Caracterizar um quadro experimental que representa excesso de glicocorticoides e verificar esse efeito sobre o metabolismo dos carboidratos no tecido adiposo branco. Ratos foram divididos aleatoriamente em grupo controle (CON) e dexametasona (DEX), e após 4 semanas de tratamento foram sacrificados e os tecidos retirados e analisados. O tratamento foi capaz de bloquear o eixo hipotálamo-hipófise-adrenal, como verificado pela menor concentração de corticosterona plasmática e atrofia das glândulas adrenais no grupo DEX. Além disso, os animais do grupo DEX apresentaram resistência à insulina, intolerância à glicose, dislipidemia e alterações hormonais; além de adipócitos hipertrofiados. Apresentaram também maior lipogênese nos coxins retroperitoneal e mesentérico, sendo que houve maior incorporação de glicose na porção ácido graxo dos triacilgliceróis. Houve maior atividade e expressão das enzimas lipogênicas no grupo DEX. Os resultados mostram que a maior atividade e expressão de enzimas lipogênicas podem justificar o acúmulo de gordura na região visceral. / To characterize an experimental condition of glucocorticoid excess and to verify this effect in carbohydrate metabolism in white adipose tissue. Rats were divided at random into control (CON) and dexamethasone (DEX) groups, and after 4 weeks of treatment they were sacrificed and tissues were excised and analysed. The treatment was able to block hypothalamic-pituitary-adrenal axis, as verified by lower corticosterone plasma levels and adrenal glands atrophy in DEX group. Furthermore, animals from DEX group presented insulin resistance, glucose intolerance, dyslipidemia and hormonal alterations; besides hypertrophied adipocytes. They also presented increased lipogenesis in retroperitoneal and mesenteric fat pads, with increased incorporation into fatty acids of triacylglycerol. There was increased activity and gene expression of lipogenic enzymes in DEX group. The data show that the increased lipogenic enzyme activity and expression could justify increased lipid accumulation in visceral depots.

A presente dissertação é constituida de duas partes. A primeira parte teve como objetivo determinar o perfil antropométrico e o consumo alimentar de atletas de Tênis profissionais e amadores. Foram avaliados parâmetros antropométricos (massa corporal, altura, circunferências e dobras cutâneas) e o consumo alimentar pelo diário alimentar de 3 dias. Não foi observada diferença significativa no perfil antropométrico de atletas amadores e profissionais. Com relação ao consumo alimentar, ambos os grupos demonstraram baixa ingestão de carboidrato (CHO) (AM: 6,3±0,5 g/kg/dia e PRO: 6,5±0,7 g/kg/dia) quando comparada às recomendações atuais disponíveis na literatura. Estes dados reforçam a importância do planejamento nutricional para estes atletas. Na segunda parte, foi avaliado o efeito da suplementação de CHO sobre a percepção subjetiva de esforço (PSE), a resposta hormonal, a concentração de IgA salivar e o desempenho durante uma partida de Tênis com duração de 180 minutos. A PSE apresentou aumento no decorrer da partida, porém não foi detectada diferença entre as condições experimentais - placebo (PLA) e CHO (P>0,05). Com relação a PSE da sessão, a ingestão de CHO parece promover tendência de redução (P=0,08, d=0,5) após o término do jogo. O consumo de CHO atenuou a concentração de cortisol salivar (P<0,05). Não houve nenhuma influência da ingestão do CHO sobre a concentração de testosterona e IgA salivar. O desempenho dos tenistas também não foi maximizado pelo consumo de CHO. Estes resultados indicam que o consumo de CHO durante a partida de Tênis atenua o aumento do cortisol salivar e a percepção global de estresse / The present study is composed of two parts. The first part aimed to determine the anthropometric profile and dietary intake of professional and amateur tennis players. It was evaluated the anthropometric parameters (body mass, height, circumferences and skin folds) and the food intake by a 3 day food diary. There was no significant difference in the anthropometric profile of amateur and professional athletes. Regarding food intake both groups had a low carbohydrate (CHO) intake (AM: 6.3 ± 0.5 g / kg / day and PRO: 6.5 ± 0.7 g / kg / day) when compared to current recommendations available in the literature. These data reinforce the importance of nutritional planning for these athletes. In the second part of the present study, it was assessed the effect of CHO supplementation on the perceived exertion (RPE), salivary hormones, salivary IgA and performance during a tennis match lasting 180 minutes. RPE showed an increase during the match, but no difference was detected between the experimental conditions placebo (PLA) and CHO (p>0,05). Regarding session RPE, the CHO intake seemed to promote a trend to reduction (P = 0.08, d = 0.5) after the end of the game. The CHO intake also attenuated the salivary cortisol response to the match (P <0.05). There was no influence of CHO ingestion on testosterone and IgA responses. The players performance has not been maximized by the CHO supplementation. These results indicate that CHO intake during the Tennis match attenuates the increase in salivary cortisol and the overall perception of stress

O presente estudo teve como objetivo a caracterização das frações protéicas e de carboidratos em pastagem de capim-elefante (Pennisetum purpureum cv. Cameroon), manejada com altas taxas de lotação no período das águas. O experimento foi realizado nas instalações do Departamento de Zootecnia da Esalq/USP. A forragem foi coletada nas estações do outono/2006, primavera/2006 e verão/2006-07, adotando-se intervalos de desfolhação fixos de 27 dias e variáveis, onde a entrada dos animais ocorreu quando o capim atingiu 1,05 m de altura (95 % IL). Foi determinada a composição bromatológica, frações protéicas e de carboidratos tanto por métodos químicos quanto pelo método de degradação in situ da forragem. A pastagem também foi avaliada quanto à massa de forragem (kg de MS por ha-1), composição morfológica e alturas do dossel na entrada e saída dos animais. Para as determinações no pasto utilizou-se o delineamento inteiramente aleatorizado com medidas repetidas no tempo. Para as frações protéicas A, B e C, foi realizado ensaio de degradabilidade in situ utilizando-se 4 garrotes castrados e canulados no rúmen. As amostras de forragem secas e moídas a 5 mm foram acondicionadas em sacos de nylon e incubadas no rúmen por 0, 3, 6, 12, 24, 48, 60, 72, 96 e 120 horas. O delineamento experimental foi em quadrados latinos 2x2 replicados. A duração do intervalo entre desfolhas não diferiu entre os tratamentos (P>0,05), em nenhuma das estações avaliadas. As alturas do dossel no pré-pastejo foram maiores (P<0,05) nos tratamentos com ID variável. Para altura do dossel em pós-pastejo, houve efeito somente da estação (P<0,05), com menores alturas na primavera (0,43 e 0,51 m), e maiores no verão (0,56 e 0,57 m) para os tratamentos com ID fixo e variável. Não foi verificada diferença (P>0,05) para produção de forragem entre os tratamentos. Apenas os teores de PB da forragem foram afetados pelos tratamentos (P<0,05), com menores valores para ID variável. Os teores de MS, FDN, FDA, lignina e PIDA não diferiram (P>0,05) entre os tratamentos. Somente a fração protéica B2 foi afetada, com maiores valores para ID variável (P<0,05). As frações A e B3 diferiram nas estações do ano (P<0,05), com o outono apresentando menores valores de A e maiores da B3. Não houve diferença para as frações B1 e C (P>0,05). No verão, a fração A+B1 dos carboidratos apresentou os menores valores dentre as estações (13,80 e 16,22 % para ID fixo e variável), e a fração B2, os maiores valores (76,59 e 73,42 %) (P<0,05). Não houve diferenças (P>0,05) para as variáveis de degradabilidade da MS e MO. Na degradabilidade da FDN, diferenças significativas foram observadas apenas para variável de DP e DE com taxa de passagem de 2 %/h no tratamento com ID fixo. A correção da contaminação microbiana resultou em aumento nos valores da fração protéica A e redução na B. Não houve efeito (P>0,05) para as variáveis da PB corrigida pela contaminação, exceto para a fração B, onde os valores foram maiores no outono (73,3 e 73,69%) e menores na primavera com ID variáveis (55,87%). / The present study designed to characerize the protein and carbohydrate fractions of elephant grass pasture (Pennisetum purpureum) cv. Cameroon, intensively grazed at high stocking rate during the rainy season. The experiment was carried in the Animal Sciences Department of the University of São Paulo (USP/ESALQ). Forage samples were collected during autumn and spring/2006 and summer/2006-07. Two defoliation intervals (DI) were adopted, fixed and variable. For the fixed DI treatment experimental animals had access to the paddocks every 27 days, and for the variable DI treatment experimental animals had access to the paddocks when the sward reached 1,05m height, corresponding to 95% light interception. Forage samples were analyzed for chemical composition and protein and carbohydrate fractions by chemical methods and with \"in situ\" degradation technique. Pasture was also analyzed for pre-grazing forage mass (kg DM ha-1) , morphologic composition, pre and post grazing sward heights. A completely randomized design with repeated measures was used for pasture determinations. For protein fractions (A, B, C) determinations, an in situ trial was developed using four rumen canulated steers. 5mm ground forage samples were conditioned in nylon bags and incubated in the rumen for 0, 3, 6, 12, 24, 48, 60, 72, 96 and 120 hours. The experimental design was a replicated 2x2 Latin square. The defoliation interval length did not differ (P>0,05) among treatments, in any season. Pre-grazing sward heights were higher (P<0,05) for the variable DI treatment. A season effect (P<0,05) was observed for post-grazing heights, with lower values observed on spring (0,43 and 0,51m) and higher on summer (0,56 and 0,57m) for both treatments. No differences (P>0,05) were observed among treatments for total forage mass. Only forage CP content was affected by treatments, with lower values (P<0,05) for variable DI. DM, NDF, ADF, lignin and ADIN were not different (P>0,05) among treatments. Protein B2 fraction was affected, showing higher values (P<0,05) for variable DI treatment. Fractions A and B3 were different among seasons, with lower fraction A and higher fraction B3 values during autumn (P<0,05). No differences were observed for fractions B1 and C (P>0,05). During summer carbohydrate fractions A + B1 showed the lowest values among seasons (13,80 and 16,22% for fixed and variable DI), and B2 fraction showed the highest values (76,59 and 73,42 %) (P<0,05). No differences were observed for DM and OM degradabilities variables (P>0,05). For NDF degradability significant differences were observed only PD and ED variables with 2%/h passage rate for fixed DI treatment. Microbial contamination adjustment resulted in higher protein A and lower protein B fraction values. No effects were observed (P>0,05) for microbial contamination adjusted CP variables, except for B fraction that showed higher values during autumn (73,3 and 73,69%) and lower during spring with variable DI (55,87%).

O tecido adiposo, através da leptina, desempenha um papel permissivo sobre a maturação sexual do indivíduo. Apesar da importância do tecido adiposo para a puberdade, pouco se sabe a respeito do processo de formação deste tecido neste período da vida. Estudos em humanos têm descrito a presença de resistência à insulina puberal. Assim, frente à importância do tecido adiposo para a puberdade, o objetivo do trabalho foi investigar a resposta do tecido adiposo à insulina no período puberal. Foram utilizados os coxins adiposos subcutâneo e periepididimal. Na puberdade, paralelamente à intolerância à glicose transitória que ocorreu nas semanas iniciais, e, portanto, prejuízo da utilização da glicose pelos tecidos insulino-dependentes, o tecido adiposo (SC e PE) teve sua responsividade normal à insulina e uma melhor capacidade de incorporação de glicose em lipídeos o que leva a crer que há um desvio da utilização deste substrato energético, a glicose, para a formação do tecido adiposo. / The adipose tissue is critical to puberty. Leptin exerts a permissive role to hypothalamic-hypophysial-gonadal maturation and, thereby, adipose tissue is necessary to pubertal development. Despite its importance to puberty, little is known about the process of adipose tissue formation during this period of life. Researches have described insulin resistance at pubertal period in humans. The adipose tissue importance to puberty added to pubertal insulin resistance described in humans lead us to investigate how the adipose tissue responds to insulin at this period since it is essential at this time. We assessed two distinct fat pads: the subcutaneous fat pad and the epididymal one. At the puberty, despite the temporary glucose intolerance and the constraint for glucose utilization by insulin-dependent tissues, the adipose tissue had normal insulin responsiveness plus an improved capacity to synthesize lipids from glucose which led us to hypothesize that glucose could have been deviated towards the adipose tissue.

O diabetes mellitus (DM) é uma doença que causa hiperglicemia pela deficiência de insulina, a qual pode levar a morte. A administração de insulina e o manejo alimentar que minimize a variação glicêmica são a base do tratamento. A quantidade, fonte e o processamento do amido podem interferir na resposta glicêmica pós-prandial em cães, mas poucas pesquisas avaliaram estes aspectos em cães diabéticos. Este estudo objetivou avaliar os efeitos do amido menos processado durante o processo de extrusão, no controle glicêmico de cães diabéticos. Foram incluídos 15 cães diabéticos, sem outras afecções, selecionados na rotina do HOVET-FMVZ/USP. Os animais foram alimentados com três rações secas extrusadas: Ba (alta fibra e proteína, baixa gordura e moderado amido oriundos de diversas fontes), Co (ervilha e cevada como fontes de amido, moderada gordura,amido, proteína e fibra) e MP (a base de milho, menos processada para apresentar menor índice de gelatinização do amido). Foi realizada curva glicêmica de 48 horas por sistema de mensuração contínua de glicemia, após 60 dias de tratamento com cada dieta e mesma dose de insulina. Testes estatísticos paramétricos e não paramétricos foram utilizados para comparar a quantidade de alimento e nutrientes ingeridos, efeitos dietéticos em variáveis glicêmicas e lipídicas entre as diferentes dietas. Os animais alimentados com a ração Co apresentaram menor ingestão de amido (p&lt;0,01) comparado à MP, e entre as duas, a Co resultou em maior tempo em hipoglicemia (p&lt;0,01), menor tempo em hiperglicemia (p&lt;0,01) e valores semelhantes de colesterolemia em relação ao alimento Ba, porém maiores que MP (p=0,01). Assim, pôde-se concluir que a ração Co (ervilha e cevada) resultou em melhores variáveis de controle glicêmico e lipídico de cães diabéticos, quando comparada ao alimento a base de milho processado para apresentar menor índice de gelatinização do amido. / Diabetes mellitus (DM) is a disease that causes hyperglycemia by insulin deficiency, which can lead to death. Administration of insulin and feeding management that minimizes glycemic fluctuation are the mainstay of treatment. The amount, source and starch processing may interfere on postprandial glycaemia in dogs, but few researches have evaluated these aspects in diabetic dogs. This study aimed to evaluate the effects of less processed starch, during extrusion process, on glycemic control of diabetic dogs. It was included 15 diabetic dogs without other disorders, selected in routine from Veterinary Hospital (School of Veterinary Medicine and Animal Science University of São Paulo). The animals were fed three extruded dry feed: Ba (high fiber and protein, low fat and moderate starch from various sources), Co (pea and barley as starch sources, moderate fat, starch, protein and fiber) and LP (use corn as a source of starch and was less processed to generate lower gelatinization index of starch). Glucose curve was performed by a continuous glucose measurement system for 48 hours, after 60 days of treatment in every diet and under the same dose of insulin. Statistical tests parametrics and non-parametrics were used to compare the amount of food and nutrient intake and dietary effects on variables of glucose and lipids concentration. The animals fed with Co presented less starch intake (p&lt;0.01) compared to LP, and between Co and LP, Co resulted in greater time under hypoglycaemia (p&lt;0.01), lesser time under hyperglycemia (p&lt;0.01) and remained similar values of cholesterolemia compared to Ba and greater than LP (p=0.01). Thus, it was concluded that the diet with slow digestion starch (pea and barley) resulted in better glycemic and lipidic parameters in diabetic dogs when compared to based corn diet processed to have lower starch gelatinization index.

A banana é considerada um bom modelo de estudo para a transformação amido-sacarose, já que acumula um teor alto de amido durante o desenvolvimento, que é degradado durante o amadurecimento. Já foram detectadas em polpa de banana atividade e proteína relativa a várias enzimas supostamente envolvidas no processo de degradação do amido. Entre elas, a &#945;-amilase, a &#946;-amilase, a amido fosforilase e as glucano-água-diquinases (GWD). Estas enzimas estão envolvidas em dois processos distintos de degradação de amido em plantas: o dependente da ação inicial da &#945;-amilase e o dependente da fosforilação do grânulo pela GWD e PWD e posterior ação da &#946;-amilase. A dificuldade do estabelecimento da participação efetiva de cada enzima no processo de degradação do amido está associada a muitos fatores, entre eles a não-correlação entre atividade e real envolvimento em um processo, e a acessibilidade da enzima ao seu substrato. Aliado ao estudo da morfologia do grânulo de amido e suas modificações sofridas durante o processo de degradação que ocorre durante o amadurecimento do fruto, estudos in vitro que simulem a ação da enzima sobre o seu substrato poderiam ser mais efetivos no estabelecimento da real ação de dada enzima sobre o suposto substrato. Tentativas no sentido de obter as proteínas relativa à degradação não foram bem sucedidas. Assim, os ensaios de grânulos de amido isolados versus enzimas foram feitos com &#945;-amilase e &#946;-amilase comerciais. O grau de fosforilação da amilopectina nas posições Glic-6 e Glic-3 foi determinado, condição necessária para o início da degradação do grânulo pela &#946;-amilase. Os resultados mostraram que os grânulos de amido isolados de bananas recém colhidas, ou verdes, já estão fosforilados e as enzimas responsáveis por esta fosforilação estão associadas aos grânulos. Após 72 h de incubação dos grânulos de amido com as enzimas hidrolítica, os grânulos foram separados do tampão contendo as enzimas e os produtos de hidrólise. Os sobrenadantes foram analisados por cromatografia líquida acoplada a detector amperométrico e os grânulos por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e microscopia de força atômica (MFA). Os resultados mostraram que a &#945;-amilase hidrolisa preferencialmente regiões amorfas dos grânulos, com predominância de amilose, expondo as regiões mais cristalinas dos anéis de crescimento, enquanto que a &#946;-amilase parece atuar preferencialmente nas regiões cristalinas dos grânulos, degradando os bloquetes, que são formados por amilopectina. Pode-se concluir que ambas as enzimas parecem ser importantes no processo de degradação do amido da banana, com diferentes especificidades. / Banana is considered a good model to study the starch-sucrose metabolism, since it accumulates a high starch content during development, which is degraded during fruit ripening. It have been detected in banana pulp some proteins and activities of several enzymes supposedly involved in starch degradation process. Among them, &#945;-amylase, &#946;-amylase, starch phosphorylase and glucan-water-diquinases (GWD). These enzymes are involved in two separate processes of starch degradation in plants: the initial action of &#945;-amylase dependent, and the starch granule phosphorylation by GWD and PWD enzymes and subsequent action of &#946;-amylase. The difficulty of establishing the effective participation of each enzyme in the starch degradation process is associated with many factors, including the lack of correlation between real activity and involvement in the process, and accessibility of the enzyme to its substrate. Allied to study the morphology of the starch granule and its modifications suffered during the process of degradation, which occurs during the fruit ripening, in vitro studies that simulate the action of the enzyme on its substrate could be more effective in establishing the real action of a given enzyme on the argued substrate. However, attempts to obtain the proteins related to the degradation process were unsuccessful. Thus, assays of isolated starch granules versus enzymes were made with commercial &#945;-amylase and &#946;-amylase enzymes. The degree of phosphorylation of amylopectin in the Gluc-6 and Gluc-3 positions was determined, a necessary condition for the start of degradation by &#946;-amylase enzyme. The results showed that the starch granules isolated from freshly harvested bananas, or green, are already phosphorylated and the enzymes responsible for this phosphorylation is associated with the starch granules surface. After 72 h incubation of the starch granules with the hydrolytic enzymes, the granules were separated from the buffer containing the enzymes and the hydrolysis products. The supernatants were analyzed by liquid chromatography coupled with amperometric detector and the granules were visualized by scanning electron microscopy (SEM) and atomic force microscopy (AFM). The results showed that the &#945;-amylase preferentially hydrolyzes amorphous regions of the granule, especially amylose, exposing more crystalline regions of the growth rings, whereas &#946;-amylase appears to act preferentially on crystalline regions of the granule, degrading blocklets that consist of amylopectin. It can be concluded that both enzymes appear to be important in the banana starch degradation process, with different specificities.

As galectinas, proteínas que compartilham características como afinidade por ?-galactosídeos e a presença de um domínio de reconhecimento ao carboidrato (CRD), tem como importante papel a decodificação de mensagens moleculares. As galectinas são encontradas em uma grande variedade de células e tecidos animais e estão envolvidas em diversos processos celulares relacionados a resposta imune e inflamatória. O grupo tandem-repeat das galectinas é formado por proteínas que apresentam dois CRDs distintos (CRD1 e CRD2) conectados por um peptídeo de ligação, ao qual pertencem as galectinas-4 e -12 humanas, alvos de nosso estudo. Durante o desenvolvimento do presente projeto foram utilizadas abordagens multidisciplinares através de técnicas biofísicas, cristalográficas, computacionais e imunoquímicas. Foi iniciado o estudo de caracterização estrutural da galectina-4 humana (hGal4) e seus domínios hGal4-CRD1 e hGal4-CRD2, de forma independente, através da produção heteróloga das proteínas e ensaios de estabilidade térmica e cristalização. As estruturas cristalográficas dos domínios foram determinadas a 1,48 e 2,46 Å de resolução, respectivamente e utilizadas para a construção de um modelo para a hGal4. Com base nos estudos de dinâmica molecular e estabilidade térmica foi possível propor um modelo de interação entre os CRDs através do peptídeo de ligação. Ensaios de dinâmica da hGal4 com LacNAc sugeriram uma diferença de plasticidade dos CRDs no reconhecimento do ligante. Foram também realizadas incessantes tentativas de desenvolver um protocolo de expressão heteróloga para as isoformas e domínios da galectina-12 humana (hGal12). Como resultado, observamos uma alta tendência à formação de corpos de inclusão e agregados resistentes a desnaturação, além da susceptibilidade ao ataque proteolítico. Os modelos estruturais dos domínios da hGal12 não permitiram identificar nenhuma característica que justificasse o comportamento das proteínas. Foram realizados estudos de localização celular em células HL-60 e foi possível identificar a presença da hGal12 na superfície das gotas de lipídio, organelas responsáveis pelo armazenamento de energia e o processo de catabolismo celular. A alta insolubilidade observada para as isoformas e domínios da hGal12, a sua localização em gotas de lipídeos, a divergência evolutiva da hGal12 quando comparada com outras galectinas do mesmo grupo e incluindo o fato de um dos CRDs não apresentar os requerimentos estruturais básicos para ligar ?-galactosídeos, nos leva a especular se essa proteína estaria, na verdade, sendo expressa como parte de um heterocomplexo proteico, que estabilizaria a estrutura da hGal12 e a endereçaria para as gotas de lipídeo. Em nossa hipótese, o domínio hGal12-CRD2 poderia ter evoluído para favorecer a interação com outros parceiros macromoleculares. Devido ao importante papel desempenhado pelas galectinas em inúmeros processos celulares, os resultados aqui obtidos representam uma importante contribuição no entendimento do papel que as galectinas hGal4 e hGal12 exercem nos diferentes eventos celulares, além de fornecem ferramentas experimentais para desenvolvimento de futuros estudos funcionais. / Galectins are proteins that share characteristics such as affinity for ?-galactosides and the presence of a carbohydrate recognition domain (CRD). They belong to a family of proteins that display the important role of decoding molecular messages. Galectins are found in a variety of cell types and are involved in several biological phenomena related to immune response and inflammation. The tandem-repeat group of galectins consists of proteins with two distinct CRDs (CRD1 and CRD2) connected by a peptide linker, in which belong galectins-4 and -12, targets of our study. During the development of the present project a multidisciplinary approach was used including the use of biophysical, crystallographic, computational and immunochemical techniques. The structural characterization of human galectin-4 (hGal4) and its hGal4-CRD1 and hGal4-CRD2 independent domains was initiated by their heterologous protein production, thermal stability and crystallization assays. The crystallographic structure of domains were determined at 1.48 e 2.46 Å resolution, respectively, and used for constructing a model for hGal4. Based on molecular dynamics and thermal stability studies we propose a model of interaction between CRDs mediated by linker peptide. Dynamics simulation of hGal4 with LacNAc suggested a difference in plasticity between CRDs and ligand recognition. In addition, several attempts have been made towards the development of a protocol for expression of isoforms and independent domains from human galectin-12 (hGal12). As result, we observed a high tendency to body inclusion formation and denaturing resistant aggregates, besides high susceptibility to proteolytic attack. Structural models for the hGal12 domains did not allow the identification of any feature to justify proteins behavior. Cell location studies in HL-60 cells were performed and hGal12 was found to be located on the surface of lipid droplets, organelles responsible for energy storage and catabolism. The high insolubility displayed by isoforms and domains from hGal12, together with its location on lipid droplets, the evolutionary divergence of hGal12 compared to tandem-repeat proteins, and the fact that hGal12-CRD2 does not present the structural requirements for ?-galactosides binding, suggest that hGal12 is, in fact, expressed as part of a protein complex that could both stabilize hGal12 structure and guide it to the lipid droplets. In our hypothesis, the hGal12-CRD2 could have evolved in order to favor the interaction with other macromolecular partners. Due to crucial roles displayed by galectins in innumerous biological process, we believe that our results represent an important contribution for the understanding of hGal4 e hGal12 proteins roles within the cell, besides providing experimental tools for the development of further functional studies.

Este trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de 39 isolados bacterianos para produção de polihidroxialcanoatos contendo monômeros de cadeia média (PHA|MCL). Os isolados foram incapazes de utilizar eficientemente amido, lactose ou sacarose. O desempenho na produção de PHA a partir de glicose ou frutose pelos isolados foi inferior à linhagem de referência (Pseudomonas sp. LFM046). Muitos dos isolados apresentaram bom desempenho na conversão de glicerol em PHAMCL. Pela primeira vez, foram detectadas bactérias capazes de produzir PHAMCL a partir de xilose. Com base no sequenciamento do rDNA 16S, estes isolados foram identificados como pertencentes ao gênero Pseudomonas. Cultivos em biorreator, resultaram em uma biomassa de aproximadamente 6 g/L, contendo cerca de 11 a 14% de PHA. A superexpressão dos genes responsáveis pelo catabolismo de xilose (xylAB) em Escherichia coli não levou a melhora no consumo de xilose ou produção de PHAMCL. / This work aimed to evaluate the potential of 39 bacterial isolates to produce polyhydroxyalkanoates containing medium-chain monomers (PHAMCL). The isolates were unable to efficiently utilize starch, lactose or sucrose. The performance of the PHA production from glucose or fructose by the isolates was lower than the reference strain (Pseudomonas sp. LFM046). Many isolates showed good performance in the conversion of glycerol into PHAMCL. For the first time, bacterial isolates capable of producing PHAMCL from xylose were detected. Based on the sequencing of 16S rDNA, these isolates were identified as belonging to the genus Pseudomonas. Bioreactor cultures resulted in a biomass of approximately 6 g/L, containing about 11 to 14% PHA. Overexpression of the genes responsible for the catabolism of xylose (xylAB) in Escherichia coli did not led to improved xylose consumption or production of PHAMCL.

The metabolic syndrome is a cluster of disorders (obesity, dyslipidaemia, hyperinsulinaemia and hypertension) which individually or collectively lead to an increase in the risk of cardiovascular disease. Over the years it has been associated with endothelial dysfunction, raised markers of chronic inflammation, insulin resistance and clotting dysregulation. Studies have shown that the prevalence of the metabolic syndrome in adults over the age of 20 years to be 24%, with approximately 12 million adults within the United Kingdom fulfilling the criteria for diagnosis. Numbers of individuals with the metabolic syndrome continue to rise following population trends of increasing sedentary lifestyle, high calorie intake, smoking, and stress. Associated is an increase in obesity, type 2 diabetes, cardiac disease, stroke and death. The increase is such that we can no longer be complacent about how we address the metabolic syndrome or its associated components. The management of the metabolic syndrome is varied and includes alterations in diet, physical exercise, and oral medication. It is well documented that a 10% reduction in weight leads to reductions in lipid abnormalities, diabetes and diabetes-related deaths, other total morbidity and deaths. Many dietary regimens have been postulated to benefit not only weight gain but improve cardiovascular risk. To address this we investigated the effect three different diets (low fat; low carbohydrate, high fat; and low glycaemic load) had on the metabolic syndrome to assess whether it is the changes in dietary caloric or macronutrient intake, or overall weight loss that had the greater influences on those aspects of metabolic syndrome which could potentially reduce cardiovascular risk.

A manga é um fruto ainda considerado exótico, onde quase tudo relativo ao seu amadurecimento está por ser esclarecido. Pouco se conhece da sua fisiologia e bioquímica pós colheita. Os objetivos deste trabalho foram avaliar algumas variedades de mangas durante o crescimento e amadurecimento; quanto aos açúcares solúveis, amido e ácido ascórbico; a atividade das enzimas sacarose-fosfato sintase e sacarose sintase durante este mesmo período na manga Van Dyke e o perfil de respiração e etileno das variedades Van Dyke, Tommy Atkins e Haden após a colheita. Os resultados mostraram que os perfis dos açúcares solúveis relativos ao adoçamento e seu metabolismo são altamente dependentes do cultivar e da maturidade fisiológica da manga. A sacarose foi o açúcar predominante em todas as variedades analisadas, sendo que o maior valor encontrado foi de aproximadamente 5% na manga Van Dyke. A frutose foi a hexose predominante na manga madura, e sua relação com a glicose variou de 2,5 a 48 vezes. Os teores de amido existentes quando a manga é colhida, independente da variedade, são muito baixos, menores que 3,0%. As enzimas ligadas ao metabolismo da sacarose, saca rose-fosfato sintase (SPS) e sacarose sintase (SS), tiveram a atividade aumentada na fase de amadurecimento pós colheita no cultivar Van Dyke. O teor de ácido ascórbico, na maioria das variedades diminuiu antes da colheita, exceto a manga Keitt e a manga Tommy Atkins, sendo esta a que apresentou maior teor de ácido ascórbico no fruto maduro. Não houve produção de etileno após o ponto de colheita, e foi encontrado mais de um pico de respiração nas mangas Haden e Van Dyke, resultado atípico de outros frutos climatéricos. / The mango ripening process and the associated physiological and biochemical changes is still poorly known. Also is unknown if the bulk of sugar is accumulated prior or after the onset of ripening. The aim of this work was to evaluate the soluble sugars, starch and ascorbic acid content during the growth and ripening of several mango varietes. The sucrose-phosphate synthase (SPS) and sucrose synthase (SS) activities were evaluated in Van Dyke mango variety. The post harvest respiration and ethylene profiles of the Van Dyke, Tommy Atkins and Haden varieties were analyzed after harvesting. The results shown that the changes on total sugar profiles were highly dependent on the cultivar and physiogical maturity. Sucrose was the predominant sugar in ali analyzed varieties. The fructose amount was 2,5 to 48 times higher than glucose being the predominant hexoses in ripe fruit. The starch content of any variety of harvested mango is too low, with values under 3,0%. The sucrose related enzymes (SPS and SS), showed an increasing activity during the post-harvest ripening of Van Dyke\'s cultivar. For most varieties, the ascorbic acid content decreased before the harvest point, except for Keitt and Tommy Atkins mangos. The highest ascorbic acid content was found in the ripened Tommy fruit. One increase in the ethylene was not detected after harvesting. More than one respiration peak was detected for Haden and Van Dyke\'s varieties, this result is different of the other climacteric fruit\'s one.