O gênero Acinetobacter tem emergido como um importante patógeno nosocomial que apresenta, não apenas resistência intrínseca a muitos antimicrobianos, como também uma grande habilidade de adquirir novos mecanismos de resistência. É de grande importância o conhecimento da epidemiologia local dos isolados para que se possa estabelecer o melhor tratamento a ser adotado e as medidas de controle epidemiológico mais adequadas para evitar a disseminação destes microrganismos. O objetivo deste trabalho foi de comparar isolados de Acinetobacter spp. provenientes de amostras clínicas e de efluente hospitalar quanto ao perfil de suscetibilidade a antimicrobianos e a presença de genes de resistência aos carbapenêmicos, assim como determinar a relação clonal destes isolados. Para isso isolados clínicos e amostras de efluente hospitalar de cinco hospitais em Porto Alegre, RS, Brasil foram coletadas. Os isolados bacterianos foram identificados como pertencentes ao gênero Acinetobacter através da amplificação do rDNA16S. O perfil de suscetibilidade a antimicrobianos foi avaliado pela técnica de disco-difusão e a presença dos genes blaIMP, blaVIM, blaSPM, blaOXA-23, blaOXA-51 foi analisada por PCR em todos os isolados resistentes a carbapenêmicos. A relação clonal dos isolados foi avaliada pela amplificação de seqüências repetitivas do genoma (ERIC-PCR) e análise de macrorestrição do genoma (PFGE). Foram analisados 577 isolados, sendo 274 clínicos e 303 de efluente hospitalar. Foram encontrados 68% de isolados clínicos e 30% de isolados de efluente multirresistentes. Não foram identificados isolados com genes para metalo-b-lactamases, mas 61,2% dos isolados clínicos e três isolados de efluente hospitalar apresentaram o gene blaOXA-23. O gene blaOXA-51 foi identificado em 84% dos isolados clínicos e 56% de efluente. As técnicas de ERIC-PCR e PFGE indicaram uma disseminação de isolados clones entre os diferentes hospitais analisados, assim como uma similaridade genética entre isolados de efluente hospitalar e isolados clínicos, indicando a disseminação dos últimos através do efluente. / The genus Acinetobacter has emerged as an important nosocomial pathogen that presents not only intrinsic resistance to many antibiotics, but also a great ability to acquire new resistance mechanisms. It is very important to study local epidemiology of bacterial isolates so the best treatment and the most appropriate epidemic control measurements to prevent the spread of these microorganisms can be determined. The aim of this study was to compare isolates of Acinetobacter spp. from clinical specimens and hospital wastewater on their antibiotic susceptibility profile and the presence of resistance genes to carbapenems, as well as to determine the clonal relationship of these isolates. Clinical isolates and hospital wastewater samples from five hospitals in Porto Alegre, RS, Brazil were collected. The isolates were identified as belonging to the genus Acinetobacter by amplification of the rDNA16S. The susceptibility profile was determined by the disk-diffusion method and the presence of the blaIMP, blaVIM, blaSPM, blaOXA-23, blaOXA-51 genes were screened by PCR. The clonal relationship of the isolates was evaluated by amplification of repetitive sequences from the genome (ERIC-PCR) and macrorestriction analysis of the genome (PFGE). We analyzed 577 isolates, where 274 were of clinical origin and 303 from the hospital wastewater samples. We found that 68% of the clinical isolates and 30% of the wastewater isolates were multiresistant. None of the isolates presented genes of metallo-β-lactamase, in other hand, 61.2% of the clinical isolates and three from the hospital wastewater had the gene blaOXA-23. The gene blaOXA-51 was identified in 84% of the clinical isolates and in 56% of the hospital wastewater ones. The PFGE and ERIC-PCR analysis showed a possible dissemination of clones strains among the hospitals studied, and a genetic similarity among the hospital sewage and clinical isolates, indicating their dissemination through the wastewater.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-03T12:11:26Z No. of bitstreams: 1 POLYANA SILVA PEREIRA.pdf: 2183990 bytes, checksum: f5a2198904653af5e6ed94add64d6d4e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T12:11:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 POLYANA SILVA PEREIRA.pdf: 2183990 bytes, checksum: f5a2198904653af5e6ed94add64d6d4e (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Klebsiella pneumoniae é um patógeno Gram-negativo da família Enterobacteriaceae, frequentemente associado às infecções. Isolados clínicos de K. pneumoniae usualmente apresentam resistência a classe dos beta-lactâmicos, devido a produção de carbapenemase do tipo KPC. Além da resistência a todos os beta-lactâmicos disponíveis, a KPC possui alta capacidade de disseminação, pois tem sido descrita em plasmídios associados à transposons (Tn4401). Foi descrita inicialmente nos EUA, e atualmente se tornou uma ameaça global. A sua primeira descrição no Brasil ocorreu em 2006 e desde então sua incidência tem crescido significativamente. Assim, o objetivo desse trabalho foi analisar o polimorfismo genético, determinar o perfil de resistência a antimicrobianos, identificar o plasmídio carreador e a região flanqueadora do gene blaKPC de 165 amostras de K.pneumoniae produtoras de KPC provenientes de doze estados Brasileiros (AL, AM, CE, DF, ES, GO, MG, MA, PE, PI, RJ e SC) no período de 2006 a 2010. A confirmação da produção de KPC e identificação da variante alélica foram realizadas por PCR e sequenciamento. A susceptibilidade aos antimicrobianos foi determinada através de difusão em ágar (CLSI, 2011) e determinação da CIM por Etest® (ANVISA N°1/2010). PFGE e MLST foram utilizados para a análise epidemiológica. Avaliação da região flanqueadora do gene blaKPC foi realizada através de PCR para detecção do Tn4401. A identificação do plasmídio carreador do gene blaKPC foi realizada através de extração plasmidial (Kado e Liu, 1981) e hibridização (Sambrook e Russel, 2001). As amostras foram recuperadas principalmente a partir de sangue (39%) e urina (37%), e todas as cepas produziram KPC-2. Foi observada resistência a ciprofloxacina (95,7%), sulfametoxazol/trimetoprima (84,2%), amicacina (34%) e gentamicina (57%), fosfomicina (7,8%), polimixina B (11%) e tigeciclina (38%). A maioria das cepas se mostrou multirresistente, sendo três resistentes a todas as classes de antimicrobianos testadas. Através de PFGE, encontramos 28 grupos clonais, sendo três mais prevalentes: grupo A (40,6%- ES, RJ, SC e CE); grupo C (23% - CE, DF, MG, GO, PE e RJ); grupo Q (9,7%- AL, ES, DF e PI). Através de MLST, também se observou 28 clones, mostrando boa correlação. Os grupos clonais A/KpRj, C e Q foram designados por MLST como ST437, ST11 e ST340 respectivamente. Através de análise filogenética, observamos três complexos clonais entre nossas amostras: CC11 (ST11, ST340, ST437, ST757, ST855), CC16-17 e CC758-840. O CC11 apresenta grande importância epidemiológica, pois inclui dois STs que têm desempenhado papel de destaque em relação à disseminação do gene blaKPC: ST258 e ST11 (encontrado em nosso trabalho). O gene blaKPC-2 foi encontrado associado ao Tn4401, isoforma “a” em todas as amostras, e associado à plasmídios em 95,3% das amostras. Desses plasmídios, 92% eram de 40kb (IncN) e 8% de 55kb (IncL/M). Dessa forma, acreditamos que em nosso país esteja ocorrendo a disseminação do gene blaKPC tanto devido a dispersão de um mesmo plasmídio de aproximadamente 40kb do grupo de IncN entre cepas de diferentes STs, como também a disseminação de um mesmo complexo clonal (CC11), onde os clones A-KpRJ/ST437 e C/ST11 tem desempenhado importante. / Klebsiella pneumoniae is a Gram-negative pathogen belonging to Enterobacteriaceae family, often associated with infections. Clinical isolates of K. pneumoniae usually show resistance to beta-lactams, due to production of KPC-type carbapenemase. In addition to resistance to all beta-lactams available, this carbapenamase has high capacity to spread, since it has been described in plasmids associated with transposons (Tn4401). KPC was first described in the U.S., and nowadays is considered a global threat. The first description of KPC in Brazil occurred in 2006 and since then its incidence has greatly increased. Thus, the objective of this study was to analyze the genetic polymorphism, determine the antimicrobial resistance profile, and identify the carrier plasmid and the flanking region of the blaKPC gene of 165 KPC-producing K.pneumoniae from twelve Brazilian states (AL, AM, CE, DF, ES, GO, MG, MA, PE, PI, RJ and SC) in the period of years 2006 to 2010. Confirmation of KPC production and identification of the allele variant were performed by PCR and sequencing. The antimicrobial susceptibility was determined by agar diffusion (CLSI, 2011) and MIC determination by Etest® (ANVISA 1/ 2010). PFGE and MLST were used for epidemiological analysis. Evaluation of flanking region surrounding the blaKPC gene was performed by PCR for the detection of Tn4401. The identification of the plasmid carrying the blaKPC gene was performed by plasmid extraction (Kado and Liu, 1981) and hybridization (Sambrook and Russell, 2001). The isolates were mainly recovered from blood (39%) and urine (37%), and all strains produced KPC-2. Resistance was observed to ciprofloxacin (95,7%), sulfamethoxazole/trimethoprim (84.2%), amikacin (34%), gentamicin (57%), fosfomycin (7.8%), polymyxin B (11%) and tigecycline (38%). Most of the strains showed multidrug resistant pattern, and three of them were resistant to all classes of antimicrobials tested. By PFGE, we found 28 clonal groups, three being the most prevalent: group A (40.6% - ES, RJ, SC and EC), group C (23% - CE, DF, MG, GO, RJ and EP); group Q (9.7% - AL, ES, DF and PI). By MLST, we also found 28 profiles, showing good consistency between these two methodologies. The clonal group A/KpRj, C and Q were designated by MLST as ST437, ST11 and ST340 respectively. Phylogenetic analysis showed three clonal complexes: CC11 (ST11, ST340, ST437, ST757, ST855), CC16-17 and CC758-840. The CC11 has great epidemiological importance, because it includes two STs that have been playing a prominent role in the spread of the blaKPC gene: ST258 and ST11 (found in our work). The blaKPC-2 gene was found associated with Tn4401, isoform "a" in all samples, and associated with plasmids in 95.3% of them. Of these plasmids, 92% had 40kb belonging to the IncN group and 8% had 55kb (IncL/M). Thus, we believe that our country is experiencing the spread of the gene blaKPC both associated with the dispersion of a single plasmid of approximately 40kb of the IncN group among strains of different STs, but also by the spread of the same clonal complex (CC11), where the clones A-KpRJ/ST437 and C/ST11 has played an important role.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-31. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:21Z : No. of bitstreams: 1 Publico-189.pdf: 1023260 bytes, checksum: 261ef67ec48667616e34852178c2c07d (MD5) / Objetivo geral: Avaliar o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos carbapenêmicos e ampicilina/sulbactam, e produção de carbapenemases entre isolados clínicos de Acinetobacter spp. provenientes de infecção de corrente sanguinea de pacientes hospitalizados nos centros médicos do Programa de Vigilância SCOPE Brasil, entre junho de 2007 e julho de 2009; Objetivos específicos: (i) avaliar perfil de sensibilidade aos antimicrobianos imipenem, meropenem e ampicilina/sulbactam pelo método de diluição em ágar; (ii) caracterizar a freqüência e tipos de metalo-- lactamases presentes nos isolados resistentes aos carbapenêmicos; (iii) Determinar a freqüência dos genes codificadores de oxacilinases entre os isolados resistentes aos carbapenêmicos.Material e Métodos: Foram avaliadas 206 isolados de Acinetobacter spp. isoladas do primeiro episódio de infecção de corrente sanguínea (ICS) de pacientes hospitalizados em 16 centros médicos de diferentes regiões do país, participantes do isolados foram submetidos a diluição em ágar para imipenem, meropenem e ampicilina/sulbactam para obter a CIM desses antimicrobianos. Os isolados resistentes a imipinem e/ou meropenem foram submetidos à PCR multiplex em tempo real para detecção dos genes codificadores de ML(blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaSPM, blaGIM) e PCR multiplex para detecção de genes codificadores de oxacilinases(blaOXA23-like, blaOXA24-like, blaOXA51-like, blaOXA58-like).Os isolados carreadores de blaIMP foram submetidos ao PFGE. Resultados e Conclusões: As taxas de resistência foram 63% para imipenem (CIM50 64 μg/mL e CIM90 256 μg/mL) e meropenem (CIM50 32 μg/mL e CIM90 256 μg/mL) e 45% para ampicilina/sulbactam (CIM50 8 μg/mL e CIM90 64 μg/mL). Dos 130 isolados submetidos a pesquisa ML 24 (18%) apresentaram o gene blaIMP e para pesquisa de OXA 94 (74%) apresentaram o gene blaOXA23-like e 24(20%) somente o gene blaOXA51-like. As altas taxas de resistência aos carbapenêmicos variaram em relação a região geográfica brasileira. A detecção do gene blaIMP em apenas 24% dos isolados demonsntra não ser este o principal mecanismo de resistência aos carbapenêmicos nesse estudo. Entretanto foi observada disseminação do gene blaOXA23-like em todas as regiões brasileiras,caracterizando o principal mecanismo de resistência frente aos carbapenêmicos. Foi observada disseminação clonal em um hospital em Fortaleza e entre 3 hospitais em São Paulo nos isolados carreadores do gene blaIMP. / Main Objective: To evaluate the susceptibility profile to antibiotics carbapenems and ampicillin/sulbactam, and the carbapenemases production among bloodstream isolates of Acinetobacter spp. from hospitalized patients participating in the SCOPE Program, period of june 2007 to July 2009. Specific objectives: (i) to evaluate the susceptibility to imipenem, meropenem and ampicillin/sulbactam by agar dilution; (ii) to characterize the frequency and types of metalo-B-lactamases in the carbapenem resistant isolates; (iii) to determine the frequency of oxacillinases coding genes among the carbapenem resistant isolates. Material and Methods: 206 isolates from the first blood stream nosocomial infection from 16 medical centers from the 5 regions of the country were susceptibility tested by agar dilution for imipenem, meropenem and ampicillin/sulbactam. The carbapenem resistant isolates were submitted to Real time multiplex PCR for detection of MBL genes (blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaSPM, blaGIM) and oxacillinases coding genes (blaOXA23-like, blaOXA24-like, blaOXA51-like, blaOXA58-like). The isolates carring blaIMP were typed by PFGE . Results and Conclusion: 63% of the isolates were resistant to carbapenems (imipenem CIM50 64 μg/mL e CIM90 256 μg/mL); meropenem (CIM50 32 μg/mL e CIM90 256 μg/mL) and 45% to ampicillin/sulbactam (CIM50 8 μg/mL e CIM90 64 μg/mL). 24 (18%) carbapenem resistant isolates showed blaIMP. 94 (74%) showed blaOXA23 and 26 (20%) showed only blaOXA51. The highest resistant rate to carbapenem was observed in the Northeast region and the lowest rate in the South region. Clonal hospital and inter-hospital dissemination was observed for IMP carring isolates but not among the different regions. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:45Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10789.pdf: 714723 bytes, checksum: 18fda82488f54ec67849c5ef6e1425d6 (MD5) / Pseudomonas aeruginosa é um importante patógeno oportunista em pacientes hospitalizados, particularmente em pacientes oncológicos e que apresentam neutropenia. Uma das principais características desta bactéria é o desenvolvimento de resistência a múltiplos antimicrobianos, incluindo os antibióticos carbapenêmicos. A primeira amostra produtora da metalo-betalactamase (MBL) blaSPM-1 reportada na literatura foi isolada de paciente hospitalizado no Instituto de Oncologia Pediátrica (IOP/GRAACC/UNIFESP) no ano 2000. Objetivo: Avaliar a prevalência de P. aeruginosa resistente aos carbapenêmicos e produtoras de metalo-beta-lactamase, isoladas de hemoculturas coletadas no período de 2000 à 2005 de pacientes admitidos no IOP; caracterizar essas MBLs e avaliar sua disseminação através de tipagem molecular e caracteristicas clínico/epidemiológicas dos pacientes. Métodos: Foram testadas 56 amostras de P. aeruginosa isoladas de 49 pacientes contra 10 antimicrobianos diferentes por disco difusão. As amostras que foram resistentes aos carbapenêmicos foram submetidas a testes fenotípicos (discoaproximação) e genotípicos (PCR) para a confirmação da presença de MBLs. As amostras produtoras de MBL foram submetidas a tipagem molecular através da técnica de PFGE. A análise clínica/epidemiológica foi realizada a partir de dados obtidos dos prontuários dos pacientes. Resultados: Durante o período entre 2000 e 2005, 32 das 56 amostras de P. aeruginosa, foram classificadas como resistentes aos carbapenêmicos pela técnica de disco difusão. Dezoito das 32 (56,2%) amostras avaliadas carreavam o gene blaSPM-1. Sendo que oito (44,4%) das 18 amostras produtoras de blaSPM-1, apresentaram o mesmo perfil genético. Não foi observada a presença de outras metalo enzimas blaIMP-1, blaVIM-1 e blaVIM-2 nas amostras de P. aeruginosa resistentes a carbapenêmicos. A terapêutica antimicrobiana foi adequada em apenas 27,7% dos pacientes com bacteremia por P. aeruginosa carreando o gene blaSPM-1. Foi observada uma maior letalidade, no período de até 30 dias após a bacteremia, em pacientes com infecção causada por P. aeruginosa carreando o gene blaSPM-1 em relação aos demais pacientes. Conclusões: Evidenciamos a presença de um clone de P. aeruginosa resistente aos carbapenêmicos carreando o gene blaSPM-1 que persistiu no período entre novembro/2000 a dezembro/2005 em hemoculturas de pacientes do IOP-GRAACC. Observamos uma maior letalidade dos pacientes com bacteremia por P. aeruginosa com essa característica de resistência a antimicrobianos e uma indaequação inicial dos esquemas antibióticos utilizados justificando uma vigilância epidemiológica rigorosa e uma readequação dos esquemas terapêuticos. / Pseudomonas aeruginosa is an important opportunist pathogen, particularly for oncologic and neutropenic hospitalized patients. One of the main characterisitic of this bacteria is the development of multiple antibiotic resistance, including the carbapenems. The first metallo-beta-lactamase (MBL) encoding the gene blaSPM-1 reported in the literature was isolated in the year 2000 from a patient admitted to the Instituto de Oncologia Pediatrica (IOP/GRAAC - UNIFESP). Objective: To evalute the prevalence of P. aeruginosa carbapenem resistant and MBL producers isolated from bloodstream samples collected from patients admitted to the IOP in the period 2000- 2005; to describe the dissemination of these enzymes by molecular typing and clinical/epidemiological data. Methods: 56 P. aeruginosa isolates from 49 patients were tested against 10 different antibiotics by disc diffusion. The isolates resistant to carbapenems were tested by disc-approximation method and submitted to PCR reaction for detection of MBLs genes. The isolates producers of blaSPM-1 were molecular typed by PFGE. The clinical and epidemiological data were obtained from the patiens charts. Results: From 2000 to 2005, 32 out of 56 P. aeruginosa isolates were classified as carbepenem reistant by disc diffusion. Eighteen out of 32 (56,2%) isolates carried blaSPM-1 and revealed the same molecular typing profile. We did not detected other MBL blaIMP-1, blaVIM-1 and blaVIM-2. The antibiotic therapy was considered adequate in only 17,7% of the patients with P. aeruginosa bacteremia encoding the gene blaSPM-1. We observed a higher letality rate, in the period of 30 days after bacteremia, in these patients compared with the letality of patients with P. aeruginosa bacteremia resistant to carbapenems but not carring MBL. Conclusion: We detected the presence of a P. aeruginosa clone resistant to carbapenems and carrying the gene blaSPM-1 that persisted in blood stream isolates of patients admitted to the IOP from 2000 to 2005. A high letality rate and inadequacy of initial antibiotic treatment was observed justifying a strict epidemiologic surveillance and re-evalutation of antibiotic treatment protocol. / TEDE

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-27 / Acinetobacter baumannii é um dos principais agentes causadores de infecção associada à assistência a saúde, e, portanto, a melhor compreensão dos fatores associados à letalidade e fatores de risco para aquisição de Acinetobacter baumannii multirresistentes em pacientes com infecção de corrente sanguínea, bem como dados a respeito da escolha terapêutica, são necessários. Objetivos: Analisar os fatores associados a letalidade em pacientes com infecção de corrente sanguínea (ICS) por Acinetobacter baumannii resistente à carbapenêmicos e avaliar o impacto da terapêutica dos pacientes tratados com polimixina B ou ampicilina-sulbactam. Método: Trata-se de um estudo tipo coorte retrospectivo realizado no Hospital São Paulo durante o período de 01 de janeiro de 2000 a 31 de dezembro de 2009. A identificação dos pacientes foi realizada através de levantamento de dados da ficha de notificação de hemoculturas com posterior revisão dos prontuários. Os pacientes foram inicialmente divididos em óbitos e sobreviventes e avaliados quanto a exposição à diversos fatores potencialmente associados à letalidade hospitalar, posteriormente aqueles que foram tratados com os antimicrobianos em questão foram analisados em relação à letalidade em 14 dias. Resultados: Foi identificado um total de 150 episódios de infecção de corrente sanguínea por Acinetobacter baumannii resistente a carbapenêmicos; o sexo masculino foi predominante com 90 pacientes (60%) e a mediana de idade foi 62 anos, quanto a abordagem terapêutica, 60 pacientes (40%) foram tratados com polimixina B, 28 (18,6%) com ampicilinasulbactam. A gravidade avaliada pelo APACHE II foi maior ou igual a 15 em cerca de 70% dos casos. Com relação aos óbitos, houve 116 óbitos que correspondeu a 77% da população estudada e a mediana do tempo decorrido da internação até o óbito foi 35 dias. A análise multivariada identificou o uso de hemodiálise (OR = 3,32, IC 95% 1,03-10,68, p = 0,044) presença de choque séptico (OR = 3,75, IC 95% 1,09 - 12,87, p = 0,036), infecção polimicrobiana (OR = 5,50, IC 95% 1,12 – 26,92, p = 0,036) e idade mais elevada (OR = 1,04, IC 95% 1,02 - 1,07, p = 0,003) como fatores de risco independentes para mortalidade nesta população. O tratamento com polimixina B ou ampicilina-sulbactam (OR = 0,07, IC 95% 0,02 - 0,33, p = 0,001) foi um fator de proteção. Ao analisarmos especificamente os 88 pacientes que utilizaram polimixina B ou ampicilina-sulbactam, as únicas variáveis que foram preditores de risco para mortalidade em 14 dias foram: idade elevada (OR = 1,04, IC 95% 1,01 - 1,07, p = 0,010) e tratamento com polimixina B (OR = 5,56, IC 95% 1,87 - 16,49, p = 0,002); enquanto a nutrição parenteral (OR = 0,21, IC 95% 0,06 - 0,70, p = 0,011) foi fator de proteção para este grupo. Conclusões: As ICS por A. baumannii resistente aos carbapenêmicos são potencialmente graves e tem como fatores independentes de mortalidade o uso de hemodiálise, a presença de choque séptico, infecção polimicrobiana e idade mais elevada. O tratamento com polimixina B foi fator relacionado à maior mortalidade em comparação com ampicilina-sulbactam. O uso de nutrição parenteral foi relacionado à menor mortalidade. / Acinetobacter baumannii is a leading cause of healthcare-associated infections. A better understanding of risk factors for acquisition and factors associated with mortality among patients with bloodstream infection caused by multidrug-resistant Acinetobacter baumannii, as well as, the appropriate therapy for these infections is needed. Objectives: The aim of this study is to analyze the factors associated with mortality in patients with bloodstream infection (BSI) caused by carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii (CRAB) and to assess the impact of therapy among patients treated with polymyxin B and ampicillin-sulbactam for at least 48 hours. Method: A retrospective cohort study was conducted at São Paulo Hospital from January 1, 2000 to December 31, 2009. The identification of patients was done through data collection from the blood culture reporting and subsequent chart review. Patients were initially divided into those who died and those who survived and evaluated against exposure to various factors potentially associated with hospital mortality. Subsequently, patients treated with the polymyxin B and ampicillin/sulbactam were analyzed concerning to 14-day mortality. Results: A total of 150 episodes of bloodstream infection caused by carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii was identified: male sex was predominant in 90 patients (60%), the median age was 62 years, 60 patients (40 %) were treated with polymyxin B and 28 (18.6%) were treated with ampicillin-sulbactam. The APACHE II score was greater than or equal to 15, in about 70% of cases. Regarding to deaths, there were 116 deaths corresponding to 77% of the population and the median time elapsed from hospital admission to death was 35 days. Multivariate analysis identified the use of hemodialysis (OD = 3.32, p = 0.044, CI 1.03 to 10.68), presence of septic shock (OR = 3.75, p = 0.036, CI 1.09 to 12, 87), polymicrobial infection (OD = 5.50, p = 0.036, CI 1.12 to 26.92) and elderly age (OD = 1.04, p = 0.003, CI 1.02 to 1.07) as independent risk factors for mortality in this population. Treatment with polymyxin B and ampicillin-sulbactam (OD = 0.07, p = 0.001, CI 0.02 to 0.33) was a protective factor. By analyzing specifically the 88 patients who received polymyxin B or ampicillin-sulbactam, the only variables found as predictors of 14-day mortality were: elderly age (OD = 1.04, p = 0.010, CI 1.01 to 1, 07) and polymyxin B treatment (OD = 5.56, p = 0.002, CI 1.87 to 16.49), while parenteral nutrition (OD = 0.21, p = 0.011, CI 0.06 to 0, 70) was a protective factor for this group. Conclusions: Bloodstream infections caused by carbapenem-resistant A. baumannii are a potentially serious infection. The independent factors associated with mortality were: use of hemodialysis, presence of septic shock, polymicrobial infection and elderly age. The treatment with polymyxin B was related to a greater mortality when compared to ampicillin-sulbactam. The use of early parenteral nutrition was a protective factor. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Os isolados do complexo Enterobacter cloacae estão entre os principais patógenos causadores de infecções hospitalares. Embora os carbapenêmicos sejam considerados a última opção terapêutica no tratamento de infecções graves por Enterobacter spp, existem evidências indicando o aumento da resistência deste gênero aos carbapenêmicos. Esta resistência é normalmente mediada pela hidrólise dos carbapenêmicos por β-lactamases (carbapenemases). A resistência aos carbapenêmicos se apresenta de forma homogênea numa população bacteriana, no entanto, eventualmente a resistência pode ocorrer em apenas parte da população. Heteroresistência pode ser definida como a expressão de resistência de uma subpopulação dentro de uma população considerada sensível em testes de susceptibilidade in vitro e pode ser considerada um estágio precursor, o qual pode ou não levar a emergência de uma população homogeneamente resistente. A não detecção destas subpopulações resistentes pode levar ao fracasso no tratamento. O objetivo deste trabalho foi avaliar a heteroresistência aos carbapenêmicos em isolados do complexo Enterobacter cloacae. Trinta e um isolados foram selecionados de acordo com seu perfil de suscetibilidade aos carbapenêmicos (imipenem e meropenem sensíveis e ertapenem resistente) e a presença de OXA-370 (5 positivas para blaOXA-370). A heteroresistência foi avaliada por análise de perfil populacional (PAP). Isolados com subpopulações que apresentaram crescimento em concentrações de carbapenêmicos ≥ 4μg/ml foram considerados heteroresistentes e isolados contendo subpopulações que cresceram em concentrações de carbapenêmicos pelo menos duas vezes maior do que o MIC original, mas < 4 μg/ml foram considerados heterogêneos. A estabilidade da heteroresistência foi determinada por sub-cultivo sete dias em meio isento de antibiótico. Um total de 6 (19,4%) isolados apresentaram subpopulações heteroresistentes e 15 (48,4%) subpopulações heterogêneas ao imipenem. Em relação ao meropenem foi encontrado apenas 1 (3,2%) isolado heteroresistente e 5 (16,13%) isolados com subpopulações heterogêneas. Todos os isolados positivos para blaOXA-370 foram classificados como heteroresistentes ou heterogêneos ao imipenem. Apenas 2/21 (9,5%) e 2/6 (33,3%) subpopulações heterogêneos/heteroresistentes para imipenem e meropenem, respectivamente, mantiveram os mesmos MICs após sete dias de sub-cultivo em meio isento de antibiótico. Nossos resultados indicam que subpopulações heterogêneas/heteroresistentes ao imipenem são comuns entre isolados do complexo Enterobacter cloacae (21/31; 67,7%). Os isolados de OXA-370 foram classificados como heterogêneo/heteroresistente e, portanto, a presença de blaOXA-370 pode estar associada ao aumento de heteroresistência a imipenem. Já a estabilidade da heteroresistência e heterogeneidade aos carbapenêmicos demonstrou-se baixa. / Enterobacter cloacae complex isolates are major pathogens in hospital infections. Although carbapenems are considered the last resort in the treatment of severe infections caused by Enterobacter spp, there are several reports indicating increase of resistance to carbapenems among isolates of this genus. This resistance is usually mediated by hydrolysis of carbapenems by β-lactamases (carbapenemases). Carbapenem-resistance is usually a homogeneous feature in a bacterial population but, eventually, the resistance may occur in only a small proportion of the population. Heteroresistance can be defined as resistance to certain antibiotics expressed by a subset of a microbial population that is generally considered to be susceptible to these antibiotics according to traditional in vitro susceptibility testing. Lack to detect heteroresistance may lead to the therapeutic failure. The aim of this study was to evaluate the heteroresistance to carbapenems among Enterobacter cloacae complex isolates. Thirty-one isolates of Enterobacter cloacae complex were selected according to their susceptibility profile as follow: resistance to ertapenem and susceptibility to imipenem and meropenem. Among these, five isolates presented the blaOXA-370 gene. Heteroresistance was evaluated by population analysis profile (PAP). Isolates that grew at concentrations ≥4μg/mL of carbapenem were considered heteroresistant, while those that grew at concentration with at least two dilutions higher than the original MIC, but <4μg/mL were considered heterogeneous. Heteroresistance stability was determined after seven day sub-culture in antibiotic-free medium. A total of 6 (19.4%) isolates presented heteroresistant subpopulations and 15 (48.4%) heterogeneous subpopulations to imipenem. Only 1 (3.2%) isolate was heteroresistant and 5 (16.1%) heterogeneous to meropenem. All positive isolates for blaOXA-370 were classified as heteroresistant or heterogeneous to imipenem. Only 2/21 (9.5%) and 2/6 (33.3%) heterogeneous/heteroresistant subpopulations to imipenem and meropenem, respectively, kept the same MIC of the subpopulation after seven days in antibiotic free medium. Our results indicate that heterogeneous/heteroresistant subpopulations were common among Enterobacter cloacae complex (21/31 - 67.7%) to imipenem and less common to meropenem. Noteworthy, that all OXA-370 producing isolates were classified as heterogeneous/heteroresistant. Therefore, the presence of blaOXA-370 may be associated with increase heteroresistance to imipenem. The stability of heteroresistance was low in antibiotic-free medium after seven days.

O gênero Acinetobacter tem emergido como um importante patógeno nosocomial que apresenta, não apenas resistência intrínseca a muitos antimicrobianos, como também uma grande habilidade de adquirir novos mecanismos de resistência. É de grande importância o conhecimento da epidemiologia local dos isolados para que se possa estabelecer o melhor tratamento a ser adotado e as medidas de controle epidemiológico mais adequadas para evitar a disseminação destes microrganismos. O objetivo deste trabalho foi de comparar isolados de Acinetobacter spp. provenientes de amostras clínicas e de efluente hospitalar quanto ao perfil de suscetibilidade a antimicrobianos e a presença de genes de resistência aos carbapenêmicos, assim como determinar a relação clonal destes isolados. Para isso isolados clínicos e amostras de efluente hospitalar de cinco hospitais em Porto Alegre, RS, Brasil foram coletadas. Os isolados bacterianos foram identificados como pertencentes ao gênero Acinetobacter através da amplificação do rDNA16S. O perfil de suscetibilidade a antimicrobianos foi avaliado pela técnica de disco-difusão e a presença dos genes blaIMP, blaVIM, blaSPM, blaOXA-23, blaOXA-51 foi analisada por PCR em todos os isolados resistentes a carbapenêmicos. A relação clonal dos isolados foi avaliada pela amplificação de seqüências repetitivas do genoma (ERIC-PCR) e análise de macrorestrição do genoma (PFGE). Foram analisados 577 isolados, sendo 274 clínicos e 303 de efluente hospitalar. Foram encontrados 68% de isolados clínicos e 30% de isolados de efluente multirresistentes. Não foram identificados isolados com genes para metalo-b-lactamases, mas 61,2% dos isolados clínicos e três isolados de efluente hospitalar apresentaram o gene blaOXA-23. O gene blaOXA-51 foi identificado em 84% dos isolados clínicos e 56% de efluente. As técnicas de ERIC-PCR e PFGE indicaram uma disseminação de isolados clones entre os diferentes hospitais analisados, assim como uma similaridade genética entre isolados de efluente hospitalar e isolados clínicos, indicando a disseminação dos últimos através do efluente. / The genus Acinetobacter has emerged as an important nosocomial pathogen that presents not only intrinsic resistance to many antibiotics, but also a great ability to acquire new resistance mechanisms. It is very important to study local epidemiology of bacterial isolates so the best treatment and the most appropriate epidemic control measurements to prevent the spread of these microorganisms can be determined. The aim of this study was to compare isolates of Acinetobacter spp. from clinical specimens and hospital wastewater on their antibiotic susceptibility profile and the presence of resistance genes to carbapenems, as well as to determine the clonal relationship of these isolates. Clinical isolates and hospital wastewater samples from five hospitals in Porto Alegre, RS, Brazil were collected. The isolates were identified as belonging to the genus Acinetobacter by amplification of the rDNA16S. The susceptibility profile was determined by the disk-diffusion method and the presence of the blaIMP, blaVIM, blaSPM, blaOXA-23, blaOXA-51 genes were screened by PCR. The clonal relationship of the isolates was evaluated by amplification of repetitive sequences from the genome (ERIC-PCR) and macrorestriction analysis of the genome (PFGE). We analyzed 577 isolates, where 274 were of clinical origin and 303 from the hospital wastewater samples. We found that 68% of the clinical isolates and 30% of the wastewater isolates were multiresistant. None of the isolates presented genes of metallo-β-lactamase, in other hand, 61.2% of the clinical isolates and three from the hospital wastewater had the gene blaOXA-23. The gene blaOXA-51 was identified in 84% of the clinical isolates and in 56% of the hospital wastewater ones. The PFGE and ERIC-PCR analysis showed a possible dissemination of clones strains among the hospitals studied, and a genetic similarity among the hospital sewage and clinical isolates, indicating their dissemination through the wastewater.

Introdução: P. aeruginosa é o principal agente causador de infecção hospitalar sendo a primeira causa de pneumonia nosocomial em hospitais brasileiros. Os carbapenêmicos são geralmente o tratamento empírico de escolha para infecções graves causadas por esta bactéria. Entretanto, seu uso tem sido limitado pelas elevadas taxas de resistência entre os isolados de P. aeruginosa principalmente os produtores de metalo-β-lactamases (Mβla). Objetivos: Caracterizar e avaliar a produção de metalo-β-lactamase em amostras de Pseudomonas aeruginosa resistentes a ceftazidima e/ou imipenem em dois hospitais universitários de Porto Alegre. Métodos: O método de disco difusão padronizado pelo NCCLS foi utilizado para avaliar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos. Um teste de aproximação de discos utilizando ceftazidima com ácido 2-mercaptopropiônico foi utilizado para triagem de amostras produtoras de Mβla. A fita de Etest combinada imipenem com EDTA também foi utilizada como teste fenotípico. Os resultados destes dois testes foram comparados à PCR para pesquisa dos genes blaSPM-1, blaIMP-1 e blaVIM-2 .Os isolados produtores de Mβla foram submetidos a tipagem molecular pela técnica de macrorestrição de DNA seguida de pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). O perfil de hidrólise para o imipenem foi avaliado nas amostras produtoras de Mβla através da variação de absorção medida a 298 nm. Resultados: Dos 92 isolados clínicos analisados, 33 foram positivos no teste de aproximação de discos. Destes, 18 foram produtores de SPM-1 e 5 de IMP-1. Todas as amostras produtoras de SPM-1 apresentaram razão de IP/IPI na fita combinada ≥ 8. Os 18 isolados de SPM-1 foram classificados como um único padrão de PFGE que foi o predominante. Seis isolados pertenciam a um segundo padrão de PFGE, sendo que cinco destes eram IMP-1. O perfil de hidrólise mostrou que os isolados produtores de SPM-1 degradam mais efetivamente o imipenem quando comparado aos produtores de IMP-1 e aos não produtores de Mβla. Conclusões: Há uma alta prevalência de Mβla entre isolados de P. aeruginosa resistentes a imipenem e/ou ceftazidima. O gene SPM-1 é o elemento genético mais prevalente entre as amostras de P. aeruginosa Mβla positivas e a disseminação clonal têm contribuído para os elevados níveis de resistência aos carbapenêmicos entre os isolados de P. aeruginosa nos hospitais deste estudo.

Os isolados do complexo Enterobacter cloacae estão entre os principais patógenos causadores de infecções hospitalares. Embora os carbapenêmicos sejam considerados a última opção terapêutica no tratamento de infecções graves por Enterobacter spp, existem evidências indicando o aumento da resistência deste gênero aos carbapenêmicos. Esta resistência é normalmente mediada pela hidrólise dos carbapenêmicos por β-lactamases (carbapenemases). A resistência aos carbapenêmicos se apresenta de forma homogênea numa população bacteriana, no entanto, eventualmente a resistência pode ocorrer em apenas parte da população. Heteroresistência pode ser definida como a expressão de resistência de uma subpopulação dentro de uma população considerada sensível em testes de susceptibilidade in vitro e pode ser considerada um estágio precursor, o qual pode ou não levar a emergência de uma população homogeneamente resistente. A não detecção destas subpopulações resistentes pode levar ao fracasso no tratamento. O objetivo deste trabalho foi avaliar a heteroresistência aos carbapenêmicos em isolados do complexo Enterobacter cloacae. Trinta e um isolados foram selecionados de acordo com seu perfil de suscetibilidade aos carbapenêmicos (imipenem e meropenem sensíveis e ertapenem resistente) e a presença de OXA-370 (5 positivas para blaOXA-370). A heteroresistência foi avaliada por análise de perfil populacional (PAP). Isolados com subpopulações que apresentaram crescimento em concentrações de carbapenêmicos ≥ 4μg/ml foram considerados heteroresistentes e isolados contendo subpopulações que cresceram em concentrações de carbapenêmicos pelo menos duas vezes maior do que o MIC original, mas < 4 μg/ml foram considerados heterogêneos. A estabilidade da heteroresistência foi determinada por sub-cultivo sete dias em meio isento de antibiótico. Um total de 6 (19,4%) isolados apresentaram subpopulações heteroresistentes e 15 (48,4%) subpopulações heterogêneas ao imipenem. Em relação ao meropenem foi encontrado apenas 1 (3,2%) isolado heteroresistente e 5 (16,13%) isolados com subpopulações heterogêneas. Todos os isolados positivos para blaOXA-370 foram classificados como heteroresistentes ou heterogêneos ao imipenem. Apenas 2/21 (9,5%) e 2/6 (33,3%) subpopulações heterogêneos/heteroresistentes para imipenem e meropenem, respectivamente, mantiveram os mesmos MICs após sete dias de sub-cultivo em meio isento de antibiótico. Nossos resultados indicam que subpopulações heterogêneas/heteroresistentes ao imipenem são comuns entre isolados do complexo Enterobacter cloacae (21/31; 67,7%). Os isolados de OXA-370 foram classificados como heterogêneo/heteroresistente e, portanto, a presença de blaOXA-370 pode estar associada ao aumento de heteroresistência a imipenem. Já a estabilidade da heteroresistência e heterogeneidade aos carbapenêmicos demonstrou-se baixa. / Enterobacter cloacae complex isolates are major pathogens in hospital infections. Although carbapenems are considered the last resort in the treatment of severe infections caused by Enterobacter spp, there are several reports indicating increase of resistance to carbapenems among isolates of this genus. This resistance is usually mediated by hydrolysis of carbapenems by β-lactamases (carbapenemases). Carbapenem-resistance is usually a homogeneous feature in a bacterial population but, eventually, the resistance may occur in only a small proportion of the population. Heteroresistance can be defined as resistance to certain antibiotics expressed by a subset of a microbial population that is generally considered to be susceptible to these antibiotics according to traditional in vitro susceptibility testing. Lack to detect heteroresistance may lead to the therapeutic failure. The aim of this study was to evaluate the heteroresistance to carbapenems among Enterobacter cloacae complex isolates. Thirty-one isolates of Enterobacter cloacae complex were selected according to their susceptibility profile as follow: resistance to ertapenem and susceptibility to imipenem and meropenem. Among these, five isolates presented the blaOXA-370 gene. Heteroresistance was evaluated by population analysis profile (PAP). Isolates that grew at concentrations ≥4μg/mL of carbapenem were considered heteroresistant, while those that grew at concentration with at least two dilutions higher than the original MIC, but <4μg/mL were considered heterogeneous. Heteroresistance stability was determined after seven day sub-culture in antibiotic-free medium. A total of 6 (19.4%) isolates presented heteroresistant subpopulations and 15 (48.4%) heterogeneous subpopulations to imipenem. Only 1 (3.2%) isolate was heteroresistant and 5 (16.1%) heterogeneous to meropenem. All positive isolates for blaOXA-370 were classified as heteroresistant or heterogeneous to imipenem. Only 2/21 (9.5%) and 2/6 (33.3%) heterogeneous/heteroresistant subpopulations to imipenem and meropenem, respectively, kept the same MIC of the subpopulation after seven days in antibiotic free medium. Our results indicate that heterogeneous/heteroresistant subpopulations were common among Enterobacter cloacae complex (21/31 - 67.7%) to imipenem and less common to meropenem. Noteworthy, that all OXA-370 producing isolates were classified as heterogeneous/heteroresistant. Therefore, the presence of blaOXA-370 may be associated with increase heteroresistance to imipenem. The stability of heteroresistance was low in antibiotic-free medium after seven days.

Introdução. Pseudomonas aeruginosa é um patógeno clinicamente importante. Existem diversos mecanismos de resistência aos antimicrobianos em P. aeruginosa, dentre eles a produção de enzimas (β-lactamases) e sistemas de efluxo se destacam, uma vez que são capazes de conferir resistência aos carbapenêmicos. Objetivo. Avaliar os sistemas de efluxo MexAB-OprM e MexXY em isolados clínicos de P.aeruginosa de pacientes atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre-RS e relacionar a expressão destes sistemas com a CIM de meropenem em isolados produtores e não produtores de metalo-beta-lactamases (MBL). Metodologia. Um total de 86 isolados de P. aeruginosa com suscetibilidade reduzida aos carbapenêmicos foram avaliados. A hiperexpressão dos sistemas MexAB e MexXY foi determinada fenotipicamente utilizando inibidor seletivo da bomba (PAβN). MBLs foi determinada por PCR utilizando primers específicos. Resultados. O fenótipo de hiperexpressão dos sistemas de efluxo estudados foi observado em 34 (47,8%) dos 71 isolados negativos para a produção de MBL e em 14 (93.3%) dos 15 isolados MBL positivos. Na presença de PaβN, todos os isolados não produtores de MBL apresentaram uma redução da CIM para meropenem para valores na faixa de suscetibilidade. Entretanto, das 13 P. aeruginosa produtoras de MBL que diminuíram a CIM, essa redução não foi para valores dentro da faixa de sensibilidade. Conclusão. Os isolados de P. aeruginosa não produtores de MBL apresentam resistência ao meropenem devido a hiperexpressão de MexAB-OprM. Na presença de PaβN, independente de apresentarem produção de MBL, o CIM de meropenem reduziu para valores ≤ 8 mg/L. Contudo, quando isolados não apresentavam MBL, a CIM de meropenem reduziu para níveis de sensibilidade. / Introduction. Bacterial efflux pump systems are resistance mechanisms which may lead to therapeutic failure of antibiotic treatment since many antimicrobial agents are substrate for these mechanisms. The aim of the study was to evaluate the expression of the MexAB, MexXY pump efflux and to determine its influence on meropenem MIC in carbapenemase producing and non-producing P. aeruginosa. Methods. A total of 86 non-repetitive clinical isolates of P. aeruginosa with reduced susceptibility to carbapenems were evaluated. Overexperession of MexAB and MexXY efflux systems were evaluated phenotypically using the PAβN selective inhibitor. Metallo-β-lactamases (MBL) were detected by PCR using specific primers. Results. The efflux pump-overexpressed phenotype was observed in 34 (47.8%) MBL-negative and in 14 (93.3%) MBL-positive isolates. In the presence of the PaβN, all non-producers of MBL presented a reduction of meropenem MICs to the range of susceptibility. In contrast, the 13 P. aeruginosa MBL-producing isolates decreased meropenem MICs at least 16-fold but this reduction did not reach the range of susceptibility. Conclusion. P. aeruginosa non-MBL-producing showed resistance to meropenem due to overexpression of MexAB-OprM. In the presence of PaβN, the isolates harboring or not MBL genes, the meropenem MICs were reduced to values ≤8 mg/L. However, when the isolates harbor MBL genes, the meropenem MIC values were reduced to the susceptibility.