A regeneração in vitro é bastante utilizada em processos biotecnológicos. No entanto, pouco se conhece sobre os mecanismos envolvidos na aquisição de competência para formação de novos órgãos. Em tomateiro (S. lycopersicum), a alta capacidade de regeneração in vitro é atribuída ao alelo Rg1, vinda de Solanum peruvianum, e que está presente na cv MsK (S. lycopersicum x S. peruvianum). Os genes de nanismo da cv Micro-Tom (MT) foram passados para MsK, obtendo-se, após 8 gerações de autofecundação (F8), a cv Micro-MsK. No presente estudo, após 6 gerações de retrocruzamentos (BC6Fn), criou-se MT-Rg1, com Rg1 isogênico a MT. Testes de regeneração in vitro mostraram que a formação de gemas caulinares adventícias para MT-Rg1 e Micro-MsK são equivalentes, evidenciando que a alta capacidade de regeneração de Micro-MsK é basicamente devido ao Rg1. Plantas MTRg1 apresentam freqüente formação de 3 cotilédones, excesso de ramificações caulinares e senescência atrasada, características ausentes nos parentais. Esses efeitos pleiotrópicos de Rg1 coincidem com aqueles descritos para alterações no hormônio citocinina. Testes de sensibilidade à citocinina e de tempo de senescência realizados por nós, bem como dosagem desse hormônio feita por outras equipes, descartaram essa hipótese. Enxertias recíprocas evidenciaram que a promoção da ramificação caulinar por Rg1 não é um sinal translocável, mas parece ser uma característica intrínseca do tecido. Rg1 também promoveu uma maior formação de raízes adventícias em estacas ex vitro, sugerindo que ele afeta o processo de competência para formação de órgãos em geral, e não somente a indução específica de gemas caulinares. Duplos mutantes entre Rg1 e mutantes com alteração na sensibilidade/metabolismo hormonal (dgt, brt e pro), ausência de ramificações caulinares (ls) e senescência acelerada (l) foram obtidos e testados quanto ao padrão de ramificações e à capacidade de regeneração in vitro. Além desses parâmetros, a presença de Rg1 suprimiu o fenótipo de folhas pouco recortadas do mutante hipersensível a giberelina (pro) e recuperou o sistema radicular pouco desenvolvido do mutante com baixa sensibilidade à auxina (dgt). Rg1 também foi capaz de reverter a ausência de ramificações laterais de ls, sendo que a mutação Me, o qual representa uma superexpressão de um gene do tipo KNOX, não foi capaz. Esse resultado sugere que Rg1 não é um gene do tipo KNOX, embora esses genes sejam considerados os principais controladores da competência. Analisando diferentes tipos de explantes em experimentos independentes, contatou-se que, em geral, as mutações brt (baixa sensibilidade a citocinina), dgt e ls diminuíram a capacidade de regeneração de Rg1, enquanto l aumentou. Rg1 mostrou-se particularmente epistático à mutação pro, revertendo o fenótipo de baixa formação de gemas caulinares desse mutante. Surpreendentemente, Rg1 provou ser mais sensível à auxina em testes de alongamento de segmentos de hipocótilos, sendo capaz de reverter o fenótipo do mutante dgt nesse mesmo teste. Em conjunto, esses resultados confirmam o papel de Rg1 na fase de aquisição da competência e sugerem uma interação dos hormônios giberelina e auxina nesse processo. / The In vitro regeneration process is widely used in plant biotechnology. However, the mechanisms involved in the acquisition of competence for organ formation are hitherto unknown. In tomato (S. lycopersicum), the high capacity for in vitro regeneration is attributed to the Rg1 allele from S. peruvianum, which is present in the cv MsK (S. lycopersicum x S. peruvianum). The dwarfism genes of the cv Micro-Tom (MT) were transferred to MsK, and, after 8 generations of selfing (F8), the cv Micro-Msk was obtained. Here, after 6 generations of backcrosses (BC6Fn), we created the MT-Rg1, which has Rg1 isogenic to MT. Tests of in vitro regeneration showed that shoot formation in MT-Rg1 and Micro-MsK are equivalent, suggesting that the high capacity of regeneration of Micro-MsK is basically due to Rg1. Comparing MT-Rg1 with the control MT, we noticed a high frequency of 3 cotyledon formation, increased shoot branching and late senescence, which are absent in the parentals. These pleiotropic effects of Rg1 coincide with those described for plants with alterations in the hormone cytokinin. Tests of sensitivity for cytokinin and senescence behavior carried out by us, as well as dosage of that hormone made by other researches, discarded that hypothesis. Reciprocal grafting showed that the promotion of shoot branching by Rg1 is not a transmissible signal, but seems to be an inherent characteristic of the tissue. Rg1 also increases adventitious roots formation of ex vitro cuttings, suggesting that it affects the process of competence, which is common for shoots and roots, instead of the specific induction of shoots. Double mutants between Rg1 and mutants with alteration in the sensitivity/metabolism of plant hormones (dgt, brt and pro), as well as mutants with absence of shoot branching (ls) and accelerated senescence (l) were obtained and tested for the capacity of in vitro regeneration. The presence of Rg1 suppressed the phenotype of less dissected leaves of the mutant hypersensitive to gibberrellin (pro) and rescued the phenotype of poor developed root system of the mutant with low auxin sensitivity (dgt). Rg1 was also able to revert the absence of axillary shoot formation in ls, whereas the mutant Me, which represents an over expression of a KNOX gene was not. This result suggests that Rg1 is not a KNOX gene, although those genes are considered the main controllers of the competence. Analyzing different types of explants in independent experiments, it was verified that, in general, the mutations brt (low sensibility to cytokinin), dgt and ls decreased the regeneration capacity of Rg1, while l increased it. Rg1 was particularly epistatic to the pro mutation, reverting the phenotype of little shoot formation of that mutant. Surprisingly, Rg1 proved to be more sensitive to auxin in the hypocotyl segment elongation test, being able to revert the phenotype of the mutant dgt in the same test. Together, these results confirm the role of the Rg1 in the process of acquisition of the competence and suggest an interaction of the hormones gibberellin and auxin in this process.

A cana-de-açúcar é uma das principais culturas agroindustriais do Brasil. Como outras culturas de importância econômica, é também afetada por diversos patógenos como fungos, bactérias, vírus e fitoplasmas que podem limitar sua produção. A bactéria fastidiosa Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx) é o agente causal do raquitismo-da-soqueira da cana-de-açúcar (RSD). Esta doença não apresenta sintomas externos característicos de fácil reconhecimento. Dessa forma, a incidência do RSD pode não ser perceptível durante inspeções visuais de campo e, assim, ser facilmente disseminado de uma região para outra. A bactéria restrita ao xilema é transmitida mecanicamente de plantas infectadas para plantas saudáveis por meio da seiva presente em ferramentas de corte e em outros equipamentos durante o plantio, o cultivo e a colheita da cultura. Em razão da importância da cana-de-açúcar e do dano causado por Lxx, este trabalho visou avaliar a termoterapia e o cultivo in vitro em dois experimentos direcionados à obtenção de plantas de cana-de-açúcar da variedade SP80-3280 livres de Leifsonia xyli subsp. xyli e, assim, fornecer subsídio para o aprimoramento das medidas atuais de controle. O primeiro experimento combinou a termoterapia de toletes de uma gema (52 °C por 30 minutos) com o cultivo de meristemas apicais de três tamanhos (0,5 mm, 1,0 mm e 1,5 mm); o segundo combinou três tempos de termoterapia (1 hora, 2 horas e 3 horas) a 50 °C em gemas laterais imaturas isoladas do tolete com o cultivo in vitro. No primeiro experimento, os resultados de RT-PCR das amostras coletadas aos 15 dias na casa de vegetação mostraram que os três tamanhos de meristemas produziram plantas com títulos bacterianos em média 25 vezes mais baixos que suas genitoras, mas não as isentaram completamente de Lxx, com exceção de 8 plantas que não apresentaram Lxx com 90 dias de cultivo (4 plantas provenientes do cultivo de meristemas de 0,5 mm, 1 planta de meristema de 1,0 mm e 3 plantas de meristemas de 1,5 mm). Além disso, os meristemas de 0,5 mm não necessariamente regeneraram plantas com títulos mais baixos da bactéria quando comparados com os meristemas de 1,0 mm e 1,5 mm, mostrando que estes tamanhos testados não apresentaram correlação direta com o nível de infecção da planta regenerada por eles. Em relação ao segundo experimento, os resultados de RT-PCR mostraram que o incremento no tempo de termoterapia proporcionou maior redução nos títulos bacterianos, sendo os tratamentos de 2 horas e 3 horas os mais bem sucedidos com média de redução de 80,08% e 81,73%, respectivamente, mas não foi capaz de eliminar a bactéria. Portanto, estes experimentos demonstram que a termoterapia associada ao cultivo de tecidos é uma metodologia promissora, pois apresentaram redução da presença da bactéria Lxx em plantas de cana-de-açúcar, mas por não terem sido totalmente efetivos na eliminação da mesma, reforça a necessidade de estudos complementares. / Sugarcane is one of the major agro-industrial crops of Brazil. Like other crops of economic importance, it\'s also affected by several pathogens such as fungus, bacteria, viruses and phytoplasmas that may limit its production. The fastidious bacterium Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx) is the causal agent of ratoon stunting disease in sugarcane (RSD). This disease shows no external symptoms characteristic of easy recognition. Thus, the incidence of RSD may not be noticeable during visual inspection in the field and be easily spread from one region to another. The xylem-limited bacterium is transmitted mechanically from infected plants to healthy plants by the sap present in cutting tools and others equipments for planting, growing and harvesting the crop. Due to the importance of sugarcane and the damage caused by Lxx, this work aimed to evaluate thermotherapy and in vitro culture in two experiments in order to obtain sugarcane plants of variety SP80-3280 free from Leifsonia xyli subsp. xyli and thus provide subsidy for the improvement of current control methods. The first experiment combined thermotherapy on the individual bud (52 °C for 30 minutes) and the cultivation of apical meristems of three sizes (0,5 mm, 1,0 mm and 1,5 mm); the second combined three period of thermotherapy (1 hour, 2 hours and 3 hours) at 50 °C in immature lateral buds totally isolated from the tissue source followed by in vitro culture. In the first experiment, the results of RT-PCR samples collected at 15 days in the greenhouse showed that the three sizes of meristems produced plants with bacterial titers on average 25 times lower than their mother plants, but not completely exempted them from Lxx, except 8 plants that showed no Lxx after 90 days of cultivation (4 plants were from cultivation of meristems with 0,5 mm, 1 plant from 1,0 mm meristem and 3 plants from 1,5 mm meristems size). Furthermore, the meristems of 0,5 mm does not necessarily regenerate plants with lower title of the bacteria compared with the meristems of 1.0 mm and 1.5 mm, showing that these sizes tested did not present direct correlation with the level of infection on the plants regenerated from them. Regarding the second experiment, RT-PCR results showed that the increase in time of thermotherapy provided greater reduction in bacterial titers, and the treatments of 2 and 3 hours were the most successful with average reduction of 80,08 % and 81,73%, respectively, but was not able to eliminate the bacteria. Therefore, these experiments showed that thermotherapy associated with tissue culture is a promising methodology because it reduced titer of Lxx in sugarcane, but were not fully effective in eliminating the same, reinforcing the need for complementary studies.

Submitted by Alexandre Soares (alexandredesoares@yahoo.com.br) on 2016-07-15T14:46:30Z No. of bitstreams: 1 karin_frichis_do_nascimento.pdf: 1481669 bytes, checksum: c542b6f2d89d5f67694bf36d33eecd30 (MD5) / Rejected by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br), reason: on 2016-07-15T20:04:35Z (GMT) / Submitted by Alexandre Soares (alexandredesoares@yahoo.com.br) on 2016-07-15T20:19:47Z No. of bitstreams: 1 karin_frichis_do_nascimento.pdf: 1481669 bytes, checksum: c542b6f2d89d5f67694bf36d33eecd30 (MD5) / Rejected by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br), reason: rever: Refer?ncia ABNT Tipo: opem Acess Nota de disserta??o/Tese: colocar ano Palavra Chave: cada uma em um campo, sem pontua??o Ag?ncia Financiadora: Sempre por extenso e com a abrevia??o entre par?nteses no final on 2016-07-18T14:41:49Z (GMT) / Submitted by Alexandre Soares (alexandredesoares@yahoo.com.br) on 2016-07-19T12:58:18Z No. of bitstreams: 1 karin_frichis_do_nascimento.pdf: 1481669 bytes, checksum: c542b6f2d89d5f67694bf36d33eecd30 (MD5) / Rejected by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br), reason: Rever: Refer?ncia ABNT Tipo Nota de disserta??o/Tese Resumos Palavra Chave Ag?ncia Financiadora Seguir modelo: http://acervo.ufvjm.edu.br/jspui/handle/1/360 on 2016-07-21T15:22:35Z (GMT) / Submitted by Alexandre Soares (alexandredesoares@yahoo.com.br) on 2016-08-25T11:45:56Z No. of bitstreams: 1 karin_frichis_do_nascimento.pdf: 1481669 bytes, checksum: c542b6f2d89d5f67694bf36d33eecd30 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-08-25T12:22:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 karin_frichis_do_nascimento.pdf: 1481669 bytes, checksum: c542b6f2d89d5f67694bf36d33eecd30 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-25T12:22:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 karin_frichis_do_nascimento.pdf: 1481669 bytes, checksum: c542b6f2d89d5f67694bf36d33eecd30 (MD5) Previous issue date: 2015 / O trabalho teve como objetivo desenvolver procedimentos de micropropaga??o para a esp?cie pau-terra-liso (Qualea multiflora Mart.) a partir de sementes germinadas in vitro e avaliar a emerg?ncia, o crescimento inicial e a sobreviv?ncia de mudas em fun??o de diferentes substratos e ambientes, em condi??es de viveiro. No primeiro cap?tulo, as sementes de Qualea multiflora foram submetidas ? desinfesta??o com hipoclorito de s?dio em diferentes concentra??es e tempos de imers?o para a sua introdu??o in vitro. Foi avaliado o percentual de germina??o e contamina??o. Utilizando o melhor tratamento do experimento de desinfesta??o, foi instalado outro experimento para comparar as composi??es distintas de meio de cultura MS (Murashige & Skoog, 1962) e WPM (Lloyd & McCown, 1981) na germina??o de pau-terra-liso. Avaliou-se o percentual de germina??o e de pl?ntulas normais. Na fase de multiplica??o foram utilizados dois tipos de explantes (segmento nodal e segmento cotiledonar) retirados das pl?ntulas germinadas in vitro que foram inoculados em meio de cultura WPM. Este foi suplementado com BAP em concentra??es diferenciadas e ANA. A fase foi constitu?da pelo cultivo inicial e dois subcultivos. Avaliaram-se os n?meros de brota??es por explantes e a altura da maior brota??o. Constatou-se que a concentra??o de 5% de hipoclorito de s?dio durante 20 minutos de imers?o proporcionou os melhores resultados de desinfesta??o e germina??o in vitro. Observou-se que o tipo de meio de cultura e a concentra??o influenciam na germina??o e na qualidade das pl?ntulas de Qualea multiflora, logo, recomenda-se o meio WPM com 100% de sais e vitaminas para essa esp?cie. Os melhores resultados de multiplica??o foram alcan?ados utilizando o explante cotiledonar e a concentra??o de 0,6 mg L-? de BAP. No cap?tulo 2, os experimentos foram instalados em ambiente de casa de sombra e de casa de vegeta??o utilizando quatro tipos de substratos, sendo: 1) 100% substrato comercial Bioplant?, 2) 70% de vermiculita de granulometria m?dia + 30% de fibra de coco, 3) 70% de vermiculita + 30% Bioplant?, e 4) 40% de vermiculita + 30% de fibra de coco + 30% de Bioplant?. Realizaram-se avalia??es aos 60, 90, 120 e 150 dias para verificar a emerg?ncia, o crescimento em altura e di?metro e a sobreviv?ncia das mudas. No final do experimento, foram obtidos o peso da mat?ria seca da xii parte a?rea, o peso de mat?ria seca de ra?zes, o peso de mat?ria seca total e a rela??o peso de mat?ria seca da parte a?rea e peso de mat?ria seca das ra?zes. Em casa de vegeta??o a emerg?ncia de Qualea multiflora obteve os maiores percentuais com o uso do substrato VB (70% de vermiculita + 30% de Bioplant ?). N?o ocorreu diferen?a no crescimento em altura entre as mudas que estavam em casa de vegeta??o e em casa de sombra. Para o ambiente casa de sombra, n?o houve diferen?as significativas entre as caracter?sticas de mat?ria seca analisadas, em fun??o dos substratos. Com os dados de sobreviv?ncia nos dois ambientes, conclui-se que a Qualea multiflora ? de dif?cil propaga??o em condi??es de viveiro, sendo necess?rios mais estudos para a produ??o de mudas da esp?cie. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncia Florestal, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2015. / The study aimed to develop micropropagation procedures for the ?pau-terra-liso? species (Qualea multiflora Mart.) from seeds germinated in vitro and evaluate the emergency, the initial growth and survival of seedlings for different substrates and environments in arboretum conditions. In the first chapter, the Qualea multiflora seeds were subjected to disinfection with sodium hypochlorite in different concentrations and immersion times for its introduction in vitro. The percentage of germination and contamination was evaluated. Using the best treatment of disinfestation experiment, it was installed another experiment to compare the different compositions of MS (Murashige and Skoog, 1962) and WPM (Lloyd & McCown, 1981) on the ?pau-terra-liso? germination. It was evaluated the percentage of germination and normal seedlings. In the multiplication phase it was used two types of explants (nodal segments and cotyledon segment) taken from seedlings germinated in vitro which were inoculated in WPM culture. This one was supplemented with ?BAP? and ?ANA? in different concentrations. The stage was set for the initial culture and two subcultures. It was evaluated the shoot numbers per explant and the height of the larger shoot. It was found that the concentration of 5% sodium hypochlorite for 20 minutes immersion gave the best results of disinfestation and in vitro germination. It was observed that the type of culture environment and the concentration influence the germination and quality of seedlings of Qualea multiflora, so it is recommended a WPM environment with 100% salts and vitamins for this species. The best multiplication results were achieved using cotyledon explants and concentration of 0.6 mg L-? of BAP. In Chapter 2, the experiments were conducted in shade house and greenhouse environment using four types of substrates, as follows: 1) 100% commercial substrate Bioplant?, 2) 70% of average grain size of vermiculite + 30% coconut fiber, 3) 70% of vermiculite + 30% Bioplant?, and 4) 40% of vermiculite and 30% coconut fiber + 30% Bioplant?. Evaluations were performed at 60, 90, 120 and 150 days to verify the emergence, growth in height and diameter and survival of seedlings. At the end of the experiment, it was obtained the dry matter weight of the aerial part, the dry matter weight of the roots, the entire dry matter weight and the relation between the weight of dry matter of aerial part and weight xiv of dry matter of the roots. In a greenhouse, the emergency Qualea multiflora obtained the highest percentages with the use of VB substrate (70% vermiculite and 30% of Bioplant ?). There was no difference in height growth among the seedlings that were in the greenhouse and in the shade house. To the environment shade house, there were no significant differences among the characteristics of the analyzed dry matter, according to the substrates. With the survival data in both environments, it is concluded that the Qualea multiflora is difficult to spread in arboretum conditions; further research is needed for the production of seedlings of the species.

Submitted by Renorbio (renorbioba@ufba.br) on 2017-08-03T16:10:36Z No. of bitstreams: 1 Tese - Kicia Karine Pereira Gomes Copeland.pdf: 2608232 bytes, checksum: 98052da7375a345d81c9bb7394b11047 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-08-10T15:11:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Kicia Karine Pereira Gomes Copeland.pdf: 2608232 bytes, checksum: 98052da7375a345d81c9bb7394b11047 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-10T15:11:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Kicia Karine Pereira Gomes Copeland.pdf: 2608232 bytes, checksum: 98052da7375a345d81c9bb7394b11047 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Caatinga a alguns anos atrás era dita como um ecossistema pobre no que tange a espécies endêmicas, fato esse que, após diversos estudos, são contestados, mostrando que possui uma rica biodiversidade e altos índices de endemismos. Dentre essas muitas espécies endêmicas, temos a Poincianella pyramidalis (Tul.) L. P. Queiroz, sinônimo botânico Caesalpinia pyramidalis Tul., conhecida por diversos nomes populares como pau-de-rato, catinga de porco, catingueira, dentre outros. Apresenta diversos usos, dentre um dos mais importantes, o seu uso medicinal que, destaca-se pela produção de compostos bioativos como flavonoides, triterpenos, fenilpropanoides e biflavonóides; sendo este último grupo de bioativos, relativamente raro na família Leguminosae e, na subfamília Caesalpinaceae, onde foi isolado pela primeira vez. No perfil químico dessa espécie já foram identificadas a amentoflavona e agatisflavona pertencentes à classe dos biflavonóides. Fatores tais como, condições geográficas, sazonalidade, ambiente, entre outros, provocam oscilação na concentração de metabólitos secundários e, em árvores da Caatinga, em períodos de seca, a coleta do material vegetal é prejudicada, uma vez que não há frutos, folhas, flores, para extração de metabólitos secundários em qualquer época do ano. Assim, esses aspectos demonstram a necessidade urgente de implementação de programas voltados para a multiplicação, conservação, produção e potencialização dos bioativos de interesse de espécies vivendo nesses ambientes. Diante do exposto, esse trabalho teve como objetivos estabelecer a calogênese in vitro de P. pyramidalis visando construir um protocolo de produção da amentoflavona e agatisflavona, bem como, testar diferentes tipos de fontes de carbono, ausência/presença de luz, acessos e, diferentes concentrações de 2,4-D combinados ao meio de cultivo, no intuito de aumentar a produção de amentoflavona e agatisflavona a partir de cultura de calos de P. pyramidalis. Os estudos mostraram que o 2,4-diclorofenoxiacético induz calos em explantes nodal, foliar e internodal de P. pyramidalis e, que concentrações de 6,28 mg.L-1, 6,49 mg.L-1 e 4,91 mg.L-1 de 2,4-D nos segmentos nodal, internodal e foliar, respectivamente, favorecem a maior formação de calos aos 30 dias. Além disso, pode-se verificar que concentração de 10 mg.L-1 de 2,4-D proporciona ix maior oxidação nos calos aos 30 dias de cultivo, sendo que a maior formação de calos ocorre na concentração de 4,91 mg.L-1 de 2,4-D para o explante foliar aos 30 dias de cultivo in vitro. O acesso de Pernambuco, produz uma maior biomassa (0,1882 g) dos calos de Catingueira. No entanto, em ambos os acessos (BA e PE), a produção de amentoflavona é maior do que da agatisflavona em todos os tratamentos. Pode-se ainda verificar que a maior biomassa em calos de P. pyramidalis ocorre no tratamento com sacarose + 5 mg.L-1 de 2,4-D e, que o período de tempo de 60 dias é ideal para a produção da biomassa em calos de P. Pyramidalis; sendo que Sacarose + 5 mg.L-1 de 2,4-D favorece uma maior produção de amentoflavona (16,44 mg.L-1) e agatisflavona (0,58 mg.L-1). Enquanto que, o tratamento GT3 (Claro – Glicose 30 g.L-1 + 1 mg.L-1 de 2,4-D) é ótimo para a biossíntese de agatisflavona (5,87 mg.L-1) e amentoflavona (6,27 mg.L-1) aos 70 dias após inoculação. A biossíntese da amentoflavona é superior a agatisflavona em todos os tratamentos estudados. / A few years ago, the caatinga was said to be a poor ecosystem with respect to endemic species, a fact that, after several studies, are contested showing that boasts a rich biodiversity and high levels of endemism. Among these many endemic species, Poincianella pyramidalis (Tul.) L. P. Queiroz, botanical synonymous Caesalpinia pyramidalis Tul., known by several common names as pau-de-rato, catinga de porco, catingueira, among others. This specie has several uses, among the most important, its medicinal use that stands out for the production of bioactive compounds such as flavonoids, triterpenes, phenylpropanoids and bioflavonoids. The latter bioactive group is relatively rare in the Leguminosae family and the subfamily Caesalpinaceae, which was first isolated. In the chemical profile of this specie have been identified amentoflavone and agatisflavone, compounds belonging to the biflavonoid groups. Among other factors, geographical conditions, seasonality, environment cause during dry periods, fluctuation in the concentration of secondary metabolites in the Caatinga trees, and, the collection of plant material is impaired, since there is no fruit, leaves and flowers for extraction of secondary metabolites in any season. These aspects demonstrate the urgent need for implementation of programs for multiplication, conservation, production and enhancement of bioactive interest species living in these environments. Thus, this study aimed to establish the in vitro callus formation of P. pyramidalis in order to build a protocol of amentoflavone and agatisflavone, productions as well as to test different types of carbon sources, absence/presence of light, access and different 2,4-D concentrations to the culture medium combinations to increase the production of amentoflavone and agatisflavone from culture of callus of P. pyramidalis. The studies showed that 2,4-dichlorophenoxyacetic induces callus of P. pyramidalis nodal, leaf and internodal explants, and that 2,4-D concentrations of 6.28 mg.L-1, 6.49 mg.L-1 and 4.91 mg.L-1, in the nodal, internodal and leaf segments, respectively, favor higher callus formation at 30 days. Moreover, it can be seen that 2,4-D concentration of 10 mg.L-1 provides increased oxidation in callus after 30 days of cultivation, and the higher callus formation occurs at a 2,4-D concentration of 4.91 mg.L-1 to the leaf explant at 30 days of in xi vitro culture. The Pernambuco access produces a greater biomass (0.1882 g) of Catingueira calluses. However, in both access (BA and PE), the production of amentoflavone is greater than the agatisflavona in all treatments. It´s also observed that the higher biomass in P. pyramidalis callus occurs upon treatment with sucrose + 2,4-D 5 mg.L-1, and the 60 day time period is optimal for biomass production in P. Pyramidalis calluses; wherein Sucrose + 2,4-D 5 mg.L-1 favors an increased production of amentoflavone (16.44 mg.L-1) and agatisflavone (0.58 mg.L-1). While the GT3 treatment (Light - Glucose 30 mg.L-1 + 2,4-D 1 mg.L-1) is great for agatisflavona biosynthesis (5.87 mg.L-1) and amentoflavone (6,27 mg.L-1) at 70 days after inoculation. The biosynthesis of amentoflavone is greater than agatisflavone in all treatments.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Eucalyptus is a genus of great importance to the economy and production of various goods. Among the species of this genus, Eucalyptus dunnii Maiden stands out the importance, especially for the states of southern Brazil, to present a good growth and resistance to frost. However, this species presents problems for the production of seedlings by cloning, mainly due to the difficulty of rooting. The objective of this research was to assess methodologies for surface disinfection, establishment, multiplication, elongation and rooting in vitro of selected genotypes of Eucalyptus dunnii. The genetic material used in this study were collected in areas of the company Stora Enso, in the county of Alegrete - RS in commercial stands of Eucalyptus dunnii about three years old, originated from the planting of seeds. After 60 days, harvested, shoots were collected from 10 selected genotypes, which were isolated from cuttings. In the laboratory, stem segments were isolated at three positions on the cuttings: top, middle and base portion, which were evaluated in procedures for surface disinfection with sodium hypochlorite. We tested different immersion times in disinfest 1.5% and in another experiment, different concentrations of immersion for 10 minutes. Subsequently, we evaluated the performance of genotypes in in vitro establishing. During multiplication were evaluated concentrations of the growth regulators 6-benzylaminopurine (BAP). At the elongation step there were two experiments, one using gibberellic acid (GA3) in varying concentrations in the presence of alpha-Naphthalene acetic acid (NAA) and BAP, and another using only NAA and BAP. In the rooting phase two experiments were conducted, using an IBA in nutrient medium and another pulse treatment with IBA and vermiculite in a liquid medium, the rooted cuttings were acclimatized in plastic cups. As a result it was possible to establish satisfactory six genotypes, and the phenol oxidation and contamination of the main causes of non-establishment of some genotypes. In the multiplication, BAP in a concentration range between 0.25 and 0.75 mg L-1 (1.11 and 3.33 μM), positively influences the formation of buds, there is a behavior varied depending on genotype. At the elongation is also genotypic influence and the use of NAA at 0.5 mg L -1 (2.69 μM) plus BAP promotes the greatest elongation of shoots. The use of GA3 in the nutritive medium of elongation may be waived, because don t promote elongation of the shoots and cause the formation of callus. AIB added to the ½ MS nutritive medium has no effect on in vitro rooting of Eucalyptus dunnii. for the use of vermiculite associated with ½ WPM liquid nutritive medium after treatment pulse with solution of IBA promote root induction in some cuttings and may be considered in further studies. / Eucalyptus é um gênero de grande importância para a economia e produção de vários bens. Entre as espécies deste gênero, Eucalyptus dunnii Maiden destaca-se pela importância, principalmente para os estados da região sul do Brasil, por apresentar um bom crescimento e resistência as geadas. Entretanto, essa espécie apresenta problemas em relação à produção de mudas por clonagem, devido, principalmente, à dificuldade de enraizamento. O objetivo geral desta pesquisa foi avaliar metodologias para a desinfestação superficial, o estabelecimento, a multiplicação, o alongamento e o enraizamento in vitro de genótipos selecionados de Eucalyptus dunnii. O material genético utilizado no presente estudo foi coletado em áreas da empresa Stora Enso, localizadas no município de Alegrete - RS, em povoamentos comerciais de Eucalyptus dunnii de cerca de três anos de idade, originados do plantio de sementes. Decorridos 60 dias do abate das árvores, foram coletadas brotações de 10 genótipos selecionados, das quais foram isoladas estacas. No Laboratório, foram isolados segmentos caulinares em três posições nas estacas: ápice, porção intermediária e base, os quais foram avaliados em procedimentos de desinfestação superficial com hipoclorito de sódio. Foram testados diferentes tempos de imersão neste desinfestante a 1,5% e, em outro experimento, diferentes concentrações na imersão durante 10 minutos. Posteriormente, foi avaliado o desempenho dos genótipos no estabelecimento in vitro. Na etapa de multiplicação foram avaliadas concentrações do regulador de crescimento 6-Benzilaminopurina (BAP). Na etapa de alongamento realizaram-se dois experimentos, um utilizando ácido giberélico (GA3) em concentrações variáveis na presença de Ácido alfa-Naftaleno Acético (ANA) e BAP, e outro utilizando apenas ANA e BAP. Na fase de enraizamento foram realizados dois experimentos, um utilizando AIB no meio nutritivo e outro, com tratamento pulso de AIB e, após, plantio em copos plásticos contendo vermiculita e meio líquido, para aclimatização das estacas em sala de cultivo. Foi possível o estabelecimento in vitro satisfatório de seis genótipos, sendo a oxidação fenólica e a contaminação as principais causas do fracasso de alguns genótipos. Na multiplicação, BAP, na faixa de concentração entre 0,25 e 0,75 mg L-1 (1,11 e 3,33 μM), influencia positivamente a formação de gemas por explante, ocorrendo um comportamento variado no comprimento e número de gemas por explante conforme o genótipo. No alongamento há também influência genotípica e a utilização de ANA na concentração de 0,5 mg L -1 (2,69 μM) associada a BAP promove o maior alongamento das brotações. A utilização de GA3 no meio de alongamento pode ser dispensada, pois além de não promover o alongamento das brotações causa a formação de calos. AIB adicionado ao meio nutritivo ½ MS não tem efeito no enraizamento in vitro de microestacas de Eucalyptus dunnii. O emprego de vermiculita associado a meio nutritivo ½WPM líquido, após tratamento pulso com solução de AIB promove a indução de raiz em algumas estacas, podendo ser considerado em estudos adicionais.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SimoneCL_DISSERT.pdf: 2150980 bytes, checksum: 9a39148c92d0ec9032d34b53daffd92a (MD5) Previous issue date: 2009-09-28 / The brazilian-plum (Spondias tuberosa, His) is a tropical fruit tree that has been consolidated in the market for agribusiness processing, due to its characteristic flavor of fruit. Accordingly, studies to optimize the propagation of plants are necessary for production of seedlings with agronomic and quality assurance measures. This study aimed at determining the efficient techniques for uniform seed germination, as brazilian-plum seed present mechanical dormancy, and establish optimal culture media for multiplication of shoots from the in vitro micropropagation. Firstly, in a greenhouse at the Universidade Federal do Rio Grande do Norte, was evaluated the influence of different methods of breaking dormancy in the emergence of seedlings of brazilian-plum and speed of germination (IVG) of seeds. After 60 days of cultivation, it was found that splay in the distal portion of the seed was the best treatment, with rates of 85.33% in germinability and 3.415 of IVG, compared with the treatment of seed-soaking in water for 12h + humus and the control group. Subsequently, new sources of seedling explants were obtained in studies of tissue culture. Laboratory of Plant Biotechnology that the university, was used stem apex, nodal segments and internodes in search of decontamination with various concentrations of calcium hypochlorite [Ca(OCl)2] and micropropagation, inoculating them in half WPM (1980) with various concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP). We used 10 sample units with three replications for different concentrations of [Ca(OCl)2], BAP and explants type. After thirty days, which was observed for the control of contamination, during the establishment in vitro, concentrations of [Ca(OCl)2] between 0.5% and 2.0% were effective in combating exogenous contamination of the apex. In nodal segments and internodes, concentrations of [Ca(OCl)2] between 1.0% and 2.0% and 1.5% and 2.0% were respectively, sufficient to reduce the percentage of losses in these infestations explants. For micropropagation, the culture medium supplemented with 0.1 mg.L-1 BAP promotes better development of multiple shoots per explants from nodal segment. However, success does not get to shoot training in internodal segment / O umbuzeiro (Spondias tuberosa, Arr.) ? uma ?rvore frut?fera tropical que vem se consolidando no mercado das agroind?strias de processamento, devido ao seu fruto de sabor caracter?stico. Nesse sentido, estudos para otimizar a propaga??o de plantas s?o necess?rios para garantir a produ??o de mudas com qualidade agron?mica e garantias fitossanit?rias. Assim, este trabalho teve como finalidade determinar as t?cnicas eficientes para uniformizar a germina??o, j? que as sementes de umbuzeiro apresentam dorm?ncia mec?nica, e estabelecer meios de cultura ideais para a multiplica??o de brotos, bem como reduzir as contamina??es e oxida??es in vitro. Primeiramente, em casa de vegeta??o da Universidade Federal do Rio Grande do Norte, foi avaliado a influ?ncia de diferentes m?todos de quebra de dorm?ncia na emerg?ncia de pl?ntulas de umbuzeiro e na velocidade de germina??o (IVG) de sementes. Ap?s 60 dias de cultivo, verificou-se que o corte em bisel na por??o distal da semente foi o melhor tratamento, com ?ndices de 85,33% de germinabilidade e 3,415 de IVG, quando comparado com o tratamento de embebi??o em ?gua + h?mus por 12h e o grupo controle. Posteriormente, as novas pl?ntulas obtidas foram fontes de explantes em trabalhos de cultura de tecidos. No Laborat?rio de Biotecnologia Vegetal dessa mesma institui??o de ensino, se utilizou ?pices caulinares, segmentos nodais e internodais em pesquisas de descontamina??o, com variadas concentra??es de hipoclorito de c?lcio [Ca(OCl)2] e de micropropaga??o, inoculando-os em meio WPM (1980) com variadas concentra??es de 6-benzilaminopurina (BAP). Utilizou-se 10 unidades amostrais com tr?s repeti??es para as diferente concentra??es de [Ca(OCl)2], de BAP e tipo de explante. Ao fim de trinta dias, se observou que para o controle da contamina??o, durante o estabelecimento in vitro, as concentra??es de [Ca(OCl)2] entre 0,5% e 2,0% foram eficientes no combate das contamina??es ex?genas do ?pice caulinar. Nos segmentos nodais e internodais, as concentra??es de [Ca(OCl)2] entre 1,0% e 2,0% e 1,5% e 2,0% foram respectivamente, suficientes na diminui??o do percentual de perdas por infesta??es nestes explantes. Para a micropropaga??o, o meio de cultura suplementado com 0,1 mg.L-1 BAP favorece o melhor desenvolvimento de brotos m?ltiplos por explante a partir de segmento nodal. Entretanto, n?o se obt?m sucesso de forma??o de brotos em segmento internodal

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Cleome rosea é uma espécie nativa, de porte herbáceo, ocorrente em restingas brasileiras. Estudos recentes têm revelado o potencial medicinal da espécie para importantes propriedades farmacológicas, como por exemplo, as atividades anti-inflamatória, antigenotóxica, antiviral e antibacteriana. Porém, nos últimos anos, C. rosea não tem sido encontrada em várias regiões de seu ambiente natural, devido, principalmente, às ações antrópicas. Dessa forma, torna-se relevante o desenvolvimento de métodos de conservação que permitam o estudo e exploração das propriedades medicinais da espécie. O cultivo in vitro de raízes representa uma forma eficiente para produção de biomassa, devido ao rápido crescimento, produção estável de metabólitos, além de representar uma potencial fonte de explantes para a propagação em massa de diferentes espécies. O presente trabalho teve como objetivo a produção in vitro de culturas de raízes de C. rosea, associada à criopreservação, como forma de manutenção em longo prazo das culturas, monitorada através da análise de estabilidade genética. As culturas estabelecidas a partir de explantes radiculares de plantas propagadas in vitro de C. rosea demonstraram excelente capacidade de multiplicação de raízes em meio de cultura suplementado com o fitorregulador ANA, com manutenção dessa capacidade ao longo de sucessivas subculturas. Associado a esses resultados, o estabelecimento de protocolos de criopreservação pelo método de vitrificação resultou em elevados valores de frequência de recuperação do material após congelamento em nitrogênio líquido com as soluções de vitrificação PVS2 e PVS3. Os estudos de monitoramento da estabilidade genética, pela técnica de marcadores moleculares RAPD, revelaram a presença de polimorfismos significativos em uma das três culturas iniciadas a partir de raízes de C. rosea criopreservadas. Esses resultados demonstram as possibilidades de produção de raízes de C. rosea e conservação em longo prazo através da criopreservação, iniciando estudos inéditos para a espécie. / Cleome rosea is an herbaceous species found in the restinga vegetation of Brazil. Recent studies have reported its medicinal potential for important pharmacological properties, such as anti-inflammatory, antigenotoxic, antiviral and antibacterial activities. However, in recent years, no C. rosea plants have been found in their natural habitat, mainly due to human impact. Thus, it becomes applicable to the development of conservation methods that facilitate the study and exploration of the medicinal properties of C. rosea. The in vitro roots culture represents an efficient way to produce biomass, due to rapid growth, stable production of metabolites and represent a potential source of explants for mass propagation of different species. This study aimed to produce in vitro root cultures of C. rosea, associated with cryopreservation, as form of long-term maintenance of cultures, monitored by analysis of genetic stability. Cultures established from root explants of in vitro propagated plants of C. rosea showed excellent ability to multiplication of roots in culture medium supplemented with NAA plant regulator, maintaining this capacity during successive subcultures. Associated with these results, the establishment of protocols for cryopreservation by vitrification method resulted in high values of recovery frequency of the material after freezing in liquid nitrogen with vitrification solutions PVS2 and PVS3. Studies to monitoring the genetic stability by RAPD technique revealed the presence of significant polymorphisms in one of three cultures initiated from cryopreserved roots of C. rosea. These results demonstrate the potential production of roots of Cleome rosea and long-term conservation through cryopreservation, starting unpublished studies for the species.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A micropropagação de orquídeas é uma técnica utilizada com vários objetivos, podendo-se destacar a multiplicação rápida de plantas, propagação de novos híbridos, produção em larga escala e obtenção de matrizes livres de patógenos. A utilização de extratos naturais com ação antimicrobiana na micropropagação mostra-se como uma forma alternativa, ecológica e econômica de obtenção de plantas isentas de micro-organismos. Este trabalho teve como objetivo avaliar a utilização de extratos de Allium sativum (alho), de Syzygium aromaticum (cravo) e de própolis para evitar a contaminação com micro-organismos durante o processo de subcultivo in vitro de Epidendrum ibaguense Kunth e as possíveis interferências desses extratos no desenvolvimento vegetativo das plântulas. Foram isolados e identificados os micro-organismos Aspergillus sp., Candida sp., bactéria Gram-negativa, bactéria Gram-positiva e Penicillium sp. presentes em frascos com meio de cultura contaminados, oriundos do cultivo in vitro e do ambiente. Avaliou-se a ação antimicrobiana dos extratos sobre os micro-organismos isolados e observou-se que, o extrato de cravo inibiu o crescimento dos mesmos. Foram utilizados sete tratamentos compostos pelo meio Murashige; Skoog (1962) com metade da concentração de macronutrientes, acrescido de carvão vegetal e dos extratos de alho a 1,0 mgL-1 (T1), alho a 0,5 mgL-1 (T2), cravo a 1,0 mgL-1 (T3), cravo a 0,5 mgL-1 (T4), própolis a 1,0 mgL-1 (T5), própolis a 0,5 mgL-1 (T6) e o controle (T7) em um delineamento inteiramente casualizado, com cinco repetições e três plântulas por repetição. Após sessenta dias do subcultivo nos meios com os extratos avaliou-se a altura da parte aérea, o comprimento da maior raiz, o número de raízes, o número folhas, o comprimento da maior folha, o peso da massa fresca, o peso da massa seca e a taxa de multiplicação das plântulas. Houve influência dos extratos de alho, cravo e própolis no desenvolvimento in vitro de plântulas de E. ibaguense. O extrato de cravo apresentou ação antimicrobiana frente aos micro-organismos Aspergillus sp., Candida sp., Escherichia coli, Penicillium sp. e Streptococcus pneumoniae. Já os extratos de alho e própolis não demonstraram atividade antimicrobiana sobre nenhuma das cepas testadas. Através deste trabalho foi possível estabelecer um protocolo para o cultivo in vitro de E. ibaguense visando o controle da contaminação. / The micropropagation of orchids is a technique used for various purposes, may be noted the rapid multiplication of plants, propagation of new hybrid, large-scale production and obtaining free arrays of pathogens. The use of natural extracts with antimicrobial activity in micropropagation shows up as an alternative, environmentally friendly and economical way to obtain plants free of microorganisms. This study aimed to evaluate the use of extracts of Allium sativum (garlic), Syzygium aromaticum (clove) and propolis to prevent contamination with micro-organisms during the process of in vitro subculture of Epidendrum ibaguense Kunth and the possible interference of these extracts on vegetative growth of seedlings. The microorganisms Aspergillus sp. Candida sp. Gram-negative bacteria, Gram-positive and Penicillium sp. present in the contaminated bottles with culture, derived from in vitro culture and the environment, were isolated and identified. We evaluated the antimicrobial activity of the extracts on the isolated microorganisms and it was observed that the extract of clove inhibited their growth. Seven compound treatments were used by Murashige; Skoog (1962) with half the concentration of macronutrients, plus charcoal and garlic extracts to 1.0 mgL-1 (T1), garlic 0.5 mgL-1 (T2), cloves 1.0 mgL- 1 (T3), cloves 0.5 mgL-1 (T4), propolis to 1.0 mgL-1 (T5), propolis 0.5 mgL-1 (T6) and control (T7) on a randomized complete randomized with five replications and three seedlings per replication. Sixty days of subculture in the media with the extracts evaluated the shoot height, the length of roots, number of roots, leaves number, the length of the longest leaf, the weight of the fresh weight, the weight of the mass drought and the multiplication rate of the seedlings. There were significant effects of the extracts of garlic, clove and propolis in the development of in vitro plantlets of E. ibaguense. Clove extract showed antimicrobial activity against microorganisms Aspergillus sp., Candida sp., Escherichia coli, Penicillium sp. and Streptococcus pneumoniae and the extracts of garlic and propolis showed no antimicrobial activity against any of the tested strains. Through this work, it was possible to establish a protocol for the in vitro cultivation of E. ibaguense for the contamination control.

Atualmente a procura por produtos sustentáveis têm-se mostrado cada vez mais frequente e promissora. Em espécies de importância comercial, procura-se obter a maior produtividade possível dentro de um curto espaço de tempo aliado à preservação do meio ambiente. Dentro disso, a transformação genética de plantas se mostra uma alternativa atrativa para a geração de variedades de cana-de-açúcar que gerem produtos de maneira mais eficaz. O sucesso da transformação genética está diretamente associada a cultura de tecidos de plantas que precisa ser adequada a cada genótipo e situação de cultivo, sendo a luminosidade um dos principais fatores para a produção de plantas vigorosas. Outro fator importante é a seleção das plantas transgênicas, que precisam ser submetidas a uma quantidade de agente seletivo suficiente para identificar as plantas modificadas geneticamente. Em cana-de-açúcar, a identificação de plantas transgênicas por PCR e a definição do número de cópias é um procedimento de difícil execução e muito oneroso. Isto se dá pois no processo transformação via biolística, a inserção de genes é aleatória, produzindo plantas com variados números de cópias. Em consideração a estes fatores envolvidos na eficiência de obtenção de plantas transgênicas de cana-de-açúcar, os objetivos deste trabalho foram o aperfeiçoamento do protocolo de cultura de tecidos, transformação genética da variedade SP803280 com os genes xth, AtDdm1, como também, definir genes de referência para a quantificação do número de cópias dos genes xth e AtDdm1 inseridos na variedade SP803280 e do gene neo na RB835089, análise de ploidia e tamanho de genoma dos eventos transgênicos comparado com as plantas controle. No estudo a respeito da melhor qualidade de luz durante o cultivo in vitro na fase de regeneração de plantas, tem-se que a luz branca e a junção das luzes LED e branca se mostraram melhores para regeneração e desenvolvimento das plantas enquanto que para plântulas, as luzes LED e branca separadamente foram mais efetivas no crescimento. Para a seleção das plantas uma concentração de geneticina entre 40 e 50 mgL-1 é recomendada. As taxas de sucesso nas transformações genéticas para o gene xth variaram entre 2,5 a 18,3% dependendo do experimento e para AtDdm1 foi de 2,2% em um bombardeamento.Não houveram alterações de ploidia e tamanho do genoma nos transgênicos das duas variedades em relação à planta selvagem. Os genes p4h e prr foram identificados como os melhores para a quantificação relativa de genes inseridos por PCR em tempo real na variedade SP803280 enquanto que para a RB835089 aprt e prr se mostraram mais eficazes. A análise do número de cópias inseridas em eventos transgênicos por PCR em tempo real foi possível através das duas metodologias de cálculo testados por este trabalho, com resultados que concordam com uma tendência nesta determinação de maneira simples e rápida. / Currently the demand for sustainable products has been shown to be frequent and promising. In species of commercial importance, there is an effort to obtain the highest possible productivity in a short time, along with the environment preservation. In this context, genetic transformation of plants appears as an attractive alternative for the development of sugarcane varieties able to generate products in a more effective way. The genetic transformation success is directly associated to plant tissue culture that requires specific condition for each genotype and cultivation process, in which, luminosity is one of the main factors that determines the production of vigorous plants. Another important factor is the selection of transgenic plants, that occur by exposing plants to a sufficient amount of selective agent in order to identify only genetic modified plants. In sugarcane, identification of transgenic plants by PCR and the definition of copy numbers is a difficult procedure to implement and usually is very costly. It is because in the process of genetic transformation by biolistic, the insertion of genes occurs randomly and also produce plants with varied copy numbers. In consideration of these factors directly involved in the efficiency to obtain sugarcane transgenic plants the objectives of this study were the improvement of a tissue culture protocol, the genetic transformation of the variety SP803280 with xth and AtDdm1 genes. Also, the studies include the definition of reference genes for determining the number of copies inserted of xth and AtDdm1 genes into the variety SP803280 and neo gene in RB835089, ploidy analysis and genome size of the transgenic events compared to control plants. In the study related to the best light quality for in vitro plant regeneration, white light and the combination of LED and white lights proved to be better for plants regeneration and development while for seedlings, LED and white light separately were more effective for growth. In order to obtain selection of transgenic plants, geneticin concentration between 40 and 50 mg L-1 is recommended. Success rates in xth genetic transformation ranged from 2.5 to 18.3% depending on the experiment, and for AtDdm1 was only 2.2% in just one biolistic bombardment. There were no changes in ploidy and genome size in transgenic events related to their wild type plant. The genes p4h and prr were defined to be the best for determining the copy number of transgenic events by real time PCR in SP803280 variety, while for RB835089, the genes aprt and prr were the most effective. The analysis of the number of inserted copies was possible using the two calculation methodologies tested by this work, with results that agree with a tendency in a simple and fast quantification methodology.

A técnica de cultura de tecidos permite a propagação rápida e maciça de propágulos geneticamente semelhantes, isentos de doenças, sendo amplamente empregada para a obtenção de gemas adventícias e embriões somáticos visando principalmente, a multiplicação clonal sob ação de reguladores de crescimento. Resultados satisfatórios foram obtidos com a espécie Bactris gasipaes Kunth. por meio da regeneração direta de gemas adventícias e de embriões somáticos, no entanto, as consequências decorrentes da prolongada manutenção in vitro de espécies perenes como a pupunheira, não estão elucidadas, sendo que as pesquisas mais expressivas ocorrem com espécies anuais e restritas a órgãos específicos. Considerando que o tempo de cultivo pode promover a senescência e a habituação de determinados tecidos aos reguladores de crescimento, afetando consideravelmente o potencial morfogênico, o objetivo principal do presente trabalho foi investigar a ocorrência destes processos em folhas, raízes e bases caulinares de plântulas e microplantas com um e oito anos de cultivo, respectivamente. Para tanto, o processo de senescência foi monitorado por meio de análises histológicas, ultraestruturais e histoquímicas à detecção de substâncias ergásticas e à fragmentação do DNA, ao passo que o processo de habituação, foi monitorado por meio de análises morfofisiológicas, histológicas e histoquímicas. Os resultados pertinentes ao processo de senescência evidenciaram a ocorrência de intenso processo de morte celular programada nas células de diversos tecidos nas estruturas analisadas das microplantas, sendo que estes eventos foram escassos e limitados às bases caulinares nas plântulas. Além disso, foi observada a presença elevada de plastoglóbulos no interior dos cloroplastos e de compostos fenólicos nas estruturas foliares e radiculares das microplantas. Já, em relação aos resultados obtidos à detecção do processo de habituação nestas microplantas, quando comparados às plântulas, foram detectados problemas relacionados ao alongamento da parte aérea e do sistema radicular, bem como alterações morfológicas nas raízes e uma pronunciada redução no potencial morfogênico das células pré-procambiais em relação às plântulas. Estes resultados evidenciam que a manutenção in vitro de pupunheiras por longos períodos promoveu o envelhecimento dos propágulos em decorrência à senescência generalizada, bem como provavelmente os conduziu ao processo de habituação aos reguladores de crescimento ANA e/ou BAP, inviabilizando a propagação em grande escala desta espécie. / The tissue culture technique allows rapid and massive spread of propagules genetically similar, free from diseases, being the technique widely employed to obtain adventitious buds and somatic embryos mainly targeting the clonal multiplication under the action of growth regulators. Satisfactory results have been obtained with the specie Bactris gasipaes Kunth. through direct regeneration of adventitious buds and somatic embryos, however, the consequences from prolonged in vitro maintenance of perennial species such as peach palm are not clear, and the most significant research occur with annual species and restricted to specific organs. Whereas the cultivation time can promote senescence and habituation of certain tissues to the growth regulators, affecting considerably the morphogenic potential, the main objective of this study was to investigate the occurrence of these processes in leaves, roots and stem bases of seedlings and microplants with one and eight years of cultivation, respectively. Thus, the senescence process was monitored by histological, ultrastructural and histochemical detection of ergastic substances and DNA fragmentation, whereas the habituation process was monitored by analyses histologic, histochemic and morpho-physiological. The relevant results from the senescence process showed the occurrence of an intensive process of programmed cell death in cells of various tissues of the analised microplants structures, and these events were rare and limited to the stem bases in the seedlings. Furthermore, it was observed the high presence of plastoglobules inside chloroplast and phenolic compounds in the leaf and root structure of microplants. Already, the results obtained in relation to the detection of the habituation process in these microplants, when compared to the seedlings, were detected problems related to the elongation of shoots and roots, as well as morphological changes in roots and a pronounced reduction in the morphogenic potential of pre procambial cells compared to seedlings. These results demonstrate that the in vitro maintenance of peach palm for long periods promoted the aging of seedlings due to senescence widespread and probably led to the habituation process, to the growth regulators NAA and/or BAP, difficulting the propagation on a large scale of this species.