Orientador: Fernanda Gonçalves Basso / Banca: Adriano Fonseca de Lima / Banca: Ana Paula Dias Ribeiro / Banca: Fernanda Lourenção Brighenti / Banca: Elisa Maria ASparecida Giro / Resumo: O objetivo geral da presente pesquisa foi avaliar o efeito do LED 850 nm sobre diferentes processos metabólicos de células-tronco da polpa dentária in vitro. Para todos os estudos, células originárias da polpa de dentes decíduos humanos hígidos foram caracterizadas por imunofluorescência utilizando os anticorpos STRO-1, CD44, CD146, Nanog e OCT3/4, antes da realização dos protocolos experimentais. No estudo 1, células foram cultivadas em placas de acrílico, estimuladas à diferenciação odontoblástica e irradiadas com LED (850 nm) em diferentes doses de energia (DE - 0, 2, 4, 8, 15 ou 30 J/cm2, 40 mW/cm2), n=9. Após 12 h e 72 h da irradiação, foram avaliados o metabolismo celular (MTT), a formação de nódulos mineralizados (NM - Alizarin Red) e o número de células viáveis (Trypan Blue). Os dados foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (p<0,05). Para o estudo 2, o mesmo protocolo experimental foi realizado, porém utilizando apenas as doses de 2 e 4 J/cm2 e o tempo de avaliação de 72 h pós-irradiação. Foram avaliados a atividade de fosfatase alcalina (ALP), a produção de proteína total (PT), produção de colágeno total (Sircol), bem como a expressão gênica (qPCR) de ALP, colágeno tipo I (Col I), sialoproteína da dentina (DSPP) e proteína da matriz dentinária (DMP-1), n=8. Os mesmos testes estatísticos foram utilizados. Para o estudo 3, as células foram semeadas sobre a superfície pulpar de discos de dentina com 0,2 mm de espessura (n=72), submetidas ao mesmo protocolo de irradiação do estudo 2, aplicada sobre a superfície oclusal dos discos de dentina (n=8, ação transdentinária). Os testes incluíram viabilidade celular (MTT), atividade de ALP, produção de PT, expressão gênica de ALP, Col I, DSPP e DMP-1 e morfologia celular (MEV) e os dados foram submetidos aos mesmos testes estatísticos. Para o estudo 1, quando comparadas ao ...(Resumo completo, clique acesso eletrônico) / Abstract: The overall aim of this study was to evaluate in vitro the effect of 850 nm LED irradiation on different metabolic processes of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs). For all studies, pulp cells originated from sound deciduous teeth were characterized by immunofluorescence using STRO-1, CD44, CD146, Nanog and OCT3/4 antibodies, before experimental protocols. In the first experiment, cells were seeded in 24 well-plates, submitted to ondontoblastic differentiation and irradiated with different energy doses (ED - 0, 2, 4, 8, 15 or 30 J/cm2, 40 mW/cm2) n=9. After 12 h and 72 h post irradiation, cell viability (MTT), mineralized nodule formation (MN - Alizarin Red) and number of viable cells (Trypan Blue) were evaluated. Data were submitted to Kruskal Wallis and Mann-Whitney tests (p<0.05). In the second experiment, the same protocol was performed, however, using only 2 and 4 J/cm2, considering 72 h post irradiation as period of evaluation. Alkaline phosphatase (ALP) activity, total protein (TP) production, total collagen production (Sircol Assay), as well as gene expression (qPCR) of ALP, collagen type I (Col I), dentin sialophosphoprotein (DSPP) and dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP-1) were assessed, n=8. For the third experiment, cells were seeded on the pulp surface of 0.2 mm-thick dentin discs (n=72) and submitted to the same protocol of irradiation as experiment 2, applied on the occlusal surface of the dentin discs (n=8, transdentinal action). The assays included cell viability (MTT), ALP activity, TP production, ALP, Col I, DSPP and DMP-1 gene expression and cell morphology (SEM). Again, the same statistical tests were applied to data. In the first study, when compared with the control group, cells submitted to 2 or 4 J/cm2 showed higher cell viability after 72 h and all EDs increased the number of viable cells after 12 h. For MN formation... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Rosana Rossi Ferreira / Banca: João Paulo de Castro Marcondes / Banca: Dejair Caitano do Nascimento / Resumo: Introdução: A Engenharia de Tecidos consiste na regeneração de órgãos e tecidos, obtidos através da coleta de partes de órgãos ou tecidos do indivíduo, que, dissociados em células, são cultivadas sobre suportes biológicos ou sintéticos (scaffolds), tendo como principal premissa o reestabelecimento e recuperação da funcionalidade do tecido lesado ou perdido. Esta tecnologia, portanto, abre novos caminhos para gerar transplantes funcionais e vitais. Dentro da Engenharia Biomédica e de Biomateriais, o Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu possui, desde 2001, pesquisas na área de produção de curativos biológicos, que são aqueles que interagem de forma ativa nas diversas fases do processo cicatricial, nos vários tipos de feridas. Diante da realidade de que o tratamento das feridas crônicas englobam altos custos econômicos, sociais e humanos, comprometendo a vida dos indivíduos acometidos e da necessidade de se otimizar e minimizar o impacto negativo do descarte de hemocomponentes excedentes da prática transfusional, o desafio é buscar alternativas de scaffolds para Terapia Celular. Objetivos: Avaliar o desempenho de diferentes arcabouços biológicos como a cola de fibrina, gel de plaquetas e membrana de quitosana dopada com fatores de crescimento extraídos de plaquetas, para cultura de células. Material e Métodos: Foi coletado um fragmento de pele e um de gordura de cinco pacientes diferentes. Estes tecidos foram submetidos a protocolos de dissociação mecânica, enzimática e por explante, seguido de isolamento, semeadura e expansão das células obtidas: células-tronco mesenquimais, fibroblastos e queratinócitos. As células foram cultivadas até ao menos a quarta passagem, caracterizadas e separadas em dois grupos: testes pré-scaffold e pós-scaffold, que consistiu nas análises de imunofenotipagem, imunocitoquímica, dosagem de citocinas inflamatórias no sobrenadante de cultura, teste do ... / Abstract: Introduction: Tissue engineering comprises in organ and proper tissue regeneration achieved by collecting small tissue fragments that are dissociated into cells and then cultivated into biological or synthetics scaffolds. The main characteristic of these constructs is their capacity to behave as their biological matrix counterparts, providing mechanical support and the required micro environment to the cells. This technology paves the way for the creation of functional and vital tissues for transplants. Within Biomedical Engineering and Biomaterials, the Cell Engineering Laboratory of the Botucatu Blood Transfusion Center has been investigating these topics since 2001, starting with the production of biological dressings. Biological dressings interact actively with the several phases of chronic wounds, which involves high economic, social and psychological costs, often condemning the patients quality of life. Considering this reality, the contribution of tissue engineering is to develop alternatives on cell therapy using scaffold technology. Aims: To assess the performance of different biological scaffolds such as fibrin glue, platelet gel and chitosan membrane for cell culture. Material and Methods: Five fragments of adipose tissue and skin were collected, dissociate with mechanical, enzymatic and explant techniques, and the resulting cells were seeded on tissue culture flasks, amplified and characterized using multiparameter techniques. Following characterization, these cells were cultivated into three different scaffolds made of fibrin glue, platelet gel and chitosan - which was performed in two distinct ways, on its natural form and incorporated with platelet-derived growth factors to analyze this interaction. Discussion and Results: cell cultures were amplified and cultivated making a good cell bank. However, keratinocytes were difficult to grow and the rest of experiments were unfeasible to drawn up. Immunocytochemistry analysis ... / Mestre

Orientador: Ana Gabriela Sávio / Banca: Mariângela Esther Alencar Marques / Banca: Érika Sinara Lenharo Orti Raduan / Resumo:A doença enxerto contra hospedeiro (DECH) ou graft-versus-host-disease (GVHD) é a maior causa de morbidade e mortalidade em pacientes que foram submetidos ao transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH). É uma síndrome com várias manifestações clínicas, patológicas e imunológicas. Com o objetivo de contribuir para o esclarecimento da participação das células dendríticas Mielóides, Plasmocitóides e Células NK (natural killer) na doença enxerto contra hospedeiro crônica (DECHc) e esclarecer os mecanismos envolvidos, foram analisados cortes microscópicos de mucosa jugal de 26 pacientes com Leucemia Mielóide Aguda (LMA), que realizaram o transplante alogênico de células tronco hematopoiéticas no Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP, onde 13 pacientes desenvolveram DECHc em mucosa bucal e 13 não desenvolveram DECHc. Cortes microscópicos foram submetidos à técnica imuno-histoquímica, utilizando-se anticorpos monoclonais anti-CD1a, anti- CD123 e anti-CD56. O número de células imunomarcadas no córion (CD1a+, CD123+ CD56+) por milímetro quadrado foi calculado dividindo-se a média das células dendríticas presentes nos 10 campos examinados pela área percorrida em cada espécime. Os dados foram avaliados pelo método de Mann-Witney Os resultados demonstraram um aumento estatisticamente significativo das células dendríticas mielóides CD1a+ (p=0,02) e das células NK CD56+(p=0,04) em pacientes com DECHc quando comparados àqueles sem DECHc. A análise da imunomarcação de CD123+ não demonstrou diferença estatística entre os grupos. Conclui-se através deste estudo que no desenvolvimento da DECH crônica há participação das células dendríticas mielóides e céulas NK no córion de mucosa bucal / Abstract:The graft versus host disease (GVHD) or graft-versus-host-disease(GVHD) is a major cause of morbidity and mortality in patients who underwent hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). It is a syndrome with various clinical, pathological and immunological. Aiming to contribute to clarifying the role of Myeloid dendritic cells, plasmacytoid cells and NK (natural killer) in chronic graft versus host disease (GVHD) and to clarify the mechanisms involved were examined microscopic sections of the oral mucosa of 26 patients with leukemia Acute Myeloid (AML) who underwent allogeneic hematopoietic stem cell in the Hospital Amaral Carvalho, Jau - SP, where 13 patients develop GVHDc oral mucosa and 13 did not develop GVHD. Microscopic sections were submitted to immunohistochemistry staining using monoclonal antibodies anti-CD1a, anti-CD56 and anti- CD123. The number of immunostained cells in the chorion (CD1a, CD123 and CD56) per square millimeter was calculated by dividing the mean of dendritic cells present in the 10 fields examined area covered by each specimen. The data were evaluated by Mann-Whitney. Results showed a statistically significant increase of myeloid dendritic cells CD1a (p = 0.02) and NK cells CD56 (p = 0.04) in patients with GVHDc compared with those without GVHDc. Analysis of CD123 immunostaining of no statistical difference between groups. It is concluded from this study that the development of chronic GVHD is participation of myeloid dendritic cells and NK cells in the chorion of oral mucosa / Doutor

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Lawrence Charles Smith / Banca: Fabiana Fernandes Bressna / Banca: Clara Slade Oliveira / Resumo: O estudo de células tronco em cães corrobora com o progresso das terapias celulares, tanto veterinárias quanto humanas, uma vez que a espécie canina é um modelo de estudo para desenvolvimento de doenças humanas hereditárias e, também, adquiridas. As CT multipotentes derivadas de tecido são geralmente as mais utilizadas, sobretudo pela facilidade de obtenção por meio do próprio animal (autólogas) e por não envolverem questões éticas, as quais limitam o uso das células tronco embrionárias. Estudos recentes e promissores demonstraram a existência de CT no ovário, com grande capacidade de proliferação e possível capacidade pluripotente. Com base nessas evidências, este projeto propôs a obtenção de células tronco isoladas a partir do tecido ovariano de cães adultos, utilizando o tecido adiposo como controle. Para tanto, foram delineados três experimentos: o experimento I possuía o objetivo de verificar as características de crescimento e morfológicas. Então, foi realizado o isolamento de células provenientes do tecido ovariano e adiposo, após digestão em colagenase, Após 3h do inicio do cultivo, foi realizada a primeira troca de meio para seleção de células aderentes ao plástico. Após 72h de cultivo primário, o tecido adiposo possuía mais células por grama de tecido em relação ao ovariano (1937 ± 592,6 vs 1771 ± 262,1), ambas as células derivadas apresentaram morfologia fibroblástica. Em relação às análises de crescimento, o tempo de duplicação da população foi similar em ambos os tipos celulares. Tanto as células do tecido adiposo, como as do ovariano foram capazes de formar colônias, entretanto as do tecido adiposo mostraram uma maior capacidade de formar colônias que as células do tecido ovariano (37,08 ± 2,10 vs. 27,08 ± 1,45, p<0,05). O experimento II possuía o objetivo de realizar a caracterização molecular das células obtidas no experimento I. Tanto as células do... / Abstract: Research with canine stem cells contributes to the progress of veterinary and human cellular therapies, because the dog is often the best animal model for many hereditary and acquired human diseases. While embryonic SC have unlimited differentiation potential (i.e. pluripotent), adult-derived multipotent SC are often preferred for ease of recovery from the patient itself (i.e. autologous) and for avoiding ethical constraints of destroying embryos to obtain pluripotent SC. Recent promising studies have shown the existence SC in ovarian tissue, that have greater proliferative and differentiation potential than SC in other adult tissues. Based on this evidence, the aim of this project was to obtain stem cells isolated from ovarian tissue of adult dogs. In experiment I, we evaluated morphological and kinetic properties of collagenase-digested ovarian and adipose derived SC. Adipose derived cells yielded more cells per tissue after 72h in culture (1937 ± 592.6 vs 1771 ± 262.1), both cells had the same fibroblastic morphology. The growth curve showed that adipose derived cells started the exponential growth before the ovarian derived cells, however when the both were multiplying, the population doubling time was the same. All the derived cells types were able to form colonies, however, adipose derived cells formed more colonies than ovarian derived cells (37.08 ± 2.10 vs. 27.08 ± 1.45). Experiment II aimed at characterizing at the molecular level the SC obtained in experiment I. We evaluated the expression of mesenchymal and pluripotent markers through immunofluorescence (flow cytometry and confocal microscopy) and PCR. Both cells from expressed CD90, CD44, CD194 and CD 105 by PCR, were positive for CD44, CD90 (only the adipose tissue) and negative for CD45 and CD34 by immunocytochemistry analysis. By flow cytometry, 37.08%+-11.35% of the population of cells derived from ovarian tissue was positive for CD90, while 62.05%+-8.40% of ... / Mestre

Orientador: Maria Rita Marques de Oliveira / Banca: Thais Borges Cesar / Banca: Carla Maria Vieira / Resumo: A elevada prevalência de fatores de risco para a Síndrome Metabólica (SM) entre pacientes submetidos ao Transplante de Células-Tronco Hematopoéticas (TCTH) já foi comprovada, mas pouco se sabe a respeito das alterações ocorridas na composição corporal e sobre a interferência do consumo de alimentos na manifestação desses fatores. Pouco se sabe também sobre o quão precoce é o surgimento dessas alterações. Frente a isso, foi proposto com este estudo avaliar o consumo de alimentos, o estado nutricional e a incidência de alteração precoce de fatores determinantes da síndrome metabólica em pacientes submetidos ao TCTH. Tratou-se de um estudo longitudinal, com dados obtidos no Departamento de Hematologia e Transplante de Medula Óssea (TMO) do Hospital de Câncer de Barretos. Participaram 27 indivíduos que realizaram TCTH no período de junho de 2009 a março de 2010, com idade média de 44±14, entre 20 e 60 anos, 13 mulheres e 14 homens, com maior proporção de TCTH autólogo (n=20) sobre o alogênico (n=7), sendo o Mieloma Múltiplo (60%) prevalente entre os autólogos e a Leucemia Mielóide Aguda (43%) entre os alogênicos. O Índice de Massa Corporal (IMC) médio no Pré-TMO dos casos estudados foi de 27±5 Kg/m2. Nos momentos Pós-TMO, D+30, D+60 e D+100 (D+n = dias decorridos do TMO) foram monitorados indicadores antropométricos do estado nutricional, indicadores bioquímicos do metabolismo lipídico e da glicose e o consumo de alimentos a partir de um recordatório do consumo de 24 horas. A SM foi avaliada conforme os critérios diagnósticos da IV Diretriz Brasileira sobre Dislipidemias e Prevenção de Aterosclerose (2007). Os resultados apontaram na direção de confirmação da hipótese do trabalho, uma vez que após 100 dias do transplante foi constatado que os 27 indivíduos analisados mantiveram estáveis o consumo alimentar e o estado nutricional avaliado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The high prevalence of risk factors for metabolic syndrome (MS) among patients undergoing transplantation Hematopoietic Stem Cells (HSCT) has been proven, but very few is known about the changes in body composition and on the interference of consumption foods in the manifestation of these factors. Very few is known about how early is the emergence of such changes. Because of that, it was proposed in this study to assess food intake, nutritional status and incidence of early alteration of factors of metabolic syndrome in patients with HSCT. This was a longitudinal study with data obtained from the Department of Hematology and Bone Marrow Transplantation (BMT) of Barretos Cancer Hospital. The sample included 27 subjects who underwent HSCT between June 2009 and March 2010, mean age 44 ± 14, between 20 and 60 years, 13 women and 14 men, with large numbers of autologous HSCT (n = 20) on the allogeneic (n = 7) and the Multiple Myeloma (60%) prevalent among the autologous and acute myeloid leukemia (43%) among allogeneic. The average Body Mass Index (BMI) in the Pre-BMT cases studied was 27 ± 5 kg/m2. In times post- BMT, D +30, D +60 and D +100 (D + n = days after BMT) were monitored anthropometric indicators of nutritional status, biochemical indicators of lipid metabolism and glucose and food consumption from a recall of consumption of 24 hours. MS was evaluated according to the diagnostic criteria of the IV Brazilian Guidelines on Dyslipidemia and Atherosclerosis Prevention (2007). The results pointed toward confirming the hypothesis of the work, because after 100 days of transplantation was found that the 27 subjects studied were stable food consumption and nutritional status assessed from anthropometric indicators. There was no difference in the incidence of risk factors for the diagnosis of MS in all comparisons. There was no difference in blood glucose and fasting insulin. However, the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Coorientador: Marcos Jun Watanabe / Banca: Carlos Alberto Hussni / Banca: Carlos Eduardo Ambrósio / Banca: Elenice Deffune / Banca: Thais Sodré de Lima Machado / Resumo: As diferentes formas de terapia celular, como as células-tronco mesenquimais (CTM) associadas ao plasma rico em plaquetas (PRP), têm sido amplamente utilizadas no tratamento de lesões condrais e da osteoartrite, apresentando resultados interessantes. Atualmente, a literatura já traz uma série de competências positivas inerentes às CTM e ao PRP. O emprego da terapia celular em associações com outros tipos de tratamento, como as microfraturas, possibilitou que os pesquisadores aproximassem-se de resultados muito próximos ao ideal. Sendo assim, este estudo teve como objetivo comparar a resposta clínica e a inflamação articular, a morfologia e a composição do tecido de reparação de lesões condrais experimentalmente induzidas em equinos, tratadas com microfraturas e CTM em gel de PRP de forma isolada ou com a associação desses tratamentos. Para isso, 12 equinos foram submetidos a uma primeira cirurgia artroscópica, considerada tempo zero do experimento (T0), onde foi induzida uma lesão condral de 15 mm de diâmetro na tróclea medial femoral de ambos os membros pélvicos. As 24 articulações femoropatelares desses animais foram divididas em quatro grupos. O defeito condral foi submetido ao tratamento conforme o grupo: GA: recebeu o tratamento apenas com microfraturas. GB recebeu o tratamento com microfraturas associadas ao implante de CTMs em arcabouço de PRP em gel. GC recebeu o tratamento apenas com o implante de CTM em gel de PRP, e o GD foi o grupo controle do experimento, sem a aplicação de tratamentos. As CTMs foram extraídas do tecido adiposo e o PRP em gel foi obtido por protocolo de dupla centrifugação seguido da adição de trombina liofilizada bovina para a formação do gel. As articulações foram acompanhadas até os cinco meses (T150) através de exames clínicos e laboratoriais. Em T150 foi realizada nova artroscopia para avaliação macroscópica e coleta de amostras do tecido de reparação para... / Abstract: Several methods of cell therapy, such as mesenchymal stem cells (MSC) associated with platelet rich plasma (PRP), have been commonly used in the treatment of chondral articular defects and osteoarthritis, with satisfactory outcomes. Nowadays, the literature already shows an amount of positive features inherent to the MSC and the PRP. The use of cell therapy in association with other kinds of treatment, such as microfractures, allowed the researchers come closer to the ideal results. Thus, this study aimed to compare the clinical response and joint inflammation, the morphology and the structure of repair tissue from chondral defects experimentally induced in horses which were treated with microfractures, MSC, PRP alone or in combination of treatments. For this purpose, a first arthroscopic surgery was performed in 12 horses, which was considered time zero of the experiment (T0). A chondral defect of 15 mm diameter was created on medial femoral trochlea of both hindlimbs. The 24 patellofemoral joints of these animals were divided into four groups. The chondral defect was treated according to the group: GA: received treatment only with microfractures. GB received treatment with microfractures associated with MSC in PRP-gel scaffold. CG received treatment only with MSC in PRP-gel, and the GD was the control group, without treatments. MSCs were obtained from adipose tissue and PRP gel was obtained through double centrifugation method, followed by adding lyophilized bovine thrombin to achieve the gel consistency. The joints were followed during five months (T150) by clinical and laboratory assessment. At T150 there was performed a new arthroscopy aiming the macroscopic evaluation and repair tissue samples collection for histopathological, immunohistochemistry and qPCR analysis. We observed that the use of CTM in PRP-gel in the treatment of experimental chondral defects can modify the IL-1 and PGE2 concentrations in the synovial fluid. There ... / Doutor

Orientador: Jair Cortez Montovani / Banca: Mariza Akemi Matsumoto / Banca: José Vicente Tagliarini / Resumo: A cavidade oral é um local potencial de complicações em pacientes imunossuprimidos podendo ser um importante local de agentes causadores de infecções sistêmicas, o que pode contribuir para a perda do transplante de célulastronco hematopoéticas, ou mesmo para o óbito do paciente. OBJETIVOS: Apresentar um modelo de avaliação para identificação de potenciais riscos das doenças orais em pacientes imunossuprimidos antes e após transplante de célulastronco hematopoéticas. O presente estudo é clínico, prospectivo, com modelo de coorte temporal longitudinal, realizado no período de julho de 2007 a dezembro de 2008 no Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP. Foram incluídos 65 pacientes divididos em 2 grupos de acordo com o tipo de transplante (alogênico e autológo), maiores de 18 anos, de ambos os sexos, portadores de doenças hematológicas malignas ou não, e que se submeteram ao transplante de células-tronco hematopoéticas no período acima citado. Foram feitas 3 avaliações odontológicas: no período pré-transplante (momento 1), uma semana após a infusão das célulastronco (momento 2) e cem dias pós-transplante (momento 3). Os dados de cada momento foram correlacionados de acordo com a pontuação obtida e os indivíduos foram classificados como grau de risco leve, moderado, grave e gravíssimo no momento 1 e graus de toxicidade leve, moderado, grave e gravíssimo nos momentos 2 e 3 para as complicações clínicas da cavidade oral. As alterações patológicas da boca mais frequentes foram as gengivites, pericoronarite de 3º molar e próteses nos três momentos. Porém, nos momentos 2 e 3 a principal causa do aumento da toxicidade associada a imunossupressão foi a mucosite. Mesmo em indivíduos classificados com grau leve, quando tinham mucosite em graus variados o período de internação hospitalar era maior o mesmo ocorrendo para as recidivas e óbitos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Oral cavity is a potential site for complications in immunosuppressed patients and it can be an important center of causative agents of systemic infections, which can contribute to the loss of hematopoietic stem cell transplantation, or even to patient's death. To present an assessment model for identifying the potential risks of oral diseases in immunosuppressed patients, before and after the hematopoietic stem cell transplantation. This is a clinical, prospective study with model of longitudinal temporal cohort performed from July/2007 to December/2008, at the Amaral Carvalho Hospital, Jau, São Paulo. The sample comprised 65 patients who were divided into 2 groups according to transplant type (allogenous and autologous), older than 18 years old, both sexes, with or without malignant hematopoietic diseases, and who undergone hematopoietic stem cell transplantation during the aforementioned period. Three dental assessments were executed: at pretransplantation (Time 1), at one week after stem cell infusion (Time 2), and at 100-day post-transplantation (Time 3). Data of each time were correlated according to the score obtained, and the individuals were classified in: mild, moderate, severe, and very severe risk groups at Time 1; and, in mild, moderate, severe and very severe toxicity levels at Time 2 and 3, regarding to clinical complications of oral cavity. The most frequent pathological conditions were: gingivitis, pericoronaritis due to third molar, and presence of prosthesis, at three times. However, at Time 2 and 3, the main cause of the increase of toxicity associated to immunosuppression was mucositis. Even when mild-risk individuals exhibited mucositis at several levels, the hospital stay length was higher, as well as the relapses and deaths. In the identification of oral diseases in patients who will undergo hematopoietic stem cell transplantation, mucositis accounted... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:07:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423495-Texto+Completo-0.pdf: 730049 bytes, checksum: 4639035476798082e647607d7fc5174d (MD5) Previous issue date: 2010 / Neonatal asphyxia is the main cause of brain damage in the perinatal period. Studies suggest that the stem cell transplant would curb the expansion of damages and facilitate the repair of damaged tissues, and could thus become a therapeutic option in cases of asphyxia. Objective: In the present study we tested whether intra-arterialy infused human umbilical cord stem cells enter brain and survive in the brain microenvironment, and improve neurological functional recovery after hypoxic-ischemic insult using two two different arterial access. Materials and methods: Thirty-six healthy piglets not older than two days were divided into four groups: Group I (Sham), Group II, which was the control group, Group III, treated with stem cells infused through the umbilical artery, and Group IV, treated with stem cells injected via the common carotid artery. Stem cells were obtained from human umbilical cord blood. For induced asphyxia, a simultaneous association of procedures that caused hypoxia and ischemia was used. The brain tissue of treated animals that died before completing the twenty-one days was used for PCR research for human DNA. At two, seven, fourteen, and twenty-one days after the procedures, the animals a neurologic score was applied. After twenty-one days, the survivors were taken to the surgery room again, deeply anesthetized and a transcardiac perfusion was performed in order to be sacrificed. After this, the animal brains were slowly extracted and the Nissl histological staining technique was used to assess the degree of brain damage. Results : At 21 days there were differences among the average scores of group treated via carotid, when compared to those of control group and treated via umbilical artery. At other assessment moments no differences were found. In the PCR research of animals that received stem cells via the common carotid artery catheter it was possible to visualize the band corresponding to the human β-globin in several points of the researched brain tissue samples of two of the four animals. The samples with positive PCR were obtained fifteen and twenty-four hours after the asphyxia procedure. Likewise, no positive PCR was found in any of the samples of the animals in group III. The averages and SD of encephalic volume in four groups didn’t show differences and brain volume and final body weight of the animals had a moderate positive correlation Conclusion :The results of this study suggest that the administration of human umbilical cord stem cells via the carotid artery in a hypoxia-ischemia model in piglets is associated with the presence of positive PCR for the human β-globin gene, and led to a significant improvement in neurological function with 3 weeks, although there was no evidence of decreased lesion area. / A asfixia neonatal é a principal causa de lesão cerebral no período perinatal, tendo como conseqüências alta mortalidade e grande número de seqüelas neurológicas. Atualmente, várias estratégias neuroprotetoras estão sendo avaliadas em modelos animais na tentativa de reduzir a morte celular e melhorar os desfechos neurocomportamentais dos recém nascidos, mas os resultados são pouco expressivos. Estudos sugerem que o transplante de células-tronco limitaria a expansão de lesões e facilitaria o reparo de tecidos lesados, podendo se constituir numa opção terapêutica em casos de asfixia. Os pesquisadores optaram pelo uso de um modelo em suínos recém-nascidos devido ao fácil manejo, baixo custo e similaridade de peso e tamanho em relação aos bebês. Objetivo: O objetivo deste estudo é analisar de que forma células-tronco de cordão umbilical humano, infundidas via intra-arterial entram no cérebro, sobrevivem neste micro ambiente, e promovem a recuperação da função neurológica após insulto hipóxico-isquêmico, usando dois tipos diferentes de acessos arteriais. Materiais e métodos: Foram utilizados 36 suínos com até dois dias de vida divididos em 4 grupos: Grupo I (Sham), Grupo II de controle, Grupo III tratado com células-tronco via artéria umbilical, e Grupo IV com células-tronco injetadas pela artéria carótida comum. Para a indução da asfixia utilizou-se a associação simultânea de procedimentos que causavam hipóxia e isquemia. As células-tronco foram obtidas a partir de sangue umbilical humano .Com 2, 7, 14 e 21 dias de vida os animais eram examinados e era aplicado um escore neurológico. O tecido cerebral de animais tratados com células tronco que morreram antes de completar 21 dias foi utilizado para pesquisa de PCR para DNA humano. Aos 21 dias os animais sobreviventes eram novamente levados a sala cirúrgica, anestesiados profundamente a fim de serem sacrificados e realizar-se uma perfusão trans-cardíaca com paraformaldeído para a extração dos encéfalos. Logo após, era aplicada a técnica histológica de Nissl e realizada a estimativa de volume encefálico para avaliação do grau de lesão cerebral. Resultados:. Aos 21 dias houve diferença entre a média dos escores do grupo que recebeu células pela carótida quando comparada as dos grupos controle e o que recebeu células pela artéria umbilical. Na pesquisa através de PCR em animais do grupo das células-tronco pela artéria carótida comum foi possível a visualização da banda correspondente ao gene β-globina humano em dois dos quatro animais em diversos pontos de tecido cerebral em amostras obtidas 15 e 24 horas após o procedimento de asfixia. Não se identificou PCR positivo nas coletas realizadas 7 dias e 15 dias deste mesmo grupo bem como em nenhuma das amostras dos animais do outro grupo pesquisado. Não houve diferença entre as médias dos volumes encefálicos nos quatro grupos. O volume cerebral e o peso final dos animais apresentaram uma correlação positiva moderada. Conclusão: Os resultados deste estudo sugerem que a administração de células-tronco de cordão umbilical humano via artéria carótida comum em modelo de hipóxia-isquemia em suínos está associada a presença de PCR positivo para o gene da β-grobina humana e a uma melhora na função neurológica com 3 semanas embora sem evidência de diminuição da área de lesão.

Made available in DSpace on 2015-01-20T01:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000464699-Texto+Completo-0.pdf: 3304843 bytes, checksum: 1c2d736171549331a5af746072affda0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Mesenchymal stem cells hold great promise for tissues repair and regeneration, including bone defects. The association of these cells to a scaffold which resembles bone tissue structure and physiology is a major challenge in bone tissue engineering. The lyophilized bovine bone has a structure, chemical composition and mechanical properties similar to human bone marrow and acts as an excellent osteoconductive material. This in vitro study aimed to evaluate the growth of bone marrow mononuclear cells (BMMC) on a lyophilized bovine bone scaffold (Orthogen® - Baumer S. A., BR) covered with fibronectin; to verify if different cell densities interfere with the adhesion and proliferation of these cells and to evaluate whether the combination of platelet-rich plasma (PRP) interferes with adhesion and proliferation of BMMC grown on the lyophilized bovine bone scaffold. For this purpose, bone marrow cells obtained from a Kyoto rat were grown on blocks of lyophilized bovine bone coated with fibronectin in DMEM culture medium supplemented with 10% inactivated fetal bovine serum. The Orthogen® samples were distributed into four experimental groups, in triplicate, in three 24 wells culture plates and evaluated in three periods: 72 h, 96 h and 192 h. Group 1: lyophilized bovine bone + BMMC (5 x 104 cells / well); Group 2: lyophilized bovine bone + BMMC + PRP; Group 3: lyophilized bovine bone + fibroblasts (3T3); Group 4: lyophilized bovine bone + BMMC (15 x 104 cells / well). Cultures were incubated with the intercalating agent 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) for nuclear staining in order to evaluate the cell population density, by detection with confocal microscopy, of the number of cells adhered to the lyophilized bovine bone scaffolds, after 72 h, 96 h and 192 h. The analysis of the lyophilized bovine bone surface and the morphological aspects of the cells adhered to it was performed on one sample from each group, by scanning electron microscopy (SEM). Analysis of variance (ANOVA) with two factors showed a significant interaction between the main effects evaluated: group and time, with p < 0. 001.Through the results of Bonferroni statistical test, significant difference was found in the average number of nuclei in the period of culture of 96 h in group 3, and the period of culture of 192 h in group 4, which was higher than the other groups. Through SEM analysis, mononuclear cells adhered to the lyophilized bovine bone scaffold were observed only in the groups 3 and 4, in the last, progressively, being already possible to observe cell morphology differentiation and to identify spherical and fusiform cells with cytoplasmic extensions. We concluded that BMMC cultured on a lyophilized bovine bone scaffold coated with fibronectin adhered and proliferated on the bone surface. BMMC cultured at a density of 15 x 104 cells / well, adhered and proliferated on the bone surface more evidently, when compared to the BMMC cultured at a density 5 x 104 cells / well, in the three culture periods evaluated. The association of PRP to BMMC culture on a lyophilized bovine bone scaffold increased, but not with statistical significance, the adhesion and proliferation on the bone surface. / As células-tronco mesenquimais detêm grande promessa para a reparação e regeneração de tecidos, inclusive de defeitos ósseos. A associação destas células a um arcabouço que se assemelhe à estrutura e à fisiologia do tecido ósseo é um dos grandes desafios da engenharia tecidual óssea. O osso bovino liofilizado, com estrutura e composição química similares ao osso humano medular, além de possuir propriedades mecânicas comparáveis às do osso humano, atua como excelente material osteocondutor. O presente estudo in vitro teve como objetivos avaliar o cultivo de células mononucleares de medula óssea (CMMO) sobre um arcabouço de osso bovino liofilizado (OrthoGen® - Baumer S. A., BR) recoberto com fibronectina; verificar se diferentes densidades celulares interferem na proliferação e na adesão destas células e avaliar se a associação de plasma rico em plaquetas (PRP) interfere na adesão e na proliferação das CMMO cultivadas sobre o arcabouço de osso bovino liofilizado. Para isso, células da medula óssea obtidas de um rato Kyoto foram cultivadas sobre blocos de osso bovino liofilizado, recobertos com fibronectina, em meio de cultura DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino inativado. As amostras do OrthoGen® foram distribuídas em quatro grupos experimentais, em triplicata, em três placas de cultura com 24 poços e avaliadas em três períodos: 72 h, 96 h e 192 h. Grupo 1: osso bovino liofilizado + CMMO (5 x 104 células/poço); Grupo 2: osso bovino liofilizado + CMMO + PRP; Grupo 3: osso bovino liofilizado + fibroblastos (3T3); Grupo 4: osso bovino liofilizado + CMMO (15 x 104 células/poço). As culturas foram incubadas com o agente intercalante 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) para coloração nuclear visando à avaliação de densidade populacional, por meio da detecção por microscopia confocal, do número de células aderidas aos arcabouços de osso bovino liofilizado, após 72 h, 96 h e 192 h. A análise da superfície do osso bovino liofilizado e das características morfológicas das células aderidas sobre ele o foram realizadas em uma amostra de cada grupo, com o auxílio do microscópio eletrônico de varredura. A análise de variância (ANOVA) com dois fatores mostrou interação significativa entre os efeitos principais avaliados: grupo e tempo, com valor de p < 0,001.Através dos resultados do teste estatístico de Bonferroni, verificou-se diferença significativa da média de núcleos no período de cultura de 96 h no grupo 3, e no período de cultura de 192 h no grupo 4, a qual foi maior do que as dos demais grupos. Através da análise por microscopia eletrônica de varredura foram observadas CMMO aderidas ao arcabouço de osso bovino liofilizado somente no grupo 3 e no grupo 4, neste aumentando de forma progressiva, já sendo possível evidenciar diferenciação na morfologia celular e identificar células esféricas e fusiformes com prolongamentos citoplasmáticos. Conclui-se que as CMMO cultivadas sobre um arcabouço de osso bovino liofilizado recoberto com fibronectina aderiram e proliferaram sobre a superfície óssea. As CMMO cultivadas numa densidade de 15 x 104 células / poço, aderiram e proliferaram sobre a superfície óssea de forma mais evidente, quando comparadas às CMMO cultivadas numa densidade 5 x 104 células / poço, nos três períodos de cultura avaliados. A associação de PRP à cultura de CMMO sobre um arcabouço de osso bovino liofilizado aumentou, mas não de forma estatisticamente significativa, a adesão e a proliferação celular sobre a superfície óssea.

Orientador: Clarisse Martins Machado / Resumo: A revaccination program is recommended for all HSCT recipients. Despite the excellence of the Brazilian revaccination program, several pitfalls have been observed over the years. We evaluated such pitfalls and how a prospective and tailored follow-up may help to overcome these obstacles. HSCT recipients (n=122) were followed prospectively and categorized into Group 1 (n=72), recipients who had already started the revaccination program and Group 2 (n=50), recipients who were up to start the vaccines. Whenever a gap on the program was encountered or a difficulty was reported, interventions and subsequent evaluations were performed. Problems related to patient compliance were less frequent than those related to HSCT center modifications of previous recommendations, or to errors made by the vaccination center. Advisory intervention was needed in 64% and 46% of Group 1 and Group 2, respectively (p=0.05), and were partially successful in around 70% of the cases. Total resolution was achieved in more than 35% in both groups. Although the Brazilian revaccination program is excellent, it needs to be improved and all efforts should be made to guarantee a safe and complete revaccination schedule. HSCT centers should appoint nurses and transplant infectious disease physicians to organize and to monitor the progress of the program. / Abstract: Um programa de revacinação é recomendado para todos os receptores de TCTH. Apesar da excelência do programa de revacinação brasileiro, várias dificuldades têm sido observadas ao longo dos anos. Avaliamos essas dificuldades, e como um follow-up prospectivo e adaptado poderia ajudar a superar esses obstáculos. Receptores de TCTH (n=122) foram acompanhados prospectivamente e categorizados em Grupo 1 (n=72), receptores que já haviam iniciado o programa de revacinação e Grupo 2 (n=50), receptores que iniciaram a vacinação após inclusão no estudo. Sempre que uma falha no programa foi encontrada ou uma dificuldade informada, intervenções e subsequentes avaliações foram realizadas. Problemas relacionados à adesão dos pacientes foram menos frequentes do que as relacionadas às modificações das recomendações anteriores do centro de TCTH, ou a erros cometidos pelo centro de vacinação. Intervenções foram necessárias em 64% e 46% nos Grupos 1 e 2, respectivamente (p=0,05), e foram parcialmente bem sucedidas em aproximadamente 70% dos casos. A total resolução foi alcançada em mais de 35% em ambos os grupos. Embora o programa de revacinação brasileiro seja excelente existe a necessidade de aperfeiçoa-lo, e todos os esforços deveriam ser feitos para garantir um programa de revacinação seguro e completo. Os Centros de TCTH deveriam indicar enfermeiros e infectologistas de transplante para organizar e monitorar o progresso do programa de revacinação. / Mestre