Carbon black, which has polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) adsorbed on its surface, is used in the composition of rubber for pharmaceutical used in injectable drugs and parenteral formulations such as amino acid solutions and lipid emulsions. In this study, the contamination of parenteral preparations administered to newborn infants (NB) by PAHs was evaluated. Commercial solutions used in the composition of parenteral nutrition bags (NP) and the content of the bags administered to a group of ten RN during their period in the neonatal intensive care unit was analyzed. It was also analyzed the metabolite 1-hydroxypyrene in the urine of these infants, as well as in the urine of a group of infants who were not receiving NP (control group). Methods for determination of PAHs and 1-hydroxypyrene by high performance liquid chromatography using detection with DAD and fluorecence, respectively, were developed and validated for the samples of the study. PAHs were extracted from the samples using a polyethylene column. In the urine samples, extraction of metabolite was performed on a C-18 cartridge after its enzymatic hydrolysis. The results showed PAHs contamination in 56 out of 59 samples. Total PAHs concentration ranged from 0.013 mg/L to 10.562 mg/L. Pyrene was present in 50 out of 59 samples. The analysis revealed the presence of the metabolite 1- hydroxypyrene in the urine of babies who received NP, with concentration ranging from 0.039 mg/L to 0.544 mg/L (0.03 and 0.877 mmol/mol creatinine). In the urine of the control group the metabolite was not detected. Considering the toxicity of PAHs and the large volume usually administered in the NP, the results found in this study are worrying. The presence of PAHs in NP administered to newborns is even more important because they are the most vulnerable to adverse effects. / O negro de fumo, que possui hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) adsorvidos em sua superfície, é utilizado na composição de borrachas de uso farmacêutico usadas em medicamentos injetáveis e formulações parenterais como soluções de aminoácidos e emulsões lipídicas. Neste estudo avaliou-se a contaminação por HPAs em preparações parenterais administradas a recémnascidos (RN). Soluções comerciais usadas na composição das bolsas de nutrição parenteral (NP) bem como o conteúdo das próprias bolsas administradas a um grupo de dez RN durante o período de internação na UTI neonatal foram analisados. Foi também analisado o metabólito 1-hidroxipireno na urina desses RN, bem como de um grupo de RN que não estava recebendo NP (grupo controle). Os métodos para determinação dos HPAs e do 1-hidroxipireno por cromatografia líquida de alta eficiência usando detecção por arranjo de fotodiodos e fluorescência, respectivamente, foram desenvolvidos e validados para as amostras do estudo. Os HPAs foram extraídos das amostras utilizando uma coluna de polietileno. Nas amostras de urina, a extração do metabólito foi realizada em um cartucho C-18 após hidrólise enzimática do mesmo. Os resultados mostraram contaminação por HPAs em 56 das 59 amostras analisadas. O total de HPAs variou de 0,013 mg/L a 10,562 mg/L. O pireno esteve presente em 50 das 59 amostras. A análise das urinas revelou a presença do metabólito 1-hidróxipireno para os bebes que receberam NP, com concentração média entre 0,039 μg/L e 0,544 μg/L (0,03 e 0,877 μmol/mol de creatinina). Na urina dos bebes controle o metabólito não foi detectado. Considerando a toxicidade dos HPAs e o grande volume usualmente administrado na NP, os resultados encontrados nesse estudo são preocupantes. A presença de HPAs na NP administrada a recém-nascidos é ainda mais relevante, dado que são os mais vulneráveis a efeitos adversos.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo / Pithecoctenium echinatum belongs to the family Bignoniaceae, popularly known as comb monkey used in folk medicine for inflammations, rheumatism, skin infections, headaches, cleanses the blood and calming. The objective of this study was to characterize morphological and anatomical fruit of P. echinatum; to determine the physico-chemical quality of the plant drug, isolating chemical compounds of secondary metabolism, as well as to investigate antimicrobial, antioxidant and anti-inflammatory, and analyzing biochemical parameters of liver and kidney toxicity in the crude extract (CE) of seeds of P. echinatum. This species has bicarpelar ovary with the presence of trichomes, crystals and emergencies. It has parietal placentation. The rudiment seminal anatropous, unitegmic and tenuinucellate. The ring nectary has stomatal complexes and trichomes. The epicarp has cutin with the presence of lenticels, estomatíferos and complex emergencies. The outer mesocarp has parenchyma cells, stone cells, sclerified cells and crystals. The endocarp is represented by a single cell layer is not sclerified. The seed is winged and exotestal. The endothelium and the endosperm are the membranaceous embryo. The mesophyll has chemical compounds such as alkaloids, fixed oils, volatile oils, scarce presence of starch and consists of pectic walls. In physico-chemical characterization, using pharmacopoeia tests was used dried vegetable drug, noting that no significant variation of the samples collected in different locations. The hydroethanolic extract 70% seeds of P. echinatum presented secondary metabolic compounds such as steroids and/or triterpenes, flavonoids, alkaloids, anthraquinones, tannins, catechin, phenolic hydroxyl heterosides cardiotonic and volatile oils. Assay polyphenols, flavonoids and tannins were determined by spectroscopic in the CE and fractions. P. echinatum showed antioxidant potential (IC50 131.84 mg/ml) in acetate fraction by the DPPH method and antimicrobial activity to P. aeruginosa, P. zophii and C. albicans by the microdilution method (MIC). From the CE the seeds of P. echinatum we performed the isolation and identification of hesperetin and diometin. These flavonoids were isolated from P. echinatum first. The compounds were determined and analyzed by HPLC / MS and NMR and their spectra compared with the literature. The anti-inflammatory activity of the CE was assayed by the induction of inflammation for cotton rolls and serum taken from rats submitted to the bioassay, in which were administered orally by 300mg/kg/day of CE for 6 consecutive days and compared to nimesulide (5mg/kg/day) and negative control (propylene glycol 20% v/v). The results showed that the CE of P. echinatum showed significant inhibition of inflammation of 24.7%, similar to the inhibition obtained by the group of animals treated with nimesulide 21.4% compared to controls. The hematological parameters showed an increase in the number of leukocytes and decreased of corpuscular medium volume, while AST, ALT and creatinine showed no significant difference in the use of CE compared with the control group propylene glycol. Therefore, the physico-chemical parameters established for P. echinatum enable quality control of drugs of this kind, and this presented antimicrobial, antioxidant and anti-inflammatory activities. Furthermore, no evidence of a hepatotocidade and nephrotoxicity in the experimental conditions tested. / Pithecoctenium echinatum pertence à família Bignoniaceae, conhecida popularmente como pente-de-macaco e é utilizada na medicina popular para inflamações, reumatismo, infecções cutâneas, dor de cabeça, depurativo do sangue e calmante. O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização morfo-anatômica do fruto de P. echinatum; determinar parâmetros físico-químicos de qualidade da droga vegetal; isolar compostos químicos do metabolismo secundário, bem como investigar atividade antimicrobiana, antioxidante e anti-inflamatória, além de analisar parâmetros bioquímicos de toxicidade hepática e renal no extrato bruto das sementes de P. echinatum. Esta espécie possui ovário bicarpelar com presença de tricomas, emergências e cristais. Possui placentação parietal. O rudimento seminal é anátropo, unitegumentado e tenuinucelado. O anel nectarífero possui complexos estomáticos e tricomas. O epicarpo é cutinizado com presença de lenticelas, emergências e complexos estomatíferos. O mesocarpo externo possui células parenquimáticas, células pétreas, células esclerificadas e cristais. A semente é alada e exotestal. O endotélio e o endosperma constituem o envoltório membranáceo do embrião. O mesofilo cotiledonar possui compostos químicos como alcaloides, óleos fixos e voláteis, presença escassa de amido e é constituído de paredes pécticas. Na caracterização físico-química, por meio de testes farmacopeicos foi utilizado droga vegetal seca, constatando que não houve variação significativa das amostras coletadas em locais diferentes. O extrato hidroetanólico 70% (EB) das sementes de P. echinatum apresentou compostos do metabolismo secundário como esteróides e/ou triterpenos, flavonoides, alcaloides, antraquinonas, taninos catéquicos, oxidrila fenólica e heterosídeos cardiotônicos e óleos voláteis. Por doseamento espectroscópico foram determinados polifenóis, flavonoides e taninos no EB e frações. P. echinatum apresentou potencial antioxidante (CE50 131,84 μg/ml) na fração acetato pelo método do DPPH e atividade antimicrobiana à P. aeruginosa, P. zophii e C. albicans pelo método de microdiluição em caldo (CIM). A partir do EB das sementes de P. echinatum foi realizado o isolamento e a identificação de dois flavonoides diometina e hesperitina, agliconas flavona e flavanona, respectivamente. Estes flavonoides foram isolados de P. echinatum pela primeira vez. Os compostos foram determinados e analisados por CLAE/MS e RMN e seus espectros comparados com a literatura. A atividade anti-inflamatória do EB foi avaliada pelo método da indução da inflamação por cilindros de algodão, e realizadas dosagens séricas dos ratos submetidos ao bioensaio, nos quais foram administrados a três grupos de ratos, por via oral, 300mg/kg/dia do extrato bruto, 5mg/kg/dia de nimesulida e propilenoglicol 20% v/v, por 6 dias. Os resultados obtidos mostraram que o extrato bruto de P. echinatum apresentou inibição da inflamação significativa de 24,7%, semelhante à inibição obtida pelo grupo de animais tratados com nimesulida de 21,4%, em relação ao grupo controle. Os parâmetros hematológicos mostraram que houve aumento no número de leucócitos e diminuição no volume corpuscular médio (VCM), enquanto que AST, ALT e creatinina não apresentaram diferença significativa no uso do extrato de P. echinatum, quando comparados com o grupo controle propilenoglicol. Portanto, os parâmetros físico-químicos estabelecidos para P. echinatum possibilitam controle de qualidade da droga dessa espécie, e esta, apresentou atividades antimicrobiana, antioxidante e antiinflamatória. Além disso, não foram observados sinais de hepatotocidade e nefrotoxicidade nas condições experimentais testadas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Growing evidence has shown that leukotrienes are important contributors in the pathophysiology of several SNC inflammatory diseases where excitotoxicity is involved, including traumatic brain injury, encephalitis, Parkinson's disease, ischemia, epilepsy and neuropathic pain. However little is known about the molecular mechanism by which leukotrienes facilitate excitatory activity in the brain. Thus, in this study we investigated the effect of antagonists for cysteinyl leukotrienes receptors (CysLT) on PTZ-induced seizure in mice. Bay-u9973 (3 and 30 nmol), montelukast (0.03 and 0.3 μmol) and pranlukast (1 and 3 μmol), increased the latency to generalized seizures and decreased the mean amplitude of EEG recordings during seizures. LTD4 (0.2 and 2 pmol) reverted the anticonvulsant effect of montelukast (0.3 μmol). Montelukast (0.03 and 0.3 μmol) prevented PTZ-induced BBB disruption, an effect that was reversed by LTD4 (6 pmol). In addition, doses of LTD4 (0.2 and 2 pmol) which reversed the effect of montelukast in crisis did not alter the protective effect of montelukast on the barrier, dissociating the anticonvulsant of protective effect on BBB. The confocal microscopy analysis revealed that 1. PTZ increased the number of CD45+ and IgG cells in cerebral cortex, indicating BBB leakage with leukocyte infiltration; 2. while LTD4 (6 pmol) potentiated, montelukast decreased the effect of PTZ on leukocyte migration. Considering that increase levels of leukotrienes and decrease in Na+,K+-ATPase are common findings in several excitotoxic conditions, including epileptic seizures, we also investigated the effects of LTD4 on the activity of Na+,K+-ATPase activity in mice hippocampal slices. LTD4 10 and 100 nM decreases Na+,K+-ATPase activity alpha 2, 3 and alpha 1 subunits, respectively, in mice hippocampal slices. The inhibitory effect of LTD4 on Na+,K+-ATPase activity was not observed in hippocampal homogenates, indicating that it requires intact cells. Moreover, we showed that LTD4-induced decrease Na+,K+-ATPase activity was reversed by CysLT1R inverse agonis, montelukast (1 μM). In addition, we also showed that possibly the PKC activation pathway is involved in LTD4-induced decrease of Na+,K+-ATPase activity in mice hippocampal slices, since PKC inhibitor, GF 109203X (0,3 μM), prevent this effect. Finally, but not least important, we have demonstrated that animals injected with LTD4 (2 pmol/3 μL icv), there also occurs a decrease in Na+,K+-ATPase activity, corroborating our in vitro findings and confirming the biological importance of this work. In summary, we showed that CysLT1 receptor activation modulates hippocampal Na+,K+-ATPase activity in mice, suggesting a possible mechanism for the involvement of leukotrienes in several dosorders related with brain inflammation and hyperexcitability. / Evidências crescentes têm mostrado que os leucotrienos são importantes contribuintes na patofisiologia de diversas doenças inflamatórias do sistema nervoso central nas quais a excitotoxicidade esteja envolvida, incluindo trauma crânio-encefálico, encefalite, doença de Parkinson, isquemia, dor neuropática e epilepsia. Entretanto pouco se sabe sobre o mecanismo molecular pelo qual os leucotrienos facilitam a atividade excitatória no encéfalo. Assim, neste trabalho investigamos o efeito de antagonistas para receptores de leucotrienos cisteínicos (CysLT) sobre as convulsões induzidas por PTZ em camundongos. Bay-u9973 (3 and 30 nmol), montelucaste (0.03 and 0.3 μmol) e pranlucaste (1 and 3 μmol), aumentaram a latência para as crises e diminuíram a amplitude média do EEG durante as crises. Montelucaste (0.03 and 0.3 μmol) preveniu a ruptura da BHE induzida pelo PTZ, e o efeito foi revertido pelo LTD4 (6 pmol). Além disso, as doses de LTD4 (0.2 and 2 pmol) que reverteram o efeito do montelucaste nas crises não alteraram o efeito protetor do montelucaste sobre a barreira, dissociando o efeito anticonvulsivante do efeito protetor sobre a BHE. As análises de microscopia confocal revelaram: 1) PTZ aumentou o número de células CD45+ e IgG no córtex, evidenciando a ruptura da BHE; 2) enquanto o LTD4 (6 pmol) potencializou, o montelucaste diminuiu o efeito do PTZ sobre a migração leucocitária. Considerando que níveis aumentados de leucotrienos e diminuição na atividade da Na+,K+-ATPase são achados comuns em diversas condições excitotóxicas, incluindo crises epilépticas, também investigamos o efeito do LTD4 sobre a atividade da Na+,K+- ATPase em fatias de hipocampo de camundongos. LTD4 nas doses de 10 e 100 nM, diminuiu a atividade das subunidades alfa 2/3 e alfa 1, respectivamente. O efeito inibitório do LTD4 na atividade da Na+,K+-ATPase não foi reproduzido quando realizado com homogeneizado de hipocampo, indicando que esse efeito requer a célula intacta. A fim de nos certificarmos de que o LTD4 (10 nM) estava se ligando ao receptor CysLT1, incubamos as fatias com anticorpo anti- CysLT1, e verificamos que, na presença do anticorpo, o LTD4 perde o efeito. Além disso, observamos que a diminuição na atividade da Na+,K+-ATPase induzida pelo LTD4 foi revertida pelo montelucaste (1 μM), agonista inverso dos receptores CysLT1. Neste trabalho mostramos ainda que a ativação da PKC possivelmente esteja envolvida no efeito do LTD4 sobre a atividade da Na+,K+-ATPase em fatias de hipocampo de camundongos, uma vez que o GF 109203X (0,3 μM), inibidor da PKC, preveniu esse efeito. Por fim, mas não menos importante, também demonstramos que em animais injetados i.c.v. com LTD4 (2 pmol/3 μL, i.c.v.), também ocorre uma diminuição na atividade da Na+,K+-ATPase, corroborando com nossos achados in vitro e confirmando a importância biológica deste trabalho. Assim, este trabalho mostrou evidências do envolvimento dos receptores CysLT1 nas crises induzidas por PTZ bem como na permeabilidade da BHE, sendo a modulação da enzima Na+,K+-ATPase um possível mecanismo para a implicação dos leucotrienos em diversas doenças do SNC relacionadas com inflamação e hiperexcitabilidade.

Sida rhombifolia L belongs to the family Malvaceae, it is native to the American continent and can be found in all regions of Brazil. It is popularly known as prickly sida , and used in traditional medicine as anti-inflammatory, antidiabetic and lipid lowering. The aim of this study was to determine and evaluate the physical and chemical parameters of quality in the four seasons and the aerial parts and roots of the plant drug; determining the content of total polyphenols, flavonoids and tannins in the extracts of the aerial parts and roots of S. rhombifolia in four seasons; evaluating the antimicrobial and antioxidant activity in these same extracts; investigating the hypoglycemic and lipid lowering activity of extracts that have a higher content of flavonoids, as well as to analyze biochemical parameters of liver, kidney and pancreatic toxicity and cytotoxicity in cells NCTC clone 929 by incorporation of neutral red dye. The drug was collected at the four seasons in Santa Maria, RS, separated into aerial parts and roots and made hydroethanolic extracts 70% from each of these collections. The physico-chemical parameters varied according to the plant part analyzed and the season. The values found for strange matter, determination of water and ash insoluble in hydrochloric acid are consistent with those established for herbs. The winter collection showed higher content of total ash, both to shoots (21.20%) and roots (17.63%). The swelling rates varied significantly among the aerial parts and roots, and the highest rates obtained for each of the samples were collected in summer (35.47%) and autumn (18.40%), respectively. There were significant differences between the content of total polyphenols and flavonoids throughout the year and these have focused differently from the aerial parts and roots. The content of tannins and did not suffer seasonal variation nor the distribution between the parties analyzed the plant. The extracts of the aerial parts (172.50 g / mL) and roots (374.08 g / mL) of winter presented the best antioxidant activity. Extracts of S. rhombifolia showed good antibacterial activity while showed no activity against fungi. The extracts of the aerial parts and roots of the summer of the winter showed no hypoglycemic and lipid lowering activity in healthy animals, the markers of liver, kidney and pancreatic damage did not vary in relation to the control group, and the IC50 obtained at the cytotoxicity assays were 8.88 mg/mL e 12.57 mg/mL, respectively. / Sida rhombifolia L. pertence à família Malvaceae, é nativa do continente americano e pode ser encontrada em todas as regiões do Brasil. É conhecida popularmente por guanxuma, e utilizada na medicina tradicional como antiinflamatória, hipoglicemiante e hipolipidemiante. O objetivo deste trabalho foi determinar e avaliar os parâmetros físico-químicos de qualidade nas quatro estações do ano e nas partes aéreas e raízes da droga vegetal; realizar o doseamento de polifenóis totais, flavonoides e taninos condensados nos extratos das partes aéreas e raízes de S. rhombifolia nas quatro estações; avaliar a atividade antioxidante e antimicrobiana nestes mesmos extratos; investigar a atividade hipoglicemiante e hipolipidemiante dos extratos que apresentarem maior conteúdo de flavonoides, assim como analisar parâmetros bioquímicos de toxicidade hepática, renal e pancreática e citotoxicidade em células NCTC clone 929 por incorporação do corante vermelho neutro. A droga vegetal foi coletada nas quatro estações do ano no município de Santa Maria, RS, separada em partes aéreas e raízes e feitos extratos hidroetanólicos 70% de cada uma destas coletas. Os parâmetros físico-químicos variaram de acordo com a parte da planta analisada e a estação. Os valores encontrados para matéria estranha, determinação de água e cinzas insolúveis em ácido clorídrico estão de acordo com os estabelecidos para drogas vegetais. A coleta de inverno apresentou maior conteúdo de cinzas totais, tanto para as partes aéreas (21,20%) quanto para as raízes (17,63%). Os índices de intumescência variaram significativamente entre as partes aéreas e raízes, e os maiores índices obtidos para cada uma das coletas foram nas amostras do verão (35,47%) e outono (18,40%), respectivamente. Houve diferença significativa entre os conteúdos de polifenóis totais e flavonoides ao longo do ano e estes concentraram se diferentemente entre as partes aéreas e raízes. O conteúdo de taninos não sofreu variação entre as partes analisadas da planta e de sazonalidade. Os extratos das partes aéreas (172,50 μg/mL) e das raízes (374,08 μg/mL) do inverno foram os que apresentaram melhor atividade antioxidante. Os extratos de S. rhombifolia apresentaram boa atividade antibacteriana e não apresentaram atividade contra fungos. Os extratos das partes aéreas do verão e das raízes do inverno não demonstraram atividade hipoglicemiante e hipolipidemiante em animais sadios. Os marcadores de danos hepáticos, renais e pancreáticos não variaram em relação ao grupo controle, e as IC50 obtidas nos testes de citotoxicidade das partes aéreas e raízes foram 8,88 mg/mL e 12,57 mg/mL, respectivamente.

Desonide is a corticoid used topically in the treatment of dermatological diseases of inflammatory or allergic origin. In Brazil, is available as cream (0.05%), creamy lotion (0.05%), gel cream (0.05%), ointment (0.05%) and hair lotion (0.1%). Recent studies demonstrated the photoinstability of some marketed formulations of desonide (hair lotion, creamy lotion and gel cream), upon direct exposure to UVA radiation. Thus, the aim of this work was to develop desonide hair solution and desonide gel cream, seeking to obtain products with higher photostability than the marketed products. Capillary solutions with similar composition to the one commercially available were prepared and they were added of excipients such as antioxidants and ultraviolet filter benzophenone-3 (BZ-3). The antioxidants used were not able to avoid desonide fotodegradation upon UVA light exposure (15h), being the residual content of desonide between 43.2 and 61.8%. The antioxidants used were not able to avoid the desonide fotodegradation when the formulations were exposed to UVA for 15 hours (residual levels between 43.2% and 61.8%). BZ-3 at 0.3% prevented desonide photolysis, since after 15 hours of exposure to direct UVA radiation, the residual content of desonide was 98.61%. The photostability of the hair solution with BZ-3 was also evaluated against UVC radiation, and their results compared to the formulation without this adjuvant. It was observed that desonide in hair solution with BZ-3 degraded slowly (t 90 1.41 h) than the formulation without BZ-3 (t90 0.64 h). The BZ-3 was also used as adjuvant in the gel cream developed, but at the concentration of 0.1%. This formulation was characterized with respect to its rheological properties, spreadability, pH, in vitro release profile and content, presenting satisfactory physicochemical characteristics and being suitable for topical application. The photostability study conducted by direct exposure to UVA radiation demonstrated the stability of the desonide gel cream, which was indicated by the residual content around 95% after 48 hours of evaluation. The stability study performed at 20°C and 40°C showed that the capillary solution formulation was stable under both conditions for 70 days. Under the same conditions, the gel cream proved to be stable at a temperature of 20°C for 60 days. / A desonida é um corticosteroide de uso tópico, utilizada no tratamento de doenças dermatológicas de origem alérgica ou inflamatória. No Brasil, encontra-se disponível sob as formas de creme (0,05%), loção cremosa (0,05%), loção capilar (0,1%), pomada (0,05%) e gel creme (0,05%). Estudos de estabilidade recentes demonstraram a fotoinstabilidade da desonida nas formulações de loção capilar, loção cremosa e gel creme comercializadas após exposição direta à radiação UVA. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi desenvolver solução capilar e gel creme de desonida, buscando obter produtos com maior fotoestabilidade do que os produtos comercializados. Prepararam-se soluções capilares com composição semelhante à disponível no comércio nacional, porém contendo excipientes como antioxidantes e o filtro ultravioleta benzofenona-3 (BZ-3). Os antioxidantes usados não evitaram a fotodegradação da desonida quando as formulações foram expostas à radiação UVA durante 15 horas (teores residuais entre 43,2% e 61,8%). O uso da BZ-3 na concentração de 0,3% preveniu a fotólise da desonida, visto que após 15 horas de exposição direta à radiação UVA, o teor residual de desonida foi 98,61%. A fotoestabilidade da solução capilar com BZ-3 também foi avaliada frente à radiação UVC, e seus resultados comparados à formulação sem o adjuvante. Observou-se que na formulação com BZ-3 a desonida degradou mais lentamente (t90 1,41h) do que na formulação sem BZ-3 (t90 0,64 h). O gel creme desenvolvido também contém a BZ-3 em sua composição, porém na concentração de 0,1%. Essa formulação foi caracterizada quanto às suas propriedades reológicas, espalhabilidade, pH, perfil de liberação in vitro e teor, apresentando características físico-químicas satisfatórias e adequadas à aplicação tópica. O estudo de fotoestabilidade, realizado através da exposição direta da formulação à radiação UVA demonstrou a estabilidade da desonida na formulação, sendo obtido teor residual em torno de 95% após 48 horas de avaliação. O estudo de estabilidade realizado a 20ºC e a 40ºC demonstrou que a formulação de solução capilar manteve-se estável em ambas as condições durante 70 dias. Nas mesmas condições, o gel creme demonstrou ser estável em temperatura de 20ºC durante 60 dias.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Polymeric nanocapsules have been studied extensively for drug delivery by various routes of administration. Currently, the nanoencapsulation of drugs is considered the most efficient means of ensuring controlled release, specific targeting and reduction of adverse effects. In this context, the aim of this work was to develop polymeric nanocapsules for pulmonary delivery of beclomethasone dipropionate (BD). Nanocapsules have been prepared from 2 polymers, poly(-caprolactone) (PCL) and ethyl cellulose (EC). To quantify the drug in the nanostructures, the analytical method was developed and validated. This method showed to be specific, linear, precise, accurate and robust. Nanocapsules were prepared by interfacial deposition of preformed polymers and were evaluated as to pH, particle diameter, polydispersity index, drug content, encapsulation efficiency and zeta potential. All samples showed encapsulation efficiency greater than 98%, negative zeta potential, pH value in the range of neutrality and drug contents close to their theoretical values. The size distribution was nanometric (158-270 nm) with polydispersity index lower than 0.2. The results of the photodegradation study showed that polymeric nanocapsules were able to protect BD from UVC radiation when compared to the free drug solution. In vitro release experiments were performed using the dialysis bag technique, which showed, for all formulations, a prolonged drug release mediated by anomalous transport and first order kinetics. Free drug in solution took between 24 and 36 h to reach 100% of release, whereas nanocapsules were able to control the drug release for up to 108 h, depending on the polymer employed. Nanocapsules of EC and PCL were evaluated for in vitro and in vivo toxicity and the results suggest that the proposed formulations are safe. In the final stage of the work, pullulan was proposed as stabilizer agent for PCL nanocapsules and the results obtained for the zeta potential and the drug content suggested that these formulations have become more stable. Thus, the nanocapsules developed in this work represent a promising alternative for the pulmonary delivery of BD in the treatment of asthma and other respiratory disorders. / Nanocápsulas poliméricas vem sendo estudadas extensivamente para liberação de fármacos por diversas vias de administração. Atualmente a nanoencapsulação de fármacos é considerada o meio mais eficiente de assegurar liberação controlada, direcionamento específico e redução dos efeitos adversos. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver nanocápsulas poliméricas para a liberação pulmonar do dipropionato de beclometasona (DB). Nanocápsulas foram preparadas a partir de 2 polímeros, a poli(-caprolactona) (PCL) e a etilcelulose (EC). Para a quantificação do fármaco nas nanoestruturas, o método analítico foi desenvolvido e validado. Este mostrou ser específico, linear, preciso, exato e robusto. As nanocápsulas foram preparadas por deposição interfacial do polímero pré-formado e avaliadas quanto ao pH, diâmetro de partícula, índice de polidispersão, teor, eficiência de encapsulamento e potencial zeta. Todas as amostras apresentaram eficiência de encapsulamento maior que 98%, valor de potencial zeta negativo, valor de pH na faixa da neutralidade e teores próximos aos teóricos. A distribuição de tamanho foi nanométrica (158-270 nm) com índice de polidispersão menor que 0,2. Os resultados do estudo de fotodegradação mostraram que as nanocápsulas poliméricas foram capazes de proteger o DB da radiação UVC quando comparadas com uma solução do fármaco. Os experimentos de liberação in vitro foram realizados empregando a técnica de sacos de diálise, a qual mostrou, para todas as formulações, uma liberação prolongada do DB, mediada por transporte anômalo e cinética de primeira ordem. A solução etanólica de DB levou entre 24 e 36 h para alcançar 100% de liberação, enquanto que as nanocápsulas foram capazes de controlar a liberação do fármaco por até 108 h, dependendo do polímero empregado. Nanocápsulas de EC e PCL foram avaliadas quanto à toxicidade in vitro e in vivo e os resultados obtidos sugerem que as formulações propostas são seguras. Na etapa final do trabalho, o pullulan foi proposto como agente estabilizador de nanocápsulas de PCL e os resultados obtidos para o potencial zeta e o teor de fármaco sugerem que estas formulações tornaram-se mais estáveis. Desta forma, as nanocápsulas desenvolvidas neste trabalho representam uma alternativa promissora para a liberação pulmonar do DB no tratamento da asma e de outras desordens do trato respiratório.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diabetes mellitus is a metabolic disease characterized by hyperglycemia due defective or deficient response to insulin secretion. Type 2 diabetes mellitus (Type 2 DM) is therefore associated with a general activation of the innate immune system, in which there is a chronic, cytokine-mediated state of low-grade inflammation. Dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) is a cell-surface protease that bind with Adenosine deaminase (ADA) and both enzymes act in the lymphocytes proliferation and citokyne production. Vitis vinifera is a plant that has been studied due its pharmacology effects including the hypoglycemic properties. Thus, the aim of this study is to evaluate some inflammatory biomarkers, the ADA and DPP-IV activities in type 2 DM and investigate the effects of aqueous grape seed extract from Vitis vinifera (cv. Merlot) (GSE) in the ADA and DPP-IV activities in lymphocytes submitted to different glucose concentrations, in vitro. In the manuscript I, in lymphocytes, we observed a decrease in CD26 expression, an increase in ADA and n-acetil-β-d-glucosaminidase (NAG) activities in type 2 DM patients when compared to controls, while the gamma-glutamyl tranferase (GGT) and DPP-IV activities did not show differences between the groups. Moreover, the NAG activity demonstrated a positive correlation with ADA activity and a negative, with CD26 expression. GGT activity was positively correlated with waist circumference and body mass index (BMI), in type 2 DM. In the manuscript II, we observed we observed an increase in ADA activity when lymphocytes were exposure to the high concentration (100mM) of glucose and GSE prevented this increase in ADA activity. In serum, in the manuscript I, we showed an increase in ADA activity and in C reactive protein (CRP) levels in type 2 DM. Furthermore, the levels of CRP in diabetics were positively correlated with waist circumference and BMI. The GGT and DPP-IV activities did not show alterations between the groups, but in type 2 DM the DPP-IV activity was positively correlated with glicated hemoglobin. We concluded that, glucose might stimulated the ADA activity in the same time that it cause decrease in CD26 expression, in lymphocytes. Moreover, GSE prevents the ADA activation in presence of glucose possible due its hypoglycemic properties. / O diabetes melito (DM) é uma desordem metabólica caracterizada por hiperglicemia em virtude de resposta defeituosa ou deficiente à secreção de insulina. O DM tipo 2 (DM 2) está associado com a ativação do sistema imune, no qual há uma inflamação de baixo grau mediada por citocinas. A dipeptidil peptidase IV (DPP-IV, CD26) é uma protease multifuncional e na superfície celular ela encontra-se ligada a adenosina deaminase (ADA). Ambas estão envolvidas na proliferação de linfócitos e na produção de citocinas inflamatórias. A Vitis vinifera é uma planta que tem sido estudada devido suas propriedades farmacológicas, dentre essas, por apresentar efeitos hipoglicêmiantes. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar biomarcadores inflamatórios, a atividade da ADA e da DPP-IV em pacientes com DM 2, e verificar o efeito do extrato aquoso de sementes de Vitis vinifera (cv. Merlot) sobre a atividade da ADA e da DPP-IV em linfócitos expostos a diferentes concentrações de glicose, in vitro. Em linfócitos, no manuscrito I observamos uma diminuição na expressão do CD26, um aumento na atividade da ADA e da n-acetil-β-d-glicosaminidase (NAG) em pacientes com DM 2 em relação aos controles, enquanto que a atividade da gamaglutamil transferase (GGT) e da DPP-IV não se alterou. Também, a atividade da NAG linfocitária em pacientes com DM 2 mostrou-se positivamente relacionada com a atividade da ADA e negativamente com a expressão do CD26 e a atividade da GGT mostrou-se positivamente relacionada à circunferência abdominal e ao IMC. Já no manuscrito II, observamos um aumento na atividade da ADA quando os linfócitos forma expostos a 100mM de glicose e este aumento foi atenuado quando, expostos a glicose e extrato aquoso de sementes de Vitis vinifera. Em soro, no manuscrito I, observamos um aumento na atividade da ADA e também nos níveis de proteína C reativa (PCR) em pacientes com DM 2. Além disso, os níveis de PCR em diabéticos mostraram-se positivamente correlacionados com a circunferência abdominal e o índice de massa corporal (IMC) desses pacientes. A atividade da GGT e da DPP-IV não mostraram diferenças entre os grupos. No entanto, a atividade da DPP-IV sérica mostrou-se correlacionada com os níveis de hemoglobina glicada nos pacientes com DM 2. Conclui-se que, a glicose possa estimular a atividade da ADA ao mesmo tempo em que provoca uma redução da expressão do CD26 em linfócitos. Além disso, o extrato aquoso de sementes de Vitis vinifera é capaz de impedir a ativação da atividade da ADA em presença de glicose possivelmente devido suas propriedades hipoglicemiantes.

The diclofenac potassium (DPt) is a derivate of phenylacetic acid, with proprietary anti-inflammatory, analgesic and antipyretic, thus indicated for the relief of low back pain, rheumatoid arthritis and postoperative pain. The DPt is in the market for oral suspension dosage forms, dragee, suppository, injectable solution, dispersible tablet and tablet. However not been found in literature analytical method for determination of DPt in oral suspension. There are also no reports of methods for evaluating the in vitro dissolution of oral suspension containing the drug. Thus, in the present work were developed and validated methods by liquid chromatography high efficiency for the quantification and assessment of drug dissolution in oral suspension. Quantification of DPt was performed using column C8, mobile phase consisting of methanol and phosphate buffer pH 2.5 with a flow rate of 1.0 mL/min. The quantitative method was shown to be specific, even in the presence of possible degradation products, good linearity (r = 1.0), precise (RSD < 2.0%) and having adequate accuracy and robustness. The drug demonstrated to be stable under alkaline conditions and high temperature, but showed instability when exposed to conditions acid, oxidative and in the presence of ultraviolet radiation. To develop the method of dissolving the best conditions were 900 mL of aqueous solution containing 0.3% of sodium laurylsulfate, maintained at 37.0 ± 0.5 ºC, using paddle apparatus with rotation speed of 50 rpm. Thus, the release of DPt was greater than 85.0% at 30 minutes for both batches evaluated. The validated method proved to be specific, linear (r > 0.99), and showed precision and accuracy satisfactory. We also evaluated the stability of the drug in the dissolution medium selected, and the possible adsorption of the drug on the paper filter used. For both the test results were satisfactory. Thus, the methods developed and validated may be used as routine methods in quality control for the quantification and evaluation of the dissolution profile of DPt oral suspension. / O diclofenaco potássico (DPt), fármaco derivado do ácido fenilacético, apresenta propriedade anti-inflamatória, analgésica e antitérmica, sendo assim indicado para o alívio da dor na região lombar, artrite reumatoide e dor pós-operatória. O DPt encontra-se no mercado nas formas farmacêuticas de suspensão oral, drágea, supositório, solução injetável, comprimido dispersível e comprimido, no entanto não foram encontrados na literatura métodos analíticos para determinação de DPt em suspensão oral. Também não há relatos de métodos para avaliação da dissolução in vitro de suspensão oral contendo este fármaco. Desta forma, no presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos por cromatografia a líquido de alta eficiência para quantificação e avaliação da porcentagem dissolvida do fármaco. A determinação quantitativa foi realizada utilizando coluna C8, fase móvel composta de metanol e tampão fosfato pH 2,5 e fluxo de 1,0 mL/min. O método quantitativo apresentou ser especifico, mesmo na presença de possíveis produtos de degradação, boa linearidade (r = 1,0), preciso (DPR < 2,0%) ser exato e robusto. O fármaco demonstrou ser estável em condições alcalinas e a alta temperatura, porém demonstrou instabilidade quando exposto a condições ácidas, oxidativas e na presença da radiação ultravioleta. Para o desenvolvimento do método de dissolução utilizou-se como meio 900 mL de solução aquosa contendo 0,3% de laurilsulfato de sódio, mantida a 37,0 ± 0,5 ºC, utilizando aparato pá com velocidade de rotação de 50 rpm. Nestas condições, a liberação de DPt foi superior a 85,0% em 30 minutos para ambos os lotes avaliados. O método validado demonstrou ser específico, linear (r > 0,99), e apresentou precisão e exatidão satisfatórias. Também se avaliou a estabilidade do fármaco no meio de dissolução, assim como a possível adsorção do fármaco no papel de filtração utilizado. Para ambos os ensaios os resultados encontrados foram satisfatórios. Desta forma, os métodos desenvolvidos e validados podem ser utilizados como métodos de rotina no controle de qualidade para quantificação e avaliação do perfil de dissolução de DPt suspensão oral.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Rupatadine is a second generation antihistamine H1, from the pyperidinic group, which inhibits both the histamine and platelet activating factor effects, and is clinically used for the treatment of allergic rhinitis and chronic urticaria. The methods for the evaluation of rupatadine in pharmaceutical products were developed and validated in the present work. The reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) analysis was carried out using a Gemini C18 column (150 mm x 4.6 mm), maintained at 30 oC. The mobile phase consisted of ammonium acetate buffer 0.01 M, pH 3.0 with 0.05% of 1-heptanosulfonic acid/acetonitrile (71.5:28.5 v/v), run at a flow rate of 1.0 mL/min with detection at 242 nm. The chromatographic separation was obtained within 7 min and it was linear in the concentration range of 0.5-400 μg/mL (r2=0.9999). The capillary electrophoresis method was developed and validated, using the micellar electrokinetic chromatography (MEKC) as the separation mode, and nimesulide as internal standard (IS). The analysis were performed on a fused-silica capillary (50 μm id, effective length, 40 cm), maintained at 35ºC, using electrolyte solution consisted of 15 mM borate buffer and 25 mM anionic detergent SDS solution at pH 10, with detection by photodiode array detector set at 205 nm. The injection was performed using the hydrodynamic mode at 50 mbar for 5 s, and a constant voltage of 25 kV was applied during the analysis. The electrophoretic separation was obtained within 6 min and it was linear in the oncentration range of 0.5-150 μg/mL (r2=0.9996). The procedures were validated evaluating parameters such as the specificity, linearity, precision, accuracy, limits of detection and quantitation, robustness, and system suitability test, giving results within the acceptable range. The proposed methods were applied for the analysis of pharmaceutical products, showing significant correlation (P>0.05) of the results. Therefore, the procedures can be applied to improve the quality control of pharmaceutical products and to assure the safety and therapeutic efficacy of the drug. / A rupatadina é um anti-histamínico H1 de segunda geração pertencente ao grupo piperidínico, que inibe os efeitos da histamina e do fator ativador plaquetário, sendo utilizada clinicamente no tratamento de rinite alérgica e urticária crônica. No presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos para avaliação de rupatadina em produtos farmacêuticos. As análises por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) foram realizadas utilizando coluna Gemini C18 (150 mm x 4,6 mm), mantida a 30 oC. A fase móvel foi composta de tampão acetato de amônio 0,01 M, pH 3,0 com 0,05% de ácido 1-heptanosulfônico/acetonitrila (71,5:28,5, v/v), eluída na vazão de 1,0 mL/min com detecção no ultravioleta a 242 nm. A separação cromatográfica foi obtida no tempo de 7 min, sendo linear na faixa de concentração de 0,5-400 μg/mL (r2=0,9999). Paralelamente, desenvolveu-se e validou-se método por eletroforese capilar, utilizando modo de separação por cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) e nimesulida como padrão interno (PI). Executaram-se as análises em capilar de sílica fundida (50 μm id, comprimento efetivo de 40 cm), mantido a 35ºC, utilizando solução eletrolítica composta de tampão borato 15 mM e tensoativo aniônico SDS 25 mM, pH 10, com detecção no ultravioleta a 205 nm. A injeção foi realizada no modo hidrodinâmico a 50 mbar durante 5 s e voltagem constante de 25 kV foi aplicada durante as análises. A separação eletroforética foi obtida em 6 min, sendo linear na faixa de concentração de 0,5-150 μg/mL (r2=0,9996). Os procedimentos foram validados, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção e quantificação, robustez e teste de adequabilidade do sistema, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados. Os métodos propostos foram aplicados na análise de produtos farmacêuticos, demonstrando correlação significativa dos resultados (P>0,05). Desse modo, estabeleceram-se procedimentos que podem ser aplicados para aprimorar o controle da qualidade de medicamentos, bem como garantir a segurança e eficácia no uso terapêutico.

Etoricoxib is a non-steroidal anti-inflammatory drug, from the coxibs group, that represents a second-generation of COX-2 inhibitors, used for the treatment of arthritis and pain. The methodologies for the evaluation of etoricoxib in pharmaceutical products and plasma were developed and validated in the present work. The reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) analysis was carried out using a Synergi fusion C18 column (150 mm x 4.6 mm), maintained at a controlled-ambient temperature. The mobile phase consisted of phosphoric acid 0.01 M, pH 3.0/acetonitrile (62:38, V/V), run at a flow rate of 1.0 mL/min with detection at 234 nm. The chromatographic separation was obtained within 7.0 min and it was linear in the concentration range of 0.02-150 µg/mL. The liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was developed and validated using a Luna C18 column (50 mm x 3.0 mm), maintained at 40 ºC and the mobile phase consisted of acetonitrile:water (95:5, V/V)/ 0.1% acetic acid (90:10, V/V), run at flow rate of 0.4 mL/min. The mass spectrometer, equipped with electrospray positive source, was used in multiple reaction monitoring mode (MRM), monitoring the transitions of 359.3>280.0 and 332.0>95.0, for etoricoxib and piroxicam (internal standard), respectively. The chromatographic separation was obtained within 2.0 min and it was linear in the concentration range of 1-5000 ng/mL. The procedures were validated evaluating parameters such as the specificity, linearity, precision, accuracy, robustness, limit of detection and limit of quantitation. Besides, for the bioanalytical method, the matrix effects, recovery and stability studies were also analyzed, giving results within the acceptable range. The proposed methods were applied for the analysis of pharmaceutical products, showing significant correlation (r=0.9999) of the results. Moreover, the liquid-liquid and solid phase extraction methods developed and optimized allowed high mean recoveries of etoricoxib and internal standard from the plasma samples. The procedures can be applied for the biovailability studies and for the quality control of pharmaceutical products. / Etoricoxibe é um antiinflamatório não esteroidal, pertencente ao grupo dos coxibes, que representa a segunda geração dos inibidores seletivos da cicloxigenase-2. É indicado para o tratamento de artrites e dor aguda. No presente trabalho foram desenvolvidas e validadas metodologias para avaliação de etoricoxibe em produtos farmacêuticos e plasma humano. As análises por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) foram realizadas utilizando coluna Synergi fusion C18 (150 mm x 4,6 mm), mantida a temperatura ambiente. A fase móvel foi composta de ácido fosfórico 0,01 M, pH 3,0/acetonitrila (62:38, V/V) na vazão de 1,0 mL/min e detecção no ultravioleta a 234 nm. A separação cromatográfica foi obtida no tempo de 7 minutos, sendo linear na faixa de concentração de 0,02-150 µg/mL. Paralelamente, desenvolveu-se e validou-se método por cromatografia líquida combinada à espectrometria de massas (CL-EM/EM). Realizaram-se as análises utilizando Luna C18 (50 mm x 4,6 mm), mantida a 40 ºC e fase móvel composta de acetonitrila:água (95:5, V/V)/ 0,1% ácido acético (90:10, V/V), na vazão de 0,4 mL/min. O espectrômetro de massas, equipado com fonte de electrospray positivo, foi empregado no modo de monitoramento de reação múltipla (MRM), monitorando as transições de 359,3>280,0 e 332,0>95,0, para o etoricoxibe e piroxicam (padrão interno), respectivamente. A separação cromatográfica foi obtida em 2 minutos, sendo linear na faixa de concentração de 1-5000 ng/mL. Os procedimentos foram validados, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de detecção e quantificação, incluindo para o método bioanalítico os efeitos de matriz, a recuperação e estudos de estabilidade, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados. Os métodos propostos foram utilizados na análise de produtos farmacêuticos, demonstrando correlação significativa dos resultados (r=0,9999). Além disso, os métodos de extração líquido-líquido e em fase sólida desenvolvidos e otimizados propiciaram significativas percentagens de recuperação do etoricoxibe e do padrão interno nas amostras de plasma. Os procedimentos pesquisados podem ser aplicados para estudos de biodisponibilidade e para aprimorar o controle da qualidade de medicamentos.