O ameloblastoma é definido como um tumor odontogênico epitelial de crescimento lento e localmente invasivo, que acomete os maxilares com alta taxa de recorrência quando não removido adequadamente. Este trabalho tem por objetivo estudar as expressões imuno-histoquímicas das proteínas -catenina, p-Akt, CD44 e vimentina em ameloblastomas. Para este estudo foram selecionados 40 casos de ameloblastoma, pertencentes aos arquivos do Serviço de Patologia da Disciplina de Patologia Bucal da FOUSP. Para a realização das reações imuno-histoquímicas foi utilizada a técnica da estreptavidina-biotina e os cortes submetidos aos anticorpos anti--catenina, anti-pAkt, anti-CD44 e anti-vimentina separadamente. O padrão de marcação celular da -catenina nos ameloblastomas foi: marcação citoplasmática, nuclear e de membrana em 33 (82,5%) casos, marcação citoplasmática e de membrana em 7 (17,5%) casos; quanto à sua localização, em 21 (52,5%) casos marcações central e periférica, em 15 (37,5%) casos observou-se marcação central, em, 4 (10%) marcação periférica. Com relação à proteína p-AKT em 36 (90%) casos o padrão de marcação celular foi citoplasmático, sendo em 4 (10%) casos evidenciado o padrão citoplasmático e nuclear. De todos os casos analisados quanto a localização da marcação do p-AKT, 23 (57,5%) casos com marcação nas áreas central e periférica e 17 (42,5%) apresentaram marcação periférica. Nenhuma das lâminas estudadas apresentou marcação exclusiva em áreas centrais da lesão. Para a proteína CD44, 27 (67,5%) casos dos ameloblastomas estudados apresentou marcações citoplasmática e de membrana, enquanto 13 (32,5%) casos mostraram apenas marcações citoplasmáticas. No que diz respeito a localização, 28 (70%) casos apresentaram marcações centrais e periféricas concomitantes, 11 (27 %) casos marcações centrais, e 1 (2,5%) caso marcação periférica. 37 (92,5%) dos casos incluídos nesta pesquisa apresentou marcação citoplasmática para vimentina, sendo 3 (7,5%) casos negativos para a proteína. Dentre os casos com positividade, 22 (55%) referiram-se à região central 14 (7,5%) para as regiões central e periférica , e 1 (2,5%) caso para a região periférica. De acordo com os resultados obtidos, acredita-se que as áreas central e periféricas do tumor possuem células responsáveis pela proliferação e invasividade do tumor, assim como a presença de células tronco responsáveis pela invasividade do tumor, também estão presentes nessas áreas. / The ameloblastoma is defined as an epithelial odontogenic tumor of slow growth, and locally invasive, affecting the jaws with a high rate of recurrence if not removed properly. This study aims to study the immunohistochemical expression of the protein -catenin, p-Akt, CD44 and vimentin in ameloblastomas. For this study we selected 40 cases of ameloblastoma, from the archives of the Pathology of Oral Pathology FOUSP. To carry out the reactions immunohistochemical technique was used streptavidin-biotin and cuts subjected to anti--catenin, anti-pAkt, anti-CD44 and antivimentin separately. The pattern of cell labeling of -catenin in ameloblastomas was: cytoplasmic, nuclear and membrane in 33 (82.5%) cases, cytoplasmic membrane in 7 (17.5%) cases, as regards its location in 21 (52.5%) cases markings central and peripheral in 15 (37.5%) cases observed central marking in, 4 (10%) peripheral marking. With respect to the p-AKT protein in 36 (90%) cases, the staining pattern was cytoplasmic cell, and 4 (10%) patients demonstrated the nuclear and cytoplasmic pattern. In all cases analyzed as marking the location of the p-AKT, 23 (57.5%) cases with marking the central and peripheral areas and 17 (42.5%) had peripheral marking. None of the studied thin sections show labeling exclusively in the central areas of the lesion. For protein CD44, 27 (67.5%) cases of ameloblastomas studied showed markings and cytoplasmic membrane, while 13 (32.5%) cases showed only cytoplasmic markings. Regarding localization, 28 (70%) presented concomitant central and peripheral markings, 11 (27%) patients central markings, and 1 (2.5%), peripheral marking case. 37 (92.5%) of the cases included in this study showed cytoplasmic staining for vimentin, and 3 (7.5%) cases negative for protein. Among the positive cases, 22 (55%) referred to the central 14 (7.5%) for the central and peripheral, and 1 (2.5%) case for the peripheral region. According to the obtained results, it is believed that central and peripheral areas of the tumor cells have responsible for the proliferation and invasiveness of the tumor, as well as the presence of stem cells responsible for tumor invasiveness, are also present in these areas.

PGC-1 beta é um co-ativador de transcrição gênica responsável pela regulação do metabolismo celular, principalmente na biogênese e função mitocondrial, disponibilidade de substrato e síntese de lipídios. Nos últimos anos, outras isoformas de PGC-1 têm sido descritos como participantes na gênese e manutenção de tumores. Portanto, nosso objetivo foi determinar se o PGC-1beta está relacionado ao aumento da proliferação celular de células de melanoma. Inicialmente, foi demonstrado que os níveis de RNAm e proteína de PGC-1beta são muito mais elevados em linhagens de células de melanoma (Tm1 e Tm5) do que na linhagem parental de melanócitos não tumorais (Melan-a) como detectado por PCR quantitativa e western blotting. A fim de descobrir uma relação causal entre a expressão de PGC-1? e crescimento celular da linhagem Tm5, células de tal linhagem foram transfectadas com um oligonucleotídeo antisense (ASO) contra PGC-1beta. As células tratados com ASO apresentaram níveis mais baixos de RNAm e proteína PGC-1beta, além de redução em sua atividade avaliada pela expressão de genes PGC-1beta dependentes. Além disso, as células transfectadas apresentaram uma taxa de proliferação inferior em comparação com células de controle Tm5. Este fenômeno também foi observado in vivo. Quando injetadas em camundongos, as células Tm5 desenvolvem-se em um tumor que atinge 1,34 ± 0,20 cm3 após nove dias. Tumores tratados com ASO após o mesmo tempo apresentaram volume tumoral de 0,75 ± 0,05 cm3. Este crescimento não estava relacionada à necrose tumoral, mas sim com a proliferação reduzida de células. Finalmente, verificamos se o mesmo fenômeno seria observado em humanos. A expressão PGC-1beta foi muito maior em amostras de melanoma do que em nevos, alterações não-malignas da pele com alto conteúdo de melanina. Por conseguinte, conclui-se que a expressão PGC-1? está aumentada no melanoma, tanto murino e humano, e que o bloqueio da sua atividade leva à diminuição da proliferação celular e crescimento tumoral / PGC-1beta is a co-activator of gene transcription primarily responsible for the regulation of cellular metabolism, mainly in mitochondrial biogenesis and function and also substrate and lipid synthesis. In recent years, other isoforms of PGC-1 have been described as participating in the genesis and maintenance of tumors. Therefore, our objective was to determine whether PGC-1beta is related to increased proliferation of melanoma cells. Initially, it was demonstrated that mRNA and protein levels of PGC-1beta are much higher in melanoma cell lines (Tm1 and TM5) than in the non-tumoral parental lineage melanocytes (melan-a) as detected by quantitative PCR and Western blotting. In order to find a causal relationship between the expression of PGC-1beta and cell growth, Tm5 lineage cells were transfected with an antisense oligonucleotide (ASO) against PGC-1beta. The cells treated with ASO had lower levels of PGC-1beta mRNA and protein, as well as reduction in its activity detected by quantitation of PGC-1beta dependent genes expression. Furthermore, transfected cells showed a lower rate of proliferation compared to Tm5control cells. This phenomenon was also observed in vivo. When injected into mice, Tm5 cells develop a tumor which reaches 1.34 ± 0.20 cm3 after nine days. Tumors treated with ASO, after the same time, presented tumor volume of 0.75 ± 0.05 cm 3. This growth was not related to tumor necrosis, but with reduced cell proliferation. Finally, we checked whether the same phenomenon would be observed in humans. The PGC-1beta expression was much higher in melanoma samples than in nevi, a non-malignant skin alteration filled with melanin. Therefore, we concluded that PGC-1beta expression in melanoma is increased, both in murine and human, and that blocking its activity leads to decreased cell proliferation and tumor growth

Os hormônios glicocorticóides (GCs) têm sido amplamente empregados como agentes antiinflamatórios e anti-tumorais. Sua ação ocorre via receptores nucleares (GR) sendo dependente da remodelação da estrutura da cromatina. As proteínas Brm e BRG1, componentes essenciais de um complexo regulador global da transcrição (SWI/SNF), por remodelamento da cromatina, exercem um papel-chave na ação de GR. Para estudar o mecanismo de ação de GCs, foram utilizadas as linhagens celulares ST1 e P7, derivadas da linhagem celular C6, de glioma de rato. P7 é insensível ao tratamento com GC, enquanto ST1 apresenta reversão fenotípica tumoral→normal, gerando um bloqueio específico na fase G1. Um anti-soro policlonal específico para Brm e BRG1, foi gerado através da inoculaçâo de coelha com a proteína hBRG1 recombinante. Este antisoro foi utilizado para análisar os níveis destas proteínas nas duas linhagens celulares, sob ação de GC. Enquanto em ST1, Brm é induzida por GC, em células P7, o nível basal de Brm é relativamente alto, mantendo-se inalterado na presença de GC. A possíbilidade de existirem mutações no gene brm de células P7, foi investigada através de amplificação do DNA, por PCR, e seqüenciamento. A superexpressão de brm e BRG1 em células P7 mostrou que clones isolados apresentavam, de um modo geral, achatamento celular, diminuição da taxa de crescimento e da eficiência de plaqueamento em substrato sólido e semi-sólido. Alguns destes clones passaram a responder ao tratamento com GC, porém não tão drasticamente como as células ST1. Co-imunonoprecipitação mostrou algumas diferenças entre os complexos SWI/SNF de células ST1 e P7. / Glucocorticoid hormones (GCs) have been used as anti-inflammatory and anti-tumor agents, acting via nuclear receptors (GR) and being dependent on remodeling of the chromatin structure. As components of the global chromatin remodeling transcription complex (SWI/SNF), Brm and BRG-1 proteins play a key role in the action of GR. In order to study the mechanisms of action of GCs, we have been using the ST1 and P7 cell lines, derived from the C6, a rat glioma cell line. P7 is insensitive to the GC treatment, while ST1 displays a complete phenotypic reversion from tumoral to normal, including a G1-specific block in the cell cycle. A Brm and BRG1-specific polyclonal antiserum was generated, in rabbit, using recombinant hBRG1 protein as antigen. This antiserum was used to analyze the levels of Brm and BRG1 in these two cell lines, under GC treatment. While Brm is induced by GC, in ST1 cells, the basal level of Brm, in P7 cells, is relatively high, remaining unchanged under GC treatment. The possibility of brm mutations occurring in the P7 cells, was analyzed by DNA sequencing. Overexpression of brm and BRG1 in P7 cells led to morphological alterations (cell flattening) and decreased colony formation in agarose suspension and in solid substrate. Some of these clones became partially responsive to GC, when compared to the ST1 cell line. Co-immunoprecipitation assays revealed some differences in the SWI/SNF complex between ST1 and P7 cells.

Objetivo:Caracterizar o padrão de homeostase (proliferação celular e apoptose) de tecido endometrial eutópico e ectópico de coelhas submetidas à indução de lesões de endometriose por modelo experimental já conhecido, quatro e oito semanas após o procedimento de implantação endometrial. Material e Métodos:Estudo experimental animal sendo utilizado 20 coelhas adultas Nova Zelândia, fêmeas e virgens, submetidas à laparotomia para indução da lesão de endometriose, através da ressecção de um corno uterino e fixação no peritônio pélvico de fragmento de 5mm. As coelhas foram divididas em dois grupos de 10 animais, sendo os animais do grupo 1, sacrificados após 4 semanas da indução da lesão endometrial ectópica e os do grupo 2 após 8 semanas. A lesão foi excisada para análise histológica juntamentecom o corno uterino contralateral, comprovando a presença de tecido endometrial glandular e estromal. Reações de imunohistoquímica foram realizadas, no tecido endometrial eutópico e ectópico, para proliferação celular através do PCNA e para apoptose através do fas, na glândula e estroma, sendo obtido o índice de proliferação celular (IPC) e de apoptose (IA) através do número de células marcadas por 1000 contadas, e o índice dehomeostase tecidual através do coeficiente entre o IPC e IA. Resultados:Observou-se maior índice de proliferação no tecido ectópico, tanto glandular como estromal, quando comparado com o endométrio eutópico, com 4 e 8 semanas após a indução da lesão. Contudo, quando as lesões ectópicas foram comparadas entre si, com 4 e 8 semanas, não foi observada diferença significativa. Quando comparamos o índice de apoptose, observamos que não houve diferença entre o tecido ectópico e o eutópico, tanto glandular como estromal nas lesões induzidas e analisadas com 4 semanas, porém no tecido glandular das lesões analisadas com 8 semanas houve diferença significativa entre a lesão ectópica e o tecido endometrialeutópico 0,0819 ± 0,0213 e 0,0995 ± 0,01336, respectivamente (p=0,04). A homeostase tecidual foi calculada e observou-se uma tendência destes tecidos a proliferação, sempre com índicesde homeostase tecidual (IPC/IA) acima de 1. Conclusão:As lesões ectópicas parecem ter uma proliferação celular maior que o endométrio eutópico levando a uma tendência ao crescimento tecidual descontrolado nas lesões de endometriose induzidas. / Objective: To characterize the pattern of tissue homeostasis (cell proliferation and apoptosis) of eutopic and ectopic endometrium in rabbitsfour and eight weeks after endometrium implantation for induction of endometriotic lesions by experimental standardized method. Material and methods: Animal experimental study with 20 female, virgins and adult New Zeland rabbits, submitted to laparotomy for endometriosis induction by resection of one uterine horn, isolation of the correspondent endometrium and fixation of a 5mm tissue segment to the pelvic peritoneum. The animals were divided in two groups of 10, group 1 was sacrificed after 4 weeks of endometriosis induction and group 2 eight weeks after the procedure. The lesion was excised for later histological analysis together with the opposite uterine horn, just to verify the presence of endometrial gland and stroma. Immunohistochemistry reactions were performed in order to study cell proliferation (by PCNA technique) and apoptosis (by fastechnique) in the eutopic and ectopic endometrium, and a Cell Proliferation Index (CPI) and an Apoptotic Index (AI) werecalculated based on these findings, considering the number of marked cellsper 1000 counted cells. The Homeostatic Tissue Index (HTI) was considered to be the relation between CPI and AI (CPI/AI). Gland and stroma were analyzed separately. Results: There was an increase in the CPI of the ectopic tissue, considering gland and stroma, after four and eight weeks of endometriosis induction when comparing to the eutopic one. However, when comparing the ectopic lesions, there was no difference between four and eight weeks of induction. Analyzing the only the AI, there was no difference between the eutopic and the ectopic endometrium with four weeks,nevertheless there was a significant difference in the glandular tissue of the lesions with eight weeks when comparing eutopic and ectopic tissues (0.0819 ± 0.0213 e 0.0995 ± 0.01336, respectively (p=0,04)). Based on HTI there was a tendency to cell proliferation on these tissues, always with and HTI (CPI/AI) higher than 1. Conclusions: Ectopic lesions seem to have a higher cell proliferation than the eutopic endometrium, tending to present an uncontrolled tissue growth in the endometriotic inducted lesions.

As junções comunicantes formadas por conexinas (Cx) ligam o citoplasma de células adjacentes e permitem a passagem de moléculas e íons entre elas. No sistema nervoso, esses canais constituem as sinapses elétricas e são fundamentais para a fisiologia glial. No desenvolvimento, as conexinas estão envolvidas nos processos de migração, proliferação e diferenciação celular. Caracterizamos a expressão gênica (RNAm) e protéica de duas importantes conexinas no cerebelo de aves: Cx36 (neuronal) e Cx43 (glial). Houve um aumento protéico e na expressão de RNAm tanto para a Cx36 quanto para a Cx43. Para a Cx43 esse aumento foi associado a sinaptogênese. A Cx36 foi observada em estágios mais precoces, na camada proliferativa cerebelar. No cerebelo pós-natal, A Cx36 foi observada nos dendritos das células de Golgi. A Cx43 encontra-se principalmente em astrócitos da camada granular e substância branca. Em conclusão, nós observamos uma padrão de expressão espaço-temporal distinto entre as duas conexinas, relacionado a papéis específicos na função de desenvolvimento cerebelares. / Gap junction channels composed of connexins (Cxs) connect the cytoplasm of adjacent cells and allow the flow of ions and molecules between them. In the nervous system, these channels constitute the electrical synapses and are fundamental for the glial physiology. In the development, Cx channels are involved in the processes of cell proliferation, migration and differentiation. We characterized the gene (mRNA) and protein expression of Cx36 (neuronal) and Cx43 (glial) in the embryonic and postnatal avian cerebellum. Cx36 and Cx43 mRNA and protein levels were upregulated during development. For Cx43 this increase was clearly associated with the synaptogenesis process. Cx36 was observed in earlier stages, localized in the cerebellar proliferative layer. In the postnatal period, Cx36 was observed in the dendrites of Golgi cells. Cx43 was localized in the astrocytes of the grey and white matter. In conclusion, we observed a distinct spatio-temporal expression pattern for Cx36 and Cx43, wich is likely related to particular roles in cerebellar development and function.

O núcleo é uma estrutura organizada e possui verdadeiras organelas nucleares. Entre elas, estão os nucléolos e os corpúsculos de Cajal (CBs). Estes compartimentos nucleares são estruturas dinâmicas, mantidos pela associação de macromoléculas envolvidas na expressão gênica que interagem entre si delimitando-as. A principal proteína encontrada nos CBs é a p-80-coilin e, portanto, o principal epítopo capaz de marcar essas estruturas. Suas funções específicas ainda tem sido alvo de estudo. Existe uma proteína em comum a ambas as estruturas, a fibrilarina que participa no processamento de rRNA. Estes corpúsculos já foram descritos na periferia dos nucléolos ou mesmo fisicamente ligados a ele. Acredita-se que os corpúsculos de Cajal participem da síntese de rRNA, maturação, transporte e associação das subunidades ribossômicas.Diante esta relação, este trabalho visa estudar a inter-relação entre estas estruturas em células normais e as respectivas linhagens de células tumorais em cultura antes e após tratamentos com actinomicina D. Esta droga se usada em baixas concentrações, bloqueia a transcrição dos genes que foram decodificados pela RNA polimerase I e II, e -amanitin, por sua vez bloqueia a transcrição de genes decodificado pela RNA polimerase II . Além disso, também visa investigar uma relação entre a proliferação das linhagens estudadas e freqüência dos corpúsculos de Cajal nas células controle e tratadas. O microscópio confocal de varredura a laser permitiu o estudo dessas estruturas em preparações imunofluorescência fornecendo uma análise tridimensional destas estruturas quando utilizados anticorpos específicos. Linhagens de células que apresentaram um crescimento mais lento foram aquelas que tinham uma maior freqüência de corpúsculos por núcleo. Por outro lado, aquelas que apresentaram um crescimento mais intenso, foram aquelas que apresentaram maior variação no número de corpúsculos por núcleo. Após o tratamento com inibidores de síntese de RNA, tanto os corpúsculos de Cajal quanto os nucléolos, apresentaram alterações morfológicas, às vezes apresentando um grande acúmulo na região dos corpúsculos ou desorganizando os nucléolos. Mudanças no tamanho e forma também puderam ser destacadas. / The nucleus is a structure that has sub-compartments which can be called nuclear organelles. Among them, may be cited the nucleoli and the Cajal bodies (CBs). These nuclear compartments are dynamic structures, maintained by association and stock of macromolecules involved in gene expression. The main protein found in the CB is a p-80-coilin and therefore the main epitope able to label these structures. Their functions are still to be clarified. There is a protein in common to the nucleolus and Cajal bodies, the fibrillarin that takes part in the processing of rRNA. The CBs can be found at the periphery of the nucleoli or even physically connected to them. It is believed that the CBs may have role in the synthesis of rRNA and maturation, transport and association of ribosome subunits. In view of this relationship between Cajal bodies and nucleoli, this work aims to study the interrelationship between these structures in normal cells and their respective tumor cell line in culture before and after treatments with actinomycin D, which in low concentrations, blocks the transcription of genes that were decoded by the RNA polymerase I and II and -amanitin, which is responsible for blocking the transcription of genes decoded by the RNA polymerase II and find out a relationship between cell proliferation and Cajal bodies frequencies in control and treated cells. The confocal microscope of laser scanning enabled the study of these structures in preparations immunofluorescent providing a three-dimensional analysis of these structures when used specific antibodies before and after treatment. Cell lines that shown low cell grow, appears to have lass CB/ nucleus in the other hand, cell lines that have fastest grow shown nuclei with more Cajal bodies frequencies and more variation in the number of Cajal/nucleus After treatment with inhibitors, both Cajal bodies as nucleoli, made quite clear morphological changes, sometimes giving large accumulation of proteins in organelles and sometimes appeared disorganized in the nucleoplasm. Changes in the size and shape were also highlighted. The tumor cell lines also showed changes compared to their normal cell type.

As propriedades da superfície do implante têm papel crítico na indução das respostas celulares necessárias para o sucesso do implante. Os objetivos deste trabalho foram investigar o efeito do bombardeamento com íons de argônio sobre a superfície de titânio comercialmente puro (TiCP) e sua influencia na interação célula-superfície. Superfícies bombardeadas e lisas foram avaliadas quanto à topografia, rugosidade e molhabilidade. Ensaios de adesão, proliferação, atividade de fosfatase alcalina (ALP) e expressão de osteocalcina (OC) foram conduzidos usando células MC3T3-E1 cultivadas sobre essas duas diferentes superfícies. Os níveis de rugosidade na superfície bombardeada e lisa foram 0,11µm and 0,027µm, respectivamente. A Microscopia eletrônica de Varredura (MEV) e Microscopia de força atômica (AFM) também revelaram rugosidade uniforme nestas amostras. A molhabilidade foi maior na superfície bombardeada. O número de células aderidas (30 e 60 min) foi significativamente maior sobre a superfície bombardeada. A proliferação celular depois de 3 e 7 dias também foi maior na superfície bombardeada. A atividade de ALP e expressão de OC não apresentaram diferença significativa entre as superfícies. Esses dados nos levam a propor que a técnica processamento a plasma em atmosfera de argônio com uso de cátodo planar é uma excelente ferramenta para obtenção de biomateriais que favoreçam a osseointegração. / Titanium surfaces were modified by argon ions bombardment aiming to evaluate the influence of the treatment on cell-surface interaction. The effects of topographic (roughness, microstructure) and physiochemical (wettability - contact angle) parameters on the morphology, adhesion, proliferation and MC3T3-E1 preosteoblasts differentiation were analyzed. No-treated surfaces (smooth) were used as a control. The levels of roughness observed in bombarded and smooth titanium surfaces were of 0.11µm and 0.027µm respectively. Scanning electron microscopy (SEM) and atomic force microscopy (AFM) analysis showed that the roughness distribution was uniform. The wettability increased in treated surfaces. The number of attached cells (30 and 60min) was significantly higher on the bombarded surface, as well as, cell proliferation after 3 and 7 days was also significantly higher on ion-bombarded surface. The ALP activity and OC expression did not show not significant differences between the surfaces. Based on the results showed one can propose that the bombardment of titanium surfaces with argon ions is an excellent procedure for obtaining biomaterials and improve the osseointegration.

Propõe-se que a angiogênese represente um importante passo no processo de adesão, implantação, invasão e crescimento das células endometriais, visto que, semelhante aos tumores metastáticos, implantes endometrióticos dependem de neovascularização para se proliferarem. Tal constatação sugere que a supressão do desenvolvimento de vasos sanguíneos por meio da inibição de fatores angiogênicos específicos pode ser uma nova oportunidade terapêutica na abordagem da endometriose. Estudos demonstram um efeito antiangiogênico do propranolol anticancerígeno em diferentes tipos de tumores. Tal achado sugere que o propranolol pode contribuir clinicamente exercendo papel sobre a inibição de neoangiogênese, e tal efeito resultar em um impacto sobre as lesões de endometriose. Foi estudado o efeito do propranolol sobre marcadores de diferenciação (Metalotioneínas MT1 e MT2), invasão (MMP9 e TIMP2), proliferação celular (PCNA) e apoptose (CASP8 - caspase 8) por coloração imunohistoquímica, e também a influência sobre a adesão, motilidade e angiogênese das lesões de endometriose por quantificação da expressão relativa (RQ) por PCR em tempo real dos genes Vegf, Cald1, Pcna, Tnf e Sparc. Foram utilizadas 30 ratas adultas Wistar, fêmeas, virgens que foram submetidas a laparotomia para indução de lesões de endometriose. As ratas foram separadas em três grupos, e sacrificados após 14 dias de tratamento de dose baixa (PB, n = 10) e dose elevada (PA, n = 10) de propranolol; e o grupo de controlo (C, n = 10) sem tratamento. As lesões foram excisadas para análise histológica com o corno uterino contralateral, com confirmação da presença de tecido glandular e estroma endometrial. No presente estudo foi observada uma redução na marcação imunohistoquímica para Metalotioneínas, com 60% de positividade no grupo controle, 10% e 11,1% para o PA, PB, respectivamente (p <0,05). Também observamos uma diminuição na expressão do gene de Pcna (C = 1,04; PA = 0,32; PB = 0,69). Em outros marcadores de imunohistoquímica e quantificação da expressão gênica nas lesões e no tecido uterino não foram observadas diferenças significativas. O tratamento com drogas antiangiogênicas como propranolol oferece novas perspectivas de abordagem terapêutica para pacientes com endometriose. / Since endometrial implants rely on neovascularization to proliferate, in a similar way to metastatic tumors, it is proposed that angiogenesis represents an important step in the process of adhesion, implantation, invasion and growth of ectopic endometrial cells. These findings suggest that the suppression of the development of blood vessels by inhibition of specific angiogenic factors may be a new therapeutic opportunity in endometriosis approach. Studies demonstrate an antiangiogenic anticancer effect of propranolol in different types of tumors. This drug can play a role in the inhibition of neoangiogenesis, which could interfere on the growth of endometriotic lesions. The effect of propranolol on markers of differentiation (Metallothionein, MT1 and MT2), invasion (MMP9 and TIMP2), cell proliferation (PCNA) and apoptosis (CASP8 - caspase 8) was evaluated by immunohistochemical staining, as well as the influence of propranolol on adhesion, motility and angiogenesis of both endometriotic lesions and endometrial tissue through quantification of relative expression (RQ) by real-time PCR of the genes Vegf, Cald1, Pcna, Tnf and Sparc. Thirty Wistar adult rats, females, virgins who underwent laparotomy for induction of endometriosis lesions were used. The rats were divided into three groups, and sacrificed after 14 days of low (BP, n = 10) and high dose treatment (AP, n = 10) of propranolol; and the control group (C, n = 10), untreated. The lesions were excised for histological analysis with the contralateral uterine horn, with confirmation of the presence of glandular tissue and endometrial stroma. In the present study we observed a reduction in immunostaining for Metallothioneins, with 60% positive in the control group, in comparison to 10% and 11.1% for PA and PB, respectively (p <0.05). Furthermore, there was a decrease in expression of Pcna gene (C = 1.04; PA = 0.32; PB = 0.69) which was statistically significant (p<0.05). However, quantification of gene expression regarding other immunohistochemical markers evaluated both in the endometriotic lesions and uterine tissue showed no statistically significant difference. In conclusion, antiangiogenic drugs like propranolol may offer new perspectives for the therapeutic approach of patients with endometriosis.

O vírus linfotrópico de células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) é um retrovírus associado a duas manifestações clínicas principais: i) mielopatia associada ao HTLV- 1/paraparesia espástica tropical (HAM/TSP) e a ii) leucemia/linfoma de células T do adulto (ATL). Devido à ausência de tratamentos específicos e efetivos, faz-se necessário o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento das doenças associadas ao HTLV-1. Nesse sentido, nosso objetivo foi realizar a triagem de compostos químicos para identificar indutores de apoptose e/ou bloqueadores da proliferação celular em linhagem celular infectada pelo HTLV-1 (MT-2), bem como drogas com efeito sobre a atividade de Tax viral. Inicialmente, foi estabelecido um ensaio baseado em células, o qual permitiu realizar a triagem de compostos pelo método de redução da resazurina. A partir de 26 derivados 1,2,3-triazólicos, oito compostos (hits) apresentaram atividade >= 70% por reduzirem de forma significativa a atividade metabólica da MT-2. Tais hits foram selecionados para as etapas de validação. O composto 61 foi o único a induzir uma parada na fase S do ciclo celular, enquanto os compostos 48, 49, 65 e 66 induziram a apoptose da linhagem MT-2. Na avaliação do efeito dos compostos sobre a atividade da proteína viral Tax, uma linhagem repórter com a expressão induzida de Tax foi estabelecida. Verificamos que apenas os compostos 48 e 49 foram capazes de reduzir a expressão de GFP, e consequentemente, interferir na atividade de Tax. Uma biblioteca de 707 compostos do NIH também foi avaliada neste estudo. A partir da triagem primária, 34 compostos (hits) com atividade >= 50% foram obtidos, enquanto na triagem secundária, apenas cinco hits foram confirmados. Entretanto, apenas dois destes foram selecionados para as futuras etapas de validação (dissulfiram e bromidrato de galantamina). Por fim, exceto os compostos 65 e 66, os demais hits não interferiram na viabilidade da linhagem hepática Huh-7. Os resultados deste estudo mostraram que os compostos 48, 49, 61, dissulfiram e bromidrato de galantamina deveriam ser explorados como novas abordagens terapêuticas das doenças associadas ao HTLV-1. / Human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) is a retrovirus associated with two main clinical manifestations: i) HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) and ii) adult T cell leukemia/lymphoma (ATL). Due to the lack of a specific and an effective therapy, the development of new drugs for treatment of HTLV-1 associated diseases is urgently required. Thus, our aim was to perform a drug screening for identification of apoptosis inducers and/or cell proliferation inhibitors in a HTLV-1-infected cell line (MT-2), as well as drugs with effect on activity of viral Tax. First, it was established a cell-based assay in order to perform a drug screening by resazurin reduction method. From 26 1,2,3-triazole derivatives, eight compounds (hits) presented >= 70% of activity, since they significantly reduced the metabolic activity of MT-2. These hits were selected for the further validation steps. Compound 61 was the only one that induced an S phase cell cycle arrest, while compounds 48, 49, 65 and 66 promoted apoptosis of MT-2. In the evaluation of the effect of these compounds on activity of Tax viral protein, an inducible-tax reporter cell line was established. We verified that only compounds 48 and 49 were able to reduce GFP expression and, then, get involved on the Tax activity. A NIH library of 707 compounds was also assessed in this study. From a primary screening, 34 compounds (hits) with activity >= 50% were obtained, while in secondary screening, five hits were confirmed, of which two of them were selected for future validation steps (disulfiram and galantamine hydrobromide). Finally, except for compounds 65 and 66, other hits did not interfere in cellular viability of hepatic cell line, Huh-7. The results of this study showed that compounds 48, 49, 61, disulfiram and galantamine hydrobromide should be explored as new therapeutic approaches of HTLV-1-associated diseases.

A proteína FBXO25 é uma E3-ligase do tipo SCF, responsável pela seletividade da ligação da Ub à proteína substrato e pelo direcionamento da proteína marcada para o barril proteassomal 26s. Sabe-se que FBXO25 é capaz de interagir e ubiquitinar a proteína Elk-1 em células HEK293T e, assim, inibir a expressão de genes importantes na regulação da proliferação celular, como C-FOS e EGR-1, após estímulo com o mitógeno PMA. Aqui mostramos que FBXO25 atua em um outro ponto da via das MAPKs, modulando os níveis de fosforilação de ERK1/2. Por meio da utilização de células nocaute para FBXO25 (FBXO25KO) foi possível observar que o tratamento com PMA promoveu aumento dos níveis de fosforilação de ERK1/2 nestas células quando comparadas com sua linhagem parental. Observouse também que o estímulo com os mitógenos PMA ou ATP levou a um aumento da proliferação celular não relacionada à modulação direta do ciclo celular nas células nocautes, sendo que estas apresentaram uma redução significativa dos seus níveis de apoptose. Tomando esses resultados em conjunto, mostramos que FBXO25 atua sobre a sinalização de MAPK por meio de redução da ativação ERK1/2 e, dessa forma, promove uma resposta secundária sobre o fenótipo de proliferação celular / The FBXO25 protein is an SCF-type E3-ligase responsible for the selectivity of Ub binding to the protein and the targeting of the labeled protein to the 26s proteasome barrel. FBXO25 has been long known to be able to interact and ubiquitinate the Elk-1 protein in HEK293T cells, thereby inducing a decrease in the expression of important genes in the regulation of cell proliferation such as CFOS and EGR-1 after stimulation with the mitogen PMA. Here we show that FBXO25 acts at another point in the MAPK pathway by modulating the ERK1/2 phosphorylation levels. We observed that the treatment with PMA rised the phosphorylated levels of ERK1/2 in knockout cells for FBXO25 (FBXO25KO) when compared to its parental lineage. Stimulation with the mitogens PMA or ATP also led to an increase in cell proliferation unrelated to a direct modulation of the cell cycle in knockout cells, with a significant weight of apoptosis levels being observed. Taking these results together, we show that FBXO25 acts on MAPK signaling by reducing ERK1/2 activation and thus promotes a secondary response on the cell proliferation phenotype.