As doenças coronarianas, entre elas o infarto agudo do miocárdio, possuem alta incidência, morbidade e mortalidade e são um sério problema de saúde pública. A hipertensão arterial é considerada uma das principais causas de doença isquêmica do coração. A isquemia que provoca o infarto leva ao adverso remodelamento do músculo cardíaco e a depressão da função cardíaca. As células que sobrevivem à isquemia primária respondem com hipertrofia ao invés de proliferação, devido à capacidade mitótica limitada do cardiomiócito adulto. A terapia celular surge como uma alternativa de regeneração para o tecido cardíaco.Este trabalho teve como objetivo analisar os tipos de células e vias de administração mais apropriadas para regeneração cardíaca em modelos animais. Em dois de nossos estudos, utilizamos fêmeas de uma linhagem de ratos espontaneamente hipertensos (SHR, spontaneously hypertensive rats), nos quais já existe um comprometimento orgânico prévio ao infarto. Os animais foram submetidos à oclusão da artéria coronária descendente para indução do infarto. O efeito de células totais da medula óssea foi comparado com o de sua subpopulação de células-tronco mesenquimais, em duas vias de administração (sistêmica e intramiocárdica). As células foram coletadas de machos singenéicos. No terceiro estudo, usamos uma linhagem de camundongos geneticamente modificada para indução de insuficiência cardíaca (linhagem nocaute para receptores adrenérgicos α2a e α2c), a fim de verificar a ação das células-tronco mesenquimais ao longo do tempo (12 meses). No primeiro estudo comparamos os dois tipos celulares pela via endovenosa e verificamos que células totais da medula produziram uma significativa melhora na regeneração da função cardíaca. Esta mesma ação foi mostrada pela célula-tronco mesenquimal quando administrada de forma intracardíaca. Como em nossos experimentos não foram observadas células masculinas no coração das fêmeas receptoras dos transplantes, mesmo com a realização de PCR e nested PCR, a secreção de fatores parácrinos parece ter sido o mecanismo responsável pela melhora funcional e tecidual produzida pelas células. No terceiro estudo houve uma melhora significativa na função cardíaca e na mortalidade dos camundongos tratados vs seus controles. Como conclusão destes estudos, acreditamos que os experimentos aqui desenvolvidos, representando modelos animais mais fiéis à doença cardíaca humana, permitiram a comparação de diferentes preparações de células e vias de administração e podem assim contribuir de maneira bastante importante para a padronização de protocolos pré-clinicos para regeneração cardíaca. / Coronary diseases, including acute myocardial infarction, have high frequency, morbidity and mortality, representing a major health problem. Arterial hypertension is one of the main causes of myocardial infarction. The ischemia which is responsible for the infarction results in remodeling of the cardiac muscle and depression of heart function. The cells surviving to the primary ischemic process have limited mitotic capacity and mostly undergo hypertrophy. Cell therapy represents an interesting alternative for the regeneration of the cardiac muscle. This work aimed to analyze different types of cell preparations and routes of administration, to determine more efficient models of heart regeneration in animal models. In two of the studies, SHR (spontaneously hypertensive rat) were used. The animals, that present a previous organic deficiency, were submitted to occlusion of the descending coronary artery to induce a myocardial infarction. The effect of total bone marrow cells was compared to that of mesenchymal stem cells, after systemic or intramyocardial delivery. The cells were obtained from syngeneic males. In the third study, a murine strain genetically modified for the induction of heart failure (knockout for α2a and α2c adrenergic receptors) was used, to evaluate the long-term therapeutic potential of mesenchymal stem cells. In the first study, the two cell populations were systemically administered, and the results showed that total bone marrow cells result in improved recovery of cardiac function as compared to mesenchymal stem cells. On the other hand, this cell type was superior in recovering cardiac function after intramyocardial delivery. Since transplanted male cells were not detected in the heart of recipient femalesby PCR or nested PCR, the mechanism of repair more probably involve the secretion of paracrine factors. In the third study, we observed a significant improvement of cardiac function in the mice transplanted with mesenchymal stem cells, as compared to control animals. In conclusion, we believe that the experiments performed in this work, representing models more faithful to heart failure in humans, allowed the adequate comparison of different types of cells and routes of administration, and may thus give important contribution to the standardization of pre-clinical protocols of heart regeneration.

Gliomas são os tumores mais comuns no SNC, apresentando altas taxas de invasibilidade e proliferação, resistência à quimio e radioterapias, e elevados índices de recorrência e morte. As células-tronco tumorais constituem uma minoria dentre as células do tumor, apresentam características de células tronco neurais podendo sofrer diferenciação e auto-renovação. Linhagens celulares de gliomas, como U87, são capazes de produzir tumoresferas quando em alta confluência, que são similares às neuroesferas produzidas por células tronco neurais, e são ricas em células tronco tumorais (CSCs). Em gliomas, CSCs podem ser identificadas por expressarem o marcador de superfície CD133. Receptores purinérgicos estão envolvidos em diversos processos biológicos. O ATP induz respostas celulares como proliferação e diferenciação, e a degradação deste nucleotídeo por células de glioma é lenta, o que resulta no seu acúmulo no espaço extracelular. O objetivo deste trabalho é identificar a população de CSCs em U87 bem como o efeito do ATP na formação de esferas, expressão do marcador CD133, a expressão de genes de receptores purinérgicos e de genes marcadores de células diferenciadas (GLAST e CAMKII) e de células indiferenciadas (CD133 e OCT-4). U87 foram mantidas em condições padrão com 5% de SFB e esferas foram obtidas através de crescimento sobre ágar 1%. RNA total foi extraído de esferas e monocamada, e os genes de interesse foram amplificados em reação de RT-PCR com primers específicos. Esferas apresentam uma maior expressão de CD133, visto por citometria e imunodetecção. O mRNA de OCT-4 também foi mais expresso em esferas do que em monocamada, que expressa mais CAMKII e GLAST. ATP em uma concentração final de 100 µM reduz significativamente o número de esferas formadas (P<0.05) durante um período de 7 dias e também reduz a expressão de CD133. Dentre os receptores purinérgicos, a expressão de P2X4 foi maior em esferas, e P2X6 em monocamada. Estes resultados indicam que as esferas possuem componentes de células tronco e que a sinalização purinérgica pode estar envolvida em importantes aspectos da biologia de CSCs. / Glioblastoma multiformes are the most aggressive tumors in the CNS and are characterized by high invasion and proliferation rates, as well as for being resistant to chemo and radiotherapies. This leads to one of the worst prognosis among cancers. Cancer stem cells (CSCs) are scarce among the tumor cells, but can undergo differentiation and self-renewal, being fundamental for tumor maintenance. Tumorspheres, which resemble neurospheres, can grow in glioma cell cultures and are rich in CSC. Additionally, CSCs seem to be more resistant to radiotherapy and strategies aimed at differentiating these stem cells have potential to produce less aggressive and more efficient treatment regimes. CSCs have been identified in different tumor types as well as in established cell lines such as the human glioma cell line U87, and are characterized by the presence of the CD133 glycoprotein. Purinergic receptors are stimulated by nucleotides and nucleosides, and are involved in many biological processes, including embryonic development. ATP induces several cellular responses, such as proliferation and differentiation, and it has been demonstrated that the degradation of this nucleotide is slow in glioma cells, which results in its accumulation in the extracellular space. The aim of this work was to characterize the CSC population in U87 and the effect of ATP in sphere formation. Spheres were obtained by plating cells on a thin layer of agar. Tumorspheres presented a higher amount of CD133 marker as analyzed by flow citometry and western blotting. mRNA expression of OCT-4, a marker of undifferentiated cells, was higher in spheres, while GLAST and CAMKII, markers of differentiated glial and neuronal cells respectively, presented higher expression in the monolayer cells. Cells plated in the presence of ATP 100 µM formed 54% less spheres (P<0.05) when compared to control and also had a reduced level of CD133 marker. Among the purinergic receptors, P2X4 expression was higher in spheres, whereas P2X6 expression was higher in the monolayer. Our results indicate that spheres have components of stem cells and that the purinergic signaling is involved in important aspects of CSC biology.

Carrapatos são artrópodos hematófagos distribuídos por todo o mundo e vetores de diversas doenças. Como todos os hematófagos, os carrapatos possuem um arsenal de moléculas que inibe a resposta hemostática do hospedeiro, o que viabiliza o repasto sanguíneo bemsucedido. O carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um carrapato de um só hospedeiro e considerado o mais importante parasito de animais domésticos da América Latina. O R. microplus causa sérios danos aos bovinos, direta, e principalmente, devido à espoliação de sangue que leva à anemia e diminuição da produção de leite e do ganho de peso; e, indiretamente, via a transmissão de patógenos, como Babesia spp. e Anaplasma spp. O R. microplus é também um modelo interessante para o estudo das relações parasitohospedeiro, visto que ele permanece fixado ao mesmo hospedeiro durante toda a sua vida parasitária, o que leva em torno de três semanas. Os objetivos deste trabalho são explorar os mecanismos farmacológicos da saliva do carrapato R. microplus capazes de modular o sistema hemostático, bem como o papel que esta modulação desempenha na relação parasito-hospedeiro. Nesse sentido, este estudo foi organizado em duas partes. Primeiramente, foi realizada uma investigação sobre os parâmetros hemostáticos em bovinos infestados por carrapatos. Em um segundo momento, foram estudados os mecanismos da saliva do carrapato envolvidos na inibição da hemostasia, assim como a habilidade do soro de bovinos repetidamente infestados (que apresentam resistência imunológica naturalmente adquirida contra o carrapato bovino) em interferir na ação antihemostática da saliva do carrapato. Na primeira parte do estudo, foi demonstrado que bovinos experimentalmente infestados com 20.000 larvas de R. microplus apresentam uma diminuição na capacidade de agregação plaquetária (em resposta a colágeno e ADP), bem como na coagulação sanguínea (evidenciada por um aumento nos tempos de tromboplastina parcialmente ativado e de protrombina), enquanto a contagem de plaquetas e os níveis de fibrinogênio aumentaram significativamente ao longo da infestação. Na segunda parte, foi demonstrado que a saliva de R. microplus: (i) apresenta atividade inibitória in vitro sobre a agregação plaquetária induzida por colágeno; (ii) inibe a indução de ativação endotelial; e (iii) reduz a trombogênese in vivo. Ademais, o soro de bovinos repetidamente infestados (RIBS) foi capaz de bloquear parcialmente a atividade anticoagulante e antitrombótica da saliva e totalmente a modulação da ativação endotelial, ao passo que o RIBS não apresentou nenhum efeito sobre a inibição da agregação plaquetária. O conjunto dos dados apresentados permite um melhor entendimento dos fenômenos que ocorrem no hospedeiro durante o parasitismo, e também fornece mais subsídios para uma maior compreensão do processo de hematofagia e dos mecanismos fisiopatológicos que regem a relação parasitohospedeiro. / Ticks are blood-feeding arthropods widely distributed in the world and vectors of several diseases. Like all hematophagous animals, ticks resort to a variety of molecules in order to avoid the host hemostatic response, which in turn allow a successful blood-meal. The cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is an one-host tick, and is considered the most harmful parasite of domesticated animals in Latin America. R. microplus causes expressive injuries to bovines, directly, mainly due to blood spoliation, leading to anemia, and diminution of milk production and weight gain. Indirectly the tick is responsible for the transmission of pathogens such as Babesia spp. and Anaplasma spp. R. microplus is also a consistent model to study the parasite-host relationship, since it remains attached to the same host throughout the whole parasitic stage, which lasts around three weeks. This work aims at exploring the pharmacological mechanisms of R. microplus tick saliva able to modulate hemostasis, and the role of this modulation in tick-host relationship. In this sense, this study was organized in two parts: firstly, an investigation about the hemostatic parameters in tick infested bovines was performed. Secondly, the tick salivary mechanisms involved in the inhibition of hemostasis were studied, and the ability of serum from repeatedly infested bovines (which displays natural acquired immunological resistance to the cattle tick) to interfere in anti-hemostatic activity of tick saliva was also investigated. In the first part of this study it was shown that calves experimentally infested with 20,000 R. microplus larvae display a decrease in platelet aggregation (in response to collagen and ADP) as well as in coagulation ability (evinced by an increase in activated partial thromboplastin time and prothrombin time), whereas platelet blood count and fibrinogen level significantly increased during the course of infestation. In the second part of this work, it was demonstrated that R. microplus saliva: (i) displays in vitro inhibitory activity upon collagen-induced platelet aggregation; (ii) inhibits the induction of endothelial activation; and (iii) reduces thrombogenesis in vivo. Moreover, repeated infested bovine sera (RIBS) were shown to be able to partially block the delay of coagulation and the antithrombotic effect of saliva, and to totally abolish the modulation of endothelium activation, in spite of the fact that RIBS has no effect on the inhibition of platelet aggregation. The set of data presented in this work allows a better understanding of the phenomena occurring in the host during parasitism, and also gives more insights to improve the understanding of the hematophagy process and the pathophysiological mechanisms behind host-tick interaction.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o número de AgNORs por núcleo e a expressão de Ki-67 no fronte de invasão tumoral e sua correlação com os parâmetros clínicos (TNM), morfológicos (fronte de invasão tumoral, graduação histopatológica), do carcinoma de células escamosas da mucosa bucal. Foram incluídos 48 pacientes de um total de 109 pacientes analisados no período de 2000 a 2010. A idade média foi de 63 anos, a língua a localização mais comum representando 41,7% dos casos, e 79,2% dos casos eram os homens. Todos diagnosticados e tratados no Instituto Nacional do Câncer de Montevideo, Uruguai. Todos os espécimes incluídos neste estudo deviam ter presente o fronte de invasão (FIT) claramente demonstrado com uma faixa de ilhas de tecido conjuntivo adjacente. Todas as amostras foram obtidas da peça de ressecção do tumor e foram submetidas ás técnicas de hematoxilina/eosina, imunoistoquímica para anticorpo Ki-67 e técnica de AgNOR. Observou-se uma correlação significativa nos Carcinomas Espinocelulares localizados em áreas de alto risco (língua, assoalho da boca e trígono retromolar) em comparação com as áreas de baixo risco (mucosa labial, gengiva, palato), por meio da marcação de AgNOR (p=0,0085). Neste estudo foi encontrada uma associação do tamanho do tumor para T2 e T3 com a sobrevida dos pacientes (p=0,036). Na área de invasão tumoral foi observado que os pacientes com padrão IV do FIT apresentam 60% de grau III de diferenciação celular de acordo com a OMS, 80% eram T3 e 80% evoluíram para óbito. A média de células positivas para Ki-67 foi de 22,3% ±11.89. O padrão I-IV de FIT expressam positividade para Ki-67 com uma relação inversa (p<0,032). Não foi observada associação entre os parâmetros de proliferação celular estudados com o tipo de fronte de invasão tumoral, nem com o grau de diferenciação celular.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-05T22:48:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Larissa Chaves Costa.pdf: 1912892 bytes, checksum: ca8ed0a252bc273c0b96b2cd3778733e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-05T22:48:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Larissa Chaves Costa.pdf: 1912892 bytes, checksum: ca8ed0a252bc273c0b96b2cd3778733e (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / CAPES / A glutamina é um aminoácido que apresenta, dentre varias funções, uma importante influência nas células do sistema imunológico. Em determinadas situações, a sua síntese não supre a demanda exigida pelo organismo, repercutindo na imunodeficiência. Assim, a suplementação da glutamina vem sendo utilizada para ativar o sistema imune e melhorar a recuperação de pacientes. No entanto, a administração da mesma na sua forma livre pode promover nefropatias, principalmente em pacientes diabéticos. Deste modo, a utilização da glutamina encapsulada em nanosistemas, como os lipossomas convencionais, pode ser uma alternativa para reduzir os possíveis efeitos tóxicos, além de promover uma potencialização na eficácia terapêutica, uma vez que estes lipossomas são reconhecidos e capturados pelas células do sistema imune. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi nanoencapsular a glutamina em lipossomas convencionais, desenvolver um método analítico em CLAE para a quantificação da glutamina encapsulada e avaliar a viabilidade dos neutrófilos. As formulações foram preparadas utilizando a técnica de hidratação do filme lipídico seguido de sonicação e caracterizadas segundo pH, tamanho das vesículas, potencial zeta e eficiência de encapsulação, além de avaliação da estabilidade ao armazenamento. Um planejamento fatorial foi realizado com a finalidade de estudar a influência da concentração dos constituintes lipídicos e da glutamina na formulação e assim escolher a preparação ideal. A viabilidade celular foi avaliada por citometria de fluxo, a partir de neutrófilos provenientes de ratos wistar sadios, 2h após administração por via intraperitoneal de glutamina livre (Gln), nanoencapsulada em lipossomas (LG), lipossomas branco (LB) e solução salina como controle (C). A formulação escolhida apresentou tamanho médio de 114,65 ± 1,82 nm com índice de polidispersão de 0,300 ± 0,00 e pH 7,69. O potencial zeta foi positivo (36,30 ± 1,38 mV) e a eficiência de encapsulação foi de 39,49 ± 0,74 %. O método cromatográfico desenvolvido foi eficiente para a quantificação da glutamina encapsulada, obtendo pico no tempo de retenção em torno de 3,8 minutos. Após tratamento, apesar dos neutrófilos permanecerem viáveis em todos os grupos testados, uma maior viabilidade foi observada no grupo tratado com glutamina encapsulada em relação ao grupo controle (20%). Assim, a glutamina encapsulada em lipossomas é capaz de manter os neutrófilos viáveis, tornando-se uma nova e promissora estratégia para aumentar a resposta em situações de imunodeficiência, com possível redução de sua toxicidade. / Glutamine is an amino acid that has, among several functions, an important influence on immune cells. In certain situations, their synthesis does not supply the demand required by the body, resulting in immunodeficiency. Thus, glutamine supplementation has been used to activate the immune system and improve the recovery of patients. However, the administration in its free form can promote kidney disease especially in diabetic patients. In that way, the use of glutamine encapsulated into nanosystems, such as conventional liposomes, may be an alternative to reducing possible toxic effects, and promote a potentiation in therapeutic efficacy, since these liposomes are recognized and captured by the immune system cells. In this context, the goal of this research work was nanoencapsulate glutamine into conventional liposomes, develop an analytical HPLC method for the quantification of encapsulated glutamine and evaluate the viability of neutrophils. Liposomes were prepared using the technique of thin-film hydration followed by sonication and characterized according to pH, size, zeta potential and encapsulation efficiency. The stability of liposomes was evaluated for at least 45 days. An experimental design was performed to study experimental conditions such as the concentration of lipids and glutamine, as well as choose the ideal preparation. Viability of neutrophils, from healthy wistar rats, was assessed, by using a flow cytometer, 2 hours after intraperitoneal administration of free glutamine (Gln), glutamine-loaded liposomes (GL), unloaded-liposome (UL) and saline solution as control (C). The chosen formulation presented a mean diameter of 114.65 ± 1.82 nm with a polydispersion index of 0.30 ± 0.00, and pH 7.69 . The zeta potential was positive (36.30 ± 1.38 mV) and the encapsulation efficiency was 39.49 ± 0.74 %. The chromatographic method developed was efficient for the quantification of encapsulated glutamine, obtaining a peak at retention time around 3.8 minutes. After treatment, although neutrophils remain viable in all groups, greater viability was observed in the group treated with glutamine encapsulated compared with control group (20%). Thus, glutamine encapsulated into liposomes is able to maintain viable neutrophils becoming a new and promising strategy to increase the response in immunodeficiency conditions, with a possible reduction of glutamine toxicity.

Made available in DSpace on 2018-08-01T20:28:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_11374_Dissertação_Lauanda Milanez Carvalho.pdf: 2064416 bytes, checksum: 0e063cb59628dc3c87fb5991704eef9e (MD5) Previous issue date: 2017-07-03 / Saccharomyces cerevisiae, uma levedura com larga aplicação econômica e biotecnológica é um organismo modelo em estudos de estresse e longevidade. Segundo estudos, organismos que melhor respondem ao estresse alcançam maior tempo de vida. O estresse por alta pressão hidrostática (HHP) gera resposta celular semelhante à de outros estresses sofridos por leveduras em dornas de fermentação. O microscópio de força atômica (AFM) é uma ferramenta que gera imagens tridimensionais, e fornece dados precisos sobre as características morfológicas e químicas das leveduras. O objetivo do trabalho foi analisar, utilizando AFM, características morfológicas de células-mães e filhas de S. cerevisiae e após tratamento por HHP de 100 MPa por 30 minutos. Após o tratamento foram feitas imagens em AFM em modo de leitura de contato intermitente e modo fase. Dados de variação relativa de rugosidade entre o maior e o menor valor encontrados foram obtidos a partir de 11 células em cada grupo experimental, sendo plotados gráficos de caixa. Foi feito teste de calibração do AFM em lamínula de vidro e foi desenvolvido um programa para a criação de representações gráficas de leveduras mães e filhas à pressão ambiente e após aplicação de 100 MPa a partir das médias de rugosidade obtidas nas leituras. O teste de calibração aumentou a confiabilidade dos dados obtidos. Células-mães e filhas a 0,1 MPa apresentaram distribuição de rugosidade dispersa, porém as células-filhas apresentaram menor uniformidade (29-51%) da superfície do que as mães (18-41%). As células-mães após tratamento por HHP a 100 MPa mostraram ter maior uniformidade do perfil de rugosidade do que a 0,1 MPa. Células-filhas após tratamento por HHP também mostraram maior uniformidade em seu perfil de rugosidade do que à pressão ambiente. Após a aplicação de 100 MPa de HHP, células-filhas mostraram sofrer mais os efeitos do estresse, tornando-se mais uniformes do que as células-mães submetidas às mesmas condições. A maior uniformidade da superfície das células-mães e filhas após tratamento por HHP pode ser devida à sua compressão durante o processo de pressurização. A partir das médias de rugosidade foram montadas representações gráficas tridimensionais das leveduras (estáticas e animadas). O programa desenvolvido mostrou-se eficaz, apresentando de forma simples e visual os dados numéricos do trabalho. Assim, com os dados obtidos foi possível observar que o piezoestresse afeta de maneira diferentes as células-mães e filhas de Saccharomyces cerevisiae e isso pode ser devido tanto à própria composição da parede celular dessas leveduras, quanto a fatores moleculares envolvidos na resposta ao estresse. Estes e outros resultados podem auxiliar na elucidação dos mecanismos utilizados por S. cerevisiae na resposta ao estresse.

Orientador: Marcos Silveira Buckeridge / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T09:47:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_AnaMariada_D.pdf: 7141017 bytes, checksum: 8fd85424c475be2565861dd9ec704602 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A partir de análises bioquímicas caracterizamos os polissacarideos de parede celular de cana-deaçúcar (Saccharum officinarum) (Artigo 1), acompanhando a dinâmica destes polímeros ao longo do desenvolvimento da planta. COITelacionamos a dinâmica do desenvolvimento com os dados de expressão gênica das enzimas responsáveis pelo metabolismo da parede celular. Os resultados obtidos a partir da análise de monossacarideos e de análise estrutural sugerem que os polissacarideos encontrados na parede celular da cana são os arabinoxilanos, f3-glucanos, mananos e pectinas com ramificações neutras compostas principalmente de arabinanos (1 _5) ligados. A análise dos perfis dos oligossacarídeos de f3-glucanos dos vários tecidos de cana mostrou que nos diferentes órgãos a razão molar entre tri e tetrassacarideos se manteve constante. Os eventos observados nas folhas foram similares aos observados nas panículas, com alterações nas ftações neutras das pectinas e nos mananos e aumento no nível de ramificações dos xilanos. A extração de ß3-glucanos nas ftações NaOH O,lM e 4M sugere que nestas ftações foram solubilizados os ß3-glucanos ligados aos arabinoxilanos através de interação intermolecular não covalente. Em conjunto com a análise de monossacarídeos por Cromatografia de troca iônica de alto desempenho com detecção de pulso amperométrico (HP AEC-P AD) e análise de ligações glicosídicas por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (GC-MS), foi possível acompanhar a dinâmica dos polissacarideos da parede celular ao longo do desenvolvimento. Em Brachiaria decumbens (Artigo 11) constatou-se modificações quantitativas e qualitativas nos f3-glucanos ao longo do desenvolvimento foliar. A partir das análises dos oligossacarídeos de (3-glucanos através de Cromatografia de troca iônica de alto desempenho com detecção por pulso amperométrico(HP AEC-P AD), verificou-se que em folhas maiores que 30cm a razão tri: tetrassacarideo sofreu alteração, o que poderia estar relacionado com o fim do período de alongamento celular e crescimento do tecido provocando alteração na estrutura do f3-glucano e desta forma promovendo a forte interação com os glucuronoarabinoxilanos (GAXs) / Abstract: The dynamics of cell wall of sugar cane (Saccharum officinarum) was characterized by biochemical analysis (paper 1). The expression of genes that encoding enzymes responsible for cell wall metabolism were correlated with plant development The results :ITom monosaccharide and structural analysis suggest that the sugar cane cell wall is composed of the polysaccharides arabinoxylans. f3glucans. mannans and pectins with neutral branching galactan. The oligosaccharide profile of f3glucans :ITom severa! sugar cane tissues indicated a similar ratio between tri and tetrasaccharides. Leaf and inflorescence showed similar alterations regarding pectin neutral fractions and mannans and an increase of xylan branching. The f3-glucans fractions produced with 0.1 and 4M NaOH, suggest the solubilization of glucans bound to arabinoxy1ans by non covalent intermolecular bonds. Together with monosaccharide analyses by (HPAEC-PAD) and glycoside linkages by gas chromatography-mass spectrometIy. it was possible to follow the dynamic changes in cell wall polysaccharides along sugar cane development The structure and composition is consistent with the presence of a (poaceae-like) type n cell wall. In Brachiaria decumbens (paper H). an Amcan grass species. quantitative and qualitative changes in f3-glucans were followed along leaf development f3glucan analysis by HP AEC-P AD revealed that the ratio tri:tetrasaccharides increased in leaves longer than 30cm. These observations indicate that proportionally more f3-(1 _3) linkages are made during development, suggesting that more soluble and possibly less interactive f3-glucans are made in the wall during leaf expansion. Than at the end of the growth period / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maria Lucia Furlan Wada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T21:22:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lombello_ChristianeBertachini_D.pdf: 22570702 bytes, checksum: 65a6a844469f7dad818b6d7dcfb82610 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Para estabelecer um sistema de cultura em que seja mantida a diferenciação de determinado tipo celular, é interessante que as relações célula-substrato sejam semelhantes às interações que ocorrem in vivo entre as células e a matriz extracelular. Neste trabalho foi analisada a influência de hidrogéis à base de metacrilato de hidróxi etila (HEMA) sobre células fibroblásticas e condrócitos em cultura. Comparamos os resultados obtidos com as células cultivadas sobre o poliHEMA e células cultivadas sobre copolímero poli(HEMAco-AA) e blenda de poliHEMA-poli(MMA-co-AA). Este trabalho foi realizado em duas etapas, primeiramente com células fibroblásticas, e posteriormente foi realizada a cultura primária de condrócitos. Os trabalhos com as células Vero incluíram análises quantitativas e morfológicas da adesão das células sobre amostras densas e porosas dos hidrogéis citados. Os hidrogéis não favoreceram a adesão celular, no entanto permitiram a proliferação das células aderidas. As células observadas 2 horas após a adesão apresentavam morfologia diferenciada, menos achatadas e com menos prolongamentos. Após 10 dias em cultura as células perderam a inibição por contato, crescendo em múltiplas camadas com morfologia diferenciada, menos achatada. As células localizadas no interior dos poros dos hidrogéis apresentaram morfologia arredondada. Os resultados obtidos para as blendas foram mais evidentes no aspecto quantitativo de adesão e também no aspecto da diferenciação da morfologia celular. Comparando os resultados obtidos com hidrogéis densos e porosos observamos que a estrutura porosa favoreceu a manutenção de diferenciação celular. Para as culturas primárias de condrócitos realizamos análises morfológicas da proliferação das células sobre os hidrogéis de estrutura porosa. Os condrócitos mantiveram a morfologia arredondada quando cultivados sobre as blendas, hidrogel que se mostrou mais eficiente na manutenção de condrócitos diferenciados em cultura. Concluímos que a blenda porosa de poliHEMA-poli(MMA-co-AA) é um hidrogel capaz de manter condrócitos em cultura com sua morfologia diferenciada. Estes resultados sugerem a possibilidade de aplicação deste hidrogel no reparo de defeitos da cartilagem articular / Abstract: To establish a culture system that maintains the differentiation of specific cells the interactions between cell and substrate has to mimic the interactions between cells and extracellular matrix in vivo. We analyzed the influence of hydroxy ethyl methacrylate (REMA) substrates on tibroblastic cells and chondrocytes in culture. We compared the results from cells cultured on polyHEMA with those obtained from cells cultured on the copolymer (poly (REMA-co-AA)) and on the blend (polyHEMA-poly (MMA-co-AA)). We used tibroblastic cells and chondrocytes to analyze the polyHEMA hydrogels as culture substrates. The tibroblastic cells, from Vero lineage, were cultured on dense and porous samples of the hydrogels. The hydrogels did not favor the cell adhesion, but allowed the proliferation of adhered cells. The cells showed morphological differentiation afier 2 hours in culture, they were less flattened and showed fewer prolongations. Afier 10 days of culture the cells grown on the hydrogels lost the inhibition by contact and grown in multiple layers with a differentiated morphology, less flattened. The cells inside hydrogel pores showed a rounded morphology. The results obtained for the adhesion and proliferation assays of cells cultured on the blend were more pronounced than those obtained for polyHEMA. We ana1yzed the morphology of chondrocytes cultured on porous hydrogels. The chondrocytes maintained the rounded morphology when cultured on the blend, specially the cells located inside the pores. We concluded that the blend of polyHEMA-poly (MMA-coAA) maintained morphological differentiated chondrocytes in culture. These results suggest a possible application of this hydrogel in the repair of articular cartilage / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Antonio Fernando Martorelli de Lima / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-28T04:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Palioto_DanielaBazan_D.pdf: 2504166 bytes, checksum: 52e0762b51537a46a411499bc0275b40 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O conhecimento das diferenças morfológicas e proliferativas de fibroblastos do ligamento periodontal (FLP) e fibroblastos gengivais (FG) são fundamentais para o melhor entendimento do papel destas células nos eventos de homeostasia, doença e regeneração periodontal. O primeiro objetivo desse estudo foi comparar as características morfológicas, o potencial proliferativo e a síntese protéica de FLP e de FG. Os fibroblastos foram cultivados pela técnica do explante a partir de fragmentos gengival e do ligamento periodontal de um mesmo paciente. As células foram isoladas e plaqueadas para análise em microscopia de contraste de fase e microscopia óptica. O índice de proliferação celular foi determinado por contagem automática de células nos dias 1, 4, 7, 15 e 21 e pelo ensaio de incorporação de bromodioxiuridina (BrdU). A síntese de proteína total foi verificada por eletroforese em gel de poliacrilamida e zimografia. Os resultados mostraram que FLP são maiores e mais alongados que os FG em condições de subconfluência e confluência celular. Os FLP proliferam mais rapidamente que os FG nos períodos de 1, 4 e 7 dias (P<0,05). Nos períodos subsequentes de 15 e 21 dias, não houve diferença estatística significativa entre o número de células do dois tipos celulares. O índice de incorporação de BrdU demonstrou potencial proliferativo de 65,1 .:t 11,0 % para FLP e 41,2.:t 17,1% para FG (P<0,05). A síntese de proteína total verificada em nosso experimento no período de 24 horas mostrou resultados similares para FLP e FG. Nossos resultados demonstraram que FLP e FG são diferentes na morfologia e na capacidade proliferativa, porém são semelhantes na síntese protéica. O segundo objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da matriz protéica do esmalte (EMD), do fator de crescimento insulina-símile (IGF-I) e da associação dos dois fatores sobre o potencial proliferativo e a capacidade de adesão e migração celular de fibroblastos do ligamento periodontal humano. Esse estudo foi conduzido utilizando a análise de proliferação por contagem automática de células (Coulter Counter_ / Abstract: The knowledge of morphological and proliferative differences between Gingival Fibroblasts (GF) and Periodontal Ligament Fibroblast (PDL) is essential to understand the role of each cell on the homeostasis, disease process and regeneration Df the periodontium. The first objective of this study was to compare the PDL and GF morphology, proliferation rate and protein synthesis. PDL and GF were explanted from tissues Df the same patients. To characterize and compare the cells morphology, PDL and GF were plated for optical and phase contrast microscopy. The proliferation rates were determined by automated count at days 1, 4, 7, 15 and 21, and by Bromodeoxyuridine Labelling Index (BrdU). The total protein content was analyzed by means of electrophoresis in 10% polyacrylamide gel and zimography containing gelatin as substrate. PDL were greater and more elongatOO than GF in subconfluence and confluence conditions. The proliferative rate Df PDL was higher than GF at 1, 4, and 7 days (P < 0.05). At 15 and 21 days there was no statistically significant difference between cells number. The BrdU Index demonstrated a proliferative potential Df 65.1 ! 11.0 % for PDL and 41.2 :t 17.1 % for GF (P < 0.05).The synthesis of protein in a period of 24 hours was similar for both PDL and GF. Our results demonstrated that PDL and GF are different in morphology and in proliferative capacity, however, they do not differ in protein synthesis. The second objective of the present study was to evaluate the effects of the enamel matrix protein (EMD) the effects of Insulin growth factor-I (IGF-I) and the association of the these two factors on periodontal ligament fibroblasts. The study was based on the proliferation rate, and cellular attachment and migration. The proliferation rate was determined by counting the cells afier 1, 3, 7 and 10 days with the help of a automated counter (Coulter Counter). The cellular attachment was analyzed by means of colorimetric assays. Migration assays was performed in Boyden chambers for a period of 4h and analyzed by means of colorimetric assays. EMD has significantly raised the proliferation rate from a minimum concentration of 50 uglml up to maximum concentration of 200 uglml in a 24h period. The proliferation rate continuing to be raised in a period of 3,7 and 10 days (P < 0.05). IGF-I has not altered the proliferation rate at any concentration. The association of EMD + IGF-I raised the proliferation rate independently of the concentration. However, the association has not resulted on further significant effect when compared to the use of EMD alone. The cellular attachment and migration was not altered by EMD, IGF-I or EMD + IGF-I. Our results showed that EMD increased the proliferation rate of PDL but did not improve cellular attachment and migration. IGF-I did not raise neither the proliferation rate no r the cellular attachment and migration and did not have any additional effect on the EMD alone / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador : Irene Lorand-Metze / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T08:47:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_GislaineBorba_M.pdf: 1136616 bytes, checksum: 39ae5f174c71eaaa0994339452586771 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A leucemia linfóide crônica apresenta grande variabilidade na sua apresentação e evolução clínica, bem como, na sua resposta ao tratamento. Estudando a apoptose destas células in vivo, observou-se que ela se encontra bloqueada, o que não ocorre após a cultura a curto prazo, onde este processo acontece espontaneamente. Neste estudo, avaliamos o grau de apoptose in vitro e suas interações com alguns parâmetros clínicos e laboratoriais. Foram avaliados a idade, o estádio clínico segundo os critérios de Rai e Binet, índice de massa tumoral (TTM) e os seguintes parâmetros laboratoriais: hemoglobina (g/dl), contagem de leucócitos, linfócitos e plaquetas (/l ), a porcentagem de células com cluster de AgNOR, a porcentagem de células positivas para a Anexina V, o índex e o número absoluto de células CD8 positivas. A apoptose foi medida através da técnica da Anexina V e a taxa de proliferação através da técnica das AgNORs. Houve correlação inversa entre a porcentagem de células positivas para a Anexina V e a contagem de linfócitos periféricos (r=-0,49), com o estádio de Rai (r=-0,40), com o estádio de Binet (r=-0,50), com com o TTM (r=-0,51) e com a porcentagem de células com um cluster de AgNOR (r=-0,45). As correlações diretas ocorreram com os valores de hemoglobina (r=0,34) e de plaquetas (r=0,52). O número de células CD8 positivas mostrou correlação com a contagem de linfócitos periféricos (r=0,49). Quando esta variável foi mantida constante, foi possível detectar uma correlação entre a contagem de células CD8 positivas e o estádio clínico (r=-0,47), com o TTM (r=-0,42) e com a contagem de plaquetas (r=0,67). Os linfócitos CD4 positivos apresentaram uma correlação somente com os linfócitos CD8 positivos. Na análise de clusters, foi possível a criação de três grupos de pacientes com diferentes taxas de apoptose, utilizando os valores do TTM e dos clusters de AgNOR. Portanto, nos foi permitido concluir com este trabalho que, com a progressão da doença, ocorre o aumento da massa tumoral e da taxa de proliferação paralelalmente ao aumento da susceptibilidade à apoptose / Abstract: Chronic lymphocytic leukemia (CLL) presents considerable variability in clinical presentation as well as in its evolution. In contrast to the inhibition of apoptosis in vivo, spontaneous apoptosis after short-term culture occurs. We studied the degree of this apoptosis in vitro, and its interactions with several clinical and laboratory parameters. Apoptosis was measured by the annexin V technique. Proliferation rate was evaluated by the AgNOR (nucleolar organizer regions) technique. There were inverse correlations between the percentage of annexin V-positive cells and peripheral lymphocyte count (r=-0,49), Rai stage (r=-0,40), Binet stage (r=-0,50) , TTM (total tumor mass score; r=-0,51), and percentage of cells with one AgNOR cluster (r=-0,45). Direct correlations were found with hemoglobin values (r=0,34) and platelet counts (r=0,52). The number of CD8positive cells showed a correlation with perIpheral lymphocyte count (r=0,49). When this variable was held constant, a correlation was detected between CD8-positive cells and staging (r=-0,47), TTM (r=-0,42), and platelet count (r=0,67). CD4-positive lymphocytes presented a correlation only with CD8-positive lymphocytes. In a cluster analysis, it was possible to create three groups of patients with different apoptosis rate using the TTM and AgNOR values. We conclude that, with the progression of the disease, together with the increase of tumor mass and proliferation rate, there is a decrease in the susceptibility to apoptosis / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica