A literatura relata que o veneno de Crotalus durissus terrificus (VCdt) ou suas toxinas isoladas modulam a resposta inflamatória. A crotoxina (CTX) é a principal toxina do VCdt, representando aproximadamente 65% do conteúdo do veneno bruto. Dando continuidade aos estudos que evidenciam o efeito modulador do VCdt sobre a inflamação, foi demonstrado que o VCdt apresenta um efeito anti-inflamatório prolongado sobre a resposta inflamatória induzida pela carragenina (Cg), em camundongos. Esse estudo mostrou que uma única dose de VCdt, administrada pela via subcutânea, 7 ou 21 dias antes da injeção de Cg inibe, respectivamente, o desenvolvimento do edema de pata e a migração celular para a cavidade peritoneal, induzidos por este agente inflamatório. Este efeito anti-inflamatório também foi observado após a instalação da resposta inflamatória (Nunes et al., 2007). Além disso, foi demonstrado também que a CTX, é a toxina responsável por este efeito anti-inflamatório prolongado. Ainda, dados recentes mostram que os receptores para peptídeo formil, tais como lipoxina/anexina, mediadores com potente ação anti-inflamatória, estão envolvidos no efeito da CTX. Em continuidade a essa linha de investigação, este trabalho teve por objetivo caracterizar o efeito da CTX sobre a expressão de mediadores pró-inflamatórios e de moléculas de adesão envolvidas na resposta inflamatória induzida pela Cg. em camundongos. Além de avaliar também o efeito desta toxina sobre a translocação da subunidade p65 do NF-κB para o núcleo celular. Para tanto, foi, investigado o efeito de uma única dose de CTX (44 μg/kg) sobre: a expressão de P-selectina, ICAM-1, PECAM-1 e Mac-1; sobre a secreção de TNF-α, IL-1β, IL-6, PGE2, e LTB4 e sobre a expressão de iNOS e p65. Cabe destacar ainda que, um inibidor da síntese de glicocorticoides (Mifepristone), bem como um antagonista de receptor para glicocorticoides (Metirapona) foram administrados antes do tratamento da CTX, para avaliar também a participação de glicocorticoides endógenos no efeito anti-inflamatório da CTX. A administração subcutânea de uma única dose de CTX produziu: 1- diminuição da secreção de TNF-α, IL-1β, IL-6; 2- diminuição da expressão de P-selectina e ICAM-1 e 3- diminuição da expressão de p65. Por outro lado, a CTX não alterou os níveis de PGE2, e LTB4, como também não alterou a expressão de iNOS e Mac-1. Além disso, nossos resultados sugerem que os glicocorticóides endógenos não interferem no efeito anti-inflamatório da CTX, uma vez que o pré-tratamento com Mifepristone ou Metirapona não alteraram o efeito inibitório desta toxina sobre a migração celular. Em conjunto, os resultados caracterizam o efeito anti-inflamatório da CTX sobre a migração celular induzida pela Cg e sugerem que esta toxina pode inibir a expressão de importantes substâncias pró-inflamatórias envolvidas na resposta inflamatória pela Cg ao inibir a ativação do fator de transcrição, NF-κB, uma vez que este fator favorece a transcrição de vários genes, cujas proteínas são importantes no desenvolvimento da resposta inflamatória. Esses resultados contribuem para a elucidação dos mecanismos envolvidos na ação modulatória da CTX sobre a resposta inflamatória / The literature shows that Crotalus durissus terrificus snake venom (CdtV) or their toxins isolated modulate the inflammatory response. The crotoxin (CTX) is the main toxin of CdtV, representing approximately 65% of the content of the crude venom. It was demonstrated that CdtV presents a long-lasting anti-inflammatory effect induced by carrageenan (Cg) in mice. This study showed that a single dose of CdtV inhibits respectively, the development of paw edema and cell migration to the peritoneal cavity induced by this inflammatory agent. This anti-inflammatory effect was also observed after installation of the inflammatory response (Nunes et al., 2007). Furthermore, it was also demonstrated that CTX is responsible for this long-lasting anti-inflammatory effect. Still, recent data show that the formil peptide receptors, such as lipoxin/anexin, mediators with potent anti-inflammatory action, are involved in the effect of CTX. The aim of this study is characterize the effect of CTX on the expression of proinflammatory mediators and adhesion molecules involved in the inflammatory response induced by Cg in mice and also evaluate the effect of the toxin on translocation of the p65 subunit of NF-κB to the nucleus. Therefore, it was investigated the effect of a single dose of CTX (44 μg/kg) on: P-selectin, ICAM-1, PECAM-1 and Mac-1 expression; TNF-α, IL-1β, IL-6, PGE2 and LTB4 secretion and, on iNOS and p65 expression. It should be noted that a synthesis of glucocorticoids inhibitor (Mifepristone) and a glucocorticoid antagonist receptor (Metyrapone) were administrated before CTX treatment to evaluate the involvement of endogenous glucocorticoids in the anti-inflammatory effect of CTX. Our results show that a single dose of CTX produced: reduction of TNF-α, IL-1β and IL-6 secretion; reduction of P-selectin and ICAM-1 expression and reduction of p65 expression. Moreover, CTX did not alter levels of PGE2 and LTB4 secretion and did not alter iNOS and Mac-1 expression. Furthermore, our results suggest that endogenous glucocorticoids do not interfere with anti-inflammatory effect of CTX, since that pre-treatment with Mifepristone and Metyrapone did not alter the inhibitory effect of this toxin on cell migration induced by Cg and suggest that this toxin can inhibit the expression of important proinflammatory substances involved in the inflammatory response induced by Cg to inhibit the NF-κB activation, since this factor promotes the transcription of several genes whose proteins are important in the development inflammatory response. These results contribute to the elucidation of the mechanisms involved in the modulatory action of CTX on the inflammatory response

Nossa hipótese é de que os efeitos pró-inflamatórios iniciais da ativação do receptor ativado por protease 2 (PAR2) na articulação temporomandibular (ATM) sejam mediados por mecanismos neurogênicos. A análise por imunofluorescência revelou um alto grau de imunorreatividade ao PAR2 em aferentes primários trigeminais da ATM. Além do mais, a imunorreatividade ao PAR2 também foi observada na camada íntima da sinóvia, além de co-localizar com o marcador neuronal PGP9.5 e o neuropeptídeo substância P. A injeção intra-articular de agonistas PAR2 na ATM induziu um aumento dependente da dose no extravasamento plasmático, influxo de neutrófilos e indução de alodinia mecânica. O bloqueio farmacológico de receptors NK1 inibiu o aumento no extravasamento plasmático, influxo de neutrófilos e alodinia induzido pela ativação do PAR2. Em conclusão, a ativação do PAR2 é pró-inflamatório na ATM, via mecanismos neurogênicos envolvendo receptores NK1, sugerindo que o PAR2 é um importante componente da resposta imunológica inata na ATM. / We hypothesised that the early pro-inflammatory effects of proteinase-activated receptor 2 (PAR2) activation in the temporomandibular joint (TMJ) are mediated by neurogenic mechanisms. Immunofluorescence analysis revealed a high degree of neurons expressing PAR2 in retrogradely labelled trigeminal ganglion neurons. Furthermore, PAR2 immunoreactivity was observed in the lining layer of the TMJ, co-localizing with the neuronal marker PGP9.5 and substance P-containing peripheral sensory nerve fibres. The intra-articular injection of PAR2 agonists into the TMJ triggered a dose-dependent increase in plasma extravasation, neutrophil influx and induction of mechanical allodynia. The pharmacological blockade of NK1 receptors abolished PAR2-induced plasma extravasation and inhibited neutrophil influx and mechanical allodynia. We conclude that PAR2 activation is pro-inflammatory in the TMJ, through a neurogenic mechanism involving NK1 receptors. This suggests that PAR2 is an important component of innate neuro-immune response in the TMJ.

O presente estudo investigou o efeito do veneno de Crotalus durissus terrificus (VCdt) e da sua principal fração, crotoxina (ctx) sobre a resposta inflamatória induzida pela carragenina (cg). Foram avaliados o efeito do pré e do pós-tratamento com o VCdt sobre o desenvolvimento do edema de pata, a migração celular para a cavidade peritoneal e a interação leucócito-endotélio na microcirculação do músculo cremaster de camundongos induzidos por carragenina. O pré (14, 7 dias ou 1 h) e pós-tratamento (48, 4 ou 1 h) com o VCdt (1,5 μg/50 μL s.c.) inibiu o desenvolvimento do edema de pata induzido pela injeção intraplantar de carragenina em todos os tempos analisados (300 μg/50 μL). O mesmo efeito inibitório foi observado para o pré (21, 14, 7 dias ou 1 h) e pós-tratamento (1 h) com o VCdt (1,5 μg/50 μL s.c.) sobre a migração celular para a cavidade peritoneal induzida pela carragenina (300 μg/50 μL). A administração do VCdt por via oral (8,8 μg/200 μL) antes (14, 7 dias ou 1 h) ou após (1 h) a injeção de carragenina (300 μg/200 μL) também inibiu o influxo celular para a mesma cavidade. Em relação à interação leucócito-endotélio, o tratamento com o VCdt 1 h antes ou após a injeção de carragenina no subcutâneo da bolsa escrotal (300 μg/100 μL), aumentou o número de células em estado de rolling. Por outro lado, reduziu a adesão das células ao endotélio e a migração celular para o tecido extravascular. Da mesma forma que o VCdt, a ctx (0,89 μg/50 μL s.c.) administrada 1 h antes ou após a carragenina inibiu todos os eventos acima citados. Os efeitos inibitórios do VCdt sobre o edema e sobre a migração celular foi comparado ao de clássicas drogas antiinflamatórias: a dexametasona, a indometacina, o L-NAME e o nimesulide. Para o edema, foi observado que somente o VCdt e o nimesulide impediram a formação do segundo pico de edema de carragenina. Para a migração celular, não foi observada diferença entre o tratamento com o VCdt e as drogas antiinflamatórias. A associação do VCdt com as drogas antiinflamatórias acima citadas não potencializou as suas ações inibitórias sobre a migração celular. Os dados demonstram que o VCdt apresenta um efeito antiinflamatório prolongado, e ainda, que a ctx pode contribuir para o efeito antinflamatório do VCdt. / In the present study, we investigated the effects of Crotalus durissus terrificus venom (CdtV) and crotoxin (ctx) on vascular and cellular events of inflammation induced by carrageenan (cg) in mice. It was evaluated the effect of the pre or post-treatment with CdtV on development of paw edema, cell migration and leukocyte-endothelium interaction at the cremaster muscle microcirculation induced by cg in mice. The pre (14, 7 days or 1h) and posttreatment (48, 4 or 1h) with CdtV (1,5 μg/50 μL s.c.), inhibited the paw edema induced by carrageenan (300 μg/50 μL) in all periods of time evaluated. The same inhibitory effect of CdtV (1,5 μg/50 μL s.c.) was observed to the pre (21, 14, 7 days or 1 h) and post-treatment (1h) on cell migration to the peritoneal cavity induced by cg (300 μg/200 μL). The oral administration of CdtV (8,8 μg/200 μL) before (14, 7 days or 1h) or after (1h) intraperitoneal injection of cg (300 μg/200 μL), also inhibited the cell influx to the same cavity. To evaluate leukocyte-endothelium interaction, the treatment with CdtV 1h before or after the cg injection (300 μg/100 μL) into the scrotal bag of the animals induced an increase in leukocyte rolling, but reduced the cellular adhesion to the endothelium surface and cellular migration to the extravascular tissue. The administration of ctx (0,89 μg/50 μL s.c.) 1 h before or after cg injection, could inhibit all inflammatory events mentioned above. The inhibitory effect of CdtV on paw edema and cellular migration were also compared with that observed for classical anti-inflammatory drugs, such as: dexamethasone, indomethacin, LNAME and nimesulide. Only CdtV and nimesulide blocked the second peak of edema formation induced by cg. For cell migration, no differences were observed among the treatment with CdtV and anti-inflamatory drugs. The association of CdtV with drugs did not potentialize their actions on cell migration. These results demonstrate that CdtV exhibits a long-lasting antiinflammatory effect and that ctx could contribute for the anti-inflammatory effect of CdtV.

Nossa hipótese é de que os efeitos pró-inflamatórios iniciais da ativação do receptor ativado por protease 2 (PAR2) na articulação temporomandibular (ATM) sejam mediados por mecanismos neurogênicos. A análise por imunofluorescência revelou um alto grau de imunorreatividade ao PAR2 em aferentes primários trigeminais da ATM. Além do mais, a imunorreatividade ao PAR2 também foi observada na camada íntima da sinóvia, além de co-localizar com o marcador neuronal PGP9.5 e o neuropeptídeo substância P. A injeção intra-articular de agonistas PAR2 na ATM induziu um aumento dependente da dose no extravasamento plasmático, influxo de neutrófilos e indução de alodinia mecânica. O bloqueio farmacológico de receptors NK1 inibiu o aumento no extravasamento plasmático, influxo de neutrófilos e alodinia induzido pela ativação do PAR2. Em conclusão, a ativação do PAR2 é pró-inflamatório na ATM, via mecanismos neurogênicos envolvendo receptores NK1, sugerindo que o PAR2 é um importante componente da resposta imunológica inata na ATM. / We hypothesised that the early pro-inflammatory effects of proteinase-activated receptor 2 (PAR2) activation in the temporomandibular joint (TMJ) are mediated by neurogenic mechanisms. Immunofluorescence analysis revealed a high degree of neurons expressing PAR2 in retrogradely labelled trigeminal ganglion neurons. Furthermore, PAR2 immunoreactivity was observed in the lining layer of the TMJ, co-localizing with the neuronal marker PGP9.5 and substance P-containing peripheral sensory nerve fibres. The intra-articular injection of PAR2 agonists into the TMJ triggered a dose-dependent increase in plasma extravasation, neutrophil influx and induction of mechanical allodynia. The pharmacological blockade of NK1 receptors abolished PAR2-induced plasma extravasation and inhibited neutrophil influx and mechanical allodynia. We conclude that PAR2 activation is pro-inflammatory in the TMJ, through a neurogenic mechanism involving NK1 receptors. This suggests that PAR2 is an important component of innate neuro-immune response in the TMJ.

Disfunções temporomandibulares são secundárias à inflamação e dor. Estudos mostram a participação da ET na nocicepção. Investigamos o papel da ET1 na sinovite induzida pela injeção de CGN na ATM de ratos. Injeções intra-articulares de CGN, ET1 ou do agonista do receptor ETB BQ3020 foram realizadas na ATM. Após 4h, a hiperalgesia foi avaliada usando um analgesímetro digital e as cavidades articulares foram lavadas para contagem total e diferencial de leucócitos. Antagonistas dos receptores ETA e ETB foram co-injetados com CGN e ET1, e o antagonista de TRPV1 capsazepina com a ET1. A ET1, o BQ3020 e a CGN induziram hiperalgesia que foi inibida pela injeção simultânea (mas não individual) dos antagonistas ETA e ETB. A capsazepina não afetou o efeito nociceptivo da ET1. Nem a ET1, o BQ3020 nem os antagonistas dos receptores da ET afetaram a infiltração de leucócitos. Com base nestes resultados concluímos que a ET1 induz hiperalgesia e está envolvida na nocicepção induzida por CGN através dos receptores ETA e ETB, sem qualquer efeito sobre a migração de leucócitos. / Temporomandibular disorders are secondary to inflammation and pain. Studies show the involvement of ET in nociception. Weve investigated the role of ET1 in synovitis induced by CGN injection on the rats TMJ. Intra-articular injections of CGN, ET1 or ETB receptor agonist BQ3020 were performed at the TMJ. After 4h, hyperalgesia was assessed using a digital analgesimeter and the joint cavities were washed for total and differential leukocyte counting. ETA and ETB receptors antagonists were co-injected with CGN and ET1, and the TRPV1 antagonist capsazepine with ET1. ET1, BQ3020 and CGN induced hyperalgesia, which was inhibited by simultaneous (but not single) antagonists ETA and ETB injection. The capsazepine did not affect the ET1 nociceptive effect. Neither ET1, BQ3020 nor antagonists of ET receptors affect leukocyte infiltration. Based on these results we conclude that the ET1 induces hyperalgesia and its involved in CGN induced nociception through ETA and ETB receptors, without any effect on the leukocytes migration.

Orientadores: Claudia Herrera Tambeli, Maria Cecilia F. A. Veiga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T06:07:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_LucianeLacerdaFrancoRocha_D.pdf: 2035730 bytes, checksum: 6401d3a12bda71532a90f1fa6da06785 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Considerando que a ATM recebe uma rica inervação simpática, o objetivo deste estudo foi investigar o papel das aminas simpatomiméticas na hiperalgesia da ATM induzida pela carragenina, além de validar a natureza inflamatória do modelo de hiperalgesia quimicamente induzida pela carragenina na ATM de ratos. Uma pequena dose de 5-hydroxytriptamina (5-HT; 75mg) que induz resposta comportamental nociceptiva mínima, foi aplicada na região da ATM de ratos 1h após a injeção de carragenina (C; 100mg) para detectar a sensibilização induzida pela carragenina na região da ATM, que foi avaliada pela soma das respostas nociceptivas comportamentais, como coçar a região orofacial e levantar a cabeça. O bloqueio da síntese de prostaglandinas pela indometacina sistêmica (2,5mg/kg) ou local (10µg) antes do início da inflamação pela carragenina diminuiu significativamente a hiperalgesia da ATM. A depleção das aminas simpatomiméticas pela guanetidina (30mg/kg por três dias consecutivos antes da injeção de carragenina na ATM) ou a co-aplicação de antagonistas dos adrenoceptores ß (propranolol nas doses de 0,25 e 2,25µg), assim como os antagonistas dos adrenoceptores ß2 (ICI 118,551 nas doses de 0,05 e 0,1 µg) com carragenina (C; 100 µg) reduziram significativamente a hiperalgesia na ATM. A co-aplicação de antagonistas dos adrenoceptores ß1 (atenolol nas doses de 6, 18, 54 ou 162µg) não afetou as respostas comportamentais induzidas pela carragenina (C; 100µg). Indometacina local, propranolol e ICI 118,551 não tiveram efeito quando injetados na ATM contra lateral, o que indica uma participação periférica das prostaglandinas e das aminas simpatomiméticas nesta hiperalgesia. Estes resultados sugerem que as aminas simpatomiméticas são liberadas no local da injúria onde as mesmas contribuem para a hiperalgesia inflamatória na ATM através dos adrenoceptores ß2, indicando que os mesmos são possíveis alvos para o desenvolvimento de novas drogas analgésicas no controle da dor da ATM / Abstract: The aim of this study was to further validate our carrageenan-induced temporomandibular joint (TMJ) inflammatory hyperalgesia model in rats by showing that administration of indomethacin before the initiation of inflammation would diminish the TMJ hyperalgesia. By using this model, it was investigated whether norepinephrine and local adrenoceptors contribute to the development of inflammatory TMJ hyperalgesia. Carrageenan-induced TMJ hyperalgesia was assessed by measuring the behavioral nociceptive responses, such as rubbing the orofacial region and flinching the head, induced by the injection of a low dose of 5-hydroxytryptamine into the TMJ sensitized one hour before by a TMJ injection of carrageenan. Blockade of prostaglandin synthesis by indomethacin prior to initiation of inflammation by carrageenan significantly attenuated the TMJ hyperalgesia. The guanethidine depletion of norepinephrine or the blockade of ß2 but not the blockade of the ß1 adrenoceptor by the selective adrenoceptor antagonists ICI 118.551 and atenolol, respectively, significantly reduced carrageenan-induced TMJ hyperalgesia. In this study, we further validate our carrageenan-induced TMJ hyperalgesia model to study the mechanisms involved in inflammatory TMJ hyperalgesia and to test the analgesic effect of different types of peripheral analgesics. By using this model, we show that norepinephrine is released at the site of injury where it contributes to the development of the inflammatory TMJ hyperalgesia. It is proposed that the contribution of norepinephrine to the development of the inflammatory TMJ hyperalgesia is mediated by the activation of ß2-adrenoceptors. Perspective: The findings that local sympathomimetic amines contribute to the inflammatory TMJ hyperalgesia by acting on ß2-adrenoceptors may be relevant to clinical TMJ inflammatory pain states less sensitive to non-steroidal anti-inflammatory drugs / Doutorado / Fisiologia Oral / Doutor em Odontologia

A literatura relata que o veneno de Crotalus durissus terrificus (VCdt) ou suas toxinas isoladas modulam a resposta inflamatória. A crotoxina (CTX) é a principal toxina do VCdt, representando aproximadamente 65% do conteúdo do veneno bruto. Dando continuidade aos estudos que evidenciam o efeito modulador do VCdt sobre a inflamação, foi demonstrado que o VCdt apresenta um efeito anti-inflamatório prolongado sobre a resposta inflamatória induzida pela carragenina (Cg), em camundongos. Esse estudo mostrou que uma única dose de VCdt, administrada pela via subcutânea, 7 ou 21 dias antes da injeção de Cg inibe, respectivamente, o desenvolvimento do edema de pata e a migração celular para a cavidade peritoneal, induzidos por este agente inflamatório. Este efeito anti-inflamatório também foi observado após a instalação da resposta inflamatória (Nunes et al., 2007). Além disso, foi demonstrado também que a CTX, é a toxina responsável por este efeito anti-inflamatório prolongado. Ainda, dados recentes mostram que os receptores para peptídeo formil, tais como lipoxina/anexina, mediadores com potente ação anti-inflamatória, estão envolvidos no efeito da CTX. Em continuidade a essa linha de investigação, este trabalho teve por objetivo caracterizar o efeito da CTX sobre a expressão de mediadores pró-inflamatórios e de moléculas de adesão envolvidas na resposta inflamatória induzida pela Cg. em camundongos. Além de avaliar também o efeito desta toxina sobre a translocação da subunidade p65 do NF-κB para o núcleo celular. Para tanto, foi, investigado o efeito de uma única dose de CTX (44 μg/kg) sobre: a expressão de P-selectina, ICAM-1, PECAM-1 e Mac-1; sobre a secreção de TNF-α, IL-1β, IL-6, PGE2, e LTB4 e sobre a expressão de iNOS e p65. Cabe destacar ainda que, um inibidor da síntese de glicocorticoides (Mifepristone), bem como um antagonista de receptor para glicocorticoides (Metirapona) foram administrados antes do tratamento da CTX, para avaliar também a participação de glicocorticoides endógenos no efeito anti-inflamatório da CTX. A administração subcutânea de uma única dose de CTX produziu: 1- diminuição da secreção de TNF-α, IL-1β, IL-6; 2- diminuição da expressão de P-selectina e ICAM-1 e 3- diminuição da expressão de p65. Por outro lado, a CTX não alterou os níveis de PGE2, e LTB4, como também não alterou a expressão de iNOS e Mac-1. Além disso, nossos resultados sugerem que os glicocorticóides endógenos não interferem no efeito anti-inflamatório da CTX, uma vez que o pré-tratamento com Mifepristone ou Metirapona não alteraram o efeito inibitório desta toxina sobre a migração celular. Em conjunto, os resultados caracterizam o efeito anti-inflamatório da CTX sobre a migração celular induzida pela Cg e sugerem que esta toxina pode inibir a expressão de importantes substâncias pró-inflamatórias envolvidas na resposta inflamatória pela Cg ao inibir a ativação do fator de transcrição, NF-κB, uma vez que este fator favorece a transcrição de vários genes, cujas proteínas são importantes no desenvolvimento da resposta inflamatória. Esses resultados contribuem para a elucidação dos mecanismos envolvidos na ação modulatória da CTX sobre a resposta inflamatória / The literature shows that Crotalus durissus terrificus snake venom (CdtV) or their toxins isolated modulate the inflammatory response. The crotoxin (CTX) is the main toxin of CdtV, representing approximately 65% of the content of the crude venom. It was demonstrated that CdtV presents a long-lasting anti-inflammatory effect induced by carrageenan (Cg) in mice. This study showed that a single dose of CdtV inhibits respectively, the development of paw edema and cell migration to the peritoneal cavity induced by this inflammatory agent. This anti-inflammatory effect was also observed after installation of the inflammatory response (Nunes et al., 2007). Furthermore, it was also demonstrated that CTX is responsible for this long-lasting anti-inflammatory effect. Still, recent data show that the formil peptide receptors, such as lipoxin/anexin, mediators with potent anti-inflammatory action, are involved in the effect of CTX. The aim of this study is characterize the effect of CTX on the expression of proinflammatory mediators and adhesion molecules involved in the inflammatory response induced by Cg in mice and also evaluate the effect of the toxin on translocation of the p65 subunit of NF-κB to the nucleus. Therefore, it was investigated the effect of a single dose of CTX (44 μg/kg) on: P-selectin, ICAM-1, PECAM-1 and Mac-1 expression; TNF-α, IL-1β, IL-6, PGE2 and LTB4 secretion and, on iNOS and p65 expression. It should be noted that a synthesis of glucocorticoids inhibitor (Mifepristone) and a glucocorticoid antagonist receptor (Metyrapone) were administrated before CTX treatment to evaluate the involvement of endogenous glucocorticoids in the anti-inflammatory effect of CTX. Our results show that a single dose of CTX produced: reduction of TNF-α, IL-1β and IL-6 secretion; reduction of P-selectin and ICAM-1 expression and reduction of p65 expression. Moreover, CTX did not alter levels of PGE2 and LTB4 secretion and did not alter iNOS and Mac-1 expression. Furthermore, our results suggest that endogenous glucocorticoids do not interfere with anti-inflammatory effect of CTX, since that pre-treatment with Mifepristone and Metyrapone did not alter the inhibitory effect of this toxin on cell migration induced by Cg and suggest that this toxin can inhibit the expression of important proinflammatory substances involved in the inflammatory response induced by Cg to inhibit the NF-κB activation, since this factor promotes the transcription of several genes whose proteins are important in the development inflammatory response. These results contribute to the elucidation of the mechanisms involved in the modulatory action of CTX on the inflammatory response

O sulfeto de hidrogênio (H2S) é uma molécula produzida endogenamente que desempenha um importante papel em diversos processos fisiológicos e patológicos, incluindo inflamação e nocicepção. Assim, os objetivos deste estudo foram avaliar os efeitos de um doador de H2S de liberação lenta, o composto GYY-4137, na sinovite aguda induzida por carragenina (CGN) na articulação temporomandibular (ATM) de ratos, e caracterizar os mecanismos envolvidos. Os resultados mostraram que na sinovite aguda de ATM (caracterizada por alodinia mecânica e infiltração de leucócitos 4 h após a injeção i.art. de CGN), a administração concomitante do composto GYY-4137 resultou em redução destes parâmetros envolvendo a participação de GMPc e abertura de canais KATP, sem afetar a produção aumentada das citocinas IL-1β e IL-6. Estes achados dão suporte ao uso de doadores de H2S como potenciais alternativas terapêuticas para o tratamento de distúrbios temporomandibulares. / Hydrogen sulfide (H2S) is an endogenously produced molecule that plays an important role in many physiological and pathological processes, including inflammation and nociception. The objectives of this study were to evaluate the effects of slow-release H2S donor, compound GYY-4137, in the carrageenan (CGN) induced acute synovitis of the temporomandibular joint (TMJ) in rats, and to characterize the mechanisms involved. The results showed that in the acute TMJ synovitis (characterized by mechanical allodynia and leukocyte infiltration 4 h after the i.art CGN injection), the concomitant administration of compound GYY-4137 resulted in reduction of these parameters, involving the participation of cGMP and KATP opening, without affecting the increased production of the cytokines IL-1β and IL-6. These findings support the use of H2S donors as potential therapeutic alternatives for treatment of temporomandibular disorders.

Temporomandibular Disorder (TMD) is a dysfunction that affects the temporomandibular joint (TMJ), characterized primarily by the presence of pain. It has been shown that low level laser therapy (LLLT) presents analgesic and anti-inflammatory effects in cases of TMD, but still experimental studies are scarce in order to understand the mechanisms involved in this biological activity. Therefore, the purpose of this work was to evaluate the ability of LLLT to control pain and inflammation induced by different chemical agents injected in the rat s TMJ. A study was carried out in two steps. At first induction of nociception was performed with 2.5% formalin in 25 Wistar rats ATM of 25 (300 ± 50 g), which they were randomly divided into 05 groups (n=5): CRG (no treatment); DFN (diclofenac sodium); LST1 (LLLT 12,5 J/cm2); LST2 (LLLT 52.5 J/cm2) and LST3 (LLLT 87.5 J/cm2). The LLLT was performed in a single application, with the apparatus laser with 780 nm (GaAlAs diode laser). The animals were evaluated considering the nociceptive behaviors characterized by rubbing the orofacial (RO) region and flinching the head (FH) quickly, analyzed separately and summed the behaviors. Data were analyzed through Anova test (one way) and Tukey s test. In the second stage, inflammation was induced in the TMJ of 45 Wistar rats (300 ± 50 g) with carrageenan to 1%. Then, the animals were divided into 03 main groups (n=15): CRG (no treatment); DFN (diclofenac sodium) and LST3 (LLLT 52.5 J/cm2). The LLLT was performed every 48 h, with the laser device described above. At specific times (24 h, 3 days and 7 days) five animals from each group were randomly sacrificed and their TMJ specimens were processed and stained with hematoxylin/eosyn (HE). The data were submitted to descriptive analysis regarding to semiquantitative and morphostrutural changes and mphasizing the inflammatory aspects and vascular neoformation. Data were analyzed through Kruskal-Wallis test and Dunn s post-hoc test. The results showed that DFN, LST2 and LST3 significantly reduced nociceptive responses characterized by the sum of the behaviors of FH and RO (p<0.001). DFN was also able to reduce the behaviors of FH (p< 0.05) and CO (p< 0.01) when assessed separately, as well as it was observed in LST2 (FH and RO, p<0.001). The LST1 did not elicit nociceptive effect. In the histological analysis, an inflammatory infiltration was observed significantly more intense in CRG than in DFN and LST2 in 24 h (P<0.05 e p<0.001), 3 days (p<0.01 e p<0.001) and 7 days (p<0.001 e p<0.01). In addition, the contingent of neutrophils was more conspicuous in CRG than in other groups in 24h. The vascular neoformation was less expressive in CRG than DFN (p<0.001) and LST2 (p<0.001) in 24 h, while in 3 days, exhibited greater quantitative LST2 blood vessels than CRG (p<0.001) and DFN (p<0.001). In 7 days, there was no difference in vascular content between experimental groups (p>0.05). Based on the results, one might conclude that the LLLT showed anti-inflammatory and antinociceptive effect in the inflammation induced in the TMJ of animals. / A Desordem temporomandibular (DTM) é uma disfunção que afeta a articulação temporomandibular (ATM), sendo caracterizada principalmente pela presença de dor. Tem sido demonstrado que fototerapia laser de baixa potência (FLBP) apresenta efeitos analgésicos e anti-inflamatórios em casos de DTM, mas ainda são escassos os estudos experimentais que permitam compreender os mecanismos envolvidos nesta atividade biológica. Sendo assim, o propósito desse trabalho foi avaliar a capacidade da FLBP em controlar a dor e a inflamação induzidas na ATM de ratos com diferentes agentes químicos. Para isso, foi realizado um estudo em duas etapas. Na primeira, foi induzida nocicepção com formalina a 2,5% na ATM de 25 ratos Wistar (325 ± 25 g), que foram então distribuídos aleatoriamente em 05 grupos (n=5): CRG (sem tratamento); DFN (tratados com diclofenaco sódico); LST1 (tratado com FLBP 12,5 J/cm2); LST2 (tratado com FLBP 52,5 J/cm2) e LST3 (tratado com FLBP 87,5 J/cm2). A FLBP foi realizada em única aplicação, com laser diodo GaAlAs a 780 nm. Os animais foram avaliados em relação aos comportamentos de levantar a cabeça (LC), coçar a face (CO), analisados separadamente e somados os comportamentos. Os dados foram analisados por meio de teste Anova (uma via) e teste de Tukey. Na segunda etapa, foi induzida inflamação na ATM de 45 ratos Wistar (325 ± 25 g) com carragenina a 1%. Posteriormente, os animais foram divididos em 03 grupos principais (n=15): CRG (sem tratamento), DFN (tratados com diclofenaco sódico) e LST2 (tratado com FLBP 52,5 J/cm2). A FLBP foi realizada a cada 48 h, com laser diodo GaAlAs a 780 nm. Em 24 h, 3 e 7 dias, cinco animais de cada grupo foram randomicamente eutanasiados e os espécimes de ATM foram processados e corados com hematoxilina/eosina (HE). Foi realizada análise descritiva das alterações morfoestruturais e semiquantitativa da intensidade da resposta inflamatória e neoformação vascular. Os dados foram analisados pelo teste Kruskal-Wallis e extensão posthoc de Dunn. Os resultados demonstraram que o DFN, o LST2 e o LST3 significativamente reduziram as respostas nociceptivas caracterizadas pela soma dos comportamentos de LC e CO (p<0.001). DFN também foi capaz de reduzir os comportamentos de LC (p<0.05) e CO (p<0.01) quando avaliados separadamente, da mesma forma que o LST2 (LC e CO, p<0.001). O LST1 não apresentou efeito antinociceptivo. Na análise histológica, foi observada uma infiltração inflamatória significativamente mais intensa in CRG do que em DFN e LST2 em 24 h (P<0,05 e p<0,001), 3 dias (p<0,01 e p<0,001) e 7 dias (p<0,001 e p<0,01). Além disso, o contingente de neutrófilos foi mais conspícuo em CRG do que nos demais grupos em 24 h. A neoformação vascular se apresentou menos expressiva em CRG do que DFN (p<0,001) e LST2 (p<0,001) em 24 h, enquanto que em 3 dias, LST2 exibiu maior quantitativo de vasos sanguíneos que CRG (p<0,001) e DFN (p<0,001). Em 7 dias, não houve diferença no conteúdo vascular entre os grupos (p>0,05). Baseado nos resultado pôde-se concluir que a FLBP apresentou atividade antinociceptiva e anti-inflamatória na indução realizada na ATM de animais experimentais.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os antiinflamatÃrios podem apresentar efeitos diferenciados quanto a eficÃcia terapÃutica, podendo, alguns serem bons analgÃsicos e outros potentes antiinflamatÃrios. Neste estudo, foram avaliados e comparados os efeitos anti-edematogÃnicos de antiinflamatÃrios nÃo esteroidais seletivos COX-2, lumiracoxibe 5mg/Kg, 30mg/Kg, 100mg/Kg, relativamente seletivos, nimesulida 25mg/Kg, meloxicam 30mg/Kg, nÃo seletivos COX, diclofenaco de sÃdio 20mg/Kg, alÃm dos glicocorticÃides dexametasona (3mg/Kg) e hidrocortisona (4mg/Kg), no clÃssico modelo de edema em pata de rato induzido por carragenina (EPICg). Cada grupo com 4 animais, recebia uma hora antes da injeÃÃo subcutÃnea (s.c) intraplantar do estÃmulo inflamatÃrio a dose referente de cada droga a ser testada, sendo que o grupo-controle recebia soluÃÃo salina 0,9%. ApÃs uma hora da administraÃÃo destas doses, 0,1mL de carragenina a 1% era injetada na pata direita de cada animal. O volume da pata edemasiada foi aferido quatro vezes em intervalos de uma hora, em um pletismÃgrafo digital (Ugo Basile Â).O efeito antiedematogÃnico de cada droga testada foi determinado pela comparaÃÃo dos resultados com o grupo-controle atravÃs do teste ANOVA. Dexametasona (3mg/Kg) e diclofenaco (20mg/Kg) foram as drogas com melhor desempenho, com taxa de reduÃÃo significativa do edema, na 3Â hora, em 94,20% e 84,43%, respectivamente. JÃ o lumiracoxibe, nas trÃs concentraÃÃes utilizadas, 5mg/Kg, 30mg/Kg, 100mg/Kg, obteve efeito significativo na reduÃÃo do edema, com 47,49%, 61,21%, 47,76% respectivamente na 3Â hora. Meloxicam, nimesulida e hidrocortisona tambÃm demonstraram eficiÃncia, com taxas de 42,48%, 62,27% e 58,84%, respectivamente. O presente estudo demonstrou que dexametasona (3mg/Kg) e diclofenaco (20mg/Kg) apresentaram potente aÃÃo antiedematogÃnica e que drogas mais seletivas COX-2 nÃo mostraram eficÃcia comparÃvel ao diclofenaco / The anti-inflammatories might present several efects about de therapeutical efficacy being some powerful antiinflammatories, but others act as excellent analgesics. In this study were observed and compared the anti-edematogenic efects of selective COX-2 non-steroidal antiinflammatories, lumiracoxib 5mg/Kg, 30mg/Kg, 100mg/Kg, relatively selected, nimesulide 25mg/Kg, meloxicam 30mg/Kg, non selective COX, diclofenac 20mg/Kg, yet of the glucocorticoids dexamethasone (3mg/Kg) and hydrocortisone (4mg/Kg), on the classic model of the edema on rat paw induced by carrageenan. Each group of four animals got one hour before the subcutaneous injection (sc) of the inflamatory estimulation the dosage of each drug to be tested, being that the control group received saline solution 0.9%. After one hour of the management of those dosages, 0.1% to 1% of carrageenan was injected in the right paw of each animal. The volume of the edema paw was checked four times in between one hour breaks, in a digital pletismograph (Ugo Basile Â).The antiedematogenic effect of each tested drug was determined by the comparission of the results with the control group through the ANOVA test. Dexamethasone (3mg/Kg) and Diclofenac (20mg/Kg) were the drugs with best performance with significative reduction rate of the edema, on the third hour, in 94.20% and 84.43% respectively. But the lumiracoxib on the three concentrations used, 5mg/Kg, 30mg/Kg, 100mg/Kg got significative effect on the reduction of the edema with 47,49%, 61,21%, 47,76% respectively on the third hour. Meloxicam, nimesulide and hydrocortisone also demonstrated eficiency with rates of 42,48%, 62,27% and 58,84% respectively. The current study demonstrated that dexamethasone (3mg/Kg) and diclofenac (20mg/Kg) presented potencial antiedematogenic action and that more COX-2 selective drugs didnât show eficacy comparable to diclofenac