Orientador: Iêda Maria Begnini. / Dissertação (Mestrado em Química) - Programa de Pós-Graduação em Química, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Universidade Regional de Blumenau, Blumenau.

Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: João Clóvis do Prado Júnior / Banca: Márcia Aparecida Sperança / Banca: Mara Cristina Pinto / Banca: Vera Lucy de Santi Alvarenga / Resumo: Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado causador da doença de Chagas que, segundo estimativas da OMS afeta 16-18 milhões de pessoas na América Latina, causando danos sociais extremamente graves. A doença apresenta formas clínicas variadas que incluem a forma indeterminada, cardiomiopatia e alterações digestivas. Variações intraespecíficas nas diferentes cepas de Trypanosoma cruzi estudadas foram demonstradas em nível morfo-biológico, bioquímico e genético. Essa heterogeneidade poderia explicar a variabilidade nas manifestações clínicas da doença de Chagas e as diferenças regionais de sua morbidade. Com o objetivo de caracterizar quatro cepas de Trypanosoma cruzi isoladas de pacientes chagásicos crônicos, residentes na região de Araraquara - SP, parâmetros biológicos e moleculares foram avaliados. Para estudar o comportamento biológico das cepas, três grupos de camundongos Swiss, não isogênicos, pesando 10-12g foram infectados com formas sangüíneas das cepas em estudo. Foram avaliados os seguintes aspectos: período pré-patente, curvas de parasitemia, morfologia do parasita no sangue periférico, taxas de mortalidade e lesões histopatológicas. Três cepas apresentaram parasitemia patente com períodos pré-patentes variáveis, baixa parasitemia e formas tripomastigotas largas durante todo o curso da infecção. Uma cepa apresentou parasitemia sub-patente. Nenhum animal morreu durante o período do estudo. Exame histopatológico mostrou ninhos de formas amastigotas no coração de animais infectados para duas cepas e inflamação em vários órgãos para todas as cepas. Para a caracterização molecular o DNA do parasita foi extraído de formas epimastigotas mantidas em meio LIT. Parte do espaçador não transcrito do gene de mini-exon foi amplificado por PCR. Todas as cepas geraram produtos com 250 pb. Os dados biológicos e moleculares permitiram a classificação de todas as cepas como T.cruzi II. / Abstract: Trypanosoma cruzi is a flagellate protozoan agent of Chagas disease that, according to the OMS estimation, affect 16-18 milion of people in Latin America, making serious social damage. The illness shows varied clinicals forms that include indeterminate form, cardiomiopathy and digestive alterations. Intra-specific variations among differents Trypanosoma cruzi strains studied have been demonstrated on morpho-biological, genetic and biochemical levels. Such heterogeneity can explain the variability of Chagas disease in clinical manifestations and in the regional differences of the morbidity rate. This research has the objective to characterize four strains of Trypanosoma cruzi isolated from humans patients, residents in Araraquara - SP region, by evaluating biological and molecular parameters. In order to study the biological behavior of Trypanosoma cruzi strains, three groups of albino Swiss mice, weighting 10-12g were intraperitoneally inoculated with bloodstreams forms of the strains in study. Pre-patent period, parasitaemia patterns, tripomastigote morphology, mortality rate and tissue distribution of the protozoan were analysed. Three strains showed patent parasitemy with variable pre-patent period, low parasitemy and broad forms during the whole infection period. One strain showed sub-patent parasitemy. Mortality rates were null. Histopathological analysis showed amastigotes forms in heart for two strains and inflamatory process in several organs for all the strains. For the molecular characterization, the parasite DNA was extracted from epimastigotes forms kept in LIT medium. Part of the non-transcribed spacer of the mini-exon gene was amplified by PCR. All the strains generated products with 250 pb. The molecular and biological informations allowed to classify all the strains as T.cruzi II. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-25Bitstream added on 2014-08-13T18:01:07Z : No. of bitstreams: 1 000739020.pdf: 876211 bytes, checksum: 9bad2f7fc2c7256615bfb792f07281b1 (MD5) / Este estudo teve como objetivo estimar o número de casos de reações sorológicas não-negativas para doença de Chagas em doadores de sangue do Hemocentro de Botucatu, São Paulo - Brasil de 2003 a 2010 e, relaciona-las com as suas cidades de origem. Quinhentos e setenta e quatro reações sorológicas não-negativas para doença de Chagas foram avaliados. Destes, 371 eram reagentes (64,8%), e 203 inconclusivas (35,4%). Houve, em média, 72 casos/ano, e uma prevalência do sexo masculino foi observada (64,8%). Quarenta e três indivíduos (7,49%) tinham entre 18 e 30 anos, 92 (16,02%) de 31 a 40; 147 (25,61%) 41 a 50, e 292 (50,87%) tinham mais de 50 anos. Observou-se que 29.3% das mulheres com sorologia reagente estavam em idade fértil (18 e 45 anos). A maioria dos doadores eram naturais de cidades das regiões sudoeste e central da cidade de São Paulo, mas os indivíduos de outros estados contribuíram com 20%. A procedência da maioria dos doadores era a cidade de Botucatu/SP, seguido pela cidade de Taquarituba/SP. Portanto, o perfil de doadores de sangue neste hemocentro favorece a ocorrência de um número maior de reações sorológicas não-negativas. Embora tenha havido uma redução significativa no número de casos novos/ano para esta doença, ainda é um problema de saúde pública, e os resultados sugerem a necessidade de novas avaliações epidemiológicas na região estudada / This study aimed at estimating the number of cases of non-negative serological reactions to Chagas disease in blood donors at the Blood Center of Botucatu, São Paulo – Brazil from 2003 to 2010 and at relating them to their cities of origin. Five hundred and seventy-four non-negative results for Chagas disease were evaluated. Of these, 371 (64.8%) were reagent, and 203 (35.4%) were inconclusive. There were, on average, 72 cases/year, and a prevalence of males was observed (64.8%). Forty-three (7.49%) individuals were 18 to 30 years old; 92 (16.02%) were 31 to 40; 147 (25.61) 41 to 50, and 292 (50.87%) were older than 50 years. It was observed that 29.3% of females with reagent serology were at their fertile age (18 and 45 years). The majority of donors were originally from cities in the southwestern and central regions of São Paulo, but individuals from other states contributed with 20%. The provenance of most donors was the city of Botucatu/SP, followed by the city of Taquarituba/SP. Therefore, the profile of donors at this blood center favors the occurrence of a larger number of non-negative serological reactions. Although there has been a significant reduction in the number of new cases/year for this disease, it is still a public-health problem, and results suggest the need for new epidemiological assessments in the studied region

Orientador: João Aristeu da Rosa / Coorientador: Sergio de Albuquerque / Banca: Mara Cristina Pinto / Banca: Carlos Eugenio Cavasini / Banca: Ana Amélia Carraro Abrahão / Banca: Maria Tercilia Vilela Azeredo de Oliveira / Resumo: A atividade de 92 extratos etanólicos de espécies de Annonaceae, Apiaceae, Cucurbitaceae, Lauraceae, Moraceae, Nyctaginaceae, e Verbenaceae foi avaliada sobre formas epimastigotas das cepas Y e Bolívia de Trypanosoma cruzi, nas concentrações de 500, 350, 250 e 100 µg/ml. Quinze extratos de Lippia salviaefolia, L. sidoides, L. laciocalycina, L. lupulina, L. balansae, L. velutina e suas frações hexânicas, de acetato de etila, n-butanólicas e aquosas foram avaliados sobre formas epimastigotas do clone B5 da cepa CL Brener de T. cruzi, nas concentrações de 32, 8, 2 e 0,5 µg/ml. Adicionalmente, as amostras mais promissoras de Lippia sp foram avaliadas, in vitro, sobre as formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi e, in vivo, em camundongos BALB/c. A citotoxicidade foi avaliada em fibroblastos da linhagem LLCMK2 e o benzonidazol foi utilizado como controle positivo. Todos os 92 extratos etanólicos, testados sobre as formas epimastigotas da cepa Y de T. cruzi, foram inativos. Os melhores resultados entre as 92 amostras avaliadas foram obtidos com o extrato etanólico de Ocotea paranapiacabensis, por apresentar atividade tripanocida sobre as formas epimastigotas da cepa Bolívia e toxicidade moderada, e com o extrato de Aegiphilla lhotzkyana, que demonstrou atividade tripanocida moderada sobre a cepa Bolívia e moderada citotoxicidade. Dentre os extratos etanólicos de Lippia sp avaliados, o de folhas de L. velutina apresentou a maior atividade tripanocida sobre as formas epimastigotas e toxicidade moderada, mas foi inativo contra as formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi. Os melhores resultados foram obtidos da sua fração de acetato de etila que apresentou atividade, sobre formas epimastigotas, 42 vezes maior do que o benzonidazol, com Índice de Seletividade (IS) de 371,0, além de atividade moderada sobre as formas tripomastigotas. Esta amostra foi inativa contra... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trypanocidal activity of 92 ethanol extracts of species of Annonaceae, Apiaceae, Cucurbitaceae, Lauraceae, Moraceae, Nyctaginaceae, and Verbenaceae was evaluated using the epimastigote forms of the Y and Bolivia strains of Trypanosoma cruzi at a concentration of 500, 350, 250, and 100 µg/ml. Fifteen extracts of Lippia salviaefolia, L. sidoides, L. laciocalycina, L. lupulina, L. balansae, L. velutina, their liquid-liquid extraction fractions of hexane, ethyl acetate, n-butanol and water were evaluated using the epimastigote forms of B5 clone of CL Brener strain of T. cruzi at a concentration of 32, 8, 2, 0.5 µg/ml. Additionally, samples of the most promising of Lippia sp were evaluated, in vitro, using trypomastigote and amastigote forms of T. cruzi and, in vivo, in BALB/c. The cytotoxic activity was evaluated on fibroblasts of lineage LLCMK2 and benznidazole was used as positive control. All the 92 ethanol extracts tested against epimastigote forms of the Y strain of T. cruzi are inactive. The best results among the 92 samples evaluated were obtained with ethanol extracts of Ocotea paranapiacabensis, for showing trypanocidal activity against epimastigote forms of the Bolivia strain and being moderately toxic, and the extracts of Aegiphilla lhotzkyana, which showed moderate trypanocidal activity against the Bolivia strain and moderate toxicity. Among the 15 ethanol extracts of Lippia sp assayed, the one from of leaves of L. velutina showed the highest trypanocidal activity on epimastigote forms and moderate toxicity, but was inactive against trypomastigote and amastigote forms of T. cruzi. Best results were obtained for its ethyl acetate fraction, which showed activity in epimastigote forms, 42 times more than benznidazole, with Selectivity Index (SI) of 371.0 and moderate activity on trypomastigote forms. This sample was inactive against the amastigote forms of the parasite... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Carlos Eduardo Almeida / Banca: Aline Rimoldi Ribeiro / Banca: Luis Lênin Vicente Pereira / Resumo: A taxonomia e a sistemática dos triatomíneos baseiam-se, principalmente, em caracteres morfológicos. No entanto, existem espécies muito semelhantes ou até mesmo idênticas (espécies crípticas) do ponto de vista morfológico. Dessa forma, novas abordagens são necessárias para caracterizar um táxon e análises citogenéticas têm se mostrado como importantes ferramentas para a caracterização taxonômica e o conhecimento evolução desses vetores. Assim, o presente trabalho teve como objetivos principais: caracterizar os subcomplexos Brasiliensis, Rubrovaria, Matogrossensis, Maculata e Rubrofasciata; auxiliar na revalidação de Triatoma bahiensis; avaliar o status específico de Rhodnius montenegrensis, Rhodnius sp. (afim de R. neglectus), T. pintodiasi, T. lenti e T. sherlocki; analisar a relação evolutiva da tribo Rhodniini; caracterizar o fenômeno de persistência nucleolar na subfamília Triatominae e analisar a variabilidade genética intraespecífica de T. sordida proveniente do Brasil. Os resultados obtidos permitiram caracterizar citogeneticamente as espécies do subcomplexo Brasiliensis; revalidar T. bahiensis e corroborar que essa espécie, bem como T. lenti e T. petrocchiae são membros do subcomplexo Brasiliensis; corroborar o status específico de T. lenti, T. sherlocki e T. bahiensis pela presença de barreira de isolamento reprodutivo pós-zigótica (desmoronamento do híbrido); sugerir que durante a muda imaginal, os triatomíneos cessam a meiose e estimulam a espermiogênese para... / The taxonomy and systematics of triatomines are mainly based on morphological characters. However, there are very similar or even identical species (cryptic species) from the morphological point of view. Thus, new approaches are necessary to characterize a taxon and cytogenetic analyzes have been shown as important tools for the taxonomic characterization and the evolutionary knowledge of these vectors. Thus, the main objectives of this study were: characterize the Brasiliensis, Rubrovaria, Matogrossensis, Maculata and Rubrofasciata subcomplexes; assist in the revalidation of Triatoma bahiensis; evaluate the specific status of Rhodnius montenegrensis, Rhodnius sp., T. pintodiasi, ... / Doutor

Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Maria Tercilia Vilela de azeredo Oliveira / Banca: Carlos Eduardo de Almeida / Banca: Marcos Takashi Obara / Banca: Sergio de Albuquerque / Resumo: A doença de Chagas apresenta como agente etiológico o protozoário Trypanosoma cruzi, cujos vetores pertencem à subfamília Triatominae. Triatomíneos são insetos sugadores de sangue (ordem Hemiptera e família Reduviidae), distribuídos, principalmente, na região Neotropical e, epidemiologicamente, se destacam espécies dos gêneros Panstrongylus, Rhodnius e Triatoma. O gênero Rhodnius apresenta alta semelhança morfológica entre suas espécies e o gênero Triatoma é o mais diversificado, porém ambos foram agrupados em complexos de espécies, com base em semelhanças morfológicas, distribuição geográfica, abordagens genéticas, entre outros. Para alguns complexos de espécies os caracteres morfológicos não são suficientes para a identificação específica correta. Portanto, as ferramentas moleculares são apresentadas como uma alternativa útil para a identificação de espécies relacionadas. Este estudo visou contribuir para a identificação de três grupos de espécies de triatomíneos, por meio do desenho de novos primers diagnósticos para compor uma multiplex-PCR: o primeiro grupo é composto por quatro espécies de Rhodnius: R. neglectus, R. robustus, R. prolixus e R. pictipes; os segundo e terceiro grupos apresentam espécies do gênero Triatoma: T. maculata e T. pseudomaculata; e T. tibiamaculata, T. melanocephala e T. vitticeps. Além disso, avaliaram-se as relações filogenéticas com as sequências resultantes. Após extração do DNA mitocondrial (16S, Cytb e COI) e DNA nuclear (ITS1 e ITS2) genes foram amplificados e sequenciados. Para diagnosticar as espécies do gênero Rhodnius, os primers referentes ao Cytb foram eficientes para compor uma multiplex-PCR, que se separou R. prolixus, R. neglectus, R. pictipes e R. robustus. Da mesma forma, os primers desenhados para o fragmento 16S distinguiram T. tibiamaculata, T. melanocephala... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease presents as etiologic agent the protozoan Trypanosoma cruzi, whose vectors belong to the Triatominae subfamily. Triatomine bugs are bloodsucking insects (belonging to the Hemiptera order and Reduviidae family), which are distributed predominantly at the Neotropical region and epidemiologically stand the species belong Panstrongylus, Rhodnius and Triatoma genera. The Rhodnius genus shows high morphological similarity among their species, as the Triatoma genus is the most numerous, however both were grouped into species complexes, according to morphological similarities and geographical distribution, genetic approaches, and others. For some species complexes morphological characters are not enough to make the correct specific identification. Therefore, molecular tools are presented as an useful alternative to identify closely related species. This study aimed to contribute to the identification of three groups of Triatominae species by the design of new diagnose primers for multiplex-PCR: the first group consists of four species of Rhodnius genus: R. neglectus, R. robustus, R. prolixus and R. pictipes; the second and third groups comprise Triatoma species: T. maculata, and T. pseudomaculata; and T. tibiamaculata, T. melanocephala and T. vitticeps. Additionally, we evaluated the phylogenetic relationships with the resulting sequences. After DNA extraction, mitochondrial (16S, Cytb and COI) and nuclear DNA (ITS1 and ITS2) genes were amplified and sequenced. To diagnose Rhodnius species the primers for the fragment of Cytb were efficient, by using a multiplex-PCR that separated R. prolixus, R. neglectus, R. robustus and R. pictipes. Similarly, the primers designed for the 16S fragment distinguished T. tibiamaculata, T. melanocephala and T. vitticeps. For T. maculata and T. pseudomaculata no one of the tested candidate primers showed satisfactory results... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-12-08T16:15:21Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JoeMCBocanegra.pdf: 5727987 bytes, checksum: 4b05bdb2998997c42d7f1f238641702d (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-16T15:34:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JoeMCBocanegra.pdf: 5727987 bytes, checksum: 4b05bdb2998997c42d7f1f238641702d (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-16T15:34:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JoeMCBocanegra.pdf: 5727987 bytes, checksum: 4b05bdb2998997c42d7f1f238641702d (MD5) / Esse trabalho teve como objetivo estudar a parasitemia e sua possível associação com a evolução da doença de Chagas crônica. Foram incluídos no trabalho 124 pacientes com infecção chagásica crônica do projeto Mambaí que tinham seis sorologias positivas feitos em 1975/76. Esses pacientes realizaram exame clínico, eletrocardiográfico e xenodiagnóstico artificial em 2007. Foram utilizados também nesse trabalho o exame clinico, eletrocardiográfico, esofagograma, xenodiagnóstico e enema opaco feitos em períodos anteriores. O estudo da parasitemia em 2007 baseou-se em um único xenodiagnóstico artificial, utilizando 40 ninfas de D. maximus de primeiro estágio. Cada cinco insetos dissecados constitui um “pool”. De acordo com o percentual de “pools” positivos, os indivíduos foram classificados com parasitemia ausente, parasitemia baixa (0,1-19,9%), parasitemia media (20 a 50%) e parasitemia alta (50,1-100%). Deste modo houve 105 (84,7) com parasitemia ausente, seis (4,8%) indivíduos classificados com parasitemia baixa, 12 (9,7%) com média e um (0,8%) com alta. Também foi caracterizada a tendência da parasitemia que foi definida como decrescente, quando a parasitemia diminuiu, constante quando não houve mudança e crescente quando houve aumento no nível de parasitemia, em relação aos exames feitos em 1976/78. Nesses 124 pacientes o nível de xenopositividade caiu de 70,1% (87/124) em 1976/78 para 15,3% (19/124) em 2007. Dos 19 pacientes xenopositivos, sete permaneceram no mesmo nível, nove elevaram e três baixaram o nível de parasitemia. Sessenta e sete (54%) pacientes apresentaram eletrocardiogramas normais. As alterações eletrocardiográficas mais freqüentes foram: alterações de repolarização ventricular (29,8%), extrassístoles ventriculares (17,7%), bloqueio completo de ramo direito (16,9%), hemibloqueio anterior esquerdo (9,7%) e bloqueio AV de 1º grau (5,6%). Dos 124 pacientes com infecção chagásica, houve 57 (45,9%) com a forma cardíaca. Destes, 45 tiveram evolução progressiva, sendo que 38 desenvolveram cardiopatia e sete agravaram a cardiopatia preexistente em 1975/76. A evolução para cardiopatia aumentou ao longo dos anos e 78,9% desenvolveram o estádio C-I e C-II de cardiopatia, isto é, uma doença leve a moderada. Uma vez instalada a cardiopatia progride lentamente. O estudo evolutivo da forma digestiva foi feita pelos esofagogramas realizados em 1975/76, e 1988 e pelo enema opaco feito em 2002. Também levou-se em conta o sintoma obstipação e considerou-se como tendo colopatia os indivíduos com seis ou mais dias de obstipação. Foram considerados 30 (24,2%) pacientes com a forma digestiva e 28 tiveram evolução progressiva. O estudo mostrou que os 19 pacientes xenopositivos em 2007, tiveram percentual de evolução clinica semelhante aos 105 indivíduos xenonegativos. Mostrouse ainda que pacientes com parasitemia ausente, média e baixa tenderam a evolução progressiva similar. Houve tendência de evolução progressiva maior naqueles com perfil de parasitemia decrescente. Neste estudo o xenodiagnóstico, bem como o nível de parasitemia e o perfil de parasitemia não influenciaram na evolução da doença de Chagas. / The purpose of this research was to identify potencial relationships between the parasitaemia and the evolution of Chagas’s chronic disease. Patients with chronic Chagas infection were included from Mambaí Project Research. They had been detected with six positive Chagas serologic test at 1975/76. One hundred and twenty-four patients had clinical, electrocardiographic and artificial xenodiagnosis evaluations at 2007; and also, they used esophagogram and doble contrast enema of colon performed in previous periods. In 2007, the study of parasitaemia was based on a single artificial xenodiagnosis using 40 nymphs at first stage of D. Maximus. A group of five intestinal contents of insects were considered a “pool”. According to the percentage of positive "pools", patients were classified with absent, low (0.1-19.9%), medium (20 to 50%) and high (50.1-100%) parasitaemia. One hundred and five (84.7%), six (4.8%), 12 (9.7%) and one (0.8%) patients had absent, low, medium and high parasitaemia, respectively. Also the parasitaemia’s trend was characterized. It was defined as: decreased when parasitaemia declined, constant when not change occurred and increased when the parasitaemia’s level ascended, all in relation with 1976/78 parasitaemia testing. In those 124 patients, xenodiagnosis’s positive level fell from 70.1% (87/124) in 1976/78 to 15.3% (19/124) at 2007. Among the 19 patients with positive xenodiagnosis, seven remained at the same level, nine increased and three dropped their parasitaemia’s level. Sixty-seven (54%) patients had normal electrocardiograms. The most frequent electrocardiographic abnormalities were: alterations in ventricular repolarization (29.8%), ventricular premature beats (17.7%), complete right bundle branch block (16.9%), left anterior fascicular block (9.7%) and first degree atrio-ventricular block (5.6%). Meanwhile, from the 124 patients with Chagas infection, there were 57 (45.9%) with cardiopathy form. Forty five had progressive evolution, 38 developed heart disease and seven worsen their 1975/76 pre-existing heart disease. Trend for heart disease increased throughout the years and those who developed heart disease, 78.9% did so to CI and C-II stages, considered mild to moderate disease. Once installed heart disease, it progress slowly. Evolution of the digestive form was evaluated through esophagograms made in 1975/76, 1988, and the double contrast enema of colon in 2002. Colon disease was considered if the patient related constipation’s symptom for six or more days. Digestive form was considered in 30 (24.2%) patients, 28 of them had progressive evolution. The research showed that the 19 patients with positive xenodiagnosis, in 2007, had similar clinical evolution percentage than the 105 patients with negative result. It also showed that patients with absent, medium and low parasitaemia tended to evolutes in similar way. There was a trend of higher evolution in those with parasitaemia’s decreased profile. In this research, xenodiagnosis, parasitaemia’s level and parasitaemia’s profile did not influence in the evolution of chronic Chagas’s disease. / Este trabajo tuvo como objetivo estudiar la parasitemia y su posible asociación con la evolución de la enfermedad de Chagas crónica. Fueron incluidos en este trabajo 124 pacientes con infección chagásica crónica del proyecto Mambaí que tenían seis sorologias positivas hechos en 1975/76. Estos pacientes realizaron examen clínico, electrocardiográfico y xenodiagnóstico artificial en 2007. Fueron utilizados también el examen clínico, electrocardiográfico, esofagograma, xenodiagnóstico y enema opaco realizados en periodos anteriores. El estudio de la parasitemia en 2007 se baso en un único xenodiagnóstico artificial, utilizando para ello 40 ninfas de D. maximus de primer estadio. Cada cinco insectos disecados constituyó un “pool”. De acuerdo con el porcentual de “pools” positivos, os individuos fueron clasificados con parasitemia ausente, parasitemia baja (0,1-19,9%), parasitemia media (20 a 50%) y parasitemia alta (50,1-100%). De este modo hubo 105 (84,7) pacientes con parasitemia ausente, seis (4,8%) con baja, 12 (9,7%) con media y uno (0,8%) con alta parasitemia. También fue caracterizada la tendencia de la parasitemia, que fue definida como decreciente, cuando la parasitemia diminuyó, constante cuando no hubo mudanza y creciente cuando hubo aumento en el nivel de parasitemia en relación a los exámenes realizados en 1976/78. En estos 124 pacientes el nivel de xenopositividad cayo de 70,1% (87/124) en 1976/78 para 15,3% (19/124) en 2007. De los 19 pacientes xenopositivos, siete permanecieron en el mismo nivel, nueve elevaron y tres bajaron su nivel de parasitemia. Sesenta y siete (54%) pacientes presentaron electrocardiogramas normales. Las alteraciones electrocardiográficas mas frecuentes fueron: alteraciones de repolarización ventricular (29,8%), extrasístoles ventriculares (17,7%), bloqueo completo de ramo derecho (16,9%), hemibloqueo anterior izquierdo (9,7%) y bloqueo AV de 1º grado (5,6%). De los 124 pacientes con infección chagásica, hubo 57 (45,9%) con la forma cardiaca. De estos, 45 tuvieron evolución progresiva, siendo que 38 desenvolvieron cardiopatía y siete agravaron la cardiopatía preexistente en 1975/76. La evolución para cardiopatía aumentó a lo largo de los años y de los que desenvolvieron cardiopatía el 78,9% lo hicieron para los estadios C- I y C-II, considerada una enfermedad leve a moderada. Una vez instalada la cardiopatía progresa lentamente. La evolución de la forma digestiva fue evaluada por los esofagogramas realizados en 1975/76, 1988, y por el enema opaco en el 2002. También se tomó en consideración el síntoma estreñimiento. Compromiso colónico fue considerado si el paciente refería seis o mas días de estreñimiento. Fueron considerados 30 (24,2%) pacientes con la forma digestiva, de los cuales 28 tuvieron evolución progresiva. El estudio mostró que los 19 pacientes xenopositivos en el 2007, tuvieron un porcentaje de evolución clínica semejante a los 105 individuos xenonegativos. Se mostró también que pacientes con parasitemia ausente, media y baja tendieron a la evolución progresiva similar. Hubo tendencia de evolución progresiva mayor en aquellos con perfil de parasitemia decreciente. En este estudio, el xenodiagnóstico, bien como el nivel de parasitemia y el perfil de parasitemia no influyeron en la evolución de la enfermedad de Chagas.

Orientador: Sueli Aparecida Calvi / Resumo: A doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi), é uma doença negligenciada e considerada um grave problema de saúde pública. A sua evolução no individuo infectado ocorre em duas fases distintas: a fase aguda que dura de 2 a 4 meses, caracterizada pela alta parasitemia, mas ausência de sinais e sintomas específicos, o que dificulta sua detecção, e a fase crônica na qual a maioria dos indivíduos é diagnosticada. Nessa fase, uma boa parte dos indivíduos apresenta a forma indeterminada ou assintomática da doença. No entanto, cerca de 30 a 40% dos indivíduos infectados desenvolvem a DC sintomática, que pode se apresentar na forma de doença cardíaca ou doença digestiva. Um dos desafios mais importantes no estudo da DC é a determinação dos mecanismos relacionados à resposta imune do hospedeiro que levam a essas diferentes apresentações clinicas. A resposta imune celular via liberação das citocinas pró-inflamatórias como IFN-y, TNF-α e IL-17 é considerada determinante na resistência do hospedeiro. No entanto, um fino controle da liberação dessas citocinas deve ocorrer para que a resposta não se intensifique ou não se perpetue e resulte em lesão tecidual, o que ocorre através da ativação de citocinas anti-inflamatórias como a IL-10 e o TGF-y. Esse controle de resposta seria responsável pelo não aparecimento de sintomas nos indivíduos com doença de Chagas assintomática. Os receptores de reconhecimento padrão (PRRs), particularmente os Toll-Like Receptors... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease (CD), caused by the protozoan Trypanosoma cruzi (T. cruzi), is a neglected disease and considered a serious problem of public health. Its evolution in a infected host occurs in two distinct stages: the acute stage which lasts 2 to 4 months and is characterized by high parasitemia, but no detection of specific signs and symptoms, which difficult its detection, and the chronic stage in which most individuals are diagnosed. At this second stage, most individuals present the indeterminate or asymptomatic chronic disease. However, about 30 to 40% of them become symptomatic and present the cardiac or digestive disease. One of the most important challenges in the CD study is to determine the mechanisms related to the host immune response that lead to these different clinical manifestations. The cellular immune response characterized by the release of pró-inflammatory cytokines such as IFN-y, TNF-α and IL-17 is considered crucial in host resistance. However, it is suggested that a fine control of this response must occur in order to avoid a perpetuated inflammatory process which results in tissue injury. This control was found to be responsible by the absence of clinical symptoms in individuals with the indeterminate chronic form and depends on activation of anti-inflammatory cytokines such as IL-10 and TGF-β. The pattern recognition receptors (PRRs), particularly the Toll-Like Receptors (TLRs) are extremely important in defining the cytokine profile that will be relea... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-12T19:52:37Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InfluênciaVariabilidadeGenética.PDF: 16224264 bytes, checksum: 2ed133aebe11fb0ace36d30c69aa6fa9 (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-15T15:58:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InfluênciaVariabilidadeGenética.PDF: 16224264 bytes, checksum: 2ed133aebe11fb0ace36d30c69aa6fa9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-15T15:58:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InfluênciaVariabilidadeGenética.PDF: 16224264 bytes, checksum: 2ed133aebe11fb0ace36d30c69aa6fa9 (MD5) Previous issue date: 2007 / A variabilidade genética do Trypanosoma cruzi parece correlacionar-se a algumas variáveis da doença como tropismo tecidual, infectividade e resistência a drogas. Neste estudo, clones das linhagens do T. cruzi I (Gamba cl1 e SP104 cl1 - genótipo 19) e (Cuica cl1 e P209 cl1 - genótipo 20), e do T. cruzi II (Bug2148 cl1 e MN cl2 - genótipo 39) e (MVB cl8 e IVV cl4 - genótipo 32) foram avaliadas quanto à capacidade de gerar reativação da doença crônica em camundongos imunossuprimidos com ciclofosfamida (Cy) e ainda, se o tratamento prévio com o fármaco benznidazol (Bz) previniria esta recrudescência clone-específica. Entre os clones de ambas as linhagens do T. cruzi não houve alteração no perfil da curva de parasitemia nos animais infectados. Porém, após o protocolo de imunossupressão com Cy, no final da fase aguda e durante a fase crônica, clones da linhagem T. cruzi I induziram índices de reativação da parasitemia de 77,5% e 51,25%, respectivamente, enquanto clones da linhagem T. cruzi II apresentaram reativação de 4,7% apenas no final da fase aguda nos camundongos avaliados. De modo geral, o tratamento com Bz induziu uma redução dos índices de reativação tanto na fase aguda (72,22%) quanto na fase crônica (31,37%) da infecção. No entanto, Bz não foi capaz de prevenir a reativação da parasitemia em animais inoculados com os clones Gamba cl1, Cuica cl1 e P209 cl1 na fase aguda. Outro aspecto associado ao Bz, ainda na fase aguda, foi a queda induzida dos níveis totais de IgG avaliados. Finalmente, a imunossupressão induziu aumento de parasitismo tecidual durante a fase crônica mostrando-se, principalmente, associada aos animais infectados com clones da linhagem T. cruzi I. Nosso estudo demonstrou, pela primeira vez, a correlação entre a divergência filogenética do T. cruzi e a reativação da doença de Chagas em condição de imunossupressão, sendo esta relacionada a parasitos da linhagem genética T. cruzi I. Além disso, foi demonstrado que a eficácia da prevenção secundária na reativação pelo tratamento com Bz, provavelmente também dependente das características genéticas das populações do T. cruzi. Nossos resultados abrem perspectivas para se validar a terapêutica imunossupressora em indivíduos chagásicos submetidos à quimioterapia antineoplásica e/ou corticoidoterapia ou mesmo a proposição de novos fármacos imunossupressores. ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The genetic variability of Trypanosoma cruzi appears to be correlated with some aspects of Chagas disease like tissue parasite tropism, infectivity and drug resistance. In this study, lineages of T. cruzi I (Gamba cl1 and SP104cl1 - genotype 19) and (Cuica cl1 and P209 cl1 - genotype 20) and T. cruzi II (Bug2148 cl1 and MN cl2 - genotype 39) and (MVB cl8 e IVV cl4 - genótipo 32), were evaluated to its capacity to generate reactivation during experimental chronic phase of disease using Cyclophosfamide (Cy) immunosuppressed mice and, whether the previously treatment with Benznidazol (Bz) would foresee this clone-specific recrudescence. There was no difference associated with parasitemia curve observed among clones into each T. cruzi lineage. However, T. cruzi I lineage was able to induce 77,5% and 51.25% of parasitemia reactivatin when Cy was administrated in the end of acute phase and 51,25%, respectively, while this reactivation associated with T. cruzi II was observed only in the end of acute phase (4.7%). In general, treatment with Bz was able to induce low index of reactivation in acute (72.22%) and chronic (31.37%) phase of infection. Nevertheless, Bz was not able to prevent reactivation of parasitemia in acute phase, induced by clones clones Gamba cl1, Cuica cl1 e P209 cl1. Another aspect associated with Bz treatment, in acute phase, was the reduction of IgG1 levels, except to clones that belongs to 32 and 39 genotypes. Finally, immunosuppression induced high levels of tissue parasites during chronic phase and this aspect was associated with animals infected with T. cruzi I clones. In our study, we demonstrated for the first time, the correlation between philogenetic divergence of T. cruzi and reactivation of Chagas disease under immunosuppression condition and a close relation of these events with T. cruzi I genetic lineage. Besides, it was demonstrated a secondary prevention of this reactivation after Bz treatment and, also, this event appears to be dependent of genetic T. cruzi populations. Our data open new perspectives to an immunosuppressed therapeutic validation in chagasic individuals submitted to chemotherapy to neoplasic cells or corticoterapia or, at least, to propose new immunosuppression drugs.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-14T19:37:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 21267 bytes, checksum: 73e23c2acaaf13389e092bd813e3223d (MD5) TESE_Eco-epidemiologiaDoençaChagas.pdf: 3662041 bytes, checksum: 355296d46561aed26bcd629566fbb715 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-08-25T13:30:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 21267 bytes, checksum: 73e23c2acaaf13389e092bd813e3223d (MD5) TESE_Eco-epidemiologiaDoençaChagas.pdf: 3662041 bytes, checksum: 355296d46561aed26bcd629566fbb715 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-25T13:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 21267 bytes, checksum: 73e23c2acaaf13389e092bd813e3223d (MD5) TESE_Eco-epidemiologiaDoençaChagas.pdf: 3662041 bytes, checksum: 355296d46561aed26bcd629566fbb715 (MD5) Previous issue date: 2013 / Na Amazônia Brasileira as descrições sobre Doença de Chagas Aguda (DCA) tem se limitado a análise de surtos orais e casos isolados. O Estado do Pará, a partir da sistematização da vigilância da doença de Chagas, registrou entre 2005 e 2012 um número crescente de casos agudos, principalmente na região nordeste do Estado. Para avaliar fatores associados ao risco de ocorrência de DCA foram selecionadas áreas urbanas, rurais e ilhas, no município de Abaetetuba onde foram feitos cortes epidemiológicos entre os anos 2008 e 2009 confrontando-se as informações da casuística registrada pelo Sistema Nacional de Notificação de Agravos (SINAN) no período 2005-2012 com os achados do trabalho de campo. Nos inquéritos realizados foi aplicado um questionário, coleta de amostras biológicas para estudo sorológico e parasitológico, capturas entomológicas em unidades domiciliares e ecótopos naturais para determinar os níveis de infestação, infecção pelo Trypanosoma cruzi e estudo de fonte alimentar em triatomíneos, georreferenciamento das residências, palmeiras e casos humanos, análise ambiental para estratificar o grau de antropização e dados climatológicos. De uma população de 6213 residentes (4,3% da população do município), foram analisadas 4699 amostras, dando uma soroprevalência geral de 2,54 por mil hab. Não foram encontrados triatomíneos domiciliados e dos 250 espécimes capturados em palmeiras, 85,20% foi da espécie Rhodinus pictipes, com uma infectividade de 11,26% que se alimentaram principalmente com sangue de gambá e roedor. A análise multivariada demostrou que a febre, contato com triatomíneos, palmeiras infestadas e velocidade do vento são fatores altamente significativos e associados (RC= 28.7; 14.5; 10.3 e 4.36 respectivamente) ao risco de contrair a doença de Chagas, principalmente na ilha de Ajuaí, área menos antropizada, que no momento da pesquisa apresentava um ciclo enzoótico ativo e estabelecido; no banco de vigilância observou-se associação significante entre a ocorrência de DCA e apresentar edema, febre e alimentar-se com açaí. Os resultados indicam uma epidemiologia da DCA diferenciada entre as áreas de estudo onde a dinâmica de produção do açaí produzido nas ilhas tem relação com a ocorrência dos casos agudos por transmissão oral na área urbana. Estes achados devem ser considerados na formulação das políticas públicas para o controle da doença na região amazônica. _______________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: In the Brazilian Amazon descriptions of Acute Chagas Disease (ACD) have been limited to oral outbreaks and isolated cases analysis. Between 2005 and 2012, the Pará State, under systematic surveillance of Chagas disease, recorded an increasing number of acute cases, especially in the northwest region. To assess factors associated with the risk of ACD, crosssectional surveys were developed in urban, rural and island areas in Abaetetuba municipality, between 2008 and 2009. Findings in the fieldwork were confronted to the information recorded by the National System of Notifiable Diseases (SINAN) between 2005-2012. Surveys techniques included: a questionnaire, collection of biological samples for serological and parasitological studies, entomological catches in households and natural ecotopes to determine infestation levels, infection by Trypanosoma cruzi and the food source in triatomines; georeferencing was made of households, palm trees and human cases; environmental analysis assessed the degree of anthropization; climate data was included. From a population of 6213 residents (4.3% of the municipality), 4699 samples were analyzed, giving an overall prevalence of 2.54 per thousand inhabitants. Not domiciled triatomines were found and out of 250 specimens captured in palms, 85.20% was Rhodnius pictipes, whose infectivity was 11.26% and fed mainly with possum and rodent blood. Multivariate analysis demonstrated that fever, contact with triatomines, infested palms and wind speed are factors strongly associated (OR = 28.7; 14.5; 10.3 and 4.36 respectively) to the risk of contracting ACD, primarily on the island of Ajuaí, less anthropized area, which at the time of the survey had an active and established enzootic cycle. The surveillance data showed significant association between the occurrence of ACD and the presence of edema, fever and having fed açai. We observed an epidemiology of ACD differentiated between the study sites, where the dynamics of açai produced in the islands has a relationship with the occurrence of acute cases by oral transmission in the urban area. These findings should be considered in the formulation of public policies for the control of Chagas´ disease in the Amazon region.