Orientador: Profª. Drª. Iara José de Messias Reason / Coorientador: Prof. Dr. Najeh Maissar Khalil / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 26/08/2016 / Inclui referências : f. 117-139 / Resumo: O câncer é uma das doenças que mais preocupa a população mundial atualmente e as projeções futuras são alarmantes. A dificuldade no desenvolvimento de tratamentos com menor custo, efetivos e baixo efeito colateral preocupa a devido o risco de pacientes ficarem sem o atendimento adequado. Apostar em produtos naturais com potenciais terapêuticos talvez seja a solução mais viável a curto prazo. Uma das substâncias que vem obtendo boas respostas clínicas é a capsaicina. Ela é um metabólito secundário utilizado como analgésico e anti-inflamatório, porém, com relatos de respostas antitumorais e cancerígenas. A fim de avaliar o potencial terapêutico da capsaicina e melhorar o direcionamento do fármaco apenas para células tumorais, o presente estudo teve o objetivo de desenvolver nanoformulação de albumina bovina com capsaicina. Entretanto, antes de desenvolver a formulação foi necessário validar o método analítico para identificação e quantificação da capsaicina. O mesmo foi realizado por cromatografia líquida de alta eficiência com volume de injeção de 100?L, fase móvel de metanol:água (15:85, v/v), temperaturas da coluna e amostra em 25 oC, coluna fase reversa C18 (25cm X 4mm), tempo de corrida de 8 minutos e leitura da absorbância em 280 nm. A formulação foi desenvolvida por método de dessolvataçãocoacervação utilizando meio com pH 7, adição do agente dessolvatante (etanol) em 1 mL/min e concentração do reticulante (glutaraldeído) a 8%. Após desenvolver a formulação, a mesma foi validade através de vários métodos analíticos, o que confirmou a estabilidade da formulação (90 dias em ambiente refrigerado) e a reprodutibilidade do método de síntese. As nanopartículas apresentaram forma quasi-esférica, diâmetro de aproximadamente 200 nm e baixo índice de polidispersão. Os testes in vivo analisaram as alterações ocasionadas sobre parâmetros bioquímicos, hematológicos, histológicos e da expressão de citocinas. Diferentemente dos resultados da literatura, houve um discreto aumento da glicemia para capsaicina livre, no entanto, os outros parâmetros bioquímicos ficaram dentro da normalidade. O hemograma da capsaicina livre apresentou alteração na contagem de % de linfócitos, 67 ±4%, contra 37 ±7 e 49±7% do controle e nanopartículas, respectivamente. Por outro lado, os granulócitos da droga livre tiveram redução (21 ± 2%), enquanto o controle (49 ±4%) e nanopartículas de capsaicina (40 ±9%) não tiveram diferença significativa, o que pode representar algum processo inflamatório ou infeccioso. Entretanto, ainda são necessários outros estudos para confirmar alguma hipótese. A análise histológica revelou infiltrados de leucócitos em tecidos pulmonares, sendo esta resposta inflamatória mais intensa com a droga livre. Dentre as citocinas, apenas a expressão de TNF-alfa foi influenciada. Esta citocina apresentou menor expressão plasmática nos grupos com capsaicina livre e nanoencapsulada. Os testes in vivo demonstraram perfil de segurança devido a ausência de alterações nos exames. Sobre a resposta antitumoral in vitro, a nanoformulação obteve excelentes resultados com inibição do crescimento de mais 80% das células B16F10 (modelo de melanoma) na concentração de 250 ug/mL. A IC50 calculada ficou em 31,25 ug/mL durante incubação de 72h. Ao fim desta etapa de estudo, pode-se concluir que o desenvolvimento da nanopartícula de albumina com capsaicina para fins terapêuticos (anti-tumorais) ocorreu com sucesso. A formulação possui controle no diâmetro, liberação da droga, menor toxicidade ao ser comparada com a droga livre e boa resposta antitumoral in vitro. Palavras-chave: Nanopartículas. Capsaicina. Antitumoral. Toxicidade. Albumina. / Abstract: Cancer is currently one of the diseases that most concerns the world population and its future projections are alarming. The difficulty in developing effective, with lower costs and side effects treatments is due to the risk of patients being without adequate attendance. To consider natural products with therapeutic potentials may be the most viable solution at short-term. One of the substances that has been obtaining great clinical responses is capsaicin. It is a secondary metabolite utilized as analgesic and anti-inflammatory, however, with reports of antitumor and anti-carcinogenic responses. In order to evaluate the therapeutic potential of capsaicin and improve the drug's targeting to tumor cells, the present study aimed to develop a bovine albumin nanoformulation with capsaicin. Nonetheless, before developing the formulation it was necessary to validate the analytical method to identify and quantify the capsaicin. This procedure was performed by high-performance liquid chromatography (HPLC) with injection volume of 100 ?L, mobile phase of methanol: water (15:85, v/v), column and sample temperature of 25 oC, reversed-phase column C18 (25cm X 4mm), trial time of 8 minutes and absorbance reading in 280 nm. The formulation was developed by desolvation/ coacervation method using mean with pH 7, 1 mL/min addition of dissolvent agent (ethanol) and reticulant agent concentration (glutaraldehyde) of 8%. After developing the formulation, it was validated through many analytical methods, which confirmed the stability of the formulation (90 days in a refrigerated environment) and reproducibility of the synthesis method. The nanoparticles presented a quasi- spherical form, diameter of approximately 200 nm and a low polydispersity index. In vivo tests analyzed the alterations caused over biochemical, hematological, histological parameters and over the cytokines expression. Differently from the literature, a small rise in glucose level occurred in the group of free capsaicin, however, the other biochemical parameters remain within the reference range. The hemogram of this free capsaicin group presented alterations in lymphocytes % count 67 ±4%, against 37 ±7 and 49±7% of control and nanoparticles groups, respectively. In contrast, the granulocytes of the free drug group reduced (21 ± 2%), while the control group (49 ±4%) and the nanoparticle one (40 ±9%) presented no significant difference, what may represent some inflammatory or infectious process. Still, other studies are necessary to confirm any hypothesis. The histological analysis revealed leukocytes infiltrates in pulmonary tissues, being this inflammatory response more intense with the free drug. Among the cytokines, only the expression of TNF-alfa was influenced. This cytokine showed a lower plasmatic expression in the groups with free and nano encapsulated capsaicin. In vivo tests demonstrated a safe profile due to the absence of alterations in the analyses. About the antitumor response in vitro, the nanoformulation obtained excellent results, inhibiting 80% of B16F40 cells (melanoma mode) in the concentration of 250 ug/mL. The IC50 calculated was 31.5 ug/mL during incubation of 72h. In the end of this study stage, it can be concluded that the development of a nanoparticle of albumin with capsaicin to therapeutic purposes (antitumor) occurred with success. The formulation has control in diameter and drug release, lower toxicity when compared to the free drug and a good antitumor response in vitro. Key-words: Nanoparticles. Capsaicin. Antitumor. Toxicity. Albumin.

Neste trabalho, avaliou-se a eficácia do uso da oleoresina de capsaicina, extraído das pimentas Malagueta, Red Savina e Bhut Jolokia, no tratamento da superfície de madeiras do gênero Pinus sp. com teores de umidade de equilíbrio de 12% e 0%. Os corpos de prova foram submetidos ao ataque de fungos Paecilomyces variotti e Pycnoporus sanguineus. Foi utilizado um preservante sintético conhecido comercialmente como stain para se comparar com a eficiência de preservantes naturais à base de oleoresina de capsaicina. A partir de medidas de ângulo de contato das superfícies das madeiras tratadas com o óleo de capsaicina, observou-se que a pimenta Bhut Jolokia e o preservante stain proporcionavam menor molhabilidade para a espécie de madeira estudada em ambos teores de umidade. O tratamento preservante fez com que a energia de superfície diminuísse se comparada aos valores de amostras de madeiras sem o tratamento preservante devido às contribuições polares e dispersivas. A análise estatística dos resultados, pelo método de Tukey, mostrou que não existe um grupo de resultados estatisticamente equivalente aos obtidos com a amostra testemunha (sem tratamento). As amostras de Pinus sp. a um teor de umidade 0% mostrou-se mais protegida superficialmente quando modificada com a oleoresina extraída da pimenta Bhut Jolokia e o mesmo efeito foi observado estatisticamente para o preservante stain. A técnica de Langmuir foi utilizada para melhor compreender as interações capsaicina/ergosterol, capsaicina/DPPG (dipalmitoil fosfatidil glicerol) e capsaicina/DPPG/ergosterol. A isotermas de pressão de superfície vs área por molécula se mostraram mais expandidas quando a subfase continha oleoresina de capsacina e quando comparada com as de lipídio puro (DPPG), indicando assim, a inserção da capsaicina na monocamada. Em linhas gerais, oleoresina de capsaicina extraída da pimenta Bhut Jolokia mostrou-se mais eficiente em todos os aspectos se comparada com as pimentas Red Savina e Malagueta, marcando, assim, uma potencialidade para uso como preservante natural de madeiras. / The present study evaluated the effectiveness of capsaicin oleoresin extracted from Malagueta, Red Savina and Bhut Jolokia peppers in the surface treatment of Pinus sp. with moisture contents of 12% and 0%. The samples were submitted to the attack of Paecilomyces variotti and Pycnoporus sanguineus fungus. A synthetic wood preservative, that is commercially known as stain, was used to compare the effectiveness of natural preservatives based on capsaicin oleoresin. From contact angle measurements for wood surfaces treated with capsaicin oleoresin, it was obtained that Bhut Jolokia pepper and stain preservatives have provided worse wettability for wood samples at both moisture contents. The preservative treatment caused a decrease in the surface energy when compared to the samples without preservative treatment due to polar and dispersive contributions. Statistical analysis for the results by using the Tukey method showed that there is not a group of results that are statistically equivalent to those obtained for the control samples (without treatment). Pinus sp. samples at a moisture content of 0% showed to be more surface protected after being modified with the oleoresin extracted from Bhut Jolokia; the same effect was observed statistically for stain. The Langmuir technique was used to better understand interactions among capsaicin/ergosterol, capsaicin/DPPG (dipalmitoyl phosphatidyl glycerol) and capsaicin/DPPG/ergosterol. Surface pressure vs. area per molecule isotherms appeared to be even more extended when the subphase contained capsaicin oleoresin instead of pure lipid (DPPG), thus indicating the inclusion of capsaicin into the monolayer. In general, the capsaicin oleoresin extracted from Bhut Jolokia proved to be more efficient in all the aspects of characterization when compared to Red Savina and Malagueta highlighting its potential for use as a natural wood preservative.

Nesse estudo, utilizamos a oleoresina de capsaicina, extraído da pimenta Malagueta (Capsicum frutensens) e da pimenta Dedo-de-moça (Capsicum baccatum), para a preservação de amostras de madeira contra o ataque do fungo Paecilomyces variotti. Os preservantes naturais foram aplicados em corpos de prova de madeiras do gênero Pinus sp. e Hymenae sp. (Jatobá) com as dimensões 5,0 x 3,0 x 1,0 (cm). A seguir, esses corpos de prova foram expostos ao fungo para o acompanhamento do seu desenvolvimento. As análises mostraram que o preservante natural retardou o crescimento do fungo, sendo a oleoresina de capsaicina extraído da pimenta Malagueta a mais eficiente se comparada à oleoresina extraída da pimenta Dedo-de-moça e ao óleo de linhaça. A partir da medida de ângulo de contato observou-se que o preservante de oleoresina da pimenta Malagueta proporcionava uma maior molhabilidade para as duas espécies de madeiras. A técnica de FTIR-ATR indicou que os preservantes não modificaram a estrutura das madeiras e a análise de raios X revelou que o desenvolvimento do fungo provocou uma perda de estabilidade e periodicidade nas estruturas das madeiras. Através do teste de proporção utilizado para a análise do desenvolvimento do fungo, comprovou-se estatisticamente que o seu crescimento foi menor para as amostras com os preservantes das pimentas. Pelo MEV foi possível visualizar as estrutura de hifas do fungo sobre a madeira. E a perda de massa para ambas as espécies de madeiras foram menores quando foram utilizados os preservantes, sendo o Pinus a espécie que sofreu maior degradação. / In this study, were used the oleoresin capsaicin, extracted from Capsicum frutensens and Capsicum baccatum, for the preservation of wood samples against the attack of the Paecilomyces variotti fungus. The natural preservatives were applied to Pinus sp. and Hymenaea sp. (Jatobá) specimens with the dimensions 5.0 x 3.0 x 1.0 (cm). Subsequently, these specimens were exposed to fungus and their development was monitored. . Analyses showed that the natural preservative slowed the growth of the fungus. Action of the oleoresin capsaicin extracted from Chilli pepper is the most efficient when compared to pepper oleoresin extracted from Capsicum frutensens and Capsicum baccatum and also with the linseed oil. The contact angle measured showed that the preservative of Oleoresin Chilli Pepper offered a higher wettability for both wood species. FTIR-ATR technique indicated that the preservatives did not change wood structure and X-ray analysis revealed that the development of the fungus caused a loss of stability and periodicity in the wood structures. At proportion test to analyze the development of the fungus, it was shown statistically that their growth was lower for the samples with preservatives peppers. It was possible to visualize the hyphae structure by scanning electronic microscopy technique. Mass loss of both wood specie was lower when preservative was used, and Pine species was more degraded.

O câncer é o segundo grupo de doenças que mais mata em todo o mundo, atrás apenas das doenças cardiovasculares. No Brasil, esse panorama é preocupante devido ao período de acentuada tendência de envelhecimento, fase etária de maior incidência do câncer. Neste contexto, a atual terapia antineoplásica continua apresentando diversos vieses quanto à toxicidade e seletividade. Muitos dos fármacos empregados na clínica médica são de origem natural, ou tiveram em suas etapas iniciais de desenvolvimento, correlação com produtos naturais, enaltecendo a importância de fontes naturais no desenvolvimento de novos compostos bioativos. A capsaicina, substância responsável pela pungência apresentada pelos frutos de pimenteiras do gênero Capsicum, tem se mostrado um importante agente natural com atividade citotóxica à diversas linhagens neoplásicas, porém, sua ação pungente e baixa estabilidade físico-química, limitam seu emprego terapêutico. Com isso, a capsaicina apresenta grande potencial em servir como arcabouço para o planejamento de novas entidades químicas bioativas, análogas à mesma, para emprego no tratamento do câncer. Este trabalho propôs-se a planejar e sintetizar análogos sulfonamídicos e sulfonatos da capsaicina, promovendo variações moleculares no núcleo estrutural capsaicinóide. Após síntese em única etapa, os análogos foram obtidos e caracterizados por faixa de fusão, RMN 1H/13C e análise elementar. Posteriormente os compostos foram submetidos a ensaio de citotoxicidade nas linhagens tumorais: MDA-MB-231 e MCF-7 (de câncer de mama), B16-F10 (melanoma murino) e sobre linhagens sadias de fibroblasto (3T3), pelo método de avaliação da viabilidade celular por biorredução do sal de tetrazólio, o MTT. Quatro compostos apresentaram atividade biológica interessante, em concentrações micromolares (µM) iferiores à atividade apresentada pela capsaicina, destacando-se os compostos RPF-101 e RPF-151, os mais ativos e que tiveram seus mecanismos de indução de morte investigados. Estudos teóricos subsequentes realizados com os análogos de maior atividade (RPF-101 e RPF-151), revelaram que as modificações moleculares promovidas nas estruturas dos mesmos conferiram maior caráter hidrofílico e maior momento de dipolo, o que pode estar relacionado com o incremento na atividade biológica de ambos. A avaliação dos compostos ativos frente às propriedades constantes na Regra dos Cinco de Lipinski (RO5) revelou que estes respeitam todos os parâmetros da regra, enaltecendo assim o caráter druglikeness dos mesmos, em serem ativos via administração oral, visto que o RPF151 não apresentou ação pungente in vivo. A obtenção dos compostos RPF-101 e RPF-151 indicam o sucesso alcançado com a otimização estrutural promovida no arcabouço capsaicinóide, e enaltece o potencial destes análogos em inspirar o planejamento de novas estruturas, ainda mais otimizadas, que possuam maior potência e menor toxicidade associada. / Cancer is the second most lethal group of diseases all over the world, just behind cardiovascular diseases. This scenery is worrying in Brazil due the pronounced aging trend observed, that presents the higher incidence of cancer. In this context, the current anticancer therapy still have several biases regarding toxicity and selectivity. Many current medicines correlate to natural products, even in its early stages of development, which highlight the importance of natural sources in the design of new bioactive compounds. Capsaicin is the substance responsible for the pungency of Capsicum genus\' chili peppers. Capsaicin has been shown as an important natural agent because of its cytotoxic activity against several tumor cell lines. However, the pungency and poor stability presented by capsaicin restricts its therapeutic employments. Thus, the capsaicinoid scaffold has a great potential to inspire the design of new bioactive analog entities to be employed in anticancer therapy. This project aimed at designing and synthesizing sulfonamide and sulfonate analogues of capsaicin, performing molecular changes on capsaicinoid core. After a single step synthesis, the analogues were purified and characterized by melting point, 1H/13C NMR and elementary analysis. Subsequently, cytotoxicity assays were performed by MTT method on tumor cell lines MDA-MB-231 and MCF-7 (breast cancer), B16-F10 (murine melanoma) and on healthy fibroblast (3T3). Four compounds showed interesting biological activity at micromolar concentrations (µM) and their IC50 were lower than that presented by capsaicin. The most active compounds, RPF-101 and RPF-151, had their death induction mechanisms investigated. In silico subsequent studies with the most active compounds (RPF-101 and RPF-151) showed that molecular changes promoted on each one increased their hydrophilicity and raised their dipole moment, which may be related to the improvement on biological activity of both. The evaluation of active compounds for Lipinski´s Rule of Five (RO5) properties revealed that they respect all properties presenting its druglikeness for oral administration since RPF151 did not presented in vivo pungency. The RPF-101 and RPF-151 indicate the success obtained by the structural optimization promoted on capsaicinoid scaffold and emphasizes the potential of these analogues to inspire the designing of new future optimized structures, with greater potency and less associated toxicity.

Foram desenvolvidos três experimentos para avaliação de uma mistura de extratos vegetais de orégano, pimenta e canela na produção de frangos de corte: Experimento I - Utilizou-se 320 pintos machos de um dia de idade da linhagem Cobb 500, distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualisado com quatro tratamentos (0, 75, 150 e 225 ppm de extratos vegetais) com dez repetições de oito aves cada, criadas até 21 dias para determinação da digestibilidade dos nutrientes das dietas, pela metodologia de coleta do conteúdo ileal. Experimento II - Utilizou-se 600 pintos machos de um dia de idade da linhagem Cobb 500, distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualisado com cinco tratamentos (Controle Positivo (CP) com 54 ppm de Bacitracina de Zinco; Controle Negativo (CN) sem aditivos melhoradores de desempenho; CN com a adição de 75 ppm; 150 ppm e 225 ppm de extratos vegetais) com dez repetições de doze aves cada para avaliação de desempenho e características de carcaça. Experimento III - Utilizou-se 600 pintos machos de um dia de idade da linhagem Cobb 500, distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualisado com cinco tratamentos (Controle Positivo (CP) com 54 ppm de Bacitracina de Zinco; Controle Negativo (CN) sem aditivos melhoradores de desempenho; CP até 33 dias e posteriormente substituído pelo CN, no período de 34 a 42 dias de idade, com a adição de 75 ppm; 150 ppm e 225 ppm de extratos vegetais) com dez repetições de doze aves cada para avaliação de desempenho e características. Todos os dados foram analisados pelo Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2008), submetidos à análise de regressão polinomial pelo procedimento GLM ao nível de 5% de significância. No experimento I, não foi observado efeito significativo entre os tratamentos para digestibilidade ileal da energia bruta, e a digestibilidade ileal da proteína bruta e dos aminoácidos apresentou efeito quadrático (P<0,05). No experimento II o consumo de ração não apresentou efeito significativo entre os tratamentos, já para ganho de peso e conversão alimentar foi observado efeito significativo (P<0,05) na comparação entre o antibiótico e os níveis de extratos vegetais adicionados a dieta. No experimento III, não foi observado efeito significativo entre os tratamentos para consumo de ração e ganho de peso, mas a conversão alimentar apresentou efeito significativo (P<0,05) na comparação entre o antibiótico e os níveis de extratos vegetais adicionados a dieta. Nos experimentos II e III, para as características de carcaça não foram observados efeitos significativos (P<0,05) entre os tratamentos. Concluiu-se que a inclusão de uma mistura de extratos vegetais de orégano, pimenta e canela na dieta de frangos de corte em substituição aos aditivos melhoradores de desempenho proporcionou maior digestibilidade ileal da proteína bruta e dos aminoácidos, e de acordo com os níveis praticados, os extratos vegetais não proporcionaram efeitos positivos no desempenho quando comparados com o tratamento com antibiótico, no período total de criação. Entretanto, o fornecimento na fase final apresentou um comportamento diferente, melhorando o rendimento de peito. / We developed three experiments to evaluate a mixture of herbal extracts of oregano, pepper and cinnamon in the production of broilers: Experiment I - was used 320 male chicks from one day old Cobb 500, distributed in completely randomized design with four treatments (0, 75, 150 and 225 ppm of plant extracts) with ten replicates of eight birds each, created up to 21 days to determine the nutrient digestibility of diets, the collection methodology of the ileal content. Experiment II - was used 600 male chicks from one day old Cobb 500, distributed in completely randomized design with five treatments (Positive Control (PC) with 54 ppm Bacitracin Zinc; Negative Control (NC) without enhancing additives performance; CN with the addition of 75 ppm, 150 ppm and 225 ppm of plant extracts) with ten replicates of twelve chicks each to assess performance and carcass characteristics. Experiment III - was used 600 male chicks from one day old Cobb 500, distributed in completely randomized design with five treatments (Positive Control (PC) with 54 ppm Bacitracin Zinc; Negative Control (NC) without enhancing additives performance; CP up to 33 days and subsequently replaced by CN, from 34 to 42 days of age, with the addition of 75 ppm, 150 ppm and 225 ppm plant extracts), with ten replicates of twelve chickens each for performance evaluation and characteristics. All data were analyzed using Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2008), submitted to polynomial regression analysis by GLM procedure at the 5% level of significance. In the first experiment, no significant effect was observed between treatments for ileal digestibility of raw energy and ileal digestibility of crude protein and amino acids showed a quadratic effect (P <0.05). In experiment II feed intake had no significant effect between treatments, as for weight gain and feed conversion was no significant effect (P <0.05) in the comparison between the antibiotic and the levels of plant extracts added to the diet. In experiment III, no significant effect was observed between treatments for feed intake and weight gain, feed conversion but significant effect (P <0.05) in the comparison between the antibiotic and the levels of plant extracts added to the diet. In experiments II and III, for carcass traits were not significant effects (P <0.05) among treatments. It was concluded that the inclusion of a mixture of herbal extracts of oregano, pepper and cinnamon in the diet of broilers in place of performance enhancing additives provided higher ileal digestibility of crude protein and amino acids, and according to the levels prevailing, vegetable extracts yielded no positive effect on performance when compared with the antibiotic treatment, the total periods. However, the provision in the final phase showed a different behavior by improving the yield of breast.

A Síndrome de Ardência Bucal (SAB) caracteriza - se por sensação de ardor, com ausência de sinais clínicos ou laboratoriais associados. A etiopatogenia é desconhecida, inexistindo protocolo terapêutico satisfatório. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia da aplicação tópica de capsaicina, como alternativa terapêutica, em um grupo de pacientes portadores da SAB, além de investigar, nessa população, indicativos de ansiedade e depressão, correlacionando estes últimos aspectos com a resposta à terapêutica aplicada. Constituiu-se um grupo de vinte indivíduos portadores da síndrome, todos de acordo com os termos do consentimento esclarecido. Quinze sujeitos constituíram o grupo teste (GT) e foram tratados com capsaicina, em aplicações diárias, durante três semanas, repetindo-se o ciclo por quatro semanas após uma semana de intervalo. O grupo controle (GC) foi tratado com o creme base utilizado como veículo da capsaicina, durante o mesmo período. Ambos foram controlados após 30 dias do término da medicação. A evolução dos sintomas foi controlada por escala visual de sintomatologia (EVS) e questionário acerca do efeito global percebido (EGP). A intensidade média do sintoma de ardência antes do início dos ciclos de tratamento, mensurado pela EVS, foi de 5,1 (GT) e 4,4 (GC). Ao final da quarta semana o GT mostrou redução dos sintomas (EVS=3,6), enquanto o GC declarou aumento da sintomatologia (EVS=4,8). No GT, entre a quarta e a oitava semana houve redução dos sintomas da ordem de 8,3%, e entre a oitava e a décima segunda semana observou-se aumento de 13,5% da sintomatologia. No GC houve 22.8% de piora (EVS=5,75) entre o início e a décima segunda semana. Ao EGP houve pelo menos algum alívio do sintoma em seis pacientes (40%) do GT e em um paciente do GC (20%). Quatro pacientes (26,6%) reportaram remissão total do sintoma após tratamento com capsaicina e um paciente (20%) do controle. Para três pacientes do GT e dois do GC não houve modificações do sintoma. Houve relato de piora em dois pacientes (13,3%) do GT e um (20%) do GC. Oito pacientes do GT apresentaram alto nível de ansiedade e sete níveis médios. No GC um paciente apresentou nível baixo, três mostraram valores médios e um classificou-se como alto. Ao CES-D valores indicativos de depressão foram registrados por dez pacientes (66,6%) do GT e 40% (02) do GC. Concluímos que a capsaicina apresentou efetividade no controle da sintomatologia da SAB, parecendo haver correlação com a intensidade inicial de sintomas e manutenção do uso do medicamento. Além disso, houve correlação entre alto nível de ansiedade e indicativos de depressão, embora não se tenha percebido influência destes aspectos sobre a resposta terapêutica. / Burning mouth syndrome (BMS) is characterized by an oral burning sensation, with no corresponding clinical signs or laboratory abnormalities. The etiology is unknown, and there was no satisfactory treatment available. The objective of this study was to evaluate the effectiveness of topical use of capsaicin, as an alternative therapy in a group of BMS patients, as well as to correlate anxiety and depression levels to response to the therapy applied. Twenty BMS individuals in accordance to the terms to informed consent comprised the study group. Fifteen subjects were allocated to the test group (TG) and were treated with capsaicin, in daily applications for three weeks, one-week interval and an additional treatment cycle of four weeks. The control group (CG) was treated with the cream base used as a vehicle of capsaicin preparation, during the same period. All patients were examined 30 days after discontinuation of the medication. Results were assessed through a visual analogue scale (VAS) and a questionnaire on the global perceived effect (GPE). The average symptoms intensity before treatment, on EVS, was 5.1 (TG) and 4.4 (CG). At the fourth week control, TG presented reduction on the level of symptoms (EVS = 3.6), while CG presented an increase of symptoms intensity (VAS = 4.8). In the TG, between fourth and eighth week of follow-up, symptoms decreased around 8.3%, and between the eighth and twelfth week there was an increase of 13.5% on symptoms intensity. In the CG it was registered 22.8% of worsening (EVS = 5.75) between the beginning of the study and the twelfth week of control. On GPE assessment, six patients (40%) of TG and one patient of CG (20%), presented some relief of symptoms; four patients TG (26.6%) reported total remission of symptoms after treatment with capsaicin and one patient (20%) of control; three patients of TG and two of the CG remained unaltered. There were reports of worsening in two patients (13.3%) of TG and one (20%) of the CG. Eight patients of TG showed a high level of anxiety and seven moderate levels. In CG one patient presented low level, three showed a moderate level and one was ranked as having a high level of anxiety. CES-D suggested traits of depression in ten patients (66.6%) of TG and 40% (2) of the CG. We concluded that capsaicin is effective in controlling the burning symptom of BMS, suggesting some correlation with initial symptoms intensity and the maintenance of drug use. Moreover, there was some correspondence between high levels of anxiety and traits of depression, but it was not perceived influence of these aspects to the therapeutic response.

O câncer é o segundo grupo de doenças que mais mata em todo o mundo, atrás apenas das doenças cardiovasculares. No Brasil, esse panorama é preocupante devido ao período de acentuada tendência de envelhecimento, fase etária de maior incidência do câncer. Neste contexto, a atual terapia antineoplásica continua apresentando diversos vieses quanto à toxicidade e seletividade. Muitos dos fármacos empregados na clínica médica são de origem natural, ou tiveram em suas etapas iniciais de desenvolvimento, correlação com produtos naturais, enaltecendo a importância de fontes naturais no desenvolvimento de novos compostos bioativos. A capsaicina, substância responsável pela pungência apresentada pelos frutos de pimenteiras do gênero Capsicum, tem se mostrado um importante agente natural com atividade citotóxica à diversas linhagens neoplásicas, porém, sua ação pungente e baixa estabilidade físico-química, limitam seu emprego terapêutico. Com isso, a capsaicina apresenta grande potencial em servir como arcabouço para o planejamento de novas entidades químicas bioativas, análogas à mesma, para emprego no tratamento do câncer. Este trabalho propôs-se a planejar e sintetizar análogos sulfonamídicos e sulfonatos da capsaicina, promovendo variações moleculares no núcleo estrutural capsaicinóide. Após síntese em única etapa, os análogos foram obtidos e caracterizados por faixa de fusão, RMN 1H/13C e análise elementar. Posteriormente os compostos foram submetidos a ensaio de citotoxicidade nas linhagens tumorais: MDA-MB-231 e MCF-7 (de câncer de mama), B16-F10 (melanoma murino) e sobre linhagens sadias de fibroblasto (3T3), pelo método de avaliação da viabilidade celular por biorredução do sal de tetrazólio, o MTT. Quatro compostos apresentaram atividade biológica interessante, em concentrações micromolares (&#181;M) iferiores à atividade apresentada pela capsaicina, destacando-se os compostos RPF-101 e RPF-151, os mais ativos e que tiveram seus mecanismos de indução de morte investigados. Estudos teóricos subsequentes realizados com os análogos de maior atividade (RPF-101 e RPF-151), revelaram que as modificações moleculares promovidas nas estruturas dos mesmos conferiram maior caráter hidrofílico e maior momento de dipolo, o que pode estar relacionado com o incremento na atividade biológica de ambos. A avaliação dos compostos ativos frente às propriedades constantes na Regra dos Cinco de Lipinski (RO5) revelou que estes respeitam todos os parâmetros da regra, enaltecendo assim o caráter druglikeness dos mesmos, em serem ativos via administração oral, visto que o RPF151 não apresentou ação pungente in vivo. A obtenção dos compostos RPF-101 e RPF-151 indicam o sucesso alcançado com a otimização estrutural promovida no arcabouço capsaicinóide, e enaltece o potencial destes análogos em inspirar o planejamento de novas estruturas, ainda mais otimizadas, que possuam maior potência e menor toxicidade associada. / Cancer is the second most lethal group of diseases all over the world, just behind cardiovascular diseases. This scenery is worrying in Brazil due the pronounced aging trend observed, that presents the higher incidence of cancer. In this context, the current anticancer therapy still have several biases regarding toxicity and selectivity. Many current medicines correlate to natural products, even in its early stages of development, which highlight the importance of natural sources in the design of new bioactive compounds. Capsaicin is the substance responsible for the pungency of Capsicum genus\' chili peppers. Capsaicin has been shown as an important natural agent because of its cytotoxic activity against several tumor cell lines. However, the pungency and poor stability presented by capsaicin restricts its therapeutic employments. Thus, the capsaicinoid scaffold has a great potential to inspire the design of new bioactive analog entities to be employed in anticancer therapy. This project aimed at designing and synthesizing sulfonamide and sulfonate analogues of capsaicin, performing molecular changes on capsaicinoid core. After a single step synthesis, the analogues were purified and characterized by melting point, 1H/13C NMR and elementary analysis. Subsequently, cytotoxicity assays were performed by MTT method on tumor cell lines MDA-MB-231 and MCF-7 (breast cancer), B16-F10 (murine melanoma) and on healthy fibroblast (3T3). Four compounds showed interesting biological activity at micromolar concentrations (&#181;M) and their IC50 were lower than that presented by capsaicin. The most active compounds, RPF-101 and RPF-151, had their death induction mechanisms investigated. In silico subsequent studies with the most active compounds (RPF-101 and RPF-151) showed that molecular changes promoted on each one increased their hydrophilicity and raised their dipole moment, which may be related to the improvement on biological activity of both. The evaluation of active compounds for Lipinski´s Rule of Five (RO5) properties revealed that they respect all properties presenting its druglikeness for oral administration since RPF151 did not presented in vivo pungency. The RPF-101 and RPF-151 indicate the success obtained by the structural optimization promoted on capsaicinoid scaffold and emphasizes the potential of these analogues to inspire the designing of new future optimized structures, with greater potency and less associated toxicity.

Foram desenvolvidos três experimentos para avaliação de uma mistura de extratos vegetais de orégano, pimenta e canela na produção de frangos de corte: Experimento I - Utilizou-se 320 pintos machos de um dia de idade da linhagem Cobb 500, distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualisado com quatro tratamentos (0, 75, 150 e 225 ppm de extratos vegetais) com dez repetições de oito aves cada, criadas até 21 dias para determinação da digestibilidade dos nutrientes das dietas, pela metodologia de coleta do conteúdo ileal. Experimento II - Utilizou-se 600 pintos machos de um dia de idade da linhagem Cobb 500, distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualisado com cinco tratamentos (Controle Positivo (CP) com 54 ppm de Bacitracina de Zinco; Controle Negativo (CN) sem aditivos melhoradores de desempenho; CN com a adição de 75 ppm; 150 ppm e 225 ppm de extratos vegetais) com dez repetições de doze aves cada para avaliação de desempenho e características de carcaça. Experimento III - Utilizou-se 600 pintos machos de um dia de idade da linhagem Cobb 500, distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualisado com cinco tratamentos (Controle Positivo (CP) com 54 ppm de Bacitracina de Zinco; Controle Negativo (CN) sem aditivos melhoradores de desempenho; CP até 33 dias e posteriormente substituído pelo CN, no período de 34 a 42 dias de idade, com a adição de 75 ppm; 150 ppm e 225 ppm de extratos vegetais) com dez repetições de doze aves cada para avaliação de desempenho e características. Todos os dados foram analisados pelo Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2008), submetidos à análise de regressão polinomial pelo procedimento GLM ao nível de 5% de significância. No experimento I, não foi observado efeito significativo entre os tratamentos para digestibilidade ileal da energia bruta, e a digestibilidade ileal da proteína bruta e dos aminoácidos apresentou efeito quadrático (P<0,05). No experimento II o consumo de ração não apresentou efeito significativo entre os tratamentos, já para ganho de peso e conversão alimentar foi observado efeito significativo (P<0,05) na comparação entre o antibiótico e os níveis de extratos vegetais adicionados a dieta. No experimento III, não foi observado efeito significativo entre os tratamentos para consumo de ração e ganho de peso, mas a conversão alimentar apresentou efeito significativo (P<0,05) na comparação entre o antibiótico e os níveis de extratos vegetais adicionados a dieta. Nos experimentos II e III, para as características de carcaça não foram observados efeitos significativos (P<0,05) entre os tratamentos. Concluiu-se que a inclusão de uma mistura de extratos vegetais de orégano, pimenta e canela na dieta de frangos de corte em substituição aos aditivos melhoradores de desempenho proporcionou maior digestibilidade ileal da proteína bruta e dos aminoácidos, e de acordo com os níveis praticados, os extratos vegetais não proporcionaram efeitos positivos no desempenho quando comparados com o tratamento com antibiótico, no período total de criação. Entretanto, o fornecimento na fase final apresentou um comportamento diferente, melhorando o rendimento de peito. / We developed three experiments to evaluate a mixture of herbal extracts of oregano, pepper and cinnamon in the production of broilers: Experiment I - was used 320 male chicks from one day old Cobb 500, distributed in completely randomized design with four treatments (0, 75, 150 and 225 ppm of plant extracts) with ten replicates of eight birds each, created up to 21 days to determine the nutrient digestibility of diets, the collection methodology of the ileal content. Experiment II - was used 600 male chicks from one day old Cobb 500, distributed in completely randomized design with five treatments (Positive Control (PC) with 54 ppm Bacitracin Zinc; Negative Control (NC) without enhancing additives performance; CN with the addition of 75 ppm, 150 ppm and 225 ppm of plant extracts) with ten replicates of twelve chicks each to assess performance and carcass characteristics. Experiment III - was used 600 male chicks from one day old Cobb 500, distributed in completely randomized design with five treatments (Positive Control (PC) with 54 ppm Bacitracin Zinc; Negative Control (NC) without enhancing additives performance; CP up to 33 days and subsequently replaced by CN, from 34 to 42 days of age, with the addition of 75 ppm, 150 ppm and 225 ppm plant extracts), with ten replicates of twelve chickens each for performance evaluation and characteristics. All data were analyzed using Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2008), submitted to polynomial regression analysis by GLM procedure at the 5% level of significance. In the first experiment, no significant effect was observed between treatments for ileal digestibility of raw energy and ileal digestibility of crude protein and amino acids showed a quadratic effect (P <0.05). In experiment II feed intake had no significant effect between treatments, as for weight gain and feed conversion was no significant effect (P <0.05) in the comparison between the antibiotic and the levels of plant extracts added to the diet. In experiment III, no significant effect was observed between treatments for feed intake and weight gain, feed conversion but significant effect (P <0.05) in the comparison between the antibiotic and the levels of plant extracts added to the diet. In experiments II and III, for carcass traits were not significant effects (P <0.05) among treatments. It was concluded that the inclusion of a mixture of herbal extracts of oregano, pepper and cinnamon in the diet of broilers in place of performance enhancing additives provided higher ileal digestibility of crude protein and amino acids, and according to the levels prevailing, vegetable extracts yielded no positive effect on performance when compared with the antibiotic treatment, the total periods. However, the provision in the final phase showed a different behavior by improving the yield of breast.

Orientador: Guilherme Antonio Moreira de Barros / Banca: Norma Sueli Pinheiro Módolo / Banca: Manoell Lima de Menezes / Banca: Efigênia Queiroz de Santana / Banca: Francisco Otero Espinar / Resumo: Introdução e Objetivo: a síndrome de dor miofascial (SDM) é uma das causas mais comuns de dor musculoesquelética. Esta dor pode se originar em um único músculo e, eventualmente, pode envolver múltiplos músculos gerando padrões complexos e variáveis de sintomas dolorosos. Nesta pesquisa, utilizou-se a capsaicina em alta concentração, produto natural obtido da pimenta vermelha e que há muito é empregada para o alívio da dor, como alternativa ao tratamento da SDM. Assim, o objetivo deste estudo foi desenvolver e avaliar a possível ação analgésica de uma forma farmacêutica semi-sólida (creme) de capsaicina 8% em pacientes com síndrome de dor miofascial. Paralelamente avaliou-se a ocorrência de efeitos de intolerância cutânea relacionados ao emprego tópico da capsaicina, bem como as concentrações de capsaicina plasmática e finais, após 10 meses de manufatura, nas formulações. Material e Métodos: foram desenvolvidas as formulações Fc1 (fórmula creme base) e Fc2 (fórmula creme base + capsaicina 8%). As mesmas foram submetidas aos ensaios microbiológicos, físicos e químicos para avaliação da qualidade, conforme preconizado pela ANVISA. Este estudo prospectivo e randomizado foi desenvolvido no Serviço de Terapia Antálgica e Cuidados Paliativos (TACP) da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP. Os 40 pacientes participantes foram alocados em dois grupos, Fc1 e Fc2. Sempre em âmbito hospitalar, os cremes foram administrados topicamente, conforme o grupo, com o emprego prévio de anestésico local tópico por 50 minutos. Para tal, escolheu-se o pontogatilho (PG) que mais provocava desconforto e dor à palpação para a aplicação tópica das formulações na quantidade de 10 g em área delimitada de aproximadamente 24 mm e superficialmente a este ponto. Após 30 minutos da aplicação o produto foi retirado, tendo sido avaliados os parâmetros de tolerabilidade à pele. A dor foi quantificada imediatamente,... / Abstract: Background and Objective: myofascial pain syndrome (MPS) is one of the most common causes of musculoskeletal pain. This pain may originate in a single muscle and eventually may involve multiple muscles generating complex patterns and variable painful symptoms. In this study capsaicin, a natural product obtained from red pepper, was formulated in a high concentration. Capsaicin, which has long been used for the management of pain, was tested as an alternative to the management of the MPS. The objective of this study was to develop and evaluate the potential analgesic action of a semi-solid formulation (cream) containing capsaicin 8% on myofascial pain syndrome patients. At the same time we evaluated the occurrence of cutaneous side effects related to the topic use of capsaicin, as well as the plasma capsaicin concentrations result of its use. Also the residual capsaicin concentration was tested in the formulations after 10 months of manufacturing. Methods: two formulations were developed: Fc1 (based cream formula) and Fc2 (cream formula base + capsaicin 8%). The formulations were submitted to microbiological tests, physical and chemical quality evaluation, as recommended by ANVISA. This prospective, randomized study was conducted in Pain Management and Palliative Care Service (TACP), Botucatu, Botucatu Medical School, UNESP. The 40 participating patients were assigned into two groups, Fc1 and Fc2. The clinical tests were carried out at the hospital; the creams were administered topically, as per assigned group, with the prior use of topical local anesthetic for 50 minutes. The trigger point (PG) that aroused more discomfort and pain on palpation was chosen for topical application of the formulations (10 g) in an enclosed area of about 24 mm and above this point. After 30 minutes the product was removed and parameters of the skin tolerability were evaluated. The pain was measured immediately before and during application of the ... / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) is relevant to the perception of noxious information and has been studied as a therapeutic target for the development of new analgesics. The goal of this study was to perform in vivo and in vitro screens to identify novel, efficacious, and safe TRPV1 antagonists isolated from leaves of the medicinal plant Vernonia tweedieana Baker. All of the fractions and the hydroalcoholic extract produced antinociception in mice during the capsaicin test, but the dichloromethane fraction (Dcm) also had antioedematogenic effect. Among the compounds isolated from the Dcm fraction, only α-spinasterol reduced the nociception and oedema induced by capsaicin injection. Moreover, α-spinasterol demonstrated good oral absorption and high penetration into the brain and spinal cord of mice. Besides, α-spinasterol was able to displace [3H]-resiniferatoxin (RTX) binding and diminish calcium (Ca2+) influx mediated by capsaicin. Orally administration of the Dcm fraction and α-spinasterol also produced antinociceptive effect in the noxious heat-induced nociception test; however, they did not change the mechanical threshold of naive mice. The treatment with α-spinasterol did not produce antinociceptive effect in mice systemically pre-treated with RTX. In addition, α- spinasterol and the Dcm fraction also reduced the oedema, mechanical and heat hyperalgesia elicited by complete Freund s adjuvant (CFA) paw injection. The Dcm fraction and α-spinasterol did not affect body temperature or locomotor activity. In conclusion, α-spinasterol is an efficacious and safe antagonist of the TRPV1 receptor with antinociceptive effect. / O receptor de potencial transitório vanilóide 1 (TRPV1) é relevante para a percepção de estímulos nocivos e tem sido estudado como um alvo terapêutico para o desenvolvimento de novos analgésicos. O objetivo deste estudo foi desenvolver uma triagem in vivo e in vitro para caracterizar novos antagonistas do receptor TRPV1 isolados das folhas de Vernonia Tweedieana Baker, uma planta medicinal, com atividade antinociceptiva em camundongos. Todas as frações e o extrato hidroalcólico apresentaram efeito antinociceptivo no teste da capsaicina, sendo que a fração diclorometano (Dcm) também mostrou efeito antiedematogênico. Entre os compostos isolados da fração Dcm, apenas o α-espinasterol reduziu a nocicepção e o edema induzidos pela injeção intraplantar de capsaicina. Além disso, o α- espinasterol foi capaz de deslocar o radioligante [3H]-resiniferatoxina, e também de diminuir o influxo de cálcio estimulado pela capsaicina. A fração Dcm e o composto α-espinasterol apresentaram efeito anti-hiperalgésico na nocicepção induzida por estímulo térmico, mas não induzida por estímulo mecânico em animais sem injúria. Porém, o composto α-espinasterol não apresentou atividade antinociceptiva em animais pré-tratados sistemicamente com resiniferatoxina. Este composto e a fração Dcm foram capazes de reduzir a hiperalgesia mecânica e térmica, e também o edema induzidos por adjuvante completo de Freund. A fração Dcm e o α- espinasterol não foram capazes de induzir alteração na temperatura corporal ou atividade locomotora. Também, o α-espinasterol mostrou boa absorção por via oral, e alta penetração no cérebro e na medula espinhal de camundongos. Assim, o α- espinasterol, isolado da fração Dcm, age como um antagonista do receptor TRPV1 com eficaz efeito antinociceptivo, sem indução de efeitos adversos.