A fluoxetina (FLU) é um antidepressivo amplamente prescrito para depressão e outras doenças neurológicas. Além da forma inalterada, seu metabólito, a norfluoxetina (NOR), também possui atividade farmacológica. A determinação de FLU em fluidos biológicos é necessária para fins de monitorização terapêutica (TDM), no desenvolvimento de novas formulações, bem como em análises toxicológicas e forenses. Técnicas miniaturizadas, como a microextração em fase líquida (LPME), vêm sendo utilizadas no preparo de amostras biológicas, sendo simples, sensíveis e ambientalmente adequadas. A cromatografia líquida é considerada a técnica de escolha para a análise de FLU e NOR, porque em sua forma não derivatizada esses compostos são incompatíveis com a cromatografia gasosa (GC), a qual seria de interesse por sua simplicidade e baixo custo. Este trabalho apresenta o desenvolvimento de um método para a análise de FLU e NOR em plasma por LPME-GC-MS utilizando derivatização no injetor (IPD). Após derivatizados, os fármacos se tornam adequados à análise, sendo o processo online promissor devido ao baixo consumo de agente derivatizante e não adição de etapas no preparo de amostras. Foram utilizadas fibras ocas de polipropileno (600 μm de diâmetro interno, 200 μm de espessura da parede, e 0,2 μm de tamanho dos poros) para a extração por LPME, as análises foram feitas em um GC-MS 2010 Plus Shimadzu®. Um microlitro de agente derivatizante, MBTFA (n-metil-bis trifluoroacetamida) e 2 μL de extrato foram injetados diretamente no injetor do GC. O processo de derivatização online foi otimizado quanto à vazão do gás de arraste, temperatura do injetor e da coluna, injeção sob alta pressão (HPI), e tipo de liner. O processo de extração foi avaliado quanto ao efeito de salting out, pH da fase doadora e precipitação de proteínas plasmáticas. Além desses, os parâmetros termodinâmicos (tipo de solvente, volume e concentração do tampão e diluição da amostra), e cinéticos (tempo de extração e velocidade de agitação) foram otimizados. Para a derivatização online foram otimizadas vazão de 1,7 mL/min, injetor a 300 °C e temperatura inicial da coluna de 140 °C, utilizando o modo HPI a 250 kPa e liner split. Utilizando as condições cromatográficas otimizadas e nortriptilina como padrão interno o método proposto foi: 1 mL de plasma após a precipitação de proteínas com solução de ZnSO4/NaOH, 4 mL de tampão fosfato 0,1 mol/L pH 11, fibra oca de 3,7 cm com 10 μL de éter dihexílico extraindo por 30 min a 700 rpm. O método mostrou-se linear para FLU entre 10 e 500 ng/mL (R2 = 0,9973), e para NOR entre 15 e 500 ng/mL (R2 = 0,9972). Os limites de detecção e quantificação foram de 3 e 10 ng/mL, e de 5 e 15 ng/mL para a FLU e NOR, respectivamente. A precisão e exatidão foram avaliadas para 3 concentrações dos analitos (50, 250 e 500 ng/mL). Seletividade, estabilidade de curta duração e recuperação também foram avaliadas. O método foi aplicado com sucesso na análise de plasma de 5 pacientes em tratamento com FLU. O método desenvolvido é rápido, sensível e ambientalmente adequado, reduzindo significativamente o uso de solventes tanto no preparo de amostras quanto no processo de separação. A derivatização online com MBTFA, inédita até o momento para a análise de fármacos por GC, mostrou resultados promissores podendo ser utilizada como uma alternativa a análises por HPLC. / Fluoxetine (FLU) is a widely prescribed antidepressant for major depression and other neurological diseases. In addition to the unchanged form, its metabolite – norfluoxetine (NOR) – also has pharmacological activity. Determination of FLU in biofluids is necessary in therapeutic drug monitoring (TDM), in new formulation development, as well as in analytical and forensic toxicology. Miniaturized techniques such as LPME have been used in biological sample preparation, being simple, sensitive, and environmentally friendly. Liquid chromatography is considered the technique of choice for the analysis of FLU and NOR, because in its underivatized form these compounds are incompatible with gas chromatography (GC); which would be of interest for its simplicity and low cost. This work presents the development of a method for FLU and NOR analysis in plasma by LPME-GC-MS using injection-port derivatization (IPD). The process made these drugs suitable for analysis, being the online procedure promising due to low derivatizing agent consumption, as well as not adding steps in sample preparation. Polypropylene hollow-fibers (600 μm inside diameter, 200 μm wall thickness, and 0.2 μm pore size) were used for extraction and analyses were performed in a GC-MS 2010 Plus Shimadzu®. One microliter of derivatizing agent MBTFA (n-methyl-bis trifluoroacetamide) and 2 μL of extract were directly injected into the GC port. The IPD process was optimized for carrier gas flow rate, injector and column temperature, high-pressure injection mode (HPI), and type of insert liner. The extraction was evaluated for salting out effect, donor phase pH, and plasma proteins precipitation; additionally, two factorial designs were performed to verify the influence of thermodynamic parameters (type and volume of solvent, buffer concentration and dilution of the sample), and of kinetic parameters (extraction time and stirring speed) on extraction. For the IPD were optimized a flow rate of 1.7 mL/min, an injector temperature of 300 °C and a column initial temperature of 140 °C, using HPI at 250 kPa and split liner. Using the optimized chromatographic conditions and nortriptyline as the internal standard the proposed method was: 1 mL of plasma after protein precipitation with ZnSO4/NaOH, 4 mL of 0.1 mol/L phosphate buffer at pH 11. Hollow-fiber pieces of 3.7 cm with 10 μL of dihexyl ether for 30 min at 700 rpm were used for extraction. Linearity for FLU was between 10 and 500 ng/mL (R2 = 0.9973), and for NOR between 15 and 500 ng/mL (R2 = 0.9972). Detection and quantification limits of 3 and 10 ng/mL, and of 5 and 15 ng/mL for FLU and NOR, respectively. The intra-assay and inter-assay precision and accuracy were studied for three concentrations (50, 250 e 500 ng/mL). Selectivity, short term stability and extraction efficiency were also evaluated. After validated the method was successfully applied to the analysis of samples from 5 patients under fluoxetine treatment The developed method is fast, sensible and environmentally friendly, significantly reducing both the use of solvents in sample preparation and separation. The IPD with MBTFA, unpublished until the moment for the GC analysis of drugs, has been showing promising results and may be used as an alternative to HPLC analysis. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A espécie Garcinia brasiliensis, conhecida como "bacupari", é nativa da Amazônia e cultivada em todo o território brasileiro. Na medicina popular, suas folhas são utilizadas para tratar tumores, inflamações das vias urinárias e artrite, bem como para aliviar dores. Este trabalho foi conduzido para avaliar a atividade analgésica e antiinflamatória do extrato etanólico foliar (GbEE) e da 7-epiclusianona, uma benzofenona natural poliprenilada isolada de suas folhas, em modelos animais in vivo. A ação deste benzofenona também foi investigada em um ensaio antiinflamatório ex vivo, enfocando o “burst” respiratório de neutrófilos e as vias bioquímicas envolvidas. Foi constatada atividade atividade antiinflamatória tanto para GbEE v.o. ( 30, 100 3 300 mg /kg) como para 7-epiclusianona v.o.(5, 10 e 15mg/Kg) por reduzir o edema de pata induzido por carragenina e inibir o recrutamento de leucócitos na cavidade peritoneal. Além disso, através do modelo de indução de inflamação crônica foi observado uma redução estatisticamente significativa de formação do tecido granulomatoso. Por outro lado, efeito antinociceptivo periférico foi atribuído ao GbEE sugerindo ser mais eficaz contra dores inflamatórias, enquanto que para a benzofenona foi constatada tanto atividade antinociceptiva periférica como central, através de diferentes mecanismos. O composto 7-epiclusianona (10 a 100µg) também foi capaz de reduzir e até mesmo suprimir a liberação de ânion superóxido por fagócitos inflamatórios através de um mecanismo controlado pela fosforilação da proteína tirosina e pela estimulação direta da proteína quinase C, sugerindo novas abordagens terapêuticas para o tratamento de processos inflamatórios e desenvolvimento de novos fármacos. Os resultados mostraram atividades antiinflamatória e analgésica das folhas de G. brasiliensis e da benzofenona isolada, confirmando o uso tradicional dessa espécie para tratamento de dores e inflamações. / The species Garcinia brasiliensis, known as “bacupari”, is native to the Amazon and cultivated throughout Brazil. Their leaves are used in folk medicine to treat tumors, inflammation of the urinary tract and arthritis as well as to relief pain. This study was conducted to evaluate the anti-inflammatory and analgesic effects of the ethanolic extract of leaves (GbEE) and the 7-epiclusianone, a natural polyisoprenilated benzophenone isolated from G. brasiliensis, in several animal models. The action of the benzophenone was also investigated ex vivo throughout an anti-inflammatory assay, focusing neutrophil respiratory burst and the biochemical pathway. Antiinflammatory activity was found for both GbEE (30, 100 and 300 mg /kg) p.o. and for 7-epiclusianone (5, 10 and 15mg/kg) p.o. to reduce the paw edema induced by carrageenan and to inhibit leukocyte recruitment into the peritoneal cavity. In addition, through the induction model of chronic inflammation, was observed a statistically significant reduction of granulomatous tissue formation. Moreover, peripheral antinociceptive effect was attributed to GbEE suggesting that this extract could be more effective against inflammatory pain, whereas for benzophenone was verified both peripheral and central antinociceptive activity through different mechanisms.The compound 7-epiclusianone (10 to 100 μg) was also able to reduce and even suppress the release of superoxide anion by inflammatory phagocytes through a mechanism controlled by protein tyrosine phosphorylation and by direct stimulation of protein kinase C, suggesting new therapeutic approaches for the treatment of inflammatory processes and development of new drugs. So, it was demonstrated the anti-inflammatory and antinociceptive activities of the leaves of G. brasiliensis and the benzophenone isolated which supports previous claims of the traditional use of this species against inflammation and pain. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

As doenças parasitárias continuam sendo um sério desafio de saúde pública, principalmente em países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Dentre as diversas parasitoses existentes, pode-se destacar a leishmaniose, endêmica em vários países localizados nas regiões tropicais e subtropicais do globo terrestre. Ainda hoje, milhões de pessoas adquirem a infecção e milhares vão a óbito devido às complicações da doença quando não diagnosticada e tratada corretamente. Pesquisas voltadas à busca de tratamentos mais efetivos e seguros de doenças consideradas de países que negligenciam tais são de suma importância, uma vez que a disponibilidade de medicamentos eficazes e seguros ainda é bastante limitada, além do setor da indústria farmacêutica não demonstrar disposição em investimentos. Diante destes fatos, o presente trabalho visou à obtenção de novos candidatos a protótipos de fármacos leishmanicidas, utilizando como modelo estrutural a piperina, uma amida natural com propriedades antileishmania. Assim, foram obtidos oito ésteres (LFQM 138-145), tendo em suas estruturas as subunidades benzodioxola e piperidínica, comuns à piperina (6). Além destes, dois carbamatos (LFQM 146 e LFQM 147) também foram obtidos. Todos os compostos foram elucidados estruturalmente por técnicas de espectrometria (IV, RMN e EM), além de avaliados biologicamente in vitro frente às formas promastigotas de Leishmania amazonensis através do IC50 em μM. As substâncias mais ativas da série dos ésteres foram LFQM 144, LFQM 145 e LFQM 139, com valores de IC50 de 41,06 μM, 42,83 μM e 51,58 μM, respectivamente. Para a série dos carbamatos, o mais ativo foi LFQM 146 com IC50 = 43,16 μM, sendo equipotente aos dois compostos ésteres mais ativos LFQM 144 e LFQM 145. Todos os compostos foram menos ativos que a anfotericina B (IC50 = 5,08 μM), utilizada como medicamento padrão nas análises. Os compostos mostraram baixo perfil de citotoxicidade ao serem avaliados pelo ensaio de MTT com monócitos humanos, sendo o éster LFQM 145 o mais seguro dentre todos os sintetizados, com relação CC50/IC50 = 40,10. Dessa forma, o perfil molecular destes compostos está sendo considerado de grande interesse, podendo levar através de otimizações estruturais futuras à descoberta de compostos mais ativos e seguros / Parasitic diseases remain a serious public health challenge, especially in underdeveloped or developing countries. Among the various existing parasitosis, we can highlight that leishmaniasis is endemic in many countries located in tropical and subtropical regions of the globe. Even today, millions of people become infected and thousands will die as result of complications of the disease if not diagnosed and treated properly. Researches aimed at seeking more effective and safer treatments for diseases considered countries that neglect these are of paramount importance, since the availability of effective and safe medicines is still quite limited and also the pharmaceutical industry sector not demonstrate willingness to investments. Given these facts, the present work aimed at obtaining new candidate prototypes antileishmanial drugs, using as structural model piperine, an amide with natural antileishmanial properties. Thus, we obtained eight piperidine-benzodioxole esters (LFQM 138-145) presenting in their structures the piperidinic and benzodioxolic subunits, common to the compound model, piperine (6). In addition, two carbamates (LFQM 146 and LFQM 147) were also obtained. All compounds had their structures elucidated by spectral techniques IR, NMR and MS. All compounds have been biologically evaluated in vitro against the Leishmania amazonensis promastigotes and values were expressed by IC50 in μM. The most active substances of the ester series were LFQM 144, LFQM 145 and LFQM 139, with IC50 values of 41.06 μM, 42.83 μM and 51.58 μM, respectively. For the carbamate series, the most active was LFQM 146 with IC50 = 43.16 μM, that was equipotent to the evaluated esters LFQM 144 and LFQM 145. All compounds were less active than amphotericin B (IC50 = 5.08 μM) that was used as standard drug in the analysis. The compounds showed low toxicity in the MTT human cell viability assay and LFQM 145 was considered the safer between all the synthetized compounds, with a relation CC50/IC50 = 40,10. Thus, the molecular profile of these compounds is being considered of great interest and may lead future structural optimizations through the discovery of compounds most active and safe / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Os medicamentos em formulações sólidas podem apresentar o fenômeno do polimorfismo e diferentes polimorfos podem gerar diferentes propriedades físico-químicas. Portanto, a escolha do polimorfo correto pode evitar problemas de transição de fase durante os processos de fabricação, distribuição, armazenamento e de solubilidade que pode afetar a biodisponibilidade, eficácia e segurança dos medicamentos. Dois fármacos de baixa solubilidade foram escolhidos para avaliar a ocorrência de polimorfismo em seus ingredientes farmacêuticos ativos (IFAs) e a influência na qualidade dos fármacos e medicamentos: a famotidina e o meloxicam. A famotidina, um antagonista do receptor H2 muito utilizado no tratamento de doenças ulcerosas, apresenta dois polimorfos A e B. Dos IFAs estudados, um lote apresentou mistura dos polimorfos A e B que afetou a qualidade e, portanto, pode influenciar a eficácia do medicamento, pois a contaminação com a forma A acarretou diminuição da solubilidade do fármaco. O meloxicam, inibidor da ciclooxigenase (COX) com seletividade moderada a COX-2, é um anti-inflamatório largamente utilizado em doenças articulares. Na literatura, há descrição de cinco polimorfos para o meloxicam, mas somente os polimorfos I e IV possuem suas estruturas cristalinas elucidadas. Todos os IFAs estudados foram identificados e caracterizados pelas técnicas de DRXP, IV-ATR, DSC e TG e apresentaram qualidade de acordo com o que é preconizado para ser dispensado à população (forma I). No entanto, um dos IFAs estava contaminado com o polimorfo III. A mistura de polimorfos I e III afetou significativamente a solubilidade e a dissolução do meloxicam em comprimido. A solubilidade dos fármacos foi influenciada pela presença do polimorfismo podendo comprometer a eficácia e a segurança dos medicamentos. / Solid drugs can present the phenomenon of polymorphism and different polymorphs may have different physico-chemical properties. Therefore, choosing the correct form can avoid problems of the phase transition during the processes of manufacture, distribution and storage and solubility can affect the bioavailability, efficacy and safety of drugs. Two active pharmaceutical ingredients (APIs) of low solubility were chosen to evaluate the occurrence of polymorphism and its influence on the quality of drugs and pharmaceutical products. Famotidine, an antagonist of receptor H2 widely used in the treatment of ulcerous diseases, presents two polymorphs: A and B. Among the five APIs samples studied, one shows a mixture of polymorphs A and B which affected the quality and efficacy of the drug product. Meloxicam, inhibitor of cyclooxygenase (COX) with COX-2 moderate selectivity is an anti-inflammatory extensively used in joint diseases. There is a description of five meloxicam polymorphs in the literature. But only polymorphs I and IV have their crystalline structures elucidated. All APIs studied were identified and characterized as polymorph I by DRXP, IV-ATR, DSC and TG techniques, and they are in agreement what has been recommended for commercialization. However for one of the APIs another polymorph was found (polymorph III). The mixture of polymorphs I and III affects significantly the solubility and the dissolution of meloxicam tablet. Therefore, solubility of the drugs was influenced by the polymorphism presence, which could compromise the efficacy and safety of drug products. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Os micro-organismos endofíticos são aqueles que habitam o interior de um tecido vegetal, intra ou extracelularmente sem causar-lhe nenhum prejuízo. Eles possuem uma relação de simbiose (relação interespecífica de forma mutuamente vantajosa) com a planta e podem, por isto, sintetizar substâncias com alto potencial biotecnológico. Neste trabalho, objetivou-se a avaliação da capacidade dos fungos endofíticos isolados do mangue do litoral sul do estado de São Paulo, em produzirem compostos com atividade biológica: antimicrobiana, antiproliferativa, antioxidante e leishmanicida. Os extratos brutos de doze fungos endofíticos foram avaliados quanto a sua capacidade antimicrobiana contra uma bactéria Gram-positiva, uma bactéria Gram-negativa e uma levedura patogênica pelo método de microdiluição em placa. Três dos doze fungos endofíticos testados, Diaporthe phaseolorum 41.1(1), Diaporthe sp. 54(4) e Gibberella moniliformis 99(3), destacaram-se neste teste (CIM de 62,500 a 125,000µg/mL) e posteriormente, foram realizadas as demais avaliações de atividade biológica com eles. Verificou-se atividade antioxidante pelo método DPPH (1,1-difenil-2-picrilidrazil) abaixo dos valores encontrados para os padrões butil hidroxi tolueno (BHT) (66,310% ±0,019) e ácido ascórbico (96,047% ±0,005) para os extratos dos fungos testados: D. phaseolorum 41.1(1) (8,357% ±0,005), Diaporthe sp. 54(4) (8,747% ±0,018) e G. moniliformis 99(3) (29,640% ±0,011). Somente o extrato bruto do fungo Diaporthe sp. 54(4) apresentou atividade antiproliferativa contra as linhagens de células tumorais testadas. Foram necessários 2,700µg/mL para inibir 50% do crescimento de células de leucemia K562 e 7,200µg/mL para inibir a mesma porcentagem de células tumorais de glioma K51, sendo considerado um extrato com atividade moderada contra estas linhagens tumorais. O extrato do endófito D. phaseolorum 41.1(1) demonstrou melhor atividade leishmanicida, sendo que a concentração de 7,197µg/mL inibe o crescimento de cinquenta porcennto das formas promastigotas de Leishmania amazonensis. Estes resultados destacam a importância do estudo destes micro-organismos do mangue, pois eles podem ser uma fonte de várias substâncias com atividade de interesse farmacológico. / Endophytic microorganisms are those that inhabit the interior of plant tissues, intra-or extracellularly without causing any damages. They have a symbiotic relation with the plant and they can synthesize substances with high biotechnological potential. This study aimed to review the capacity of mangrove endophytic fungi isolated from the southern coast of São Paulo state in producing compounds with biological activity: antimicrobial, antiproliferative and antioxidant. Twelve endophytic fungi extracts were screened for their antimicrobial properties against Gram-positive bacteria, a Gram-negative bacteria and pathogenic yeast by microdilution plate method. Three of them, Diaporthe phaseolorum 41.1 (1), Diaporthe sp. 54 (4) and Gibberella moniliformis 99 (3), stood out in this test (MIC 62.500 to 125.000µg/mL) and then were held other biological activities assays with them. The scavenging capacity (average sequestrant capacity + standard deviation), at 90 ppm was measured by DPPH (1,1-diphenyl-2-picrilidrazyl) method and it was found values ​​found for BHT (butil hydroxi toluen) patterns (66.310% ± 0.019) and ascorbic acid (96.047% ± 0.005) and for the extracts of fungi tested which were below than the patterns: D. phaseolorum 41.1(1) (8.357%± 0.005), Diaporthe sp. 54(4) (8.747%± 0.018) and G.moniliformis 99(3) (29.640% ± 0.011). Only the Diaporthe sp. 54(4) crude extract presented antiproliferative activity against tumor cell lines tested wich 2.7µg/mL of the crude extract were required for 50% growth inhibition of leukemia cells K562 and 7.2µg/mL to inhibit the same percentage of K51 glioma tumor cells, this extract can be considered moderately active against these tumor cell lines. The extract of the endophytic D. phaseolorum 41.1 (1) showed better leishmanicidal activity, whereas the concentration of 7.197µg/mL inhibits 50% of the growth of Leishmania amazonensis promastigote forms.These results highlight the importance of these mangrove microrganisms study and show that they can be a source of various substances with pharmacological interest activity. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A doença de Alzheimer (DA) é uma neuropatologia grave e sem cura que se caracteriza por um distúrbio progressivo da memória e outras funções cognitivas, afetando o funcionamento ocupacional e social. Estimativas apontam que esta doença atinge aproximadamente 37 milhões de pessoas em todo o mundo e é considerada a maior causa de demências degenerativas em indivíduos acima dos 60 anos. Com o aumento da expectativa média de vida da população mundial, doenças associadas à longevidade como DA e a doença de Parkinson passaram a representar um grande desafio, onde o desenvolvimento de ações terapêuticas mais eficazes e seguras consiste em um dos objetivos mais perseguidos no cenário científico internacional. Dentre as alterações fisiopatológicas associadas ao desenvolvimento da DA, a redução da função colinérgica central tem sido o principal alvo dos fármacos disponíveis que atuam, em sua maioria, na inibição da acetilcolinesterase, enzima-chave na cascata biossintética e na regulação da concentração de acetilcolina nas fendas sinápticas. A busca por novos fármacos anticolinesterásicos com esqueleto carbônico inovador, levou-nos ao planejamento de um novo protótipo de candidato a fármaco desenhado pela hibridação molecular das estruturas do donepezil (2) e da rivastigmina (3), dois fármacos disponíveis para o tratamento da DA, com a inserção de uma subunidade acil-hidrazona visando propriedades antinflamatórias adicionais. O planejamento sintético da série 26 foi baseado numa abordagem convergente envolvendo o acoplamento dos intermediários-chave, hidrazida 29 e o aldeído piperidínico 33. Realizou-se um estudo comparativo de diferentes condições oxidativas para obtenção do aldeídochave observando os melhores rendimentos, independente do agente oxidante, para álcoois benzílicos, os melhores tempos reacionais e rendimentos de conversão foram observados com a utilização de NaNO2/Ac2, a melhor condição de obtenção de aldeídos não-conjugados foi obtida utilizando PCC/DMSO como oxidantes. / Alzheimer's disease (AD) is a serious and incurable neuropathology, characterized by a progressive disturbance in memory and other cognitive functions, affecting dramatically the social and occupational behavior. Hitting 37 millions people in the world, AD is considered the main cause of degenerative dementia in individuals over the age 60. With the increase of life expectancy of population worldwide, diseases associated to longevity such as AD and Parkinson's disease perform a big challenge, where the development of more efficient and safety therapeutic agents becomes the main target for research groups and Pharmaceutical Industry. Among the pathophysiological changes associated with the development of AD, the reduction of central cholinergic function has been the main target of the available drugs, which work mainly in the inhibition of acetylcholinesterase, a key enzyme in the biosynthetic cascade and regulation of the concentration of acetylcholine in synaptic clefts. The search for new anti-cholinesterase drugs, with innovative carbon skeleton and pharmacological profile, led us to design a new drug candidate prototype by using molecular hybridization of the structures of donepezil (2) and rivastigmine (3), two drugs available for the AD treatment. Furthermore, we proposed the insertion of an acyl hydrazone subunit aiming to achieve additional anti-inflammatory properties. The synthetic route for the series 26 was based on a convergent approach involving the coupling of the key-intermediates hydrazide 29 and the piperidine aldehyde 33.

A presente dissertação de Mestrado é dividida em duas partes: a primeira, dedicada à obtenção de extratos das sementes e frutos de Rheedia brasiliensis Pl. & T para isolamento de benzofenonas polipreniladas bioativas e identificação de suas estruturas moleculares e cristalinas, contem dois artigos científicos acerca da elucidação estrutural, por técnicas espectroscópicas e cristalográficas, de dois produtos naturais, gutiferona A e garciniafenona; a segunda, por sua vez, é constituída de um artigo científico no qual é descrita a atividade inibitória dos dois compostos supracitados e de outras duas benzofenonas, epiclusianona, também isolada de Rheedia brasiliensis, e 2,2’,4-triidroxibenzofenona, sintetizada através de substituição eletrofílica aromática, sobre quatro proteases: papaína, tripsina, catepsina B e catepsina G. Garciniafenona foi isolada pioneiramente dos frutos de Rheedia brasiliensis e sua completa caracterização é apresentada em um dos artigos supracitados. No outro, a estrutura cristalográfica de gutiferona A, uma benzofenona natural com propriedades inibitórias sobre a infecção por HIV e isolada pela primeira vez de Symphonia globulifera, é reportada. Em ambos os artigos, as estruturas de garciniafenona e gutiferona A são discutidas comparando os parâmetros geométricos, eletrônicos e estéricos determinados, com aqueles descritos na literatura para epiclusianona e o seu epímero, clusianona, esclarecendo relações entre configuração e tautomerismo ceto-enólico. O artigo relativo ao efeito inibitório das benzofenonas sobre proteases traz resultados experimentais que foram correlacionados com certos motivos estruturais cristalograficamente estimados, possibilitando o estabelecimento de relações entre as estruturas químicas dos compostos testados e a atividade anti-proteolítica, as quais são fortemente suportadas por ensaios computacionais de ancoragem dos inibidores no alvo macromolecular. / The present Master degree dissertation contains two parts: the first one, which was devoted to extract preparation from Rheedia brasiliensis seeds and fruits in order to isolate bioactive polyprenylated benzophenones and to identify their molecular and crystalline structures, leads two articles on structural elucidation of two natural products by X-ray crystallography and spectroscopic techniques: guttiferone A and garciniaphenone; the second one is a paper describing the inhibiting activity of the two compounds before mentioned and other two benzophenone-type derivatives, epiclusianone, which was also isolated from Rheedia brasiliensis, and 2,2’,4- trihydroxybenzophenone, which was synthesized by aromatic electrophilic substitution, against four proteases, papain, trypsin, cathepsin B and cathepsin G. Garciniaphenone has been discovered for the first time in Rheedia brasiliensis fruits and its complete characterization is given on a paper of the series. The crystallographic structure of a HIV-inhibitory benzophenone that was initially isolated from Symphonia globulifera, guttiferone A, is reported on another article of the series. On both papers, the structures of garciniaphenone and guttiferone A are analyzed matching their steric, electronic and geometrical features to that found in the literature for epiclusianone and its epimer, clusianone, which has allowed to state relationships between configuration and keto-enol tautomerism. The article concerning the inhibiting effect of benzophenones on proteases shows experimental data that were correlated with certain structural motifs determined by X-ray diffraction crystallography, establishing structure-activity relationships strongly supported by theoretical investigations using computational docking to predict the inhibitor-enzyme complex interaction pattern. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O objetivo deste trabalho foi isolar proantocianidinas de folhas de barbatimão e avaliar a atividade citotóxica para células de tumor mamário humano, MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435 (ER-). As proantocianidinas foram isoladas da fração aquosa de folhas de barbatimão, utilizando-se cromatografia em coluna de Sephadex LH-20 e metanol (10-100% ) e acetona (70%) como eluentes. A presença de proantocianidinas, nas frações obtidas, foi monitorada por cromatografia de camada delgada e esta revelou que a fração eluída com metanol 100% (usada nos experimentos) apresentou o maior teor de proantocianidinas. A despolimerização ácida permitiu quantificar as procianidinas na amostra e a análise por HPLC revelou a presença de ácido gálico, procianidina dimérica B1 e (-)-epicatequina-3-O-galato. A fração apresentou atividade antioxidante, sendo que a capacidade antioxidante total foi de 470,28 ± 14,36 mg ácido ascórbico/g de fração. A atividade seqüestrante de radicais livres DPPH 50% foi de 12 μg/mL e a atividade inibidora máxima da oxidação de proteínas foi obtida com 50 μg/mL de fração. A fração apresentou atividade citotóxica para células de tumor mamário MCF-7 e MDA-MB-435. O tratamento das células com a fração aumentou a atividade redutora de MTT, o que indica aumento da viabilidade celular. Entretanto, a análise morfológica revelou intensa vacuolização citoplasmática dependente da concentração da fração. Os vacúolos acumularam MTT, indicando tratarem-se de vacúolos autofágicos. Outras alterações morfológicas observadas com o tratamento foram a perda da morfologia celular típica, condensação da cromatina (principalmente formação de núcleo picnótico), alterações na membrana plasmática e após 48 h de tratamento houve marcante diminuição do tamanho das células. Não foi observado o padrão de DNA escada característico de apoptose nos diversos tratamentos. Os resultados parecem indicar que a fração isolada pode induzir autofagia nos dois tipos celulares estudados. A autofagia pode potencializar os efeitos antitumorais de quimioterápicos, o que pode ser útil na terapia contra o câncer e as folhas de barbatimão parecem ser uma valiosa fonte de substâncias bioativas. / The aim of the present study was to isolate proanthocyanidins from barbatimão leaves and evaluate its cytotoxic activity to MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435 (ER-) cells. The proanthocyanidins were isolated from the aqueous fraction of barbatimão leaves using Sephadex LH-20 column chromatography and methanol (10-100%) and acetone (70%) as eluents. The proanthocyanidins presence in the obtained fractions was monitored by thin layer chromatography and it revealed that the methanol 100% eluted fraction (used in the experiments) exhibited the highest content of proanthocyanidins. The acid depolimerization allowed quantifying the procyanidins in the sample and the HPLC analysis revealed the presence of gallic acid, procyanidin dimmer B1 and (-)-epicatechin-3-O-gallate. The fraction exhibited antioxidant activity, being the total antioxidant capacity 470.28 ± 14.36 mg ascorbic acid/g of fraction. The 50%DPPH free radical scavenging activity was obtained with 12 μg/ml and the maximum protein oxidation inhibitory activity was achieved with 50 μg/ml fraction. The fraction was cytotoxic to breast cancer MCF-7 and MDA-MB-435 cells. Cell fraction treatment enhanced the reducing MTT activity that indicates increased cell viability. However, the morphological analysis showed intense cytoplasmic vacuolization in a dosedependent manner. The vacuoles accumulated MTT, which seems to be consistent with autophagic vacuoles. Other morphological changes observed after cell treatment include cell lost of typical morphology, chromatin condensation (mainly pyknosis), membrane blebbing and after 48 h-treatment there was prominently cell shrinkage. No DNA-laddering formation, typical of apoptosis, was obtained after cell treatment. The results seem to indicate that the isolated fraction could induce autophagy in both studied breast cancer cell lines. Autophagy could enhance the effects of antitumor chemotherapy that can be useful in anti-cancer therapy and barbatimão leaf seems to be a valuable source of bioactive substances.

A maioria dos compostos naturais do mundo ainda não foi testada, visto a vasta biodiversidade disponível. As plantas do gênero Rheedia apresentam propriedades farmacológicas e químicas bem descritas na literatura e podem ser fonte de fungos endofíticos produtores de compostos bioativos. Os fungos endofíticos merecem especial destaque por sua grande diversidade de espécies e consequentemente, seus metabólitos tendem a apresentar diversidade química e moléculas inéditas com algumas atividades biológicas já descritas. Objetivou-se neste trabalho isolar fungos endofíticos das folhas de Rheedia brasiliensis, selecionar os de maior destaque e testá-los quanto à capacidade em produzir metabólitos bioativos com atividade antimicrobiana, antioxidante e antiproliferativa. Foram analisados 245 fragmentos de folhas de R. brasiliensis com isolamento de 154 fungos (freqüência de isolamento de 62,86%). Selecionou-se dois fungos, por meio da triagem antimicrobiana, para estudos mais avançados, sendo eles o Paraconiothyrium sp. P83F4/1, que pertence a um novo gênero recentemente descrito e que pode vir a se destacar na produção de novas moléculas de interesse e, Colletotrichum gloeosporioides P67F1/1, o qual apresenta histórico de metabólitos bioativos e moléculas importantes descritas na comunidade científica. Assim, no primeiro estudo, avaliou-se as propriedades biológicas do extrato acetato de etila de Paraconiothyrium sp. P83F4/1 obtido pela fermentação submersa em caldo czapek, testando-o quanto a sua capacidade em produzir compostos bioativos de interesse por meio de ensaios antimicrobianos, antioxidantes e antiproliferativos. As cepas de Staphylococcus aureus e Escherichia coli foram susceptíveis ao extrato de Paraconiothyrium sp. P83F4/1 testado, sendo a concentração inibitória mínima (CIM) para S. aureus de 500-1000 g/mL. Utilizando o método do DPPH (radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazil), o extrato de Paraconiothyrium sp. P83F4/1 apresentou capacidade sequestrante (média da capacidade sequestrante+desvio padrão), a 90 ppm, de 58,92+0,024 (%), sendo significativamente superior (p<0,05) ao padrão comercial Butil Hidróxi Tolueno (BHT), 39,52+0,095 (%). Ainda, o extrato deste fungo também apresentou destaque pela seletividade sobre as células HaCat (queratinócito humano), importante em patologias como psoríase, sendo o valor de GI50 de 0,95 µg/mL (média do log GI50 = -0,02). Estes resultados apontam para a potencialidade do extrato da fermentação do fungo Paraconiothyrium sp P83F4/1 e estimulam a continuidade dos estudos, elucidando o(s) composto(s) que exerce(m) estas atividades em potencial e aprofundando os conhecimentos sobre os mecanismos de ação envolvidos em tais atividades. No segundo estudo, objetivou-se avaliar o potencial biológico do extrato bruto de farelo de trigo e demonstrar sua influência em processos fermentativos, utilizando-se o fungo endofítico C. gloeosporioides P67F1/1 para a obtenção dos compostos bioativos. Verificou-se que o extrato diclorometânico do farelo de trigo apresentou atividades biológicas iguais ou superiores ao extrato fúngico. No ensaio antimicrobiano, ambos os extratos apresentaram CIM de 250-500 g/mL. A capacidade sequestrante (%) dos extratos, revelada pelo DPPH, mostrou valores de (média da capacidade sequestrante+desvio padrão): 17,7+0,037 (farelo de trigo) e 10,56+0,004 (fungo), sendo o extrato do farelo significativamente (p<0,05) melhor que o extrato de C. gloeosporioides P67F1/1. No ensaio antiproliferativo, o extrato bruto do farelo de trigo apresentou atividade fraca frente à maioria das linhagens tumorais avaliadas (25,34<GI50 (g/mL)<47,75; 1,40<média logGI50<1,68). Por outro lado, o extrato fúngico mostrou-se inativo frente a todo painel celular testado (GI50>250 g/mL, média logGI50>2,40), conforme critério do National Cancer Institute. Diante dos resultados, verificou-se que o farelo de trigo não se apresentou como substrato inerte no processo fermentativo. Desta forma, alerta-se a necessidade de maiores cuidados ao empregá-lo como substrato em determinados tipos de fermentação (cujos objetivos assemelham-se aos deste trabalho), evitando assim, influências de sua composição química (direta e/ou indiretamente) sobre atividades esperadas para os extratos em estudo, provenientes de processos fermentativos fúngicos. / The majority of natural compounds in the world has not been tested yet, due to vast biodiversity available. Plants of the genus Rheedia can be sources of endophytic fungi producers of bioactive compounds because it presented chemical and pharmacological properties well described in the literature. Endophytic fungi deserve particularly consideration because they include microorganisms with high species diversity and consequently, high chemistry diversity and uniqueness of molecules with biological activities proven. This study aimed isolate endophytic fungi from Rheedia brasiliensis leaves, selecting the most outstanding and testing their ability to produce bioactive metabolites with antimicrobial, antioxidant and antiproliferative activity. In all, 245 fragments of leaves of R. brasiliensis were analyzed with isolation of 154 fungi (isolation frequency of 62.86%). Two fungi were selected, through the antimicrobial screening, for more advanced studies: the first one was Paraconiothyrium sp. P83F4/1, which belongs to a new genus recently described and it may be important in the production of new molecules of interest, and, the second was Colletotrichum gloeosporioides P67F1/1, which presents a historical of metabolites and bioactive molecules that are outlined by the scientific community. The first part of this study evaluated biological properties of extract obtained from submerged fermentation into czapek broth of the Paraconiothyrium sp. P83F4/1 endophytic fungus. So, this extract was tested for its capacity to produce bioactive compounds with antimicrobial, antioxidant and antiproliferative properties of interest. The strains of Staphylococcus aureus and Escherichia coli were susceptible to fungal extract tested, with greater emphasis against S. aureus, whose minimum inhibitory concentration (MIC) values ​​were 500-1000 µg/mL. Using the method of DPPH (1,1-diphenyl-2-picril-hydrazyl radical), Paraconiothyrium sp. P83F4/1 extract showed scavenging capacity (average sequestrant capacity + standard deviation), at 90 ppm, of 58.92+0.024 (%), and was significantly higher (p<0.05) than commercial standard Butyl Hidroxi Toluene (BHT), of 39.52+0.095 (%). The Paraconiothyrium sp. P83F4/1 extract also stood out for selectivity on HaCat cells (human keratinocytes), important in diseases such as psoriasis, with GI50 value of 0.95 mg/mL (mean log GI50 = -0.02). These results indicate extract powerfull of the Paraconiothyrium sp. P83F4/1 and stimulate continuation of studies, with elucidating of compounds and deep knowledge about action mechanisms involved in such activities. The second part of this study aimed to analyze the biological potential of crude wheat bran extract and demonstrate its influence on fermentation processes using the C. gloeosporioides P67F1/1 to obtain bioactive compounds. The dichloromethane extract of wheat bran presented biological activities equal or higher than the fungal extract. For antimicrobial assay, both extracts showed MIC of 250-500 µg/mL. The scavenging capacity (%) of extracts, revealed by the DPPH, showed values ​​(average sequestrant capacity + standard deviation): of 17.7+0.037 (wheat bran) and 10.56+0.004 (fungus), with the bran extract significantly (p <0.05) better than the fungal extract. For the antiproliferative assay, the wheat bran crude extract showed weak activity for the most part of tumor lines tested (25.34<GI50 (µg/mL)<47.75, 1.40<average of logGI50<1.68). On the other hand, the fungus extract was inactive for all tested cell panel (GI50>250 µg/mL, average of logGI50>2.40), according to National Cancer Institute criteria. According to results obtained, we verified that wheat bran was not an inert fermentation substrate. So, for some fermentation processes is necessary more care to use it, in order to avoid influences of (direct and/or indirect) chemical composition on activities expected for the extracts on analysis, originated from fungal fermentation processes.

Diante da caracterização da violência como problema de saúde pública, o Brasil tem implementado estratégias de notificação do agravo para possibilitar a identificação de prioridades a serem tratadas pelas políticas públicas que realmente possam coibir e prevenir esse fenômeno e promover a saúde da população exposta. Este é um estudo epidemiológico descritivo-exploratório de desenho individual-observacional-transversal que objetivou analisar a qualidade das informações sobre violência doméstica, sexual e outras geradas a partir do banco de dados do Sistema de Agravos de Notificação compulsória (SINAN) no estado de Minas Gerais nos anos de 2010-2011, bem como caracterizar os atendimentos notificados. Para a análise da qualidade, foram avaliadas as incompletitudes e inconsistências dos dados nas fichas de notificação/investigação. As inconsistências foram verificadas por meio um instrumento elaborado com definição das possíveis inconformidades entre os campos relacionados. Como incompletitudes, foram considerados os registros preenchidos como ignorados ou em branco. A categorização foi realizada da seguinte forma: baixa (< 10% de registros sem preenchimento); regular (11 a 30%) e alta (> 30%). A caracterização dos casos notificados foi realizada por meio da análise do sexo; da faixa etária; da raça/cor da pele das vítimas; do local de ocorrência e da relação com o agressor, comparadas à tipologia da violência. Para as análises estatísticas descritivas e analíticas, foi empregado o software SPSS, versão 17, utilizando o teste Qui-quadrado, o Exato de Fischer com estabelecimento de 95% de confiança e margem de erro de 5%. Por meio de análise de 22.755 registros, verificou-se que 36,5% das fichas de notificações continham ao menos uma inconformidade; 0,4 % apresentavam características de acidentes e 5,1 % referiam-se a casos de violência extrafamiliar (criminalidade/delinquência), cujas vítimas eram adultos (20 a 59 anos) do sexo masculino, que, por estratégia adotada pelo Ministério da Saúde, não são objeto de notificação por esse banco de dados. Totalizaram-se, assim, 42 % de inconsistências. O perfil das pessoas atendidas, de forma geral, consiste principalmente de mulheres, jovens (20-29 anos) e pretos. O principal local de ocorrência é a residência e a relação com o agressor sofre variação de acordo com a faixa-etária analisada e com a tipologia da violência. Excetuando a violência sexual e a negligência/abandono, nas demais tipologias o principal agressor foi representado pelos cônjuges/companheiros. Houve maior predomínio de mães (20,3%) como executoras do ato violento nas negligências/abandonos e de desconhecidos (34,4%) nas notificações de violência sexual. Entre os adolescentes de 10-14 anos os conhecidos da vítima (25,6%) foram os maiores agressores e entres aqueles de 15-19 anos a maior parcela foi representada pelos parceiros amorosos (19,9%). Em crianças (0-9 anos) os agressores mais reportados foram a mãe (17%) e o pai (14,8%). Nas notificações em idosos (60 anos e mais) houve predominância dos filhos (20,9%) como agressores. Em relação ao sexo dos autores da agressão 51% deles foram homens. Os resultados permitem, por meio de análise crítica do banco de dados, com exclusão das inconsistências, a caracterização do perfil da violência para o direcionamento das ações de saúde no enfrentamento ao problema. Ainda são necessários esforços no aprimoramento da incompletitude e da consistência das informações. A notificação compulsória de violência pelo setor saúde é uma estratégia que possibilita o avanço na visibilidade e o enfrentamento ao flagelo, no entanto, evidencia-se, ainda, a necessidade da instituição de uma política nacional de monitoramento regular da qualidade das informações produzidas no Brasil, conduzida pelo Ministério da Saúde. / Given the characterization of violence as a public health problem, Brazil has implemented strategies notification of this disease to enable the identification of priorities to be treated by public policies that might actually restrain, prevent and promote health. This is an epidemiological descriptive exploratory observational, cross-individual study design aimed analyze the quality of information on domestic, sexual and other violence generated from the database of Disease Notification System compulsory ( SINAN ) in the state of Minas Gerais in the years 2010-2011, as well as characterize the calls reported. To analyze the quality of the incomplete data and inconsistencies in data reporting forms / research were evaluated. Inconsistencies were assessed using an instrument designed to define the possible noncompliance among related fields. How incomplete data were considered as the records filled ignored or unfilled. A categorization was performed as follows: low (<10% of records without filling), fair (11-30%) and high (> 30%). The characterization of notified cases was performed by analysis of sex, age group, race / skin color of the victims, place of occurrence and relationship to the perpetrator, compared to the typology of violence. For descriptive and analytical statistical analyzes SPSS version 17 software was used, using the Chi-square test, Fisher's Exact settled 95% confidence and a margin of error of 5%.Through analysis of 22,755 records it was found 36.5 % of the notification forms contained at least one unconformity , 0.4 % had characteristics of accidents and 5.1% referred to the cases of extra-familial violence ( crime / delinquency ), whose victims were adults ( 20-59 years) male, which in strategy adopted by the Ministry of Health, is not subject to notification in this database. Thus, totaling 42% of inconsistencies. The characterization was performed by analysis sex of victims, age group, race / ethnicity, place of occurrence and relationship to the perpetrator, compared to the typology of violence. The profile of the victims, in general, consists mainly of women, youth (20-29), and blacks. The primary site of occurrence is the residence and the relationship with the abuser undergoes variation according to age group analyzed the typology of violence. Except sexual violence and neglect / abandonment, in other typologies main offender was represented by intimate partners. There was a higher prevalence of mothers (20.3%) as executors of the violent act in neglect / abandonment and unknown (34.4%) in reports of sexual violence. Among adolescents aged 10-14 known by the victim (25.6%) were the biggest offenders and those aged 15-19 the largest portion was represented by romantic partners (19.9%). In children (0-9 years) the most commonly reported perpetrators were the mother (17%) and father (14.8%). In the elderly (60 and over) were prevalent, sons (20.9%) as aggressors. Regarding the sex of the authors of aggression 51% of them were men.The results allow, through critical analysis of the database, excluding inconsistencies, collect data on violence for targeting of health in addressing the problem. Further efforts are needed in improving the completeness and consistency of information. The mandatory reporting of violence by the health sector is a strategy that enables the advancement in visibility and in confronting the scourge, however, is still evident, the necessity of establishing a national policy for regular monitoring of the quality of information produced in Brazil, conducted by the Ministry of Health