Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Alessandro de Mello Varani / Banca: Itabajara da Silva Vaz Junior / Banca: Mucio Flavio Barbosa Ribeiro / Resumo: Anaplasma marginale é o mais prevalente patógeno transmitido por carrapatos em bovinos nas regiões tropicais e subtropicais do mundo. A Proteína Principal de Superfície 1 alpha (MSP1a) do A. marginale contém um número variável de sequências repetidas na região animo-terminal e tem sido utilizada para a caracterização da diversidade genética desse patógeno. Nós realizamos um estudo longitudinal para averiguar a diversidade genética do A. marginale em um rebanho bovino leiteiro de Seropédica no estado do Rio de Janeiro e Taiaçu no estado de São Paulo, Brasil. Vinte bezerras foram avaliadas a cada três meses durante o primeiro ano de vida por esfregaço sanguíneo, Ensaio de Imunoadsorção Enzimático Indireto (ELISA), Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Reação em Cadeia da Polimerase (nPCR/qPCR). Adicionalmente, as amostras positivas para o gene msp1a usando nPCR foram sequenciadas. A frequência do A. marginale variou de 10 - 90% no esfregaço sanguíneo, 20 - 80% no ELISA/RIFI e 15 - 100% na qPCR. O número de copias da msp1a por mL de sangue variou de 1,04 x 101 a 6.76 x 1012 (Seropédica RJ) e 1.20 x 101 a 5.17 x 106 (Taiaçu SP). Os resultados mostraram que a diversidade genética do A. marginale, em um grupo de bezerras até 1 ano de idade em Taiaçu (SP) foi baixa, com apenas três diferentes estirpes identificadas, mostrando o genótipo E. No entanto, os resultados mostraram que o diversidade genética do A. marginale, em um grupo de bezerras até 1 ano de idade em Seropédica (RJ) foi elevada, com dezenove diferentes estirpes identificadas, mostrando o genótipo E e G. As estirpes 4-63-27 (27.4%) e α-β3-Γ (77.8%) foram as mais comumente observadas em bezerras do estado do Rio de Janeiro e São Paulo, respectivamente. O novo conjunto de repetição da MSP1a 190 foi descrito em bezerras de Taiaçu e vinte e uma repetições em tandem da MSP1a resultou em novas sequências com alterações de... / Abstract: Anaplasma marginale is the most prevalent tick-borne pathogen in cattle in tropical and subtropical regions of the world. The A. marginale major surface protein 1 alpha (MSP1a) contains a variable number of tandem repeats in the amino terminal region and has been used for the characterization of pathogen genetic diversity. We conducted a longitudinal study to ascertain the genetic diversity of A. marginale in in a dairy cattle herd in Seropédica state of Rio de Janeiro and Taiaçu state of São Paulo, Brazil. Twenty calves were evaluated every three months during the first year of life by blood smear, Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA), Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) and Polymerase Chain Reaction (nPCR/qPCR). Additionally, samples positive for the msp1a gene using nPCR were sequenced. The prevalence of A. marginale ranged from 10 to 90% according to blood smears, 20-80% using ELISA/IFAT and 15-100% using qPCR. The number of msp1a copies per mL of blood ranged from 1,04x101 to 6.76x1012 (Seropédica RJ) and 1.20 x 101 to 5.17 x 106 (Taiaçu SP). The results showed that the genetic diversity of A. marginale in a group of calves up to 1 year of age from Taiaçu (SP) was low, with only three different strains identified, showing the microsatellite genotype E. However, the results showed that the genetic diversity of A. marginale in a group of calves up to 1 year of age from Seropédica (RJ) was high, with nineteen different strains identified, showing the microsatellite genotype E and G. The strains 4-63-27 (27.4%) and α-β3-Γ (77.8%) were the most commonly observed in calves of Seropédica RJ and Taiaçu SP, respectively. The new MSP1a tandem repeat 190 was described in calves from Taiaçu and twenty-two MSP1a tandem repeats resulted in new sequences with amino acid changes, which were labeled as 165-186 in calves from Seropédica. In Seropedica, three animals were born infected, with strains 4-63-27, 78-242-25-31 and ... / Doutor

Orientador: Henrique Nunes Oliveira / Coorientador: Márcia Cristina de Sena Oliveira / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Janete Aparecida Desidério / Banca: Wilson Malago Junior / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Resumo: Entre as principais causas de perdas produtivas em bovinos criados nos trópicos está a infestação pelo carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e, consequentemente, dos hemoparasitas transmitidos por ele. A resistência dos zebuínos e de animais cruzados com raças taurinas à infestação por esse ácaro é amplamente conhecida. Entretanto, no que se refere à suscetibilidade às babesioses bovinas, existem evidências de que o grupo genético também pode interferir na resistência, seguindo o mesmo padrão observado para o carrapato vetor, com os taurinos apresentando maior sensibilidade. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar a parasitemia porBabesia bovis e Babesia bigemina em 50 novilhas da raça Canchim ( Charolês + Zebu) naturalmente infestadas pelo R. (B.) microplus nas quatro estações do ano durante 24 meses, além de caracterizar o perfil de citocinas que podem estar associados ao fenótipo de resistência e suscetibilidade aos hemoparasitas do gênero Babesia spp. Foram realizadas contagens de fêmeas adultas de carrapatos com tamanho igual ou superior a 4,5 mm de diâmetro, presentes no lado esquerdo de cada bovino. As amostras de DNA extraídas foram submetidas à amplificação por meio da Reação em Cadeia daPolimerase Quantitativa em Tempo Real (qPCR), utilizando iniciadores que flanqueiam fragmentos dos genes mitocondriais do citocromo b (mt-cyt B), específicos para B. bovis e B. bigemina. O RNA extraído do sangue, foi usado para sintetizar o DNA complementar (cDNA) ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among the main causes of production losses in cattle is in the tropics infestation by Rhipicephalus (Boophilus) microplus, and consequently the hemoparasites transmitted by it. The resistance of zebu and crossbred with European breeds to infestation by this mite is widely known. However, as regards susceptibility to bovine babesiosis, there is evidence that genetic group can also interfere in resistance following the same pattern observed in the tick vector, with the taurine presenting greater sensitivity. This study aimed to evaluate parasitaemia by Babesia bovis and Babesia bigemina in 50 heifers Canchim (⅝ Charolais + ⅜ Zebu) naturally infested by R. (B.) microplus in four seasons for 24 months, and characterize the profile of cytokines that may be associated with phenotype resistance and susceptibility by gender hemoparasites Babesia spp. Adult female ticks counts with size equal to or greater than 4.5 mm in diameter, present in the left side of each calf were performed. The extracted DNA samples were subjected to amplification by Reaction Polymerase Chain Quantitative Real Time (qPCR), using primers flanking fragments of mitochondrial gene cytochrome B (mt-cyt B) specific for B. bovis and B. bigemina. The RNA extracted from the blood was used to synthesize complementary DNA (cDNA) for expression analysis of genes IFN-γ, TNF-α, IL-10 and IL-12B by relative quantification (RT-qPCR). Significant differences were observed (P <0.05) between the months of reviews for the tick ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O estabelecimento de isolados de Rhipicephalus (B.) microplus resistentes a drogas é um passo fundamental para pesquisas sobre mecanismos de ação das drogas e desenvolvimento de novos acaricidas. Diferentes tratamentos de pressão de seleção foram efetuados sobre uma população de campo com fator de resistência (FR) à ivermectina (IVM) 1,37 visando obter experimentalmente uma cepa resistente. O tratamento das larvas com IVM não resultou em infestações de bezerros. O tratamento das adultas, por duas gerações consecutivas não alterou o valor do FR da população. A este último procedimento foi associado o tratamento do hospedeiro com IVM, resultando em aumento significativo do FR. Infestações utilizando larvas provenientes de posturas de alta eclodibilidade parece ter contribuído ainda mais para o aumento do FR observado na última geração. Em resumo, foi possível estabelecer pela primeira vez, em laboratório, uma cepa resistente à IVM que apresentou um aumento estatisticamente significante do valor do FR da última geração analisada (F10) em relação à inicial (F1). / The establishment of drug resistant Rhipicephalus (B.) microplus isolates is a fundamental step on researches about drugs mechanisms of action and on the development of new acaricides. Different selection treatments were effectuated upon a field population with an ivermectin (IVM) resistant ratio (RR) 1,37 aiming to obtain experimentally a resistant strain. The larval treatments with IVM do not reach calf infestations. The adult treatments, in two consecutive generations do not changed the population RR. To this last protocol was added the IVM host treatment, increasing significantly the RR. Infestations using larvae obtained from the high-eclodibility oviposition seemed to have contributed much more to the RR increase observed on the last generation. Finally, it was possible to establish for the first time, on laboratory, an IVM resistant strain that showed a significantly higher RR value from the last generation (F10) in relation to the first one analyzed (F1).

Orientador: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Coorientador: Flávio Politi / Banca: Ilio Montanari Junior / Banca: Luis Vitor do Sacramento / Resumo: O Brasil é um dos maiores exportadores de carne bovina do mundo, entre 2003 e 2008 a receita com exportações cresceu de um bilhão para mais de cinco bilhões de dólares. Apesar disso, o setor enfrenta perdas consideráveis devido à ocorrência de infestações massivas de ectoparasitas como os carrapatos da espécie Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Ainda dentro do agronegócio, outra produção que se encontra em amplo crescimento e demonstrando grande potencial de ganho de espaço no mercado internacional é a ovinocultura, com rebanho estimado em 14 milhões de animais, colocando o Brasil em 18º lugar no ranking mundial de exportações. Porém, existem grandes perdas econômicas devido à existência de infestações com endoparasitas, como o nematódeo gastrintestinail da espécie Haemonchus contortus. Em paralelo à preocupação com os prejuízos financeiros no agronegócio, outra espécie de carrapato, Rhipicephalus sanguineus, desperta interesse dos pesquisadores por ser o vetor de microrganismos causadores de importantes doenças em cães nas regiões tropicais e subtropicais. Devido ao mau uso, acaricidas e nematicidas sintéticos tem ocasionado o fenômeno de resistência, com isso a busca por novas substâncias a partir de espécies vegetais configura-se numa alternativa muito promissora para o controle desses parasitas. A espécie Achyrocline satureioides (Lam.) D.C. (Asteraceae), popularmente conhecida como macela, possui em sua composição compostos fenólicos, sobretudo flavonóis e flavanonas, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Brazil is one of the largest beef exporter in the world and between 2003 and 2008, revenue from exports grew from one billion to more than five billion dollars. Nevertheless, the sector is facing considerable losses due to the occurrence of massive infestations of ectoparasites such as tick species of Rhipicephalus (Boophilus) microplus. In the agribusiness, another production that is in ample growth and showing great potential for space gain in the international market is the sheep industry, with herd estimated at 14 million animals, placing Brazil in 18th position in the world exports ranking. However, there are great economic losses due to the infestations of endoparasites, such as the gastrointestinal nematodes species of Haemonchus contortus. In parallel to the concern about the financial losses in agribusiness, other tick species, Rhipicephalus sanguineus, arouses interest of researchers for being the vector of microorganisms that causes major diseases to dogs in tropical and subtropical regions. Due to misuse of synthetic antiparasitic, which causes the phenomenon of resistance to them, the search for new substances from plant species sets up a very promising alternative for the biological control. The species Achyrocline satureioides (Lam.) DC (Asteraceae), popularly known as macela, has in its composition phenolic compounds, particularly flavonols and flavanones in the inflorescences. Based on the aspects, this study aimed to analyze the effectiveness of extractives of the first Brazilian cultivar of A. satureoides developed in the CPQBA on ticks R. (B.) microplus and R. sanguineus, as well as on the nematode H. contortus, using in vitro assays. The essential oil and the extracts of inflorescences of macela have shown that this plant has high activity on engorged females of R. (B.)... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A febre maculosa é uma zoonose emergente causada por bactérias do gênero Rickettsia do Grupo da Febre Maculosa (GFM). Este estudo foi delineado para comprovar indiretamente a infecção por riquétsias em humanos e animais e, diretamente em carrapatos Amblyomma cajennense. As amostras foram colhidas no município de Pedreira, região endêmica do estado de São Paulo. A reação de imunofluorescência indireta foi positiva em 31,2% e 77,3% dos soros de cães e eqüinos, respectivamente. Nenhum humano se apresentou positivo para esse teste. Para confirmar a infecção natural dos carrapatos adultos, utilizou-se o teste de hemolinfa, que se revelou insatisfatório. Larvas, ninfas e adultos de A. cajennense foram submetidos à técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR). As reações resultaram na amplificação de um fragmento (230pb) do gene codificador da proteína 17 kDa, somente em adultos (4,7%) e em larvas (1,1%). Não foi possível a amplificação de nenhum fragmento de outros genes testados (citrato sintase, OmpA e OmpB). Os produtos amplificados pela PCR de dois carrapatos adultos e de quatro larvas foram seqüenciados, apresentando 100% de similaridade com Rickettsia felis; e de 99,4% a 100% de similaridade com Rickettsia rickettsii, Rickettsia conorii, Rickettsia parkeri e Rickettsia peacockii, respectivamente. A detecção de positividade em larvas não alimentadas confirma a ocorrência da transmissão transovariana de riquétsias na espécie A. cajennense. A alta identidade observadas entre as riquétsias estudadas e as espécies acima mencionadas sugere a existência dessas bactérias na região. Contudo, maiores estudos deverão ser realizados, uma vez que as sequências de bases do fragmento de DNA estudado não permite a distinção entre as diferentes riquétsias do GFM. / Spotted fever is an emergent zoonosis caused by Rickettsia from the Spotted Fever Group. This study was designed to indirectly detect the human and animals infection by rickettsiae, and to directly detect the Amblyomma cajennense tick infection. The samples were collected at the Pedreira County, an endemic region of the State of São Paulo. The indirect imunofluorescence assay was positive for 31.2 % of canine and for 77.3% of equine examined sera. No human serum was positive by the use of this serological tests. In order to confirm the adult tick natural infection, it was used the hemolymph test, which showed to be unsatisfactory. The larvae, nymph and adult tick rickettsiae detection was performed by the use of the polymerase chain reaction (PCR). The PCR resulted on the amplification of a 230 bp fragment of the gene encoding the17 kDa protein, in adults (4.7%) and larvae (1.1%) only. It was not possible to amplify any other tested gene fragment (citrate synthase, OmpA and OmpB). The PCR amplified products from two adult ticks and from four larvae were sequenced, and presented 100% of similarity with Rickettsia felis and from 99,4% to 100% of similarity to Rickettsia rickettsii, Rickettsia conorii, Rickettsia parkeri and Rickettsia peacockii, respectively. The rickettsia detection in non-fed larvae confirms the occurrence of the rickettsiae transovarian transmission in A. cajennense specie. The high identity observed among the present studied rickettsiae and the above cited rickettsia species suggests the presence of these bacteria in Pedreira County. However, once the sequences of bases of the studied amplified DNA fragment did not allow the differentiation among the SFG rickettsiae, further studies are necessary.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2003-Katia Roberta Fernandes.pdf: 342140 bytes, checksum: e0a9b9e260d5d0a6cd41c984d6cfada1 (MD5) Previous issue date: 2003-02-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / There were made sensibility-tests in vitro of acaricides in engorged female Boophilus microplus, ticks coming from 12 cattle farms localized in different municipes in Rio de Janeiro-state, from March to September 2002. The following active principles, with the respective concentrations, were tested: Amitraz 250 ppm, cipermetrine high CIS 250 ppm, cipermetrine high CIS + DDVP 500 ppm and clorpyrifos + DDVP 500 ppm. Two groups of 10 engorged female ticks were used for each principle. Two groups with 10 females were used as controls, being treated with destilled water. The found results of the medium efficacy and the range (on amplitude) were: amitraz 45.40% (10.16 87.54); cipermetrine high CIS 37.61% (13.62 61.71); cipermetrine high CIS + DDVP 42.27% (23.87 76.87) and clorpyrifos + DDVP 88.95% (62.76 99.73). The active principles amitraz, cipermetrine high CIS and cipermetrine high CIS + DDVP were less efficient than the product containing clorpyrifos + DDVP, who proved out to being 11 of the studied cattlefarms. These differences in efficient treatment and control of tick B. microplus point out to the necessity of tests as well as for permanent monitoring control in order to find out the best acaricides for each farm. / Realizaram-se testes de sensibilidade in vitro a acaricidas em amostras de f?meas ingurgitadas de Boophilus microplus procedentes de 12 propriedades pecu?rias com atividade leiteria e de corte, localizadas em diferentes munic?pios do Estado do Rio de Janeiro, no per?odo de mar?o a junho de 2002. Para a an?lise da susceptibilidade das amostras de carrapatos, foram utilizados os princ?pios ativos nas seguintes concentra??es: amitraz 250 ppm, cipermetrina high CIS 250 ppm, cipermetrina high CIS + DDVP 500 ppm e clorpirif?s + DDVP 500 ppm; empregando-se dois grupos de 10 f?meas ingurgitadas para cada princ?pio ativo e um grupo controle (dois grupos de 10 f?meas ingurgitadas) submetido ? imers?o em ?gua destilada. Os resultados obtidos da m?dia de efic?cia e a amplitude foram, respectivamente: amitraz - 45,40% (10,16 - 87,54); cipermetrina high CIS - 37,61% (13,62 61,71); cipermetrina high CIS + DDVP- 42,27% (23,87 76,87) e clorpirif?s + DDVP - 88,95% (62,76 - 99,73). Os princ?pios ativos amitraz, cipermetrina high CIS e cipermetrina high CIS + DDVP foram os menos eficazes, e o produto a base de clorpirif?s + DDVP mostrou-se o mais eficiente em 11 das propriedades estudadas. A grande variabilidade na efic?cia dos princ?pios ativos avaliados no controle do carrapato B. microplus, demonstra a import?ncia de um monitoramento permanente para a indica??o dos acaricidas mais apropriados para cada propriedade.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Vanessa de Almeida Raia.pdf: 1677171 bytes, checksum: e3f8cffe7eb95e4096f3adf06552ae0c (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / To fill some gaps on intrinsic mechanisms of the biology of the oviposition and embryogenesis of R. (B.) microplus and R. (R.) sanguineus, was evaluated the variability protein in eggs per day of posture and incubation. For this, engorged female laid eggs in controlled environment chamber (27 ? 1oC, 80 ? 5% UR, and darkness). As soon as the female initiated the oviposition, egg samples of 50 mg was collected daily, conditioned in eppendorf tube and preserved in freezer - 20?C, characterizing the period of posture. Samples of 50 mg was removed from a fresh egg mixture and put in perforated eppendorf tube, kept in environment chamber (27 ? 1oC, 80 ? 5% UR, and darkness). Daily, one tube was transferred to freezer -20?C until the first larva hatch. Thus a sequence of different stage of embryogenesis was obtained. The Bradford method was used to measure the protein concentration and subsequently, the electrophoresis profiles was performed in SDS-PAGE. The protein concentrations was correlated with the oviposition and embryogenesis days using the Pearson (r) correlation and for this, the data was transformed in logarithmic value [log (X+1)] after the normality to be discarded (test of Shapiro-Wilk). During oviposition the protein concentrations of the eggs of R. (B.) microplus and R. (R.) sanguineus remained constant until the last days when abrupt increase was observed. In both of species, variation in the concentration of protein was observed during all embryonic period. The number of detectable bands of proteins decreasing during oviposition and embryogenesis days, but in the last days a new band was found. It can inferred that the proteins variation in the eggs of R. (B.) microplus and R. (R.) sanguineus is correlated with the days oviposition and incubation. The ticks R. (B.) microplus and R. (R.) sanguineus have a different oviposition profile proteins model that can be use as phenetic feature. As well, a different way of degradation of protein for each species was characterized. / Objetivando preencher algumas lacunas sobre mecanismos intr?nsecos da biologia da oviposi??o e embriog?nese de R. (B.) microplus e R. (R.) sanguineus, foi avaliada a variabilidade prot?ica dos ovos por dia de postura e incuba??o. Para tal, f?meas ingurgitadas foram colocadas para efetuar postura em estufa biol?gica sob condi??es controladas (27 ? 1oC, 80 ? 5% UR, escotofase). Ap?s in?cio da postura, amostras di?rias de 50 mg de ovos foram coletadas, acondicionadas e preservadas a 20?C, caracterizando o per?odo de postura. A partir de um pool de ovos rec?m colocados, foram obtidas al?quotas de 50 mg que acondicionadas em tubos de eppendorf perfurados foram mantidas em estufa biol?gica nas mesmas condi??es controladas descritas acima. Desde a separa??o das al?quotas at? o surgimento da primeira larva, diariamente uma amostra foi transferida para freezer ? -20?C, obtendo-se assim ovos seq?encialmente em diferentes momentos da embriog?nese. Para dosagem das prote?nas utilizou-se o m?todo de Bradford, e os perfis eletrofor?ticos foram tra?ados atrav?s de eletroforese em gel de poliacrilamida. Os dados das concentra??es prot?icas foram correlacionados com os dias de postura e de embriog?nese. Para isso, utilizou-se o coeficiente de correla??o de Pearson (r), com os dados da concentra??o transformados logar?timicamente [log (X+1)]. Os dados foram transformados ap?s o descarte da normalidade (teste de Shapiro-Wilk). De modo geral as concentra??es das prote?nas nos ovos de R. (B.) microplus e R. (R.) sanguineus durante a postura mantiveram-se constantes at? os ?ltimos dias quando se observou aumento abrupto das concentra??es. Nas duas esp?cies, foram observadas varia??es nas concentra??es das prote?nas durante o per?odo embrion?rio. Ainda em ambas esp?cies, na an?lise das bandas prot?icas, o n?mero de bandas detect?veis diminuiu ao longo do per?odo de postura e embriog?nese, sendo observado nos ?ltimos dias surgimento de uma nova banda. Pode-se depreender que a varia??o na concentra??o das prote?nas dos ovos de R. (B.) microplus e R. (R.) sanguineus est? correlacionada com os dias de postura e incuba??o, atrav?s do aumento na concentra??o de prote?nas ? medida que o final da postura e eclos?o da larva se aproximam. Devido ?s diferen?as entre os perfis prot?icos de R. (B.) microplus e R.(R.) sanguineus ao longo dos dias de postura, conclui-se que as prote?na s disponibilizadas aos ovos durante o per?odo de postura s?o diferentes entre estas duas esp?cies e que os zimogramas podem ser utilizados como marcadores fen?ticos. Ainda pode-se concluir que, ao longo da embriog?nese, devido ao desaparecimento e surgimento de bandas prot?icas, as prote?nas dispon?veis para o embri?o de R. (B.) microplus e R.(R.) sanguineus s?o biotransformadas de modo que h? um perfil de degrada??o particular para cada esp?cie.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008- Jania de Resende.pdf: 467062 bytes, checksum: cf6acc7c0e32afbfa397b5b1c07d0d87 (MD5) Previous issue date: 2008-02-22 / Funda??o Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Embryonic cells of tick in vitro constitute an important one tool for culture and study of the biology of B. burgdorferi. Spirochetes Borrelia burgdorferi is the aetiologic agent of borreliose of Lyme in U.S.A. and Europe, where it is transmitted by tick of the Ixodes genus. The aim of this work was in vitro to cultivate B. burgdorferi (American Cepa G39/40) in primary culture of embryonic cells of Rhipicephalus (B.) microplus and the A. cajennense. From the primary culture of embryonic cells of R. (B.) microplus were performed subculture maintained with medium Leibovitz's (L-15) free of antibiotic, that later it were changed by medium Barbour-Stoener-Kelly (BSK). After the addition of the BSK inoculated B. burgdorferi of and also in Tube of Leighton (TL) with free BSK of cells (control) in a final concentration of 6x106 spirochetes/mL. The embryonic cells of the A. cajennense initially were cultivated in medium L-15 with antibiotic, which was substituted by the BSK. Later, 1,1x107 spirochetes/mL in medium BSK cultivated was inoculated, and also in TL controlled free of cells. All the culture was incubated at 34?C. The development of the culture was observed in microscope of inverted contrast of phase, as well as the countings of B. burgdorferi performed in chamber of neubauer. Cover glass of the TL had been stained with Giemsa. It was evidenced by the observation in microscope of inverted contrast of phase the survival, attach and multiplication of B. burgdorferi, in the embryonic cells of R. (B.) microplus and A. cajennense. It did not have differences in the finale counting of spirochetes cultivated in cells of R. (B.) microplus when compared with the free control of cells, but on with cells of the A. cajennense, the number amount approximately was 1,9x107 spirochetes/mL, and while in the tube it has controlled free of cells was 1x106 spirochetes /mL. The culture of cells of tick R. (B.) microplus and the A. cajennense have potential to be used as substratum for culture of B. burgdorferi, and study of its development. / C?lulas embrion?rias de carrapatos mantidas in vitro constituem uma importante ferramenta para cultivo e estudo da biologia de Borrelia burgdorferi. A espiroquetas B. burgdorferi ? o agente etiol?gico da borreliose de Lyme nos EUA e Europa, onde ? transmitida por carrapatos do g?nero Ixodes. O objetivo deste trabalho foi cultivar in vitro Borrelia burgdorferi (Cepa Americana G39/40) em cultura prim?ria de c?lulas embrion?rias dos carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus e Amblyomma cajennense. A partir da cultura prim?ria de c?lulas embrion?rias de R. (Boophilus) microplus foram realizados subcultivos mantidos com meio Leibovitz s L-15 livre de antibi?tico, que posteriomente foi trocado pelo meio Barbour-Stoener-Kelly (BSK). Ap?s a adi??o do BSK na cultura, inoculou-se B. burgdorferi e tamb?m em Tubo de Leighton (TL) com BSK livres de c?lulas (controle), numa concentra??o final de 6x106 espiroquetas/mL. As c?lulas embrion?rias de A. cajennense foram inicialmente cultivadas em meio L-15 com antibi?tico, o qual foi substitu?do pelo BSK. Posteriormente, inoculou-se 1,1x107 espiroquetas/mL cultivadas em meio BSK, e tamb?m em TL controle livre de c?lulas. Todos os cultivos foram incubados em estufa bacteriol?gica a 34?C. O desenvolvimento dos cultivos foram observados em microsc?pio de contraste de fase invertido, assim como as contagens de B. burgdorferi realizados em c?mara de neubauer. As lam?nulas dos TL foram coradas com Giemsa. Foi constatado pela observa??o em microsc?pio de contraste de fase invertido a sobreviv?ncia, ader?ncia e multiplica??o de B. burgdorferi, nas c?lulas embrion?rias de R. (Boophilus) microplus e A. cajennense. N?o houve diferen?as na contagem final de espiroquetas cultivadas em c?lulas de R. (Boophilus) microplus quando comparada ao controle livre de c?lulas, mas sobre c?lulas de A. cajennense o valor total de aproximadamente 1,9x107 espiroquetas/mL, e enquanto no tubo controle livre de c?lulas foi 1x106 espiroquetas/mL. O cultivo de c?lulas do carrapato R. (Boophilus) microplus e A. cajennense t?m potencial para ser utilizado como substrato para cultivo de B. burgdorferi e para estudo de seu desenvolvimento.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Charles Passos Rangel.pdf: 970968 bytes, checksum: 8211b14a033b6089d8ed8bbdef93fe27 (MD5) Previous issue date: 2008-08-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Artificial feeding is an important tool, as an option to minimize the use of animals in scientific experiments, providing study of the transmission of bioagentes in the absence of vertebrate host. The objectives of this study were artificially food through capillary tubes females partially engorged of the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus previously fed on cattle and to check the influence of the technique in the biological aspects of non-parasitic phase this species. Females weighing between 40,6 and 69,7 milligrams were separated into four groups of homogeneous weight, with 10 females in each and set on trays of styrofoam with double-sided tape. For artificial feeding tubes of microhematocrit containing blood citrated cattle were placed on the apparatus mouthpiece of ticks. The groups were fed by six, 12, 24, 36 hours, being kept under temperature of 27 ? 1 ? C and humidity above 80%. After artificial feeding, the ticks were weighed to verify the ingestion of blood. To monitoring the biological aspects, the ticks were set in Petri dishes, and kept in the same controled temperature and humidity, describe above. The control group was formed by engorged females from cattle, being kept in the same conditions of temperature and humidity of the groups artificially fed. For statistical analysis was used variance analysis and Tukey's test with a significance level of 5%, for comparisons of means. The average weights acquired in milligrams were 12.33 ? 15.17; 33.41 ? 21.27; 67.53 ? 27.57; 79.47 ? 45.53 in groups 6, 12, 24, 36 hours, respectively. The two groups exposed for less time to capillaries, showed statistical difference compared with the gain average of weight of the group of 36 hours. From 24 hours of feeding was observed significant difference between the biological aspects of the groups artificially fed, except for the posture period. Although the females artificially fed through capillary tubes have not reached full engorgiment, the findings show that the technique did not presented deleterious effect on the biological aspects of this species. / Alimenta??o artificial ? uma ferramenta importante, por constituir op??o para minimizar o uso de animais na experimenta??o cient?fica propiciando estudo da transmiss?o de bioagentes na aus?ncia do hospedeiro vertebrado. Os objetivos deste estudo foram alimentar artificialmente, por meio de tubos capilares, f?meas parcialmente ingurgitadas do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus previamente alimentadas em bovinos e verificar a influ?ncia da t?cnica, nos aspectos biol?gicos da fase n?o-parasit?ria desta esp?cie. F?meas pesando entre 40,6 e 69,7 miligramas foram separadas em quatro grupos de peso homog?neo, com 10 f?meas cada e fixadas em bandejas de isopor com aux?lio de fita dupla face. Para alimenta??o artificial, tubos de microhemat?crito contendo sangue bovino citratado foram posicionados sobre o aparelho bucal dos carrapatos. Os grupos foram alimentados por 6, 12, 24, 36 horas, sendo mantidos em estufa, ? temperatura de 27 ? 1?C e umidade superior a 80%. Ap?s alimenta??o artificial, os carrapatos foram pesados para verifica??o da ingest?o de sangue. Para acompanhamento dos aspectos biol?gicos, os carrapatos foram fixados em placas de Petri, e incubados nas mesmas condi??es de temperatura e umidade descritas acima. O grupo controle foi formado a partir de f?meas ingurgitadas oriundas de bovinos infestados experimentalmente, mantidas nas mesmas condi??es de temperatura e umidade dos grupos alimentados artificialmente. Para an?lise estat?stica utilizou-se an?lise de vari?ncia e teste de Tukey com n?vel de signific?ncia 5%, para compara??es das m?dias. Os pesos m?dios em miligrama adquiridos foram 12,33?15,17; 33,41?21,27; 67,53?27,57; 79,47?45,53 nos grupos 6, 12, 24, 36 horas, respectivamente. Os dois grupos expostos por menos tempo aos capilares apresentaram diferen?a estat?stica em rela??o ao ganho m?dio de peso do grupo de 36 horas. A partir de 24 horas de alimenta??o foi observada diferen?a significativa entre os aspectos biol?gicos dos grupos alimentados artificialmente, exceto para o per?odo de postura. Embora as f?meas alimentadas artificialmente por meio de tubos capilares n?o tenham atingido ingurgitamento total, os resultados apresentados demonstram que a t?cnica n?o apresentou efeito delet?rio sobre os aspectos biol?gicos da esp?cie.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-04-24T20:39:20Z No. of bitstreams: 1 2014 - Maria Clara da Silva Negreiros Botelho.pdf: 2378053 bytes, checksum: bfc9cb9e12f70927d727da1fba44c017 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-24T20:39:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014 - Maria Clara da Silva Negreiros Botelho.pdf: 2378053 bytes, checksum: bfc9cb9e12f70927d727da1fba44c017 (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / CNPq / FAPUR (UFRRJ) / The aim of this study was to evaluate the efficacy of a collar impregnated with deltamethrin and propoxur to control infestations R. sanguineus and Ctenocephalides felis felis in beagle dogs and to evaluate the safety of treatment by clinical, haematological and biochemical tests, and to assess the dosage of serum cholinesterase in dogs after the treatment with a carbamate. Twenty beagles dogs were selected, divided into two groups: control and treated with a collar containing a combination of deltamethrin 4g and propoxur 12g. Each animal was infested with 50 R. sanguineus ticks (25 males and 25 females) and 100 C. felis felis fleas adults (50 males and 50 females). For the assessment of efficacy, 48 hours after each infestation, the mechanical removal of the parasites was performed. Each animal was infested with fleas and ticks on days -7 (before treatment), -2, +5, +12, +19 and +26. After day 26, every 14 days infestations were performed until the day +208. After this experimental day, the animals were infested with fleas only every 7 days until the termination of the study on day +271. For haematological and biochemical evaluations, blood samples were collected from animals in both groups every seven days until day +14. This experimental day up to +266, samples were collected every 14 days. After removal of the collars (day 274), three collections were made on days: +275, +281 and +288 , to assess the possible occurrence of changes in serum levels of serum enzyme butyrylcholinesterase (BChE). The acaricides effectiveness of the test product was 100 % on days +7, +21 and +28. The efficacy values were above 90% until day 126. As from day +182, the efficacy reached values lower than 80%. Only after day +168, levels declined below 80%. Pulicide efficiencies of the test product was 100 % on days +21, +28, +42, +56, +98 and +112. The efficacy values were above 90% until day +266, reducing 89.48% on day 273. The animals showed no changes in clinical and laboratory examinations that could be associated with adverse effects from the use of the product tested. It is concluded that a collar containing a combination of deltamethrin 4g and propoxur 12g was effective in controlling R. sanguineus ticks for up to 126 days and control C. felis felis fleas for up to 266 days in addition to proving to be safe for use in dogs. The animals showed no clinical and laboratory changes that could be associated with adverse effects from the use of the product tested, thus demonstrating that the association deltamethrin and propoxur in an impregnated collar is safe for use in dogs. / O objetivo do presente estudo foi avaliar a efic?cia de uma coleira impregnada com deltametrina e propoxur no controle de infesta??es por Rhipicephalus sanguineus e Ctenocephalides felis felis em c?es da ra?a beagle e avaliar a seguran?a cl?nica do tratamento atrav?s de exames cl?nicos, hematol?gicos e bioqu?micos, al?m de avaliar a dosagem da colinesterase s?rica em c?es submetidos ao tratamento com um carbamato. Para isso, foram selecionados 20 animais da ra?a beagle em bom estado sanit?rio, distribu?dos em dois grupos: controle e tratado com uma coleira impregnada com 4g de deltametrina e 12g de propoxur. Cada animal foi infestado com 50 carrapatos R. sanguineus (25 machos e 25 f?meas) e 100 pulgas C. felis felis adultas (50 machos e 50 f?meas). Para a avalia??o da efic?cia, 48 horas ap?s cada infesta??o, foi realizada a remo??o mec?nica dos parasitos. Cada animal foi infestado com pulgas e carrapatos nos dias -7 (antes do tratamento), -2, +5, +12, +19 e +26. Ap?s o dia +26 foram realizadas infesta??es a cada 14 dias at? o dia +208. Ap?s este dia experimental, os animais foram infestados somente com pulgas a cada sete dias, at? o encerramento do estudo, no dia +271. Para avalia??o hematol?gica e bioqu?mica, amostras de sangue foram coletadas dos animais de ambos os grupos a cada sete dias at? o dia +14. Deste dia experimental at? o dia + 266, as coletas foram realizadas a cada 14 dias. Ap?s a retirada das coleiras (dia +274), foram realizadas mais tr?s coletas nos dias +275, +281 e +288, para avaliar a poss?vel ocorr?ncia de altera??es nos n?veis s?ricos da enzima butirilcolinesterase s?rica (BChE). A efic?cia carrapaticida do produto em teste foi de 100% nos dias +7, +21 e +28. Os valores de efic?cia foram superiores a 90% at? o dia+126. Apenas a partir do dia +182, a efic?cia atingiu valores inferiores a 80%. Apenas ap?s o dia +168 os n?veis declinaram abaixo dos 80%. A efic?cia pulicida do produto em teste foi de 100% nos dias +21, +28, +42, +56, +98 e +112. Os valores de efic?cia foram superiores a 90% at? o dia+266, reduzindo a 89,48% no dia +273. Os animais n?o apresentaram altera??es em exame cl?nico e laboratoriais que pudessem ser associados a efeitos adversos provenientes do uso do produto testado. Conclui-se que a coleira impregnada com 4g de deltametrina e 12g de propoxur foi eficaz no controle de carrapatos R. sanguineus por at? 126 dias e no controle de pulgas C. felis felis por at? 266 dias. Os animais n?o apresentaram altera??es cl?nicas e laboratoriais que pudessem ser associadas a efeitos adversos provenientes do uso do produto testado, demonstrando assim que a associa??o deltametrina e o propoxur em uma coleira impregnada ? segura para uso em c?es.