Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000418376-Texto+Completo-0.pdf: 1759547 bytes, checksum: abe3efb07dc975e78ecba705690c7f76 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: The only curative treatment currently available for cirrhotic patients is liver transplantation. However, there are limitations with this treatment, making necessary the development of new methods. Acumulating evidence indicates that stem cell transplantation is therapeutically effective in chronic liver diseases. The objective of this study was to evaluate the potential of intraportal transplantation of bone marrow mononuclear cells in an induced cirrhosis model in rats. Methods: Twenty-four female Wistar rats, 14 days after ligation of the common bile duct were randomized to perform a transplantation of 1x107 mononuclear cells from bone marrow obtained from male Wistar rats or saline infusion by the portal route, guided by echography. On the 28th day of the experiment, the rats were sacrificed and serum albumin, bilirubin and aminotransferases were quantified. The area of hepatic fibrosis was determined by picrosirius red staining, and the identification of cells derived from male bone marrow was performed by immunohistochemical staining with anti-Sox 18 antibody. Results: After transplantation, a strong hepatic repopulation with cells from the donor bone marrow was detected in 75% of the treated rats. There was a significant reduction in the area of fibrosis in the cell therapy group (P=0. 036), without alteration in the biochemical parameters. However, when evaluating the group showing incorporation of bone marrow cells, besides a reduction in fibrosis (P=0. 043), there was an increase in serum albumin levels (P=0. 008).Conclusion: Intraportal transplantation of mononuclear bone marrow cells can be an effective treatment for hepatic repopulation, reduction of fibrosis, and increase in serum albumin, making this a potential alternative therapy for human cirrhosis. / Introdução: O único tratamento curativo disponível atualmente para pacientes cirróticos é o transplante hepático. Existem, entretanto, limitações na aplicação desta terapêutica, tornando necessário o desenvolvimento de novos métodos. Evidências crescentes têm demonstrado que o transplante de células-tronco pode tornar-se uma terapia eficaz em hepatopatias crônicas. O objetivo deste estudo é avaliar o potencial do transplante intraportal de células mononucleares de medula óssea em modelo de cirrose induzida em ratos. Metodologia: Vinte e quatro ratos Wistar fêmeas, quatorze dias após a ligadura de ducto biliar comum, foram randomizados para realização de transplante de 1x107 células mononucleares de medula óssea de ratos Wistar machos ou infusão salina através da veia porta, orientada por ecografia. No 28º dia do experimento os ratos foram sacrificados, com quantificação de albumina, bilirrubinas e aminotransferases séricas, além da aferição quantitativa da área de fibrose hepática através do picrossirius e identificação das células derivadas da medula óssea com a realização de imunohistoquímica com Anti-Sox 18. Resultados: Após o transplante verificou-se forte repovoamento hepático com células da medula óssea do doador em 75% dos ratos. Houve redução significativa da área de fibrose no grupo da terapia celular (P=0,036), sem alteração nos parâmetros bioquímicos. Quando, entretanto, avaliaram-se os grupos pela incorporação de células da medula óssea, além da redução da fibrose (P=0,043) houve aumento dos níveis séricos de albumina (P=0,008) no grupo que apresentou repopulação. Conclusão: O transplante intraportal de células mononucleares de medula óssea pode ser uma terapêutica eficaz para repopulação hepática, redução da fibrose e aumento da albumina sérica, podendo torna-se alternativa para o tratamento de cirrose em humanos.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-08-22T20:42:33Z No. of bitstreams: 1 GilmarAmorimDeSousa_TESE.pdf: 399375 bytes, checksum: 44df3ea97c9bb8746e637e071d02b4d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-08-22T20:51:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GilmarAmorimDeSousa_TESE.pdf: 399375 bytes, checksum: 44df3ea97c9bb8746e637e071d02b4d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-22T20:51:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GilmarAmorimDeSousa_TESE.pdf: 399375 bytes, checksum: 44df3ea97c9bb8746e637e071d02b4d5 (MD5) Previous issue date: 2015-09-11 / A hepatite C cr?nica ? a principal causa de doen?a hep?tica cr?nica avan?ada em est?gio final, de carcinoma hepatocelular (CHC) e de morte relacionada ? doen?a hep?tica. Evolui de forma progressiva no espa?o de tempo de 20 a 30 anos. Taxas evolutivas variam na depend?ncia de fatores do v?rus, do hospedeiro e comportamental. Este estudo objetivou fazer uma avalia??o do impacto da hepatite C, no servi?o de refer?ncia em Hepatologia do Hospital Universit?rio Onofre Lopes - N?cleo de Estudos do F?gado - de maio de 1995 a dezembro de 2013. Foi realizada uma avalia??o retrospectiva em 10.304 prontu?rios, com a finalidade de se construir uma coorte de pacientes com hepatite C, em que todos os indiv?duos tivessem o seu diagn?stico confirmado pelo teste padr?o ouro de biologia molecular. Os dados foram obtidos diretamente dos prontu?rios dos pacientes e registrados em planilha Excel, previamente constru?da, seguindo uma codifica??o elaborada com as vari?veis de estudo, os quais se constituem em dados individuais e em fatores de progn?stico definidos pela literatura na progress?o da hepatite C cr?nica. O projeto foi aprovado pelo Comit? de ?tica em Pesquisa do HUOL-UFRN com o n?mero de parecer 448.243. Os resultados foram analisados estatisticamente, sendo o teste de Qui-Quadrado e o Exato de Fisher utilizados para verificar a associa??o entre as vari?veis. Para a an?lise multivariada, usou-se o m?todo de regress?o Log?stica Binomial. Para ambos os testes, admitiu-se signific?ncia p<0,05 e IC de 95%. Os resultados mostraram que a preval?ncia de Hepatite C cr?nica no NEF foi estimada em 4,96%. A preval?ncia de cirrose por Hepatite C foi 13,7%. A preval?ncia de diabetes em pacientes com Hepatite C foi 8,78% e de diabetes em cirr?ticos com hepatite C 38,0%. A preval?ncia de CHC foi estimada em 5,45%. As taxas de descontinuidade do acompanhamento cl?nico foram estimadas em 67,5%. A mortalidade nos casos confirmados sem cirrose foi 4,34% e nos pacientes cirr?ticos 32,1%. Os fatores associados ao desenvolvimento de cirrose foram gen?tipo 1 (p = 0,0015) e bilirrubina > 1.3 mg% (p = 0,0017) . Os fatores associados ? mortalidade foram idade acima de 35 anos, abandono do tratamento, diabetes, uso de insulina, AST > 60 UI, ALT > 60 UI, bilirrubina total alta, TAP alargado, INR alto, albumina baixa, suspens?o do tratamento, cirrose e hepatocarcinoma. A ocorr?ncia de diabetes mellitus elevou a mortalidade de pacientes com hepatite C em 7,2 vezes. Vari?veis associadas ao diagn?stico de cirrose por US foram doador de sangue (odds ratio 0,24, p= 0,044) e atleta profissional (odds ratio 0,18, p = 0,35). ? razo?vel considerar uma reavalia??o nos modelos de screening para CHC propostos atualmente. A condi??o de cirrose e diabetes modifica a evolu??o cl?nica de pacientes com hepatite C cr?nica, tornando-a uma doen?a com maior mortalidade. Entretanto, ser doador de sangue ou atleta profissional ? fator de prote??o que reduz o risco de cirrose, independente do consumo de ?lcool. Pol?ticas p?blicas para melhor acessso, acolhimento e resolutividade s?o necess?rias para esta popula??o. / Chronic Hepatitis C is the leading cause of chronic liver disease in advanced final stage of hepatocellular carcinoma (HCC) and of death related to liver disease. Evolves progressively in time 20-30 years. Evolutionary rates vary depending on factors virus, host and behavior. This study evaluated the impact of hepatitis C on the lives of patients treated at a referral service in Hepatology of the University Hospital Onofre Lopes - Liver Study Group - from May 1995 to December 2013. A retrospective evaluation was performed on 10,304 records, in order to build a cohort of patients with hepatitis C, in which all individuals had their diagnosis confirmed by gold standard molecular biological test. Data were obtained directly from patient charts and recorded in an Excel spreadsheet, previously built, following an elaborate encoding with the study variables, which constitute individual data and prognostic factors defined in the literature in the progression of chronic hepatitis C. The Research Ethics Committee approved the project. The results were statistically analyzed with the Chi-square test and Fisher's exact used to verify the association between variable for the multivariate analysis, we used the Binomial Logistic regression method. For both tests, it was assumed significance p < 0.05 and 95%. The results showed that the prevalence of chronic hepatitis C in NEF was 4.96 %. The prevalence of cirrhosis due to hepatitis C was 13.7%. The prevalence of diabetes in patients with Hepatitis C was 8.78 % and diabetes in cirrhotic patients with hepatitis C 38.0 %. The prevalence of HCC was 5.45%. The clinical follow-up discontinuation rates were 67.5 %. The mortality in confirmed cases without cirrhosis was 4.10% and 32.1% in cirrhotic patients. The factors associated with the development of cirrhosis were genotype 1 (p = 0.0015) and bilirubin > 1.3 mg % (p = 0.0017). Factors associated with mortality were age over 35 years, abandon treatment, diabetes, insulin use, AST> 60 IU, ALT> 60 IU, high total bilirubin, extended TAP, INR high, low albumin, treatment withdrawal, cirrhosis and hepatocarcinoma. The occurrence of diabetes mellitus increased mortality of patients with hepatitis C in 6 times. Variables associated with the diagnosis of cirrhosis by us were blood donor (odds ratio 0.24, p = 0.044) and professional athlete (odds ratio 0.18, p = 0.35). It is reasonable to consider a revaluation in screening models for CHC currently proposed. The condition of cirrhosis and diabetes modifies the clinical course of patients with chronical hepatitis C, making it a disease more mortality. However, being a blood donor or professional athlete is a protective factor that reduces the risk of cirrhosis, independent of alcohol consumption. Public policies to better efficient access, hosting and resolution are needed for this population.

Introdução e objetivo: Anorexia e desnutrição são causas importantes de desnutrição nas crianças e adolescentes com cirrose. A grelina e a leptina são hormônios envolvidos na homeostase energética, possuem efeitos antagônicos e estão associadas com anorexia em cirróticos. O objetivo deste estudo é avaliar as concentrações de grelina, leptina, insulina e glicose, e o estado nutricional entre crianças e adolescentes cirróticos e hígidos. Métodos: Estudo transversal prospectivo, realizado com 39 crianças e adolescentes com cirrose (66,7% atresia biliar) idade entre 2,5 e 188 meses, sendo 51,3% do sexo feminino e 51,3% eram Child-Pugh A; 41%, B e 7,7%, C respectivamente, e 39 controles hígidos pareados por sexo e idade. As concentrações de grelina, leptina, insulina e glicose foram dosadas pelo método de ELISA. Amostras de sangue foram coletadas pelo menos após 3 horas de jejum. A gravidade da doença hepática foi avaliada pela classificação de Child-Pugh e pelo escore PELD e/ou MELD. A avaliação antropométrica foi realizada pelos índices de estatura para idade, prega cutânea tricipital e a classificação foi determinada de acordo com os padrões WHO 2009 e Frisancho 2008. Resultados: A grelina apresentou correlação inversa com a idade. Os valores medianos (percentil 25-75) de grelina acilada foram significativamente menores nos cirróticos do que nos controles [140,3 (93,9-269,7) pg/ml versus 277,8 (209,9-557,8) pg/ml, P=0,003]. Os valores medianos da grelina total e desacilada dos cirróticos foram 913,4 pg/ml (760,8- 1443,7) e 1397,8 pg/ml (815,27-2.047) respectivamente. Os valores medianos da leptina, insulina e glicose não foram significativamente diferentes entre os cirróticos e os controles (P=0,421; P=0,908; P=0,851). A grelina acilada foi associada com a gravidade e classificação de Child-Pugh, e a grelina desacilada com o escore PELD `15. A leptina apresentou correlação positiva com os parâmetros antropométicos, hematócrito e hemoglobina. Os cirróticos desnutridos apresentaram níveis diminuídos de leptina quando comparados aos cirróticos bem nutridos (P=0,023). Conclusões: A concentração diminuída de grelina acilada e aumentada de grelina total e desacilada relacionaram-se com a gravidade da doença hepática, enquanto os níveis séricos de leptina com desnutrição em crianças e adolescentes cirróticos. A insulina e a glicose não apresentaram associação com as variáveis estudadas. / Introduction and Objective: Anorexia and undernutrition state are a problem of paramount importance in children and adolescents with cirrhosis. Ghrelin and leptin are the main hormones involved in the control of food intake and body weigth, having antagonic effects and being associated with anorexia in cirrhotic patients. This study aimed to investigate the relationship between fasting ghrelin, leptin, insulin and glucose concentrations; and the nutritional status in pediatric cirrhotic patients, comparing with sex- and age-matched healthy controls. Methods: Cross-sectional study evaluated 39 children with cirrhosis (biliary atresia as etiology in 66.7%) aged between 2.5 and 188 months, 51.3% female were evaluated, 51.3% were Child-Pugh A; 41%, B and 7.7%, C. Other 39 healthy children matched for sex and age, taken as controls, were also evaluated. Blood samples were collected at least after 3-hours fasting. Fasting total ghrelin, acyl grelin, leptin, insulin and glucose levels were measured using a commercial ELISA kit. Severity of liver disease was assessed by Child-Pugh classification, and PELD or MELD score. Antropometric papameters including, body fat mass and height for age were determined and classified according to WHO 2009 and Frisancho 2008 standard reference. Results: Plasma ghrelin levels showed an inverse correlation with age. Median values (25-75 centile) of acylated ghrelin were significantly lower in cirrhotics than in healthy controls [142 (93-278) pg/ml vs 275 (208-481) pg/ml, P=0.001]. Median values of leptin, insulin and glucose were not significantly different between cirrhotics and controls (P=0.421; P=0.908; P=0.851). Ghrelin levels were associated with the severity of Child-Pugh classification and PELD or MELD scores `15. Ghrelin levels did not associate with gender and causes of cirrhosis. Leptin levels were correlated positively with anthropometric parameters, hematocrit and hemoglobin. Undernourished cirrhotic patients had lower leptin levels than wellnourished (P=0.023). Conclusion: Plasma acyl ghrelin concentration are lower and total and desacyl ghrelin were higher and associated with cirrhosis severity, whereas leptin was associated with undernourishment in children and adolescents with cirrhosis. Insulin and glucosis werent associated with any variable.

O uso de tetracloreto de carbono (CCl4) em ratos é um modelo experimental de dano ao tecido hepático, desencadeando fibrose e, a longo prazo, cirrose. Seu metabolismo ocorre no fígado pelo citocromo P450, resultando na produção de radicais livres e estimulação da lipoperoxidação, que induz um processo de necrose, inflamação e maior progressão da fibrose. Vários antioxidantes, entre eles os flavonoides, têm sido referidos como eficazes para diminuir a fibrose em modelos animais. Este estudo pretende avaliar a ação antioxidante da quercetina (Q) em um modelo experimental de cirrose induzida por CCl4 inalatório. Foram utilizados 25 ratos Wistar machos, com peso médio de 250g, divididos em 3 grupos: Controle (CO), CCl4 e CCl4+Q. Os ratos foram submetidos a inalações de CCl4 (2x/semana), durante 16 semanas, recebendo fenobarbital na água de beber na dose de 0,3g/dl, como indutor enzimático. A Q (50mg/Kg) via intraperitoneal foi iniciada na 10ª semana de inalação, perdurando até o final do experimento. A análise estatística foi ANOVA, seguida de Student Newmann Keuls (Média±SEM), considerando-se diferença estatisticamente significativa quando p<0,05. Após o tratamento com quercetina, observamos uma melhora na integridade hepática, diminuição da fibrose, do conteúdo de colágeno e re-estabelecimento nos níveis dos metabólitos do óxido nítrico, comparado ao grupo CCl4. Constatou-se também redução do dano oxidativo, verificada pela diminuição das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS), assim como aumento na atividade das enzimas antioxidantes e da relação GSH/GSSG. A partir desses dados, sugerimos que o emprego da quercetina possa ser promissor como terapia antioxidante nas complicações hepáticas. / Carbon tetrachloride (CCl4) is a classic experimental model of oxidative damage to liver tissue, causing long-term fibrosis and cirrhosis. Metabolism in the liver via cytochrome P450 results in the stimulation of lipid peroxidation and production of free radicals, which induce a process of necrosis, inflammation and greater progression of fibrogenesis. Various antioxidants and flavonoids have been identified as effective in reducing fibrosis in animal models. This study aimed to assess the antioxidant activity of quercetin (Q) in an experimental model of cirrhosis induced by CCl4 inhalation. We used 25 male Wistar rats (250g) that were divided into 3 groups: control (CO), CCl4 and CCl4 + Q. The rats were subjected to CCl4 inhalation (2x/week) for 16 weeks, and they received phenobarbital in their drinking water at a dose of 0.3 g/dl as a P450 enzyme inducer. Q (50 mg/Kg) was initiated intraperitoneally at 10 weeks of inhalation and lasted until the end of the experiment. Statistical analysis was by ANOVA Student-Newman Keuls (mean ± SEM), and differences were considered statistically significant when p <0.05. After treatment with quercetin, we observed an improvement in liver integrity, decreased fibrosis, as analyzed by picrosirius for the quantification of collagen, and restored levels of nitric oxide metabolites compared with the CCl4 group. It also reduced oxidative stress, as confirmed by the decrease of substances reacting to thiobarbituric acid (TBARS), the increased activity of antioxidant enzymes and the reduced glutathione ratio and glutathione disulfide (GSH/GSSG). From these data, we suggest that the use of quercetin might be promising as an antioxidant therapy in liver complications.

Fibrose Hepática Congênita (FHC) é uma hepatopatia hereditária que se manifesta, clinicamente, por diferentes quadros, dependendo da idade dos pacientes e da associação com anomalias em outros órgãos além do fígado. Nos primeiros 2 anos de vida, as manifestações clínicas mais salientes são devidas à concomitância das alterações renais; em escolares, adolescentes e adultos jovens, é a hipertensão porta que domina a cena. A comprovação diagnóstica é histopatológica, caracterizando-se por fibrose porta e perilobular com conservação da arquitetura lobular hepática; em relação aos duetos biliares, são descritos 2 padrões da doença: num há proliferação; no outro ausência dos ductos biliares em meio à fibrose. FHC é uma hepatopatia cujo diagnóstico é de grande importância, possibilitando a detecção de anomalias extra-hepáticas e a descoberta da doença em familiares assintomáticos. Foram estudados 26 pacientes com idade entre 2 horas e 27 anos. Em todos os casos, o diagn6stico de FHC foi feito pelo estudo histopatológico de fígado, tendo o material sido colhido por biópsia em 18 casose por necropsia nos demais. Cerca de 85% amostra era constituída de pacientes com idade inferior a 18 anos e não houve predomínio significativo em relação ao sexo atingido. Constatou-se mais freqüentemente a forma esporádica da doença, tendo se verificado recorrência familiar comprovada em aproximadamente 15% e suspeita em 24%, sugestiva de herança autossômica recessiva. Ao exame físico, esplenomegalia foi uma verificação constante, excetuando os recém-nascidos, e nefromegalia foi constatada apenas em crianças com idade inferior a 3 anos. Ficou demonstrada a pequena intensidade das alterações nos resultados dos exames laboratoriais utilizados para avaliar a "função hepática", excetuando a atividade da fosfatasemia alcalina que se apresentou alterada em aproximadamente 90% dos casos. Considerando a amostra global, hipertensão porta ocorreu em 65,3%, nos pacientes acompanhados clinicamente, em cerca de 90%, tendo a investigação hemodinâmica revelado hipertensão porta intra-hepática pré-sinusoidal. A prevalência de malformações extra-hepáticas foi de 42,3% na amostra global, aumentando para 57,8% nos pacientes submetidos à investigação histológica renal. O sistema urinário foi o mais comumente atingido (57,8%), e a doença renal policística forma infantil (nas suas 4 modalidades) responsável por aproximadamente 80% das malformações renais. Em relação às formas clínicas da doença, a amostra ficou assim distribuída: hipertensiva, 13 casos; renal, 8, latente, 4 e mista, 1. A forma colagítica não foi observada. Demonstrou-se associação significativa (p<0,001) entre a idade dos pacientes e as formas hipertensiva e renal da FCH.

Orientador: Paula Schmidt Azevedo Gaiolla / Resumo: Introdução: As doenças crônicas são associadas com frequência a alterações nutricionais, porém a avaliação da composição corporal na maioria das vezes utiliza somente o índice de massa corporal (IMC). Apesar da perda de massa muscular esquelética estar associada à redução da função ou performance, ela não é rotineiramente avaliada. Mais importante, um peso corporal aparentemente alto pode mascarar a perda de massa e função muscular, caracterizadas pela sarcopenia. Em pacientes com doenças crônicas, como artrite reumatoide (AR) e cirrose hepática (CH), observamos subdiagnóstico de sarcopenia quando estes pacientes são avaliados somente pelo IMC. Portanto conhecer melhor a composição corporal e os métodos de avaliação em pacientes com doenças crônicas é de grande relevância. Objetivos: Avaliar e comparar a antropometria, composição corporal e função muscular em pacientes com AR e CH. Avaliar a correlação e concordância entre bioimpedância (BIA) e densitometria de radiação X de dupla energia (DXA) para a avaliação da massa magra. Avaliar se métodos simples como força de preensão manual (FPM), espessura do músculo adutor do polegar (EMAP) e ângulo de fase (AF) se associam com alterações da massa e função muscular, em indivíduos com CH e AR. Métodos: Foram avaliados 100 pacientes do gênero feminino, 34 pacientes com CH e 66 com AR, seguidos no ambulatório de Hepatologia e Reumatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu-Unesp. Foi realizada avaliação an... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Resumo não disponível

Com o objetivo de avaliar as características operacionais da quantificação do RNA do vírus da hepatite C (VHC) pelo método do DNA ramificado (bDNA) e correlacionar a taxa de viremia com aspectos demográficos, laboratoriais e histopatológicos da doença hepática crônica C, foram estudados prospectivamente, no período de julho de 1991 à julho de 1992, 1 07 pacientes provenientes do ambulatório do Serviço de Hepatologia da Universidade de Miami, Flórida, E.U.A.. Todos apresentavam elevação das aminotransferases por mais de seis meses, anticorpos anti-VHC positivos por ELISA 11 e RIBA 11, RNA do VHC positivo por reação em cadeia da polimerase pós-transcriptase reversa (RT-PCR) e diagnóstico histopatológíco de hepatite crônica ou cirrose. Quanto ao sexo, 68 dos 107 (63,6%) pacientes eram homens e 39 (36,4%) eram mulheres. A idade variou entre 29 e 84 anos (média de 46,2 +/- 12,6 anos). Com relação à cor, 93 dos 107 (86,9%) pacientes eram brancos, 13 (12,1%) eram pretos e 1 (0,9%) amarelo. Como controles, foram selecionados 41 indivíduos com anticorpos anti-VHC negativos por ELISA li e RIBA 11 e negativos para oRNA do VHC por RT-PCR, compreendendo 11 pacientes avaliados ambulatorialmente no mesmo período (6 com cirrose biliar primária e 5 com hepatite crônica B), além de 30 voluntários saudáveis. Do total de 107 pacientes positivos para o RNA do VHC por RT-PCR, o teste bONA foi positivo em 88 (sensibilidade de 82,2%), sendo negativo em todos os controles (especificidade de 1 00% ). A concordância observada entre ambos os testes foi de 87,2%, com índice "kappa" de 0,74. A correlação entre os aspectos demográficos e o grau de atividade histopatológica mostrou que os pacientes com cirrose (CIR) possuíam idade média significativamente superior aqueles diagnosticados como hepatite crônica ativa (HCA) (52,4 +/- 14,3 versus 46,8 +/- 12,3 anos; p<0,02) ou hepatite crônica persistente (HCP) (52,4 +/- 14,3 versus 40,8 +/- 8,9 anos; p<0,0002). A m.édia da aminotransferase do aspartato (AST) mostrou-se significativamente superior no grupo CIR quando comparado aos grupos HCA (139,5 +/- 81,4 versus 96,4 +/- 40,2 UI/I; p<0,009) e HCP (139,5 +/- 81,4 versus 87,5 +/- 40,2 UI/I; p<0,009). A quantificação do RNA do VHC por bDNA não apresentou relação com os aspectos demográficos e laboratoriais dos pacientes com doença hepática crônica C. Porém, com relação a atividade histopatológica, observou-se que os indivíduos do grupo HCA apresentaram taxa média de viremia significativamente superior aos grupos HCP (16.908.490 +/- 13.654.660 versus 3.796.030 +/- 8.075.090 eq RNA-VHC/ml; p<O,OOOO) e CIR (16.908.490 +/- 13.654.660 versus 4.200.030 +/- 5.543.480 eq RNA-VHC/ml; p<O,OOOO). Concluindo, entre os vários resultados que confirmam dados anteriores ou ampliam os conhecimentos relativos a alguns aspectos da doença hepática crônica C, destaca-se a elevação progressiva da idade com relação à progressão da atividade histopatológica, a concordância substancial entre a quantificação viral por bDNA e a detecção do RNA do VHC por RT-PCR, além do achado de maior taxa média de viremia nos pacientes com HCA em relação aos demais grupos, aqui objetivamente demonstrada.

INTRODUÇÃO: Foi recentemente sugerido que a suscetibilidade à fibrose hepática, induzida pelo HCV, está relacionada a genes que regulam a apoptose. OBJETIVOS: Este trabalho visa elucidar a possível interação entre apoptose, inflamação e fibrose em pacientes com hepatite crônica C (HCC). MATERIAL E MÉTODOS: Pacientes com HCC, monoinfectados, com idade entre 18 a 60 anos, foram incluídos e submetidos a exames clínico e histopatológico. Aqueles com insuficiência renal crônica, neoplasias malignas, abuso de álcool, gravidez e/ou uso de imunossupressores foram excluídos. Foram determinados o índice de massa corporal, glicose, insulina, HOMA-IR, perfil lipídico, fibrose (METAVIR), níveis séricos de CK-18 (M30-Apoptosense, ELISA - Lausen, Switzerland), Fas, Fas-L, I-CAM, V-CAM, MIF, PAI (HSEP-63k, Milliplex, Millipore, Copenhagen, Denmark). RESULTADOS: Cinquenta e cinco pacientes foram incluídos, 23 deles eram virgens de tratamento. Dos pacientes que receberam tratamento antiviral, 15 obtiveram resposta virológica sustentada (RVS) e 17 foram não respondedores (NR). A inflamação, avaliada pelo sVCAM foi diretamente associada à fibrose avançada (p = 0,009). Além disso, níveis de apoptose mensurados pelo sFas-L e inflamação mensurados através do sVCAM foram mais elevados no grupo RVS em relação aos virgens de tratamento (p = 0,006 e 0,019, respectivamente). sVCAM correlacionou-se tanto com o sFas-L (rs = 0,778, p < 0,001) quanto com o MIF (rs = 0,621, p < 0,001). MIF e sFas-L também apresentaram correlação positiva (rs = 0,526, p = 0,001). CK-18 não diferiu entre os grupos. CONCLUSÃO: Fibrose avançada teve uma correlação positiva com a inflamação, mensurada pelo sVCAM, mas não foi associada a marcadores de apoptose. Os níveis de apoptose via sFas-L e inflamação via sVCAM evidenciaram-se maiores em pacientes que eliminaram o vírus quando comparados a pacientes não tratados. MIF também revelou tendência a ter níveis mais elevados naqueles com fibrose avançada. / AIMS: HCV-related liver fibrosis was recently suggested to be linked to genes that regulate apoptosis. Our study aims to elucidate the possible crosstalk between apoptosis, inflammation and fibrosis in patients with HCV. METHODS: HCV monoinfected patients, aging from 18 to 60 years old were included and underwent clinical pathological examination. Those with chronic renal failure, malignancies, alcohol abuse, pregnancy and/or taking immunosuppressant agents, were excluded. Body mass index, glucose, insulin, HOMA-IR, lipid profile, and fibrosis (METAVIR) were determined as well as serum levels of CK-18 (M30-Apoptosense, ELISA - Lausen, Switzerland), Fas, Fas-L, I-CAM, V-CAM, MIF, and PAI (HSEP-63k, Milliplex, Millipore, Copenhagen, Denmark). RESULTS: Fifty-five patients were included, 23 of them naïve. From the antiviral-experienced patients, 15 had sustained virological response (SVR) and 17 were non-responders (NR). Inflammation as assessed by sVCAM was directly associated to advanced fibrosis (p=0.009). As well the levels of apoptosis via sFas-L and inflammation via sVCAM both were increased in SVR group in comparison to naïve (p=0.006 and 0.019, respectively). sVCAM correlated both with sFas-L (rs=0.778, p < 0.001) and MIF (rs = 0.621, p < 0.001). MIF and sFas-L also displayed a correlation (rs=0.526, p=0.001). CK-18 did not differ among the groups. CONCLUSION: Advanced fibrosis had a positive correlation with inflammation by sVCAM, but was not associated with apoptosis markers, while levels of apoptosis via sFas-L and inflammation via sVCAM were increased in patients who cleared the virus when compared to naïves. MIF also showed a tendency to have higher levels those with advanced fibrosis.

A fibrose hepática é uma característica comum de diversas doenças crônicas do fígado e é caracterizada pela deposição excessiva de matriz extracelular no órgão. Em última instância, essa alteração anormal do parênquima hepático acarreta em hipertensão portal, cirrose e insuficiência do fígado, o que pode levar o paciente à morte. As células estreladas hepáticas (HSC) participam ativamente deste processo, modificando seu fenótipo quiescente, rico em gotas lipídicas no citoplasma, para o fenótipo ativado, em resposta a um insulto hepático. A linhagem GRX é um modelo de HSC ativadas. As caveolas são pequenas invaginações de 50-100 nm da membrana plasmática que são ricas em glicoesfingolipídeos, colesterol e proteínas GPI ancoradas. Elas são caracterizadas pela presença de caveolina, uma proteína estrutural específica desta organela. Estas pequenas organelas, consideradas especializações dos “rafts” lipídicos, estão presentes nos mais diversos tipos celulares e podem funcionar como plataformas onde se ancoram várias proteínas de membrana. Estas proteínas reconhecem sinais externos e transmitem sinais moduladores da atividade celular, regulando ou facilitando o transporte de ácidos graxos e de lipídeos, e também são responsáveis pelo transporte de vesículas de membrana. As caveolinas são as principais proteínas estruturais das caveolas, sendo a caveolina-1 (Cav-1) a mais importante. A Cav-1 é encontrada em todos os tipos celulares e está relacionada com a transformação oncogênica e tumorogênese. Estudos já mostraram a interação entre as caveolas e os filamentos de actina, os microtúbulos, e os filamentos intermediários. Em fígados cirróticos foi encontrado um aumento da expressão de Cav-1 nas células endoteliais sinusoidais e nas HSC. Em trabalho anterior, utilizamos o plasmídeo pCav1EGFP para a obtenção de uma linhagem permanente que superexpressa a Cav-1 e a proteína EFGP, a GRXEGFP-Cav. Neste trabalho, nós caracterizamos, bioquímica e morfologicamente, essa linhagem e realizamos outra transfecção com o plasmídeo vazio pCineoEGFP para estabelecer uma linhagem controle, a GRXEGFPpCineo . Através de métodos de análise bioquímica, de imunocitoquímica, de citometria de fluxo e de microscopia confocal e eletrônica de transmissão, mostramos que a superexpressão de Cav-1, aumentou a proliferação e a adesão celular, alterou a morfologia e a estrutura do citoesqueleto das células, a capacidade de migração e de endocitose da GRXEGFP-Cav. A análise ultraestrutural por microscopia eletrônica de transmissão revelou o aumento do número de caveolas na membrana plasmática. As alterações do citoesqueleto de actina e o aumento da afinidade célula-célula são indicativos de maior mobilidade celular. Esses resultados somados ao aumento do conteúdo de αSMA e Col-I sugerem a modulação da GRXEGFP-Cav para um fenótipo de miofibroblasto ativado característico de situações de dano hepático. Como a distribuição e a significância da expressão de Cav-1 em fígados normais e cirróticos são pouco conhecidas, e considerando o papel das HSC nas doenças hepáticas, entendemos que a linhagem permanente GRXEGFP-Cav pode ser uma ferramenta experimental muito interessante para o estudo destas patologias. / Liver fibrosis is a common feature of several chronic hepatic diseases and is characterized by the excessive deposition of extracellular matrix in the organ. Usually, this abnormal change of the hepatic parenchyma causes portal hypertension, cirrhosis and liver failure, which can lead to the patient death. Hepatic stellate cells (HSC) participate actively in this process through modifying their quiescent phenotype rich in lipid droplets in the cytoplasm to the activated phenotype in response to the liver injury. GRX line is a model of activated HSC. The caveolae are small invaginations of plasma membrane that reaches 50-100nm of size, rich in glycosphingolipids, cholesterol, and GPI-anchored proteins. These organelles are characterized by the presence of caveolin, a structural and specific protein. These small organelles, which are considered specializations of lipid "rafts" and can be present in several cell types, can act as anchoring platforms for several membrane proteins. These proteins recognize external signals and transmit these signals to modulate the cell activity through regulating or facilitating the transport of fatty acids and lipids, being also responsible for the transport of membrane vesicles. Caveolins are the main structural proteins of caveolae and caveolin-1 (Cav-1) is the most important. Cav-1 is found in all cell types and is related to the oncogenic transformation and tumorigenesis. Previous studies have shown the interaction among caveolae, actin filaments, microtubules, and intermediate filaments. Also, it was found an increase of Cav-1 expression in sinusoidal endothelial cells and HSC of cirrhotic livers, which was suggested to be related to the portal hypertension that accompanies the process of fibrosis. In a previous work, we used the pCav1EGFP plasmid to obtain a permanent cell strain that overexpresses Cav-1 protein and EFGP, which was named GRXEGFP-Cav. In this work we biochemical and morphologically characterized this strain. We also did another cell transfection with an empty pCineoEGFP plasmid to establish a permanent control cell line, which was named GRXEGFPpCineo. Through biochemical analysis, immunocytochemistry, flow cytometry, confocal and electron transmission microscopy, we showed that Cav-1overexpression increased cell proliferation and adhesion, changed cell morphology and cytoskeleton structure, and the cell migration and endocytosis capacity of GRXEGFP-Cav. The actin cytoskeletal changes and the increased cell-cell affinity are indicative of greater cell motility. These results associated to the increase of αSMA and Col-I contents suggest the GRXEGFP-Cav modulation be the activated myofibroblast that characterizes liver damage. As the distribution and the significance of Cav-1 expression in normal and cirrhotic livers are little known and considering the role of HSC in liver diseases, we believe that the permanent GRXEGFP-Cav line can be a very interesting experimental tool for the study of these pathologies.