Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-11Bitstream added on 2014-06-13T18:53:22Z : No. of bitstreams: 1 pinheiro_vg_me_botib.pdf: 219390 bytes, checksum: a4a81d46d63eddc4df849062b1b592d7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Existem relatos na literatura que tanto a remoção temporária de bezerro (RTB) como a administração de eCG podem aumentar a eficiência (taxa e prenhez) de tratamentos hormonais com progesterona/progestágenos, em vacas em anestro pós-parto. No presente trabalho a associação de RTB e/ou a aplicação de eCG foram testadas simultaneamente em protocolos hormonais com progesterona, comumente utilizado para inseminação artificial em tempo fixo (IATF) de vacas no período pós-parto. Os protocolos hormonais foram testados em 3 propriedades, em vacas Nelore lactantes (40 a 80d pós-parto, n = 443), com escore de condição corporal de 2,5 a 3,0 (escala de 1 a 5). Em estágio aleatório do ciclo estral (D0), os animais do grupo PEPE (Progesterona-Estrógeno- Prostaglandina-Estrógeno) receberam dispositivo intravaginal contendo progesterona (1,0 g, DIB®, Sintex, Buenos Aires, Argentina) e 2,5 mg de benzoato de estradiol (BE, via IM, Estrogin®, Farmavet, São Paulo, Brazil). Oito dias mais tarde (D8) administrou-se PGF2 (150 μg de d-cloprostenol, via IM, Prolise®, ARSA S.R.L., Buenos Aires, Argentina), e o DIB foi removido. Vinte e quatro horas após a remoção do DIB, as vacas foram tratadas com BE (1,0 mg, IM) e 30 a 36 h mais tarde todos os animais receberam IATF, sem observação do cio. As vacas foram divididas ao acaso em 4 Grupos: PEPE, PEPE/RTB, PEPE/eCG e PEPE/RTB/eCG. No grupo PEPE/RTB, além do tratamento descrito acima (PEPE) os bezerros foram retirados das vacas por 54 – 60 h consecutivas (a partir da retirada do DIB até a IATF). No Grupo PEPE/eCG, os animais receberam o mesmo tratamento do grupo PEPE associado a uma aplicação de eCG (300 UI, via IM, Novormon®, Sintex, Buenos Aires, Argentina) no momento da administração da PGF2 (D8). No Grupo PEPE/RTB/eCG, os animais foram tratados de acordo com o protocolo PEPE/RTB associado a aplicação de eCG (300 UI) no D8... / Reports indicate that either TCR or eCG administration can increase the efficiency (pregnancy rate) of hormonal treatments with progestins during postpartum anestrus. This experiment evaluated effects of TCR and/or eCG administration in a protocol with progesterone that is frequently used for fixed-time artificial insemination (FTAI) in cows during postpartum anestrus. The protocols were tested at three farms in lactating Nelore cows (40 to 80 d postpartum, n = 443) with body condition scores from 2.5 to 3.0 (0- to 5- point scale). At random stage of the estrous cycle (D0), animals received a basic PEPE (Progesterone-Estrogen-Prostaglandin-Estrogen) protocol with insertion of an intravaginal device with progesterone (1.0 g, DIB®, Sintex, Buenos Aires, Argentina) and injection of 2.5 mg of estradiol benzoate (EB, i.m., Estrogin®, Farmavet, São Paulo, Brazil). Eight days later (D8) cows were treated with PGF2; (150 μg d-cloprostenol, i.m., Prolise®, ARSA S.R.L., Buenos Aires, Argentina), and DIB was removed. Twenty four hours after DIB removal, cows received EB (1.0 mg, i.m), and 30 to 36 h later all animals received FTAI, without estrus detection. Cows were allocated randomly to 4 Groups: PEPE, PEPE/TCR, PEPE/eCG and PEPE/TCR/eCG. In Group PEPE/TCR, calves were removed temporarily for 54 – 60 h (from DIB removal until FTAI). In Group PEPE/eCG, animals received PEPE treatment plus one dose of eCG (300 IU, i.m., Novormon®, Sintex, Buenos Aires, Argentina) following PGF2 administration (D8). In Group PEPE/TCR/eCG, animals were treated as in protocol PEPE/TCR plus eCG on D8. All animals were examined by ultrasonography (Aloka SSD 500, 7.5 MHZ probe) 10 days before and at the beginning... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-17Bitstream added on 2014-06-13T19:21:22Z : No. of bitstreams: 1 machado_mf_dr_botib.pdf: 3725562 bytes, checksum: d4f694ed133c9c007068eeeff7ba0042 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fatores de crescimento fibroblástico (FGFs) regulam o desenvolvimento folicular e a maturação oocitária através de ligação aos seus receptores (FGFRs). Os RNAm que codificam o FGFR2c e o FGFR3c foram detectados em folículos antrais bovinos. Com o objetivo de identificar FGFs que poderiam regular a foliculogênese por meios desses, investigou-se os padrões de expressão do FGF16 e FGF20 em folículos antrais bovinos, bem como os níveis de RNAm desses FGFs e seus receptores (FGFR2c e FGFR3c) durante a maturação in vitro de complexos cumulus-oócito (COCs). Além disso, dados preliminares do nosso laboratório indicativos de que a expressão do FGF17 em oócitos é regulada ao longo da maturação oocitária motivaram a investigação da função dessa proteína na maturação de COCs in vitro. Sendo assim, avaliou-se o efeito do FGF17 na expansão do cumulus e no controle da transcrição de fatores EGF-like [ampiregulina (AREG), epiregulina (EREG) e betacelulina (BTC)] e outros genes reguladores da expansão [cicloxigenase 2 (COX2), hialurona sintase 2 (HAS 2), pentraxina 3 (PTX3), proteína indutora do fator de necrose tumoral 6 (TSG6)]. Os RNAm dos FGF16 e FGF20 e as respectivas proteínas foram detectados no ovário bovino. A abundância de RNAm de FGF16 e FGF20 foi maior em células da granulosa e da teca de folículos atrésicos comparados a folículos saudáveis ou transicionais. O tratamento com FSH diminuiu a abundância de RNAm para FGF16 e FGF20 e o IGF1 inibiu FGF16 em células da granulosa cultivadas in vitro. Ao longo da maturação a expressão do FGF16 e do FGF20 foi estável no oócito, enquanto que a expressão dos receptores FGFR2c e FGFR3c foi estimulada nas células do cumulus pelo FSH. A proteína FGF16 foi localizada no oócito, células do cumulus e da teca e o FGF20 em oócitos, células do cumulus, da granulosa e da teca. O FGF17 aumentou a proporção... / Fibroblast growth factors (FGFs) regulate follicular development and oocyte maturation. Messenger RNA encoding receptors FGFR3c and FGFR2c have been detected in bovine antral follicles. Aiming to identify FGFs that can potentially regulate folliculogenesis through these receptors, the expression patterns of FGF16 and FGF20 were assessed in bovine antral follicles. Messenger RNA expression of these FGFs and their receptors (FGFR2c and FGFR3c) was also assessed in oocytes and cumulus cells, respectively, during in vitro maturation. In addition, previous data suggesting that FGF17 mRNA expression is regulated in the oocyte led us to investigate the effects of FGF17 on cumulus expansion and on the expression of EGF-like factors [amphiregulin (AREG), epiregulin (EREG) and betacelullin (BTC)] and other genes that regulate expansion [cyclooxygenase 2 (COX2), hyaluronan synthase 2 (HAS 2), pentraxin 3 (PTX3), protein-inducing tumor necrosis factor 6 (TSG6)]. FGF16 and FGF20 mRNA and proteins were detected in the bovine ovary. Messenger RNA abundance of FGF16 and FGF20 was higher in granulosa and theca cells from atretic follicles compared with healthy or transitional follicles. Treatment with FSH decreased mRNA expression of FGF16 and FGF20 and IGF1 inhibited FGF16 mRNA abundance in cultured granulosa cells. During maturation, mRNA expression of FGF16 and FGF20 was stable in the oocyte, while FGFR2c and FGFR3c were stimulated in cumulus cells by FSH. FGF16 protein was localized to the oocyte, cumulus and theca cells, and FGF20 was detected in the oocyte, cumulus, granulosa and theca cells. Supplementation of maturation medium with FGF17 increased the proportion of fully expanded COCs, but did not alter mRNA expression of COX2, HAS2, PTX3, TSG6, AREG, EREG and BTC in cumulus cells during in vitro maturation. In conclusion, FGF17 enhances bovine cumulus expansion... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-11Bitstream added on 2014-06-13T19:45:09Z : No. of bitstreams: 1 sudano_mj_dr_botfmvz.pdf: 2445410 bytes, checksum: b31fdea0d1a6b4b576d49b7e856ede8a (MD5) / Objetivo deste experimento foi estudar os mecanismos envolvidos na sobrevivência à criopreservação de embriões Bos taurus indicus (Nelore) e Bos taurus taurus (Simental) produzidos in vitro (PIV) e in vivo (TE). Em um arranjo fatorial 2 x 2, duas subespécies (Bos taurus indicus vs Bos taurus taurus) e duas origens (PIV vs TE) foram utilizadas para testar a hipótese de que a capacidade de sobrevivência após a criopreservação é um evento multifatorial, e que a composição lipídica e o padrão de expressão gênica global afetam a criotolerância embrionária. Vacas Nelore (N=14) e Simental (N=14) foram submetidas a OPU e os oócitos recuperados (N=840 e 450, respectivamente) foram submetidos a MIV, FIV e CIV. Além disso, vacas Nelore (N=7) e Simental (N=8) foram submetidas a superestimulação ovariana, IATF e lavagem uterina. Os embriões PIV (N=349 e N=105) e TE (N=80 e N=74), respectivamente Nelore e Simental, foram submetidos as técnicas de vitrificação (N=70-94), coloração de Sudan Black (n=30), espectrometria de massas por ionização e dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-MS; N=8 por grupo), microarray genômico (Nelore PIV N=4, Nelore TE N=4, Simental PIV N=3, Simental TE N=3) e validação no qPCR (N=8 por grupo). Modelos univariados (PROC LOGISTIC e PROC GLIMMIX- SAS 9.2) e multivariados (análise dos componentes principais-PCA- Piruete v.3.11 e MetaboAnalyst) foram utilizados na análise estatística. A análise do Microarray genômico procedeu-se no FlexArray 1.6.1.1. Genes com “fold change” de 1,5 e P≤0,05 foram considerados diferentemente expressos. Embriões Simental apresentaram maior sobrevivência após a vitrificação que os Nelore (34,6 vs 20,2%; P<0,05). Apesar disso, os embriões Simental apresentaram maior conteúdo lipídico do que os Nelore (3,4±0,3 vs 2,4±0,3 intensidade de cinza x 10-4 / μm3 ; P<0,05)... / The objective was to study mechanisms involved in the post-cryopreservation survival of Bos taurus indicus (Nellore) and Bos taurus taurus (Simmental) in vitro (IVP) and in vivo (ET) produced embryos. In a 2x2 factorial experimental design, two subspecies (Bos taurus indicus vs Bos taurus taurus) and two origins (PIV vs ET) were used to test the hypotheses that the postcryopreservation embryo survival capacity is a multifactorial event and that the lipid composition and the global gene expression pattern affect embryo cryotolerance. Nellore and Simmental cows (N=14) were submitted to OPU sessions and recovered oocytes (840 and 450, respectively) underwent IVM, IVF and IVC. Moreover, Nellore (N=7) and Simmental (N=8) cows were submitted to ovary superstimulation, FTAI, and uterine flushing. The IVP (N=349 and N=105) and ET (N=80 and N=74) embryos, Nellore and Simmental respectively, were used in the vitrification (N=70-94), Sudan Black B stain (N=30), matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry (MALDIMS) (N=8 per group), genomic microarray (Nellore IVP N=4, Nellore ET N=4, Simmental IVP N=3, Simmental ET N=3) and qPCR (N=8 per group) techniques. Univariate (PROC LOGISTIC and PROC GLIMMIX, SAS 9.2) and multivariate (PCA - Piruete v.3.11 and MetaboAnalyst) models were used for the statistical analysis. Microarray data analysis was performed in FlexArray 1.6.1.1 software. Genes with a fold change of at least 1.5 and a probability of P<0.05 were considered differentially expressed. Simmental embryos had higher post-vitrification survival (34.6 vs 20.2%; P<0.05) compared with Nellore. Nevertheless, Simmental embryos had higher lipid content than Nellore (3.4±0.3 vs 2.4±0.3 gray intensity x 10-4 / μm3; P<0.05). When compared ET with PIV embryos, it was observed that the former had higher post-vitrification... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-06Bitstream added on 2014-06-13T18:46:30Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_cs_dr_jabo.pdf: 1211579 bytes, checksum: 2f19bde4e0f7fbfd3f2aae7f084ceea1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Modificações pós-translacionais de histonas são importantes componentes do código epigenético, e contribuem para o controle da transcrição gênica de cada célula. O presente trabalho descreve a participação de duas modificações de histonas no desenvolvimento embrionário pré-implantacional: a acetilação de lisinas e a citrulinização de argininas. No capítulo 1, avaliamos a presença de duas modificações de histona H3, K9ac (permissiva) e K27me3 (repressiva) em embriões bovinos no ciclo de ativação do genoma embrionário (AGE), por imunofluorescência. Ambas as marcas estão presentes e apresentam alto coeficiente de correlação, e dois perfis de embriões (com alta e baixa variação dos níveis das modificações entre blastômeros) foram descritos. A acetilação de histonas está relacionada à ativação da expressão gênica, portanto no capítulo 2 hipotetizamos que a manipulação de seus níveis em embriões bovinos poderia influenciar a ativação do genoma embrionário, o desenvolvimento de blastocistos e a inativação do cromossomo X em fêmeas. Foram testadas concentrações do inibidor das histona desacetilases tricostatina A variando de 5 a 50nM, aplicadas por 12 a 144h, iniciando 70h após a FIV. Três protocolos foram selecionados: 5nM 48h, 5nM 144h e 15nM 48h. Após, foi utilizado sêmen sexado para estudar os efeitos da TSA sobre embriões fêmeas e machos separadamente. Por imunofluorescência para H3K9ac, foi observado aumento na acetilação de histonas em ambas as concentrações (5 e 15nM), sendo 5nM mais eficaz em fêmeas do que machos. O tratamento com 15nM 48h reduziu a produção de blastocistos em machos e fêmeas, e 5nM 144h em machos. A taxa de apoptose, avaliada pelo ensaio TUNEL, foi elevada em embriões fêmeas (grupos 5nM144h e 15nM48h), e em machos (grupo 15nM48h), mas tal aumento... / Histone post translational modifications are important components of the epigenetic code, and contribute to the control of gene transcription in each cell. This work describes the participation of two histone modifications in embryonic preimplantation development: acetylation of lysines and citrullination of arginines. In chapter 1, we evaluated the presence of two modifications of histone H3, K9ac (permissive) and K27me3 (repressive) in bovine embryos in the cycle of embryonic genome activation (EGA), by immunofluorescence. Both marks are present and show a high correlation coefficient, and two profiles of embryos were described, displaying high and low variation of modifications level between blastomeres. The acetylation of histones is related to gene expression activation, so in Chapter 2 we hypothesized that the manipulation of acetylation levels in bovine embryos could influence embryonic genome activation, blastocyst development and X chromosome inactivation in females. Five concentrations of the histone deacetylase inhibitor trichostatin A (TSA), ranging from 5 to 50nM beginning 70 hours after FIV were applied per 12 to 144h. Three protocols were selected: 5nM 48h, 5nM 144h and 15nm 48h. After, sexed semen was used to study the effects of TSA on male and female embryos separately. Immunofluorescence of H3K9ac showed increased histone acetylation at both concentrations (5 and 15nM). 5nM TSA was more effective in females than in males. Treatment with 15nM 48h reduced male and female blastocyst yield, and 5nM 144h reduced male blastocyst yield. Apoptosis rate was measured by the TUNEL assay. Female 5nM144h and 15nM48h groups, and male 15nM48h group displayed higher apoptosis levels, but this increase was not observed in low quality embryos. In female embryos, TSA did not affect... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-12Bitstream added on 2014-06-13T20:26:12Z : No. of bitstreams: 1 camargos_as_dr_botfmvz_parcial.pdf: 67933 bytes, checksum: 2094efb1e7f37edf06ccd1d3f8b62930 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-09T14:35:35Z: camargos_as_dr_botfmvz_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-02-09T14:36:19Z : No. of bitstreams: 1 000711994.pdf: 521661 bytes, checksum: 002c33dc96d33e4102653cbd3a53db4d (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-09T17:15:01Z: 000711994.pdf,Bitstream added on 2015-02-09T17:15:38Z : No. of bitstreams: 1 000711994.pdf: 521661 bytes, checksum: 002c33dc96d33e4102653cbd3a53db4d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo foi dividido em três experimentos. No experimento 1, objetivou-se avaliar e comparar o efeito da administração de análogo sintético de prostaglandina em diferentes períodos do puerpério de bubalinos. 45 búfalas pluríparas foram distribuídas aleatoriamente em três grupos: CON (controle) – soro fisiológico na primeira e terceira semanas pós-parto; CLO1 – cloprostenol sódico na primeira semana e; CLO3 – cloprostenol sódico na terceira semana. Os animais foram avaliados nos dias 7, 14, 21, 28 e 35 após o parto quanto ao grau de involução uterina, acúmulo de fluido intrauterino, concentração de progesterona plasmática, período de serviços e intervalo entre partos. Não houve diferença entre os grupos quanto ao grau de involução uterina e concentração de progesterona plasmática. Os animais dos grupos CLO1 e CLO3 apresentaram menor acúmulo de fluido intrauterino, período de serviços e intervalo entre partos em relação ao grupo controle. O protocolo com aplicação de cloprostenol na primeira semana apresentou os melhores resultados sobre a eficiência reprodutiva de búfalas pós-parto. No experimento 2, o objetivo do estudo foi verificar se a aplicação de cloprostenol, no puerpério precoce ou intermediário, induz mudanças nas concentrações plasmáticas de progesterona, PGFM e estradiol de búfalas pós-parto, além de efeitos sobre a involução uterina, acúmulo de fluido intrauterino e retorno da atividade ovariana cíclica. 30 búfalas Murrah foram distribuídas aleatoriamente em três grupos: CONT (solução salina); CLO2 (cloprostenol nos dias 2 e 5 pós-parto) e; CLO15 (cloprostenol nos dias 15 e 20 pós-parto). Exames ginecológicos foram realizados nos dias 2, 7, 14, 21 e 28 pós-parto, onde foram avaliados o grau de involução uterina, o acúmulo de fluido intrauterino e a atividade... / This study was divided into three experiments. In experiment 1, the aim was to evaluate and compare the effect of prostaglandin synthetic analogue administration at different periods of buffalo puerperium. 50 pluriparous buffaloes were randomly divided into three groups: CON (control) – saline at first and third weeks postpartum; CLO1 – chloprostenol at first week and; CLO3 – chloprostenol at third week. Animals were evaluated at days 7, 14, 21, 28 and 35 after parturition about uterine involution degree, uterine fluid accumulation, progesterone plasmatic level, service period and parturition interval. There was no difference between groups on uterine involution degree and progesterone plasmatic level. Groups CLO1 and CLO3 animals presented lower uterine fluid accumulation, service period and parturition interval in relation to control group. The protocol of chloprostenol administration in the first week presented best results on postpartum buffalo reproductive efficiency. In experiment 2, the objective of the study was to verify if chloprostenol administration, at early or intermediary puerperium, can induces changes on progesterone, PGFM and oestradiol plasma concentrations of postpartum buffaloes, beyond effects on uterine involution, intrauterine fluid accumulation and ovarian activity return. 30 Murrah buffaloes were randomly divided into three groups: CONT (saline); CLO2 (chloprostenol at days 2 and 5 postpartum) and; CLO15 (chloprostenol at days 15 and 20 postpartum). Gynecological examinations were performed at days 2, 7, 14, 21 and 28 postpartum, when were evaluated uterine involution degree, intrauterine fluid accumulation and ovarian activity. After exams, were collected blood samples to dosage of progesterone, PGFM and oestradiol plasma concentrations. Group CLO2 showed more uterine involution, faster ovarian activity return and.. (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-22Bitstream added on 2014-06-13T19:05:27Z : No. of bitstreams: 1 marquesfilho_wc_dr_botfmvz.pdf: 648603 bytes, checksum: 1f30b6fb6e4d5b77b142f7aa9e2bea30 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste foi avaliar os efeitos da utilização de implantes subcutâneos de Deslorelina (agonista de GnRH-Suprelorin®) por 70 dias sob a dinâmica folicular, secreção de FSH, LH e P4 e, a expressão gênica e proteica dos receptores endometriais de estrógeno e (E R e E R), de progesterona isoformas A e B (PABR e PBR) e de ocitocina (OTR) em vacas Nelore (Bos taurus indicus). Foi sincronizada a ovulação de 15 vacas Nelore com escore de condição corporal (ECC) 3 e, no D0 foram aleatoriamente selecionados 7 animais para serem submetidos a implantação subcutânea de Deslorelina por 70 dias. O exame ultra-sonográfico foi realizado para caracterização da dinâmica folicular e os folículos foram classicados em classes: I (< 0,4 cm), II (0,4-0,6cm) e III (> 0,6cm). Amostras de sangue foram coletadas para mensuração das concentrações plasmáticas de FSH, LH e P4. A pulsatilidade e os picos de LH foram determinados a partir de amostras sanguíneas coletadas a cada 15 minutos por 6 horas em 4 vacas escolhidas aleatoriamente nos D20 e D62. A mensuração da expressão proteica dos E R, E R, PABR e PBR no epitélio glandular e estroma uterino foram mensurados por meio da técnica da imunoistoquímica e, a expressão gênica dos E R, E R, PABR e OTR foi avaliada com auxílio da técnica de qRT-PCR, ambas... / The objective this study is to evaluate the effects of subcutaneous implant Deslorelin (GnRHa-Suprelorin®) by 70 days on the endocrine dynamic, the follicular development and, gene and protein expression of endometrial receptors of estrogen and (E R and E R), progesterone isoforms A and B (PABR and PBR), and oxytocin (OTR) of Nelore (Bos taurus indicus) cows . Ovulation of 15 Nelore cows with BCS 3 was synchronized following of implantation of Deslorelin in 7 animals for 70 days. During this period, the ovaries were scanned by ultrasonography to characterize the follicular dynamics, where the follicles were divided in class: I (< 0.4 cm), II (0.4-0.6 cm) and III (> 0.6 cm). Blood samples were collected before of each ultrasonographic exam for later measurement of plasma FSH, LH and P4. The assessment of LH pulsatile secretion was measured on blood samples collected every 15 minutes for six hours through the jugular catheterization in fourrandomly chosen cows on D20 and D62. The protein expression of E R and E R, PABR and PBR of endometrial glandular epithelial and stromal was measured using the technique of immunohistochemistry and the quantification of gene expression of E R, E R, PABR and OTR by qRT-PCR technique from fragments collected through endometrials biopsies on days 0, 4, 20 and 27. Others two samples of endometrium were used for. The comparison between the moments of the measures was performed using the nonparametrics tests of the Friedman and Fisher's Exact. The relationship between the results of follicular dynamics, gene and protein expression was performed by Pearson correlation, all with a significance level of 0.05. During the 70 days of implantation of Deslorelin neither animal ovulated, indicating that the preovulatory peak of LH was abolished. The maximum number of follicles... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-02Bitstream added on 2014-06-13T18:46:31Z : No. of bitstreams: 1 calegari_rs_dr_botfmvz.pdf: 6174607 bytes, checksum: b51ee0fe951008c48ebb49f5a60afa88 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Este estudo foi dividido em dois experimentos. No exp. 1, investigou-se a influência do sêmen congelado heterospérmico e homospérmico de touros Nelore sobre o movimento de espermatozóides (ME), integridade da membrana plasmática (IMP) e produção de embriões in vitro (PIV). No exp. 2, a substituição de plasma seminal (PS) de touros com sêmen de média congelabilidade (grupo homospérmico, HoM) por PS heterólogo de touros de alta congelabilidade (grupo homospérmico, HoA), foram avaliados através do ME, IMP, PIV, proteína total (PT), concentração de testosterona plasmática (TP) e padrão eletroforético das proteínas do plasma seminal (PE). O plasma seminal heterólogo (grupo PSH) foi composto pela mistura de PS de touros HoA com espermatozóides de touros HoM. As amostras seminais de oito touros foram classificadas, com base em avaliações anteriores. Para o exp. 1, não foi observada diferença significativa para o ME, IMP e PIV entre os grupos, mas, foi observada entre os touros, independentemente do grupo. No exp. 2, não houve diferença, para o ME, PT, TP e embriões produzidos entre os grupos, entretanto, maior número de membranas plasmáticas intactas (P<0,05) foi encontrado no grupo HoA, bem como para a taxa de clivagem (P<0,05) no grupo PSH. Sete padrões de proteínas (20 a 25 frações) foram detectados no PS. A concentração de PT e TP variou pouco, quando comparada com o PE. Concluindo, o sêmen heterospérmico não melhorou nenhuma característica espermática nem aumentou a produção de embriões in vitro, no entanto, o PSH somente mostrou efeito benéfico sobre a taxa de clivagem. Agradecimentos: Central VR e frigorífico Frig, Araçatuba, SP, Brasil / This study was divided into two experiments. In exp.1, the influence of frozen heterospermic and homospermic bull semen on sperm motion (SM), plasma membrane integrity (PMI) and in vitro embryo production (IVP) were investigated. In exp.2, the replacement of seminal plasma (SP) of bulls with medium semen freezability (homospermic group, MH) by heterologous SP of bulls with high freezability (homospermic group, HH), as evaluated for SM, PMI, IVP, total protein (TP), plasma testosterone level (PT), and electrophoretic profile of plasma seminal protein (EP). The heterologous seminal plasma (HSP) group consisted of a mixture of SP of bull HH with spermatozoa of bull MH. Sperm samples from 8 Nellore bulls were classified based on previous evaluations. In exp. 1, no significant difference was observed for SM, PMI, and IVP among groups, but it was observed among bulls, regardless of group. In exp.2, there was no difference for SM, TP, PT, and yielded embryos among groups, but more intact plasma membranes (P<0.05) were found in group HH as well as for cleavage rate (P<0.05) in group HSP. Seven protein profiles (20 to 25 protein fractions) were detected in SP. Level of TP and PT varied little when compared to the seminal protein profile. In conclusion, heterospermic semen did not improve any sperm characteristic nor enhanced in vitro embryo production, however, HSP only showed beneficial effect on cleavage rate. Acknowledgement: VR Insemination Station and FRIG slaughterhouse, Araçatuba, SP, Brazil

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-01-27Bitstream added on 2014-06-13T19:45:13Z : No. of bitstreams: 1 landimjunior_lp_dr_jabo.pdf: 646488 bytes, checksum: 161e7cdad2a76d414639bfa36165023e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Devido às elevadas perdas gestacionais verificadas nas fases embrionária e fetal, principalmente em animais produzidos in vitro (TN e/ou FIV), o presente trabalho avaliou, por RIE, a participação dos produtos secretados pelas BNCs na síntese in vitro de PGF2alfa pelas células BEND e constatou que o meio condicionado, na presença de PDBu, determinou o aumento da produção de PGF2alfa (de 435,84a para 1323,94b pg/mL; p<0,05), mas não na ausência de PDBu (19,01a; 15,08a; 16,83a e 23,10a pg/mL; respectivamente para MCSS; 1:25; 1:50 e 1:100; p<0,05), indicando a participação destes produtos na modulação da síntese de PGF2alfa, provavelmente na etapa da enzima PKC. A expressão gênica relativa de LP e VEGF foi avaliada pela técnica de PCR em tempo real, em placentas de animais TN e FIV, comparados a animais MN e, embora haja uma tendência de .down-regulation. para o VEGF (-1,41a e .0,72a; respectivamente para TN e FIV, p<0,05) não se verificou diferença na expressão entre os grupos. Quanto ao LP, também não foi verificada diferença na sua expressão, embora haja uma tendência numérica de .up-regulation. em TN (+0,11) e .down-regulation. em FIV (-3,18). Estes dados confirmam a capacidade de modulação de síntese de PGF2alfa pela BNC, bem como a não diferença na expressão gênica relativa de VEGF e LP em placentas de animais TN e FIV, quando comparados à MN. / Due to the high pregnancy failures during foetal and embryo stages, mainly in in vitro produced-animals (by NT and/or IVF), this work evaluated the BNCs products on in vitro PGF2alpha synthesis, by RIA, from BEND cells and showed that the conditioned medium, with PDBu, increased the PGF2alpha synthesis (from 435.84a to 1323.94bpg/mL, p<0.05), but not without PDBu (19.01a; 15.08a; 16.83a and 23.10a pg/mL; respectively to MCSS; 1:25; 1:50 and 1:100; p<0.05), showing the function of these cellular products on PGF2alpha synthesis modulation, probably at PKC level. The PL and VEGF relative gene expression were evaluated, by Real Time PCR, in NT and IVF placentas, compared to AI placentas and, although there was a tendency for VEGF to be down-regulated (-1,41a and .0,72a; respectively to TN and IVF, p<0,05), no differences between groups were observed. In relation to LP gene expression, although there was a tendency for upregulation in NT group (+0.11) and down-regulation in IVF (-3.18), no statistical differences were shown also. These data shown the modulation capacity on PGF2alpha synthesis by BNC, as well the no differences on relative gene expression of VEGF and PL in NT and FIV placentas, when compared to IA placentas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T18:46:35Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_ces_dr_botfmvz.pdf: 1119134 bytes, checksum: 2a9658153aec069a334942b772885d58 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente estudo objetivou identificar o perfil eletroforético seminal, as características do espermograma e fertilidade in vitro, do sêmen de touros proveniente dos períodos pré e pós-indução do processo degenerativo testicular por insulação. Para isso, foram selecionados quatro animais da raça Nelore, com idade entre trinta e trinta e seis meses. Amostras de sêmen foram colhidas três dias antes (P0) da indução do processo degenerativo e, sete (P7), quatorze (P14) e vinte e um (P21) após a retirada do insulto testicular com cinco dias de duração. Para a análise dos dados foram considerados três experimentos: 1) efeito dos períodos experimentais (P0, P7, P14 e P21) sobre o espermograma e perfil eletroforético do plasma seminal e membrana plasmática dos espermatozóides; 2) efeito dos períodos experimentais e seleção espermática por gradiente de Percoll sobre as características seminais e 3) fertilidade in vitro e associação com características seminais oriundas do período pré e pósinsulto testicular. No experimento 1, os espermogramas foram avaliados por métodos convencionais, coloração de Fuelgen para estimativa do percentual de fragmentação nuclear (FN) e, perfil eletroforético do plasma seminal e espermatozóides por SDSPAGE a 12,5%... / The study was conducted to evaluate the seminal gel electrophoresis profile, spermogramme characteristics and in vitro fertility rate, of semen obtained before and after induction of the testicular degenerative process by scrotal insulation. Four Nelore bulls, between thirty and thirty-six months of age, were subjected to a five days scrotal insult. Semen samples were collected three days (P0) before scrotal insulation and seven (P7), fourteen (P14) and twenty-one (P21) days after the removal of the testicular insult. Three experiments were considered for data analysis: 1) effect of the experimental periods (P0, P7, P14 and P21) on the spermogramme and seminal plasma and plasmatic membrane of spermatozoa gel electrophoresis profile; 2) effect of the experimental periods and sperm selection by Percoll gradient on the seminal characteristics; and 3) in vitro fertility rate and association with seminal characteristics from periods before and after testicular insult. In the experiment 1, the spermogrammes were evaluated by conventional methods beside in the Fuelgen stain for nuclear fragmentation (NF) and proteins profile by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE, 12,5%)...

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-06. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:36Z : No. of bitstreams: 1 000849664.pdf: 1189084 bytes, checksum: cbc1fe6d442a04c2f695f228e768b010 (MD5) / Em camundongo, estudos recentes demonstraram que o precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) e o seu receptor do tipo 2 (NPR2) são essenciais para a manutenção do bloqueio da meiose I no oócito. Além disso, fatores parácrinos secretados pelo oócito, como a proteína morfogenética óssea (BMP15), podem modular esse bloqueio pelo estímulo da expressão do gene NPR2 nas células do cumulus de camundongos. Em recente estudo na espécie bovina, o fluido folicular bovino (FFb), quando adicionado ao meio de maturação, interferiu na maturação nuclear do oócito e, como resultado, melhorou a produção in vitro de embriões. Contudo, não são conhecidos quais os fatores, presentes no FFb, que são responsáveis por esse efeito podendo inclusive haver participação das microvesículas presentes neste. Além de ser um componente do FFb, foi demonstrado que o estradiol pode participar diretamente da estimulação do NPR2. Portanto, os objetivos gerais do presente trabalho envolvem a elucidação do sistema NPPC-NPR2 no ovário bovino e a investigação da influência do NPPC exógeno, do estradiol e das vesículas extracelulares sobre a expressão do gene da PDE3 no oócito bovino e sobre a concentração de nucleotídeos cíclicos nos complexos cumulus-oócito. Foram realizado s quatro experimentos: 1) Ensaio imunoenzimático (ELISA) para investigar a presença e a concentração do NPPC no fluido folicular, no lisado de células da granulosa mural e nas vesículas extracelulares, de acordo com a classe de diâmetro folicular (3 a 6 mm; 6 a 8 mm e >8 mm); 2) Imunolocalização do receptor NPR2 no folículo antral bovino; 3) Expressão do gene da PDE3 no oócito bovino, mediante RT - PCR em tempo real, em CCOs im aturos e maturados in vitro por 6 horas com NPPC exógeno, estradiol e vesículas extracelulares; 4) Mensuração da concentração de AMPc e GMPc, em oócitos e células... / In mice, recent studies have demonstrated that the natriuretic peptide precursor C (NPPC) and its type - 2 - receptor (NPR2) are essential for the maintenance of meiosis I arrest in the oocyte. Moreover, paracrine factors secreted by the oocyte such as bone mo rphogenetic protein 15 (BMP15) can modulate this arrest through the expression of the NPR2 gene in cumulus cells of mice. In a recent study in cattle, the bovine follicular fluid (bFF) added to the maturation medium was able to interfere with the oocyte nu clear maturation resulting in higher embryo yield in vitro . However, it is not known what factors present in bFF might be responsible for this effect and one candidate could be the presence of microvesicles in the bFF. Additionally, the estradiol hormone i s component of the bFF and was demonstrated to directly stimulate NPR2 expression. Therefore, the objectives of this work includes the investigation of the NPPC - NPR2 system in the bovine ovary and the assessment of the effects of exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles on the expression of the PDE3 gene in bovine oocytes and the concentrations of cyclic - nucleotides in cumulus - oocyte complexes. We designed four experiments: 1) enzyme - linked immunosorbent assay (ELISA) for the presence and concen tration of the NPPC in follicular fluid, in the lysate of mural granulosa cells and in the extracellular vesicles, according to follicular diameter (3 to 6 mm, 6 to 8 mm, >8 mm); 2) Immunolocalization of NPR2 receptor in bovine antral follicles; 3) PDE3 ge ne expression in bovine oocyte by RT - PCR in real time, in immature COCs and in COCs in vitro matured for 6 h with exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles; 4) Measurement of the concentration of cAMP and cGMP in oocytes and cumulus cells, respectively, either immature or matured in vitro for 6 h with exogenous NPPC or extracellular vesicles through specific...