Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Marcus Antônio Rossi Feliciano / Banca: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Banca: Felipe Perecin / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar diferentes estratégias para minimizar os efeitos do estresse oxidativo induzido pela menadiona durante o cultivo in vitro sobre o potencial de desenvolvimento embrionário in vitro. Para tanto, no Experimento I, os oócitos foram MIV em meio suplementado com 0,6 mM de cisteína e 100 µM de cisteamina (C+C), 100 UI de catalase (CAT), 0,6 mM de cisteína associado à 100 µM de cisteamina e 100 UI de catalase (C+C+CAT), ou sem a suplementação com antioxidantes (Controle). Posteriormente, foram fecundados e os prováveis zigotos cultivados in vitro durante 7 dias. Oócitos imaturos (0h) e após 22 h de MIV foram avaliados quanto ao conteúdo intracelular de ROS e de GSH, potencial de membrana mitocondrial, maturação nuclear e ocorrência de apoptose. No Experimento II, oócitos foram MIV em meio suplementado com C+C+CAT (ATX) e os prováveis zigotos foram CIV em meio SOF. Do Dia 6 até o final do CIV os embriões foram cultivados na presença ou ausência de 5 µM de menadiona (MD). No dia 7 foi avaliada a taxa de blastocistos e os mesmos destinados às avaliações quanto ao conteúdo intracelular de ROS e GSH, atividade de caspases 3 e 7 e ocorrência de apoptose. Por fim, no Experimento III, oócitos foram MIV e os prováveis zigotos foram CIV em meio SOF suplementado com 100 ng/mL de IGF-I (IGF). Do Dia 6 até o final do CIV os embriões foram cultivados na presença ou ausência de 5 µM de menadiona (MD). No dia 7 foi avaliada a taxa de blastocistos e os mesmos foram destinados às avaliações previamente descritas no Experimento II além da avaliação da taxa de re-expansão após vitrificação/aquecimento e expressão dos genes CASP3, GPX-1 e SOD-1. No experimento I, a taxa de maturação nuclear não foi afetada pelos tratamentos (P> 0,05). A porcentagem de apoptose do grupo C+C+CAT foi superior (P<0,05) ao grupo CAT, porém os grupos Controle e... / Abstract: The study aimed to evaluate different strategies to minimize the effects of oxidative stress induced by menadione during in vitro culture on the potential for in vitro embryonic development. Therefore, in Experiment I, the oocytes were IVM in medium supplemented with 0.6 mM cysteine and 100 mM cysteamine (C+C), 100 IU catalase (CAT), 0.6 mM cysteine associated with 100 uM cysteamine and 100 IU catalase (C+C+CAT) or without antioxidants supplementation (Control). Then, were fertilized and the presumptive zygotes were in vitro cultured for 7 days. Immature oocytes (0h) and oocytes after 22 h of IVM were evaluated for intracellular levels of GSH and ROS, mitochondrial membrane potential, nuclear maturation and apoptosis. In Experiment II, oocytes were IVM in medium supplemented with C+C+ CAT (ATX) and the presumptive zygotes were IVC in SOF medium. From Day 6 to the end of the IVC, embryos were cultured in the presence or absence of 5 uM menadione (MD). On day 7, embryo development to the blastocyst rate was evaluated. Blastocysts were subjected to evaluations for intracellular GSH and ROS content, caspases 3 and 7 activity and apoptosis. Finally, Experiment III, oocytes were IVM and the presumptive zygotes were IVC in SOF medium supplemented with 100 ng/mL IGF-I (IGF). From Day 6 to the end of the IVC, embryos were cultured in the presence or absence of 5 uM menadione (MD). On day 7, embryo development to the blastocyst rate was evaluated. Blastocysts were subjected to evaluations for intracellular GSH and ROS content, caspases 3 and 7 activity, apoptosis, re-expansion rates after vitrification/thawing and expression of CASP3, GPX-1 and SOD-1 genes. In the first experiment, nuclear maturation rate was not affected by treatments (P>0.05). The percentage of apoptosis in C+C+CAT group was higher (P<0.05) compared to CAT group, but the Control and C+C groups did not differ from other groups ... / Doutor

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-11-03T11:20:58Z No. of bitstreams: 1 2006_Daniela Oliveira Brandao.pdf: 802866 bytes, checksum: b6d64ec9d9889cfa0f753bbc6743fa44 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-11-09T12:25:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Daniela Oliveira Brandao.pdf: 802866 bytes, checksum: b6d64ec9d9889cfa0f753bbc6743fa44 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-09T12:25:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Daniela Oliveira Brandao.pdf: 802866 bytes, checksum: b6d64ec9d9889cfa0f753bbc6743fa44 (MD5) Previous issue date: 2006-10-26 / Taxas de blastocisto aceitáveis são obtidas com os sistemas atuais de produção in vitro de embriões. Entretanto, o elevado índice de reabsorção embrionária e descontinuidade de gestação, bem como as variações dos resultados obtidos, diminuem de forma significativa a eficiência da técnica. Na tentativa de minimizar estes dois fatores foi focado nesta tese o desenvolvimento de novas formas de monitoramento dos embriões e simplificação da rotina diária. O primeiro trabalho, desenvolvido para o monitoramento do desenvolvimento embrionário, procura aprofundar o entendimento das perdas embrionárias no período de reconhecimento materno da gestação. Apesar de inúmeras investigações do desenvolvimento e caracterização embrionárias serem constantemente realizadas, estas estão restritas ao embrião até 7 dias de vida ou à gestação avançada. A maioria dos problemas, no entanto, está concentrada no período de reconhecimento materno, seguido da implantação no endométrio, sendo imprescindível a criação de métodos práticos e confiáveis que permitam o monitoramento do desenvolvimento embrionário pós-eclosão. Diante dessa necessidade, foi estabelecido um sistema de cultivo in vitro de embriões bovinos no período pós-eclosão denominado sistema PHD (post hatching development). Nele, embriões produzidos in vitro foram cultivados em túneis de gel de agarose em meio de cultivo modificado e os dados obtidos revelaram que o sistema de cultivo foi capaz de sustentar a diferenciação celular do embrião em trofoblasto, hipoblasto e epiblasto, inclusive com a formação da camada de Rauber, definindo assim o disco embrionário. Este sistema de cultivo representa o primeiro modelo experimental capaz de promover crescimento e diferenciação pós-eclosão in vitro, podendo ser utilizado com sucesso para monitorar o efeito tardio de tratamentos utilizados no sistema de cultivo. Dados preliminares de seu uso para monitorar substâncias tóxicas e expressão gênica foram obtidos e estão relacionados no corpo desta Tese. Adicionalmente ao sistema PHD, um segundo trabalho focou a simplificação e maior padronização da rotina da produção in vitro de embriões, sugerindo para isto, o congelamento e estoque de meios de cultivo prontos para uso. Os resultados obtidos com meios congelados em dois sistemas distintos de produção in vitro (DIAS-Dinamarca e Embrapa- Brasil), mostraram ser possível a produção de embriões em meios previamente congelados, sem que haja prejuízo nas taxas de blastocisto alcançadas. Além de facilitar a laboriosa rotina de produção de meios de cultivo, seu congelamento e estoque permitiram a existência de padronização entre manipulações, dado que a partida dos meios de cultivo utilizados é sempre a mesma. Em conclusão, os dois trabalhos desenvolvidos nesta Tese, um de contribuição científica e o outro aplicado, procuram contribuir em áreas pouco exploradas e deixam claro que existem lacunas a serem investigadas para melhoria dos sistemas atuais da produção in vitro de embriões. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Acceptable blastocyst rates are obtained with the actual systems of in vitro embryo production. However, the high rate of embryonic death and gestation interruption, as much as the broad variation in the obtained results, reduce significantly the technique efficiency. In a trial to minimize both factors, this thesis has focused on developing new monitoring systems and routine work simplification. The first work was developed for monitoring embryo development, in an effort to understand embryos loss in the maternal recognition of pregnancy period. Although several investigations have been focused in embryo development and characterization, these are restricted to the embryo up to 7 days, or to the late gestation. However, most of the problems are concentrated in the maternal recognition period, followed by endometrium implantation, so it is fundamental to create practical and trustable methods for monitoring the post-hatching embryo development. Considering this necessity, a post-hatching culture system denominated PHD (Post Hatching Development) system was established. In this system, in vitro produced embryos were cultured in agarose gel tunnels under a modified culture medium and the obtained data revealed that it was capable to sustain embryonic cell differentiation in trophoblast, hypoblast and epiblast, including the Rauber´s layer formation, defining the embryonic disc. This represents the first complete experimental model to promote rapid growing and post-hatching differentiation in vitro, able to be successfully used to monitor the late effect of treatments in the culture system. Preliminary data of its use to monitor toxic substances and gene expression were obtained and are described in this thesis. Additionally to the PHD system, a second work focused on the simplification and pattern of in vitro embryo production. For that, we suggested the freezing and stocking of ready-to-use medium. The results obtained in two different systems (DIAS-Dinamarca and Embrapa- Brasil) have shown that it is possible to produce embryos in previously frozen medium without affecting embryo rates. Besides facilitating the laborious routine of medium production, freezing aliquots has allowed to create a pattern among different manipulations, considering that the medium batch was always the same. In conclusion, both works developed in this thesis, one more scientific and the other more applied, try to contribute in non explored areas and clearly show that there are gaps to be investigated for enhancing the results in in vitro embryo production.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Rosane Cossich Furtado (rosanecossich@gmail.com) on 2009-12-04T11:36:14Z No. of bitstreams: 1 2007_MarceloTigreMoura.PDF: 520636 bytes, checksum: 7b19fc979206fdab6cd57d11632ea655 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2009-12-04T18:36:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_MarceloTigreMoura.PDF: 520636 bytes, checksum: 7b19fc979206fdab6cd57d11632ea655 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-04T18:36:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_MarceloTigreMoura.PDF: 520636 bytes, checksum: 7b19fc979206fdab6cd57d11632ea655 (MD5) Previous issue date: 2007-05-17 / A clonagem por Transferência Nuclear (TN) é uma técnica pouco eficiente e laboriosa. O processo, do ponto de vista técnico, é um dos principais fatores responsáveis pela quantidade e qualidade dos embriões produzidos. A enucleação é a etapa mais agressiva da TN. Apesar dos métodos alternativos propostos, a enucleação permanece sendo realizada como inicialmente descrita nos anos 50. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do inibidor irreversível de transcrição e replicação actinomicina D (Fluka®, Suiça) como método de enucleação química de ovócitos. Ovócitos foram maturados in vitro (MIV) por 4 ou 6 horas e expostos a actinomicina D (T1, controle; T2 = 1,0 μg ml-¹ / 16hs; T3 = 1,0 μg ml-¹ / 14hs; T4 = 2,5 μg ml-¹ / 14hs; T5 = 5,0 μg ml-¹ / 14hs). Os ovócitos foram desnudados após 20 horas de MIV e ativados com 24-26 horas de MIV. As taxas de clivagem foram avaliadas 48 horas após a ativação (D2) e as de blastocisto após 168 (D7) e 192 (D8) horas de cultivo. Parte dos ovócitos foi fixada e corada com lacmóide ou orceína para determinação da fase da meiose ou para visualização da morfologia dos cromossomos, respectivamente. Posteriormente, ovócitos tratados com actinomicina D foram utilizados para clonagem por TN, sendo que parte dos embriões (D3) foi fixada para avaliar o percentual de células apoptóticas através do teste de TUNEL. Os dados relativos às taxas de maturação, clivagem e blastocisto foram analisados pelo teste do Qui-quadrado e os percentuais de apoptose pelo teste de Mann-Whitney. A taxa de maturação (T1 = 90,4%; T2 = 82,3%; T3 = 79,1%; T4 = 83,4%; T5 = 74,7%), clivagem (T1 = 68,9%; T2 = 46,0%; T3 = 49,7%; T4= 33,4; T5= 29,3%) e de blastocisto em D8 (T1 = 41,1%; T2 = 1,4%; T3= 1,3%; T4= 0,9%; T5= 0,0%) após o tratamento com actinomicina D foi significativamente menor. Dos ovócitos fixados, 63,2% estavam em metáfase II (MII). Ao avaliar os cromossomos, foi observada uma descondensação significativa com as concentrações mais altas (2,5 e 5,0 μg ml-¹). Os demais tratamentos não apresentaram modificações perceptíveis. Ovócitos tratados com 1,0 μg ml-¹ por 14 horas foram utilizados como citoplasmas receptores. A taxa de clivagem dos embriões reconstruídos (61,3%) foi semelhante ao grupo partenogenético tratado (61,3%) e inferior ao não tratado com actinomicina D (70,2%), embora a taxa de blastocisto tenha sido mais alta no grupo de TN (11,8%) em relação ao controle tratado (3,6%) e inferior ao controle sem tratamento (38,0%). Ao analisar o índice apoptótico dos embriões, os embriões partenogenéticos tratados tiveram um índice maior que os partenogenéticos não tratados (24,2% contra 4,8%). No entanto, os embriões oriundos de TN com ovócito tratado não foram diferentes estatisticamente dos TN controle (9,3 contra 13,0%). A actinomicina D é eficiente no bloqueio da transcrição e replicação embrionária. Além disso, foi possível obter embriões reconstruídos que apresentavam percentual de células apoptóticas indistinguível do controle. ___________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cloning by Nuclear Transfer (NT) is a low efficiency and labor intense technique. The process, in technical terms, is one of the main factors responsible for both embryo quality and quantity. Enucleation is the most aggressive step. Although alternative methods have been proposed, it remains mainly as it has been first described in the early fifties. The objective of the present work was to evaluate the effect of transcription and replication inhibitor actinomycin D as a chemical enucleation method for oocytes. Oocytes were matured in vitro (MIV) for 4 or 6 hours and exposed to actinomycin D (T1, control; T2 = 1,0 μg ml-¹ / 16hs; T3 = 1,0 μg ml-¹ / 14hs; T4 = 2,5 μg ml-¹ / 14hs; T5 = 5,0 μg ml-¹ / 14hs). The oocytes were denuded 20 hours after MIV and activated 24-26 hours after MIV. The cleavage rate was recorded 48 hours post activation and the blastocyst at 168 (D7) and 192 (D8) hours of culture. Some oocytes were fixed and stained with lacmoyd or orcein to determine the maturation status or for chromosome morphology evaluation, respectively. Furthermore, oocytes treated with actinomycin D were used as recipient cytoplasts for NT, while some embryos (D3) were fixed to evaluate the percentage of apoptotic nuclei by the TUNEL assay. The data relative to the maturation, cleavage and blastocyst rate were analyzed by the chi-square test and apoptosis percentages by the Mann-Whitney test. The maturation (T1 = 90,4%; T2 = 82,3%; T3 = 79,1%; T4 = 83,4%; T5 = 74,7%), cleavage (T1 = 68,9%; T2 = 46,0%; T3 = 49,7%; T4 = 33,4%; T5 = 29,3%) and blastocyst rate at D8 (T1 = 41,1%; T2 = 1,4%; T3 = 1,3%; T4 = 0,9%; T5 = 0,0%) after actinomycin D treatment was significantly different. Analyzing the fixed oocytes, 63,2% were in MII. While evaluating the chromosomes, it was observed a significant uncoiling when exposed to higher concentrations (2,5 and 5,0 μg ml-¹). The remaining groups had no apparent perceptible modifications. Furthermore, oocytes treated with 1 μg ml-¹ for 14 hours were used as recipient cytoplasts. The cleavage rate (61,3%) was similar to the actinomycin D treated control group (61,3%) and lower than the non-treated control (70,2%), although the blastocyst rate was higher in the NT group (11,8%) comparing to the treated control (3,6%) and lower to the untreated control (38,0%). After analyzing the embryos for apoptotic cells, the treated parthenogenetic embryos had a higher index than the parthenogenetic control (24,2% vs. 4,8%). However, the NT embryos generated by treated cytoplasts wasn’t statistically different from the NT control (9,3 vs. 13,0%). The actinomycin D treatment is efficient to block embryonic transcription and replication. Moreover, it was possible to obtain reconstructed embryos that possess an apoptotic cell index indistinguishable from the control.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-10-27T18:57:45Z No. of bitstreams: 1 2011_MarceloTigreMoura.pdf: 6193475 bytes, checksum: 12353daa4f10fb76887ace85228c8ceb (MD5) / Approved for entry into archive by Repositorio Gerência(repositorio@bce.unb.br) on 2011-10-27T19:42:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MarceloTigreMoura.pdf: 6193475 bytes, checksum: 12353daa4f10fb76887ace85228c8ceb (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-27T19:42:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MarceloTigreMoura.pdf: 6193475 bytes, checksum: 12353daa4f10fb76887ace85228c8ceb (MD5) / O processo de diferenciação celular foi por muito tempo considerado progressivo e irreversível. O desenvolvimento da clonagem por transferência nuclear e da indução da pluripotência por fatores definidos (Oct4, Sox2, cMyc, e Klf4) demonstrou inequivocamente que células somáticas podem ser reprogramadas para um estado indiferenciado. No entanto, essas tecnologias permanecem pouco eficientes devido a fatores técnicos e biológicos. A enucleação dos ovócitos representa um dos principais fatores limitantes da transferência nuclear, enquanto que a integração dos transgenes no genoma durante a indução da pluripotência pode afetar negativamente o fenótipo das células. Por isso, os objetivos do presente trabalho foram: aprimorar a enucleação química de ovócitos pela actinomicina D e investigar um mecanismo que permita reprogramar para pluripotência sem Oct4 exógeno, ao compensar a atividade do transgene com moléculas. A investigação da enucleação por actinomicina D permitiu eliminar a toxidez da abordagem durante a maturação dos ovócitos, aumentar a eficiência do procedimento e reduzir drasticamente o período de incubação com a actinomicina D. Diferentes abordagens in vitro e in vivo permitiram determinar que a principal limitação do desenvolvimento embrionário após a enucleação pela actinomicina D é a presença dos cromossomos expostos a actinomicina D dentro gameta. A ativação do gene Nr5a2 foi testada como mecanismo para substituir o Oct4 exógeno na indução da pluripotência, baseandose na importância desse receptor nuclear na regulação do Oct4 durante o desenvolvimento. A expressão forçada do Nr5a2 não aumentou a eficiência da reprogramação com Oct4, Sox2, e Klf4 em fibroblastos, e em conjunto com Sox2 e Klf4 apenas não resultou em células reprogramadas. As tentativas de ajustar a estequiometria das partículas virais e de elevar a expressão endógena do Nr5a2 pelo uso de agonistas também não foram bem sucedidas. Esforços mais recentes utilizando hepatócitos podem determinar se existem limitações tecido-específicas. Apesar das evidências recentes na literatura em suporte ao modelo, ainda não foi possível repetir tais resultados. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cell differentiation has long been considered a progressive and irreversible process. The development of cloning by nuclear transfer and induced pluripotency by defined factors (Oct4, Sox2, cMyc, and Klf4) demonstrated inequivocally that somatic cells can be reprogrammed to an undifferentiated state. However, both technologies hold low efficiencies due to technical and biological factors. The enucleation of oocytes represents one of the main limiting factors for nuclear transfer, while the integration of reprogramming vectors in the genome during the induction of pluripotency can negatively affect cell phenotype. Due to these facts, the objectives of the present research were: to improve oocyte chemical enucleation by actinomycin D and to investigate a mechanism that would allow reprogramming in the absence of exogenous Oct4, by replacing the transgene with small molecules. The investigation of oocyte enucleation by actinomycin D confered with the possibility to eliminate the toxic effect of the approach on oocyte maturation, to increase enucleation efficiency and drastically reduce incubation period with the inhibitor. Different in vitro and in vivo approaches altogether allowed the conclusion that the main limiting factor to embryonic development after enucleation by actinomycin D is the presence of cromossomes exposed to the inhibitor inside the oocyte. The induction of Nr5a2 expression was tested as a possible mechanism to replace exogenous Oct4 during reprogramming to pluripotency based on upstream roles of the nuclear receptor on Oct4 levels during development. The ectopic expression of Nr5a2 did not increase reprogramming efficiency with Oct4, Sox2, and Klf4 in fibroblasts, and concomitant with Sox2 and Klf4 only did not yield reprogrammed cells. Fine-tuning of viral stochiometry and atempts to induce endogenous expression of Nr5a2 by agonists were unsuccessful. Recent efforts with hepatocytes might shed some light on possible cell type specific limitations. In spite of recent literature in accordance with this model, it has been challeging to reproduce such results.

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-07-23T18:47:06Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 794104 bytes, checksum: 8c35b7cff540a6a80df86a7a07ed89fe (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-23T18:47:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 794104 bytes, checksum: 8c35b7cff540a6a80df86a7a07ed89fe (MD5) Previous issue date: 2018-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo foi realizado para avaliar os efeitos da suplementação proteico- enegética e frequência de suplementação durante o pré (105 dias antes do parto) e pós- parto (105 dias após o parto) sobre o desempenho e características metabólicas de vacas primíparas de corte em pastejo. Foram utilizadas vinte e quatro vacas primíparas Nelore com PC médio de 409±8.0 kg, 22±0.9 meses de idade e 172±2.5 dias de gestação. Os tratamentos foram distribuídos aleatoriamente aos animais: Controle (mistura mineral ad libitum), Suplementação Diária (1.5 kg/dia de concentrado/animal) e Suplementação Infrequente (4.5 kg de concentrado/animal a cada três dias). O PC, GMD, ECC, esspessura de gordura subcutânea (EGS) e área de olho de lombo (AOL) foram avaliados no pré e pós-parto. Foram realizados dois ensaios de consumo e digestibilidade, o primeiro aos 55 dias antes do parto e o segundo, 55 dias após o parto. Amostras de sangue foram coletadas nos dias 27 e 9 dias antes do parto, ao parto, 9 e 27 dias após o parto para mensuração das concentrações de glicose, IGF-1, AGNE, -OH, colesterol e triglicerídeos, utilizados como indicadores do status energético, e mensuração de aminoácidos livres (AA), nitrogênio ureico sérico (NUS), proteína total, albumina e globulinas utilizados como indicadores de status proteico dos animais. As globulinas foram calculadas subtraindo a albumina quantificada do nível de proteína total. Aos 27 dias antes do parto, foi realizado biópsias de tecido hepático e tecido muscular para avaliar biomarcadores de ureogênese e metabolismo energético. Concentração sérica de progesterona (P4) foi avaliada no 36o dia pós-parto. Todas variáveis foram analisadas utilizando PROC MIXED do SAS 9.4 (SAS Inst., Cary, NC). A frequência de suplementação não alterou (P > 0.10) o PC, PC ajustado ao dia do parto (PCajus), PC após o parto (PCp), GMD, ECC, AOL e EGS no pré e pós parto. O PC (P = 0.079), PCajus (P = 0.078), e GMD (P = 0.074) foram maior para as vacas suplementadas no pré-parto. O ECC (P = 0.251), a AOL (P = 0.352), a EGS sobre o músculo longissimus (P = 0.199) e sobre o músculo Biceps femoris (P = 0.924) não foram afetados pela suplementação durante o pré-parto. Aos 105 dias após o parto, a suplementação não afetou (P > 0.10) o PC, GMD, ECC, AOL e EGS. O PC dos bezerros ao nascer, GMD e PC dos bezerros 105 dias após o parto não foram diferente (P > 0.10) de acordo com a suplementação e a frequência de suplementação. O consumo de matéria seca total e o consumo voluntário de forragem não foram afetados pela suplementação e frequência de suplementação durante o pré-parto (P > 0.10) e pós- parto (P > 0.10). Os animais suplementados diariamente apresentaram maiores níveis de glicose (P < 0.001) que os animais suplementados a cada três dias. Interação entre tratamento e tempo de coleta foi significativa para AA (P < 0.001), AA glicogênicos (P < 0.001), AA cetogênicos (P < 0.001), AA glico-cetogênicos (P < 0.001) e NUS (P = 0.005). A suplementação e frequência de suplementação não alteraram (P > 0.10) os níveis séricos de IGF-1, AGNE, -OH, colesterol e triglicerídeos. Do mesmo modo, a suplementação e frequência de suplementação não alteraram (P > 0.10) os níveis de proteína total, albumina e globulinas. A abundância da proteína carbamoil-fosfato sintetase-1 (CPS-1), os níveis de mRNA de carnitina palmitoyltransferase-1 (CPT-1) e do coativador-1α do receptor ativado por proliferador de peroxissoma (PGC-1α) não foram afetados (P > 0.10) pela suplementação e frequência de suplementação. Observou-se uma porcentagem semelhante (P = 0.606) de vacas com atividade ovariana (P4 > 1 ng/ml) e taxa de concepção (P = 0.842) entre os tratamentos. A suplementação proteica-energética durante o pré e pós-parto de vacas primíparas de corte em pastejo não melhora o desempenho e características metabólicas. Contudo, a redução da frequência de suplementação não resulta em efeitos negativos sobre o desempenho e características metabólicas. / The present study was performed to evaluate the effects of energy-protein supplementation and supplementation frequency during pre (105 d before calving) and postpartum (105 d after calving) of primiparous beef cows on performance and metabolic characteristics under grazing conditions. Twenty-four pregnant Nellore primiparous cows with average BW of 409±8.0 kg, 22±0.9 mo old and 172±2.5 d of gestation were used in this trial. Treatments were randomly assigned to primiparous cows: Control (ad libitum mineral mix), Daily Supplementation (1.5 kg/d of concentrate/animal) and Infrequent Supplementation (4.5 kg of concentrate/animal every three days). The BW, ADG, BCS, fat-thickness and ribeye area (RA) were evaluated at pre and postpartum period. Two 9-d intake-digestibility trials were performed throughout the experimental period where the first at 55 d before parturition, and the second at 55 d after parturition. Concentrations of glucose, IGF-1, NEFA, - OH, cholesterol and triglycerides were used as indicators of energy status, and free amino acids (AA), serum urea nitrogen (SUN), total protein, albumin and globulins were used as indicators of proteic status collected at 27 and 9 d before parturition, at the day of parturition, 9 and 27 d after parturition. Globulins were calculated subtracting the albumin quantified from the total protein level. Biopsies of hepatic and skeletal muscle tissues were performed at 27 d prior to calving to evaluate ureagenesis and energy metabolism biomarkers. Serum progesterone (P4) level was evaluated at the 36 th d postpartum. The response variables were analyzed using PROC MIXED of SAS 9.4 (SAS Inst., Cary, NC). The frequency of supplementation did not alter (P > 0.10) BW, adjusted BW at day of parturition (adjBW), BW after calving upon parturition (calvingBW), ADG, BCS, RA and fat-thickness during pre and postpartum. The BW (P = 0.079), adjBW (P = 0.078) and ADG (P = 0.074) were higher for supplemented cows during the prepartum. The BCS (P = 0.251), RA (P = 0.352), fat-thickness on longissimus muscle (P = 0.199) and on Biceps femoris muscle (P = 0.924) were not affect by supplementation during the prepartum. At 105 d after calving the supplementation did not affect (P > 0.10) BW, ADG, BCS, RA, and fat-thickness. Birth BW of calves, ADG and calf BW 105 d after calving were not different (P > 0.10) according to supplementation and frequency of supplementation. The total dry matter intake and forage voluntary intake were not affected by supplementation and supplementation frequency during prepartum (P > 0.10) and postpartum (P > 0.10). Daily supplemented animals had higher (P < 0.001) glucose levels than animals supplemented every three days. Interaction between treatment and sampling time was significant for AA (P < 0.001), glucogenic AA (P < 0.001), ketogenic AA (P < 0.001), gluco/ketogenic AA (P < 0.001), and SUN (P = 0.005). The supplementation and frequency of supplementation did not alter (P > 0.10) the levels of IGF-1, NEFA, -OH, cholesterol and triglycerides. Likewise, the supplementation and frequency of supplementation did not alter (P > 0.10) the levels of total protein, albumin and globulins. The protein abundance of carbamoyl phosphate synthase-1 (CPS-1), mRNA levels of carnitine palmitoyltransferase-1 (CPT-1) and peroxisome proliferator-activated receptor coactivator-1α (PGC-1α) were not affected (P > 0.10) by supplementation and supplementation frequency. Similar percentage (P = 0.606) of cows with ovarian activity (P4 > 1 ng/ml) and conception rate (P = 0.842) were observed among the treatments. The energy-protein supplementation during pre and postpartum of primiparous beef cows under grazing conditions do not improve performance and metabolic characteristics. However, the reduction of frequency of supplementation do not result negative effects on performance and metabolic characteristics.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-18T15:22:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 561367 bytes, checksum: 578cf6d1c681a3a9046579ae376b988c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-18T15:22:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 561367 bytes, checksum: 578cf6d1c681a3a9046579ae376b988c (MD5) Previous issue date: 2016-09-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os experimentos descritos no presente trabalho foram realizados com o objetivo geral de avaliar se a adição dos antioxidantes ácido ascórbico (AA) e ditiotreitol (DTT), ou o inibidor da caspase-3 (z-DEVD-fmk), durante a criopreservação podem melhorar o criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro. Foram realizados cinco experimentos representados assim: experimento 1, 2 e 3 no capitulo 1 e, experimento 4 e 5 no capitulo 2. Para todos os experimentos, os complexos cumulus- oócitos foram obtidos a partir de ovários de vacas de abatedouros. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados in vitro até o dia 7. Blastocistos e blastocistos expandidos foram aleatoriamente submetidos ao congelamento com taxa controlada seguindo o equilíbrio de 10 min em meio de congelamento (Hepes-TALP acrescido de 1,5 M de etilenoglicol e 0,1 M de sacarose) com os tratamentos tal como descrito abaixo. No experimento 1, os embriões foram equilibrados no meio de congelamento contendo 0,0; 0,1; 0,3 ou 0,5 mM de AA. Os embriões em palhetas foram então colocados numa máquina de congelamento programável em -6,0 °C a -32 °C antes de ser mergulhado em nitrogênio líquido (-196 °C). Em seguida, os embriões foram descongelados e cultivados durante 72 h em meio SOF-BE1 suplementado com 10% (v/v) de soro fetal bovino a 38,5 °C numa atmosfera umidificada de 5% de CO 2, 5% O2 e 90% N2. Os embriões tratados com 0,1 mM de AA apresentaram maiores taxa de re-expansão às 24, 48 e 72 h e na taxa de eclosão às 72 h em comparação com os embriões do controle (P<0,05), assim, essa concentração foi considerada como ótima para os seguintes experimentos. Para o experimento 2 e 3, os embriões foram criopreservados em meio de congelamento contendo ou não 0,1 mM de AA, em seguida foram descongeladas e cultivadas durante 24 h. As concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigénio foram reduzidos (P<0,001) pelo antioxidante AA (30,3 ± 2,4) em comparação com o controle (49,3 ± 1,9). Não houve efeito sobre o número total de células de blastocisto (P>0,05). Contudo, o AA 0,1 mM reduziu (P<0,001) a percentagem de células apoptóticas e a fragmentação do DNA comparado ao grupo controle. Os experimentos 4 e 5 foram conduzidos para avaliar os efeitos do DTT ou z-DEVD-fmk durante a criopreservação. Blastocistos e blastocistos expandidos foram equilibrados em meio de congelamento contendo DTT (0, 50, 100 e 200 μM) ou z-DEVD-fmk (0, 50, 100 e 200 μ M). Os embriões em palhetas foram colocados numa máquina de congelamento programável em -6,0 °C a -32 °C antes de ser mergulhado em nitrogênio líquido (-196 °C). Os embriões foram descongelados e cultivados em seguida durante 72 h. A taxas de re-expansão e eclosão foram registradas às 24, 48 e 72 h. Não houve efeito (P>0,05) do tratamento com DTT ou z-DEVD-fmk nas taxas de re-expansão e eclosão às 24, 48 ou 72 h pós- descongelamento. Este é o primeiro trabalho que utiliza os antioxidantes AA e DTT ou o inibidor específico da apoptose z-DEVD-fmk no meio de criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro. Em conclusão, a adição de AA (0,1 mM) no meio de congelamento lento melhora a crio-sobrevivência de embriões bovinos produzidos in vitro, reduz as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigénio e a fragmentação do DNA. Os tratamentos DTT e z-DEVD-fmk não apresentaram nenhum efeito sobre a sobrevivência dos embriões pós- descongelamento. / Experiments described in this study were performed with the overall objective to evaluate whether the addition of antioxidants ascorbic acid (AA) and dithiothreitol (DTT), or inhibitor of caspase-3 (z-DEVD-fmk) during cryopreservation could improve the cryotolerance of in vitro produced bovine embryos. Five experiments were performed and represented as follows: experiment 1, 2 and 3 in Chapter 2 and experiment 4 and 5 in Chapter 3. For all experiments, cumulus oocyte complexes were obtained from ovaries of slaughterhouse cows. Oocytes were in vitro matured, fertilized and cultured to day 7. Blastocysts and expanded blastocysts were randomly assigned to be subjected to controlled-rate freezing following equilibration for 10 min in freezing medium (Hepes-TALP plus 1.5 M ethylene glycol and 0.1 M Sucrose) with treatments as described below. For experiment 1, the embryos were equilibrated in freezing medium containing 0.0; 0.1; 0.3 or 0.5 mM of AA. The embryos into straws were then placed into programmable freezing machine at -6.0 °C to -32 °C prior to being plunged into liquid nitrogen (-196 °C). Then, embryos were thawed and cultured for 72 h in SOF-BE1 supplemented with 10% (v/v) fetal bovine serum at 38.5 oC in a humidified atmosphere of 5% CO2, 5% O2 and 90% N2. Embryos treated with 0.1 mM AA showed higher re-expansion at 24, 48 and 72 h and hatching rates at 72 h compared to control embryos (P<0.05), thus concentration was considered as the optimal for the sequential experiments. For experiment 2 and 3, embryos were cryopreserved in freezing medium containing or not 0.1 mM AA, then were thawed and cultured for 24 h. Intracellular reactive oxygen species levels were reduced (P<0.001) by AA treatment (30.3 ± 2.4) compared with control (49.3 ± 1.9). There was no effect of the total cells number of blastocyst (P>0.05). However, 0.1 mM AA reduced (P<0.001) the percentage of apoptotic cells and DNA fragmentation compared with the control group. Experiments 4 and 5 were conducted to assess the effects of DTT or z-DEVD-fmk during cryopreservation. Blastocyst and expanded blastocysts embryos were equilibrated in freezing medium containing DTT (0, 50, 100 and 200 μM) or z-DEVD-fmk (0, 50, 100 and 200 μM). The embryos into straws were then placed into programmable freezing machine at - 6.0 °C to -32 °C prior to being plunged into liquid nitrogen (-196 °C). Embryos were thawed and then cultured for 72 h. Re-expansion and hatching rates were recorded at 24, 48 and 72 h. There was no effect (P>0.05) of treatment with DTT or z-DEVD- fmk on re-expansion or hatching rates at 24, 48 or 72 h post-thaw. This is the first report that used AA and DTT antioxidants or z-DEVD-fmk a specific inhibitor of the apoptosis in the cryopreservation medium of in vitro produced bovine embryos. In conclusion, addition of AA (0.1 mM) in slow-freezing medium improves the cryosurvival of in vitro produced bovine embryos, reduces intracellular reactive oxygen species levels and DNA fragmentation. DTT and z-DEVD-fmk treatments had no effect on post-thaw embryo survival.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T18:58:57Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_lm_me_botfmvz.pdf: 178812 bytes, checksum: 797042795544766c3d38f3b7f7288cad (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O desvio ou divergência folicular é um momento importante da seleção folicular, onde pela primeira vez, nota-se uma diferença significativa na taxa de crescimento entre os dois maiores folículos ovarianos. A seleção folicular tem sido estudada intensamente em raças européias (Bos taurus taurus), porém pouco estudada em raças zebuínas (Bos taurus indicus). Objetivou-se com o presente trabalho determinar as características morfológicas do desvio associadas a primera onda folicular do ciclo estral de vacas da raça Nelore. A partir do dia da ovulação, os três maiores folículos (F1, F2 e F3) tiveram seu desenvolvimento acompanhado por ultra-sonografia transretal, realizada a cada 12 h, até o sexto dia após a ovulação. Em cada animal (n= 11), o momento do desvio foi determinado graficamente usando inspeção visual do perfil de crescimento dos F1, F2 e as vezes F3 (desvio observado) e matematicamente, usando análise de regressão linear segmentada para comparar as diferenças de diâmetro entre F1 e F2, e as vezes F3 (desvio calculado). Os resultados da determinação do momento do desvio usando os métodos matemático e observado, não foram significativamente diferentes. Utilizando-se a média dos resultados dos dois métodos, o momento do desvio ocorreu 2,4 dias após a ovulação, quando o F1 atingiu 6,1 mm. Concluiu-se que, o diâmetro do futuro folículo dominante no momento do desvio folicular foi de aproximadamente 6,1 mm em vacas da raça Nelore, cerca de 2,4 dias após a ovulação. / Follicle diameter deviation is defined as the beginning of the differential change in growth rates between the largest and next largest follicles subsequent to wave emergence and is considered a key component of follicle selection. Follicle selection has been extensively studied in European breeds of cattle (Bos taurus) but has not been critically studied in Zebu breeds (Bos indicus). The objective of the present study was to determine the morphological characteristics of deviation associated with the first post-ovulatory wave (Wave 1) of the estrous cycle in nonlactating cows. Beginning on the day of ovulation (day 0), the three largest follicles (F1-F3, respectively) were individually tracked every 12 h for 6 d using transrectal ultrasonography. In individual animals (n=11), deviation was determined graphically using visual inspection of the diameter profiles of F1, F2 and sometimes F3 (observed deviation) and mathematically using segmented regression analysis of the diameter differences between F1 and F2 or sometimes F3 (calculated deviation). The results of determining the beginning of deviation in cows using the observed and calculated methods were not significantly different. Averaged over both methods, diameter deviation occurred 2.4 d after ovulation when F1 reached 6.1 mm in cows. It is concluded that the future dominant follicle has 6.1 mm at the time of deviation in Nelore cows, 2.4 days after ovulation.

Orientador : Flávio Abranches Pinheiro / Banca: Izabel Cristina Takitane / Banca: Ciro Moraes Barros / Banca: Geraldo Sant'Ana C. de Barros / Banca: Evaristo Marzabal Neves / Resumo: A bovinocultura de corte é de reconhecida importância no agronegócio brasileiro (mercado interno e externo), sendo que o país tem o segundo rebanho bovino mundial, com cerca de 80% destinados a produção de carne (maioria de zebuínos). Um dos limitantes desta atividade é a reprodução dos animais, que permite que o rebanho cresça em número e qualidade. Atuando-se sobre a reprodução, pode-se melhorar a conversão alimentar, diminuindo o custo. A inseminação artificial (IA) tem grande importância na obtenção de ganhos quantitativos e qualitativos (e.g. ganho genético), além de permitir um melhor controle do rebanho. Novas tecnologias de inseminação estão sendo aperfeiçoadas, inclusive tratamentos hormonais que possibilitam a IA com tempo fixo (IATF). Considerando a questão energética, é importante o desenvolvimento de tecnologias que otimizem os gastos energéticos na bovinocultura. Este trabalho tem por objetivo avaliar os custos econômicos (valores em reais, julho de 2003) nos manejos reprodutivos: IA convencional (IAC), IATF (GnRH-PGF2 -GnRH, GnRH-PGF2 -BE), GP (controle, GnRH-PGF2 e IA) e Monta; em vacas Nelore (zebuínos), além de fazer considerações sobre o gasto energético biológico destes manejos. A partir de dados obtidos em uma fazenda comercial da região de Botucatu, SP, foram realizadas análises de custos de reprodução de bezerros, nas tecnologias de IAC, IATF (grupos GPG-9, GPG-12, GPE-15 e GPE-18) e GP (GP-21 e GP-24) associados à Monta; e Monta-Simulado. O melhor Custo Total Unitário de reprodução por bezerro (CTU) foi observado na IAC (R$ 127,00) com taxa de prenhez (TxPr) de 84%. Na IATF, o melhor resultado foi do grupo GPE-15 (R$ 130,00, TxPr 74%)...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Beef cattle is a very important sector in Brazilian agribusiness, both in domestic and international market. Brazil has the second largest bovine herd in the world, with 80% of beef cattle (mostly Bos indicus). A limiting factor of this activity is the animal reproduction, which allows herd improvement and growth. Acting on reproduction may allow improvements on feed conversion, diminishing costs. Artificial insemination (AI) is a way of obtaining quantitative and qualitative gains (genetic improvement), in addition to a better herd management. New technologies on AI are been developed, including hormonal treatments which allow timed fixed AI (TAI). Besides, on the energetic approach, the development of new technologies optimizing energy expenses is also very important. The aim of this study was to evaluate the economic costs (in Reais, July 2003) on several reproductive handlings: Conventional AI (IAC), Timed AI (TAI; GnRH-PGF2 -GnRH; GnRH-PGF2 -BE), Synchronized estrus GP (control, GnRH-PGF2 and AI) and Natural Service; in Nelore cows (Bos indicus), in addition to making short considerations regarding energetic expenses on those handlings. Reproduction costs analysis were performed on data obtained on a commercial farm in Botucatu, SP, on IAC and TAI (groups GPG-9, GPG-12, GPE-15 and GPE-18) and GP (GP-21 e GP-24) associated to Natural Service; and simulated Natural Service group. The best total reproduction cost per calf (CTU, R$ 127,00) was observed in IAC with the pregnancy rate (TxPr) of 84%; otherwise, in TAI, the best result was from GPE-15 (R$ 130,00, TxPr 74%). The simulated Natural Service group had a CTU of R$ 116,00, with TxPr of 87%. The other groups obtained CTUs of R$163,00 (GPG-12, TxPr 69%), R$174,00 (GPE-18, TxPr 68%), R$181,00 (GP-21, TxPr 59%), R$ 189,00 (GPG-9, TxPr 67%) e R$ 338,00 (GP-24 TxPr 31%)...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Nereu Carlos Prestes / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Inês Cristina Giometti / Banca: Jeanne Broch Siqueira / Resumo: O objetivo deste foi avaliar os efeitos da utilização de implantes subcutâneos de Deslorelina (agonista de GnRH-Suprelorin®) por 70 dias sob a dinâmica folicular, secreção de FSH, LH e P4 e, a expressão gênica e proteica dos receptores endometriais de estrógeno e (E R e E R), de progesterona isoformas A e B (PABR e PBR) e de ocitocina (OTR) em vacas Nelore (Bos taurus indicus). Foi sincronizada a ovulação de 15 vacas Nelore com escore de condição corporal (ECC) 3 e, no D0 foram aleatoriamente selecionados 7 animais para serem submetidos a implantação subcutânea de Deslorelina por 70 dias. O exame ultra-sonográfico foi realizado para caracterização da dinâmica folicular e os folículos foram classicados em classes: I (< 0,4 cm), II (0,4-0,6cm) e III (> 0,6cm). Amostras de sangue foram coletadas para mensuração das concentrações plasmáticas de FSH, LH e P4. A pulsatilidade e os picos de LH foram determinados a partir de amostras sanguíneas coletadas a cada 15 minutos por 6 horas em 4 vacas escolhidas aleatoriamente nos D20 e D62. A mensuração da expressão proteica dos E R, E R, PABR e PBR no epitélio glandular e estroma uterino foram mensurados por meio da técnica da imunoistoquímica e, a expressão gênica dos E R, E R, PABR e OTR foi avaliada com auxílio da técnica de qRT-PCR, ambas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective this study is to evaluate the effects of subcutaneous implant Deslorelin (GnRHa-Suprelorin®) by 70 days on the endocrine dynamic, the follicular development and, gene and protein expression of endometrial receptors of estrogen and (E R and E R), progesterone isoforms A and B (PABR and PBR), and oxytocin (OTR) of Nelore (Bos taurus indicus) cows . Ovulation of 15 Nelore cows with BCS 3 was synchronized following of implantation of Deslorelin in 7 animals for 70 days. During this period, the ovaries were scanned by ultrasonography to characterize the follicular dynamics, where the follicles were divided in class: I (< 0.4 cm), II (0.4-0.6 cm) and III (> 0.6 cm). Blood samples were collected before of each ultrasonographic exam for later measurement of plasma FSH, LH and P4. The assessment of LH pulsatile secretion was measured on blood samples collected every 15 minutes for six hours through the jugular catheterization in fourrandomly chosen cows on D20 and D62. The protein expression of E R and E R, PABR and PBR of endometrial glandular epithelial and stromal was measured using the technique of immunohistochemistry and the quantification of gene expression of E R, E R, PABR and OTR by qRT-PCR technique from fragments collected through endometrials biopsies on days 0, 4, 20 and 27. Others two samples of endometrium were used for. The comparison between the moments of the measures was performed using the nonparametrics tests of the Friedman and Fisher's Exact. The relationship between the results of follicular dynamics, gene and protein expression was performed by Pearson correlation, all with a significance level of 0.05. During the 70 days of implantation of Deslorelin neither animal ovulated, indicating that the preovulatory peak of LH was abolished. The maximum number of follicles... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Fábio Morato Monteiro / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Ricarda Maria dos Santos / Resumo: As suplementações de bovinos com fontes de ácidos graxos poliisaturados (AGPs) são formas de aumentar o nível energético das dietas, além de possuir efeito na reprodução dos ruminantes. Tendo em vista o exposto idealizouse o presente trabalho com o objetivo de avaliar as condições reprodutivas do pósparto, número de folículos, quantidade de oócitos totais, de viáveis e a PIVE de doadoras primíparas da raça Nelore (Experimento 1) e multíparas da raça Holandesa (Experimento 2) suplementadas com dieta rica em AGPs protegido (Megalac-E®, principalmente de n-6) e não protegido (Linhaça, principalmente de n- 3) durante o pré e pós-parto. No experimeto 1 as doadoras Nelore foram divididas aleatoriamente em 3 grupos, sendo que o grupo controle apresentou 7 fêmeas, o segundo grupo, com 8 animais que foram suplementados com uma fonte de gordura protegida contendo 100g/doadora/dia de Megalac-E® e o terceiro grupo com 7 fêmeas suplementadas com uma fonte de gordura não protegida contendo 1kg/doadora/dia de torta de linhaça. As dietas foram fornecidas por 30 dias pré-parto e 75 dias pós-parto. Estes animais foram submetidos à OPU nos dias 30, 45, 60 e 75 pós-parto. No experimento 2 as doadoras Holandesa foram divididas aleatoriamente em 3 grupos, sendo que o grupo controle apresentava 6 fêmeas, o segundo grupo, com 5 animais que foram suplementados com uma fonte de gordura protegida contendo 100g/doadora/dia de Megalac-E® no pré-parto e 300g/doadora/dia no pós-parto e o terceiro grupo com 5 fêmeas suplementadas com uma fonte de gordura não protegida contendo 1kg/doadora/dia de torta de linhaça no pré-parto e 1,5kg/doadora/dia no pós-parto. As dietas foram fornecidas por 30 dias pré-parto e 60 dias pós-parto. Estes animais foram submetidos à OPU nos dias 30, 45 e 60 pós-parto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The supplementation of cattle with sources of polyunsaturated fatty acids (PUFA) are ways to increase the energy level of the diet, in addition to having effect on reproduction. The aim of this study were to evaluate the reproductive conditions of the postpartum, number of follicles, aspirates oocytes, amount of viable oocytes and the IVPE of the Nelore primiparous donors (Experiment 1) and Holstein multiparous donors (Experiment 2) supplemented with rich diet in protected PUFA (Megalac-E®) and non-protected (Linseed) during pre and postpartum. In experiment 1 Nelore donors were divided into three groups, the control group with 7 animals, the second group, with 8 animals were supplemented with a source of protected fat contains 100g/donor/day of Megalac-E® and the third group with 7 animals supplemented with a source of unprotected fat contains 1kg/donor/day linseed. The diets were fed for antepartum thirty days and postpartum seventy-five days. These animals were submitted to OPU on days 30, 45, 60 and 75 postpartum. In Experiment 2 Holstein donors were divided into three groups, the control group with 6 animals the second group, with 5 animals were supplemented with a source of protected fat contains 100g/donor/day of Megalac-E® in pre-partum and 300g/donor/day in postpartum and the third group with 5 animals supplemented with a source of fat unprotected contains 1kg/donor/day linseed pre-partum and 1.5 kg/donor/day in postpartum. The diets were fed for antepartum thirty days and postpartum sixty days. These animals were submitted to OPU on days 30, 45 and 60 postpartum. The recovered oocytes from both experiments were selected and the viable oocytes were submitted to procedures of the IVPE. The data from both experiments were analyzed by the method of least squares using variance analysis... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre