Os neutrófilos representam a primeira linha de defesa do organismo contra microrganismos invasores, células infectadas com vírus e células tumorais. Em seres humanos saudáveis eles constituem a população de células brancas mais abundantes do sangue. O reconhecimento de componentes microbianos por neutrófilos desencadeia a fagocitose, geração de espécies reativas de oxigênio (EROs) e liberação de proteínas granulares, tais como mieloperoxidase (MPO) e elastase (NE). Essas EROs e enzimas agem como agentes microbicidas e contribuem para os processos inflamatórios. Em trabalho anterior constatamos um aumento da atividade do sistema NADPH oxidase fagocítico (NOX2) e da geração de EROs por neutrófilos de ratos diabéticos e não diabéticos tratados com aminoguanidina (AG), um conhecido inibidor da formação de produtos finais de glicação avançada (AGEs), que culminou num aumento da atividade microbicida destas células. Nosso objetivo é elucidar o mecanismo de ação pelo qual a AG está atuando no nosso modelo. Desta forma, neste trabalho, avaliamos a hipótese que a AG estaria estimulando a degranulação de neutrófilos, portanto, estudamos a modulação da MPO e da NE, principais enzimas presentes nos grânulos azurófilos de neutrófilos. Para isso, utilizamos neutrófilos humanos isolados a partir de sangue periférico colhido por punção venosa de voluntários sadios. Os neutrófilos foram incubados ou não com AG 0,5 mM por um período de 18 horas em estufa de cultivo celular. A atividade de MPO foi avaliada através da formação de HOCl e através de quimiluminescência amplificada por luminol. A atividade de NE foi avaliada através da formação do produto da reação p-nitroanilida, por espectrofotometria. Avaliamos também a expressão da MPO e NE por Western blotting e imunomarcação. Como controle das reações foi utlizado inibidor de MPO (azida) e de NE (inibidor de tripsina de glycine max (soybean) - (STI)). O isolamento de neutrófilos permitiu obter uma população celular com mais de 95% de neutrófilos, com viabilidade superior a 99%. Nossos resultados mostraram que a AG não foi capaz de influenciar a atividade de cloração e basal da MPO, porém, observamos um aumento de ERO pelo tratamento com a AG após estímulo. Vimos também que a atividade de NE permaneceu inalterada pelo tratamento com a AG. Além disso, a AG não interferiu na expressão e distruibuição da MPO e NE. Estes resultados em conjunto nos levam a sugerir que a AG não influencia diretamente no processo de degranulação de neutrófilos, uma vez que este processo é um mecanismo utilizado por fagócitos com o propósito de criar um ambiente totalmente hostil para patógenos invasores. Aparentemente, o aumento da atividade microbicida de neutrófilos tratados com AG, não é via NE ou MPO na atividade clássica desta enzima, ou seja, na produção de HOCl. Entretanto, vimos uma resposta importante na atividade de MPO, que nos permite propor várias atividades para esta enzima, ora como uma atividade oxidativa que pode contribuir para o killing, ora como uma atividade antioxidante e desta forma pode proteger outras proteínas granulares antimicrobianas dos danos oxidativos. / Neutrophils represent the organism´s first line of defense against invading microorganisms, infected cells with viruses and tumor cells. In healthy humans, they constitute the most abundant population of white blood cells. The recognition of microbial components by neutrophils initiate phagocytosis, generation of reactive oxygen species (ROS) and release of granular proteins, such as myeloperoxidase (MPO) and elastase (NE). These ROS and enzymes act as microbicidal agents and contribute to the inflammatory processes. In a previous study, we found an increase in phagocyte NADPH oxidase system activity (NOX2) and generation of ROS by neutrophils of diabetic rats and non-diabetics treated with aminoguanidine (AG), a known inhibitor of the formation of advanced glycation end products (AGEs), which resulted in an increased microbicidal activity of these cells. Our aim is to elucidate the mechanism of action by which AG is acting in our model. This way, this study evaluated the hypothesis that AG would be stimulating degranulation of neutrophils, therefore, we studied the modulation of MPO and NE, the main enzymes present in azurophilic granules of neutrophils. For this, we used human neutrophils isolated from peripheral blood collected by venipuncture from healthy volunteers. Neutrophils were incubated or not with AG 0,5 mM for a 18 hour period in cell culture incubator. MPO activity was evaluated through the formation of HOCl and luminol-amplified chemiluminescence. NE activity was evaluated through the formation of the product of p-nitroanilide reaction, by spectrophotometry. We also evaluated the expression of MPO and NE by western blotting and immunostaining. As control of reactions was used inibitor of MPO (azide) and of NE (trypsin inhibitor from Glycine max (soybean) - (STI)). The neutrophil isolation allowed the achievement of a cell population with over 95% of neutrophils, with viability greater than 99%. Our results showed that AG was not capable of influencing the chlorination and basal activity of MPO, however, an increase of ROS by the treatment with AG after stimulation was noted. We also noted that NE activity remained unaltered by the treatment with AG. In addition, AG did not affect expression and distribution of MPO and NE. These results together lead us to suggest that AG does not influence directly the process of neutrophils degranulation, as this process is a mechanism used by phagocytes in order to create a fully hostile environment for invading pathogens. Apparently, the increase of microbicidal activity of neutrophils treated with AG is not via NE or MPO in the classical activity of this enzyme, in other words, in the production of HOCl. However, we observed a significant response in MPO activity, allowing us to propose various activities for this enzyme, either as a oxidative activity that can contribute to the killing or as an antioxidant activity, and therefore may protect other antimicrobial granular proteins from oxidative damage. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A espironolactona (SPR) é um ingrediente farmacêutico ativo (IFA), com estrutura química esteroidal, que possui atividade diurética sendo utilizada no controle da hipertensão arterial e, também, como agente antiandrogênico. Possui incompleta absorção oral devido à sua baixa solubilidade que pode dificultar a sua liberação. O uso de solventes e diferentes processos de cristalização para a síntese de um IFA são fatores que conduzem à formação de polimorfos. No Brasil, os IFAs em sua maioria são provenientes de diversos países, portanto apresentam diferentes fabricantes e rotas sintéticas distintas e, por isso, a caracterização físico-química e a identificação da estrutura cristalina são procedimentos importantes para garantir a qualidade e eficácia do medicamento, pois distintos polimorfos podem levar a concentrações plasmáticas ineficazes ou tóxicas. O trabalho teve por objetivo caracterizar polimorfos de SPR em IFAs provenientes de diferentes fabricantes através das técnicas de difração de raios X, análises térmicas, infravermelho e ensaios de solubilidade em equilíbrio. Os IFAs caracterizados foram usados para fabricar comprimidos, avaliando a influência do polimorfismo no perfil de dissolução do medicamento. Os IFAs foram identificados como SPR-L1, L2, L3, L4 e L5, o padrão secundário como SPR-pd 2° NCQ, o comprimido de referência como SPR-R, e os lotes de comprimidos produzidos como Lote A (SPR-L1) e Lote B (SPR-L2). Os resultados mostraram que os IFAs SPR-L2, L3, L4, L5 e padrão SPR-pd 2° NCQ foram caracterizados como forma II enquanto o IFA SPR-L1 contém polimorfos I e II. O ensaio de solubilidade em equilíbrio demonstrou que SPR-L1 apresenta solubilidade significativamente maior que SPR-L2 em todos os meios avaliados (p < 0,01), a partir do teste t-Student. Ao comparar os perfis de dissolução dos lotes A e B, o valor calculado para F2 foi de 19,00, demonstrando que à dissolução dos lotes de comprimidos fabricados não foram equivalentes. Portanto, a presença de pequena quantidade do polimorfo I, mais solúvel, influenciou com aumento significativo na velocidade de dissolução do fármaco. Ao avaliar o mecanismo de ação do fármaco, o aumento na velocidade de dissolução poderia estar relacionado à maiores concentrações plasmáticas de SPR e potencializar o efeito terapêutico, podendo causar hiperpotassemia e efeitos adversos indesejáveis. Comprimidos comercializados no Brasil também foram avaliados e a formulação demonstrou papel importante na velocidade de dissolução do fármaco, pois estes medicamentos não apresentaram equivalência farmacêutica entre si. / Spironolactone (SPR) is an active pharmaceutical ingredient (API), with steroidal chemical structure and diuretic activity, administered for arterial hypertension treatment, and also as antiandrogen agent. The drug shows incomplete gastrointestinal absorption due to its poor aqueous solubility that can difficult the drug release. The use of different solvents and crystallization processes for the synthesis of an API are factors that lead to formation of polymorphs. In Brazil, APIs have been purchased from different manufacturers, including different synthetic routes. Therefore, the physicochemical characterization and identification of the crystal structure of an API are important points to ensure its quality. Different crystal structures of a drug can lead to ineffective or toxic plasma concentrations, if different aqueous solubility were determined. In this study, SPR polymorphs in five batches of APIs from different manufacturers were characterized using powder X-ray diffraction, infrared spectroscopy, thermal analysis, and equilibrium solubility measurements. Tablets were manufactured using different APIs to assess the effect of drug polymorphism on their dissolution profiles. The APIs were identified as SPR-L1, L2, L3, L4 and L5; the standard as SPR-pd 2 ° NCQ, the reference drug product as SPR-R, and the batches of the manufactured tablets are denominated as batch A (SPR-L1) and batch B (SPR-L2). The results indicated that the APIs SPR-L2, L3, L4, L5 and standard SPR-pd 2 ° NCQ were characterized as pure form II although SPR-L1 contains both forms I and II. The equilibrium solubility measurements demonstrated that SPR-L1 solubility is higher than the SPR- L2 solubility in all aqueous media (p <0.01 using Student test). When the dissolution profiles of batches A and B were compared, the calculated value for F2 was 19.00, demonstrating that the dissolution of the manufactured tablets are not equivalent. Therefore, the presence of low amounts of polymorph I, a more soluble form, increases the dissolution rate of the drug. The increase in the dissolution rate could enhance the therapeutic effects of SPR due to changes in drug plasma concentrations, and cause hyperkalemia, leading to the appearance of undesirable side effects. Marketed SPR tablets in Brazil were also evaluated and formulation showed an important role in dissolution rate of the drug, leading to lack of pharmaceutical equivalence in these drug products. / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Liliane Werle Lima.pdf: 3601191 bytes, checksum: 5783e9d4437866bebca28c4080abc069 (MD5) Previous issue date: 2014-11-10 / Pesticides are widely used around the world for pest control and guarantee increased productivity. As is harmful to insects and weeds, are also toxic to humans . Pesticides are related to alterations of the immune system, are neurotoxic, and involved with alterations em endocrine system, besides interfering with metabolism. Exposure to pesticides is monitored by measurement of biomarkers, especially cholinesterase , and through changes in laboratory tests. The most commonly used pesticides are those belonging to the class of organophosphates, whose mechanism of action is irreversible inhibition of cholinesterase. Pesticides being involved in alterations of the immune system, and cardiovascular disease, this study aimed to evaluate the activity of myeloperoxidase (present in phagocytic cells) in individuals chronically exposed to pesticides, in addition to other laboratory markers. This study included 79 volunteers , divided into 3 groups : 1 ) EDP : direct exposure to pesticides ; 2) EIP : indirect exposure to pesticides , and 3) C : control, volunteers not exposed, or low exposure to pesticides. Laboratory tests for glucose, total cholesterol and fractions , triglycerides , AST, ALT, urea, creatinine, myeloperoxidase (MPO) , alpha-1- acid glycoprotein (AGP), high sensitive C-reactive protein (Hs-CRP), total antioxidant capacity, cholinesterase were performed and CBC . There were significant increases in urea in the EDP group. High levels of MPO, AGP and glucose were found for the EDP and EIP groups. The Hs-CRP showed a direct correlation with the values of AGP, but was elevated only for the EIP group. Significant reduction in total antioxidant capacity of serum was found in groups EDP and EIP. The cholinesterase values showed significantly higher activity in the EDP group. With these results we concluded that chronic exposure to pesticides can lead to an adaptive increase in cholinesterase activity resulting in decreased anti-inflammatory action of acetylcholine, with increased levels of myeloperoxidase and other markers of inflammation. / Os praguicidas são largamente utilizados em todo o planeta para controle de pragas e garantia de aumento de produtividade. Assim como são nocivos para insetos e ervas daninhas, também são tóxicos para os seres humanos. Os pesticidas estão relacionados com alterações do sistema imunológico, nervoso, endócrino, alem de interferir no metabolismo. A exposição aos praguicidas é monitorada pela dosagem de biomarcadores, especialmente a colinesterase, e através de alterações em exames laboratoriais. Os pesticidas mais usados são aqueles pertencentes à classe dos organofosforados, que tem como mecanismo de ação a inibição irreversível das colinesterases. Estando os pesticidas envolvidos em alterações do sistema imunológico, e com a doença cardiovascular, este estudo teve por objetivo avaliar a atividade da enzima mieloperoxidase (presentes em células fagocíticas) em indivíduos expostos cronicamente a pesticidas, alem de outros marcadores laboratoriais. Este estudo incluiu 79 voluntários, divididos em 3 grupos: 1) EDP: exposição direta aos praguicidas; 2)EIP:exposição indireta aos praguicidas; e 3) C: controle, voluntários com pouca ou nenhuma exposição aos praguicidas. Foram realizados exames laboratoriais para dosagem de glicose, colesterol total e frações, triglicerídeos, TGO, TGP, ureia, creatinina, mieloperoxidase (MPO), alfa-1-glicoproteína ácida (AGP), proteína C reativa ultrassensível (PCR-us), colinesterase, capacidade antioxidante total e hemograma. Ocorreram aumentos significativos na ureia no grupo EDP. Níveis elevados de MPO, AGP e glicose foram encontrados para os grupos EDP e EIP. A PCR-us apresentou correlação direta com os valores de AGP, contudo mostrou-se elevada apenas para o grupo EIP. Significante redução na capacidade antioxidante total do soro foi encontrada nos grupos EDP e EIP. A colinesterase apresentou valores de atividade significativamente maiores no grupo EDP. Com estes resultados concluímos que a exposição crônica aos pesticidas pode levar a um aumento adaptativo da atividade da colinesterase resultando em diminuição da ação anti-inflamatória da acetilcolina, com aumento dos níveis de mieloperoxidase e outros marcadores da inflamação.

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Berton, Juliana.pdf: 2602704 bytes, checksum: 2cb56990fbaa5b2f82264280c97a04df (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Histidine is an important amino acid in the differentiation of some cell types, such as hepatocytes, for example. Histamine is synthesized from histidine is present in many cancer types, including melanoma. This cancer has as characteristics no differentiated cell and the production a high amount of histamine. The purpose of this work was to study the effects of a histidine supplementation on differentiation and tumor progression. In vitro cell viability were performed by neutral red and MTT assays with histidine at 0,01, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0, 10 and 20 mM cimetidine at 0,01, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0, 10 mM, 10 mM histidine association cimetidine + 0,01 mM and 10 mM cimetidine association + 0,01 mM histidine and evaluated after 24, 48 and 72 hours using B16F10 cells and morphological analysis additionally performed. Histamine at 0,01, 0,1, 1 and 10 mM, terfenadine at concentrations 1, 10, 100 nM and 1 uM and thioperamide at concentrations 1, 10, 100 nM and 1 uM were also assessed by using the MTT cell B16F10. ELISA was performed to quantify histamine with cell culture supernatant treated with histidine, histamine, terfenadine, cimetidine, and thioperamide. For in vivo assays were used C57BL6/J mice underwent implantation of tumor cells and subsequently treated with histidine solution at a dose of 21.4 mg/kg cimetidine 343.3 mg/kg and association between both and evaluated for 11 days as the tumor growth were used. Histological analysis, hematological and biochemical determinations were also performed. Data were analysed by ANOVA One-Way, and Tukey post-test. The results of the MTT viability test, showed cell viability decreased histidine at a concentration of 0,01 mM in 72 hours, cimetidine in concentrations 3 to 10 mM at 48 and 72 hours and cimetidine 10 mM /histidine 0,01 mM association in 48 and 72 hours, results also found in neutral red. Histamine decreased the cell viability of B16F10 cells at 20 mM concentration in 48 h and concentrations 1 and 10 mM at 72 hours, terfenadine decreased cell viability at all concentrations tested at 24 h and stayed up to 10 nM 72 hours and thioperamide decreased the cell viability at all concentrations tested 72 hours MTT assay. In the morphological analysis it was observed that at lower concentrations of histidine discrete cell rounding occurred and the appearance of "blebs" and the highest concentrations of vacuolated cytoplasm. Cimetidine treated cells showed characteristics of apoptosis. The association histidine 0,01 mM/cimetidine 10 mM caused cell death. The histamine ELISA test showed that the treatment with the histamine H1 antagonist may increase or decrease production of histamine and its receiving treatment led to thioperamide produce less or blocking of histamine H3 receptors allows a greater uptake of histamine. In experiments in vivo treatments with histidine and cimetidine inhibited tumor growth by the seventh day of treatment. Biochemical determinations of AST, ALT showed no toxicity after treatment. The histological findings, the group treated with histidine showed necrotic areas and the cimetidine group showed leukocyte infiltration and promoted stimulation of angiogenesis. Metastases were not found in any of the organs analyzed groups. It was concluded that histidine plays an important role in tumor progression and stimulating or inhibitory depending on the dosage/day of treatment. / A histidina é um aminoácido importante fator na diferenciação de alguns tipos celulares, como hepatócitos, por exemplo. A histamina, sintetizada a partir da histidina, está presente em muitos tipos de câncer, entre eles o melanoma. Esse tipo de câncer tem como características a não diferenciação celular e a produção de grande quantidade de histamina. O propósito deste trabalho foi estudar os efeitos de uma suplementação de histidina sobre a diferenciação e progressão tumoral. Os ensaios in vitro de viabilidade celular MTT e vermelho neutro foram realizados com histidina nas concentrações 0,01, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0, 10 e 20 mM, cimetidina nas concentrações 0,01, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0, 10 mM, associação histidina 10 mM + cimetidina 0,01 mM e associação de cimetidina 10 mM + histidina 0,01 mM e avaliados após 24, 48 e 72 horas utilizando-se células B16F10 e adicionalmente realizada a análise morfológica. Histamina nas concentrações 0,01, 0,1, 1 e 10 mM, terfenadina nas concentrações 1, 10, 100 nM e 1 μM e tioperamida nas concentrações 1, 10, 100 nM e 1 μM também foram avaliadas pelo MTT utilizandose células B16F10. Foi realizado teste de ELISA para quantificação de histamina com sobrenadante de cultura celular tratada com histidina, histamina, terfenadina, cimetidina e tioperamida. Para o ensaio in vivo foram utilizados camundongos C57BL6/J, submetidos ao implante de células tumorais e posteriormente tratados com solução de histidina na dose de 21,4 mg/kg, cimetidina na dose de 343,3 mg/kg e associação entre ambas e avaliados por 11 dias quanto ao crescimento tumoral. Avaliações hematológicas, determinações bioquímicas e análise histológica também foram realizadas. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística ANOVA 1-VIA, e pos-test Tukey. Como resultados no teste de viabilidade MTT, a histidina diminuiu a viabilidade celular na concentração de 0,01 mM em 72 horas, da cimetidina nas concentrações de 3 e 10 mm em 48 e 72 horas e da associação cimetidina 10 mM/histidina 0,01 mM em 48 e 72 horas, resultados também encontrados no vermelho neutro. A histamina diminuiu a viabilidade celular das células B16F10 em 48 h na concentração de 20 mM e em 72 horas nas concentrações de 1 e 10 mM, a terfenadina diminuiu a viabilidade celular em todas as concentrações testadas em 24 h, permanecendo a de 10 nM até 72 horas e a tioperamida diminuiu a viabilidade celular em todas as concentrações testadas em 72 horas no ensaio de MTT. Na análise morfológica observou-se que nas menores concentrações de histidina ocorreu discreto arredondamento celular e aparecimento de “blebs” e nas concentrações maiores vacuolização de citoplasma. As células tratadas com cimetidina apresentaram indícios de apoptose. A associação histidina 0,01 mM/cimetidina 10 mM provocou morte celular. O teste de ELISA para histamina revelou que o tratamento com o antagonista H1 de histamina pode aumentar a produção de histamina ou diminuir sua receptação e o tratamento a tioperamida levou a uma menor produção de histamina ou o bloqueio dos receptores H3 permitindo uma maior recaptação de histamina. Na experimentação in vivo os tratamentos com histidina e cimetidina inibiram o crescimento tumoral até o sétimo dia de tratamento. As determinações bioquímicas das enzimas transaminase oxalacética e transaminase pirúvica revelaram que não houve toxicidade após os tratamentos. Nas avaliações histológicas, o grupo tratado com histidina apresentou áreas necróticas e o grupo cimetidina apresentou infiltrado leucocitário e promoveu estímulo da angiogênese. Metástases não foram encontradas nos órgãos analisados de nenhum dos grupos. Concluiu-se que a histidina tem um papel importante na progressão tumoral sendo inibitório ou estimulante dependendo da dosagem/dias de tratamento.

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jessica Bitencourt Emilio Mendes.pdf: 1572029 bytes, checksum: 2b2c9dc7481232e1bca34cb744c1ab6d (MD5) Previous issue date: 2011-09-17 / Resveratrol is a potent antioxidant, anti-inflammatory, anticancer, and chemoprotective agent. However, it is sensitive to some external agents such as air, light and oxidative enzymes that can reduce its viability and bioavailability for clinical use. In order to provide a controlled release, the aim of this study was to obtain resveratrol-loaded polyester microparticles and to evaluate their physicochemical properties, antioxidant potential and effect on hemolysis of human erythrocytes. Microparticles of poly(3-hydroxybutyrate-co -3-hydroxyvalerate) (PHBV) and poly(-caprolactone) (PCL) containing resveratrol were successfully prepared by simple emulsion/solvent evaporation. All formulations showed suitable encapsulation efficiency values higher than 80%. PHBV microparticles revealed spherical shape with rough surface and presence of pores. PCL microparticles were spherically shaped with smooth surface. Fourier-transformed infrared spectra demonstrated no chemical bond between resveratrol and polymers. X-ray powder diffraction patterns and differential scanning calorimetry analyses indicated that microencapsulation led to a drug amorphization. These PHBV/PCL microparticles delayed the dissolution profile of resveratrol. Release profiles were better fitted to biexponential equation. The hypochlorous acid scavenging activity and 2,2-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) radical cation decolorization assay confirmed that the antioxidant activity of resveratrolloaded into PHBV/PCL microparticles was kept, but was dependent on the microparticle morphology and dissolution profile. Resveratrol-loaded PHBV/PCL microparticles showed no cytotoxic effect on red blood cells. These results support an experimental basis for the use of resveratrol-loaded PHBV/PCL microparticles as a feasible oral drug delivery carrier for controlled release of resveratrol, being an attractive alternative in chronic diseases prevention. / O resveratrol é um potente agente antioxidante, anti-inflamatório, anticancerígeno e quimiopreventivo. No entanto, é sensível a algumas condições externas e ambientais, tais como: ar, luz e enzimas oxidativas, que podem reduzir a sua viabilidade e a sua biodisponibilidade para o uso clínico. Com o propósito de se elaborar sistemas de liberação modificada, o objetivo deste estudo foi a obtenção de micropartículas baseadas em poliésteres, contendo resveratrol, e a avaliação das características físico-químicas, do potencial antioxidante e do efeito sobre a hemólise de eritrócitos humanos desses materiais. As micropartículas de poli(3-hidroxibutirato-co-3 hidroxivalerato) (PHBV) e poli(-caprolactona) (PCL) contendo resveratrol foram preparadas com sucesso pelo método de emulsão simples/evaporação do solvente. Todas as formulações mostraram valores de eficiência de encapsulação adequados, superiores a 80%. As micropartículas de PHBV revelaram formato esférico com superfície rugosa e presença de poros. As micropartículas de PCL apresentaram formato esférico com superfície lisa. Os espectros de infravermelho com transformada de Fourier não demonstraram nenhuma ligação química entre o resveratrol e polímeros após a microencapsulação. As análises de difração de raio-X e de calorimetria exploratória diferencial indicaram que a microencapsulação conduziu a uma amorfização do fármaco. As micropartículas de PHBV e de PCL foram efetivas no controle da liberação do resveratrol. Os perfis de dissolução apresentaram o melhor ajuste para a equação biexponencial. Os ensaios de inibição do ácido hipocloroso e de descolaração do radical catiônico 2,2-azinobis(3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfônico) confirmaram a manutenção da atividade antioxidante do resveratrol presente nas micropartículas de PHBV e de PCL, mas dependente da morfologia das micropartículas e do perfil de dissolução. As micropartículas de PHBV e de PCL contendo resveratrol não apresentaram efeitos citotóxicos sobre os eritrócitos humanos. Esses resultados sugerem que as micropartículas poliméricas elaboradas a partir do PHBV e da PCL, contendo o fármaco, têm viabilidade como sistemas de liberação controlada por via oral do resveratrol, sendo uma alternativa interessante na prevenção de doenças crônicas.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-06-18T13:18:31Z No. of bitstreams: 1 470631 - Texto Parcial.pdf: 431429 bytes, checksum: b5055842a739822ab3818d061be0160a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-18T13:18:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 470631 - Texto Parcial.pdf: 431429 bytes, checksum: b5055842a739822ab3818d061be0160a (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Several companies wordwide produce kits with 99mTc labelling for diagnosing neuroendocrine tumors. Aiming at producing this kind of product in Brazil, a formulation was proposed, based on the methodology developed by Guggenberg et ul, using HYNIC-TOC, SnCl2, EDDA, tricine, mannitol and ascorbic acid. For labelling the cold kit, metastable radionuclide technetium (99mTc), produced by a 99Mo generator was used. The product was stored at temperatures of 0 to 8?C and at 25?C before labelling. After the product was labelled, it was kept at room temperature for up to 4 hours. The time of exposure was sufficient to observe the shelf life of the product for each storage method. Considering a radiochemical purity (RCP) of 80%, the product remained stable during the eight-month storage at 0 to 8?C before labelling and up to 4 hours after labelling. Therefore, the use of this product is possible in centers of nuclear medicine for a longer period during the day. / No mundo, diversas empresas produzem kits para diagn?stico de tumores neuroend?crinos para marca??o com 99m Tc. Com a inten??o de nacionalizar esse tipo de produto no Brasil, uma formula??o foi proposta e baseada na metodologia desenvolvida por Guggemberg et al, utilizando HYNIC-TOC, SnCL2, EDDA, tricina, manitol e ?cido asc?rbico. Para marca??o do cold kit, foi utilizado o radionucl?deo tecn?cio metaest?vel(99m Tc), produzido por um gerador de 99Mo. O produto foi armazenado em temperaturasde 0 a 8?C e a 25?C antes da marca??o. Ap?s marca??o do produto, esse foi mantido em temperatura ambiente por at? quatro horas. O tempo de exposi??o foi suficiente para observar a vida do produto em cada m?todo de armazenamento. Considerando-se em limite de PRQ (pureza radioqu?mica) de 80%, o produto se mostrou est?vel durante os oito meses, quando armazenado entre 0 a 8?C antes da marca??o, e at? quatro horas p?s-marca??o. Sendo assim, poss?vel a utiliza??o desse produto, em centro de medicina nuclear, por per?odo mais longo durante o dia.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-10T11:50:40Z No. of bitstreams: 1 DIS_FERNANDA_GRENDENE_PACHECO_COMPLETO.pdf: 2728715 bytes, checksum: 93bb3d4fcee10a1e8abba33e2e0e8996 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-10T11:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_FERNANDA_GRENDENE_PACHECO_COMPLETO.pdf: 2728715 bytes, checksum: 93bb3d4fcee10a1e8abba33e2e0e8996 (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Introduction: Cutaneous leishmaniasis is caused by Leishmania protozoan and transmitted through the female of Lutzomyia sandflies. The disease can manifest itself in different clinical forms: localized cutaneous leishmaniasis, disseminated cutaneous leishmaniasis, recidivans and diffuse cutaneous leishmaniasis. The North and Northeast (Brazil) are the most affected area by the disease. Pentavalent antimonials and amphotericin B have been the most used drugs for the treatment of this disease but may cause many side effects, which leads the patients to discontinue treatment. Control or progression of the disease has been related to the immune response triggered by the individual. PNP (purine nucleoside phosphorylase) is the key enzyme in the purine salvage route catalyzing the reversible phosphorolysis of purine nucleosides such as deoxyinosine or deoxyguanosine producing their respective bases and deoxyrribose-1-phosphate. The PNP inhibitors can be used for treating diseases caused by disorder mediated by T cells. Immucillin - DI4G (4th generation Immucillin ; 7-((bis(2-hydroxyiethyl)amine)methyl)-1,5-dihydro-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one) is considered as a potent inhibitor of PNP. Objective: development of pre-formulation and formulation studies of a pharmaceutical form for topical use containing Immucillin-DI4G as drug candidate for Cutaneous Leishmaniasis treatment. Material and Methods: Characterization of the compound was performed by NMR, FTIR-ATR and HRMS. The stability of the amorphous powder was evaluated over 90 days using a HPLC method for quantification. Formulations have been developed for stability, rheological and spreadability studies over 30 and 90 days. A method for the quantification of Immucillin-DI4G in the formulation was developed and validated using the HPLC. Results and discussion: The Immucillin - DI4G (amorphous powder) was stable up to 30 days when stored at 4 ?C and 25 ?C. Formulation 1 (Immucillin - DI4G 1.1% Carboxyvinylpolymer gel 2%) was stable only when stored at 4 ?C for a period of 60 days. Formulation 1 was considered as a non-Newtonian fluid with pseudoplastic behavior and no alterations in viscosity was observed over 90 days. On the other hand, significant changes in spreadability was observed when topical formulation was stored at 45 ?C. The formulation containing additives (formulation 2) showed an improvement in stability when stored at 45 ?C for a period of 30 days, but there was a significant decrease in drug content when stored at 4 ?C and 25 ?C. Formulations 3 (Immucillin-DI4G a 1,1% Gel-Cream) and 4 (Immucillin-DI4G 1.1% in Hydroxypropylcellulose polymer at 2%) presented significant loss in the drug content in 30 days when stored at 45 ?C. The results shows that further studies should be conducted in order to analyze the possible degradation products looking for design of novel formulations. / Introdu??o: A Leishmaniose Cut?nea ? causada por protozo?rios do g?nero Leishmania e transmitidas atrav?s das f?meas dos mosquitos do g?nero Lutzomyia. A Leishmaniose cut?nea pode se manifestar de diferentes formas cl?nicas: cut?nea localizada, cut?nea disseminada, recidiva c?tis e cut?nea difusa. A regi?o Norte e Nordeste s?o as mais acometidas pela doen?a. Os antimoniais pentavalentes e a anfotericina B s?o os medicamentos mais utilizados para o tratamento desta doen?a, por?m podem causar v?rios efeitos adversos fazendo com que muitos pacientes abandonem o tratamento. O controle ou a progress?o da doen?a est?o diretamente relacionados com a resposta imunol?gica desencadeada pelo indiv?duo. A PNP ? a enzima chave na rota de salvamento de purinas, catalisa a fosfor?lise revers?vel de nucleos?deos pur?nicos como deoxinosina e deoxiguanosina formando suas respectivas bases e deoxirribose-1-fosfato. Os inibidores da PNP podem ser utilizados para tratamento de doen?as causadas por desordem mediada pelas c?lulas T, atrav?s da inibi??o segura e seletiva da prolifera??o da c?lula T. O Immucillin-DI4G (Immucillin de 4? gera??o; 7-((bis(2-hidroxietil)amino)metil)-1,5-diidro-4H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona) ? considerado como um potente inibidor da PNP. Objetivo: desenvolver estudos de pr?-formula??o e formula??o de uma forma farmac?utica de uso t?pico contendo o Immucillin-DI4G como candidato a f?rmaco para tratamento da Leishmaniose Cut?nea. Materiais e M?todos: Foi realizada a caracteriza??o do composto atrav?s do RMN, EMS e FTIR-ATR. A estabilidade do p? amorfo foi avaliada durante 90 dias, o doseamento foi realizado atrav?s do CLAE. Formula??es foram desenvolvidas para o estudo de estabilidade, estudos reol?gicos e espalhabilidade durante 30 e 90 dias. Um m?todo para o doseamento do f?rmaco nas formula??es foi desenvolvido e validado empregando o m?todo de CLAE. Resultados e discuss?o: O Immucillin-DI4G (p? amorfo) mostrou-se est?vel at? 30 dias quando armazenado a 4 ?C e 25 ?C. A formula??o 1(Immucillin-DI4G a 1,1% em Gel pol?mero Carboxivin?lico a 2% ) mostrou-se est?vel apenas quando armazenada a 4 ?C por um per?odo de 60 dias; ? considerada como um Flu?do N?o-Newtoniano de comportamento pseudopl?stico, sem altera??es na viscosidade durante 90 dias, por?m com altera??es significativas na espalhabilidade quando armazenada a 45 ?C. A formula??o que continha aditivos (formula??o 2) apresentou uma melhora na estabilidade quando armazenada a 45 ?C num per?odo de 30 dias, por?m apresentou queda significativa no teor do f?rmaco quando armazenada a 4 ?C e 25 ?C. As formula??es 3 (Immucillin-DI4G a 1,1% em Creme-Gel) e 4 (Immucillin-DI4G a 1,1% em Gel Pol?mero Hidroxipropilcelulose a 2%) apresentaram perdas significativas no teor do f?rmaco em 30 dias quando armazenadas a 45 ?C. Os resultados demonstram que novos estudos devem ser realizados para a an?lise de poss?veis produtos de degrada??o, para poss?veis ajustes nas formula??es.

Made available in DSpace on 2011-03-23T21:19:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Item created via OAI harvest from source: http://www.bdtd.ufpa.br/tde_oai/oai2.php on 2011-03-23T21:19:21Z (GMT). Item's OAI Record identifier: oai:bdtd.ufpa.br:144 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / PPBIO/MCT - Programa de Pesquisa em Biodiversidade / Aniba canellila is a large size tree found in Northern region of Brazil and largely used in folk medicine. The infusate of its leaves and bark skin is believed to be a good antispasmodic, antidiarreic, anti-inflammatory, tonic agent and a good stimulant of digestive and the central nervous systems. This study was designed to evaluate the effects 1-nitro-2-phenylethane, main component of Aniba canelilla. We evaluated the antinociceptive and anti-inflammatory effects of the 1-nitro-2-phenylethane which is the main component of essential oil of Aniba canelilla. For nociception models were designed the writhing test, hot plate test and formalin test. For inflammation models were designed the croton oil-induced ear edema, rat paw edema induced by carrageenan and dextran, and leucocyte and neutrophil migration on carrageenan-induced peritonitis. In the writhing test, the 1-nitro-2-phenylethane dosed at 15, 25 and 50 mg/kg reduced the abdominal writhes in a significant manner. In the hot plate test (55 ? 0.5? C), the 1-nitro-2-phenylethane dosed at 50, 100 and 200 mg/kg did not induced alterations in the latency time when compared to the control. In the formalin test, the 1-nitro-2-phenylethane dosed at 50 and 25 mg/kg reduced in a significant manner the second phase of the algic stimulous. In addition, its antinociception was reversed by naloxone in the second phase. The 1-nitro2-phenyletahne produced inhibition of rat paw edema induced by carrageenan and dextran in a dose-dependent manner at the doses of 25 and 50 mg/kg. Doses of 25 and 50 mg/kg caused a dose-dependent inhibition of croton oil-induced ear edema in mice (with inhibition of 73% and 79%, respectively). Pretreatment (60 min) of rats with 1-nitro-2-phenylethane (25 mg/kg) significantly decreased leucocyte and neutrophil migration on carrageenan-induced peritonitis (with inhibition of 22,55% and 38,13%, respectively). Our results suggest that 1-nitro-2-phenylethane has analgesic activity which, according to the tests employed, is probably of peripheral origin. The mechanism involved is not completely understood, however these results suggest that opiod receptors are involved in the antinociceptive action of the 1-nitro-2-phenylethane. Further, our results suggest that 1-nitro-2-phenylethane has anti-inflammatory activity which, according to the tests employed, is probably of peripheral origin. / A Aniba canelilla (H.B.K) Mez, conhecida popularmente como casca-preciosa é uma espécie da família Lauraceae que apresenta ampla distribuição na região amazônica. O chá das folhas e das cascas são utilizados na medicina popular como digestivo, carminativo e antiinflamatório. Neste estudo decidiu-se avaliar se esta atividade é devida a um de seus principais constituintes, o 1-nitro-2-feniletano. A amostra obtida por purificação do óleo essencial de Aniba canelilla possui 97,5% de 1-nitro-2-feniletano foi fornecida pelo Laboratório de Engenharia Química da UFPA. Nos modelos de nocicepção foram realizados os testes da contorção abdominal, placa quente e formalina. Enquanto que nos modelos de inflamação foram realizados a dermatite induzido pelo óleo de croton, edema de pata induzido por dextrana e carragenina e peritonite induzido pela carragenina. No teste de contorção abdominal induzido por ácido acético, o 1-nitro-2-feniletano nas doses de 15, 25 e 50 mg/kg reduziu de maneira significativa o número de contorções abdominais. No teste de placa quente (55 0,5 C), o 1-nitro-2-feniletano nas doses de 50, 100 e 200 mg/kg não induziu alterações no tempo de latência quando comparado ao grupo controle. No teste de formalina, o 1-nitro-2-feniletano nas doses de 25 e 50 mg/kg reduziu de maneira significativa o estímulo álgico na 2 fase do teste. Além disso, a antinocicepção foi revertida pela naloxona na segunda fase. Na dermatite induzida pelo óleo de croton, o 1-nitro-2-feniletano nas doses de 25 e 50 mg/kg reduziu de maneira significativa o eritema em relação ao grupo controle (inibição de 73% e 79%, respectivamente). Nos edemas de pata induzido por carragenina e dextrana, o 1-nitro-2-feniletano foi capaz de impedir o desenvolvimento do edema, nas doses de 25 e 50 mg/kg, em comparação com o grupo controle. Na peritonite induzida por carragenina, o 1-nitro-2-feniletano na dose de 25 mg/kg reduziu o número de células globais e o número de neutrófilos quando comparado ao grupo controle (inibição de 22,55% e 38,13%, respectivamente). Nossos resultados sugerem que o 1-nitro-2-feniletano tem atividade antinociceptiva e antiinflamatória, provavelmente, de origem periférica, além disso, os resultados sugerem que os receptores opióides estão envolvidos no efeito antinociceptivo do 1-nitro-2-feniletano.

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Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-04-28T13:52:04Z No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-25T19:28:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-25T19:32:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T19:32:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) Previous issue date: 2015-03-19 / The gene therapy has emerged as a promising tool to handle, replace, remove or introduce genes into an organism for treatment of disease. Among the nucleic acids with therapeutic potential are the small interference molecules (siRNA) capable of causing the removal of messenger RNAs (mRNA) or to silence genes. The main challenge is the placement of these molecules for efficient transfection into target cells. The microemulsions have been widely used as carriers for topical drugs. They are colloidal systems with high solubilizing capacity and ability to control the rate of release of active molecules. Therefore, this study developed microemulsions containing siRNA for future topical application as a nanocosmetic. Two pseudoternary phase diagram were obtained using an aqueous phase of propylene glycol and water, Span 80 and Tween 80 as the mixture of surfactants and the canola oil as the oil phase. One received 5% polyethyleneimine (PEI) to aqueous phase to the synthesis of a polymeric system. The selected formulations were evaluated for conductivity, refractive index (RI), transmission electron microscopy (TEM), differential scanning calorimetry (DSC), droplet size, X-ray diffraction (XRD), polarized light microscopy (PLM) and stability, showing microemulsions of the type W/O. Furthermore, were performed studies of encapsulation efficiency and release of siRNA, which showed a great performance of the microemulsions as carriers of the interfering molecules. The presence of PEI provided strong electrostatic interaction with polynucleotides in order to not favor his release and reduced droplet size. The cytotoxicity assay demonstrated the cytoprotective effect of the formulations applied. The systems behaved as Newtonian fluids and low viscosity which facilitates topical application. Therefore, microemulsions are promising vehicles of siRNA for the purpose of skin therapy, with possible technological and socio-economic impact, given that this methodology has not been applied in the field of cosmetics. / A terapia gênica surgiu como uma ferramenta promissora a fim de manipular, substituir, suprimir ou introduzir genes em um organismo para o tratamento de doenças. Dentre os ácidos nucleicos com potencial terapêutico estão as pequenas moléculas interferentes (siRNA), capazes de ocasionar a eliminação de RNAs mensageiros (RNAm) anômalos ou silenciar genes. O principal desafio é a veiculação dessas moléculas para eficiente transfecção em células-alvo. As microemulsões têm sido amplamente utilizadas como carreadores de fármacos de uso tópico. Elas são sistemas coloidais com alta capacidade de solubilização e controle de liberação de moléculas ativas. Dessa forma, o presente trabalho desenvolveu microemulsões contendo siRNA para futura aplicação tópica como um nanocosmético. Dois diagramas de fases pseudoternário foram obtidos utilizando uma fase aquosa de propilenoglicol e água, Span 80 e Tween 80 como a mistura de tensoativos e o óleo de canola como a fase oleosa. Um deles recebeu polietilenoimina (PEI) 5% à fase aquosa para síntese de um sistema polimérico. As formulações selecionadas foram avaliadas quanto à condutividade, índice de refração (IR), microscopia eletrônica de transmissão (MET), calorimetria exploratória diferencial (DSC), tamanho de gotículas, difração de raios-X (DRX), microscopia de luz polarizada (MLP) e estabilidade, evidenciando ser microemulsões do tipo A/O. Além disso, foram realizados estudos de eficiência de encapsulação e liberação de siRNA, que demonstraram um ótimo desempenho das microemulsões como carreadores das moléculas interferentes. A presença do PEI proporcionou forte interação eletrostática com os polinucleotídeos de forma a não favorecer sua liberação, além de reduzir o tamanho das gotículas. O ensaio de citotoxicidade comprovou o efeito citoprotetor das formulações aplicadas. Os sistemas se comportaram como fluidos Newtonianos e de baixa viscosidade, o que favorece a aplicação tópica. Sendo assim, as microemulsões são veículos promissores de siRNA para fins de terapia cutânea, com possível impacto tecnológico e sócio-econômico, uma vez que esta metodologia ainda não foi aplicada na área dos cosméticos.