Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissetacao Arioldo Vasconcelos Junior.pdf: 3999475 bytes, checksum: fcfb183b016528e836128fc94bae53f7 (MD5) Previous issue date: 2008-02-21 / This work characterized the specific cellular immune response of TCD4 and TCD8 lymphocytes against recombinant Mycobacterium tuberculosis at the Hospital Anuar Auad, Goiania Brazil, and constituted of two experimental groups: 1) 22 active TB patients with positive acid fast aputum, X-ray indicative of tuberculosis, smear culture positive for M. tuberculosis and HIV negative. 2) 15 sex and age matched healthy controls, tuberculin skin test and HIV negative. Venous blood was drawn and processed to obtain PBMC that were cultivated for 96 hours with the specific antigens (1mg/106 cells). TCD8 and TCD4 cells were analyzed by flow citometry for IL-10 and IFN-g production. In general, the percentage of positive TCD4 and TCD8 cells for IFN-g and IL-10 were superior among the TB patients. Additionally, TCD4+IFNg+ (5,63±2,43) and IL-10+ (5,83± 2,19) cells were significantly higher in TB patients than in healthy controls (TCD4+IFNg+ =1,75±0,71 and IL-10+ =1,47±0,90), (p<0,01). Regarding the percentage of TCD8 cells, a higher percentage of IFNg+ (4,33±1,45) and IL-10+ (4,01±1,14) among TB patients than controls (TCD8+IFNg+ = 1,49±0,42 and IL- 10+ 1,62±0,59) was observed (p<0,01). TB treatment did not alter the response to the tested antigens immediately after the treatment initiation. In conclusion, the recombinant antigens MPT-51, ESAT-6, GLcB, Ag85A were recognized by the specific immune response of active TB patients. Key words: Tuberculosis, Mycobacterium tuberculosis, Recombinant antigens, Cellular immune response. to the tested antigens immediately after the treatment initiation. In conclusion, the recombinant antigens MPT-51, ESAT-6, GLcB, Ag85A were recognized by the specific immune response of active TB patients. / Este trabalho avaliou a resposta imune celular dos linfócitos TCD4 e TCD8 de pacientes com tuberculose pulmonar ativa antes e após o tratamento, contra os antígenos recombinantes MPT-51, ESAT-6, GLcB, Ag85A e o Filtrado Protéico de Cultura (CFP) de Mycobacterium tuberculosis atendidos no Hospital de Doenças Tropicais Anuar Auad. A população de estudo, composta de 37 indivíduos, foi dividida em dois grupos experimentais. 1) 22 pacientes com tuberculose pulmonar, selecionados de acordo com idade, diagnóstico confirmado por baciloscopia (BAAR), radiografia evidente de tuberculose, HIV1/2 negativos. 2) 15 controles saudáveis negativos para prova tuberculinica (PT) e HIV1/2, pareados por faixa etária e sexo aos pacientes selecionados. Coletou-se aproximadamente 20 ml de sangue com heparina. O sangue total foi processado e cultivado por 96 horas na presença dos antígenos recombinantes e os linfócitos TCD4 e TCD8 foram analisados quanto à positividade para as citocinas IL-10 e IFN-g por citometria de fluxo. As porcentagens de linfócitos responsivos aos diversos antígenos de M. tuberculosis apresentaram-se em geral superiores aos controles. A porcentagem dos linfócitos TCD4+IFNg+ (5,63±2,43) e IL-10+ (5,83±2,19) foram maiores em pacientes com tuberculose pulmonar ativa em comparação com os linfócitos TCD4+IFNg+ (1,75±0,71) e IL-10+ (1,47±0,90) dos controles (p<0,01). Também, as porcentagens dos linfócitos TCD8+IFNg+ (4,33±1,45) e IL-10+ (4,01 ±1,14) dos pacientes foram maiores que os linfócitos TCD8+IFNg+ (1,49±0,42) e IL-10+ (1,62±0,59) dos controles (p<0,01). Não houve diferença significativa antes (5,63±2,43) e após (5,0±2,0) o tratamento nas populações celulares TCD4+ e TCD8+ positivas para IFN-g e IL-10 quando estimuladas com o painel de antígenos (p>0,05). Com estes resultados podemos considerar que todos os antígenos testados (MPT-51, ESAT-6, GLcB, Ag85A) são reconhecidos pelos linfócitos TCD4+ e TCD8+ de pacientes com tuberculose pulmonar ativa.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2017-09-26T18:09:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vera Lúcia Lima de Almeida - 2017.pdf: 4171276 bytes, checksum: 87f3a46f53c09bbba2b757e69ce2c7d8 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Rejected by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com), reason: A citação apresenta problemas : Almeida, V. L. L. Papel de citocinas e da leptina na imunopatologia da fase aguda na infecção experimental pelo trypanosoma cruzi em camundongos nocautes para IL-4 e IFN-γ. 2017. 66 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Tropical e Saúde Publica) - Universidade Federal de Goiás,Goiânia,2017. CORRETO: ALMEIDA, V. L. L. Papel de citocinas e da leptina na imunopatologia da fase aguda na infecção experimental pelo trypanosoma cruzi em camundongos nocautes para IL-4 e IFN-γ. 2017. 66 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Tropical e Saúde Publica) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2017. on 2017-09-27T11:28:48Z (GMT) / Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2017-09-27T17:46:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Vera Lúcia Lima de Almeida - 2017.pdf: 4171276 bytes, checksum: 87f3a46f53c09bbba2b757e69ce2c7d8 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-10-02T13:43:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Vera Lúcia Lima de Almeida - 2017.pdf: 4171276 bytes, checksum: 87f3a46f53c09bbba2b757e69ce2c7d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-02T13:43:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Vera Lúcia Lima de Almeida - 2017.pdf: 4171276 bytes, checksum: 87f3a46f53c09bbba2b757e69ce2c7d8 (MD5) Previous issue date: 2017-04-07 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Chagas disease is a parasitic disease caused by the Protozoan Trypanosoma cruzi. Approximately 30% of infected individuals develop cardiac manifestations. Among the factors involved in this evolution highlights the role of inflammation. Evidence points to an important relationship of adipokines with the cellular immune response and inflammation. The present study is objective is to evaluate the role of cytokines and leptin on immunopathology of acute phase of experimental infection by T. cruzi. For this we used C57Bl/6 WT mice, C57Bl/6 WT KO IFN-γ, Balb-c WT and Balb-c KO IL-4 100 infected with of Colombian strain forms of T. cruzi and non-infected controls was analyzed in the hearts the presence of T. cruzi, fibrosis, inflammatory infiltrate, production of cytokines in situ and serum levels of leptin, TNF-α and IL-10. Noted greater tissue parasitism in C57Bl/6 animals KO IFN-γ, but no difference in the intensity of the inflammatory infiltrate and percentage of fibrosis. Regarding cytokines C57Bl/6 mice IFN-γ KO infected showed increased TNF-α in situ, as well as the Balbc KO IL-4. Despite greater expression in situ, systemically animals Balb-c KO IL-4 have shown to be good producers of TNF-α and IL-10 as well as the C57Bl/6 KO IFNγ. However, these last have shown to be good producers of serum leptin, as well as the Balb-c. Thus, our results indicate that in the absence of IFN-γ mice infected can' not control the tissue parasitism. However, feature increased in situ of TNF-α and serum leptin as a compensatory mechanism of the Th1 response deficiency. / A doença de Chagas é uma doença parasitária causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Aproximadamente 30% dos indivíduos infectados desenvolvem a manifestação cardíaca. Dentre os fatores envolvidos nesta evolução destaca-se o papel da inflamação. Evidências apontam uma importante relação das adipocitocinas com a resposta imune celular e inflamação. O presente estudo objetivou avaliar o papel de citocinas e da leptina na imunopatologia da fase aguda da infecção experimental pelo T. cruzi. Para isso foram utilizados camundongos C57Bl/6 WT, C57Bl/6 KO IFN-γ, Balb-c WT e Balb-c KO IL-4 infectados com 100 formas tripomastigotas de cepa Colombiana de T. cruzi e controles não infectados. Foi analisado nos corações a presença ninhos de T. cruzi, infiltrado inflamatório, fibrose, produção de citocinas in situ e níveis séricos de leptina, TNF-α e IL-10. Foi observado maior parasitismo tissular nos animais C57Bl/6 KO IFN-γ, mas sem diferença na intensidade do infiltrado inflamatório e percentual de fibrose. Em relação as citocinas os camundongos C57Bl/6 KO IFN-γ infectados apresentaram aumento de TNF-α in situ, assim como os Balb-c KO IL-4. Apesar de maior expressão in situ, sistemicamente os animais Balb-c KO IL-4 não mostram ser bons produtores de TNF-α e IL-10 assim como os C57Bl/6 KO IFN-γ, entretanto esses últimos mostraram ser bons produtores de leptina sérica, assim como os Balb-c. Dessa forma, nossos resultados apontam que na ausência de IFN-γ os camundongos infectados não conseguem controlar o parasitismo tissular. Entretanto apresentam aumento in situ de TNF-α e leptina sérica como mecanismo compensatório da deficiência de resposta Th1, representado pela ausência de IFN-γ.

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecciosa, crônica, não contagiosa, causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania. A interação entre a espécie de Leishmania e os mecanismos da resposta imune do hospedeiro resulta em um amplo espectro de manifestações clínicas, histopatológicas e imunopatológicas na infecção humana. No Brasil, esta endemia representa um sério problema de saúde pública, sendo o estado do Maranhão responsável por 13% da casuística nacional. O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil imunopatológico de lesões cutâneas de 22 pacientes com LTA, causada por Leishmania (Viannia) sp, oriundos do estado do Maranhão. A reação de imunoistoquímica em biópsias de pele foi realizada empregando os anticorpos monoclonais anti-humano CD68, CD1a, fator XIIIa, CD4, CD8, IL-10 e IFN-g e os anticorpos policlonais anti-Lisozima, Foxp3 e TGF-b. A análise histológica das lesões demonstrou a presença de intenso infiltrado inflamatório na derme composto de macrófagos, linfócitos e plasmócitos com formação de granuloma na maioria dos casos. Formas sugestivas de Leishmania foram observadas em 90,9% dos casos examinados. A análise imunoistoquímica mostrou densidade superior de macrófagos ativados (4824,0 células/mm²) quando comparados aos não ativados 3458,9 células/mm²). Foi detectada densidade de células de Langerhans (CD1a+) de 310,4 células/mm² na epiderme e células dendríticas dérmicas (fator XIIIa+) de 633,6 células/mm² na derme. Foi verificada ainda, predominância de linfócitos T CD8+ (2374,1células/mm²) em relação a T CD4+ (1267,6 células/mm²). A densidade de células Treg Foxp3+ foi de 301,3 células/mm². A análise de correlação mostrou correlação positiva entre células TGF-b+ e T CD8+ e fator XIIIa+; e uma correlação negativa entre a densidade de células IFN-g+ e TGF-b+. As lesões de pacientes infectados com L. (Viannia) sp, apresentaram maior densidade de células Treg Foxp3+, e IL-10+ e IFN-g+ quando comparadas a de pacientes infectados por Leishmania (Viannia) braziliensis. A densidade de células TGF-b+ mostrou-se semelhante nos dois grupos de pacientes. A avaliação dos marcadores de acordo com o tempo de evolução da doença, não mostrou diferenças entre as densidades de células imunomarcadas. Esses dados indicam que embora exista um perfil imunopatológico associado ao controle da infecção, a presença de uma resposta regulatória no sítio da lesão pode estar relacionada à persistência parasitária. / American tegumentary leishmaniasis (ATL) is a chronic, non contagious, infectious disease caused by different protozoan parasite species of the genus Leishmania. The interaction between Leishmania species and host response results in a wide spectrum of clinical, histopathological and immunopathological presentations in humans infection. In Brazil, this endemic disease is a serious public health problem and Maranhão State is responsible for 13% of Brazilian cases. The aim of this study was to characterize the immunopathology of lesions from 22 biopsies of patients with ATL, caused by Leishmania (Viannia) sp, from Maranhão State. Immunohistochemistry was carried out by incubating skin biopsies with monoclonal mouse anti- human CD68, CD1a, XIIIa factor, CD4, CD8, IL-10 and IFN-g and polyclonal rabbit\'s anti- human lysozyme, Foxp3 and TGF-b. Analysis of skin biopsies demonstrated a dense inflammatory infiltrate in the dermis, characterized by the presence of mononuclear cells, mainly lymphocytes, macrophages, plasma cells and granulomas in most samples. Suggestive forms of amastigotes were detected in 90.9% samples observed. Immunohistochemistry showed high levels of activated macrophages (4824.0 cell/mm²) when compared to inactive macrophages (3458.9 cells/mm²). In the epidermis, the densities of Langerhans Cells (CD1a+) were 310.4 cells/mm², while in the dermis the densities of dermal dendritic cells (factor XIIIa+) were 633,6 cells/mm². High density of CD8 T+ lymphocytes (2374.1 cell/mm²) has been found compared to CD4+ T lymphocytes (1267.6 cell/mm²). The cellular density of Treg (Foxp3+) was 301 cells/mm². Among cell markers there were positive correlations between TGF-b-producing cells and CD8+ T lymphocytes and between TGF-b-producing cells and dendritic dermal cells, as well as a negative correlation between TGF-b-producing cells and IFN-g-producing cells. Patients infected with L. (Viannia) sp. presented increased densities of Treg cells and IL-10 and IFN-g- producing cells compared to Leishmania (Viannia) braziliensis infected patients. The density TGF-b+ producing cells was similar in both groups of patients. Evaluation of Immunological markers according time of infection showed no differences in the densities of immunostain cell. Results suggest that the profile of immunopathological response is associated to the control of infection, although the presence of a regulatory response at the site of infection can be responsible to the persistence of parasite in skin.

As células dendríticas (DCs) são células do sistema imune inato que são especializadas na instrução de repostas imunes adaptativas No baço murinho, as DCs convencionais podem ser classificadas em CD8&#945;+ DEC205+ e CD8&#945;- DCIR2+. Anticorpos monoclonais (mAbs) &#945;DEC205 e &#945;DCIR2 (33D1) conjugados a proteínas antigênicas e são utilizados como estratégia de direcionamento de antígenos para as DCs CD8&#945;+ e CD8&#945;-. Foi utilizado o antígeno quimérico MSP119PADRE conjugado aos mAbs &#945;DEC205 e &#945;DCIR2 e o Poly I:C como adjuvante. A montagem da resposta celular e humoral foi analisada 3, 4, 5 e 6 dias após primeira e a segunda As DCS CD8&#945;- são especializadas na instrução de células TFH. Porém, num segundo dose de mAbs há a instrução de uma resposta Th2/Th17. E, o direcionamento de antígenos para DCS CD8&#945;+ induz uma resposta Th1, indicando que essas células são especializadas na instrução desse perfil de resposta auxiliar. Apesar disso, na segunda imunização há a diferenciação de células TFH. / As dendritic cells (DC) are innate immune cells that are specialized to prime adaptive immune cells. In the murine spleen, conventional DCs can be classified into CD8&#945;+ DEC205+ and CD8&#945;-DCIR2+. Monoclonal antibodies (mAbs) &#945;DEC205 and &#945;DCIR2 (33D1) conjugated to antigenic proteins have benn used as antigen targeting strategy to CD8&#945;+ and CD8&#945;- DCs. MSP119PADRE chimeric antigen conjugated to mAbs &#945;DEC205 and &#945;DCIR2 and Poly I: C as adjuvant was used. The assembly of the cellular and humoral response was analyzed 3, 4, 5 and 6 days after the first and second doses of imnunization. DCs CD8&#945;- are specialized in the instruction of TFH cells. However, there is an a promotion of Th1 response by CD8&#945;+, indicating that these cells are specialized in the instruction of the helper response profile. Nevertheless, in the second immunization there is a differentiation of TFH cells.

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecciosa, crônica, não contagiosa, causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania. A interação entre a espécie de Leishmania e os mecanismos da resposta imune do hospedeiro resulta em um amplo espectro de manifestações clínicas, histopatológicas e imunopatológicas na infecção humana. No Brasil, esta endemia representa um sério problema de saúde pública, sendo o estado do Maranhão responsável por 13% da casuística nacional. O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil imunopatológico de lesões cutâneas de 22 pacientes com LTA, causada por Leishmania (Viannia) sp, oriundos do estado do Maranhão. A reação de imunoistoquímica em biópsias de pele foi realizada empregando os anticorpos monoclonais anti-humano CD68, CD1a, fator XIIIa, CD4, CD8, IL-10 e IFN-g e os anticorpos policlonais anti-Lisozima, Foxp3 e TGF-b. A análise histológica das lesões demonstrou a presença de intenso infiltrado inflamatório na derme composto de macrófagos, linfócitos e plasmócitos com formação de granuloma na maioria dos casos. Formas sugestivas de Leishmania foram observadas em 90,9% dos casos examinados. A análise imunoistoquímica mostrou densidade superior de macrófagos ativados (4824,0 células/mm²) quando comparados aos não ativados 3458,9 células/mm²). Foi detectada densidade de células de Langerhans (CD1a+) de 310,4 células/mm² na epiderme e células dendríticas dérmicas (fator XIIIa+) de 633,6 células/mm² na derme. Foi verificada ainda, predominância de linfócitos T CD8+ (2374,1células/mm²) em relação a T CD4+ (1267,6 células/mm²). A densidade de células Treg Foxp3+ foi de 301,3 células/mm². A análise de correlação mostrou correlação positiva entre células TGF-b+ e T CD8+ e fator XIIIa+; e uma correlação negativa entre a densidade de células IFN-g+ e TGF-b+. As lesões de pacientes infectados com L. (Viannia) sp, apresentaram maior densidade de células Treg Foxp3+, e IL-10+ e IFN-g+ quando comparadas a de pacientes infectados por Leishmania (Viannia) braziliensis. A densidade de células TGF-b+ mostrou-se semelhante nos dois grupos de pacientes. A avaliação dos marcadores de acordo com o tempo de evolução da doença, não mostrou diferenças entre as densidades de células imunomarcadas. Esses dados indicam que embora exista um perfil imunopatológico associado ao controle da infecção, a presença de uma resposta regulatória no sítio da lesão pode estar relacionada à persistência parasitária. / American tegumentary leishmaniasis (ATL) is a chronic, non contagious, infectious disease caused by different protozoan parasite species of the genus Leishmania. The interaction between Leishmania species and host response results in a wide spectrum of clinical, histopathological and immunopathological presentations in humans infection. In Brazil, this endemic disease is a serious public health problem and Maranhão State is responsible for 13% of Brazilian cases. The aim of this study was to characterize the immunopathology of lesions from 22 biopsies of patients with ATL, caused by Leishmania (Viannia) sp, from Maranhão State. Immunohistochemistry was carried out by incubating skin biopsies with monoclonal mouse anti- human CD68, CD1a, XIIIa factor, CD4, CD8, IL-10 and IFN-g and polyclonal rabbit\'s anti- human lysozyme, Foxp3 and TGF-b. Analysis of skin biopsies demonstrated a dense inflammatory infiltrate in the dermis, characterized by the presence of mononuclear cells, mainly lymphocytes, macrophages, plasma cells and granulomas in most samples. Suggestive forms of amastigotes were detected in 90.9% samples observed. Immunohistochemistry showed high levels of activated macrophages (4824.0 cell/mm²) when compared to inactive macrophages (3458.9 cells/mm²). In the epidermis, the densities of Langerhans Cells (CD1a+) were 310.4 cells/mm², while in the dermis the densities of dermal dendritic cells (factor XIIIa+) were 633,6 cells/mm². High density of CD8 T+ lymphocytes (2374.1 cell/mm²) has been found compared to CD4+ T lymphocytes (1267.6 cell/mm²). The cellular density of Treg (Foxp3+) was 301 cells/mm². Among cell markers there were positive correlations between TGF-b-producing cells and CD8+ T lymphocytes and between TGF-b-producing cells and dendritic dermal cells, as well as a negative correlation between TGF-b-producing cells and IFN-g-producing cells. Patients infected with L. (Viannia) sp. presented increased densities of Treg cells and IL-10 and IFN-g- producing cells compared to Leishmania (Viannia) braziliensis infected patients. The density TGF-b+ producing cells was similar in both groups of patients. Evaluation of Immunological markers according time of infection showed no differences in the densities of immunostain cell. Results suggest that the profile of immunopathological response is associated to the control of infection, although the presence of a regulatory response at the site of infection can be responsible to the persistence of parasite in skin.

Este estudo avaliou a imunidade humoral e celular em cães naturalmente infectados com L. (L.) chagasi correlacionando com a transmissibilidade para o vetor. Soros e biópsias de baço, linfonodo e pele foram coletados de 120 cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses do município de Araçatuba, São Paulo, Brasil. Os soros foram processados por ELISA para detecção de IgG, IgG1, IgG2 e IgE; e as biópsias foram processadas por técnicas histológicas usuais coradas pelo HE e imunoistoquímica para a detecção de parasito, macrófago e células T CD3. De acordo com os sinais clínicos, 65/120 (54%) cães foram classificados como sintomáticos e 55/120 (46%) como assintomáticos. O diagnóstico parasitológico foi confirmado em 71% dos sintomáticos e em 40% dos assintomáticos. A correlação dos sinais clínicos com parasitismo mostrou que a carga parasitária estava diretamente associada com cães sintomáticos (p<0.05). Em relação aos anticorpos específicos anti-L.(L.)chagasi, cães de área endêmica com diagnóstico parasitológico positivo mostraram maiores níveis de IgG total comparado com ambos os controles (p<0.05), sem diferença entre cães sintomáticos e assintomáticos. IgG1 esteve presente em baixos níveis e foi mais intensa no grupo sintomático parasito-positivo (p<0.05). Níveis mais elevados foram observados para IgG2 em cães de área endêmica (p<0.05), mas sem correlação com o parasitismo e sinais clínicos. IgE também esteve presente em baixos níveis, mas mostrou diferenças entre cães de área endêmica e cães de área não endêmica; e cães com diagnóstico parasitológico positivo mostrou níveis mais elevados que cães com diagnóstico parasitológico negativo (p<0.05). Histopatologicamente, linfonodos mostraram hiperplasia e hipertrofia de macrófagos na área medular e em muitos casos linfadenite granulomatosa. Na polpa branca do baço, hiperplasia folicular foi observada; e a polpa vermelha mostrou granulomas. As lesões de pele foram caracterizadas por infiltrado inflamatório crônico na derme formado por macrófagos, linfócitos e plasmócitos; variando de discreto a intenso, assim como de focal a difuso. Foi evidente a presença de granulomas epitelióides na pele de alguns animais. Imunoistoquímica mostrou presença de células marcadas pelo anticorpo anti-macrófago e anti-CD3 em 100% dos baços e linfonodos variando de intensidade entre discreto e intenso. Na pele, macrófagos foram positivos em 90% e células CD3 em 39% dos casos. Houve associação direta entre baixa expressão de células CD3 e alto parasitismo na pele. Animais assintomáticos mostraram baixa expressão de macrófagos junto com baixo parasitismo na pele. Em relação ao xenodiagnóstico, no 4o dia depois da alimentação, as fêmeas dos vetores foram dissecadas e examinadas para observação de parasitos no intestino. Formas promastigotas foram observadas em 27% das fêmeas que se alimentaram em cães sintomáticos e em 42% das fêmeas que se alimentaram em cães assintomáticos. A técnica da PCR foi também utilizada para avaliar as fêmeas positivas depois do xenodiagnóstico. DNA de Leishmania foi detectado em 24% das fêmeas que se alimentaram em cães sintomáticos e em 34% das fêmeas que se alimentaram em cães assintomáticos. Os dados mostraram que a imunidade humoral e celular não teve correlação direta com as formas clínicas de leishmaniose canina. A alta porcentagem de vetores infectados na alimentação em cães assintomáticos mostra a importância destes animais na transmissibilidade para o vetor. / These studies evaluate humoral and cellular immunity in dogs naturally infected with L. (L.) chagasi correlating to the transmissibility to the vector. Serum and biopsy from spleen, lymph node and skin were collected from 120 dogs referred to the Center of Zoonosis Control of Araçatuba city, São Paulo, Brazil. The sera were processed by ELISA for IgG, IgG1, IgG2 and IgE detection; and the biopsies were processed usual histological techniques stained by HE and immunohistochemistry for parasite, macrophage and T CD3 cells detection. According to the clinical signs, 65/120 (54%) dogs were classified as symptomatic and 55/120 (46%) as asymptomatic. Parasitological diagnosis was confirmed in 71% of symptomatic and in 40% of asymptomatic dogs. The correlation of clinical signs and parasitism showed that parasite burden was directly associated with symptomatic dogs (p<0.05). Concerning to L.(L.)chagasi-specific antibodies, dogs from the endemic area with positive parasitological diagnosis showed high levels of total IgG compared to both controls (p<0.05), without difference between symptomatic and asymptomatic dogs. IgG1 was present at low levels and was more intense in the parasite-positive symptomatic group (p<0.05). More elevated levels were observed for IgG2 in dogs from endemic area (p<0.05), but with no correlation to parasitism and clinical signs. IgE was also present at low levels, but showed differences between dogs from non-endemic and endemic areas; and dogs with positive parasitological diagnosis showed higher levels than dogs with negative parasitological diagnosis (p<0.05). Histopathologically, lymph nodes showed macrophage hyperplasia and hypertrophy in the medullary area and in many cases granulomatous lymphadenitis. In the white pulp of the spleen, follicular hyperplasia was observed; and the red pulp showed granulomas. The skin lesions were characterized by dermal chronic inflammatory infiltrate formed by macrophages, lymphocytes and plasma cells; it varied between descreet to intense, as well as focal to diffuse. The epithelioid granulomas were evident in the skin of some animals. Immunohistochemistry showed presence of labeled cells by anti-macrophage and anti-CD3+ antibodies in 100% of spleen and lymph nodes varying the intensity between mild to intense. Macrophage was positive in 90% of the skin and CD3 cells in 39%. There was a direct association between lower CD3 cells expression and higher parasite burden in the skin. Asymptomatic animals showed lower macrophage expression together with lower parasitism in the skin. Concerning to the xenodiagnosis, on the 4th day after the blood meal, female flies were dissected and examined for visible parasites in the gut. Promastigotes forms were observed in 27% of female which fed in symptomatic dogs and in 42% of female which fed in asymptomatic dogs. PCR technique was also used to evaluate the positive females after the xenodiagnosis. Leishmania DNA was detected in 24% of female which fed in symptomatic dogs and in 34% of female which fed in asymptomatic dogs. The data showed that the humoral and cellular immune response not has direct correlation to the clinical form of canine leishmaniasis. The high percentage of sand flies female infected by feeding in the asymptomatic dogs show the importance these animals on the parasite transmissibility to the vector.

Este estudo avaliou a imunidade humoral e celular em cães naturalmente infectados com L. (L.) chagasi correlacionando com a transmissibilidade para o vetor. Soros e biópsias de baço, linfonodo e pele foram coletados de 120 cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses do município de Araçatuba, São Paulo, Brasil. Os soros foram processados por ELISA para detecção de IgG, IgG1, IgG2 e IgE; e as biópsias foram processadas por técnicas histológicas usuais coradas pelo HE e imunoistoquímica para a detecção de parasito, macrófago e células T CD3. De acordo com os sinais clínicos, 65/120 (54%) cães foram classificados como sintomáticos e 55/120 (46%) como assintomáticos. O diagnóstico parasitológico foi confirmado em 71% dos sintomáticos e em 40% dos assintomáticos. A correlação dos sinais clínicos com parasitismo mostrou que a carga parasitária estava diretamente associada com cães sintomáticos (p<0.05). Em relação aos anticorpos específicos anti-L.(L.)chagasi, cães de área endêmica com diagnóstico parasitológico positivo mostraram maiores níveis de IgG total comparado com ambos os controles (p<0.05), sem diferença entre cães sintomáticos e assintomáticos. IgG1 esteve presente em baixos níveis e foi mais intensa no grupo sintomático parasito-positivo (p<0.05). Níveis mais elevados foram observados para IgG2 em cães de área endêmica (p<0.05), mas sem correlação com o parasitismo e sinais clínicos. IgE também esteve presente em baixos níveis, mas mostrou diferenças entre cães de área endêmica e cães de área não endêmica; e cães com diagnóstico parasitológico positivo mostrou níveis mais elevados que cães com diagnóstico parasitológico negativo (p<0.05). Histopatologicamente, linfonodos mostraram hiperplasia e hipertrofia de macrófagos na área medular e em muitos casos linfadenite granulomatosa. Na polpa branca do baço, hiperplasia folicular foi observada; e a polpa vermelha mostrou granulomas. As lesões de pele foram caracterizadas por infiltrado inflamatório crônico na derme formado por macrófagos, linfócitos e plasmócitos; variando de discreto a intenso, assim como de focal a difuso. Foi evidente a presença de granulomas epitelióides na pele de alguns animais. Imunoistoquímica mostrou presença de células marcadas pelo anticorpo anti-macrófago e anti-CD3 em 100% dos baços e linfonodos variando de intensidade entre discreto e intenso. Na pele, macrófagos foram positivos em 90% e células CD3 em 39% dos casos. Houve associação direta entre baixa expressão de células CD3 e alto parasitismo na pele. Animais assintomáticos mostraram baixa expressão de macrófagos junto com baixo parasitismo na pele. Em relação ao xenodiagnóstico, no 4o dia depois da alimentação, as fêmeas dos vetores foram dissecadas e examinadas para observação de parasitos no intestino. Formas promastigotas foram observadas em 27% das fêmeas que se alimentaram em cães sintomáticos e em 42% das fêmeas que se alimentaram em cães assintomáticos. A técnica da PCR foi também utilizada para avaliar as fêmeas positivas depois do xenodiagnóstico. DNA de Leishmania foi detectado em 24% das fêmeas que se alimentaram em cães sintomáticos e em 34% das fêmeas que se alimentaram em cães assintomáticos. Os dados mostraram que a imunidade humoral e celular não teve correlação direta com as formas clínicas de leishmaniose canina. A alta porcentagem de vetores infectados na alimentação em cães assintomáticos mostra a importância destes animais na transmissibilidade para o vetor. / These studies evaluate humoral and cellular immunity in dogs naturally infected with L. (L.) chagasi correlating to the transmissibility to the vector. Serum and biopsy from spleen, lymph node and skin were collected from 120 dogs referred to the Center of Zoonosis Control of Araçatuba city, São Paulo, Brazil. The sera were processed by ELISA for IgG, IgG1, IgG2 and IgE detection; and the biopsies were processed usual histological techniques stained by HE and immunohistochemistry for parasite, macrophage and T CD3 cells detection. According to the clinical signs, 65/120 (54%) dogs were classified as symptomatic and 55/120 (46%) as asymptomatic. Parasitological diagnosis was confirmed in 71% of symptomatic and in 40% of asymptomatic dogs. The correlation of clinical signs and parasitism showed that parasite burden was directly associated with symptomatic dogs (p<0.05). Concerning to L.(L.)chagasi-specific antibodies, dogs from the endemic area with positive parasitological diagnosis showed high levels of total IgG compared to both controls (p<0.05), without difference between symptomatic and asymptomatic dogs. IgG1 was present at low levels and was more intense in the parasite-positive symptomatic group (p<0.05). More elevated levels were observed for IgG2 in dogs from endemic area (p<0.05), but with no correlation to parasitism and clinical signs. IgE was also present at low levels, but showed differences between dogs from non-endemic and endemic areas; and dogs with positive parasitological diagnosis showed higher levels than dogs with negative parasitological diagnosis (p<0.05). Histopathologically, lymph nodes showed macrophage hyperplasia and hypertrophy in the medullary area and in many cases granulomatous lymphadenitis. In the white pulp of the spleen, follicular hyperplasia was observed; and the red pulp showed granulomas. The skin lesions were characterized by dermal chronic inflammatory infiltrate formed by macrophages, lymphocytes and plasma cells; it varied between descreet to intense, as well as focal to diffuse. The epithelioid granulomas were evident in the skin of some animals. Immunohistochemistry showed presence of labeled cells by anti-macrophage and anti-CD3+ antibodies in 100% of spleen and lymph nodes varying the intensity between mild to intense. Macrophage was positive in 90% of the skin and CD3 cells in 39%. There was a direct association between lower CD3 cells expression and higher parasite burden in the skin. Asymptomatic animals showed lower macrophage expression together with lower parasitism in the skin. Concerning to the xenodiagnosis, on the 4th day after the blood meal, female flies were dissected and examined for visible parasites in the gut. Promastigotes forms were observed in 27% of female which fed in symptomatic dogs and in 42% of female which fed in asymptomatic dogs. PCR technique was also used to evaluate the positive females after the xenodiagnosis. Leishmania DNA was detected in 24% of female which fed in symptomatic dogs and in 34% of female which fed in asymptomatic dogs. The data showed that the humoral and cellular immune response not has direct correlation to the clinical form of canine leishmaniasis. The high percentage of sand flies female infected by feeding in the asymptomatic dogs show the importance these animals on the parasite transmissibility to the vector.

L’interféron-α pegylé en combinaison avec la ribavirin est le seul traitement approuvé pour le traitement de l’infection au virus de l’hépatite C (VHC). L’efficacité est de 50-75%, la thérapie est coûteuse et induit beaucoup d’effets secondaires. Il est impératif d’avoir une meilleure compréhension de la pathogenèse du VHC afin de développer des traitements plus efficaces ou un vaccin. À cette fin, notre approche est de caractériser la réponse immunitaire cellulaire induite par ARFP, un antigène nouveau et conservé chez le VHC, et de cartographier les épitopes de la réponse immunitaire cellulaire d’un patient infecté au génotype 3a ayant résolu spontanément. Le génotype 3a, étant prévalant chez les utilisateurs de drogues intraveineuses (IDUs) constitue 60% des nouvelles infections. Peu d’épitopes furent identifiés auparavant pour ce génotype, ce qui rend l’étude de la réponse immunitaire difficile chez cette population. Dans cette étude, pour la réponse immunitaire cellulaire dirigée contre ARFP, nous n’avons pas observé de différence significative entre les patients ayant résolu spontanément comparativement avec ceux ayant développé une infection persistante. Ceci suggère fortement que ARFP ne joue pas un rôle majeur lors de la résolution de l’infection aigue au VHC. Pour la caractérisation de la réponse immunitaire cellulaire chez un des patients infectés au génotype 3a, nous avons identifié et caractérisé 5 épitopes spécifiquement reconnus par des lymphocytes T, CD3+, CD4+ et CD8- : E2504-521, NS31064-1081, NS4b1759-1776, NS5a2074-2091, NS5b2421-2436. Nous avons comparé avec ceux connus pour le génotype 1a. Nous avons identifié 4 nouveaux épitopes. Enfin, l’épitope NS4b1759-1776, identifié auparavant, pourrait s’avérer être un candidat intéressant dans la mise au point d’un vaccin à base de peptides immunogéniques contre le VHC. / Interferon-α combined with ribavirin is the only approved treatment of hepatitis c virus (HCV) infection. The efficiency is between 50-75%, the therapy is expensive and has numerous side-effects. It is imperative to have a better understanding of HCV pathogenesis to develop better treatments or a vaccine. To this end, our approach is to characterize the immune cellular response against ARFP, a newly identified and conserved antigen of HCV; and to characterize and fine map cellular immune response of a patient infected with genotype 3a that spontanously resolved. Genotype 3a is most prevelant in intravenous drug users (IDUs) where nearly 60% of all new HCV infections happen. Very few epitopes are known for genotype 3a which makes it difficult to study HCV-specific immune responses in this population. In this study, for ARFP specific cellular responses, we observed no significant difference between patients that spontanously resolved compared to those who developped persistent infection. This strongly suggests that ARFP does not play a major role in acute HCV infection resolution. For the charaterization of immune cellular response developped against genotype 3a, we identified and characterized 5 epitopes recognized by lymphocytes T, CD3+, CD4+, CD8-: E2504-521, NS31064-1081, NS4B1759-1776, NS5A2074-2091, NS5B2421-2436. We compared them with epitopes known for genotype 1a. We have identified 4 novel epitopes. Finally, NS4B1759-1776, previously identified, could be a good candidate in the developement of a peptide based vaccine against HCV.

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Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dis Bruna D de S Silva 2010.pdf: 942780 bytes, checksum: 696823192ee17b463193f279bf7aed38 (MD5) Previous issue date: 2010-11-19 / Tuberculosis (TB) is a disease that afflicts mankind catastrophically, causing millions of new cases and deaths worldwide. It is estimated that one third of the world population is infected with the TB bacillus, Mycobacterium tuberculosis. Currently, the major challenges in TB control are the iden-tification of latent individuals, who are have increased chances to become ill, and the effective treat-ment of individuals with active disease. Understanding the immunology of this disease is of crucial importance for the development of new diagnostic tests and vaccines to combat this disease effec-tively. In order to elucidate the cellular immune response in tuberculosis, we evaluated the subpopu-lations of TCD4+ Th1, Th17 and T regulatory cells of patients with active pulmonary tuberculosis and rheumatoid arthritis against the recombinant antigen GLcB of M. tuberculosis. Peripheral blood mononuclear cells were obtained from twenty one patients with active pulmonary tuberculosis, re-cruited at Anuar Auad Hospital, twenty five patients with rheumatoid arthritis (RA), eleven individu-als with latent tuberculosis (TST+) and twelve healthy subjects (TST-). These cells were cultured, stimulated with antigen recombinant GLcB and Th1, Th17 and T regulatory subsets cells were eva-luated by flow cytometry. It was found that patients with active pulmonary tuberculosis have a high-er response of Th1 (8.2&#61617;1.9), Th17 (3.92.1) and T regulatory (2.81.2) antigen-specific recombi-nant GLcB when compared with individuals with latent infection (Th17=2.81.3; Treg=3.11.2) and healthy controls (Th17=1.40.8; Treg=0.60.3). Individuals with latent infection have only a signifi-cant percentage of Th1 cells specific (4.61.1) to GLcB when compared to controls (1.71.0). RA Patients that developed tuberculosis had immune response similar to those with only TB. Given these results, we conclude that the Th1 cells, Th17 and regulatory T cells are directly involved in active disease. / A Tuberculose (TB) é uma doença que atinge a humanidade de forma catastrófica, causando milhões de casos novos e de mortes no mundo todo. Estima-se que um terço da população mundial esteja infectada com o bacilo da TB, Mycobacterium tuberculosis. Atualmente, os principais desafios no controle da TB são: a identificação dos indivíduos latentes, que são os principais indivíduos com potencial desenvolvimento da doença e o tratamento efetivo dos indivíduos com doença ativa. O entendimento da resposta imunológica nessa doença é de crucial importância para o desenvolvimen-to de novos testes diagnósticos e novas vacinas para combater de forma efetiva essa enfermidade. Com o intuito de elucidar a resposta imune celular envolvida no desenvolvimento da tuberculose ativa, avaliamos as subpopulações de células TCD4+ Th1, Th17 e T reguladoras de pacientes com tuberculose pulmonar e pacientes com artrite reumatóide ativa frente ao antígeno recombinante GLcB do M. tuberculosis. Foram obtidas células mononucleares do sangue periférico de vinte e um pacientes com tuberculose pulmonar ativa, recrutados no Hospital de Doenças Tropicais Anuar Au-ad, vinte e cinco pacientes com artrite reumatóide, onze indivíduos com tuberculose latente (PT+) e doze indivíduos saudáveis (PT-). Estas células foram cultivadas, estimuladas com o antígeno recom-binante GLcB e as subpopulações Th1, Th17 e T reguladoras foram avaliadas através da análise das citocinas IFN-&#61543;, IL-17 e TGF-&#61538; e IL-10, respectivamente, por citometria de fluxo. Constatou-se que pacientes com tuberculose pulmonar ativa apresentam maior resposta de células Th1 (8.2&#61617;1.9), Th17 (3.92.1) e T reguladoras (2.81.2) específicas ao antígeno recombinante GLcB quando comparados com indivíduos com infecção latente (Th17=2.81.3; Treg=3.11.2), e controles saudáveis (Th17=1.40.8; Treg=0.60.3). Indivíduos com infecção latente apresentam somente porcentagem significativa de células Th1 (4.61.1) específicas ao GLcB quando comparado aos controles (1.71.0). Pacientes com AR não apresentaram diferença significativa na porcentagem destas células quanto à classificação em PT+ e PT-. Porém, pacientes com AR que desenvolveram tuberculose a-presentaram resposta semelhante aos pacientes com TB. Diante destes resultados, podemos concluir que as células Th1, Th17 e T reguladoras estão diretamente envolvidas na doença ativa.