Submitted by ROSANA FERREIRA SILVA (rosanafsilva@hotmail.com) on 2017-01-30T17:37:11Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO CORRIGIDA APROVADA 27.01.pdf: 1086012 bytes, checksum: 936dc95381491fd885964319d807944c (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-03T15:53:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_rf_me_sjc.pdf: 1086012 bytes, checksum: 936dc95381491fd885964319d807944c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T15:53:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_rf_me_sjc.pdf: 1086012 bytes, checksum: 936dc95381491fd885964319d807944c (MD5) Previous issue date: 2016-12-01 / Outra / Micro-organismos como fungos do gênero Candida, são habitantes comensais da cavidade bucal; em condições normais, co-existem com a microbiota normal sem provocar doenças. Entretanto, alterações locais ou sistêmicas como imunossupressão, desequilíbrio da microbiota oral, hipossalivação e mucosite, secundárias ao tratamento quimioterápico, predispõem pacientes com câncer a um alto risco de infecções fúngicas orais e sistêmicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar a presença de leveduras do gênero Candida na cavidade bucal de pacientes onco-hematológicos submetidos a transplante autólogo de células-tronco hematopoiéticas (TACTH). Foram avaliados 27 pacientes, nos períodos pré, e pós-transplante. As amostras da cavidade bucal foram obtidas pela técnica de enxágüe bucal e semeadas em Chromagar Candida para triagem das cepas isoladas. Após o crescimento, foi extraído o DNA e submetido a identificação molecular (PCR) utilizando iniciadores para os genes ribossomais dessa levedura. Após a amplificação do fragmento esperado, as cepas foram sequenciadas utilizando sequenciador automático.Para análise descritiva e estatística dos resultados obtidos, os dados foram submetidos ao teste de Shapiro-Wilk para avaliação da normalidade. Em seguida, o teste de variância Wilcoxon foi utilizado. A significância adotada foi de 5%. Candida spp foi encontrada em 40,74% (11 pacientes), sendo que 2 (18,18%) possuíam mais de uma espécie, dos 9 pacientes colonizados por apenas uma espécie, 7 eram portadores de Candida albicans (77,77%) e 1 Candida dubliniensis (11,11%) e 1 C. krusei (11,11%). As colonizações mistas, nos outros dois pacientes, foram compostas de C. albicans + C. glabrata; C. albicans + C. dubliniensis. Na segunda coleta (C2), 9 (81,81%) dos portadores de Candida permaneciam colonizados, inclusive por espécies não albicans. A homologia na identificação das espécies com cepas padronizadas foi de 85 a 99%. Dentro das condições deste trabalho foi possível determinar, com precisão as espécies de Candida na cavidade oral dos pacientes, bem como observar que o uso profilatico de clorexidina tópica não elimina a colonização alertando para possibilidade de infecções sistêmicas. / Microorganisms such as fungi of the genus Candida, are commensal inhabitants of the oral cavity; under normal conditions co-exist with normal microflora without causing disease. However, local or systemic changes such as immunosuppression, imbalance in the oral microbiota, hyposalivation and mucositis, secondary to chemotherapy, predispose cancer patients at high risk of oral and systemic fungal infections. The aim of this project is to evaluate the presence of Candida species in the oral cavity of hematological malignances patients undergoing autologous transplantation of hematopoietic stem cells (HSCT). We evaluated 27 patients in pre- and post-transplant. Samples of the oral cavity were obtained by oral rinse technique and plated on Chromagar Candida for screening of the strains. After growth, the DNA was extracted and subjected to molecular identification (PCR) using primers for the ribosomal genes in this yeast. After amplification of the expected fragment, the strains were sequenced using the sequencer automático. For descriptive and statistical analysis of the results, the data will be submitted to the Shapiro-Wilk test for evaluation of normality. Then the variance Wilcoxon test was used. The significance of 5% was adopted. Candida spp was found in 40.74% (11pacientes), and 2 (18.18%) had more than one species, of the 9 patients colonized by only one species, 7 patients had Candida albicans (77.77%) and 1 Candida dubliniensis (11.11%) and 1 C. krusei (11.11%). Mixed settlements, in the other two patients were composed of C. albicans + C. glabrata; C. albicans + C. dubliniensis. In the second collection (C2), 9 (81.81%) of Candida carriers remained colonized, including by non albicans species. The homology identification of species standardized strains was 85 99%. Within the conditions of this study it was possible to determine with precision the species of Candida in the oral cavity of patients, and noted that the prophylactic use of topical chlorhexidine does not eliminate the possibility of colonization warning of systemic infections.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:59:31Z : No. of bitstreams: 1 monteiro_ba_me_botfmvz.pdf: 1690076 bytes, checksum: 2290265393e1a80a119df41bc5967502 (MD5) / Células-tronco embrionárias (CTEs) são células pluripotentes derivadas da massa celular interna, obtidas de blastocistos pré-implantados. Devido à sua pluripotência podem se diferenciar nos derivados das três camadas germinativas, endoderma, ectoderma e mesoderma, tanto in vitro como in vivo. O objetivo deste trabalho foi isolar e cultivar células da MCI de blastocistos equinos frescos e refrigerados, e caracterizar o cultivo destas células por meio da expressão dos marcadores Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Para tal foram utilizadas 10 éguas, das quais foram obtidos 40 embriões, divididos em dois grupos, sendo o Grupo 1 de embriões frescos, totalizando 26 embriões, e o Grupo 2 de embriões refrigerados, totalizando 14 embriões. No grupo 1 de embriões frescos, 73,1% das MCIs aderiram à monocamada dois dias após o cultivo, 65,4% mantiveram-se aderidas 4 dias após o cultivo, 19,2% foram submetidas à primeira passagem e nenhuma foi submetida à segunda passagem. Já no Grupo 2 de embriões refrigerados, 85,7% das MCIs aderiram á monocamada 2 dias após o cultivo, 85,7% das células permaneceram aderidas à monocamada 4 dias após o cultivo, 21,4% foram submetidas à primeira passagem, e 7,1% à segunda passagem. As colônias de CTEs equinas obtidas de embriões frescos foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Já as colônias de CTEs obtidas de embriões refrigerados foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 e SSEA-4. As células da MCI quando isoladas dos blastocistos equinos frescos e refrigerados, foram capazes de formar colônias semelhantes à colônias de CTEs. Quando cultivadas sobre monocamada de fibroblastos equinos e inativadas com Mitomicina C, apresentaram crescimento celular e foram capazes de formar colônias de CTEs... / Embryonic stem cells are pluripotent cells, derived from inner cell mass, obtained from pre-implanted blastocysts. Because of their pluripotency, they can differentiate into derivatives of three germ layers, endoderm, ectoderm and mesoderm, both in vitro as in vivo. The aim of this study was to isolate and culture inner cell mass (ICM) cells from fresh and cooled equine blastocysts and characterize stem cells culture obtained from fresh and cooled equine embryos, by the expression of pluripotency markers as Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. For this, 10 mares were used, from which were obtained 40 embryos, divided into two different groups, Group 1 from fresh embryos, with a total of 26 embryos, and Group 2 from cooled embryos, with a total of 14 embryos. In Group 1 of fresh equine embryos, 73,1% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 65,4% maintained adhered four days after culture, 19,2% were submitted to first passage and none were submitted to second passage. Whereas in the Group 2 of cooled embryos, 85,7% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 85,7% maintained adhred to the monolayer 4 days after culture, 21,4% were submitted to first passage and 7,1% to second passage. The equine embryonic like-stem cells obtained from fresh embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. While the embryonic like-stem cells obtained from cooled embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 and SSEA-4. The ICM cells when isolated from fresh and cooled equine blastocysts were capable to form embryonic stem cells-like colonies. When they were cultured under an equine fibroblasts monolayer and inactivated with Mitomycin C, showed cellular development and were able to form colonies. Equine embryonic... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-09-18T02:07:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000474864-Texto+Completo-0.pdf: 4783570 bytes, checksum: 1da454a8aaea971c62e4fff0a6d841a2 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction : The cellular and physiological changes that accompany the aging process has pronounced effects in neurodegenerative diseases. Factors that produce neurodegeneration do so through different processes that culminate in a common signaling pathway cascade. Stem cells communicate via cellular signaling mechanisms, which is part of a complex system which governs and coordinates activities and cell functions. Understanding the mechanisms and forms of intercellular communication and their relationship in the activation of signaling cascades from the surface receptor to the cell nucleus during neurogenesis, will answer some pertinent questions to the mechanisms of action of stem cells in repair central nervous system. Objective : This study aimed to determine which RTKs being activated during neurogenesis of adult stem cells from human umbilical cord tissue. Methods : Adult stem cells were obtained from human umbilical cord tissue (n = 3) and subjected to specific inducers in neurodifferentiation means. The kit Human Phospho-RTK Array was used for evaluating the phosphorylation of the RTK and the expression determined by realtime PCR. Results : The mesenchymal stem cells obtained from umbilical cord tissue were confirmed by differentiation induction in adipocytes and osteocytes cells. The neurodifferentiation was confirmed by expression of genes that are expressed during neurogenesis in cells and neural cells, as well as immunocytochemistry technique markings which showed nuclear (DAPI) and cell processes (Fluoropan). During the neuroinduction processes and neurodifferentiation the phosphorylation levels of RTKs were variable, with no clear pattern. The Ryk receptor showed no significant changes in their levels of phosphorylation of the three samples studied and the different stages of differentiation, ie, mesenchymal, neuroinductions and neurodifferentiates cells. Conclusions : The tyrosine kinases are actively being phosphorylated during neuroinduction and neurogenesis, with varying standards between the different stages and between different samples, reflecting the variability of human adult stem cells. / Introdução : As alterações celulares e fisiológicas que acompanham o processo de envelhecimento tem efeitos pronunciados nas doenças neurodegenerativas. Os fatores que produzem neurodegeneração o fazem através de diferentes processos, que culminam em uma via comum de cascata de sinalização. As células-tronco se comunicam por mecanismos de sinalização celular, que faz parte de um complexo sistema que governa e coordena as atividades e funções celulares. Compreender os mecanismos e as formas de comunicação intercelular e a sua relação na ativação das cascatas de sinalização, desde o receptor de superfície até o núcleo celular, durante a neurogênese, permitirá responder algumas questões pertinentes aos mecanismos de ação das células-tronco no reparo do sistema nervoso central. Objetivo : Este estudo teve como objetivo determinar quais os RTKs que estão sendo ativados durante a neurogênese de células-tronco adultas de tecido de cordão umbilical humano. Metodologia : Células-tronco adultas foram obtidas de tecido de cordão umbilical humano (n=3) e submetidas a neurodiferenciação em meios indutores específicos. O kit Human Phospho-RTK Array foi utilizado para avaliação da fosforilação dos RTKs e a expressão determinada por PCR em tempo real. Resultados : As células-tronco mesenquimais obtidas do tecido do cordão umbilical foram confirmadas através da indução de diferenciação em células adipócitas e osteócitas. A neurodiferenciação foi confirmada através da expressão de genes que são expressos nas células durante a neurogênese e em células neurais, como também a técnica de imunocitoquímica que mostrou marcações nucleares (DAPI) e prolongamentos celulares (Fluoropan). Durante os processos de neuroindução e neurodiferenciação os níveis de fosforilação dos RTKs foram variáveis, sem um padrão definido. O receptor Ryk não apresentou alterações significativas nos seus níveis de fosforilação entre as três amostras estudadas e nas diferentes etapas de diferenciação, isto é, células-tronco mesenquimais, células neuroinduzidas e células neurodiferenciadas. Conclusões : Os receptores tirosina quinases estão sendo ativamente fosforilados durante a neuroindução e neurogênese, com padrões variáveis entre as diferentes etapas e entre diferentes amostras, refletindo a variabilidade das células-tronco adultas humanas.

Submitted by Francine Benetti (francine_benetti@hotmail.com) on 2018-04-20T19:51:50Z No. of bitstreams: 1 Tese Francine Benetti - Endodontia - Unesp Araçatuba.pdf: 3865247 bytes, checksum: fa9bbf2ed59a70e845ce04ead454d654 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-04-23T14:02:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 benetti_f_dr_araca_int.pdf: 3865247 bytes, checksum: fa9bbf2ed59a70e845ce04ead454d654 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-23T14:02:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 benetti_f_dr_araca_int.pdf: 3865247 bytes, checksum: fa9bbf2ed59a70e845ce04ead454d654 (MD5) Previous issue date: 2018-04-13 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Através de modelo experimental caracterizado por nosso grupo de pesquisa, e protocolo clareador adaptado, verificamos que o peróxido de hidrogênio (H2O2) contido no gel clareador pode gerar efeitos ao tecido pulpar, que ainda não estão completamente compreendidos. Outros estudos mostram uma indução à mineralização, levando à posterior calcificação de grande parte do tecido pulpar e à formação de nódulos. Objetivos: Os objetivos deste trabalho foram divididos em duas etapas: 1 – Verificar os efeitos do H2O2 na expressão de marcadores da mineralização no tecido pulpar, por meio da imunomarcação de osteocalcina (OCN) e osteopontina (OPN); e a presença de resposta celular específica ao estresse oxidativo, por meio de imunomarcação com anticorpo para espécies reativas de oxigênio (EROs); 2 – Determinar a capacidade de resposta ao estresse oxidativo gerado pelo H2O2 no tecido pulpar, por meio da imunomarcação de Heme-oxigenase-1 (HO-1); investigar os efeitos do gel clareador sobre a diferenciação odontoblástica, por meio da imunomarcação do fator de transcrição Jun-D; e a influência do estresse oxidativo gerado pelo H2O2 na identificação de células-tronco mesenquimais (CTMs) do tecido pulpar, por meio da técnica de imunofluorescência, com identificação concomitante de positividade celular para CD90, CD73, CD105 e negatividade para CD45. Materiais e métodos: Foram utilizados 60 ratos Wistar que tiveram os molares superiores direitos ou esquerdos clareados com 0,01 mL de H2O2 35%, em uma aplicação de 30 minutos, de forma randomizada. Os molares do lado não clareado serviram de controle. Após 0 horas, 2, 3, 7, 15 e 30 dias (n=10), os animais foram mortos e as maxilas processadas para avaliação histológica, imunoistoquímica (OCN, OPN, EROs, HO-1 e Jun-D) e de imunofluorescência (CD90, CD73, CD105, CD45). Os resultados foram submetidos a testes estatísticos específicos (p<0,05). Resultados: No tempo de 0 horas, houve necrose em toda a polpa coronária (p<0,05), e aos 2 e 3 dias, no terço oclusal (p<0,05); aos 7, 15 e 30 dias, não houve inflamação, assim como no controle (p>0,05). Dentina terciária estava presente aos 7 dias, aumentando em 15 e 30 dias (p<0,05). Em relação aos marcadores de mineralização, OCN foi ausente imediatamente após procedimento clareador, aumentando ao longo dos períodos, se tornando significativa aos 15 e 30 dias (p<0,05); OPN apresentou maior imunomarcação aos 7 e 15 dias no grupo clareado (p<0,05). A imunomarcação de EROs foi significativa em todos os terços da polpa coronária no grupo clareado aos 7 e 15 dias, e no terço cervical aos 2 e 30 dias, comparada ao controle (p<0,05). HO-1 revelou maior imunomarcação no grupo clareado nos terços médio e cervical da polpa coronária aos 2 e 3 dias, em todos os terços aos 7 dias, e no terço oclusal aos 15 dias, quando comparado ao grupo controle (p<0,05). Imunomarcação nuclear para Jun-D foi significativa no grupo clareado no terço cervical da polpa coronária aos 2 e 3 dias, e nos terços oclusal e médio aos 7 dias, quando comparado ao grupo controle (p<0,05), reduzindo nos demais períodos (p>0,05). Poucas células CD90+/CD73+/CD105+/CD45- foram observadas no tecido pulpar do grupo controle e do grupo clareado em todos os períodos de análise (p>0,05). Conclusões: Pode-se concluir que: 1 – A redução da inflamação e o processo de reparo pulpar após procedimento clareador está associado com o aumento de OCN, e OPN participa durante o processo de reparo; EROs está presente no processo de defesa celular contra o estresse oxidativo decorrente do H2O2. 2 – As células pulpares apresentam capacidade de resposta ao estresse oxidativo expressando HO-1 nos períodos onde há inflamação, até o início do reparo; Jun-D é presente no tecido pulpar durante a redução do processo inflamatório e início da produção de dentina terciária; a presença de estresse oxidativo não influencia o número de células CD90+/CD73+/CD105+/CD45- identificadas in vivo no tecido pulpar. / Introduction Through an experimental model characterized by our research group, and adapted bleaching protocol, we verified that the hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) of bleaching gel can generate effects on the pulp tissue, which are not yet completely understood. Studies show an induction to mineralization, leading to subsequent calcification of a large part of the pulp tissu e and to the formation of nodules. Objectives The objective s of this study were divided into two stages: 1 – To verify the effects of H 2 O 2 on the expression of mineralization markers in pulp tissue, through of immunolabelling of the osteocalcin (OCN) and o steopontin (OPN); and the presence of specific cellular response to oxidative stress, by immunolabeling with antibody to reactive oxygen species (ROS); 2 – To determine the capacity of response to oxidative stress generated by H 2 O 2 in pulp tissue , through of immunolabelling of Heme - oxigenase - 1 (HO - 1); to investigate the effects of the bleaching gel on the odontoblastic differentiation, through the immunolabelling of the transcription factor Jun - D; and the influence of the oxidative stress generated by H 2 O 2 on the identification of mesenchymal stem cells ( MSC s) of the pulp tissue by the immunofluorescence technique, with the concomitant identification of cellular positivity for CD90, CD73, CD105 and negativity for CD45. Materials and methods Sixty Wistar rats were used, and the right or left upper molars were bleached with 0.01 mL of 35% H 2 O 2 , in a direct application of 30 minutes , r andomly . T he molars on the unbleached side served as controls. After 0 hours, 2, 3 , 7, 15 and 30 days (n=10), the animals were ki lled and the jaws processed for histological, immunohistochemical (OCN, OPN, ROS, HO - 1 and Jun - D) and immunofluorescence ( CD90, CD73, CD105, CD45 ) analysis. The results were submitted to specific statistical tests ( P <0.05). Results At 0 hours, there was necrosis throughout the coronary pulp ( P <0.05), and at 2 and 3 days, in the occlusal third ( P <0.05); at 7, 15 and 30 days, there was no inflammation, as well as in the control ( P >0.05). Tertiary dentin was present at 7 days, increasing in 15 and 30 days ( P <0.05). In relation to mineralization markers, OCN was absent immediately after bleaching procedure, increasing over the periods, becoming significant at 15 and 30 days ( P <0.05); OPN has higher immunolabelling at 7 and 15 days in the bleached group ( P <0.05 ). Immuno labelling of ROS was significant in all thirds of the coronary pulp in the bleached group at 7 and 15 days, and in the cervical third at 2 and 30 days, compared to the control group ( P <0.05). HO - 1 showed higher immunolabelling in the bleached grou p in the middle and cervical thirds of the coronary pulp at 2 and 3 days, in all thirds at 7 days, and in the occlusal third at 15 days, when compared to the control group ( P <0.05). Nuclear immuno labelling for Jun - D was significant in the bleached group in the cervical third of the coronary pulp at 2 and 3 days, and in the occlusal and middle thirds at 7 days, when compared to the control group ( P <0.05), reducing in the other periods ( P >0.05). Low number of CD90+/CD73+/CD105+/CD45 - cells were observed in the pulp tissue of the control group and the bleached group in all periods of analysis ( P >0.05). Conclusions It is concluded that : 1 – The reduction of inflammation and the pulp repair process after bleach ing is associated with increased of OCN, and OPN participates during the repair process; ROS are present in the cellular defence process against oxidative stress by H 2 O 2 . 2 – The pulp cells had capacity to respond to oxidative stress expressing HO - 1 in the periods where there is inflammation, until the beginning of the repair; Jun - D is present in the pulp tissue during the reduction of the inflammatory process and the beginning of the production of tertiary dentin; the presence of oxidative stress does not influence the number of CD90+/CD73+/CD105+/CD45 - cells identified in vivo in the pulp tissue. / 15/10825-2

Orientador: Clarisse Martins Machado / Resumo: Estudos sorológicos têm demonstrado que a prevalência da infecção provocada pelo vírus da hepatite A (VHA) diminuiu no Brasil. Nessas circunstancias, o vírus pode circular entre um número crescente de indivíduos suscetíveis provocando surtos. Embora a resposta à vacinação contra o VHA não tenha sido avaliada em receptores de TCTH, as orientações de imunização pós transplante tem indicado o uso da vacina após o 4º mês do TCTH em receptores suscetíveis vivendo ou viajando para áreas endêmicas. No presente estudo 46 receptores de TCTH receberam duas doses da vacina VHA. A prevalência dos anticorpos anti-VHA (IgG) imediatamente antes da vacina e a resposta a vacinação entre pacientes suscetíveis ao VHA foram avaliadas, assim como a ocorrência de eventos adversos da vacina. A prevalência de anticorpos anti-VHA em receptores de TCTH adultos avaliada por ensaio imunoenzimático comercial foi de 93,5%. Apenas 3 pacientes foram considerados suscetíveis e a resposta à vacina foi alcançada em dois deles, ambos com mais de dois anos após TCTH. Não houve aparecimento de anticorpos anti-VHA após duas doses da vacina. A resposta à vacina medida através do aumento da concentração de anticorpos anti-VHA entre receptores previamente soropositivos não pode ser avaliada no presente estudo. A vacina foi bem tolerada sem nenhum evento adverso significativo. Concluímos que a sorologia do VHA deveria ser recomendada a receptores de TCTH antes do encaminhando para a vacinação. Embora segura, a vacina ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Serological studies have demonstrated that the prevalence of the hepatitis A virus infection (HAV) has decreased in Brazil. In these circumstances, the virus may circulate among a growing number of susceptible individuals causing outbreaks. Although the response to vaccination against HAV has not been evaluated in HSCT recipients, post-transplant immunization guidelines have indicated the vaccine after the 4th month of HSCT to susceptible recipients living or traveling to endemic areas. In the present study 46 HSCT recipients received two doses of HAV vaccine. The prevalence of anti-HAV antibody (IgG) immediately before the vaccine and the response to vaccination among HAV susceptible patients were evaluated, as well as the occurrence of adverse events to the vaccine. The prevalence of pre vaccine antiHAV antibodies in adults HSCT recipients evaluated by a commercial immunoassay was 93.5%. Only 3 patients were considered susceptible and the response to the vaccine was assessed in two of them, both with more than two years after HSCT. There was no appearance of anti-HAV antibodies after two doses of vaccine. The boost effect of the vaccine among previously seropositive recipients could not be evaluated in the present study. The vaccine was well tolerated without any significant adverse events. We concluded that HAV serology should be recommended in HSCT recipients before the referral to vaccination. Although safe, the vaccine against HAV was ineffective in the evaluated patien... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Bruno das Neves Cavalcanti / Banca: Marco Antonio Húngaro Duarte / Banca: Edilson Ervolino / Banca: Célio Percinoto / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta tecidual ao implante de tubos de polietileno preenchidos com pasta triantibiótica (PTA) composta de ciprofloxacina, minociclina e metronidazol, veiculada com propilenoglicol e polietilenoglicol (macrogol), em tecido subcutâneo de ratos e, caracterizar, histologicamente, os tecidos neoformados pós-procedimento endodôntico regenerativo, empregando o coágulo ou o coágulo suplementado com plasma rico em plaquetas (PRP), aspirado de medula óssea (AMO), ou a mistura PRP/BMA, pós-desinfecção com PTA. Estudo para avaliar a biocompatibilidade da pasta: Trinta ratos receberam 2 implantes individuais de tubos de polietileno preenchidos com PTA ou pasta de hidróxido de cálcio (PHC) e um outro tubo vazio como controle. Trinta ratos adicionais receberam tubos de polietileno contendo os veículos da pasta propilenoglicol e macrogol e um procedimento somente de incisão, sem implante de tubo (Sham). Após 7, 15, 30, 60, e 90 dias, 12 animais foram sacrificados, e os tubos foram removidos e processados histologicamente pela técnica do glicolmetacrilato e corados com hematoxilina e eosina. Os scores variaram de 0 a 3, dependendo do teor de células inflamatórias, a cápsula fibrosa foi considerada fina ou espessa, e a necrose e a calcificação foram registradas como presentes ou ausentes. Os resultados foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis. Ambos os materiais induziram reações moderadas aos 7 e 15 dias sendo similares ao grupo controle (p>0.05) e reduziram para grau leve a partir de 30 dias (p>0.05). Os veículos não interferiram na resposta da pasta. A pasta triantibiótica assim com seus respectivos veículos foram biocompatíveis em todos os períodos experimentais. Estudo para análise histológica dos tecidos neoformados com diferentes estratégias de engenharia tecidual: 20 dentes... / Abstract: This study aimed to evaluate the tissue response to the implantation of polyethylene tubes filled with a triantibiotic paste (TAP) composed of ciprofloxacin, metronidazole and minocycline conveyed with propylene glycol and polyethylene glycol (macrogol) in subcutaneous tissue of rats and characterize histologically the newly formed tissues post regenerative endodontic procedure employing the blood clot (BC) or BC supplemented with platelet-rich plasma (PRP), bone marrow aspirate (BMA) or a mixture of PRP/ BMA, post-disinfection with TAP. Study to evaluate TAP biocompatibility: Thirty rats received two individual implants of polyethylene tubes filled with TAP or calcium hydroxide paste (CHP) and another empty tube as a control. Thirty other rats received additional polyethylene tubes implants containing the paste vehicles (propylene glycol and macrogol) and an incision procedure (Sham group). After 7, 15, 30, 60, and 90 days, 12 animals were killed, and the tubes were removed and processed for histological examination. The scores ranged from 0 to 3 depending on content of inflammatory cells, the fibrous capsule was considered thin or thick, and necrosis and calcification were recorded as present or absent. The results were analyzed using the Kruskal-Wallis test. Both materials induced moderate reactions at 7 and 15 days which was similar to the control group (p> 0.05) and reduced to mild after 30 days (p> 0.05). The vehicles did not affect the tissue response to the paste. The TAP and their respective vehicles were biocompatible in all experimental periods. Study to histologically evaluate newly formed tissues after regenerative treatment: 20 teeth (40 roots), from 2 Beagle dogs, had their root canals exposed to the oral environment for 90 days to induce apical periodontitis. The canals were prepared until the apical barrier with Protaper... / Doutor

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Marimélia Porcionatto / Banca: Patrícia Fidelis de Oliveira Gregolini / Banca: Marjorie de Assis Golim / Banca: Regina Kiomi Takahira / Resumo: O laser de baixa potência (LBP) é muito utilizado em diferentes ramos da medicina regenerativa e odontologia, onde é aplicado para melhorar o processo de cura e é benéfico em uma variedade de processos patológicos, no qual pode aumentar a taxa de proliferação de várias linhagens celulares. No entanto, poucos são os trabalhos que avaliaram os efeitos do LBP em células-tronco mesenquimais (CTM) caninas. Desta forma, os objetivos do presente trabalho são: caracterizar as células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (CTM-TA) e da medula óssea (CTM-MO) caninas, estudar o efeito do laser de baixa potência fosfeto de índio-gálio-alumínio nas densidades de 1,1 e 8,7 J/cm2 sobre o cultivo das mesmas quanto à proliferação e viabilidade celular, à imunogenicidade por meio da expressão do MHC-II e avaliar o cariótipo das células irradiadas e não irradiadas a fim de comprovar a ausência de alterações cromossômicas com a utilização do LBP. O estudo revelou que o LBP não alterou a viabilidade, proliferação celular, expressão de MHC-II e o cariótipo das amostras analisadas entre os grupos. Desta forma, pode-se concluir que o LBP não causa efeitos biológicos às CTM-TA e CTM-MO caninas nas dosagens utilizadas de 1,1 e 8,7 J/cm2. Portanto, outras dosagens devem ser investigadas para estimular a proliferação das CTM caninas sem causar alterações celulares deletérias / Abstract: Low power laser (LPL) is widely used in different fields of regenerative medicine and dentistry, where it is used to improve the healing process and is beneficial in a variety of disease processes, which can increase the rate of proliferation of various cell lineages. However, there are few studies evaluating the effects of LPL on canine mesenchymal stem cells (MSC). Thus, the aims of this study are: to characterize canine mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (AT-MSC) and bone marrow (BM-MSC), to investigate the effect of low power laser aluminium gallium indium phosphide at densities of 1.1 and 8.7 J/cm2 on cellular viability and proliferation, immunogenicity by MHC-II expression and evaluate the karyotype of the irradiated and non-irradiated cells in order to identify the absence of chromosomal abnormalities with the use of LPL. The study revealed that LPL did not affect cell viability and proliferation, MHC-II expression and karyotype of the samples analyzed between groups. Thus, we can conclude that LPL cause no biological effects to canine AT-MSC and BM-MSC with the 1.1 and 8.7 J/cm2 dosages used. Therefore, other dosages to stimulate proliferation without causing deleterious cellular changes of canine MSC must be investigated / Doutor

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Cássia Maria Barroso Orlandi / Banca: Ian Martin / Resumo: Células-tronco embrionárias (CTEs) são células pluripotentes derivadas da massa celular interna, obtidas de blastocistos pré-implantados. Devido à sua pluripotência podem se diferenciar nos derivados das três camadas germinativas, endoderma, ectoderma e mesoderma, tanto in vitro como in vivo. O objetivo deste trabalho foi isolar e cultivar células da MCI de blastocistos equinos frescos e refrigerados, e caracterizar o cultivo destas células por meio da expressão dos marcadores Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Para tal foram utilizadas 10 éguas, das quais foram obtidos 40 embriões, divididos em dois grupos, sendo o Grupo 1 de embriões frescos, totalizando 26 embriões, e o Grupo 2 de embriões refrigerados, totalizando 14 embriões. No grupo 1 de embriões frescos, 73,1% das MCIs aderiram à monocamada dois dias após o cultivo, 65,4% mantiveram-se aderidas 4 dias após o cultivo, 19,2% foram submetidas à primeira passagem e nenhuma foi submetida à segunda passagem. Já no Grupo 2 de embriões refrigerados, 85,7% das MCIs aderiram á monocamada 2 dias após o cultivo, 85,7% das células permaneceram aderidas à monocamada 4 dias após o cultivo, 21,4% foram submetidas à primeira passagem, e 7,1% à segunda passagem. As colônias de CTEs equinas obtidas de embriões frescos foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Já as colônias de CTEs obtidas de embriões refrigerados foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 e SSEA-4. As células da MCI quando isoladas dos blastocistos equinos frescos e refrigerados, foram capazes de formar colônias semelhantes à colônias de CTEs. Quando cultivadas sobre monocamada de fibroblastos equinos e inativadas com Mitomicina C, apresentaram crescimento celular e foram capazes de formar colônias de CTEs... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Embryonic stem cells are pluripotent cells, derived from inner cell mass, obtained from pre-implanted blastocysts. Because of their pluripotency, they can differentiate into derivatives of three germ layers, endoderm, ectoderm and mesoderm, both in vitro as in vivo. The aim of this study was to isolate and culture inner cell mass (ICM) cells from fresh and cooled equine blastocysts and characterize stem cells culture obtained from fresh and cooled equine embryos, by the expression of pluripotency markers as Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. For this, 10 mares were used, from which were obtained 40 embryos, divided into two different groups, Group 1 from fresh embryos, with a total of 26 embryos, and Group 2 from cooled embryos, with a total of 14 embryos. In Group 1 of fresh equine embryos, 73,1% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 65,4% maintained adhered four days after culture, 19,2% were submitted to first passage and none were submitted to second passage. Whereas in the Group 2 of cooled embryos, 85,7% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 85,7% maintained adhred to the monolayer 4 days after culture, 21,4% were submitted to first passage and 7,1% to second passage. The equine embryonic like-stem cells obtained from fresh embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. While the embryonic like-stem cells obtained from cooled embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 and SSEA-4. The ICM cells when isolated from fresh and cooled equine blastocysts were capable to form embryonic stem cells-like colonies. When they were cultured under an equine fibroblasts monolayer and inactivated with Mitomycin C, showed cellular development and were able to form colonies. Equine embryonic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Coorientador: Elenice Deffune / Banca: Fernando De Biasi / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Luis Gustavo Gosuen Gonçalves Dias / Banca: Paola Castro Moraes / Resumo: A cartilagem articular é um tecido que possui capacidade limitada de reparo após uma lesão aguda, e a eficácia dos tratamentos atuais geralmente resulta em alívio dos sintomas, e não em regeneração do tecido lesado. Incidindo sobre esta problemática, o objetivo do presente trabalho, foi avaliar o efeito da terapia com células-tronco mesenquimais (CTM) autólogas na regeneração da cartilagem articular de joelhos de coelhos submetidos a osteoartrite experimental. Foram utilizados 24 coelhos da raça Nova Zelândia Branca, os quais foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: GC (grupo controle); GPRP (grupo plasma rico em plaquetas); GCTM (grupo células-tronco mesenquimais autólogas indiferenciadas); GCTMdif (grupo células-tronco mesenquimais autólogas diferenciadas em condrócitos. Todos os animais foram induzidos a osteoartrite por meio da aplicação de solução de colagenase, e após quatro semanas receberam os tratamentos propostos para cada grupo. Após sessenta dias da terapia, os animais foram eutanasiados e as superfícies articulares foram submetidas a avaliações macroscópicas e histomorfológicas. Paralelamente foram realizadas diferenciações adipogênicas, condrogênicas e osteogênicas das CTM, caracterizações das mesmas por meio de análise citométrica, e avaliações de danos citogenéticos pelo Teste do Cometa. Os resultados dos exames macroscópicos e histomorfológicos revelaram um melhor tecido de reparação nos grupos tratados com CTM. As análises citométricas apresentaram resultados de imunomarcações positivos para CTM, e as diferenciações revelaram que as CTM foram capazes de se diferenciar em adipócitos, condrócitos e osteoblastos. Por meio do Teste do Cometa, foi possível notar que os danos citogenéticos aumentaram após a segunda passagem das CTM. Conclui-se que há efeitos benéficos da associação de CTM derivadas do tecido adiposo e plasma rico em plaquetas na regeneração ... / Abstract: The articular cartilage is a tissue that has limited capacity for repair after an acute injury, and the efficacy of current treatments usually results in relief of symptoms, and not in regeneration of damaged tissue. Focusing on this issue, the aim of this work was to evaluate the effect of therapy with autologous mesenchymal stem cells (MSC) in the regeneration of rabbits articular cartilage submitted to experimental knee osteoarthritis. Twenty four adult New Zealand White rabbits were randomly divided into four groups: GC (control group); GPRP (platelet rich plasma group); GCTM (undifferentiated autologous mesenchymal stem cells group); GCTMdif (chondrocyte differentiated autologous mesenchymal stem cells group). All animals were osteoarthritis-induced by application of collagenase solution, and four weeks after induction, they received the specific treatments to each group. After sixty days of therapy, the animals were sacrificed and articular surfaces were submitted to macroscopic and histomorphological evaluations. At the same time were performed adipogenic, chondrogenic and osteogenic differentiation of MSC, characterizations through cytometric analysis, and evaluation of cytogenetic damage by the Comet Assay. The macroscopic and histomorphological examinations revealed a better repair tissue in the groups treated with MSC. Cytometric analyzes showed positive results for MSC immunostaining, and differentiation showed that MSC were able to differentiate into adipocytes, chondrocytes and osteoblasts. Through the Comet Assay, it was noticeable that the cytogenetic damage increased after the second passage of the MSC. It was concluded that there are beneficial effects of the combination of MSC derived from adipose tissue and platelet-rich plasma in the regeneration of articular cartilage in knees of rabbits undergoing experimental osteoarthritis, and there is no difference when MSC are used undifferentiated or differentiated into ... / Doutor

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Banca:Marcos Antonio Maioli / Banca:Roberto Gameiro de Carvalho / Banca:Marcos Roberto Bonuti / Banca:Luiz Eduardo Correa Fonseca / Resumo: A possibilidade para o isolamento de células mesenquimais multipotentes de anexo fetal bovino é uma perspectiva interessante devido potencial para utilização destas células em aplicações biotecnológicas. No entanto, ainda há pouco conhecimento disponível sobre as características destas células progenitoras na espécie bovina. Proliferando a morfologia das células, a partir de três fases da gestação, tipicamente apareceu forma de fuso do tipo fibroblastos, apresentando o mesmo número e viabilidade. Além disso, a capacidade proliferativa das células T em resposta a um estímulo mitogénico foi suprimida quando as células da geléia de Wharton foram incluídas na cultura. Multilinhagens foram confirmadas pela sua capacidade adipogênica, condrogénica e diferenciação neurogênica. O presente estudo demonstrou que células tronco mesenquimais colhidas a partir da geléia de Wharton do cordão umbilical de bovino em todas as fases da gestação mostraram capacidade proliferativa, potencial privilegiado e imunológico. / Abstract: The possibility for isolating bovine mesenchymal multipotent stromal cells from fetal adnexa is interesting prospect because of the potential for these cells to be used for biotechnological applications. However, little knowledge is available about the characteristics of these progenitor cells in the bovine species. Proliferating cell morphology, from three stages of pregnancy, typically appeared fibroblast-like spindle shape, presenting the same viability and number. Moreover, the proliferative capacity of T cells in response to a mitogen stimulus was suppressed when Wharton's jelly mesenchymal stem cells were included in the culture. Multilineage properties were confirmed by their ability to undergo adipogenic, chondrogenic and neurogenic differentiation. The study demonstrated that Wharton's jelly mesenchymal stem cells harvested from bovine umbilical all pregnancy stages showed proliferative capacity, privileged and stem ness potential. / Doutor