Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mate (Ilex paraguariensis) is an important species in Southern Brazil for its economical and cultural values. The present work had the objectives of analyzing the propagation of mate by cuttings, disinfection and in vitro establishment of nodal segments from adult plants and micropropagation of plants originated from immature embryos. Mate cutting were submitted to three (0, 4000 and 8000 mg L-1) IBA doses and two lengths (3 and 10 cm) of cutting. The cuttings were evaluated at 135 days for survival, rooting and formation of roots, leaves and shoots. In the disinfection experiments, nodal segments of one-year-old shoots were immersed in alcohol solution of 70% for two and four min., in 2% of NaOCl for 15, 25 and 35 min. and inoculated in ¼ of MS medium. The percentage of contaminated, oxidized and healthy explants were evaluated at 15 days. In micropropagation, mate seedlings from immature embryos were submitted to different culture mediums (MS, ¼ MS and WPM) for 30 days and evaluated for number of leaves and length of seedlings. For the multiplication, different doses (0; 0,01; 0,1; 1,0 and 2,0 mg L-1) of BAP were tested in ¼ MS culture medium. At 50 days, they were evaluated for the number of shoots, leaves and internodes, shoots length and height. Different doses (0; 0,5; 1,0 and 1,5 mg L-1) of IBA were evaluated for rooting and kept explants either for 15 or 30 days in the medium. In vitro plants of mate were acclimatized in different (vermiculite, sand or coconut shells) substrates, with controlled temperature and light environmental conditions. The highest percentage of rooted cuttings, in both evaluated length, were with 4000 mg L-1 of IBA. Cuttings with 3 cm length produced the highest percentage of rooted cuttings. Nodal segments of one-year-old shoots have the highest survival, with the disinfection with alcohol 70% for four minutes and NaOCl 2% for 25 min. The ¼ of MS salts medium can be used as basal medium for in vitro culture of mate plants. The basal medium with 2 mg L-1 of BAP increases the number of adventitious shoots and promotes shoot proliferation after some sub cultivations, enabling in vitro plant maintenance as microstump, as shoot supply. In vitro rooting can be achieved in one cycle of 30 days of cultivation, with the addition of 3 mg L-1 of IBA to the medium with ¼ of MS salts. In vitro plants of mate can be acclimatized in coconut shells or sand in controlled temperature and light conditions. / A erva-mate (Ilex paraguariensis) é uma espécie de grande importância no sul do Brasil, pelo valor econômico e cultural que apresenta. O presente trabalho teve por objetivos analisar a propagação de erva-mate por estaquia, o estabelecimento e desinfestação in vitro de segmentos nodais de plantas adultas e a micropropagação de plantas oriundas de embriões imaturos. Para a estaquia, testaram-se três doses de AIB (0, 4000 e 8000 mg L-1) e dois comprimentos de estacas (3 e 10 cm). As estacas foram avaliadas quanto à sobrevivência, o enraizamento, o número de raízes, de folhas e de brotos e o comprimento de raízes e de brotos, aos 135 dias. No experimento de desinfestação, segmentos nodais de brotações de ano de erva-mate foram imersos em etanol 70%, por 2 e 4 min. e, depois, em NaOCl 2%, por 15, 25 e 35 min e, então inoculados em meio com ¼ do MS. Aos 15 dias avaliaram-se a percentagem de explantes contaminados, oxidados e sadios. Na micropropagação, plântulas de erva-mate, obtidas de embriões imaturos, foram submetidas a diferentes meios de cultura (MS, ¼ MS e WPM) por 50 dias, com avaliação do incremento obtido para as variáveis número de folhas e comprimento de plântulas. Para a multiplicação dessas plantas, foram testadas a adição de diferentes doses (0; 0,01; 0,1; 1,0 e 2,0 mg L-1) de BAP ao meio de cultura com ¼ do MS. Foram avaliados o número de brotos, folhas e entrenós, o comprimento dos brotos e a altura das plantas, aos 50 dias de cultivo. No enraizamento de brotos de erva-mate foram utilizadas doses (0; 0,5; 1,0; 1,5; 3,0 e 6,0 mg L-1) de AIB, por 15 e 30 dias. As avaliações constaram da percentagem de enraizamento e de calo obtidas, do número e comprimento de raízes, do número de folhas e altura das plantas, aos 30 dias de cultivo. Plantas de erva-mate, produzidas in vitro, foram aclimatizadas em diferentes substratos (vermiculita média, areia e casca de coco) com temperatura e luminosidade controladas. A maior percentagem de estacas enraizadas, em ambos os comprimentos, foi com a dose de 4000 mg L-1 de AIB, sendo que as estacas de 3 cm obtiveram uma maior percentagem de enraizamento. Segmentos nodais de brotações de ano de erva-mate apresentam a maior sobrevivência com a desinfestação com álcool 70% por 4 min. e em NaOCl 2% por 25 min. O meio com ¼ dos sais do MS pode ser utilizado como o meio de cultura base para o cultivo in vitro de plantas de erva-mate. A adição de 2 mg L-1 de BAP ao meio de cultura base aumenta o número de brotos adventícios em erva-mate, além de formar tufos após alguns subcultivos, possibilitando a manutenção de plantas como microcepas, para o fornecimento de brotos. O enraizamento in vitro de erva-mate pode ser realizado em apenas uma fase de 30 dias, com a adição de até 3 mg L-1 de AIB ao meio com ¼ dos sais do MS. Plantas de erva-mate, produzidas in vitro, podem ser aclimatizadas nos substratos casca de coco ou areia em ambiente com temperatura e luminosidade controladas.

This study had as objective to study the in vitro regeneration of cedar (Cedrela fissilis Vell.), a native tree of economic interest, belonging to Meliaceae family. For seeds desinfestation, different treatments with sodium hypochlorite in different concentration and immersion times were tested combined with differents culture mediums. To establish the nodal segments in vitro, benlate at 300 mg.l-1 and streptomicine sulphate at 10 mg.l-1 were added to the culture medium WPM reduced to ¾ of its salts concentration, isolated or not. After that, the hypocotyl segments from the 30 days in vitro cultured plants were used as explant in sprouts multiplication in culture mediums MS and WPM combined or not with the cytokinins BAP and KIN at 5μM.l-1 . It was also tested, in hypocotyl segments, the influence of BAP (0; 1,25; 2,5 and 5,0 μM.l-1) combined with the IBA or NAA (0,55μM.l- 1), in culture medium WPM during two subcultives. 60 days hypocotyl segments from cultive in BAP (0;1,25; 2,5 and 5,0 μM.l-1) were transferred to WPM medium added of only GA3 at 3μM.l-1 remaining during more than 30 days. Seeds desinfestated with sodium hypochlorite at 2% during 10 minutes showed a lower index of fungal contamination (8,7%) and the higher index of germination (80%), the mediums MS and WPM allowed the germination of 72,5%. The nodal segments from 3 years old plants showed an average index of bacterial contamination (13% 21 days after the inocultation) when cultivated in WPM culture medium added of benlate (300mg.l-1) plus streptomicine sulphate (10 mg.l-1) and survival index of 83%. The explants from the hypocotyl region showed average indexes of regeneration of 2,8 when cultivated in WPM medium supplemented with BAP at 5μM.l-1, on the other hand, in MS medium, the average tax of formation was 2,5 sprouts per explant. When tested in WPM culture medium, in different BAP concentrations, only at 30 days of cultive there was an interaction between the cytokinins doses and the presence of auxins IBA and NAA. BAP at 5μM showed explants with higher taxes of multiplication, regardless the auxins addition to the culture medium. In the following subcultives there was not an interaction between the concentrations and the effect of auxin presence, where the medium without auxin, associated to BAP at 5μM, promoted a higher average of sprouts per explant 2,29 (60 days). The average number of knots at 30 days of cultive was of 2,84 when evaluated the medium with ANA plus 2,5μM of BAP. At 60 days, the culture medium without the auxine promoted an average of 4,15 knots per explant, differing statistically from the mediums with auxin. At 90 days, the number of knots were 5,59 when BAP was used at 5μM plus IBA. The average length of the sprouts in the medium with NAA showed to be the more efficient (0,86 cm) at 30 days of cultive. At 60 days, the average length of the sprouts was of 0,95 and, at 90 days the average length of the sprouts was of 1,14. The formation of callus in the base of the explants happened when cytokinins were added to the medium, and the roots formation happened in the absence of these and in the presence of the auxin, generating complete plants. Explants exposed to GA3 at 60 days of cultive showed a partial reversion, showing an increase in formed roots and average length of the sprouts. / O presente trabalho teve como objetivo o estudo da regeneração in vitro de cedro (Cedrela fissilis Vell.), uma árvore nativa de interesse econômico, pertencente à família Meliaceae. Para a desinfestação de sementes, foram testadas diferentes concentrações e tempos de imersão em hipoclorito de sódio e para a germinação, diferentes meios de cultura. Para o estabelecimento in vitro de segmentos nodais, foram adicionados ao meio de cultura WPM, reduzido a ¾ de sua concentração original, benlate (300 mg.l-1) e sulfato de estreptomicina (10 mg.l-1). Após, segmentos do nó cotiledonar advindos de plântulas germinadas in vitro com 30 dias de idade, foram utilizados para a multiplicação de brotações nos meios de cultura MS e WPM, em combinação ou não com 5μM.l-1 de BAP ou KIN . Foi testado também, a influência da citocinina BAP (0; 1,25; 2,5 e 5,0 μM.l-1) combinada ou não com as auxinas AIB ou ANA (0,5μM.l-1) em meio de cultura WPM durante dois subcultivos. Os segmentos do nó cotiledonar com 60 dias de cultivo em meio WPM e BAP (0; 1,25; 2,5 e 5,0 μM.l-1) foram transferidos para meio WPM adicionado apenas de GA3 a 3μM.l-1 permanecendo por mais 30 dias. Os resultados demonstram que as sementes desinfestadas com hipoclorito de sódio a 2% durante 10 minutos apresentaram a menor taxa de contaminação por fungos (8,7%) e a maior percentagem de germinação (80%), os meios MS e WPM proporcionaram percentagem de germinação de 72,5%. Os segmentos nodais de plantas de três anos de idade apresentaram uma taxa média de contaminação por bactérias de 13% após 21 dias de inoculação quando cultivados em meio de cultura WPM adicionado de benlate (300mg.l-1)mais sulfato de estreptomicina (10 mg.l-1)e taxa de sobrevivência de 83%. Os explantes provenientes da região do nó cotiledonar apresentaram regeneração média de brotações de 2,8 quando cultivados em meio WPM suplementado com BAP a 5μM.l-1, enquanto que, no meio MS, a taxa média de brotações foi de 2,5 por explante. Quanto testados em meio de cultura WPM, em diferentes concentrações de BAP, apenas aos 30 dias de cultivo, houve interação entre as doses da citocinina e a presença das auxinas AIB e ANA. O BAP a 5μM apresentou explantes com maiores taxas de multiplicação de brotações independente da adição das auxinas ao meio de cultura. Nos subcultivos subseqüentes, não houve interação entre as concentrações e o efeito da presença de auxina, em que o meio sem a presença desta, adicionado o BAP a 5μM, proporcionou a maior média de brotações por explante 2,29 (60 dias). O número médio de nós aos 30 dias de cultivo foi de 2,84 no meio contendo ANA mais 2,5 μM de BAP. Enquanto que, aos 60 dias, o meio de cultura sem auxina proporcionou uma média de 4,15 nós por explante, diferindo estatisticamente dos meios contendo auxina. Aos 90 dias de cultivo, o número de nós foi de 5,59 quando utilizado BAP a 5μM mais AIB ao meio de cultura. Quanto ao comprimento médio das brotações, o meio contendo ANA mostrou ser o mais eficiente (0,86 cm) aos 30 dias de cultivo. Aos 60 dias, o comprimento médio das brotações foi de 0,95 e, aos 90 dias o comprimento médio de brotações foi de 1,14. A formação de calos na base dos explantes ocorreu quando foi adicionada citocinina ao meio, e a formação de raízes ocorreu na ausência desta e na presença de auxina, gerando plantas completas. Explantes expostos ao GA3 aos 60 dias de cultivo mostraram parcial reversão, apresentando um aumento na percentagem de raízes formadas e comprimento médio de brotações.

The Parapiptadenia rigida (Bentham) Brenan is a native forest specie that can be used in the restoration of gallery forests and degraded areas. This work has the objective to develop the regeneration in vitro of P. rigida using explants of aseptic seedlings. In experiment 1, seeds of P. rigida were disinfected in 0.0, 2.5 and 5.0% of sodium hypochlorite during 5, 10, 15 and 30 minutes. A design completely randomized was used with 12 treatments and four repetitions by treatment, each repetitions had five seeds. It was evaluated the percentage of seeds sprouted at 10, 20 and 30 days, and the percentage of seeds aseptic in 30 days. In experiment 2, shoots of cotyledonal nodal segment and nodal segment were induced using 0.0, 0.25, 0.50 and 1.0 mg.L-1 of BAP or KIN. The design was completely randomized and 16 treatments were used, each treatment was constituted by five repetitions with six bottles each. The percentage of explants with shoots, the size of shoots, the number of leaves per shoots, the morphologic appearance of shoots, the percentage of callus on the base of explants and the size of callus were availed at 60 days. In experiment 3, named by rooting of explants, two tests were performed. Test 1 used cotyledonal nodal segment and nodal segments, both from shoots induction phase, and test 2 used shoots from cotyledonal nodal segment. At experiment 3, it was used IBA with concentration of 0, 0.25, 1.0 and 1.75 mg.L-1 and a design completely randomized, with 8 treatments. Test 1 was constituted by four repetitions with three bottles per repetition and test 2 was constituted by four treatments, each treatments constituted by four repetitions with five bottles per repetition. The percentage of rooting, the number of roots per explants, the length of the longest root, the percentage of explants with callus on the base and the average size of callus were availed at 60 days. In experiment 4, the plants were transferred to the substrate composed by Plantmax® and vermiculite, and the percentage of survival was availed at 60 days. The analysis of variance, the Tukey test and the regression analyzes were applied on data obtained from all experiments. In experiment 1, the highest percentages of germinations (76%) were found in the treatment with water and Tween 20 during 20 minutes. The second higher was the treatment with 2.5% of sodium hypochlorite during 30 minutes (70%). The highest percentage of disinfected seeds (81%) occurred in treatment with 2.5% of sodium hypochlorite during 30 minutes. In experiment 2, the dose of 0.50 mg.L-1 formed the largest size sprouts (0.50 cm) and the biggest number of leaves for sprout (3.60 leaves), independent of kind of phytoregulators. Experiment 3 presented the biggest number of roots was observed in segments cotyledonal nodal cotyledonary inoculated in medium containing 1.0 mg.L-1 of IBA (2.35 roots). In experiment 4, the highest percentage of survival was in plants derived from cotyledonal nodal segment in medium of rooting containing 1.0 mg.L-1 AIB. The segment cotyledonal nodal is better kind of explant for regeneration in vitro of the P. rigida than nodal segment. / A Parapiptadenia rigida (Benthan) Brenam é uma espécie florestal nativa que pode ser utilizada na restauração de matas ciliares e recuperação de áreas degradadas. Este trabalho visa ao desenvolvimento da regeneração in vitro da P. rigida utilizando explantes de plântulas assépticas. No experimento 1, sementes de P. rígida foram desinfestadas em 0; 2,5 e 5,0% de hipoclorito de sódio, durante 5, 10, 15 e 30 min. O delineamento foi inteiramente casualizado, com 12 tratamentos, sendo quatro repetições por tratamento, cada repetição com cinco sementes. Avaliou-se a porcentagem de sementes germinadas aos 10, 20 e 30 dias, e a porcentagem de sementes desinfestadas aos 30 dias. No experimento 2, realizou-se a indução de brotos em segmentos nodal cotiledonar e nodal utilizando 0; 0,25; 0,50 e 1,0 mg.L-1 de BAP ou KIN. O delineamento foi inteiramente casualisado, com 16 tratamentos, com cada tratamento constituído de cinco repetições, cada repetição com seis frascos. Aos 60 dias avaliou-se a porcentagem de explantes com broto, o comprimento dos brotos, o número de folhas por broto, o aspecto morfológico dos brotos, a porcentagem de explantes com calo na base e o tamanho dos calos. O experimento 3, enraizamento de explantes, foi dividido em dois testes. No teste 1 utilizaram-se segmentos nodal cotiledonar e nodal advindos da fase de indução de brotos e, no teste 2, brotos provenientes de segmento nodal cotiledonar. Para indução rizogênica foram utilizadas as doses de 0; 0,25; 1,0; 1,75 mg.L-1 de AIB. O delineamento foi inteiramente casualizado, com oito tratamentos, sendo, no teste 1, cada tratamento composto por quatro repetições, com três tubos por repetição e, no teste 2, por quatro tratamentos, cada tratamento constituído de quatro repetições, com cinco tubos por repetição. Aos 60 dias foi avaliada a porcentagem de enraizamento, o número de raízes por explante, o comprimento da raiz mais longa, a porcentagem de explantes com calo na base e o tamanho médio dos calos. No experimento 4, as plantas regeneradas a partir dos diferentes tipos de explantes foram transferidas para substrato composto por Plantmax® e vermiculita e, aos 60 dias, avaliadas quanto a porcentagem de sobrevivência. Os dados obtidos, nos diferentes experimentos, foram submetidos à análise de variância, análise de regressão e ao teste de Tukey. No experimento 1, a maior porcentagem de germinação ocorreu em sementes embebidas em água com tween 20, durante 30 min., seguido do tratamento utilizando 2,5% de hipoclorito de sódio, por 30 min., com 76 e 70% de sementes germinadas respectivamente. A maior porcentagem de sementes desinfestadas (81%) ocorreu no tratamento com 2,5% de hipoclorito de sódio, durante 30 min. No experimento 2, foi verificado que a dose de 0,50 mg.L-1, independente do tipo de fitorregulador, promoveu maior tamanho dos brotos (0,50 cm) e maior número de folhas por broto (3,60 folhas). No experimento 3, o maior número de raízes foi observado em segmentos nodal cotiledonar inoculados em meio contendo 1,0 mg.L-1 de AIB (2,35 raízes). No experimento 4, a maior sobrevivência durante o processo de aclimatização (68%) ocorreu em plantas regeneradas a partir de segmento nodal cotiledonar em meio contendo 1,0 mg.L-1 AIB. O segmento nodal cotiledonar é o melhor tipo de explante para a regeneração in vitro de P.rigida se comparado ao segmento nodal.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:36:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2071657 bytes, checksum: 8a43f082ad29541577608649eac7bf13 (MD5) Previous issue date: 2007-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The present work aimed to study the morphophysiological behavior of two grapevine rootstocks Vitis vinifera x Vitis rotundifolia VR 043-43 and Vitis riparia, as affected by different stressful conditions. Initially, four types of flask sealing were tested: 1) transparent PVC plastic film; 2) rigid polypropylene closure (TN); 3) rigid polypropylene closure with one (TMF1) or two (TMF2) 10 mm holes, covered with 0.22 μm pore membranes, associated to sucrose concentrations (0; 10; 20, and 30 g.L-1). The experiment followed a completely randomized design in a 4 x 4 factorial scheme. After 60 days, the following characteristics were evaluated: number of leaves, leaf area (mm2), aerial shoot length (cm), root length (cm), contents of chlorophylls a, b, total and carotenoids, final medium volume (mL), and fresh dry weight (g). The effect of ethylene upon morphogenesis was also evaluated by adding the promoter (ACC) or the ethylene inhibitor (STS) to the culture medium (1/2MS; 1/2MS + 10 µM STS and 1/2MS + 3 µM ACC). For that, the following characteristics were used: number of leaves, number of internodes, leaf area, shoot length, root system length, aerial fresh mass, root fresh mass, investment percentage in mass for the aerial part and root, content of chlorophylls a, b, total and carotenoids, accumulated ethylene (at 7; 14; 21; 28; 35; 42; 49, and 56 days after explant inoculation), dry mass of shoots, dry mass of roots, and anatomical aspects. Inductive and non-inductive medium to hyperhydricity, combined with five irradiance levels were also tested. The interaction between sucrose concentrations up to 20 g.L-1 and type of sealing (TMF1 and TMF2), positively influenced in the growth parameters of in vitro propagated plants, though conferring higher survival rates when acclimatized to ex vitro conditions. The total chlorophyll content, number of leaves, leaf area, shoot length, and fresh and dry masses were significantly reduced when both cultivars were grown in ACC-supplemented medium. Hyperhydric shoots presented typical features, such as stomata deformation and increase in leaf blade width, moreover when cultured under higher irradiance levels. Higher irradiances also led to a marked photoinibition in in vitro cultured plants. / O presente trabalho teve por objetivo avaliar o comportamento morfofisiológico de dois porta-enxertos de videiras, Vitis vinifera x Vitis rotundifolia VR 043-43 e Vitis riparia, quando cultivadas sob condições de estresse in vitro, para isso foram realizados três espxperimentos distintos. No primeiro foi avaliado o efeito de quatro tipos de vedações: 1) filme plástico de PVC transparente; 2) tampa rígida de polipropileno autoclavável sem orifício (TN); 3) tampa rígida de polipropileno com um (TMF1) ou dois (TMF2) orifícios de 10 mm, cobertos por membranas de 0,22 μm de poro, permeáveis às trocas gasosas, associadas à concentrações de sacarose (0; 10; 20 e 30 g.L-1), em experimento fatorial 4 x 4, em Delineamento Inteiramente Casualizado (DIC). Após 60 dias de cultivo, foram avaliadas as características número de folhas, área foliar (mm2), comprimento da parte aérea das plantas (cm), comprimento do sistema radicular (cm), teores de clorofila a, b, totais e de carotenóides, volume final do meio de cultivo (mL) e massa seca das plantas (g). No segundo experimento foi estudado o efeito do etileno sobre o comportamento morfofisiológico dessas videiras pela adição do promotor (ACC) ou do inibidor (STS) de etileno no meio de cultivo (1/2MS; 1/2MS + 10 µM de STS e 1/2MS + 3 µM de ACC). Para tal, foram avaliadas as seguintes características: número de folhas, número de entrenó, área foliar, comprimento da parte aérea, comprimento do sistema radicular, massa fresca da parte aérea, massa fresca da raiz, porcentagem de investimento em massa para a parte aérea e raiz, determinação de clorofilas a, b, totais e carotenóides, mensuração de etileno acumulado (aos 7; 14; 21; 28; 35; 42; 49 e 56 dias após inoculação dos explantes - DAI), massa seca da parte aérea, massa seca da raiz, análises anatômicas (microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura). Por último, foi montado um experimento do tipo fatorial 5 x 2, sendo cinco níveis de irradiâncias e dois meios de cultivo, com objetivo de valiar o comportamento de plantas hiperídricas e plantas normais de videiras em distintas irradiâncias. A interação entre as concentrações de sacarose até 20 g.L-1 e as vedações TMF1 e TMF2, permeáveis às trocas gasosas, infuenciou positivamente nos parâmetros fisiológicos de crescimento das plantas propagadas in vitro, conferindo-as características favoráveis à aclimatização ex vitro. O conteúdo de clorofilas totais, número de folhas, área foliar, comprimento da parte aérea, massas frescas e secas foram significativamente reduzidos quando ambas as cultivares foram desenvolvidas em meio de cultivo contendo ACC, assim como aumento na altura das estruturas anatômicas das folhas e deformações nos estômatos. Plantas induzidas à hiperidricidade apresentaram características morfofisiológicas alteradas em relação às normais, sendo que elevados níveis de irradiâncias induziram alterações em ambas as plantas. Níveis elevados de irradiância favorecem a fotoinibição em videiras cultivadas in vitro.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O amendoim A. hypogaea L. é a quarta oleaginosa mais consumida no mundo e suas sementes são altamente energéticas, com grandes quantidades de lipídios, proteínas, vitaminas e carboidratos. Diversas atividades farmacológicas já foram observadas em extratos de raízes, folhas e sementes, sendo a principal delas a atividade antioxidante. Neste trabalho, foi realizada a comparação entre duas metodologias (por maceração e assistida por micro-ondas) para a extração de compostos antioxidantes, incluindo o resveratrol. Também foi realizada a comparação entre extratos de diferentes órgãos de cultivares brasileiras (IAC 886, IAC Caiapó, IAC Tatu ST, IAC 8112 e IAC 99-1) quanto à atividade antioxidante, por DPPH, ao teor de compostos fenólicos, por Folin-Ciocalteu, e ao teor de resveratrol, por HPLC. Por fim, foram estabelecidos protocolos de cultura de tecidos para explantes de sementes, visando à produção de calos e plantas in vitro para posterior dosagem de compostos de interesse, tendo em vista a possibilidade de modulação das condições in vitro. As melhores condições determinadas para a extração por maceração de antioxidantes de A. hypogaea foram 80% de etanol em água como solvente, trituração com almofariz e pistilo, 50 mL solvente por grama de material vegetal seco, 120 minutos de incubação e dois estágios de extração. As melhores condições para a extração de resveratrol assistida por micro-ondas foram o uso de 37 mL de solvente/g material vegetal seco, com agitação de 1200 rpm por 15 minutos, a 37C. De uma maneira geral, os extratos de raízes e oriundos de micro-ondas apresentaram maior atividade antioxidante (até 92,36 2,71%), teor de compostos fenólicos (até 54,15 1,39 mg EAG/g extrato) e teor de resveratrol (até 1,614 0,356 mg/g extrato). Dentre as cultivares estudadas, IAC Tatu e IAC 99-1 foram as que apresentaram os teores mais elevados. Brotos e calos friáveis foram obtidos a partir de cotilédones, eixos embrionários e folíolos embrionários cultivados em meios suplementados com BAP e picloram, respectivamente. / Peanut A. hypogaea L. is the fourth most consumed oleaginous in the world and its seeds are high energetic, with high amounts of lipides, proteins, vitamins and carbohidrates. Several pharmacological activities have been observed in extracts of roots, leaves and seeds, especially an antioxidant activity. In this work, the comparison between two extraction methodologies (by maceration and microwave assisted extraction) for the extraction of antioxidant compounds, including resveratrol, was studied. We also carried out a comparison between extracts from different organs of Brazilian cultivars (IAC 886, IAC Caiapó, Tatu ST IAC, IAC 8112 and IAC 99-1) for antioxidant activity by DPPH, the content of phenolic compounds by Folin-Ciocalteu and the resveratrol content by HPLC. Finally, we established tissue culture protocols for seed explants, aiming at the production of in vitro plant material for future measurement of compounds of interest in the view of possible modulation of in vitro conditions. The best conditions for the extraction of antioxidant from A. hypogaea compounds by maceration were 80% of ethanol in water as a solvent, trituration by mortar and pestle, 50 mL solvent/g dry plant, 120 minutes of incubation and two stages of extraction. The best conditions for the extraction of resveratrol assisted by micro-wave were the use of 37 mL of solvent for each gram of dry plant, with 1200 rpm of agitation for 15 minutes, with 37oC. In general, root extracts and assisted by microwave showed higher antioxidant activity (until 92,36 2,71%), phenolic (untill 54,15 1,39 mg AGE/g extract) and resveratrol content (untill 1,614 0,356 mg/g extract). Among the studied cultivars, IAC Tatu and IAC 99-1 showed the best results. In tissue culture, shoots and friable calli were obtained from cotiledons, embryonic axis and embryonic leaflet cultured in media supplemented with BAP and picloram, respectively.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A biodiversidade brasileira abrange plantas de importância medicinal que podem ser utilizadas na formulação de novos fármacos. Contudo, tem sido reduzida em velocidade alarmante, em função de diferentes ações antrópicas. A cultura de tecidos vegetais propicia a conservação e uso do germoplasma permitindo a obtenção de substâncias de importância medicinal. As leishmanioses são consideradas um problema de saúde pública mundial sendo a espécie Leishmania braziliensis de maior importância epidemiológica no Brasil. Recentemente tem-se registrado aumento da resistência à linha de tratamento usual. Do mesmo modo, o uso indiscriminado de antibióticos levou ao aumento de bactérias multirresistentes, que representam sério risco de infecção. A espécie Annona mucosa (Jacq.) possui substâncias, como acetogeninas e alcaloides, que apresentam atividades antiparasitária e antimicrobiana. Nesse sentido, o objetivo do trabalho foi avaliar o potencial leishmanicida e antibacteriano de extratos de A. mucosa de material produzido in vitro e in vivo. Foi proposto um protocolo de germinação in vitro, ainda não reportada para a espécie, com vistas à obtenção de plântulas axênicas. Em meio WPM foram cultivados explantes hipocotiledonares e foliares em meio MS, suplementados com PIC e diferentes concentrações de KIN, BAP ou TDZ. Os calos obtidos foram cultivados em meio líquido de mesma composição para a produção de suspensões celulares. Os materiais foram submetidos à extração metanólica e posterior fracionamento em hexano e diclorometano. Para a avaliação da atividade dos extratos sobre L. braziliensis foi usado o modelo in vitro, com a forma promastigota, e in vivo na forma amastigota, a partir do tratamento de macrófagos peritoneais de camundongos infectados com o parasito. Ambas as formas foram tratadas com os extratos por 96 e 48h, respectivamente. A atividade antimicrobiana foi avaliada por macrodiluição do extrato em Mueller-Hinton, sendo avaliado o crescimento das cepas após 16h de incubação a 48C. A germinação in vitro da espécie foi alcançada em substrato vermiculita estéril umedecido com solução de sais do meio MS, com taxa média de 85%. A maior produção de calos friáveis foi obtida em meios contendo KIN, com potencial uso para cultivo em suspensões celulares. Os extratos do material in situ e in vitro apresentaram atividade leishmanicida, apesar da toxicidade para macrófagos. Culturas de células em suspensão apresentaram potencial leishmanicida in vitro e redução da infecção em macrófagos. Os extratos do material avaliado apresentaram atividade antimicrobiana seletiva, com inibição do crescimento de Streptococcus pyogenes e Bacillus thurigiensis em diferentes concentrações avaliadas. Os métodos biotecnológicos empregados permitiram a obtenção de materiais com propriedades medicinais para as atividades leishmanicida e antibacteriana, assim como o material in vivo, constituindo este estudo o primeiro relato para as atividades propostas em A. mucosa. / The Brazilian flora encompasses medicinal importance species that can be used to develop new drugs. However, plants have been reduced in alarming rate, due to various human activities. Plant tissue culture promotes the conservation and use of species allowing for the production of bioactive substances for medicinal products. Leishmaniasis is considered a worldwide health problem, where Leishmania braziliensis is the most epidemiological importance specie in Brazil. Recently it has been registered increased resistance to treatment line. Similarly, the widespread use of antibiotics has led to an increase in multidrug-resistant bacteria, which represent a serious risk of infection. Annona mucosa have substances, such as acetogenins and alkaloids that exhibit antiparasitic and antimicrobial activities. In view of the problem, the aim of this work was to evaluate the leishmanicidal and antibacterial potential of extracts of A. mucosa obtained in vitro and in vivo. We proposed a protocol of in vitro germination, not yet reported for the species, aiming to achieve axenic seedlings. Hypocotyls explants was cultivated in WPM and leaf explants on MS medium supplemented with PIC and different concentrations of KIN, BAP or TDZ. The formed callus was cultured in liquid medium of the same composition for the production of cell suspensions. The materials were subjected to methanolic extraction and subsequent fractionation in hexane and dichloromethane. The activity of extracts on L. braziliensis was evaluated in vitro in the form promastigote and in vivo in amastigote form, in infected mice macrophages. Both, were treated with the extract per 96h and 48h, respectively. The evaluation of antimicrobial activity was performed by macrodilution assay in Mueller-Hinton, analyzing the growth of the strains after 16h of incubation at 48C. The in vitro germination of A. mucosa was achieved in sterile vermiculite as substrate and has a 85% germination rate. The higher callus formation and friability was obtained in media containing KIN, that may be cultured in suspension. The extracts of the material in situ and in vitro showed leishmanicidal activity, despite the toxicity in macrophages. Cell suspension cultures showed antileishmanial potential in vitro and reduction of infection in macrophages. The evaluated extracts showed selective antimicrobial activity, with growth inhibition of Streptococcus pyogenes and Bacillus thuringiensis in different tested concentrations. It was concluded that the biotechnological techniques allowed to use plant materials regarding pharmacological properties for antileishmanial and antibacterial activities.

A transformação genética pode contribuir substancialmente para o melhoramento genético do feijão, permitindo a introdução de genes que contribuam para o aumento da produtividade e estabilidade da produção. A metodologia de transformação genética de feijão (Phaseolus vulgaris), ora disponível (biobalística em embriões) apresenta baixa eficiência, o que dificulta o seu uso em pesquisas envolvendo a transferência de genes e não permite seu uso de forma ampla em programas de melhoramento genético da cultura. Um método efetivo e reprodutível de regeneração de plantas, a partir de células ou tecidos, é essencial em estudos de genética e melhoramento envolvendo a transferência de genes pela engenharia genética. Os métodos de transformação somente terão sucesso se tivermos previamente estabelecido um protocolo eficiente de regeneração de plantas a partir de tecidos potencialmente transformáveis. O objetivo principal deste trabalho é o desenvolvimento de um protocolo de transformação genética de feijão via Agrobacterium. O primeiro passo no desenvolvimento deste protocolo foi o estabelecimento de um sistema eficiente de regeneração de plantas a partir de calos. O passo seguinte foi o estabelecimento de metodologia da transformação de calos via Agrobacterium. / The genetic transformation can contribute substantially with the bean (Phaseolus vulgaris L.) breeding, allowing the introduction of genes to improve productivity and its stability. The transformation methodology of bean, now available (biolistic in embryos), is not efficient, which prevents its use in bean breeding programs. A reproducible and effective method of plant regeneration, from cells or tissues is essential in genetics studies and plant breeding, involving the genetic engineering. The transformation methods will only work if we can previously establish an efficient plant regeneration protocol from tissues with potential for transformation. The aim of this work was to develop an efficient transformation protocol of bean via Agrobacterium. The first step was to establish an efficient system of plant regeneration from callus, followed by the establishment of a transformation methodology via Agrobacterium.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Empresa Brasileira de Pesquisa AgropecuÃria / As orquÃdeas sÃo plantas ornamentais que se destacam principalmente na floricultura devido à beleza, ao exotismo, à diversidade de cores, aos tamanhos e aos formatos de suas flores. A espÃcie Cattleya labiata e as do gÃnero Phalaenopsis apresentam uma grande oferta de opÃÃes de cores que tornam suas flores muito valorizadas e demandadas para comercializaÃÃo. Cattleya labiata à nativa do Nordeste brasileiro e suas floress sÃo levemente arroxeadas e perfumadas; enquanto que Phalaenopsis sp. produz flores brancas de longa durabilidade. A cultura de tecidos tem sido largamente empregada na multiplicaÃÃo massiva desses dois gÃneros. O estiolamento in vitro permite produzir grande nÃmero de plantas, reduzindo os riscos da ocorrÃncia de variaÃÃo somaclonal. Em razÃo disso, este trabalho teve como objetivo avaliar a influÃncia de diferentes ambientes de cultivo e de concentraÃÃes de BAP (6-benzilaminopurina) e ANA (Ãcido naftaleno acÃtico) no estiolamento in vitro das orquÃdeas Cattleya labiata e Phalaenopsis sp. PlÃntulas oriundas de sementes germinadas in vitro com aproximadamente + 1,0 cm de comprimento foram inoculadas em tubos de ensaio contendo 15,0 mL de meio de cultura MS, acrescido de diferentes concentraÃÃes de BAP (0,0; 2,0 e 4,0 mg L-1), ANA (0,0; 1,0 e 2,0 mg L-1) e ambientes de cultivo (sala de crescimento no escuro e com 16 horas de luz artificial), em esquema fatorial 2 x 3 x 3 (2 ambientes x 3 doses de BAP x 3 doses de ANA). Ao final de 150 dias, foram realizadas as seguintes avaliaÃÃes: a) nÃmero de brotos estiolados; b) nÃmero de nÃs por broto estiolado; c) comprimento da brotaÃÃo principal (cm); d) nÃmero de raÃzes e, e) massa seca total (g). O nÃmero de brotos estiolados e de nÃs (por broto estiolado) em plÃntulas de C. labiata e de nÃs por broto estiolado em Phalaenopsis sp. foram superiores no ambiente em ausÃncia de luz independente do fitorregulador utilizado, entretanto para o nÃmero de brotaÃÃes de Phalaenopsis sp. o ambiente luminoso foi o mais favorÃvel. A espÃcie C. labiata apresentou maior nÃmero de nÃs com a utilizaÃÃo de 2,0 mg L-1 de ANA na ausÃncia de BAP, e a orquÃdea Phalaenopsis sp. proporcionou maior nÃmero de nÃs com o emprego de 2,0 mg L-1 de ANA. Em plÃntulas de C. labiata e Phalaenopsis sp. a altura da brotaÃÃo principal foi superior em ambiente na ausÃncia de luz e, em contraste, o nÃmero de raÃzes e a massa seca total das plÃntulas foram superiores em ambiente na presenÃa de luz, sendo que para C. labiata esses resultados foram independentes do regulador de crescimento utilizado. / Orchids are ornamental plants that stand out mainly in floriculture due to the beauty, the exoticism, the diversity of colors, the sizes and shapes of their flowers. Cattleya labiata and species of the genus Phalaenopsis feature a wide range of color choices that make their flowers much valued and demanded for marketing. Cattleya labiata is native of the Brazilian Northeast and produces purplish and slightly fragrant flowers; and Phalaenopsis sp. produces white flowers for long lasting durability. Tissue culture is widely used in massive multiplication of genres. The in vitro etiolation allows to produce large numbers of plants, reducing the risk of somaclonal variation. For this reason, this study aimed to evaluate the influence of different cultivation environments and concentrations of BAP (6-benzylaminopurine) and NAA (naphthalene acetic acid) in vitro etiolation of the orchids Cattleya labiata and Phalaenopsis sp. Seedlings grown from seeds germinated in vitro with approximately + 1.0 cm in length were inoculated into test tubes containing 15.0 mL of MS medium supplemented with different concentrations of BAP (0.0, 2.0 and 4,0 mg L-1), NAA (0.0, 1.0 and 2.0 mg L-1) and culture environments (dark growth and room with artificial light) in a factorial 2 x 3 x 3 (2 environments x 3 doses of BAP x 3 doses of NAA). At the end of 150 days, the following evaluations were performed: a) number of etiolated shoots; b) number of nodes per etiolated shoot; c) length of the main sprout (cm); d) number of roots, and e) total dry mass (g). The number of etiolated shoots and nodes (per etiolated shoot) on seedlings of C. labiata and nodes per etiolated shoot in Phalaenopsis sp. were higher in the environment in the absence of light independent of the phytoregulator used, however the number of shoots of Phalaenopsis sp. the luminous environment was the most favorable. The species C. labiata showed a higher number of nodes with the use of 2.0 mg L-1 of NAA, in the absence of BAP, and Phalaenopsis sp. provided the highest number of nodes with the use of 2.0 mg L-1 of NAA. In seedlings of C. labiata and Phalaenopsis sp. the height of the main budding was higher in the environment in the absence of light, in contrast, the number of roots and total dry weight of seedlings were higher in luminous environment, and for C. labiata these results were independent regulator growth used.

Fundação Norte-Rio-Grandense de Pesquisa e Cultura / The medicinal plants have been widely used in recent decades for therapeutic, driven by the high cost of industrialized pharmaceutical products. Among the great diversity of medicinal plants found in Brazil, is the |sambacaitá| or |canudinho| (Hyptis pectinata L. Poit), which stands out for its wide use in the treatment of bacterial infections, pain and inflammation. The intense extraction of medicinal plants has made several species enter in extinction. Therefore it is necessary to understand the mechanisms of plants for adaptation of cultivation techniques and vegetative propagating that aim sustainability and large scale production. In this context, the aim of this work was to realize a phenologic study to evaluate the influence of cattle manure and cutting heights and establish a protocol for micropropagation of H. pectinata. For the phenology study we realized evaluations weekly on plants with and without irrigation. To evaluate the influence of cattle manure and cutting heights, the experiment was arranged in a randomized block design, using split plot scheme, placing cattle manure doses in the plots and cutting heights of plants in the in the split plots. In the micropropagation assays we tested different concentrations of growth regulators. Finally, for the acclimatization assay we tested different substrates containing coconut coir and / or vermiculite. For the conditions of the Sergipe State it was observed that the beginning of flowering of H. pectinata plants occurs in late July, that is the rainy season, that in early October occurs the seed dispersion and from late October the plants enter in senescence. It is noted that H. pectinata is an annual plant. H. pectinata supports three harvests and cutting at 20 cm from the ground resulted in better regrowth. The organic manure is not a limiting factor for the growth of H. pectinata. The accessions SAM-016, SAM-017 and SAM-018 of H. pectinata can be micropropagated in medium containing 50% of MS salts without using growth regulators. The acclimatization of plantlets can be performed in coconut coir substrate + 1g.L-1 of lime stone + MS salts. / As plantas medicinais vêm sendo amplamente utilizadas nas últimas décadas com finalidades terapêuticas, impulsionadas pelo alto custo dos produtos farmacêuticos industrializados. Dentre a grande diversidade de plantas medicinais existentes no Brasil, está o sambacaitá ou canudinho (Hyptis pectinata L. Poit), que se destaca por sua ampla utilização nos tratamentos de infecções bacterianas, dores e inflamações. O intenso extrativismo das plantas medicinais tem feito diversas espécies entrarem em extinção. Por isso é necessário o entendimento dos mecanismos das plantas para a adequação de técnicas de cultivo e de propagação vegetativa que visem à sustentabilidade e a produção em larga escala. Nesse contexto, esse trabalho teve como objetivo, realizar o estudo fenológico, avaliar a influência de doses de esterco bovino e alturas de corte e estabelecer um protocolo de micropropagação de H. pectinata. Para o estudo da fenologia foram feitas avaliações semanais em plantas com e sem irrigação. Para avaliar a influência de doses de esterco bovino e alturas de corte, o experimento foi montado em blocos casualizados, usando esquema de parcelas subdivididas, colocando-se nas parcelas as doses de esterco, e nas subparcelas, as alturas de cortes da planta. Nos ensaios de micropropagação foram testados diferentes concentrações de reguladores de crescimento. Por fim, para o ensaio de aclimatização foram testados diferentes substratos contendo pó de coco e/ou vermiculita. Para as condições do Estado de Sergipe observou-se que o início da floração das plantas de H. pectinata, ocorre no final de julho, na estação chuvosa, que no início de outubro ocorra à dispersão das sementes, a partir de final de outubro as plantas entram em senescência. Notou-se que a H. pectinata é uma planta anual. H. pectinata suporta três colheitas e o corte a 20 cm do solo resultou em melhor rebrota. A adubação orgânica não é fator limitante para o cultivo de H. pectinata. Os acessos SAM-016, SAM-017 e SAM-018 de H.pectinata pode ser micropropagado em 50% dos sais do MS na ausência de regulador de crescimento. A aclimatização das mudas micropropagadas pode ser realizada no substrato pó de coco + 1g.L-1 de calcário + sais do MS.

In Brazil, the discussion about the change in the energy matrix is gaining a bigger dimension. In this context appear the interest in studying plant species such as physic nut (Jatropha curcas L.), because it is an oilseed crop that has major socio economic potential for the biodiesel production. This way, arises the need to produce large quantity of seedlings selected from superior mother plants. The aim of this study was to evaluate the influence of growth regulators on in vitro establishment and callus induction in physic nut (Jatropha curcas L.). Leaf segments of selected mother plants of accession JCUFS-012 of the active germplasm bank of the UFS were used as explant source. The plants were grown in a greenhouse with white screen. In this work we evaluated the effect of sodium hypochlorite concentrations, time of immersion of explants types and concentrations of the plant regulators BAP, IBA, NAA, 2,4-D, IAA and kinetin on in vitro establishment, callus induction and anatomy of the tissues during organogenesis of physic nut. For in vitro establishment and regeneration we recommend the use of 0.5% of sodium hypochlorite for 5 minutes for the disinfestation of leaf explants of physic nut. Explants from leaf number 3 (the third leaf from the apex to the base, 9.4 cm wide and 10.0 cm length), are the most effective for callus induction. The use of MS medium supplemented with BAP (0.5-1.0 mg L-1) and IBA (0.5 mg.L-1) is essential for induction of compact callus in physic nut. Histological analysis showed formation of developed adventitious buds, with cambium connection with the callus tissues, evidencing indirect organogenesis. / No Brasil a discussão a respeito da mudança na matriz energética vem ganhando uma maior dimensão, neste cenário surge o interesse em estudar espécies vegetais, tais como o pinhão-manso (Jatropha curcas L.) por ser uma oleaginosa que apresenta importante potencial sócio econômico para a produção do biodiesel. Sendo assim surge a necessidade de produção de grande quantidade de mudas selecionadas a partir de matrizes superiores. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência de reguladores de crescimento no estabelecimento in vitro e indução de calos em pinhão-manso (Jatropha curcas L.). Foram utilizados como fonte de explantes segmentos foliares de plantas matrizes provenientes do acesso JCUFS-012 do banco ativo de germoplasma da UFS, cultivadas em estufa agrícola com tela clarite. No presente trabalho avaliou-se o efeito de concentrações de hipoclorito de sódio e tempo de imersão, tipos de explantes e concentrações dos fitorreguladores BAP, AIB, ANA, 2,4-D, AIA e cinetina, no estabelecimento in vitro, na indução de calos em pinhão-manso e a anatomia dos tecidos durante o processo de calogênese. Para o estabelecimento e regeneração in vitro, recomenda-se o uso da concentração de 0,5% de hipoclorito de sódio por 5 minutos para a desinfestação de explantes foliares de pinhãomanso. Explantes provenientes de folhas 3 (terceira folha no sentido ápice para a base, com 9,4cm de largura e 10,0 cm de comprimento), são mais eficientes para a indução de calos. E o uso do meio MS suplementado com BAP (0,5-1,0 mg.L-1) e AIB (0,5mg.L-1) é essencial na indução de calos compactos em pinhão-manso. A análise histológica mostrou a formação de brotos adventícios desenvolvidos, apresentando conexão cambial com os tecidos dos calos, evidenciando a organogênese indireta.