Orientador: Francisco Eduardo Martinez / Coorientador: Patricia Fernanda Felipe Pinheiro / Banca: Sérgio Luis Felisbino / Banca: Renée Laufer Amorim / Banca: Ismael Forte Freitas Junior / Banca: Olga Cristina de Mello Malheiro / Resumo: O consumo de etanol está associado a alterações metabólicas e reprodutivas, causando doenças, como o câncer de próstata. Umas das medidas que pode amenizar a manifestação do câncer, incluindo o da próstata, é o exercício físico regular. Nosso trabalho tem o objetivo de avaliar a influência do exercício físico resistido e do etanol no metabolismo da próstata ventral de ratos adultos. Vinte ratos Wistar sem a preferência ao etanol, 20 ratos UChB, consumo alto de etanol e 20 ratos UChB abstinentes foram divididos em seis grupos. Tres grupos foram submetidos ao treinamento físico com uma semana de adaptação e 13 semanas de treinamento, realizando quatro séries de 10 saltos com sobrecarga crescente de 50-70% do peso corporal preso ao tórax, com 60 segundos de descanso entre cada série, três vezes por semana. Os demais grupos permaneceram sedentários. Dois dias após a última sessão de treinamento, os animais foram submetidos à eutanásia por decaptação, o sangue e as regiões intermediária e distal da próstata ventral foram coletados e processados para análises imunohistoquímicas, Western Blot, hormonais e bioquímicas. Nossos resultados sugerem que o exercício físico altera o metabolismo prostático através das interações parácrinas prevenindo as lesões prostáticas / Abstract: Ethanol consumption is associated with reproductive and metabolic changes, causing diseases such as prostate câncer. The ethanol chronic consumption of is associated with prostate cancer. One of the measures that can lessen the manifestation of cancer, including prostate, is regular exercise. Our work aims to evaluate the influence of resistive exercise and metabolism of ethanol in the ventral prostate of adult rats. Twenty rats without preference to ethanol, 20 UChB rats, ethanol high consumption and 20 UChB abstinent rats were divided into six groups. Three groups were subjected to physical training consisted of one week for adaptation and 13 weeks of physical training, performing four sets of 10 jumps with increasing overload of 50-70% body weight attached to the chest with 60 seconds rest between each series, three times per week. The other groups remained sedentary. Two days after the last training session, rats were euthanized by decapitation, blood and the intermediate and distal ventral prostate regions were collected and processed for immunohistochemical, western blot, biochemical and hormonal analysis. Our results suggest that exercise alters the metabolism of the prostate through paracrine interactions preventing prostate lesions / Doutor

Objetivo: Avaliar a taxa proliferativa de células esfoliadas da mucosa bucal clinicamente saudável de usuários de crack. Material e Métodos: esfregaços orais foram coletados de língua e assoalho bucal de 87 indivíduos, divididos em três grupos: os usuários de crack (CRCO), n = 26; fumantes / etilistas (SA), n = 26 e controles (C ), n = 35. Lâminas histológicas foram submetidas à técnica de impregnação pela prata para quantificação do número de AgNORs/núcleo. As imagens foram obtidas por um sistema de captura de imagem adaptado a um microscópio de luz em x1000 ampliação. A média AgNOR por núcleo (mAgnor) e a percentagem de células com mais de 1,2,3 e 4 AgNORs por núcleo (pAgNOR> 1,> 2> 3 um> 4) foram calculados. Resultados: As células esfoliadas de mucosa da língua SA (3,34 ± 0,51 AgNOR / núcleo) exibiram maior taxa de proliferação celular (p <0,05) quando comparado com C (2,81 ± 0,773 AgNORs / núcleo) e CRCO (2,87 ± 0,51 AgNORs / núcleo) . Um aumento (p <0,05) da mAgnor também foi observada nas células do assoalho bucal (3,55 ± 0,57) em comparação com SA C (3,18 ± 0,53) e CRCO (3,28 ± 0,39). Dados semelhantes foram encontrados usando pAgNOR>1,>2,>3 e > 4. Conclusão: usuários de crack não apresentaram alterações na taxa proliferativa celular da mucosa bucal. Diante dos dados apresentados, o consumo de cigarro, em combinação com o consumo de álcool, continua sendo o maior fator prejudicial à mucosa bucal. / Objective: The aim of this study was to evaluate cell proliferation rate of cells exfoliated from clinically healthy mucosa of crack cocaine users. Material and Methods: Oral smears were collected from tongue and floor of the mouth mucosa of 87 individuals divided into three groups: crack cocaine users (CrCo), n=26; smokers/alcohol drinkers (SA), n=26 and controls (C), n=35. Histological slides were silver-stained using AgNOR technique to evaluate cell proliferation rate. Images were obtained by an image capturing system adapted to a light microscope at x1000 magnification. Quantification considered 50 cells by smear in which the number of AgNOR dots was visually counted. Mean AgNOR numbers per nucleus (mAgNOR) and the percentage of cells with more than 1,2,3 and 4 AgNORs per nucleus (pAgNOR>1,>2>3 an>4) were calculated. Results: Cells exfoliated from tongue mucosa of SA (3.34±0.51 AgNOR/nucleus) exhibit higher cell proliferation rate (p<0.05) when compared to C (2.81±0.773 AgNORs/nucleus) and to CrCo (2.87±0.51 AgNORs/nucleus). An increase (p<0.05) in mAgNOR was also observed in floor of the mouth cells (3.55±0.57) in SA when compared to C (3.18±0.53) and CrCo (3.28±0.39). Similar findings were found using pAgNOR>1,>2,>3 e >4. Conclusion: Crack cocaine users did not present changes in cell proliferation rate of oral mucosa. Between the expositions studied here, cigarette smoking in combination with alcohol consumption remain as the most harmful factors to oral mucosa.

Orientador: Oslei Paes de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-25T08:18:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DellaColetta_Ricardo_D.pdf: 6321143 bytes, checksum: fee6575189b6054e21beeaa54cc06f5a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Fibromatose gengival hereditária (FGH) é uma condição rara caracterizada por um aumento gengival generalizado com crescimento lento e progressivo. Para elucidar algumas das características regulatórias que resultam nesta condição, quatro linhagens celulares de fibroblastos provenientes de indivíduos de uma mesma família com FGH foram isoladas e caracterizadas em relação ao comportamento prol proliferativo, produção, e expressão de colágeno e suas proteínas chaperones, expressão de MMPs e TIMPs e produção de citocinas. Fibroblastos de gengiva normal (GN) e FGH em condições de subconfluência celular apresentaram típicas características morfológicas, mas em condições de saturação da densidade, os fibroblastos de FGH apresentaram dimensões menores que as células controle. Cinco diferentes ensaios de proliferação celular mostraram que a relação de proliferação foi significantemente maior em fibroblastos de FGH. A produção e expressão de Hsp47 é também aumentada em fibroblastos de FGH em paralelo com o aumento na produção de colágeno. Em adição, a expressão de Hsp47 é regulada por estresse celular e pró-peptídeos correspondendo as regiões da porção N-terminal das cadeias 'alfa'1 (I). A produção de citocinas foi detectada por ELlSA utilizando anticorpos específicos para TGF-' beta '31, IL-6, IL-1 ' beta ' e TNF- 'alfa '. Em fibroblastos de FGH a produção de TGF-' beta ' 1 e IL-6 foi estatisticamente maior que em fibroblastos normais (p<0,013 e p< 0,0035 respectivamente), enquanto que IL-' beta ' 1 e TNF- 'alfa ' não foram detectadas em todos as linhagens celulares. A expressão e produção de MMP-1 e MMP-2, como revelada por RT -PCR e zimografia, foram significantemente menores em fibroblastos de FGH comparando com células de GN. Por outro lado, a expressão de TIMP-1 e TIMP-2 foi ligeiramente maior em fibroblastos de GN. A neutralização de TGF- ' beta ' 1 com anticorpos específicos elevou os níveis de expressão e produção de MMP-1 e dramaticamente reduziu os níveis de MMP-2, enquanto que os de níveis de TIMPs não foram alterados. Estes resultados sugerem que a pato gênese do aumento gengival de indivíduos com FGH é possivelmente resultado de uma associação de fatores incluindo alterado comportamento proliferativo, exacerbada síntese de colágeno e Hsp47, desregulação no balanço proteolítico e elevada produção de citocinas / Abstract: Characterization of cellular proliferation and expression of collagen and its molecular chaperones, cytokines and matrix metalloproteinases and its tissue inhibitors in gingival fibroblasts from pacients with hereditary gingival fibromatosis Hereditary gingival fibromatosis (HGF) is a rare oral condition characterized by a slow and progressive enlargement of the gingiva, involving both the maxillaand mandible. To further elucidate some of the regulatory features resulting in this condition, the culture characteristics of the four cell lines of gingival fibroblasts derived from patients of the some family with HGF were isolated and characterized on proliferation index, collagen and its molecular chaperones production and expression, MMPs and TIMPs expression, and cytokines production. HGF and normal gingiva (NG) fibroblasts in subcofluent culture densities showed typical morphologic characteristics, but in saturation density, HGF fibroblasts were shorter than NG cells. Five different cell proliferation assays showed that the cell proliferation rate was significantly higher in HGF fibroblasts. The production and expression of Hsp47 were significantly higher in HGF fibroblasts than in NG fibroblasts, along with increased producto?n of collagen. In addition, Hsp47 is coordinately regulated by stress and by feedback mechanism mediated by N-terminal procollagen propeptides corresponding to residues of a1 (I)-chains. The cytokines production was detected by ELlSA using specific antibodies for TGF-' beta ' 1 , IL-6, IL-1 ' beta ' and TNF- 'alfa '. In HGF fibroblasts, the production of TGF-' beta ' 1 and IL-6 was higher than fibroblasts from normal tissues (p<0.013 and p<0.0035 respectively), whereas IL-1' beta ' and TNF-'alfa ' were not detected in ali cell lines. RT-PCR and enzymographic analysis clearly demonstrated that the expression and production of MMP-1 and MMP-2 were significantly lower in fibroblasts from HGF than from NG. Interestingly, TIMP-1 and TIMP-2 expression from NG cells was shown to be slightly higher than those from HGF. The use of neutralizing antibodies to TGF-' beta ' 1 caused a slight increase in MMP-1 and a decrease in MMP-2 expression, whereas that no change TIMPs levels. These results suggest that the pathogenesis of gingival outgrowth in HGF patients is possibly resulted of a association of factors such as increased proliferative potential, altered synthesis of collagen and Hsp47, dysregulated proteolytic balance and increased cytokines production / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Odontologia

O objetivo do presente trabalho é analisar os componentes celulares e de fibras do tecido conjuntivo nas hiperplasias inflamatórias (HI), nos fibromas (F) e na fibromatose gengival hereditária (FGH), além de investigar a imunocompetência e efetuar análises moleculares de pacientes com FGH. Para atingir os objetivos foram desenvolvidos 4 artigos, com diferentes metodologias e universos amostrais. No 1º artigo, pretendeu-se estabelecer critérios microscópicos válidos para diferenciar F e HI. Foram avaliadas em microscópio óptico 136 lesões coradas pela Hematoxilina-eosina (HE) e pelo Tricrômico de Masson quanto às características microscópicas. Os resultados mostraram que uma área central de fibras colágenas dispostas de forma enovelada e mais densa, circundada por uma camada de fibras dispostas de forma paralela são características dos F, enquanto a presença de hiperplasia epitelial, infiltrado inflamatório e fibras colágenas organizadas de forma paralela são características das HI. Tais resultados motivaram o 2º artigo, no qual estudamos 18 lesões de F e 13 de HI, que foram preparadas histologicamente e coradas pelo picrosírius red e pelo direct blue para avaliação quantitativa das fibras colágenas e de fibras do sistema elástico, respectivamente, em microscopia a laser confocal. Os resultados confirmaram a disposição estrutural das fibras colágenas observada no 1º artigo, além de apontarem diferenças nas áreas ocupadas pelas fibras colágenas em todas as regiões estudadas. A fim de proceder a uma avaliação dos componentes fibroso e celular das 3 lesões fibrosas, foi desenvolvido o 3º artigo. Espécimes das 3 lesões foram estudados em microscopia ótica, a fim de avaliar suas populações de fibroblastos e de células inflamatórias e os seguintes componentes fibrosos do tecido conjuntivo: fibras colágenas, sistema de fibras elásticas, fibras reticulares e fibras oxitalânicas. Os resultados mostraram disposição e concentração diferente das fibras colágenas nas 3 lesões e uma maior concentração de fibras reticulares na FGH. A análise dos componentes celulares mostrou um maior número de fibroblastos no F e uma maior contagem de células inflamatórias na HI. A partir do encaminhamento de uma família com FGH, optouse por inclui-la no estudo, tendo em vista serem lesões do mesmo grupo. Com isso, foi desenvolvido um 4º estudo, que utilizou uma avaliação morfológica semelhante à dos 2 artigos anteriormente descritos. Dos pacientes com FGH foi obtido sangue periférico para avaliação da proliferação celular de linfócitos através do teste do MTT e para o sequenciamento do gene SOS-1. Os resultados mostraram hiperplasia epitelial na porção externa da gengiva dos pacientes com FGH, maior concentração de fibras colágenas e poucas células inflamatórias. Os 3 pacientes com FGH não mostraram diferenças no seu índice de proliferação de linfócitos em relação aos controles e não apresentaram a mutação descrita no gene SOS-1 de outras famílias com FGH. Pode se concluir que as 3 lesões apresentam estrutura conjuntiva diferente tanto no aspecto quantitativo quanto na disposição estrutural de seus componentes. / The objective of this study was to analyze the cellular and fibrous components of connective tissue in inflammatory hyperplasia (IH), oral fibroma (OF) and hereditary gingival fibromatosis (HGF), and to investigate the immunocompetence and to perform molecular analysis in HGF patients. To achieve the goals were developed 4 articles, with different methodologies and sample universes. In the 1st article, we intended to establish microscopic criteria to differentiate F and IH. The microscopic characteristics of the lesions (n=136) stained by hematoxylin-eosin (HE) and Masson trichrome were evaluated in an optical microscope. The results showed that a central area of wound collagen fibers and arranged in a higher density, surrounded by a layer of parallel fibers are characteristic of F, while the presence of epithelial hyperplasia, inflammatory infiltrate and parallel collagen fibers are characteristics of HI. These results led the 2nd article, which studied 18 F and 13 and IH, histologically prepared and stained by picrosírius red and direct blue for the direct quantitative assessment of collagen fibers and elastic fibers of the system, respectively, in the confocal laser microscope. The results confirmed the structural arrangement of collagen fibers found in Article 1, and indicate differences in the areas of collagen fibers in all regions studied. In order to evaluate the cellular and fibrous components of the 3 fibrous lesions, was developed the 3rd article. Specimens of the 3 lesions were studied in optical microscopy, to assess their populations of fibroblasts and inflammatory cells and the following components of fibrous connective tissue: collagen fibers, elastic fiber system, reticular fibers and oxytalan fibers. The results showed different arrangement and concentration of collagen fibers in the 3 lesions and a higher concentration of reticular fibers in HGF. The analysis of cellular components showed a greater number of fibroblasts in F and a higher count of inflammatory cells in IH. With the identification of a family with HGF, we chose to include it in the study because the lesions belong to the group of benign fibrous lesions. With that, it developed a 4th study, which used a similar morphologic evaluation of the 2 articles described above. Periferic blood was extracted from the HGF patients in order to determine the proliferative capacity of the peripheral lymphocytes, by the MTT test, and in order to sequence the SOS1 gene. The 3 HGF affected patients did not present the described mutation for the SOS1 gene, and the lymphocyte proliferative capacity in HGF patients was similar to those on controls. The results showed epithelial hyperplasia in the outer portion of the gingiva of patients with HGF, greater concentration of collagen fibers and few inflammatory cells. We can conclude that the 3 lesions present a different connective structure, considering both the quantitative aspect and the architectural disposition of their components.

The lung is an organ that contains a vast system of airways carefully constructed to achieve maximal surface area in a confined space, requiring guidance from a multitude of developmental factors. The Shh pathway is one such signaling mechanism that is critical to proper lung formation, guiding branching morphogenesis and cellular proliferation through its downstream Gli transcription factors. Additionally, Foxf1 has been shown to be a key developmental factor required for proper lung formation during embryogenesis. Although theorized that the Gli transcription factors are responsible for regulating foxf1 levels, their exact relationship has yet to be revealed. Using five different models for Shh signaling (gli2 null, gli2 over-expressor [hVER-Gli2], gli3 null, Gli3 constitutive repressor [Gli3Δ699] and cyclopamine treated lung explants), I compared and contrasted the role of Gli2 and Gli3 in terms of their effect on cell cycle regulation, and on the expression levels of foxf1 and its potential downstream target genes tbx4, tbx5 and fgf10. I found that ectopic over-expression of gli2 resulted in increased Shh pathway activation, and increased expression of G1/S phase cyclins, which was associated with increased cellular proliferation and lung growth. However, no change in the levels of G1/S phase cyclins due to altered Gli3 signaling was observed. Foxf1 levels positively correlate with the levels of gli2, and appear to be independent of Gli3 activity. The amount of tbx4, tbx5, and fgf10 transcripts were observed to follow the levels of gli2 in the different gli2 mouse models, however, there was no significant change in gli3 null or Gli3Δ699 mice. Finally, by analyzing gene expression at different time points during gestation, I found that while gli2 levels affect foxf1 throughout gestation, the relationship to tbx4, tbx5 and fgf10, occurs only during the latter stages of lung development. I conclude, that Gli2 and not Gli3 appears to be the primary transducer of Shh signaling influencing cyclin regulation, leading to changes in embryonic lung growth. Furthermore, that Gli2 and not Gli3 appears to regulate foxf1 expression levels, and that this may extend downstream to influence tbx4, tbx5 and fgf10 expression.

The lung is an organ that contains a vast system of airways carefully constructed to achieve maximal surface area in a confined space, requiring guidance from a multitude of developmental factors. The Shh pathway is one such signaling mechanism that is critical to proper lung formation, guiding branching morphogenesis and cellular proliferation through its downstream Gli transcription factors. Additionally, Foxf1 has been shown to be a key developmental factor required for proper lung formation during embryogenesis. Although theorized that the Gli transcription factors are responsible for regulating foxf1 levels, their exact relationship has yet to be revealed. Using five different models for Shh signaling (gli2 null, gli2 over-expressor [hVER-Gli2], gli3 null, Gli3 constitutive repressor [Gli3Δ699] and cyclopamine treated lung explants), I compared and contrasted the role of Gli2 and Gli3 in terms of their effect on cell cycle regulation, and on the expression levels of foxf1 and its potential downstream target genes tbx4, tbx5 and fgf10. I found that ectopic over-expression of gli2 resulted in increased Shh pathway activation, and increased expression of G1/S phase cyclins, which was associated with increased cellular proliferation and lung growth. However, no change in the levels of G1/S phase cyclins due to altered Gli3 signaling was observed. Foxf1 levels positively correlate with the levels of gli2, and appear to be independent of Gli3 activity. The amount of tbx4, tbx5, and fgf10 transcripts were observed to follow the levels of gli2 in the different gli2 mouse models, however, there was no significant change in gli3 null or Gli3Δ699 mice. Finally, by analyzing gene expression at different time points during gestation, I found that while gli2 levels affect foxf1 throughout gestation, the relationship to tbx4, tbx5 and fgf10, occurs only during the latter stages of lung development. I conclude, that Gli2 and not Gli3 appears to be the primary transducer of Shh signaling influencing cyclin regulation, leading to changes in embryonic lung growth. Furthermore, that Gli2 and not Gli3 appears to regulate foxf1 expression levels, and that this may extend downstream to influence tbx4, tbx5 and fgf10 expression.

O objetivo do presente trabalho é analisar os componentes celulares e de fibras do tecido conjuntivo nas hiperplasias inflamatórias (HI), nos fibromas (F) e na fibromatose gengival hereditária (FGH), além de investigar a imunocompetência e efetuar análises moleculares de pacientes com FGH. Para atingir os objetivos foram desenvolvidos 4 artigos, com diferentes metodologias e universos amostrais. No 1º artigo, pretendeu-se estabelecer critérios microscópicos válidos para diferenciar F e HI. Foram avaliadas em microscópio óptico 136 lesões coradas pela Hematoxilina-eosina (HE) e pelo Tricrômico de Masson quanto às características microscópicas. Os resultados mostraram que uma área central de fibras colágenas dispostas de forma enovelada e mais densa, circundada por uma camada de fibras dispostas de forma paralela são características dos F, enquanto a presença de hiperplasia epitelial, infiltrado inflamatório e fibras colágenas organizadas de forma paralela são características das HI. Tais resultados motivaram o 2º artigo, no qual estudamos 18 lesões de F e 13 de HI, que foram preparadas histologicamente e coradas pelo picrosírius red e pelo direct blue para avaliação quantitativa das fibras colágenas e de fibras do sistema elástico, respectivamente, em microscopia a laser confocal. Os resultados confirmaram a disposição estrutural das fibras colágenas observada no 1º artigo, além de apontarem diferenças nas áreas ocupadas pelas fibras colágenas em todas as regiões estudadas. A fim de proceder a uma avaliação dos componentes fibroso e celular das 3 lesões fibrosas, foi desenvolvido o 3º artigo. Espécimes das 3 lesões foram estudados em microscopia ótica, a fim de avaliar suas populações de fibroblastos e de células inflamatórias e os seguintes componentes fibrosos do tecido conjuntivo: fibras colágenas, sistema de fibras elásticas, fibras reticulares e fibras oxitalânicas. Os resultados mostraram disposição e concentração diferente das fibras colágenas nas 3 lesões e uma maior concentração de fibras reticulares na FGH. A análise dos componentes celulares mostrou um maior número de fibroblastos no F e uma maior contagem de células inflamatórias na HI. A partir do encaminhamento de uma família com FGH, optouse por inclui-la no estudo, tendo em vista serem lesões do mesmo grupo. Com isso, foi desenvolvido um 4º estudo, que utilizou uma avaliação morfológica semelhante à dos 2 artigos anteriormente descritos. Dos pacientes com FGH foi obtido sangue periférico para avaliação da proliferação celular de linfócitos através do teste do MTT e para o sequenciamento do gene SOS-1. Os resultados mostraram hiperplasia epitelial na porção externa da gengiva dos pacientes com FGH, maior concentração de fibras colágenas e poucas células inflamatórias. Os 3 pacientes com FGH não mostraram diferenças no seu índice de proliferação de linfócitos em relação aos controles e não apresentaram a mutação descrita no gene SOS-1 de outras famílias com FGH. Pode se concluir que as 3 lesões apresentam estrutura conjuntiva diferente tanto no aspecto quantitativo quanto na disposição estrutural de seus componentes. / The objective of this study was to analyze the cellular and fibrous components of connective tissue in inflammatory hyperplasia (IH), oral fibroma (OF) and hereditary gingival fibromatosis (HGF), and to investigate the immunocompetence and to perform molecular analysis in HGF patients. To achieve the goals were developed 4 articles, with different methodologies and sample universes. In the 1st article, we intended to establish microscopic criteria to differentiate F and IH. The microscopic characteristics of the lesions (n=136) stained by hematoxylin-eosin (HE) and Masson trichrome were evaluated in an optical microscope. The results showed that a central area of wound collagen fibers and arranged in a higher density, surrounded by a layer of parallel fibers are characteristic of F, while the presence of epithelial hyperplasia, inflammatory infiltrate and parallel collagen fibers are characteristics of HI. These results led the 2nd article, which studied 18 F and 13 and IH, histologically prepared and stained by picrosírius red and direct blue for the direct quantitative assessment of collagen fibers and elastic fibers of the system, respectively, in the confocal laser microscope. The results confirmed the structural arrangement of collagen fibers found in Article 1, and indicate differences in the areas of collagen fibers in all regions studied. In order to evaluate the cellular and fibrous components of the 3 fibrous lesions, was developed the 3rd article. Specimens of the 3 lesions were studied in optical microscopy, to assess their populations of fibroblasts and inflammatory cells and the following components of fibrous connective tissue: collagen fibers, elastic fiber system, reticular fibers and oxytalan fibers. The results showed different arrangement and concentration of collagen fibers in the 3 lesions and a higher concentration of reticular fibers in HGF. The analysis of cellular components showed a greater number of fibroblasts in F and a higher count of inflammatory cells in IH. With the identification of a family with HGF, we chose to include it in the study because the lesions belong to the group of benign fibrous lesions. With that, it developed a 4th study, which used a similar morphologic evaluation of the 2 articles described above. Periferic blood was extracted from the HGF patients in order to determine the proliferative capacity of the peripheral lymphocytes, by the MTT test, and in order to sequence the SOS1 gene. The 3 HGF affected patients did not present the described mutation for the SOS1 gene, and the lymphocyte proliferative capacity in HGF patients was similar to those on controls. The results showed epithelial hyperplasia in the outer portion of the gingiva of patients with HGF, greater concentration of collagen fibers and few inflammatory cells. We can conclude that the 3 lesions present a different connective structure, considering both the quantitative aspect and the architectural disposition of their components.

Estudos sobre cronificação têm se mostrado cada vez mais importantes, visto que, tanto na medicina humana, quanto na medicina veterinária, tem sido comum a ocorrência de lesões crônicas, que muitas vezes apresentam dificuldade de cicatrização com terapia convencional. Por este motivo, o presente trabalho tem por objetivo estabelecer modelo de ferida crônica em ratos Wistar, com o uso de agentes químicos, comumente utilizados na rotina clínica como antissépticos, em doses consideradas tóxicas ao leito da ferida. Para isso, foram utilizados 48 ratos Wistar, machos, divididos em quatro grupos de 12 animais cada. (Controle, Polivinilpirrolidona - PVPI 1%, Clorexidina 1% e H2O2 35%). Os animais foram submetidos a anestesia inalatória e sofreram lesão circular de 1cm de diâmetro, confeccionada com o uso de trépano corneal. Foram realizadas duas feridas simétricas paralelas e em seguida à confecção iniciou-se a aplicação tópica dos agentes químicos, com auxílio de pipeta de 50μl, sendo instilados duas vezes ao dia, durante 15 ou 30 dias. As avaliações macroscópicas das feridas induzidas cirurgicamente eram realizadas a cada dois dias, através de medição com paquímetro, além de observação quanto a presenças de sangramentos e outras secreções. Foram avaliadas também através de histologia e imuno-histoquímica. Como resultados o grupo PVPI teve maior taxa de contração, cicatrizando em menor tempo que o grupo controle, embora essa diferença de tempo não tenha sido significativa estatisticamente; apesar das feridas se apresentarem cicatrizadas macroscopicamente, à avaliação histológica foi possível perceber que haviam alterações, dignas de processo cicatricial em curso; o grupo H2O2 proporcionou resultados positivos perante aquilo que foi proposto. Sugere-se que novos estudos sejam realizados, com o H2O2, nos quais os períodos de uso do agente sejam prolongados, superiores aos usados no presente estudo, utilizando ainda material de silicone, fixado nas bordas da ferida, com o intuito de evitar cicatrização por contração. Sugere-se também o uso de doses elevadas de analgésicos durante todo o tempo de experimento. / Research on chronic lesions have been of increased interest in both human and veterinary medicine, as different conditions can delay and lead to difficulties on wound healing, even after conventional therapy has been instituted. Although there are several reports on experimental models for the study of acute wound healing, the establishment of chronic lesions using chemical agents, for scientific purposes, is scarce. This study pursued the development of a chronic skin wound model with chemical substances routinely used as antiseptics, in concentrations considered detrimental to injured tissue. For that, forty-eight Wistar rats were divided in four groups of 12 animals each, for of one of the topical treatments: povidone-iodine solution, 1% chlorhexidine, 35% hydrogen peroxide (H2O2), and control with 0.9% saline solution (NaCl). Under general anesthesia, two circular full skin defects, with 1cm diameter, were produced (with a corneal trephine) in the dorsal cervical region of all the animals. Immediately after the incisions, 50μl of one of the treatments were administrated twice daily, for either 15 or 30 days. Macroscopic evaluations were performed every other day, recording wound size (with a pachymeter) and occurrence of bleeding or exudates. Microscopically, at day 15 or 30, histologic and immunohistochemical studies were carried out with the complete removal of the wound or cicatricial region. Macroscopically, the povidone-iodine group showed faster wound contraction and healing rate than the control, yet, this difference was not statistically significant. Although, under clinical observation, the incised regions presented scar tissue, the histopathological evaluation of the respective specimens showed uncompleted healing process features. The hydrogen peroxide demonstrated promising results to the proposed intent. However, a bigger sample is needed to ascertain the found evidences. Furthermore, studies with longer or more frequent periods of substance exposure, along with devices to circumvent wound contraction and higher doses of analgesics, are recommended.

O objetivo do presente trabalho é analisar os componentes celulares e de fibras do tecido conjuntivo nas hiperplasias inflamatórias (HI), nos fibromas (F) e na fibromatose gengival hereditária (FGH), além de investigar a imunocompetência e efetuar análises moleculares de pacientes com FGH. Para atingir os objetivos foram desenvolvidos 4 artigos, com diferentes metodologias e universos amostrais. No 1º artigo, pretendeu-se estabelecer critérios microscópicos válidos para diferenciar F e HI. Foram avaliadas em microscópio óptico 136 lesões coradas pela Hematoxilina-eosina (HE) e pelo Tricrômico de Masson quanto às características microscópicas. Os resultados mostraram que uma área central de fibras colágenas dispostas de forma enovelada e mais densa, circundada por uma camada de fibras dispostas de forma paralela são características dos F, enquanto a presença de hiperplasia epitelial, infiltrado inflamatório e fibras colágenas organizadas de forma paralela são características das HI. Tais resultados motivaram o 2º artigo, no qual estudamos 18 lesões de F e 13 de HI, que foram preparadas histologicamente e coradas pelo picrosírius red e pelo direct blue para avaliação quantitativa das fibras colágenas e de fibras do sistema elástico, respectivamente, em microscopia a laser confocal. Os resultados confirmaram a disposição estrutural das fibras colágenas observada no 1º artigo, além de apontarem diferenças nas áreas ocupadas pelas fibras colágenas em todas as regiões estudadas. A fim de proceder a uma avaliação dos componentes fibroso e celular das 3 lesões fibrosas, foi desenvolvido o 3º artigo. Espécimes das 3 lesões foram estudados em microscopia ótica, a fim de avaliar suas populações de fibroblastos e de células inflamatórias e os seguintes componentes fibrosos do tecido conjuntivo: fibras colágenas, sistema de fibras elásticas, fibras reticulares e fibras oxitalânicas. Os resultados mostraram disposição e concentração diferente das fibras colágenas nas 3 lesões e uma maior concentração de fibras reticulares na FGH. A análise dos componentes celulares mostrou um maior número de fibroblastos no F e uma maior contagem de células inflamatórias na HI. A partir do encaminhamento de uma família com FGH, optouse por inclui-la no estudo, tendo em vista serem lesões do mesmo grupo. Com isso, foi desenvolvido um 4º estudo, que utilizou uma avaliação morfológica semelhante à dos 2 artigos anteriormente descritos. Dos pacientes com FGH foi obtido sangue periférico para avaliação da proliferação celular de linfócitos através do teste do MTT e para o sequenciamento do gene SOS-1. Os resultados mostraram hiperplasia epitelial na porção externa da gengiva dos pacientes com FGH, maior concentração de fibras colágenas e poucas células inflamatórias. Os 3 pacientes com FGH não mostraram diferenças no seu índice de proliferação de linfócitos em relação aos controles e não apresentaram a mutação descrita no gene SOS-1 de outras famílias com FGH. Pode se concluir que as 3 lesões apresentam estrutura conjuntiva diferente tanto no aspecto quantitativo quanto na disposição estrutural de seus componentes. / The objective of this study was to analyze the cellular and fibrous components of connective tissue in inflammatory hyperplasia (IH), oral fibroma (OF) and hereditary gingival fibromatosis (HGF), and to investigate the immunocompetence and to perform molecular analysis in HGF patients. To achieve the goals were developed 4 articles, with different methodologies and sample universes. In the 1st article, we intended to establish microscopic criteria to differentiate F and IH. The microscopic characteristics of the lesions (n=136) stained by hematoxylin-eosin (HE) and Masson trichrome were evaluated in an optical microscope. The results showed that a central area of wound collagen fibers and arranged in a higher density, surrounded by a layer of parallel fibers are characteristic of F, while the presence of epithelial hyperplasia, inflammatory infiltrate and parallel collagen fibers are characteristics of HI. These results led the 2nd article, which studied 18 F and 13 and IH, histologically prepared and stained by picrosírius red and direct blue for the direct quantitative assessment of collagen fibers and elastic fibers of the system, respectively, in the confocal laser microscope. The results confirmed the structural arrangement of collagen fibers found in Article 1, and indicate differences in the areas of collagen fibers in all regions studied. In order to evaluate the cellular and fibrous components of the 3 fibrous lesions, was developed the 3rd article. Specimens of the 3 lesions were studied in optical microscopy, to assess their populations of fibroblasts and inflammatory cells and the following components of fibrous connective tissue: collagen fibers, elastic fiber system, reticular fibers and oxytalan fibers. The results showed different arrangement and concentration of collagen fibers in the 3 lesions and a higher concentration of reticular fibers in HGF. The analysis of cellular components showed a greater number of fibroblasts in F and a higher count of inflammatory cells in IH. With the identification of a family with HGF, we chose to include it in the study because the lesions belong to the group of benign fibrous lesions. With that, it developed a 4th study, which used a similar morphologic evaluation of the 2 articles described above. Periferic blood was extracted from the HGF patients in order to determine the proliferative capacity of the peripheral lymphocytes, by the MTT test, and in order to sequence the SOS1 gene. The 3 HGF affected patients did not present the described mutation for the SOS1 gene, and the lymphocyte proliferative capacity in HGF patients was similar to those on controls. The results showed epithelial hyperplasia in the outer portion of the gingiva of patients with HGF, greater concentration of collagen fibers and few inflammatory cells. We can conclude that the 3 lesions present a different connective structure, considering both the quantitative aspect and the architectural disposition of their components.

Estudos sobre cronificação têm se mostrado cada vez mais importantes, visto que, tanto na medicina humana, quanto na medicina veterinária, tem sido comum a ocorrência de lesões crônicas, que muitas vezes apresentam dificuldade de cicatrização com terapia convencional. Por este motivo, o presente trabalho tem por objetivo estabelecer modelo de ferida crônica em ratos Wistar, com o uso de agentes químicos, comumente utilizados na rotina clínica como antissépticos, em doses consideradas tóxicas ao leito da ferida. Para isso, foram utilizados 48 ratos Wistar, machos, divididos em quatro grupos de 12 animais cada. (Controle, Polivinilpirrolidona - PVPI 1%, Clorexidina 1% e H2O2 35%). Os animais foram submetidos a anestesia inalatória e sofreram lesão circular de 1cm de diâmetro, confeccionada com o uso de trépano corneal. Foram realizadas duas feridas simétricas paralelas e em seguida à confecção iniciou-se a aplicação tópica dos agentes químicos, com auxílio de pipeta de 50μl, sendo instilados duas vezes ao dia, durante 15 ou 30 dias. As avaliações macroscópicas das feridas induzidas cirurgicamente eram realizadas a cada dois dias, através de medição com paquímetro, além de observação quanto a presenças de sangramentos e outras secreções. Foram avaliadas também através de histologia e imuno-histoquímica. Como resultados o grupo PVPI teve maior taxa de contração, cicatrizando em menor tempo que o grupo controle, embora essa diferença de tempo não tenha sido significativa estatisticamente; apesar das feridas se apresentarem cicatrizadas macroscopicamente, à avaliação histológica foi possível perceber que haviam alterações, dignas de processo cicatricial em curso; o grupo H2O2 proporcionou resultados positivos perante aquilo que foi proposto. Sugere-se que novos estudos sejam realizados, com o H2O2, nos quais os períodos de uso do agente sejam prolongados, superiores aos usados no presente estudo, utilizando ainda material de silicone, fixado nas bordas da ferida, com o intuito de evitar cicatrização por contração. Sugere-se também o uso de doses elevadas de analgésicos durante todo o tempo de experimento. / Research on chronic lesions have been of increased interest in both human and veterinary medicine, as different conditions can delay and lead to difficulties on wound healing, even after conventional therapy has been instituted. Although there are several reports on experimental models for the study of acute wound healing, the establishment of chronic lesions using chemical agents, for scientific purposes, is scarce. This study pursued the development of a chronic skin wound model with chemical substances routinely used as antiseptics, in concentrations considered detrimental to injured tissue. For that, forty-eight Wistar rats were divided in four groups of 12 animals each, for of one of the topical treatments: povidone-iodine solution, 1% chlorhexidine, 35% hydrogen peroxide (H2O2), and control with 0.9% saline solution (NaCl). Under general anesthesia, two circular full skin defects, with 1cm diameter, were produced (with a corneal trephine) in the dorsal cervical region of all the animals. Immediately after the incisions, 50μl of one of the treatments were administrated twice daily, for either 15 or 30 days. Macroscopic evaluations were performed every other day, recording wound size (with a pachymeter) and occurrence of bleeding or exudates. Microscopically, at day 15 or 30, histologic and immunohistochemical studies were carried out with the complete removal of the wound or cicatricial region. Macroscopically, the povidone-iodine group showed faster wound contraction and healing rate than the control, yet, this difference was not statistically significant. Although, under clinical observation, the incised regions presented scar tissue, the histopathological evaluation of the respective specimens showed uncompleted healing process features. The hydrogen peroxide demonstrated promising results to the proposed intent. However, a bigger sample is needed to ascertain the found evidences. Furthermore, studies with longer or more frequent periods of substance exposure, along with devices to circumvent wound contraction and higher doses of analgesics, are recommended.