Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-04-20T19:47:06Z No. of bitstreams: 1 paulabarrosocruz.pdf: 1781659 bytes, checksum: 62d0ee084bc070be10b7ca48781a98c6 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-04-24T16:51:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paulabarrosocruz.pdf: 1781659 bytes, checksum: 62d0ee084bc070be10b7ca48781a98c6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T16:51:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paulabarrosocruz.pdf: 1781659 bytes, checksum: 62d0ee084bc070be10b7ca48781a98c6 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade carrapaticida do extrato metanólico de Acmella oleracea e do espilantol sobre Rhipicephalus microplus e Dermacentor nitens. O extrato metanólico foi obtido através de maceração com metanol. Desse extrato, foi obtida uma fração diclorometano com 99% de espilantol (que pode ser considerado um composto puro), que também foi testada sobre larvas e fêmeas ingurgitadas de R. microplus e larvas de D. nitens. Para a avaliação da atividade sobre larvas, foi utilizado o teste de pacote de larvas modificados e o extrato metanólico e a fração diclorometano (99% de espilantol) foram testadas em concentrações de 0,2 a 50,0 mg/mL. No teste de tempo letal, também foi utilizado a técnica de pacote de larvas, o extrato metanólico foi usado na concentração de 12,5 mg/mL e a avaliação do percentual de mortalidade foi feita após 15, 30, 45, 60, 75, 90, 120 minutos e 24 horas. Nesse teste foi feito o cálculo de tempo letal 50% (TL50). O teste com fêmeas ingurgitadas foi feito apenas com R. microplus, sendo testadas concentrações de 25 a 200 mg/mL do extrato metanólico e concentrações entre 2,5 a 20,0 mg/mL para o espilantol. O extrato metanólico ocasionou mortalidade de 100% das larvas de R. microplus e D. nitens a partir de concentrações de 3,1 e 12,5 mg/mL, respectivamente. O espilantol resultou em mortalidade de 100% para larvas de R. microplus a partir da concentração 1,6 mg/mL e de 12,5 mg/mL para D. nitens. No experimento de tempo letal, a mortalidade foi de 100% para larvas de R. microplus e D. nitens após 120 minutos e 24 horas, com TL50 de 38 e 57 minutos. No teste com fêmeas, o peso da massa de ovos e percentagem de eclosão dos grupos tratados com concentrações iguais e/ou superiores a 50,0 mg/mL do extrato metanólico apresentaram redução significativa (p> 0,05) em relação ao controle, enquanto o espilantol provocou redução significativa do peso da massa de ovos e percentagem de eclosão em concentrações de 10,0 mg/mL e 2,5 mg/mL, respectivamente. As fêmeas tratadas com 200,0 mg/mL do extrato morreram antes de iniciar o processo de oviposição, resultando em eficácia de 100%, enquanto a melhor eficácia para espilantol foi de 92,9% na concentração de 20,0 mg/mL. Portanto, é possível concluir que o extrato metanólico da A. oleracea e o espilantol apresentam atividade acaricida sobre R. microplus e D. nitens. / We evaluate the acaricidal activity of Acmella oleracea methanol extract and spilanthol on Rhipicephalus microplus and Dermacentor nitens. The methanol extract was made through maceration with methanol. From this extract, a dichloromethane fraction with approximately 100% spilanthol was obtained and tested on R. microplus larvae and engorged females and D. nitens larvae. For evaluation against larvae, modified larvae test packages were used, and both methanol extract and the dichloromethane fraction were tested at concentrations of 0.2 to 50.0 mg/mL. The larvae package technique was also used in the lethal time (LT) test, with methanol extract at a concentration of 12.5 mg/mL and the mortality percentage assessment was made after 15, 30, 45, 60, 75, 90, 120 minutes and 24 hours. The lethal time calculation 50% (LT50) was performed in this test. The engorged female test was done with R. microplus only, at concentrations of 25 to 200 mg/mL for methanol extract and 2.5 to 20.0 mg/mL for spilanthol. The methanol extract caused 100% mortality of the R. microplus and D. nitens larvae at concentrations from 3.1 and 12.5 mg/mL, respectively. Spilanthol resulted in 100% mortality for R. microplus larvae at concentration from 1.6 mg/mL and 12.5 for D. nitens. In the lethal time essay using the methanol extract, the mortality rate was 100% for R. microplus and D. nitens larvae after 120 minutes and 24 hours with LT50 of 38 and 57 minutes. In the test of females, the egg mass weight and the hatching percentage of the groups treated with concentrations equal to and/or higher than 100.0 mg/mL of methanol extract showed significant differences (p> 0.05) while spilanthol causes significant reduction of the egg mass weight and hatching percentage at concentrations of 10.0 mg/mL and 2.5 mg/mL, respectively. Females treated with 200.0 mg/mL of extract died before starting the oviposition process, resulting in 100% effectiveness, while the best efficacy for spilanthol was 92.9% at concentration of 20.0 mg/mL. Thus we conclude that the methanol extract of A. oleracea and spilanthol present acaricide activity against R. microplus and D. nitens.

Orientador: Maria Izabel Camargo-Mathias / Coorientador: Pablo Henrique Nunes / Banca: Karim Christina Scopinho Furquim / Banca: Rusleyd Mara Magalhães de Abreu / Banca: Gustavo Seron Sanches / Banca: Patricia Rosa de Oliveira / Resumo: Os carrapatos Rhipicephalus sanguineus têm atraído, nos últimos anos, a atenção de pesquisadores, bem como de órgãos gerenciadores da saúde pública, por estarem se tornando grandes pragas urbanas, transmissoras de doenças para cães e humanos. Por esta razão, a busca por formulações com ação acaricida tem sido preocupação constante das indústrias farmacêuticas veterinárias. No entanto, a grande maioria dos produtos atualmente comercializados apresenta alta toxicidade aos hospedeiros dos ectoparasitas e ao meio ambiente, induzindo, inclusive, resistência nos carrapatos. Métodos alternativos de controle, como o uso de extratos de plantas, por exemplo, têm se tornado cada vez mais interessantes, já que apresentam menores custos e baixa toxicidade. Neste sentido, destaca-se a espécie Azadirachta indica (neem), cujos extratos de folhas e sementes apresentam reconhecido potencial repelente, inseticida e acaricida. Desta forma, este estudo teve como objetivo avaliar as alterações morfológicas observadas no ovário e nas glândulas salivares de fêmeas semiingurgitadas de carrapatos R. sanguineus, submetidas à aplicação tópica do óleo extraído das sementes de neem, nas concentrações de 20, 40 e 60%, utilizando-se etanol aquoso a 10% como solvente. Os órgãos foram coletados, fixados, e analisados por meio de técnicas de microscopia de luz convencional, microscopia confocal de varredura a laser e microscopia eletrônica de transmissão. De forma geral, a metodologia proposta neste trabalho permitiu a simulação de um tratamento tópico dos animais infestados, tornando os resultados obtidos mais próximos de uma aplicação prática em campo. Em ambos os órgãos analisados, o óleo de neem demonstrou efeitos claramente dose-dependentes. Os ovócitos e os ácinos glandulares de carrapatos R. sanguineus exibiram alterações morfológicas semelhantes, tais como sinais evidentes de desorganização citoplasmática,... / Abstract: Rhipicephalus sanguineus ticks have attracted, in recent years, the attention of researchers as well as public health managers, since they have become major urban pests, transmitters of diseases to humans and dogs. For this reason, the search for formulations with acaricide action has been constant concern of veterinary pharmaceutical industries. However, the vast majority of products currently commercialized exhibits high toxicity to the hosts of these ectoparasites and to the environment, even inducing resistance in ticks. Alternative control methods such as the use of plant extracts, for example, have become increasingly interesting, since they have reduced costs and low toxicity. In this sense, Azadirachta indica (neem) species stands out, as its leaf and seed extracts have recognized repellent, insecticide and acaricide potential. Thus, this study aimed to evaluate the morphological alterations resulting from the action of neem in the ovary and salivary glands of semi-engorged R. sanguineus female ticks, subjected to the topical application of the oil extracted from neem seeds, at concentrations of 20, 40 and 60%, using 10% aqueous ethanol as solvent. The organs were collected and fixed, and analyzed by means of techniques in conventional light microscopy, confocal laser scanning microscopy and transmission electron microscopy. In general, the methodology proposed in this work allowed the simulation of a topical treatment of the infested animals, making the results closer to a practical application in field. In both analyzed organs, neem oil clearly demonstrated a dose-dependent effect. Oocytes and glandular acini of R. sanguineus ticks exhibited similar morphological changes, such as evident signs of cytoplasmic disorganization, cellular vacuolation, nuclear or nucleolar irregularities, dilation of mitochondrial cristae, as well as dilation in rough endoplasmic reticulum lumen. These facts show that, regardless of the organ, neem ... / Doutor

A febre maculosa é uma zoonose emergente causada por bactérias do gênero Rickettsia do Grupo da Febre Maculosa (GFM). Este estudo foi delineado para comprovar indiretamente a infecção por riquétsias em humanos e animais e, diretamente em carrapatos Amblyomma cajennense. As amostras foram colhidas no município de Pedreira, região endêmica do estado de São Paulo. A reação de imunofluorescência indireta foi positiva em 31,2% e 77,3% dos soros de cães e eqüinos, respectivamente. Nenhum humano se apresentou positivo para esse teste. Para confirmar a infecção natural dos carrapatos adultos, utilizou-se o teste de hemolinfa, que se revelou insatisfatório. Larvas, ninfas e adultos de A. cajennense foram submetidos à técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR). As reações resultaram na amplificação de um fragmento (230pb) do gene codificador da proteína 17 kDa, somente em adultos (4,7%) e em larvas (1,1%). Não foi possível a amplificação de nenhum fragmento de outros genes testados (citrato sintase, OmpA e OmpB). Os produtos amplificados pela PCR de dois carrapatos adultos e de quatro larvas foram seqüenciados, apresentando 100% de similaridade com Rickettsia felis; e de 99,4% a 100% de similaridade com Rickettsia rickettsii, Rickettsia conorii, Rickettsia parkeri e Rickettsia peacockii, respectivamente. A detecção de positividade em larvas não alimentadas confirma a ocorrência da transmissão transovariana de riquétsias na espécie A. cajennense. A alta identidade observadas entre as riquétsias estudadas e as espécies acima mencionadas sugere a existência dessas bactérias na região. Contudo, maiores estudos deverão ser realizados, uma vez que as sequências de bases do fragmento de DNA estudado não permite a distinção entre as diferentes riquétsias do GFM. / Spotted fever is an emergent zoonosis caused by Rickettsia from the Spotted Fever Group. This study was designed to indirectly detect the human and animals infection by rickettsiae, and to directly detect the Amblyomma cajennense tick infection. The samples were collected at the Pedreira County, an endemic region of the State of São Paulo. The indirect imunofluorescence assay was positive for 31.2 % of canine and for 77.3% of equine examined sera. No human serum was positive by the use of this serological tests. In order to confirm the adult tick natural infection, it was used the hemolymph test, which showed to be unsatisfactory. The larvae, nymph and adult tick rickettsiae detection was performed by the use of the polymerase chain reaction (PCR). The PCR resulted on the amplification of a 230 bp fragment of the gene encoding the17 kDa protein, in adults (4.7%) and larvae (1.1%) only. It was not possible to amplify any other tested gene fragment (citrate synthase, OmpA and OmpB). The PCR amplified products from two adult ticks and from four larvae were sequenced, and presented 100% of similarity with Rickettsia felis and from 99,4% to 100% of similarity to Rickettsia rickettsii, Rickettsia conorii, Rickettsia parkeri and Rickettsia peacockii, respectively. The rickettsia detection in non-fed larvae confirms the occurrence of the rickettsiae transovarian transmission in A. cajennense specie. The high identity observed among the present studied rickettsiae and the above cited rickettsia species suggests the presence of these bacteria in Pedreira County. However, once the sequences of bases of the studied amplified DNA fragment did not allow the differentiation among the SFG rickettsiae, further studies are necessary.

As infestações por Rhipicephalus microplus, conhecido como o carrapato do boi, causam enormes prejuízos econômicos na produção de gado na região tropical e países subtropicais em todo o mundo. O método atual de controle do ectoparasito depende exclusivamente de produtos tóxicos como os acaricidas, que deixam resíduos no meio ambiente e seu uso contínuo tem provocado o aparecimento de carrapatos resistentes, sendo, portanto, de pouca eficácia. O grupo de pesquisa em carrapatos da FMRP-USP tria antígenos candidatos que foram testados em vacinação experimental feita em bovinos, utilizando formulação antigênica multicomponente. Baseando-se nos resultados do transcriptoma de leucócitos do sangue periférico de bovinos vacinados, que identificou genes diferencialmente expressos, cuja expressão é afetada pelas infestações e a partir do transcriptoma da pele de bovinos da raça Nelore e Holandês, o presente estudo tem objetivo avaliar, através da técnica Nanostring, genes que possam ser empregados em testes para identificar bovinos geneticamente resistentes ao carrapato e comparar com os dados já obtidos dos transcriptomas de sangue periférico e de pele. Foi analisada a expressão gênica de leucócitos de sangue periférico de vacas da raça holandesa pouco e muito infestada, e da raça nelore durante períodos de baixa e alta infestação natural por carrapatos. Os dados obtidos mostraram que a infestação modulou um número maior de genes nos holandeses muito infestados do que nas outras raças. De acordo com a análise funcional realizada dos genes diferencialmente expressos (DEGs) encontrados pode-se observar uma possível relação do perfil de expressão gênica dos holandeses com a imunidade inata, ao passo que o perfil de expressão gênica encontrado na raça nelore pode estar relacionado tanto com a imunidade inata quanto a imunidade adaptativa. Dessa forma, avaliando o perfil de resistência e suscetibilidade, este trabalho sugere que os genes CXCL6, S100A8 (Calgranulina A) TYRP1, IgM, ELANE, CCL19, PDGFRL, VCAM1, NOX1 e CEBPE, podem ser possíveis assinaturas gênicas relacionadas a resistência ou suscetibilidade / Infestations with the cattle tick, Rhipicephalus microplus, cause huge economic losses in cattle production in tropical and subtropical countries worldwide. Control of ticks and tick-borne diseases of livestock depends almost exclusively of chemical control, such as use of acaricides, which leads to environmental concerns and due to their continued use, has generated resistance mechanisms in ticks, presenting steadily decreasing efficiency in controlling tick infestations. The research group of ticks of FMRP-USP selects new antigens that were tested in an experimental immunization, using a multicomponent antigen formulation. Based on the transcriptome results from peripheral blood leukocytes from vaccinated cattle, which identified genes whose expression is affected by infestations, and from the skin transcriptome of Nelore and Holstein bovine, the aim of this project is evaluate, by Nanostring technology, genes that may be used in tests to identify genetically resistant cattle to bovine tick and compare with the data already obtained from peripheral blood transcriptome and skin transcriptome. Gene expression was analyzed in peripheral blood of Holstein (much infested or less infested), and Nelore during periods of low and high natural infestation of ticks. The results showed that a greater number of genes were modulated in Holstein than the other breeds. According to the functional analysis of differentially expressed genes (DEGs) it can be observed a possible correlation from Holsteins profile with innate immunity, while the gene expression profile found in Nelore can be related both with the innate and adaptive immunity. Thus, evaluating the resistance and susceptibility profile, this work suggests that genes CXCL6, S100A8 (Calgranulin A) TYRP1, IgM, ELANE, CCL19, PDGFRL, VCAM1, NOX1 and CEBPE may be possible gene signatures related to resistance or susceptibility.

Neste estudo avaliamos a ocorrência de fagocitose por parte de alguns tipos celulares presentes na hemolinfa do carrapato bovino B. microplus e a produção de espécies reativas de oxigênio durante a resposta imune. As técnicas empregadas para avaliação da produção de espécies reativas de oxigênio foram luminescência amplificada por luminol, oxidação de fenol vermelho, microscopia de fluorescência e fluorimetria com o corante dihidrorrodamina 123 (DHR). Observamos um aumento da luminescência amplificada por luminol quando hemócitos foram incubados na presença de bactérias Micrococcus luteus ou zimosam ou PMA. Esta luminescência foi inibida por superóxido dismutase (SOD) e por catalase (CAT), enzimas antioxidantes que removem superóxido e peróxido de hidrogênio, respectivamente. LPS não elicitou aumento da luminescência dos hemócitos em relação ao controle. Através da oxidação de fenol vermelho em reação inibida por CAT, verificamos aumento nos níveis de H2O2 produzido pelos hemócitos quando estimulados com PMA e Micrococcus luteus, enquanto não houve aumento quando o estímulo foi LPS, corroborando os resultados da luminescência. Usando microscopia de fluorescência para avaliar a produção de ERO pelos hemócitos, encontramos que cerca de 25% dos hemócitos fluorescem com maior intensidade quando estimulados com zimosam, sendo esta fluorescência inibida por CAT. Através de fluorimetria usando DHR observamos um aumento na intensidade de fluorescência dos hemócitos estimulados com PMA em reação inibida por cisteína, substância redutora que remove peróxido de hidrogênio e peroxinitrito. Nosso conjunto de resultados permitem concluir que os hemócitos do carrapato bovino produzem espécies reativas de oxigênio durante a resposta imune, semelhantemente ao que ocorre em vertebrados e em invertebrados como moluscos, crustáceos e insetos. Este é o primeiro trabalho mostrando produção de ERO pelos hemócitos de aracnídeos. / The phagocytic activity and the reactive oxygen species (ROS) production during immune response of some hemocytes of the cattle tick Boophilus microplus were evaluated in this study. The ROS production was evaluated by luminol amplified luminescence, phenol red oxidation, dyhydrorhodamine (DHR) fluorescence microscopy and fluorimetry. The luminol-amplified luminescence increased when hemocytes were incubated with bacteria (Micrococcus luteus) or zymosam or phorbol 12-miristate 13 acetate (PMA). The superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), antioxidant enzymes that removes superoxide and hydrogen peroxide, respectively, inhibited this luminescence. Lipopolysaccharide (LPS) did not elicit luminescence of hemocytes in relation to controls. The catalase-inhibittable phenol red oxidation assay also showed an increase in the level of hydrogen peroxide produced by hemocytes stimulated with PMA or Micrococcus luteus. LPS did not stimulate the hemocytes, similarly to the observed by luminescence assay's. We also evaluated ROS production by fluorescence microscopy and we found approximately 25% more fluorescent hemocytes when zymosam was used. This fluorescence was inhibited by catalase. In DHR fluorimetry assay we observed an increase in the intensity of fluorescence in PMA stimulated hemocytes. This fluorescence was inhibited by cystein, a reducing agent that removes hydrogen peroxide and peroxinitrite. We conclude that hemocytes of the tick, like other invertebrate such as mollusks, crustaceans and insects and vertebrate, produce reactive oxygen species during the immune response. This is the first report of reactive oxygen species production by arachnid hemocytes.

O carrapato do boi Rhipicephalus microplus é um ectoparasita de bovinos de grande importância sanitária e econômica, que produz grandes prejuízos na bovinocultura do Brasil. O uso de ivermectina como meio de controle químico, ao longo dos anos, levou à seleção de linhagens de R. microplus resistentes a ivermectina. A consequência desse processo é a perda da eficácia do acaricida. Este trabalho teve por objetivo determinar as bases moleculares da resistência a ivermectina. Para o estudo dos mecanismos envolvidos na resistência a ivermectina de R. microplus foram utilizadas duas cepas de referência: a cepa Mozo, suscetível a ivermectina, e a cepa Juarez, resistente, e duas abordagens experimentais complementares: ensaios enzimáticos com sinergistas e estudos de expressão gênica por meio de sequenciamento massivo em paralelo do RNA ou RNA-Seq. Os resultados deste trabalho permitem afirmar que o mecanismo de desintoxicação metabólica de maior importância é mediado por transportadores ABC, seguido de esterases, glutation-S-transferases e citocromo-oxidases. As diferenças de expressão gênica observadas entre as cepas, e dentro das cepas a diferentes concentrações de ivermectina, confirmam os resultados e permitem concluir que R. microplus apresenta uma resposta poligênica à ivermectina / The cattle tick Rhipicephalus microplus is one of the most important ectoparasites with great sanitary and economic importance for cattle rearing in Brazil. Ivermectin is a drug used in the chemical control of R. microplus. The utilization of ivermectin in the last 30 years has led to the selction of resistant populations of R. microplus, and thus, the loss of efficacy in the cattle tick control. To study the molecular basis of ivermectin resistance in R. microplus, two strains of ticks were used: the susceptible strain Mozo, and the resistant strain Juarez. Two complementary approaches were carried out: enzimatic assays using sinergists and gene expression studies using massive parallel sequencing of RNA or RNA-Seq. The results of this work indicate the involvement of various mechanisms of metabolic resistance. Detoxification mechanisms mediated by ABC transporters are probably the most important. Esterases, gluthathion-S-transferases and citochrome-oxidases play a less important role in detoxification. Differences in gene expression were observed between strains and among samples of the same strain exposed to different concentrations of ivermectin, confirming the result with the assays. Hence, the response of R. microplus to ivermectin is, probably, complex and poligenic

Rickettsia rickettsii é uma bactéria Gram-negativa, intra-celular obrigatória, causadora de uma grave riquetsiose em humanos, chamada no Brasil de Febre Maculosa Brasileira (FMB). Os carrapatos vetores de R. rickettsii para humanos, conhecidos até o momento no Brasil são Amblyomma cajennense e Amblyomma aureolatum. O presente estudo avaliou o tempo mínimo de parasitismo de A. aureolatum (ninfas não-alimentadas, machos adultos em jejum e pré-alimentados), infectadas por R. rickettsii, para que ocorra a transmissão da bactéria para o hospedeiro vertebrado. Para a produção de ninfas infectadas, foi mantida uma colônia de carrapatos em laboratório, infectados por R. rickettsii através de infestação em cobaias (Cavia porcellus) inoculadas por essa bactéria (Cepa Taiaçu). Para os experimentos com as ninfas de A. aureolatum, dividiram-se as cobaias em dez grupos de duas, sendo essas infestadas com dez ninfas cada uma. Após 2 horas da infestação (fixação da primeira ninfa), o primeiro grupo (G1) teve todas suas ninfas removidas. Após 4 horas de infestação, um segundo grupo (G2) de cobaias teve todas suas ninfas removidas de forma semelhante. Este procedimento foi repetido com os demais grupos, cada um em um determinado número de horas após a infestação: após 6 (G3), 8 (G4), 12 (G5), 18 (G6), 24 (G7), 36 (G8) e 48 (G9) horas. Para um último grupo (G10), as ninfas foram deixadas em parasitismo até seu desprendimento natural (cerca de 10 dias). Os experimentos realizados com carrapatos machos adultos em jejum seguiram os mesmos períodos utilizados para as ninfas, para fixação e retirada de carrapatos, assim como o número de cobaias. Nos experimentos com carrapatos machos adultos previamente alimentados - 48 horas em coelhos (Oryctolagus cuniculus), utilizaram-se os períodos de fixação e retirada de carrapatos idênticos aos experimentos anteriores, e além desses foi necessária a utilização de períodos menores de fixação de A. aureolatum, variando entre um minuto e uma hora. As cobaias foram avaliadas clinicamente todos os dias, e sacrificadas 21 dias após a infestação. Amostras de sangue foram colhidas e testadas para presença de anticorpos anti-R. rickettsii. Carrapatos retirados das cobaias de todos os grupos foram testados por PCR, a fim de se certificar que estavam infectados por R. rickettsii. De acordo com os resultados obtidos, ninfas não alimentadas de carrapatos A. aureolatum, infectados por R. rickettsii, necessitam realizar o repasto sanguíneo por um período mínimo de 12 horas, para que ocorra a transmissão da bactéria ao hospedeiro vertebrado; carrapatos adultos não alimentados, infectados por R. rickettsii, necessitam realizar o repasto sanguíneo por um período mínimo de 10 horas, para que ocorra a transmissão da bactéria ao hospedeiro vertebrado; e carrapatos adultos infectados por R. rickettsii e pré-alimentados em coelhos por 48 horas, necessitam realizar o repasto sanguíneo por um período mínimo de 10 minutos, para que ocorra a transmissão da bactéria ao hospedeiro vertebrado, utilizando-se cobaias como modelo experimental. / Rickettsia rickettsii is the causative agent of the most severe rickettsiosis, known in Brazil as Brazilian Spotted Fever (BSF). Tick vectors of R. rickettsii to humans in Brazil are Amblyomma cajennense and Amblyomma aureolatum. The present study determined the minimum feeding period required for A. aureolatum-infected unfed nymphs, unfed adults, and fed adults to transmit infective forms of R. rickettsii to naïve guinea pigs. For this purpose, we used nymphs and adults of a laboratory colony of A. aureolatum, previously shown to be 100% infected by R. rickettsii strain Taiaçu. Infected nymphs were allowed to infest 10 groups of hosts, each containing 2 guinea pigs, with each individual guinea pig receiving 10 infected. After two hours of parasitism (counting from the moment when the first infected nymph attached to the skin), this group had all infected nymphs manually removed and saved for further molecular analysis. After 4 hours of infection, guinea pigs of a second group had all their nymphs similarly removed. This procedure was repeated with the other groups, each at a given number of hours after infestation: 6, 8, 12, 18, 24, 36, and 48h. For an additional group, nymphs were allowed to complete feeding period (96-120h). In another experiment, this whole procedure was performed with adult ticks, being one infected male tick per naïve guinea pig. In a third experiment, adult male ticks were pre-fed on rabbits for 48h before allowing to feed on naive guinea pigs for 1, 3, 5, 10, 20, 40 or 60 minutes, and then for 2 to >48h. Clinical signs and rectal temperature were evaluated daily in each guinea. Blood samples were collected at 21 days after infestation, and tested for presence of anti-R. rickettsii antibodies. All removed ticks in all groups showed to contain rickettsial DNA by PCR. According to the results, unfed nymphs of R. rickettsii-infected A. aureolatum ticks must feed for a minimum of 12 hours to transmit the bacterium to the vertebrate host; unfed R. rickettsii-infected adult ticks must feed for a minimum of 10 hours for transmission to occur, while previously fed adult ticks must feed for a minimum of 10 minutes to transmit R. rickettsii to vertebrate hosts, using guinea pigs as experimental model.

Resumo:Nós investigamos a presença de formas promastigotas de Leishmania spp. pelo método de imuno-histoquímica em intestinos, ovários e glândulas salivares de carrapatos Rhipicephalus sanguineus em cães. Neste estudo, foram utilizados, 66 cães positivos e 33 negativos para Leishmania spp. pelo teste Imunoenzimático (ELISA), por exame citológico direto e por meio do método da Reação em cadeia da polimerase (PCR). Um total de 990 carrapatos foram colhidos desses 99 cães, sendo 10 por animal e estes foram dissecados, com posterior separação dos intestinos, ovários e glândulas salivares. Lâminas contendo os órgãos supramencionados foram confeccionadas para a execução da imuno-histoquímica (IHQ). Também foi efetuada a PCR em tempo real desses órgãos, bem como a quantificação da sua carga parasitária. Pela PCR em tempo real dos intestinos, ovários e glândulas salivares dos carrapatos, foram detectadas positividades de 93,94%, 46,97% e 27,27%, respectivamente. As cargas parasitárias médias no intestino foram de 9027,90 Leishmania/μL, nos ovários 411,66 Leishmania/μL e nas glândulas salivares 305,56 Leishmania/μL. Com relação as leituras das lâminas de IHQ, em 98,48% dos intestinos, 13,64% dos ovários e 7,58% das glândulas salivares houve imunomarcação positiva para Leishmania spp. Em virtude destes resultados evidenciados pela técnica de IHQ, com utilização do anticorpo primário lipofosfoglicano (LPG), nós consideramos a possibilidade da presença de formas promastigotas de Leishmania spp. em órgãos de R. sanguineus / Abstract:We investigated the presence of promastigotes of Leishmania spp. by immunohistochemical method in intestines, ovaries and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus ticks in dogs. In this study, was used, 66 dogs positive and 33 negative for Leishmania spp. by immunoenzymatic test (ELISA), direct cytological examination and by polymerase chain reaction (PCR). A total of 990 ticks were collected from these 99 dogs, 10 per animal and these were dissected, with further separation of the intestines, ovaries and salivary glands. Slides of these organs were made for the implementation of immunohistochemistry (IHC). Also the real-time PCR was performed in these organs as well as the quantification of that parasite load. For real-time PCR of the guts, ovaries and salivary glands of ticks were detected positivities 93.94%, 46.97% and 27.27%, respectively. The average parasitic loads in the intestine were 9027.90 Leishmania/μL, the ovaries 411.66 Leishmania/μL and salivary glands 305.56 Leishmania/μL. Regarding the readings of IHC slides in 98.48% of the intestines, 13.64% of the ovaries and 7.58% of the salivary glands were positive for Leishmania spp. In view of these results shown by IHC technique, using the lipofosfoglicano primary antibody (LPG), we consider the possibility of the presence of promastigotes of Leishmania spp. in R. sanguineus organs / Orientador:Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca:Jancarlo Ferreira Gomes / Banca:Suely Regina Mogami Bomfim / Banca:Gisele Fabrino Machado / Banca:Mônica Regina Vendrame Amarante / Doutor

Resumo: Rhipicephalus (Boophilus) microplus é considerado o mais importante parasito de bovinos no Brasil. Atualmente seu controle é dificultado pela exigüidade de moléculas acaricidas geradas, e pelo rápido desenvolvimento de resistência dos carrapatos. O presente trabalho teve por objetivo estudar o efeito de quatro extratos oleosos de sementes de Nim (Azadirachta indica) contento 2.000, 5.000, 9.000 e 10.000 ppm de azadiractina (AZA) quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em fêmeas ingurgitadas e larvas de R. (B.) microplus, in vitro. Para os ensaios com fêmeas ingurgitadas foi usado o Teste de Imersão de Adultas e para os ensaios com as larvas o Teste do Pacote com Larvas. Os resultados obtidos nos ensaios com fêmeas ingurgitadas mostraram que o principal efeito tóxico produzido pelos extratos, está relacionado à inibição da reprodução deste parasito. Foram verificadas reduções nas taxas de ovipostura e eclodibilidade das larvas oriundas das fêmeas tratadas com várias diluições dos extratos, em relação aos controles. Nos cálculos de Eficácia do produto (EP) para todas as soluções testadas, observou-se que a solução de 10.000ppm de AZA (N10) apresentou a maior eficácia. Os resultados das análises dos ensaios mostraram significância (p<0,01) dos dois efeitos incluídos no modelo, indicando variações significativas tanto devidas à concentração de AZA, quanto do ensaio realizado. Nas concentrações letais para as fêmeas ingurgitadas verificou-se que as CL50 não apresentaram variações, enquanto que as CL90 apresentaram grandes variações entre os extratos estudados. Nos ensaios com as larvas, não foram observadas mortalidade das larvas, indicando eficácia zero de todos os extratos testados. Os resultados dos ensaios com fêmeas ingurgitadas de R. (B.) microplus mostraram que os extratos oleosos de Nim apresentaram atividade ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Rhipicephalus (Boophilus) microplus is considered the most important cattle parasite in Brazil. Nowadays, his control is complicated by the slowness that acaricides molecules are generated, synthesized through and by the fast development of the resistance of these ticks to the market available products. This work aims to study the effect of four extracts of Neem seed oil (Azadirachta indica) containing 2.000, 5.000, 9.000 and 10.000 ppm of azadirachtin (AZA) quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) on engorged females and larvae of R. (B.) microplus, in vitro. For the tests with engorged females, the Adult Immersion Test was used and for the larvae was used the Larvae Package Test. The test results with the engorged females showed that the main toxic effect produced by the extracts is related to the inhibition of the parasite reproduction. Were observed reductions in oviposition and hatchability rates of the larvae derived from the female treated with several dilutions of extracts, compared to controls. In the Product Effectiveness (PE) for all the test solutions, the 10.000ppm (N10) solution showed the highest efficiency. The analysis results from the tests showed significance (p<0,01) of the two effects included in the model, indicating variations both due to AZA and to the test performed. In the lethal concentration to the engorged females was verified that the CL50 did not show great variation, while the CL90 showed great variation between the studied extracts. In the tests with larvae was not observed mortality of them, indicating zero effectiveness of all tested extracts. The results of the tests with R. (B.) microplus engorged females demonstrated that the extract of Neem seeds oils showed acaricide activity. Thus, it is suggested that further studies can be conducted, such as development of the methods and of excrection, and characterization of other secondary ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Lucia Galvão de Albuquerque / Coorientador: Márcia Cristina de Sena Oliveira / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Moacir Rossi Forim / Mestre

Orientador: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Elizabeth Moreira dos Santos Shmidt / Banca: Vamilton Alvares Santarém / Banca: Ricardo Velludo Gomes de Soutello / Resumo: Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar a resistência natural aos endoparasitas e ectoparasitas em bovinos da raça Crioula Lageana e meio-sangue Angus. Foram utilizados 10 machos castrados em cada grupo, desmamados (6-8 meses), mantidos juntos em pastagens cultivadas no município de Monte Castelo - SC. A cada 28 dias, fêmeas de carrapatos com tamanho acima de 4 mm foram quantificadas nos lados direito e esquerdo do corpo de cada animal. O mesmo foi feito para nódulos de Dermatobia hominis. A espessura da capa do pelame foi também avaliada a cada coleta e os animais foram classificados quanto à coloração do pelame. Foram coletadas amostras de fezes para realização de exames coproparasitológicos e de sangue para quantificação de anticorpos, bem como realizada a pesagem dos animais nessas mesmas ocasiões. Os animais foram abatidos e deles coletadas alíquotas dos conteúdos gastrintestinais para contagem e identificação dos parasitas. Os animais da raça Crioula Lageana apresentaram menores infestações por larvas de D. hominis e Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Não houve diferença entre a disposição de carrapatos e bernes conforme os lados do corpo. Os animais de pelagem escura foram mais susceptíveis aos ectoparasitas. Não houve diferença significativa na carga parasitária entre animais da raça Crioula Lageana e meio-sangue Angus. A partir dos 18 meses de idade os animais de ambas as raças mantiveram baixos valores de OPG, dados que sugerem a aquisição de imunidade contra as infecções por nematódeos devido aos constantes desafios / Abstract: This study was carried out to evaluate the natural breed resistance against nematode infections and ectoparasites infestations in Crioulo Lageano and crossbred Angus male calves. Ten weaned calves (6-8 months) were used in each group and were kept together in winter and summer pastures in Monte Castelo, Santa Catarina State. Every 28 days, female ticks more then 4 mm long were counted on the right and left side of the body of each animal, as well as the Dermatobia hominis nodules. Coat thickness also was measured at each sampling and all animals were classified according coat color. Fecal and blood samples were collected for parasitological and immunological tests. Body weight was recorded in the same occasion. All animals were slaughtered and gastrointestinal contents were collected from each individual for quantification and identification of parasites. Crioulo Lageano group was less infested by D. hominis and by Rhipicephalus (Boophilus) microplus. There were no differences in the distribution of the ticks and grubs between animal body sides. Dark-haired animal in both groups were the most susceptible. There were no significant differences in worm burden between the Crioula and crossbred Angus groups. From 18 months of age, Crioula Lageana and crossbred Angus animals kept low fecal egg counts. These data suggest that the animals acquired immunity resistance against nematode infections, due to constant challenges / Doutor