Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:08:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334652.pdf: 2332207 bytes, checksum: 62dc21cc8905637d24312db23ad9addf (MD5) Previous issue date: 2015 / A planta Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularmente conhecida como  timutu-pinheirinho , é uma planta característica da zona de campos do planalto catarinense e é tradicionalmente utilizada para tratar afecções dos rins, intestino e pulmões. O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito anti-inflamatório desta espécie e analisar o provável mecanismo de ação de seu composto majoritário, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Com este objetivo, o material vegetal foi submetido a extração por maceração com etanol 96% a temperatura ambiente por 7 dias para obtenção do extrato bruto hidroalcoólico (EBH). O EBH foi então submetido a extração sólido-líquido com solventes de diferentes polaridades para obtenção de três diferentes frações, sendo elas: fração hexânica (Hex), fração acetonica (Ac) e fração metanólica (MeOH). O composto 7-preniloxi-6-metoxicumarina (PC) foi isolado da fração Ac, identificado comparando-se dados de RMN H1 e C13 com literatura já publicada e quantificado através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-DAD). Para avaliação do efeito anti-inflamatório desta espécie foi realizada a quantificação de leucócitos totais e neutrófilos, além da quantificação de exsudato na cavidade pleural. Além disso, técnicas padronizadas descritas na literatura foram empregadas com intuito de verificar o efeito da P. sabulosa sobre a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-deaminase (ADA) e sobre as concentrações de metabólitos do óxido nítrico (NOx), e das citocinas pró-inflamatórias: fator necrose tumoral alpha (TNF-a) e interleucina 1 beta (IL-1ß). Com intuito de propor o mecanismo de ação do composto majoritário desta espécie, a atividade da PC foi avaliada sobre a expressão de mRNA das citocinas TNF-a, IL-1ß e da enzima oxido nítrico sintase induzida (iNOS), além de sua capacidade inibitória sobre a fosforilação da subunidade p65 do fator nuclear kappa B (NF-?B) e da proteína quinase induzida por mitógeno p38 (p38 MAPK). Todos os paramêtros inflamatórios foram avaliados 4 horas após a indução da pleurisia. Em todos os experimentos realizados a dexametasona (Dex 0,5 mg/kg, i.p.) foi utilizada como fármaco de referência anti-inflamatória. Para análise estatística dos resultados utilizou-se o teste de análise variância ANOVA, complementados pelo pós teste Newman-Keuls. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. O EBH, as frações Hex, Ac e MeOH e o composto isolado PC foram capazes de reduzir a migração leucocitária para a cavidade pleural às custas da inibição de netrófilos, além da exsudação (p < 0,05). Com exceção do EBH que não foi capaz de inibir a exsudação em nenhuma das doses testadas (p > 0.05). Ainda, o EBH, frações e a PC inibiram de forma significativa as atividades da MPO (p < 0,01) e ADA (p < 0,01), e as concentrações de NOx (p < 0,01), além das citocinas TNF-a (p < 0,01) e IL-1ß (p < 0,01). Já o composto isolado PC foi capaz de reduzir a expressão de mRNA do TNF-a (p < 0,01), IL-1ß (p < 0,01) e iNOS (p < 0,01) quando comparado ao grupo Cg. Finalmente, o composto PC ainda inibiu significativamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p < 0,01) e a fosforilação da p38 MAPK (p < 0,05). Os resultados do presente estudo demonstraram que a P. sabulosa possui atividade anti-inflamatória importante e este efeito pode ser, ao menos em parte, atribuído a seu composto majoritário que demonstrou atividade inibitória sobre duas importantes cascatas de sinalização do processo inflamatório deflagrado pela carragenina, o NF-?B e a p38 MAPK.<br> / Abstract : Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularly known as "timutupinheirinho", is a characteristic species of the field area of Santa Catarina plateau and is traditionally used to treat diseases of the kidneys, intestines and lungs. The objective of this study was to investigate the antiinflammatory effect of this species and analyze the likely mechanism of action of its major compound in the pleurisy model induced by carrageenan in mice. To this end, the plant material was subjected to extraction by maceration with 96% ethanol at room temperature for 7 days to obtain the crude hydroalcoholic extract (CE). The CE was then subjected to solid-liquid extraction with solvents of different polarities to obtain three different fractions, namely: hexane fraction (Hex) acetonic fraction (Ac) and methanol fraction (MeOH). The compound 7- prenyloxi-6-methoxycoumarin (PC) was isolated from the Ac fraction, identified by comparing data from NMR H1 and C13 with published literature and quantified by high performance liquid chromatography (HPLC-DAD). To evaluate the anti-inflammatory effect of this species the quantification of total leukocytes and neutrophils, in addition to the quantification of exudate in the pleural cavity were performed. In addition, standard techniques described in the literature were used in order to verify the effect of P. sabulosa upon the activity of the enzymes myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA), upon the nitric oxide metabolites concentrations (NOx), and pro-inflammatory cytokines: tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interleukin 1 beta (IL-1ß). With intention to propose the mechanism of action of the major compound of this species, the PC activity was evaluated upon the mRNA expression of TNF-a, IL-1ß and inducible nitric oxide synthase (iNOS), and its inhibitory ability upon the phosphorylation of the p65 subunit of nuclear factor kappa B (NF-kB) and the protein kinase-induced p38 mitogen (p38 MAPK). All inflammatory parameters were assessed 4 hours after pleurisy induction. In all of these work procedures, dexamethasone (Dex 0.5 mg / kg, ip) was used as anti-inflammatory reference drug. For statistical analysis, we used the analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls post-hoc test. p values <0.05 were considered significant. The CE, Hex, Ac and MeOH fractions and the isolated compound, PC, were capable of reducing leukocyte migration into the pleural cavity due the inhibition of neutrophils, besides the exudation (p <0.05). With the exception of CE that was not able to inhibit exudation in any of the tested doses (p> 0.05). Further, the CE, fractions and PC significantly inhibited MPO (p <0.01) and ADA (p <0.01) activities and NOx concentrations (p <0.01), also the cytokines TNF-a (p <0.01) and IL-1ß (p <0.01). The isolated compound PC was able to inhibit mRNA expression of TNF-a (p <0.01), IL-1ß (p <0.01) and iNOS (p <0.01). Finally, the PC compound significantly inhibited the phosphorylation of the p65 subunit of NF-kB (p <0.01) and p38 MAPK (p <0.05). The results of this study showed that P. sabulosa has important anti-inflammatory activity and this effect may be, at least in part, attributed to its major compound that shown inhibitory activity against two important signaling cascades in the inflammatory process produced by carrageenan, the NF-?B and p38 MAPK.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2013-06-25T23:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 312253.pdf: 1628352 bytes, checksum: a98f52520179ba2520eeed2dec842577 (MD5) / A alga marinha Kappaphycus alvarezii é a principal fonte do hidrocoloide carragenana, utilizado amplamente nas indústrias alimentícias e farmacêuticas como gelificantes, espessantes, estabilizantes e emulsificantes. Atualmente, o Brasil importa quase toda matéria-prima dos países produtores do Sudeste Asiático, embora possua vasto litoral com características propícias ao seu cultivo. As dificuldades com a etapa de secagem é um dos principais entraves na cadeia produtiva no Brasil, gerando a necessidade do desenvolvimento de processos que acelerem esta etapa. Desta forma, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes temperaturas de secagem das algas nas propriedades do gel da carragenana semirrefinada (SR) e refinada (REF) extraída de Kappaphycus alvarezii cultivada no Brasil. A cinética de secagem foi estudada nos seguintes tratamentos: algas secas diretamente ao sol (tratamento controle) e nas temperaturas de 40 ºC, 60 ºC e 90 ºC em secador convectivo até atingir umidade abaixo de 30 % em base úmida (b.u.). Isotermas de sorção de água foram obtidas nas diferentes temperaturas e umidade relativa. Foi determinado o percentual de reidratação e o teor de perda de sólidos solúveis das algas após sua secagem. Parâmetros como sinérese, rendimento, força do gel e viscosidade das amostras foram avaliados como indicadores de qualidade da carragenana. Como esperado, os resultados indicaram redução significativa no tempo de secagem com aumento da temperatura. A 90 ºC o teor de umidade desejado de 30 % (b.u.) foi obtido em 100 min, enquanto ao sol foram necessários 1440 min. A capacidade de reidratação não foi afetada pela temperatura de secagem, apresentando média de 72 % em relação a massa inicial da amostra. O percentual de perda de sólidos após a reidratação foi maior para as temperaturas de 60 ºC (42,2 %) e 90 ºC (40,4 %), com menor valor para algas secas ao sol (21,6 %). Foram observadas diferenças significativas em algumas propriedades da carragenana em função da temperatura de secagem. O rendimento de SR não apresentou diferenças em relação ao controle, enquanto a REF obteve rendimento significativamente maior (29,8 %) a 90 ºC. A força do gel de SR foi significativamente maior nos tratamentos SOL (16,8 N/cm²) e 60 ºC (16,9 N/cm²), comparados aos tratamentos de 40 ºC e 90 ºC, que foram 13,8 e 13,0 N/cm², respectivamente. Para REF, não foi observada diferença em relação ao tratamento controle. A sinérese apresentou os menores valores para as amostras SR (9,8 %) e REF (10,3 %) no tratamento de 90 ºC. A viscosidade analisada a 160 s-1 e 75ºC apresentou para as amostras SR os menores valores a 60 ºC (233 mPa.s) e 90 ºC (175 mPa.s), sendo significativamente menores do que os tratamentos SOL e 40 ºC . Para as amostras REF, foi observado o menor valor para o tratamento 90 ºC (205 mPa.s), enquanto a 40 ºC obteve-se a maior viscosidade (310 mPa.s). A análise reológica de todas as amostras para os dois tipos de carragenana apresentaram comportamento de fluido pseudoplástico. Os ajustes realizados pelo modelo da Lei da Potência foram satisfatórios, com o índice de consistência variando negativamente com o aumento da temperatura de secagem para as amostras REF. Apesar de ter havido diferenças significativas, todos os tratamentos apresentaram valores dentro da faixa descrita pela literatura. Com base em todos os resultados obtidos, pode-se sugerir que a secagem em 60 ºC apresentou os melhores resultados para os dois tipos de carragenana. / Kappaphycus alvarezii is a seaweed which is the major source of carrageenan hydrocolloid, widely used in food and pharmaceutical industries as gelling agents, thickeners, stabilizers and emulsifiers. Brazil currently imports almost all raw material produced from Southeast Asia countries, despite its wide coastline proper to developing the farming. The drying process is one of the main problems of the supply chain in Brazil and, studies are necessary to improve it. The present study aimed to evaluate the effect of different drying temperatures on the properties of semi-refined (SR) and refined (REF) carrageenan extracted from Kappaphycus alvarezii cultivated in Brazil The drying kinetic was observed in the seaweeds under the follow treatments: sun-drying (control treatment) and at 40ºC, 60ºC and 90ºC in convective dryer, until reach the moisture content below of 30 % on wet basis (w.b.). Water sorption isotherms were obtained in different temperatures and relative humidity. Percentage of rehydration and the content of soluble solids loss after drying were also determined. Carrageenan syneresis, yield, gel strength and viscosity of the samples were evaluated as indicators of quality. As expected, results showed significant reduction in the drying times with the increasing of temperature. At 90 °C, the 30 % (w.b.) moisture content was reached in 100 min, while in the sun drying it was required 1,440 min. The rehydration ability was not affected by the drying temperature, showing an average of 72 % compared to the initial mass of the sample. Percentage of solids loss after rehydration was higher at 60 ºC (42.2 %) and 90 ºC (40.4 %), with smaller value for sun-dried seaweeds (21.6 %). Significant differences of drying temperature was observed in some carrageenan properties. SR yield showed no significant differences compared to control treatment, while REF had significantly high yield (29.8 %) at 90 °C. Gel strength of SR was significantly higher in sundried (16.8 N/cm²) and at 60 ºC (16.9 N/cm²) treatments than at 40 °C and 90 °C (13.8 and 13.0 N/cm², respectively). REF showed no significant difference when compared to control treatment. Lowest values of syneresis were observed in SR (9.8 %) and REF (10.3 %) after the treatment at 90 °C. The viscosity at 160 s-1 and 75 °C showed the lowest values for SR at 60 °C (233 mPa.s) and 90 ºC (175 mPa.s), being significantly lower in sun drying and at 40 ºC treatments. For REF, the lowest value was at 90 °C (205 mPa.s), while at 40 °C the highest viscosity (310 mPa.s) was observed. The rheological analysis of all samples for both types of carrageenan exhibited pseudoplastic fluid behavior. The adjustments made by the Power Law Model were satisfactory, with the consistency index varying inversely with the drying temperature increase in REF samples. Despite the significant differences, all treatments showed values in the range described in the literature. Based on all these results, it can be suggested that drying at 60 °C showed the best results for both types of carrageenan.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2012 / Made available in DSpace on 2013-06-26T00:21:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 313319.pdf: 2559033 bytes, checksum: e7f1152cdbe5cf86b55da1feecfe3a6b (MD5) / Introdução: O gênero Esenbeckia (Rutaceae) compreende aproximadamente 30 espécies identificadas, nativas de regiões tropicais, tais como México e Brasil, incluindo principalmente os Estados brasileiros de São Paulo, Bahia, Minas Gerias, Goiás e Mato Grosso do Sul. Estudos in vivo e in vitro demonstraram que plantas deste gênero apresentam propriedades anti-inflamatórias. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto hidroalcoólico (EBH), frações e compostos isolados da Esenbeckia leiocarpa Engl., administrada por via intraperitoneal (i.p.), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Metodologia: As cascas secas da E. leiocarpa Engl. foram maceradas e extraídas com etanol para obter o EBH. A partir deste extrato, foram obtidas as frações n-hexano (Hex), acetato de etila (AcOEt), aquosa (Aq) e alcaloídica (Alc), sendo que esta última fração foi extraída com éter etílico originando duas subfrações: uma alcaloídica polar (AlcP) e outra apolar (AlcAp). O composto majoritário, o alcaloide indólico dihidrocorinanteol (DHC), foi isolado da subfração AlcAp. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura do composto majoritário presente na E. leiocarpa Engl., foram utilizadas análises de eletroforese capilar, características físicas, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13C) e espectrometria de massas. Em outro protocolo, o composto isolado identificado foi modificado por reações de substituição nucleofílica, originando os análogos acetil, p-metil, benzoil, p-metoxi e p-cloro, que foram utilizados em um estudo de relação estrutura-atividade, avaliando-se o efeito destes compostos sobre leucócitos, exsudação e atividade da enzima mieloperoxidase (MPO). No modelo da pleurisia induzida pela carragenina, foram utilizados camundongos albinos Swiss e foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios no lavado da cavidade pleural: leucócitos, exsudação, atividades das enzimas MPO e adenosina-deaminase (ADA), e as concentrações de nitrito/nitrato (NOx), interleucina 1-beta (IL-1?) e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?). Neste estudo, diferentes grupos de animais foram tratados com EBH (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alc (1 - 10 mg/kg), AlcP (0,5 - 5 mg/kg), AclAp (0,1 - 2 mg/kg) ou DHC (0,1 - 0,5 mg/kg), administrados (i.p.) 0,5 h antes da carragenina (1%) administrada por via intrapleural (i.pl.). Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h após. Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente com solução Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela análise dos testes de variância (ANOVA), Newman-Keuls e/ou t de Student. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Além disso, realizou-se também o estudo de toxicidade do EBH por meio da análise da curva de sobrevida. Neste estudo, diferentes grupos de animais receberam diferentes doses do EBH (250 mg/kg, 500 mg/kg e 1000 mg/kg, i.p.) e o número de óbitos foi observado diariamente, durante dez dias. Resultados: EBH da E. leiocarpa Engl. (25 - 100 mg/kg), Hex (25 - 50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), Aq (5 - 10 mg/kg), Alc (5 - 10 mg/kg), AlcP (1 - 5 mg/kg), AlcAp (0,5 - 2 mg/kg) e DHC (0,25 - 0,5 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos, mononucleares e exsudação (P < 0,05). Da mesma forma, EBH (25 mg/kg), Hex (50 mg/kg), AcOEt (50 mg/kg), Aq (5 ou 10 mg/kg), Alc (10 mg/kg), AlcP (1 ou 2 mg/kg), AlcAp (0,5 mg/kg) e DHC (0,25 mg/kg) inibiram as atividades das enzimas MPO e ADA, além das concentrações de NOx, IL-1? e TNF-? (P < 0,05). Em relação à toxicidade, observou-se que a dose de 250 mg/kg demonstrou-se segura, pois resultou em 100% de sobrevida dos animais após 10 dias de observação, enquanto que nas doses de 500 e 1000 mg/kg todos os animais morreram no primeiro dia. Observou-se também que o composto DHC apresentou melhor efeito anti-inflamatório do que seus análogos: acetil, p-metil, benzoil, p-metoxi e p-cloro, uma vez que somente o DHC inibiu ambos os parâmetros inflamatórios estudados: leucócitos e exsudação (P < 0,01). Além disso, os análogos do DHC inibiram a atividade da MPO (P < 0,01). Conclusões: Os resultados demonstraram que: 1) E. leiocarpa Engl. possui importante atividade anti-inflamatória; 2) este efeito ocorre principalmente em relação à inibição da migração leucocitária e da exsudação; 3) a inibição destes parâmetros inflamatórios está relacionada também à inibição de NOx, IL-1? e TNF-?; 4) a inibição da atividade da MPO e ADA está relacionada a diminuição de leucócitos ativados; 5) as doses utilizadas nos experimentos parecem ser seguras; 6) o DHC foi mais efetivo do que os seus análogos neste modelo de inflamação, e as alterações físico-químicas promovidas no DHC, após a inserção dos substituintes acetil, p-metilbenzoil, benzoil, p-metoxibenzoil e p-clorobenzoil na hidroxila do carbono 17, determinam a efetividade do efeito anti-inflamatório.<br> / Abstract : Introduction: Esenbeckia genus (Rutaceae) includes approximately 30 species native from tropical regions such as Mexico and Brazil, mainly in the Brazilian states of Sao Paulo, Bahia, Minas Gerais, Goias and Mato Grosso do Sul. Studies using in vivo and in vitro models have demonstrated that plants of this genus have anti-inflammatory properties. Objectives: To evaluate the anti-inflammatory effect of the crude hydroalcoholic extract (CHE), fractions and compounds isolated from Esenbeckia leiocarpa Engl., administered intraperitoneally (i.p.) in the carrageenan-induced murine model of pleurisy. Methodology: The dried E. leiocarpa Engl. bark was macerated and extracted with ethanol to obtain the CHE. The n-hexane (Hex), ethyl acetate (AcOEt), aqueous (Aq) and alkaloids (Alk) fractions were obtained from CHE, and two alkaloid subfractions, polar (polar Alk) and nonpolar (nonpolar Alk) were obtained from the Alk fraction using an ethyl ether extraction. The major compound, the indole alkaloid dihydrocorinantheol (DHC) was isolated from nonpolar Alk subfraction. Analysis of capillary electrophoresis, physical characteristics, infrared, nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) and mass spectrometry were used to identify and elucidate the structure of the major compound present in the E. leiocarpa Engl. In another protocol, the isolated compound was subjected to chemical structural modifications by nucleophilic substitution reactions to develop the acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro analogs, which were used in a study of structure-activity relationships to evaluate the effect of these compounds upon leucocytes and exudation concentrations and myeloperoxidase (MPO) activity. Swiss mice were used in the carrageenan-induced murine model of pleurisy and the following inflammatory parameters were evaluated the fluid of the pleural cavity: leukocytes, exudation, MPO and adenosine deaminase (ADA) activities, and the concentrations of nitrite/nitrate (NOx), interleukin-1 beta (IL-1â) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-á). In this study, different groups of animals were pretreated with CHE (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alk (1 - 10 mg/kg), polar Alk (0.5 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.1 - 2 mg/kg) or DHC (0.1 - 0.5 mg/kg) administered (i.p.) 0.5 h before carrageenan (1%) which was administered by intrapleural route (i.pl.). The inflammatory parameters were evaluated after 4 h. To evaluate the exudation, the animals were pretreated with Evans blue dye (25 mg/kg, i.v.). Statistical differences between groups were determined by analysis of variance test (ANOVA), Newman-Keuls and/or Student#s t test. P < 0.05 was considered significant. Further, the toxicity study of CHE we performed by analyzing the survival curve. In this study, different groups of animals received different doses of EBH (250 mg/kg, 500 mg/kg and 1000 mg/kg, i.p.) and the number of deaths was observed daily for 10 days. Results: CHE (25 - 100 mg/kg), Hex (25 - 50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), Aq (5 - 10 mg/kg), Alk (5 - 10 mg/kg), polar Alk (1 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 - 2 mg/kg) and DHC (0.25 - 0.5 mg/kg) inhibited leukocytes, neutrophils, mononuclears and exudation (P < 0.05). Also, CHE (25 mg/kg), Hex (50 mg/kg), AcOEt (50 mg/kg), Aq (5 or 10 mg/kg), Alc (10 mg/kg), polar Alk (1 or 2 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 mg/kg) and DHC (0.25 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, and the concentrations of NOx, IL-1â and TNF-á (P < 0.05). In relation to toxicity, it was observed that the dose of 250 mg/kg of CHE was safe because its administration resulted in 100% survival of the animals after 10 days, whereas at the doses of 500 mg/kg and 1000 mg/kg all animals died in the first day of observation. Furthermore, the DHC alkaloid showed better anti-inflammatory effect than its analogs: acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro, because only the DHC inhibits both studied inflammatory parameters: leukocytes and exudation concentrations (P < 0.01). Further, the DHC analogs inhibited MPO activity (P < 0.01). Conclusions: The results showed that: 1) E. leiocarpa Engl. has important anti-inflammatory activity; 2) this effect occurs mainly in relation to inhibition of leukocyte migration and exudation concentrations; 3) the Inhibition of these inflammatory parameters is also related to NOx, IL-1â and TNF-á inhibition; 4) the inhibition of MPO and ADA activities are associated with decrease of activated leukocytes; 5) the doses used in the experiments of this study appear to be safe; 6) DHC was more effective than its analogs in this model of inflammation, and the physicochemical modifications in the DHC after insertion of the acetyl, p-methylbenzoyl, benzoyl, p-methoxybenzoyl and p-chlorobenzoyl substituents radicals on the hydroxyl group at carbon 17 determine the effectiveness of the anti-inflammatory action.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T11:00:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 199965.pdf: 450160 bytes, checksum: 7f32f5751da8a451f3ddcc62acbcb77b (MD5) / O ácido caféico e alguns de seus derivados como o ácido caféico fenetil e octil éster são potentes antioxidantes e detentores de importantes ações antiinflamatórias. Neste estudo, foi analisado o efeito de 6 derivados do ácido caféico (metil, etil, butil, octil, benzil e fenetil éster) em modelos de inflamação in vitro e in vivo. No modelo da produção de óxido nítrico (NO) por macrófagos RAW 264.7 estimulados com lipopolissacarídeo bacteriano (LPS), a pré-incubação dos derivados inibiu o acúmulo de nitrito (um produto estável da oxidação do NO) de forma significativa e concentraçãodependente. De acordo com os resultados descritos no presente trabalho, a inibição do acúmulo de nitrito no sobrenadante das células RAW 264.7 parece decorrer, pelo menos em parte, ao scavenge do NO produzido assim como da inibição da expressão da enzima responsável pela síntese do NO, a óxido nítrico sintase induzida (iNOS). Adicionalmente, os derivados butil, octil e fenetil também apresentaram ação antiinflamatória no modelo do edema de pata de camundongos induzido pela injeção de carragenina, inibindo acentuadamente o edema assim como o aumento dos níveis da citocina interleucina-1ß e a migração de neutrófilos nas patas injetadas com carragenina.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T11:34:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 203044.pdf: 3077803 bytes, checksum: 2579a4e0bf9fa9627f5f2652cbbfb303 (MD5) / Estudos têm demonstrado o efeito antiinflamatório do PK11195 e do Ro5-4864 em modelos experimentais (TORRES et al., 1999; 2000). Estes dois fármacos são denominados ligantes do receptor benzodiazepínico periférico (RBP) estão localizados em diversos tecidos, em nível periférico. Neste estudo foi utilizado o modelo de pleurisia induzida pela carragenina (Cg, 1%/cav.), em camundongos. Este é um modelo pelo qual apresenta uma resposta inflamatória bifásica (4 e 48 h) importante para avaliação de novos fármacos com propriedades antiinflamatórias. Objetivos: 1) Avaliar o efeito do PK11195 e do Ro5-4864 sobre a resposta inflamatória induzida pela Cg na cavidade pleural de camundongos. Os parâmetros inflamatórios (leucócitos, exsudação, concentrações da mieloperoxidase (MPO), adenosina-deaminase (ADA), óxido nítrico (ONx) e permeabilidade vascular) foram estudados 4 e 48 h após a indução da pleurisia, 2) Avaliar se o possível efeito antiinflamatório dos fármacos estudados ocorre devido a síntese esteroidal. Materiais e métodos: Neste protocolo experimental, foram utilizados camundongos albinos suíços de ambos os sexos, pesando entre 18-22g. Todos os animais foram tratados previamente com solução de azul de Evans (25 mg/kg, i.v.) para análise indireta do exsudato, exceto para àqueles experimentos pelo qual, estudou-se as enzimas MPO e ADA, ONx e análise histológica. Inicialmente avaliou-se a curva dose, tempo e resposta sobre os parâmetros inflamatórios (leucócitos e exsudação). Após o estabelecimento da melhor dose e o melhor tempo de tratamento prévio dos animais com os fármacos em estudo, avaliou-se o efeito destes sobre as concentrações de MPO, ADA, ONx), tanto na primeira (4 h) como na segunda fase (48 h) da resposta inflamatória induzida pela carragenina na cavidade pleural de camundongos. Análise estatística: Os resultados obtidos com a contagem de leucócitos, exsudação, MPO, ADA, ONx e permeabilidade vascular foram expressos através da média ± e.p.m. A análise estatística para estes parâmetros foi realizada por meio do teste paramétrico ANOVA (Dunnett) complementado, quando necessário pelo teste t de student. A análise histológica foi expressa através de scores (0 = ausente; 1 = discreto; 2 = moderado e 3 = abundante). Para este último parâmetro a análise estatística utilizada foi o teste não paramétrico de Man-Whitney. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: Na primeira fase (4 h) da resposta inflamatória induzida pela carragenina, o PK11195 e o Ro5-4864 inibiram significativamente o influxo de leucócitos (P < 0,01), às custas de neutrófilos (P < 0,01), a exsudação (P < 0,01), os níveis de ONx (P < 0,01) no lavado pleural e a permeabilidade vascular no pulmão (P < 0,01). Além disso, somente o Ro5-4864 foi capaz de inibir significativamente as concentrações da enzima MPO no lavado da cavidade pleural 4 h após (P < 0,05). Nesta fase, ambos os fármacos também inibiram os leucócitos no sangue dos animais inflamados (P < 0,01). A análise histológica revelou que o PK11195 e o Ro5-4864 inibiram de forma significativa a migração de neutrófilos, mononucleares e edema pulmonar (P < 0,01). No baço observou-se também a diminuição de leucócitos, neutrófilos na polpa vermelha, bem como diminuição da hiperplasia da polpa branca (P < 0,01). Neste último órgão, os fármacos estudados também aumentaram a apoptose (P < 0,01). Já no fígado, observou-se que o PK11195 e o Ro5-4864, diminuíram os neutrófilos e as células de Kuppfer (P < 0,01). Na segunda fase (48 h) da pleurisia induzida pela carragenina, o PK11195 e o Ro5-4864 inibiram de forma significativa os leucócitos (P < 0,01), às custas de mononucleares (P < 0,01), e os níveis de ADA no lavado pleural de xv camundongos inflamados (P < 0,01). A analise histológica revelou que ambos os fármacos inibiram os neutrófilos (P < 0,01) e os mononucleares, no pulmão (P < 0,01). No baço, tanto o PK11195 como o Ro5-4864 inibiram os neutrófilos e os mononucleares (P < 0,01), no entanto, somente o Ro5-4864 diminuiu de forma significativa o centro germinativo, neste órgão (P < 0,01). Já no fígado, observou-se que os dois fármacos diminuíram a hiperplasia de células de Küppfer (P < 0,01). Finalmente para avaliarmos o possível mecanismo de ação antiinflamatório do PK11195 e do Ro5-4864 utilizamos a DL-aminoglutatimida neste modelo experimental. Os resultados revelaram que este último fármaco reverteu o efeito antiinflamatório do PK11195 em relação a: exsudação, neutrófilos, mononucleares e níveis de ONx no lavado pleural (P < 0,01), na pleurisia induzida pela Cg 4 h. Nesta fase, este efeito ocorreu também em relação ao fármaco Ro5-4864 em relação a: neutrófilos, mononucleares, MPO e ONx (P < 0,01). Na pleurisia induzida pela Cg 48 h, a DL-aminoglutatimida reverteu os efeitos antiinflamatórios tanto do PK11195 como do Ro5-4864 em relação a: leucócitos, mononucleares, neutrófilos e exsudação na cavidade pleural de camundongos (P < 0,01). Além disso, a DL-aminoglutatimida reverteu também o efeito antiinflamatório do Ro5-4864 em relação aos níveis da ADA (P < 0,01). Conclusão: Estes resultados revelam que o efeito antiinflamatório tanto do PK11195 como do Ro5-4864 ocorre principalmente sobre o influxo de leucócitos ativados, bem como a inibição de enzimas pró-inflamatórios como MPO e ADA, além do mediador óxido nítrico. Além disso, parece que este efeito antiinflamatório é mediado pela síntese esteroidal. Estudos posteriores devem ser realizados para melhor elucidar o mecanismo de ação antiinflamatória dos ligantes do PBR.

A estimulação química das fibras aferentes nociceptivas através da injeção de diferentes substâncias álgicas vem sendo estudada em modelos de dor muscular em animais. A carragenina é um dos agentes que produz inflamação aguda e é freqüentemente utilizada em modelos de dor muscular. O nosso objetivo é aprofundar nossa compreensão e explorar em maior detalhe a participação das células gliais (astrócitos e microglia), de citocinas pró-inflamatórias, prostanóides e do óxido nítrico, após a indução de miosite aguda, correlacionando com modelos comportamentais nociceptivos. Para tanto, serão avaliadas as atividades dos mediadores, previamente descritos, na medula espinal dos ratos com e/ ou sem indução de miosite, através do método de Western blotting. Tais investigações poderão vir a ser uma abordagem totalmente inovadora para tentar entender quais são alguns dos mediadores envolvidos neste modelo de dor. Assim, os dados obtidos neste projeto poderão elucidar os mecanismos envolvidos na dor músculo-esquelética, a qual se enquadra nas patologias de difíceis tratamentos e de grande relevância clínica. / Chemical stimulation of nociceptive afferent fibers through the injection of different substances has been studied in different models of muscle pain in animals. Carrageenan is one of the agents that produce inflammation and is often used in models of muscle pain. Our goal is to explore in greater detail the involvement of glial cells (astrocytes and microglia), pro-inflammatory cytokines, prostanoids and nitric oxide after induction of acute myositis and correlate it with nociceptive behavioral models. It will be assessed the activity of these mediators in the spinal cord after induction of myositis in rats, using Western blotting assay. Such investigations may be a totally new approach to try to understand how some mediators are involved in this kind of pain. Thus, the data obtained in this project will elucidate the mechanisms involved in musculoskeletal pain, which are of difficult treatment and of great clinical relevance.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A Angiotensina II (Ang II) exerce suas aÃÃes via receptores AT1 e AT2. Estudos recentes demonstraram que o sistema-renina-angiotensina (SRA) participa da inflamaÃÃo. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da Ang II em modelos de inflamaÃÃo aguda. Ratos Wistar foram separados nos grupos: salina (Sal), Ang II (1 Âg), losartan (LOS, antagonista de AT1, 62,5 Âg) e CGP42112A (agonista de AT2, 142,5 Âg). O edema de pata foi induzido pela injeÃÃo subplantar (sp) de carragenina (Cg, 100 Âg) ou dextran (DXT, 100 Âg) e foi medido com pletismÃmetro em 0, 1, 2, 3 e 4h. Nos grupos Sal e Ang II, foi colhido tecido da pata para se determinar os nÃveis de mieloperoxidase (MPO), IL-1e TNF-&#945; . Tecidos subcutÃneo e mesentÃrico foram removidos para avaliaÃÃo da degranulaÃÃo de mastÃcitos atravÃs da coloraÃÃo com azul de toluidina. Os grupos Sal e Ang II do edema de pata induzido por DXT foram tratados com mepiramina (MEP, anti-histamÃnico, 10mg/kg) ou metisergida (MET, anti-serotonÃnico, 1,5mg/kg) 1h antes da injeÃÃo de DXT. Ang II (0,5Âg/cavidade, ip) foi injetada 1h antes da injeÃÃo ip de Cg para analisar a migraÃÃo de neutrÃfilos para a cavidade peritoneal. Ang II, LOS e CGP amplificaram o edema de pata induzido por Cg e DXT e essa amplificaÃÃo foi significativa jà na primeira hora. A administraÃÃo de Ang II nÃo alterou a dosagem tecidual de MPO, TNF-&#945; e IL-1 e nÃo induziu ou preveniu a migraÃÃo de neutrÃfilos para a cavidade peritoneal, mas induziu amplificaÃÃo significativa da degranulaÃÃo de mastÃcitos. MEP e MET reduziram a potenciaÃÃo do edema do DXT pela Ang II. Nossos resultados sugerem que a Ang II potenciou a resposta inflamatÃria provavelmente atravÃs de receptores AT2, jà que o antagonista de AT1, o agonista de AT2 e a Ang II amplificaram o edema de pata. Os dados apresentados aqui sugerem que Ang II aumentou a permeabilidade vascular atravÃs da induÃÃo da degranulaÃÃo de mastÃcitos, uma vez que houve amplificaÃÃo precoce do edema de pata da Cg e do edema vascular do DXT, e os antagonistas de serotonina e de histamina inibiram significativamente o aumento do edema de pata. / Angiotensin II (Ang II) exerts its actions via AT1 and AT2 receptors. Recent studies have demonstrated that the renin-angiotensin system (RAS) participates in inflammation. The aim of this study was to evaluate the effect of Ang II on models of acute inflammation. Wistar rats were separated in the groups: saline (Sal), Ang II (1Âg), losartan (LOS, AT1 antagonist, 62.5Âg) and CGP42112A (AT2 agonist, 142.5Âg). Paw edema was induced by subplantar injection of carrageenan (Cg, 100Âg) or dextran (DXT, 100Âg) and was measured with a plethysmometer at 0, 1, 2, 3 and 4h. In the Sal and Ang II groups, paw tissue was taken to determine myeloperoxidase (MPO), IL-1 and TNF-&#945; levels. Subcutaneus and mesenterium tissue were taken to evaluate mast cell degranulation through the toluidine blue staining. Sal and Ang II groups of DXT-induced paw edema were treated i.p. with mepyramine (MEP, anti-histamine, 10mg/kg) or metisergyde (MET, anti-serotonin, 1.5mg/kg) 1h prior to the injection of DXT. Ang II (0.5Âg/cavity, ip) was injected i.p. 1h before the i.p. injection of Cg to analyse the leukocytes migration to the peritoneal cavity. Ang II, LOS and CGP enhanced the Cg and DXT-induced paw edema and this enhancement was already significant at 1h. The administration of Ang II did not change the tissue content of MPO, TNF-&#945; and IL-1 and did not induced or prevented neutrophil migration to peritoneal cavity, but induced significant enhancement of mast cell degranulation. MEP and MET reduced the Ang II-facilitated DXT-induced edema. Our results suggest that Ang II enhances the inflammatory response probably through the AT2 receptors since the AT1 antagonist, AT2 agonist and Ang II potentiated the paw edema. The data presented here also suggest that Ang II increases the vascular permeability through induction of mast cells degranulation, since there was early amplification of Cg paw edema and DXT vascular edema, and antagonists of serotonin and histamine significantly inhibited the increase in paw edema.

O Óxido Nítrico inalatório (iNO) é uitlizado para tratamento de várias doenças pulmonares, porém algumas evidências apóiam que esses efeitos farmacológicos do iNO podem alcançar outros leitos vasculares. Desse modo, esse estudo tem como objetivo investigar o possível efeito anti-inflamatório do iNO no modelo de edema de pata induzido por carragenina em camundongos e identificar por qual via ele desempenha essa resposta. Concluimos que o iNO foi eficaz na redução de sinais inflamatórios e houve indícios que o NO desempenha seus efeitos pela via do GMPc, pelo fato de ter aparecido um efeito potencializador na redução do edema quando associoado ao sildenafil e não com o rolipram. Esses resultados indicam que a terapia com iNO vai além dos efeitos vasculares pulmonares inicialmente descritos. / Inhaled Nitric Oxide (iNO) is useful to treat many lung diseases, but some evidences support that these pharmacological effects of iNO can reach other vasculature, beyond the pulmonary vasculature. Thus, this study aimed to investigate the possible antiinflammatory effect of inhaled nitric oxide on the mice paw edema induced by carrageenan and investigate for which way iNO is acting. We conclude that iNO was effective in reducing inflammatory signs and there are some traces that this responses occurred by cGMP way. These results indicate that the beneficial effect of inhaled nitric oxide therapy goes beyond the initially described pulmonar vascular effects.

O presente estudo investigou o efeito do veneno de Crotalus durissus terrificus (VCdt) e da sua principal fração, crotoxina (ctx) sobre a resposta inflamatória induzida pela carragenina (cg). Foram avaliados o efeito do pré e do pós-tratamento com o VCdt sobre o desenvolvimento do edema de pata, a migração celular para a cavidade peritoneal e a interação leucócito-endotélio na microcirculação do músculo cremaster de camundongos induzidos por carragenina. O pré (14, 7 dias ou 1 h) e pós-tratamento (48, 4 ou 1 h) com o VCdt (1,5 &#956;g/50 &#956;L s.c.) inibiu o desenvolvimento do edema de pata induzido pela injeção intraplantar de carragenina em todos os tempos analisados (300 &#956;g/50 &#956;L). O mesmo efeito inibitório foi observado para o pré (21, 14, 7 dias ou 1 h) e pós-tratamento (1 h) com o VCdt (1,5 &#956;g/50 &#956;L s.c.) sobre a migração celular para a cavidade peritoneal induzida pela carragenina (300 &#956;g/50 &#956;L). A administração do VCdt por via oral (8,8 &#956;g/200 &#956;L) antes (14, 7 dias ou 1 h) ou após (1 h) a injeção de carragenina (300 &#956;g/200 &#956;L) também inibiu o influxo celular para a mesma cavidade. Em relação à interação leucócito-endotélio, o tratamento com o VCdt 1 h antes ou após a injeção de carragenina no subcutâneo da bolsa escrotal (300 &#956;g/100 &#956;L), aumentou o número de células em estado de rolling. Por outro lado, reduziu a adesão das células ao endotélio e a migração celular para o tecido extravascular. Da mesma forma que o VCdt, a ctx (0,89 &#956;g/50 &#956;L s.c.) administrada 1 h antes ou após a carragenina inibiu todos os eventos acima citados. Os efeitos inibitórios do VCdt sobre o edema e sobre a migração celular foi comparado ao de clássicas drogas antiinflamatórias: a dexametasona, a indometacina, o L-NAME e o nimesulide. Para o edema, foi observado que somente o VCdt e o nimesulide impediram a formação do segundo pico de edema de carragenina. Para a migração celular, não foi observada diferença entre o tratamento com o VCdt e as drogas antiinflamatórias. A associação do VCdt com as drogas antiinflamatórias acima citadas não potencializou as suas ações inibitórias sobre a migração celular. Os dados demonstram que o VCdt apresenta um efeito antiinflamatório prolongado, e ainda, que a ctx pode contribuir para o efeito antinflamatório do VCdt. / In the present study, we investigated the effects of Crotalus durissus terrificus venom (CdtV) and crotoxin (ctx) on vascular and cellular events of inflammation induced by carrageenan (cg) in mice. It was evaluated the effect of the pre or post-treatment with CdtV on development of paw edema, cell migration and leukocyte-endothelium interaction at the cremaster muscle microcirculation induced by cg in mice. The pre (14, 7 days or 1h) and posttreatment (48, 4 or 1h) with CdtV (1,5 &#956;g/50 &#956;L s.c.), inhibited the paw edema induced by carrageenan (300 &#956;g/50 &#956;L) in all periods of time evaluated. The same inhibitory effect of CdtV (1,5 &#956;g/50 &#956;L s.c.) was observed to the pre (21, 14, 7 days or 1 h) and post-treatment (1h) on cell migration to the peritoneal cavity induced by cg (300 &#956;g/200 &#956;L). The oral administration of CdtV (8,8 &#956;g/200 &#956;L) before (14, 7 days or 1h) or after (1h) intraperitoneal injection of cg (300 &#956;g/200 &#956;L), also inhibited the cell influx to the same cavity. To evaluate leukocyte-endothelium interaction, the treatment with CdtV 1h before or after the cg injection (300 &#956;g/100 &#956;L) into the scrotal bag of the animals induced an increase in leukocyte rolling, but reduced the cellular adhesion to the endothelium surface and cellular migration to the extravascular tissue. The administration of ctx (0,89 &#956;g/50 &#956;L s.c.) 1 h before or after cg injection, could inhibit all inflammatory events mentioned above. The inhibitory effect of CdtV on paw edema and cellular migration were also compared with that observed for classical anti-inflammatory drugs, such as: dexamethasone, indomethacin, LNAME and nimesulide. Only CdtV and nimesulide blocked the second peak of edema formation induced by cg. For cell migration, no differences were observed among the treatment with CdtV and anti-inflamatory drugs. The association of CdtV with drugs did not potentialize their actions on cell migration. These results demonstrate that CdtV exhibits a long-lasting antiinflammatory effect and that ctx could contribute for the anti-inflammatory effect of CdtV.

Disfunções temporomandibulares são secundárias à inflamação e dor. Estudos mostram a participação da ET na nocicepção. Investigamos o papel da ET1 na sinovite induzida pela injeção de CGN na ATM de ratos. Injeções intra-articulares de CGN, ET1 ou do agonista do receptor ETB BQ3020 foram realizadas na ATM. Após 4h, a hiperalgesia foi avaliada usando um analgesímetro digital e as cavidades articulares foram lavadas para contagem total e diferencial de leucócitos. Antagonistas dos receptores ETA e ETB foram co-injetados com CGN e ET1, e o antagonista de TRPV1 capsazepina com a ET1. A ET1, o BQ3020 e a CGN induziram hiperalgesia que foi inibida pela injeção simultânea (mas não individual) dos antagonistas ETA e ETB. A capsazepina não afetou o efeito nociceptivo da ET1. Nem a ET1, o BQ3020 nem os antagonistas dos receptores da ET afetaram a infiltração de leucócitos. Com base nestes resultados concluímos que a ET1 induz hiperalgesia e está envolvida na nocicepção induzida por CGN através dos receptores ETA e ETB, sem qualquer efeito sobre a migração de leucócitos. / Temporomandibular disorders are secondary to inflammation and pain. Studies show the involvement of ET in nociception. Weve investigated the role of ET1 in synovitis induced by CGN injection on the rats TMJ. Intra-articular injections of CGN, ET1 or ETB receptor agonist BQ3020 were performed at the TMJ. After 4h, hyperalgesia was assessed using a digital analgesimeter and the joint cavities were washed for total and differential leukocyte counting. ETA and ETB receptors antagonists were co-injected with CGN and ET1, and the TRPV1 antagonist capsazepine with ET1. ET1, BQ3020 and CGN induced hyperalgesia, which was inhibited by simultaneous (but not single) antagonists ETA and ETB injection. The capsazepine did not affect the ET1 nociceptive effect. Neither ET1, BQ3020 nor antagonists of ET receptors affect leukocyte infiltration. Based on these results we conclude that the ET1 induces hyperalgesia and its involved in CGN induced nociception through ETA and ETB receptors, without any effect on the leukocytes migration.