O leite é essencial para o desenvolvimento pós-natal da mucosa gástrica e durante o período de aleitamento, o jejum estimula a proliferação celular. Mostramos que o TGF<font face=\"Symbol\">b, reverte este efeito e p27 está envolvida neste mecanismo. Os níveis de p27 oscilam durante o ciclo celular, devido à sua fosforilação na Thr187, que leva à degradação pelo sistema UPS. Diferentes estudos relatam que TGF<font face=\"Symbol\">b pode aumentar p27, através do controle de sua degradação. Este estudo visa analisar o efeito do jejum e TGF<font face=\"Symbol\">b1, na regulação de p27 no epitélio gástrico de ratos lactentes. Para tanto, filhotes de 14 dias foram submetidos a jejum durante 90 min e receberam uma dose única de TGF<font face=\"Symbol\">b ou PBS, por gavagem. As amostras foram coletadas após 2 e 14 horas de tratamento. Analisamos a concentração proteica de p27, fosfo-p27, Skp2 e Cdh1. Observamos que durante o jejum houve a diminuição de p27 e Cdh1, paralelamente ao aumento de fosfo-p27 e Skp2. Enquanto que o tratamento com TGF<font face=\"Symbol\">b1, reverteu os efeitos do jejum em 2h e 14h em todas as proteínas analisadas. Além disso, o jejum aumentou a ubiquitinação e degradação de p27 e o tratamento com TGF<font face=\"Symbol\">b1 reverte esses efeitos. Desta forma, o TGF<font face=\"Symbol\">b1 do leite materno estabiliza os níveis de p27 e assim, influenciar a progressão do ciclo celular no epitélio gástrico. / Milk is essential for postnatal development of the gastric mucosa and during the suckling period fasting stimulates cell proliferation. We have shown that TGF<font face=\"Symbol\">b reverses this effect and p27 is involved in this mechanism. The levels of p27 oscillate during the cell cycle due to its phosphorylation at Thr187, which leads to its degradation by the UPS. Different studies reported that TGF<font face=\"Symbol\">b can increase p27, by controlling its degradation. This study aims to analyze the effect of fasting and TGF<font face=\"Symbol\">b1 in regulating p27 in lactating rats gastric epithelium. For such, the 14 days rats were fasted for 90 min and received a single dose of TGF<font face=\"Symbol\">b or PBS by gavage. Samples were collected after 2 and 14 hours of treatment. We analyzed the p27 protein concentration, phospho-p27, Skp2 and Cdh1. We found that during fasting, p27 and Cdh1 a decreased, at the same time to the increment of phospho-p27 and Skp2. The treatment with TGF<font face=\"Symbol\">b1, reversed the effects of fasting on 2h and 14h in all proteins analyzed. Moreover, the fasting increased the ubiquitination and the degradation of p27, while TGF<font face=\"Symbol\">b1 treatment reversed these effects. Thus the milk born TGF<font face=\"Symbol\">b1 can stabilize p27 levels and thus influences cell cycle progression in lactent rat gastric epithelium.

Caulobacter crescentus pertence ao grupo das proteobactérias e apresenta a característica distinta de diferenciação celular a cada divisão. Este trabalho visou desvendar os mecanismos de reparo de DNA em C. crescentus. Identificamos 44 genes pertecentes ao regulon SOS através da construção de um mutante para o repressor deste, LexA. Caracterizamos funcionalmente alguns dos genes do regulon, como CC_2272 (que codifica uma proteína da família das endonucleases III) e CC_2433. A cepa deficiente em LexA apresentou morfologia filamentosa, e por esse motivo, buscamos também desvendar quais seriam os fatores genéticos responsáveis por esta morfologia. Investigamos também os processos de controle do ciclo celular após a introdução de danos na molécula de DNA pela luz UVC, em mutantes deficientes para diferentes vias de reparo. Estes experimentos nos mostraram que as células procariontes possuem mecanismos para acoplar a progressão do ciclo celular a integridade do material genético. Este trabalho abre novas e excitantes possibilidades no campo da biologia bacteriana. / Caulobacter crescentus belongs to the proteobacteria group and exhibts the distinctive feature of cellular differentiation after each division. This work aimed to reveal the DNA repair mechanisms in C. crescentus. We have identified 44 genes belonging to the SOS regulon through the construction of a mutant strain to its repressor. We have functionally characterized some of its genes, like CC_2272 (that encodes an endonuclease III family protein) and CC_2433. The lexA strain showed filamentous morphology, e because of that, we have tried to discover which the genetic factors responsible for this morphology were. We have also investigated the cell cycle control processes after the introduction of damages in the DNA by the UVC light, in mutant strains deficient in different repair pathways. These experiments showed us that prokaryotic cells possess mechanisms to couple the cell cycle progression to the integrity of the genetic material. This work opens new and exciting possibilities in the field of bacterial biology.

Rhynchosciara americana é estudada desde a década de 50 quando foi evidenciada a amplificação gênica em regiões de seus cromossomos politênicos. Os fenômenos de amplificação e a formação destes cromossomos gigantes se dão por meio da ocorrência de endociclos, regulados pela oscilação na atividade do complexo ciclinaE/CDK2. Nas glândulas salivares de nosso modelo, durante o desenvolvimento, há ocorrência de cromossomos politênicos. Foi seqüenciada uma mensagem de uma quinase dependente de ciclina (CDK10) que não apresenta qualquer ligação com os endociclos, descrita na literatura. Este transcrito teve sua sequencia revelada por experimentos de 5\'RACE. A sequência genômica foi parcialmente determinada. O perfil de expressão deste gene foi determinado nos ovários, glândulas salivares e corpo gorduroso. A presença da proteína CDK10 foi determinada por experimentos de western blot em glândulas salivares. A localização celular foi determinada nos ovários. Resultados sugerem a existência de duas isoformas deste gene nos tecidos analisados. / Rhynchosciara americana is studied since the 50s decade when gene amplifications was discovered in some regions of its polytene chromosomes. The phenomena of amplification and the formation of these giant chromosomes happens through the endocycles, regulated by an activity oscillation of the complex CyclinE/CDK2. It is known that, in the salivary glands of our model, during it is development, there is the occurrence of these polytene chromosomes, formed since the beginning of the larval life. It was sequenced a message of CDK10, a cyclin depended kinase that shows no participation with the endocycles, as described at the literature. This transcript was fully sequenced by 5\'RACE experiments. Its genomic sequence was partially determined. The relative expression pattern was determined for ovaries, salivary glands and fat body. The CDK10 protein was observed by western blot experiments in the salivary glands. Its cellular location was determined at the ovaries. Results suggest the existence of two isoforms of the RaCDK10 gene at the tissues analyzed.

Em mulheres, o câncer de mama é o tipo mais incidente depois do tumor de pele não melanoma e é a principal causa de morte por câncer. Apesar dos avanços já alcançados na caracterização da doença, a busca por novos marcadores moleculares para diagnóstico, tratamento e entendimento molecular da doença é de extrema importância. Estudos em nosso laboratório apontaram a proteína EMC1 (do inglês, Endoplasmic Reticulum Complex 1) como relacionada a propriedades malignas em linhagens celulares de câncer de mama e melanoma, assim como aumento no crescimento tumoral em ensaios in vivo. Despertou-se, então, o interesse em nosso laboratório, no estudo das outras proteínas do complexo EMC. Este estudo atual, busca analisar dados em larga escala do banco TCGA em um painel de 32 tipos tumorais, e aponta associação da expressão de diversas proteínas EMCs a pior sobrevida dos pacientes. O gene EMC2, que se localiza na região cromossômica altamente amplificada em diversos tumores (8q23.1), se destaca pela intensidade de pacientes com superexpressão em câncer de mama (40%). Em linhagens desse tipo tumoral, o knockdown de EMC2 aponta redução na taxa proliferativa, assim como associação à progressão do ciclo celular na fase M, quando feito o protocolo de sincronização utilizando a droga nocodazol. Em conjunto, nossos dados sugerem que o complexo EMC pode favorecer o desenvolvimento de tumores e influenciar em sua malignidade. Além disso, a proteína EMC2 parece apresentar funções relacionadas a proliferação e possivelmente, ciclo celular. / In woman, the breast cancer is the most incidence type after skin tumor non melanoma and it is a main cause of cancer death. Despite the advances already achieved in the disease caracterization, the search for novel molecular biomarkers to diagnostic, treatment and disease knowledge is extremely importante. In vitro approaches pointed Endoplasmic Reticulum Complex 1 (EMC1) involvement in malignant properties in breast cancer and melanoma cell lines, and increase in tumor growth in a in vivo assay. It highlighted the study of the other members of EMC complex. In this study, we used a large-scale database from TCGA in a range of 32 tumoral types, and showed association in EMC expression and poor surviving curve. The EMC2 gene, localized in a high amplified chromosome region in cancer (8q23.1), have a interesting upregulation level in breast cancer (40%). In knockdown EMC2 cell lines, the proliferation is less intense and progression in M phase, in a nocodazole sincronization assay, is impaired. Together, the data suggest that the EMC complex favors the tumour development and the EMC2 protein seens to play a role in proliferation and maybe in cell cycle.

ACTH é o hormônio trófico que estimula a esteroidogênese, promove o crescimento e a manutenção do córtex adrenal. Porém, em linhagens adrenocorticais, assim como em culturas primárias, ACTH inibe a proliferação celular. A linhagem Y-1 de células adrenocorticais de camundongo tem as seguintes respostas a ACTH: aumento da esteroidogênese, arredondamento celular, bloqueio do ciclo celular em G1 e indução dos proto-oncogenes fos e jun. Esta linhagem também responde muito Sem a FGF2, um protótipo da família dos FGFs (Fibroblast Growth Factors) que regula diferenciação e proliferação de diversos tipos celulares, sendo estimulada a transitar pelas fases G0&#8594;G1&#8594;S do ciclo celular. ACTH antagoniza este efeito de FGF2, inibindo parcialmente a entrada em S induzida por FGF2. Este projeto buscou compreender o papel de c-Myc no controle do ciclo celular de Y-1, com ênfase nos efeitos de ACTH e FGF2 na expressão e atividade de c-Myc. Mostramos que os dois principais controles da expressão de c-Myc em Y-1 são transcrição e degradação da proteína, sendo a concentração de c-Myc o único controle sobre o sistema Myc/Max/Mad, uma vez que a expressão de Max e de Mad-1 , Mad-4 e Mxi é constitutiva em células Y-1. FGF2 induz a expressão de c-Myc através da indução da transcrição e aumento da estabilidade da proteína de forma totalmente dependente da via de Erk-MAPK. ACTH, por outro lado, não interfere com a transcrição de c-myc, mas promove fortemente a degradação da proteína, dependentemente da via de PKA. Utilizando um sistema de transfecção transiente, transfectamos uma quimera da proteína c-Myc com o receptor de estrógeno, MycER. Quando ativada por tamoxifen, a quimera migra para o núcleo e reverte a ação anti-mitogênica de ACTH sobre FGF2, porém, não tem efeito sobre células carenciadas tratadas ou não com ACTH apenas. Em conclusão, o antagonismo entre ACTH e FGF2 no controle da transição G0&#8594;G1&#8594;S do ciclo celular de Y-1 pode ser explicado pelas suas ações antagônicas sobre a estabilidade da proteína c-Myc. / ACTH is the trophic hormone that stimulates steroidogenesis, promotes growth and maintenance of the adrenal cortex. However, in adrenal cell lines, as well as in primary cultures, ACTH inhibits cell proliferation. ACTH effects on Y-1 cells are: increasing in steroidogenesis, cell rounding, cell cycle blocking in G1 phase and induction of fos and jun proto-oncogenes expression. Y-1 cell line displays a robust response to FGF2, a member from the FGFs family (Fibroblast Growth Factors), which regulates differentiation and proliferation in many cell types, being induced to enter G0&#8594;G1&#8594;S phases of fhe cell cycle upon FGF2 stimulation. ACTH antagonizes FGF2 effect, partially inhibiting cell cycle progression stimulated by FGF2. This project aimed to investigate c-Myc role in Y-1 cell cycle control, with emphasis on ACTH and FGF2 effects on its expression and activity control. We have shown that there are two main controls of c-Myc expression in Y-1 cells, transcription and protein stability. c-Myc concentration regulates the system Myc/Max/Mad, once Max and also Mad-1, Mad-4 and Mxi expression is constitutive in Y-1 cells. FGF2 induces c-Myc expression by increasing its transcription rate and stabilizing the protein in an Erk-MAPK pathway dependent manner. ACTH, on the other hand, does not control c-myc transcription but promotes a strong degradation of the protein through the PKA pathway. Using a transient transfection system, we were able to express MycER, a chimera of c-Myc and estrogen receptor in Y-1 cells. When activated by tamoxlfen, MycER is translocated to cell nucleus, where it abolishes the anti-mitogenic effect of ACTH over FGF2. However, it has no effect on cell cycle progression of serum starved cells treated or not with ACTH only. In conclusion, their antagonist effects on c-Myc protein stability can explain the antagonist effects of ACTH and FGF2 on the control of G0&#8594;G1&#8594;S transition of Y-1 cell cycle.

A maioria dos tumores sólidos apresentam características aneuplóides. Porém a relação entre aneuploidia e transformação maligna, ainda não está definida. Nos últimos anos diversas proteínas têm sido descritas como reguladoras de eventos durante a divisão celular, principalmente as relacionadas com a formação do fuso bipolar e segregação equacional dos cromossomos. Neste estudo propomo-nos a analisar os efeitos da interferência em dois pontos críticos da mitose, a segregação cromossômica e a citocinese, em relação à aneuploidia e à instabilidade genética tumoral. Nossos dados mostraram que o tratamento sequencial de Monastrol e Blebistatina determinou o surgimento de fusos mitóticos anormais, amplificação centrossômica, localização ectópica de Aurora A e aumento de micronúcleos. Esta interferência pode levar a um quadro de instabilidade genética e, consequentemente a progressão tumoral, abrindo novas possibilidades para o estudo dos mecanismos moleculares envolvidos na regulação do ponto de checagem mitótico e resistência a quimioterápicos. / Most solid tumors have aneuploid feature. Therefore the relationship between aneuploidy and malignant transformation is not yet understood. In the last years it has been described many proteins involved in regulation of mitosis, mainly those related to bipolar spindle and chromosome segregation. In this work we propose to study the effects of the interference on two mitotic critical points, the chromosome segregation and cytokinesis, in relation to aneuploidy and genetic tumor instability. Our data showed that sequential treatment with Monastrol and Blebbistatin led to abnormal mitotic spindle, centrosome amplification, Aurora A ectopic and micronucleus increased. This interference can lead to genetic instability and may be involved in a tumor progression, opening news possibilities to study the molecular mechanisms involved in regulation the checkpoint mitotic and resistance to chemotherapy found in genetically unstable cells.

A Doença de Alzheimer (DA) é uma patologia senil neurodegenerativa, cujo desenvolvimento está relacionado a vários fatores, tais como deposição de proteínas, alterações no ciclo celular, disfunção mitocondrial, acúmulo de danos e deficiência dos mecanismos de reparo do DNA, entre outros. Os mecanismos moleculares associados a essas alterações ainda não foram esclarecidos. Assim, considerando a hipótese de que algumas características da DA podem ser observadas em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs, peripheral blood mononuclear cells), o presente trabalho teve como objetivo avaliar se PBMCs de indivíduos com a DA apresentam alterações nos perfis de expressão gênica, com enfoque nos processos relacionados ao ciclo celular e reparo do DNA. Além disso, o trabalho buscou verificar as consequências do nocaute da polimerase ? (Pol?), principal polimerase envolvida no reparo por excisão de bases (BER), em fibroblastos embrionários de camundongos (MEFs, mouse embryonic fibroblastos). Foram coletadas amostras de sangue de 25 pacientes com DA e 15 controles para a realização do ensaio de microarranjos de mRNAs e microRNAs. As análises de bioinformática indicaram 593 mRNAs e 12 microRNAs diferencialmente expressos nos indivíduos com DA comparados aos controles. A partir desses dados foram realizadas análises de enriquecimento de vias, as quais mostraram que processos relacionados à regulação do ciclo celular, resposta a danos no DNA, inflamação, entre outros, estavam alterados em PBMCs de DA. No entanto, a expressão proteica de PCNA avaliada por Western blot não identificou alterações na proliferação das células de pacientes DA, mas foi observada a diminuição da expressão da proteína Pol?, principalmente nos pacientes em estágio mais severo da doença. Assim, as consequências da diminuição da expressão de Pol? foram avaliadas em MEFs nocauteados ii para essa enzima, o que resultou em alterações no ciclo celular e disfunção mitocondrial. Dessa maneira, esses resultados suportam as hipóteses de que falhas nos mecanismos de reparo do DNA estão relacionadas à DA e que as PBMCs podem manifestar algumas das condições patológicas que ocorrem nos neurônios. Foram ainda destacados no presente trabalho alguns genes como potenciais alvos de estudo na busca por biomarcadores da DA. Além disso, foi também demonstrado que a deficiência de Pol? pode acarretar disfunção mitocondrial, uma característica inerente às células de pacientes com DA. / Alzheimer\'s disease (AD) is an age-related neurodegenerative pathology associated with a range of features such as deposition of proteins in the brain, alterations in cell cycle, accumulation of DNA damage, DNA repair deficiency and mitochondrial dysfunction. However, the molecular mechanisms implicated in the pathogenesis of AD are still uncertain. Thereby, the present study aimed to evaluate whether peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of AD patients display alterations in gene expression profiles, mainly focusing on processes related to cell cycle and DNA repair. Furthermore, we evaluated the implications of deficiency in polymerase ? (Pol?), which is a major polymerase involved in base excision repair (BER), in mouse embryonic fibroblasts (MEFs). Blood samples were collected from 25 AD patients and 15 age-matched controls in order to perform genome-wide mRNA and microRNA expression (microarrays). Moreover, mouse embryonic fibroblasts that are knockout for Pol? were evaluated in order to determine the effects of Pol? deficiency. In PBMCs cells, bioinformatics analysis indicated 593 mRNAs and 12 microRNAs differentially expressed in AD compared to controls. Analysis of pathway enrichment indicated that processes related to cell proliferation, DNA repair, and inflammation, among others, were altered in AD blood cells. Despite the enrichment of pathways associated with cell cycle regulation, PCNA protein expression (related to cell proliferation) analyzed by Western blot did not show difference in AD. However, Pol? expression was decreased in AD blood cells, especially in patients stricken with severe AD, in spite of the lack of alterations in terms of transcript expression. Based on the results regarding decreased Pol? expression in AD cells, we studied the consequences of Pol? knockout in MEFs, and the results clearly showed mitochondrial dysfunction along time. Thus, our study demonstrated that iv PBMCs of AD patients present alterations in cell cycle and DNA repair processes, as proposed for AD neurons, reinforcing the hypothesis that failures of DNA repair mechanisms are related to AD, and PBMCs can somehow express some of pathological conditions that may occur in neurons. We also found some genes that represent potential targets to be studied as biomarkers of the disease. Furthermore, this study demonstrated that Pol? deficiency can lead to mitochondrial dysfunction, which is an inherent characteristic of AD.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2017-08-15T12:27:16Z No. of bitstreams: 1 BRUNO_DE_SOUZA_BASSO_DIS.pdf: 1709254 bytes, checksum: 167b84b794ff4ea4955b2ef79229ab4e (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-08-16T13:04:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 BRUNO_DE_SOUZA_BASSO_DIS.pdf: 1709254 bytes, checksum: 167b84b794ff4ea4955b2ef79229ab4e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-16T13:39:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BRUNO_DE_SOUZA_BASSO_DIS.pdf: 1709254 bytes, checksum: 167b84b794ff4ea4955b2ef79229ab4e (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The genus Baccharis belongs to the family Asteraceae and has several species widely used in folk medicine and own many compounds of pharmaceutical interest. The aim of this work was to evaluate the cytotoxic, antiproliferative effect and phenotypic reversion of Baccharis anomala extract on activated hepatic stellate cells (HSCs) and identify the compounds present in the extract. In order to evaluate the cytotoxic and antiproliferative effect of the fractionated extract, lactate dehydrogenase (LDH) release and the trypan blue exclusion method were used. The phenotype reversion was evaluated by staining with Oil Red and PPAR-? expression by RT-PCR. The fractions obtained from the methanolic extract were characterized for their phenolic composition by HPLC. The results showed that two fractions of methanolic extract decreased cell proliferation without increasing LDH release levels. Cell cycle arrest was evaluated using 7-AAD and DAPI staining was used to evaluate indications of apoptosis. Fractions of B.anomala induced cell cycle arrest in G1 phase, while DAPI staining did not reveal cell death by apoptosis. Oil-Red (ORO) staining showed the ability of fractions to induce phenotypic reversion and the evaluation of PPAR-? mRNA expression was not altered, suggesting that there is an independent PPAR-? pathway involved. The main components identified in the fractions that presented biological activity were hydroxybenzoic, chlorogenic and coumaric acid. Our study was able to show the antiproliferative effect of methanolic extract fractions of B.anomala, its potential to reverse the activated phenotype of hepatic stellate cells and showed its potential for the treatment of liver fibrosis. / O g?nero Baccharis pertence ? fam?lia Asteraceae e tem v?rias esp?cies amplamente utilizadas na medicina popular, possuindo muitos compostos de interesse farmac?utico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito citot?xico, antiproliferativo e a revers?o fenot?pica do extrato de Baccharis anomala em c?lulas estreladas hep?ticas ativadas (HSCs) e identificar os compostos presentes no extrato. Para avaliar o efeito citot?xico e antiproliferativo do extrato fracionado, foram utilizadas a libera??o de lactato desidrogenase (LDH) e o m?todo de exclus?o de azul de Tripan. A revers?o do fen?tipo foi avaliada por colora??o com Oil Red e pela express?o de PPAR-? por RT-PCR. As fra??es obtidas a partir do extrato metan?lico foram caracterizadas pela sua composi??o fen?lica por HPLC. Os resultados mostraram que duas fra??es do extrato metan?lico diminu?ram a prolifera??o celular sem aumentar os n?veis de libera??o de LDH. A parada do ciclo celular foi avaliada usando 7-AAD e colora??o por DAPI foi utilizada para avaliar a apoptose celular. As fra??es de B.anomala induziram a parada do ciclo celular em fase G1, a colora??o por DAPI n?o revelou morte celular por apoptose. Colora??o por Oil-RedO (ORO) mostrou a capacidade de indu??o da revers?o fenot?pica, a avalia??o da express?o mRNA de PPAR-y por RT-PCR n?o foi alterada, sugerindo que exista uma via independente de PPAR-y envolvida. Os principais componentes identificados nas fra??es que apresentaram atividade biol?gica foram os ?cidos hidroxibenz?ico, clorog?nico e cum?rico. Nosso estudo foi capaz de mostrar o efeito antiproliferativo das fra??es de extrato metan?lico de B.anomala, seu potencial para reverter o fen?tipo ativado das c?lulas estreladas hep?ticas e mostrou seu potencial para o tratamento da fibrose hep?tica.

Estudamos o papel de quinases de Plasmodium na modulação, via derivados de triptofano, no ciclo celular do parasita. Foram realizadas análises com melatonina, N-acetilserotonina, triptamina e serotonina, avaliadas através de microscopia e citometria de fluxo. Parasitas deficientes para as proteínas PfNEK2, PfNEK3 e PfMAP1 apresentaram respostas similares ao parasita selvagem enquanto pfpk7- e pfeik1- não apresentaram resposta aos compostos indólicos. Estes dados sugerem envolvimento das quinases PfPK7 e PfeIK1 na transdução de sinal via compostos derivados de triptofano na modulação do ciclo intraeritrocítico em P. falciparum. Ensaios de medidas de cálcio intracelular mostraram que a ausência de pfpk7- leva a uma atenuação na liberação de cálcio promovida por melatonina, sugerindo que a ativação desta quinase é importante no aumento de cálcio citosólico. Estes resultados ampliaram a compreensão dos mecanismos moleculares que regulam resposta a melatonina. / We evaluated the role of Plasmodium kinases in the modulation, via tryptophan derivatives, of the parasite cell cycle. We performed analysis with melatonin, N-acetylserotonin, tryptamine and serotonin through blood smears and flow cytometry analyzes. Parasites deficient in the proteins PfNEK2, PfNEK3 and PfMAP1 showed similar responses to the wild type while pfpk7- e pfeik1- did not respond to the indolic compounds. This data suggest the involvement of the kinases PfPK7 and PfeIK1 in melatonin signal transduction for cell cycle modulation in P.falciparum. Intracellular calcium measurement assays showed that pfpk7- diminished the ability of melatonin to rise cytosolic calcium concentration, suggesting that this kinase is involved with cytosolic calcium increase. These results expand the understanding of the molecular mechanisms that regulate melatonin-dependent cell cycle modulation.

As Neoplasias Mieloproliferativas (NMPs) se caracterizam por apresentarem acúmulo de eritrócitos, leucócitos e plaquetas morfologicamente normais e seus precursores. Nos últimos anos vários estudos buscaram conhecer os mecanismos celulares e moleculares envolvidos na fisiopatologia e evolução dessas desordens, com o intuito de encontrar marcadores de diagnóstico, prognóstico e terapias eficazes. A mutação pontual no gene que codifica a enzima Janus Kinase 2 (JAK2 V617F), presente em aproximadamente 90% dos pacientes com PV e em 50% dos pacientes com TE e MF, foi o principal achado genético anormal associado a essas doenças. Essa mutação resulta na ativação constitutiva da enzima JAK2 e na desregulação da proliferação celular e resistência à apoptose. Nosso grupo de pesquisa descreveu em PV, TE e MF a expressão alterada de genes reguladores da apoptose e dados da literatura indicam que a desregulação do ciclo celular contribui para a fisiopatologia das NMPs. Nesse projeto o intuito foi investigar a associação da via de sinalização m-TOR com as alterações do ciclo celular e via JAK/STAT nas NMPs. A via de sinalização m-TOR participa dos processos celulares de sobrevivência e proliferação. A estratégia experimental foi avaliar a expressão de genes e proteínas, reguladores da via m-TOR, em leucócitos de pacientes com NPMC e linhagens celulares JAK2+ tratadas com inibidores de JAK2 e AKT. Para determinar a relação da via m-TOR nas NMPs foi escolhido o gene eIF4E, alterado nessas doenças, para observar sua modulação diante da inibição farmacológica nas linhagens celulares JAK2 positivas. Os resultados desse estudo contribuem para a descrição de novos alvos terapêuticos dependentes e indepentendes da atividade quinase JAK2 e para o melhor conhecimento da participação da via de sinalização m-TOR na fisiopatologia das NMPs. / The myeloproliferative neoplasms (MNPs) are characterized by accumulation of erythrocytes, leukocytes and platelets morphologically normal and their precursors. In recent years several studies have sought to understand the cellular and molecular mechanisms involved in the pathophysiology and progression of these disorders in order to find diagnostic and prognostic markers and effective therapies. The point mutation in the gene encoding the enzyme Janus kinase 2 (JAK2 V617F), present in approximately 90% of PV patients and in 50% of patients with ET and MF was the main abnormal genetic finding associated with these diseases. This mutation results in constitutive activation of JAK2 enzyme and the deregulation of cell proliferation and resistance to apoptosis. Our research group described in PV, ET and MF altered expression of apoptosis regulatory genes and literature data suggest that deregulation of the cell cycle contributes to the pathophysiology of MNPs. In this project the aim was to investigate the signaling pathway of the association m-TOR with the changes of the cell cycle and JAK / STAT in NMPs. The signaling pathway participates in the m-TOR cell survival and proliferation processes. The experimental strategy was to evaluate the expression of genes and proteins, regulators of m-TOR pathway in leukocytes from patients with and NPMC cell lines treated with the JAK2 JAK2 + and AKT inhibitors. To determine the relationship of m-TOR pathway with MNPs has been selected the eIF4E gene deregulated in these disorders to observe their modulation in pharmacologically inhibited cells lines JAK 2 positive. Results of this study contribute to the description of new therapeutic targets of dependent and independent JAK2 kinase activity and to a better understanding of the signaling pathway of participation m-TOR in the pathophysiology of NMPs.