Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-03-16T20:00:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoTratoDigestório.pdf: 2128923 bytes, checksum: bc9e8b3b565ff4319486b7f5221aaa47 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-03-17T19:13:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoTratoDigestório.pdf: 2128923 bytes, checksum: bc9e8b3b565ff4319486b7f5221aaa47 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-17T19:13:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoTratoDigestório.pdf: 2128923 bytes, checksum: bc9e8b3b565ff4319486b7f5221aaa47 (MD5) Previous issue date: 2011 / O protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, apresenta uma ampla variabilidade intraespecífica que determina a existência de subpopulações com características genéticas, morfológicas, moleculares e bioquímicas distintas. Este polimorfismo tem sido associado ao desenvolvimento das diferentes formas clínicas da doença de Chagas e suas implicações epidemiológicas. Neste contexto, a forma digestiva parece estar ausente na América Central, México e Venezuela, porém em países como Brasil e Bolívia pode ocorrer sozinha ou em associação com a forma cardíaca. O megaesôfago e o megacólon, manifestações mais comuns da forma digestiva, são caracterizados por acalásia e obstrução parcial/total do cólon, respectivamente. Achados histopatológicos demonstram o envolvimento do sistema nervoso entérico na patogênese dessas visceromegalias, porém poucos estudos têm abordado qual é o limite de desnervação necessário para as alterações da motilidade. Neste trabalho, cães da raça Beagle foram infectados com as cepas Y ou Berenice-78 do T. cruzi e necropsiados durante as fases aguda (30 dias após infecção-DAI) ou crônica (730 DAI) da doença experimental para avaliação histopatológica do esôfago e cólon. Ambas as cepas foram capazes de infectar o esôfago e o cólon e provocar resposta inflamatória durante a fase aguda. Na fase crônica, a PCR convencional detectou parasitismo tecidual apenas no grupo infectado com a cepa Be-78 o que poderia estar relacionado com a manutenção do processo inflamatório neste grupo. Apenas nos animais infectados com a cepa Y foi observada fibrose na fase crônica. Desnervação dos gânglios mientéricos foi observada na infecção com ambas as cepas durante a fase aguda, porém na fase crônica a desnervação foi persistente apenas nos animais infectados com a cepa Be-78. O comprometimento das células gliais foi precoce nos animais infectados com a cepa Y enquanto os animais infetados com a cepa Be-78 apresentaram redução de células gliais entéricas GFAP-IR apenas na fase crônica. Estes resultados sugerem que embora as duas cepas sejam capazes de provocar lesões no trato digestório, a cepa Y controla precocemente essas alterações, enquanto a cepa Be-78 sustenta as alterações ao longo da infecção experimental, sugerindo o desenvolvimento de lesões digestivas crônicas. ______________________________________________________________________ / ABSTRACT: The flagellate protozoan Trypanosoma cruzi, etiologic agent of Chagas disease, presents a wide intraspecific variability that determines the existence of subpopulations with distinc genetic, morphological, molecular and biochemical feactures. This polymorphism has been associated with the development of different clinical forms of Chagas disease and its epidemiological implications. In this context, the digestive form seems to be absent in Central America, Mexico and Venezuela, but in countries like Brazil and Bolivia may occur alone or in combination with the cardiac form. Megaesophagus and megacolon, the most common manifestations of the digestive form, are characterized by achalasia and colon partial /total obstruction, respectively. Histopathologic findings demonstrate the involvement of enteric nervous system in these visceromegalies pathogenesis, but few studies have addressed the limit of what is necessary for denervation changes in motility. In this study, Beagle dogs were infected with strains Y or Berenice-78 of T. cruzi and necropsied during the acute phase (30 days post infection-DPI) or chronic (730DPI) of the experimental disease for esophagus and colon post-mortem histopathological evaluation. Both strains were able to infect the esophagus and colon and cause an inflammatory response during the acute phase. In the chronic phase, the conventional PCR detected only tissue parasitism in the group infected with Be-78 strain that is associated with the inflammatory process maintenance in this group. Only in animals infected with the Y strain was observed fibrosis in chronic phase. Denervation of myenteric ganglia was observed in infection with both strains during the acute phase, but in chronic phase, denervation was persistent only in animals infected with Be-78 strain. The glial cells involvement was earlier in animals infected with Y strain while animals infected with Be-78 strain showed a reduction in enteric glial cells GFAP-IR only in the chronic phase. These results suggest that although the two strains are capable of causing injury in the digestive tract, the Y strain control these changes earlier, while the Be-78 strain sustain alterations throughout the experimental infection, suggesting the development of chronic digestive lesions.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências. / Made available in DSpace on 2012-10-26T12:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 303861.pdf: 2650431 bytes, checksum: a9f9899f0d32abf02474782e9c45e6e8 (MD5) / Este estudo teve por objetivo avaliar a atividade antiparasitária intracelular e a citotoxicidade de diaminas sintéticas em macrófagos murinos infectados com L. braziliensis, L. chagasi e T. cruzi. A perda do potencial de membrana mitocondrial (.m) de formas epimastigotas de T. cruzi, a indução de TNFa e óxido nítrico e a inibição da enzima tripanotiona redutase recombinante de L. braziliensis e T. cruzi foram utilizados para investigar possíveis mecanismos de ação dos compostos ativos. Dentre 17 diaminas estudadas, 13 inibiram a proliferação de formas promastigotas de L. braziliensis e 10 de epimastigotas de T. cruzi (CI50< 20µM). Destas, 12 foram ativas contra amastigotas intracelulares de L. braziliensis e L. chagasi (CI50 de 2,6 a 28,2 µM) e 6 foram ativas contra formas intracelulares de T. cruzi (CI50 de 1,6 a 23,6µM). A diamina DP23 foi a mais ativa contra L. braziliensis e L. chagasi (CI50 2,6 e 3,0 µM e IS de >100 e >115,4, respectivamente). A diamina DP24 foi a mais ativa contra T. cruzi (CI501,6 µM e IS>187,5). A CC50 para macrófagos variou de 149,5 a >300 µM. Diaminas cloridratadas foram mais citotóxicas que seus análogos não cloridratados. Quatro compostos (DP23Cl, DP25, RAG10 e RAG11) mostraram elevada citotoxicidade para macrófagos infectados em concentração >10 µM. A análise da estrutura e da lipofilicidade (logP) das diaminas mostrou que as estruturas com15 a 17 carbonos metilênicos foram mais ativas enquanto que, estruturas com mais de 19 carbonos não apresentaram nenhuma atividade antiparasitária. A melhor atividade leishmanicida foi observada para as diaminas com valor de logP = 5,36, sugerindo que a atividade não depende somente da distribuição de carbonos metilênicos na molécula mas também do logP ideal. Epimastigotas tratados com o composto DP24 na concentração de 6 e 12 µM mostraram despolarização da membrana mitocondrial e morte celular apartir de 6 horas de incubação de forma dose-dependente. O tratamento de células infectadas com os compostos ativos não induziu níveis significantes de produção de TNFa e NO. Com relação a inibição das enzimas tripanotiona redutase recombinante de L. braziliensis e T. cruzi, quatro compostos (DP23Cl, DP25, DP25Cl e RAG10) inibiram a atividade enzimática de LbTR entre 74,2 a 89,4% na concentração do 100 µM, enquanto que para a TcTR apenas o composto DP25Cl ocasionou inibição de 74,5% na concentração de 100 µM, sugerindo diferenças entre a tripanotiona destas duas espécies de tripanosomatídeos. As diaminas avaliadas no presente estudo apresentaram potente efeito in vitro contra formas intracelulares de Leishmania spp e T. cruzi e podem ser consideradas moléculas líder para o desenvolvimento de novos compostos contra Leishmania e T. cruzi. / This study aimed to evaluate the antiparasitic activity and cytotoxicity of synthetic diamines in murine macrophages infected with Leishmania braziliensis, L. chagasi and Trypanosoma cruzi. The loss of mitochondrial membrane potential (øm) of T. cruzi epimastigotes, the induction of TNFá nd nitric oxide and inhibition of the recombinant trypanothione reductase of L. braziliensis and T cruzi were used to investigate possible mechanisms of active compounds. Among 17 evaluated diamines, 13 inhibited the proliferation of L. braziliensis promastigotes and 10 inhibited T. cruzi epimastigotes (IC50<20 ìM). Of these, 12 were active against intracellular amastigotes of L. braziliensis and L. chagasi (IC50 of 2.6 to 28.2 ìM) and 6 were active against T. cruzi (IC50 = 1.6 to 23.6 ìM). The compound DP23 was the most active compound against both L. braziliensis and L. chagasi (IC50 = 2.6 and 3.0 ìM and SI>100 and >115.4) respectively. The compound DP24 was the most active against T. cruzi (IC50 = 1.6 ìM and SI > 187.5). The citotoxicity CC50 for macrophages ranged from 149.5 to > 300 ìM. Chlorinated diamines were more cytotoxic than their non-chlorinated analogs. Four compounds (DP23Cl, DP25, RAG10 and RAG11) showed high cytotoxicity for infected macrophages at a concentration > 10 ìM. The analysis of the structure and lipophilicity (logP) of the diamines showed that structures with 15 to 17 methylenic carbons were more active while structures with more than 19 carbons did not present any antiparasitic activity. The higher leishmanicidal activity was observed for the diamine DP23 with a value of logP = 5.36 and 13-NH-4 distribution of methylenic carbon suggesting that the activity does not depend solely on the distribution of methylenic carbon atoms in the molecule but also depends on ideal logP value. Epimastigotes treated with the compound DP24 at a concentration of 6 and 12 ìM demonstrated dose-dependent membrane depolarization and cell death starting at 6 hours of incubation. Treatment of cells infected with the active compounds did not induce significant levels of TNFá and NO production. Concerning the inhibition of the recombinant trypanothione reductase enzymes of L braziliensis and T. cruzi, four compounds (DP23Cl, DP25, DP25Cl and RAG10) inhibited the enzymatic activity of LbTR between 74.2 to 89.4% at a concentration of 100 ìM, whereas for TcTR, only the compound DP25Cl caused inhibition of 74.5% at the same concentration, suggesting differences between the trypanothione of these two species of trypanosomatids. The diamines evaluated in the study presented potent in vitro effect against intracellular forms of Leishmania spp and T. cruzi and therefore may be considered as leader molecules for developing new compounds against Leishmania and T. cruzi.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-10-11T04:01:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 342398.pdf: 2757825 bytes, checksum: 338704d064d6d412fd3b636f0ba5eff9 (MD5) Previous issue date: 2016 / Os fármacos utilizados atualmente no tratamento da doença de Chagas e leishmaniose possuem desvantagens relacionadas com sua eficácia, além de toxicidade o que leva a altos índices de abandono de tratamento. Apesar de estas doenças afetarem milhões de pessoas vivendo, principalmente, em países em desenvolvimento, ainda há poucas perspectivas no desenvolvimento de novas terapias. Com base no conceito de desenvolvimento de fármacos a partir de produtos naturais, duas lignanas (grandisina e veraguensina) relatadas com atividade antiparasitária promissora foram selecionadas como base para o desenvolvimento de novas moléculas potencialmente bioativas. Aplicando o bioisosterismo e outras estratégias de modificação molecular, vinte e seis derivados isoxazóis 3,5-dissubstituídos foram sintetizados através da cicloadição 1,3-dipolar entre óxidos de nitrila e alcinos catalisada por cobre e suas atividades contra T. cruzi e L. amazonensis foram avaliadas. Ao final, com o auxilio de um estudo preliminar de relação estrutura-atividade, seis compostos foram ativos na forma amastigota de T. cruzi com valores de IC50 entre 1,13 e 90,39 ?M. Entre estes, um dos compostos também foi ativo em L. amazonensis (composto 67) com valor de IC50 de 5,08 ?M. Os compostos que apresentaram IC50<10 ?M foram testados quanto ao potencial de inibição da enzima Tripanotiona redutase, no entanto, nenhuma atividade foi identificada.<br> / Abstract : The medicines currently used to treat Chagas disease and leishmaniasis have drawbacks related to efficacy and toxicity leading to high levels of treatment abandonment. Although these diseases affect millions of people worldwide, especially in developing countries, the perspectives of development of new therapies are still low. The concept of developing hit compounds based on natural products led us to propose derivatives of two lignans (grandisina and veraguensina) already described with promising anti-parasitary activity. Applying bioisosterism and other molecular modification strategies, twenty six 3,5-disubstituted isoxazole derivatives were synthesized using copper catalyzed 1,3-dipolar cycloaddition between a nitrile oxide and an alkyne, and their activity against T. cruzi and L. amazonensis was assessed. Further, after a preliminary structure-activity relationship study was conducted, six compounds active against amastigotes of T. cruzi with IC50 values ranging from 1.13 ?M to 90.39 ?M. Among them, one isoxazole was also active against amastigotes of L. amazonensis (compound 67), with an IC50 value of 5.08 ?M. Moreover, the action of compounds with IC50<10 ?M were evaluated on trypanothione reductase, however, none of them showed inhibition of this particular target.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T07:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 230928.pdf: 374350 bytes, checksum: 97109fa345169b35dbe8d0996d29181f (MD5) / A cardiopatia chagásica é uma doença com patogenia ainda não elucidada. Há evidências recentes que sugerem que danos produzidos pelo estresse oxidativo podem contribuir para a evolução da doença de Chagas. Trabalho concluído pelo nosso grupo (Oliveira, 2004) mostrou a existência de um quadro de estresse oxidativo, com perda parcial das defesas antioxidantes paralelamente à evolução da doença. O objetivo deste trabalho foi avaliar o status antioxidante no sangue de pacientes cardiopatas chagásicos crônicos classificados em 4 grupos, nomeados de I a IV (cada grupo com n=10), de acordo com o grau de comprometimento cardíaco, segundo classificação de Los Andes modificada (os pacientes do grupo I apresentavam função cardíaca normal ou disfunção leve, o grupo II apresentava disfunção moderada, o grupo III apresentava disfunção grave e os pacientes do grupo IV apresentavam insuficiência cardíaca), 1 ano após ao primeiro estudo (Oliveira, 2004) e após suplementação antioxidante durante 6 meses (vitaminas E 800 UI/dia e C 500 mg/dia). Foram examinadas as atividades das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx), glutationa redutase (GR) e glutationa S-transferase (GST), e as defesas antioxidantes não-enzimáticas, como os conteúdos de glutationa reduzida (GSH) e vitamina E. Foram dosados também os marcadores de dano, como a lipoperoxidação (níveis de TBARS), proteína carbonilada (PC) e atividade da gamaglutamiltransferase (GGT). Foram avaliados ainda os níveis de óxido nítrico (NO) e a atividade da mieloperoxidase (MPO). Após 1 ano do estudo inicial, foi observada uma diminuição na atividade da CAT no grupo I, aumento na atividade da SOD no grupo I, aumento da atividade da GPx no grupo II e diminuição no grupo III, aumento na atividade da GR nos grupos I e II e diminuição da GSH no grupo I. Após a suplementação antioxidante, a atividade da CAT aumentou no grupo II, a atividade da GPx aumentou no grupo I, a atividade da GR aumentou nos grupos I e II, enquanto a atividade da GST diminuiu nos grupos II, III e IV. A concentração de GSH foi maior nos pacientes do grupo I. Por outro lado, as concentrações de TBARS e proteína carbonilada diminuíram de forma acentuada em todos os grupos, sendo que a GGT não apresentou alteração significativa. Os níveis de NO aumentaram no grupo III, enquanto a MPO diminuiu nos grupos II e III. Os resultados indicam que não houve alterações importantes no status antioxidante nos pacientes após o período de 1 ano. Mais importantemente, a suplementação antioxidante permitiu diminuir o estresse oxidativo, especialmente através da diminuição dos níveis de TBARS e proteína carbonilada, provavelmente em conseqüência do consumo e proteção antioxidante da vitamina E.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:27:50Z : No. of bitstreams: 1 000851665_20160330.pdf: 89340 bytes, checksum: 9ea716295350e4f9c41b9b1ba249c761 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-04-01T11:49:41Z: 000851665_20160330.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T11:50:35Z : No. of bitstreams: 1 000851665.pdf: 3177829 bytes, checksum: 9b6d8900d08b5f09bb1d42d6593cd852 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O subcomplexo Triatoma brasiliensis compreende as espécies: Triatoma brasiliensis brasiliensis, T. juazerensis, T. lenti, T. melanica T. melanocephala, T. petrochii, T. sherlocki, T. tibiamaculata e T. vitticeps. Essas espécies apresentam muitas questões relativas à sua biologia e filogenia. Diante dessa constatação e servindo-se de estudos moleculares, morfológicos e morfométricos avaliaram-se aspectos filogenéticos das espécies do referido complexo. Para tanto caracteres morfológicos da genitália externa feminina, foram estudadas por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV). Por microscopia óptica foram desenvolvidos estudos morfométricos: geometria morfométrica de cabeças e asas, mensuração do comprimento e largura da cabeça, comprimento do tórax, abdômen e dos três segmentos da probóscide de adultos fêmeas e machos. Foram sequenciadas regiões dos genes nucleares dos espaçadores transcritos internos I e II e dos genes mitocondriais 12S, 16S, COI e CyTb e avaliadas com o intuito de propor hipóteses filogenéticas para as espécies do complexo. / The subcomplex Triatoma brasiliensis comprises species: Triatoma brasiliensis brasiliensis, T. juazerensis, T. lenti, T. melanica T. melanocephala, T. petrochii, T. sherlocki, T. tibiamaculata e T. vitticeps. These species have many questions regarding its biology and phylogeny. Given this finding and making use of molecular studies, morphological and morphometric aspects were evaluated phylogenetic species of said complex. For both morphological characters of the female external genitalia, they were studied by means of scanning electron microscopy (SEM). By optical microscopy were developed morphometric studies: morphometric geometry heads and wings, measuring the length and width of the head, thorax length, abdomen and the three segments of the proboscis of adult females and males. Sequences of nuclear genes of internal transcribed spacers I and II were sequenced and the mitochondrial genes 12S, 16S, COI and Cytb were sequenced and evaluated with the aim to propose phylogenetic hypotheses for complex species. / FAPESP: 13/08826-5

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-16. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:31:39Z : No. of bitstreams: 1 000856204.pdf: 3363766 bytes, checksum: 70b7bb759116f20b3870a5bb99392bf4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Programa de Apoio ao Desenvolvimento Científico da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da UNESP (PADC) / O benznidazol (BNZ) é o fármaco de primeira escolha para o tratamento da doença de Chagas. No Brasil, este fármaco está disponível na forma de comprimidos de liberação imediata de 100 mg (adulto) e 12,5 mg (pediátrico) e é administrado duas ou três vezes ao dia, durante 60 dias. A alta frequência diária de administrações e o longo período de tratamento são fatores que contribuem significativamente para o abandono da terapia, com consequências sobre o sucesso terapêutico. Diante deste cenário, pesquisadores do Laboratório de Tecnologia de Medicamentos (Universidade Federal de Pernambuco) desenvolveram comprimidos de liberação prolongada de BNZ (LPK4M e LPK100M). Este estudo teve como objetivo avaliar a farmacocinética pré-clínica do BNZ administrado na forma farmacêutica de comprimidos de liberação prolongada (200 mg), comparando-a aos comprimidos atualmente disponíveis. Os estudos foram conduzidos em coelhos e a quantificação de BNZ foi realizada no plasma e urina através de métodos de cromatografia líquida de ultra eficiência previamente validados. O tempo de residência médio (MRT) foi duas vezes maior para o comprimido LPK100M em comparação ao de liberação imediata adulto. O tempo para atingir a concentração plasmática máxima (tmáx) foi três vezes maior para o comprimido LPK100M em relação ao de liberação imediata adulto. Na concentração plasmática máxima (Cmáx) não se observou diferença estatística entre os diferentes tipos de comprimido (100 mg e 200 mg), demonstrando que mesmo administrando o dobro da dose (comprimidos de liberação prolongada), as concentrações plasmáticas não superam as do comprimido de liberação imediata adulto (100 mg). A biodisponibilidade do BNZ foi adequada na administração dos comprimidos de liberação prolongada e no de liberação imediata adulto, no entanto, no pediátrico foi inferior aos demais. Os parâmetros farmacocinéticos mencionados... / Benznidazole (BNZ) is the first-line drug for the treatment of Chagas disease. In Brazil, the drug is available in the form of immediate-release tablets, 100-mg (adult) and 12.5-mg (pediatric); the drug is administered twice or thrice daily for 60 days. The high frequency of daily administrations and the long period of treatment are factors that significantly contribute to the abandonment of therapy, affecting therapeutic success. In this scenario, researchers from Laboratory of Medicine Technology (Federal University of Pernambuco) developed BNZ extended-release tablets (ERK4M and ERK100M). This study aimed to evaluate the preclinical pharmacokinetics of BNZ administered as extended-release tablets (200-mg dose) compared to the tablets currently available. The studies were conducted in rabbits and BNZ quantification was performed in plasma and urine by ultra performance liquid chromatography methods previously validated. The mean residence time (MRT) was twice as high for the tablet ERK100M when compared to the immediaterelease adult. The time to maximum plasma concentration (tmax) was three times higher for the tablet ERK100M when compared to immediate-release adult. The maximum plasma concentration (Cmax) there no was no statistical difference between the different types of tablet (100-mg and 200-mg), demonstrating that even administering a double dose (extended-release tablets), plasma concentrations do not exceed the immediate-release adult tablet (100-mg). The bioavailability of BNZ was adequate in the administration of extended-release tablets and immediaterelease adult tablet; however, with the administration of the pediatric tablet, bioavailability was lower than with other tablets. The pharmacokinetic parameters demonstrated that the ERK100M tablet prolonged drug release from the polymer matrix and provided an increase in the maintenance of the drug concentration in vivo. Thus, a relative bioavailability study in humans will be ... / FAPESP: 13/25882-6

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T18:53:21Z : No. of bitstreams: 1 nogueirafilho_maf_me_arafcf.pdf: 498252 bytes, checksum: d20af41ad3c23eecfd5204ddd0e9510e (MD5) / O pró-fármaco hidroximetilnitrofural (NFOH) apresenta atividade antichagásica com grande diminuição da toxicidade e maior atividade contra formas amastigotas do T. cruzi quando comparadas ao seu fármaco matriz nitrofural (NF). Essas vantagens tornam o pró-fármaco uma possível alternativa terapêutica tanto para o tratamento da fase aguda, quanto da fase crônica da doença de Chagas. Nesse trabalho foi investigado o perfil farmacocinético do NFOH em modelo animal não roedor, estudo necessário para a continuidade do desenvolvimento do pró-fármaco. O NF foi administrado por via intravenosa e oral nas doses de 6,35 e 63,5 mg/kg, respectivamente, e o NFOH 8,05 e 80,5 mg/kg respectivamente; em coelhos albinos (n=20). Após a administração foram realizadas coletas seriadas de sangue dos animais por punção venosa. As amostras foram processadas e analisadas por método bioanalítico validado, utilizando-se um sistema MS. O sistema operou em modos positivo e negativo para as leituras dos compostos - NF e NFOH- e do padrão interno (diclofenaco 5ug/mL em metanol), sob eluição de fase móvel composta por água:metanol (50:50). As médias dos parâmetros farmacocinéticos foram calculadas pelas curvas de concentração plasmática versus tempo e comparadas pelo teste de Mann-Whitney (p<0,05). O NF apresentou biodisponibilidade oral de 114,97% no modelo animal e na administração oral este composto apresentou meia-vida de eliminação de 276,09 minutos, estatisticamente diferente da meia vida apresentada na administração intravenosa (17,32 minutos). A administração do NFOH permitiu o cálculo dos parâmetros farmacocinéticos tanto do pró-fármaco quanto do NF liberado pelo mesmo. O perfil farmacocinético do NF administrado comparado ao do NF obtido do pró-fármaco não foi estatisticamente diferente. A biodisponibilidade oral relativa do NF a partir do pró-fármaco administrado foi de 60,1% / The prodrug hydroximethylnitrofurzone (NFOH) presents antichagasic activity with greatly reduced toxicity compared to its drug matrix nitrofurazone (NF). Besides these new characteristics, the prodrug was more active against the parasite T. cruzi amastigotes. These advantages make the prodrug a possible therapeutic alternative for the treatment of both acute and the chronic phase of Chagas disease. Male albino rabbits (n=20) were divided into four groups and subjected to single administration of NF and NFOH. NF was administered intravenously and orally in doses of 6.35 and 63.5 mg / kg respectively, and NFOH, in doses 8.05 and 80.5 mg / kg respectively. After administration, serial blood samples were collected by venipuncture. The samples were processed and the final product was analyzed by MS. The system operated in positive and negative modes for the determination of compounds and internal standard, under elution of the mobile phase 50:50 water: methanol. The NF presented an oral bioavailability of 114.97% in the albino rabbits and oral administration showed half-life of 276.09 minutes due to the absorption process against 17.32 obtained in the intravenous administration. The administration of NFOH allowed the calculation of pharmacokinetic parameters of the prodrug, and the NF obtained from NFOH administration. Comparing the behavior of NF administered orally and obtained from the prodrug was not evidenced significant changes in the pharmacokinetic profiles. The relative oral bioavailability of NF obtained from the NFOH was 60,1%.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-01Bitstream added on 2014-06-13T19:20:29Z : No. of bitstreams: 1 bosquesi_pl_dr_arafcf.pdf: 1593785 bytes, checksum: 3477969063f7684f4832aaebfb59c1a0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Há mais de um século de sua descrição, a doença de Chagas continua sendo um dos maiores problemas de saúde pública. Resultante da infecção pelo protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi, a doença é endêmica nos 21 países da América Latina e estima-se que 10 milhões de pessoas estejam infectadas e aproximadamente 100 milhões estão sob o risco de contaminação. Apenas dois fármacos são disponíveis para tratamento da doença, nifurtimox e benznidazol. Ambos são ativos somente na fase aguda da doença, além de causarem efeitos colaterais graves. No Brasil apenas o benznidazol é comercializado. Neste sentido, a desenvolvimento de fármacos tripanossomicidas é de extrema importância. Estudos mostraram que derivados nitrofurânicos inibem a tripanotiona redutase, considerada enzima chave do metabolismo antioxidativo do T. cruzi. Pesquisas com o hidroximetilnitrofural (NFOH) tem demonstrado maior atividade in vitro e in vivo contra T. cruzi com menor toxicidade quando comparado ao fármaco matriz, nitrofural. Um amplo espectro de atividades biológicas tem sido relatada para compostos furoxânicos (N-óxido-1,2,5-oxadiazol) e benzofuroxânicos (N-óxido-benzo[1,2-c]1,2,5-oxadiazol), sendo assim, foi obtida uma série de derivados isósteros de nitrofural, substituindo o anel nitrofurano pelos respectivos furoxanos e benzofuroxanos. Os compostos obtidos foram avaliados quanto à atividade tripanossomicida in vitro em formas epimastigotas e amastigotas de T. cruzi, capacidade de doação de óxido nítrico e mutagenicidade in vivo. Foram sintetizados, identificados e caracterizados oito compostos. Os derivados benzofuroxânicos (compostos 20 e 21) foram os mais ativos contra as formas epimastigotas de T. cruzi, entretanto no ensaio contra as formas amastigotas, sete apresentaram... / For more than a century of his description, Chagas disease remains a major public health problems. Resulting from infection flagellate protozoan Trypanosoma cruzi, is endemic in 21 Latin American countries and it is estimated that 10 million people are infected and about 100 million are at risk of contamination. Only two drugs are available for treating the disease, nifurtimox and benznidazole. Both are active only during the acute phase of the disease, and cause serious side effects. In Brazil only benznidazole is marketed. In this sense, the development of drugs trypanosomicide is extremely important. Studies demonstrated that nitrofurans derivatives inhibit the trypanothione reductase, the key enzyme in the metabolism considered antioxidant T. cruzi. Research with hydroxymethylnitrofurazone (NFOH) has shown greater activity in vitro and in vivo against T. cruzi with less toxicity when compared to the drug matrix, nitrofurazone (NF). A wide spectrum of biological activities have been reported for compounds furoxans (1,2,5-oxadiazol-2-N-oxide) and benzofuroxans (benzo[1,2-c]-1,2,5-oxadiazol-1-N-oxide) and thus was obtained a series of derivatives of Nitrofural isosteres, nitrofuran ring by replacing the respective furoxans and benzofuroxans. The compounds were evaluated for in vitro trypanocidal activity in epimastigotes and amastigotes of T. cruzi, ability to donate nitric oxide and mutagenicity in vivo. Were synthesized, characterized and identified eight compounds. Benzofuroxans derivatives (compounds 20 and 21) were the most active against epimastigotes of T. cruzi, however the assay against amastigotes, seven showed IC50 higher than or equal to a drug used as reference (benznidazole) and less mutagenic potential when compared with the results obtained for the drugs nitrofurazone... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6031.pdf: 4687769 bytes, checksum: 0dcc9e7d60a8899699a162ecb357f433 (MD5) Previous issue date: 2014-04-04 / Universidade Federal de Minas Gerais / This work was based on bioactivity-guided study of five plants ( Galipea jasminiflora , Esenbeckia febrifuga, Esenbeckia grandiflora , Metrodorea stipularis and Zanthoxylum Fagara ) from Rutaceae family using the enzyme cruzain from Trypanosoma cruzi as target. The dichlorometane liquid-liquid partition from stems of M. stipularis were the most active one, and after a chromatographic study its fractions showed high enzymatic inhibition, so all fractions were submitted a chromatographic study aiming to isolate the secondary metabolites responsible for this inhibition. A number of compounds were isolated, among them: seven alkaloids , six coumarins, one steroid, and four dihydrochalcones, two alkaloids and three dihydrochalcones have been described for the first time. It was observed the presence of the dihydrochalcones in all active fractions indicating that has of compounds may be responsible for the activity of the extracts against cruzain. Due to the similarity of the cruzain with cathespsins B and L, and to further explore the bioactivity the isolated metabolites were also assayed in these enzymes. Four alkaloids as well two dihydrochalcones showed significant inhibition of cathepsin B, while dihydrochalcones showed to inhibition cathepsin L. Plants of this family are used in folk medicine for the treatment of malaria , so these compounds were also tested against Plasmodium falciparum parasite, and good activity was found for two dihydrochalcones. / Este trabalho baseou-se no estudo bioguiado de cinco plantas (Galipea jasminiflora, Esenbeckia febrifuga, Esenbeckia grandiflora, Metrodorea stipularis e Zanthoxylum fagara) pertencentes a família Rutaceae utilizando como alvo a enzima cruzaína de Trypanosoma cruzi. A partição diclorometânica dos caules de M. stipularis proveniente da partição líquido-líquido do extrato etanólico foi a mais ativa e após estudo cromatográfico suas frações apresentaram inibições enzimáticas muito alta. Assim foram todas estudadas cromatograficamente a fim de se isolar os metabólitos secundários responsáveis por esta inibição. Neste estudo isolou-se 18 compostos (7 alcaloides, 6 cumarinas, 1 esteroide, e 4 diidrochalconas), sendo cinco inéditos na literatura até o momento (2 alcaloides e 3 diidrochalconas). Observou-se a presença das diidrochalconas em todas as frações ativas e na enzima alvo cruzaína, as substâncias desta classe de metabolitos foram as que apresentaram as maiores inibições. Estes fatos indicam que elas podem ser as responsáveis pela inibição encontrada nas frações. Devido à similaridade da cruzaína com as catepsinas B e L, os metabolitos isolados foram ensaiados nestas enzimas e quatro alcaloides assim como duas diidrochalconas apresentaram significativa inibição na catepsina B, e duas diidrochalconas na catepsina L. Como plantas desta família são utilizadas pela medicina popular no tratamento de malária, estes compostos foram também ensaiados no Plasmodium falciparum, parasita causador da doença e os resultados de duas diidrochalconas foram satisfatórios.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2054.pdf: 3381379 bytes, checksum: b7e331b25f7899a9074fa9a68cff8f00 (MD5) Previous issue date: 2008-08-22 / Financiadora de Estudos e Projetos / This work describe the phytochemical study of bark and leaves of the specie E. paraensis (Rutaceae). This dissertation aims at contributing with the chemistry of the Rutaceae family and evaluation of the antichagasic activity of substances isolated. The phythochemical study allowed to isolate fifteen secondary metabolites belonging to different classes: two alkaloids: N-methylflindersine and skimmianine; the mixture of three steroids: &#946;-sitosterol, stigmasterol e campestanol; the limonoid limonin; six coumarins, which are: marmesin, 8-methoximarmesin, isooxypeucedanin, prangol, isopimpinellin and xanthotoxin; and three glycosides flavonoids: quercetin-3-&#946;-O-rhamnopyranoside, myricetin-3-&#946;- O-rhamnopyranoside and hesperidin, while there is still no reports on the isolation of flavonoids in this specie. The isolated compounds were evaluated as the enzyme inhibitory activity in Ggapdh (glyceraldehyde-3-phosphate-dehydrogenase) of T. cruzi. However, a strategy was used for virtual screening based on physical and chemical properties of substances isolated by the computer program Volsurf 3.0. The ability of the inhibitory compounds pre-classified was tested by isothermal titration calorimetry (ITC), which has characterized the mechanism of action of active substances on the enzyme GAPDH. Through the standardized test the following compounds were tested front of GAPDH: Limonin, quercetin-3-&#945;-O-rhamnopyranoside and prangol showed that the inhibition constant ranging between 91.8 (± 18.08) and 384.8 (145 ± , 05) &#956;M; hesperidin and marmesin that have not submitted activity against the enzyme. / Este trabalho descreve o estudo fitoquímico do caule e das folhas da espécie E. paraensis (Rutaceae). Este estudo visa contribuir com a química da família Rutaceae e verificar a atividade tripanocida das substâncias isoladas desta espécie. O estudo fitoquímico resultou no isolamento de 15 metabólitos secundários, divididos em: dois alcalóides N-metil-flindersina e esquimianina; mistura de três esteróides &#946;-sitosterol, estigmasterol e campesterol; o limonóide limonina; seis cumarinas: marmesina, 8-metoximarmesina, isooxipeucedanina, prangol, isopimpenilina e xantotoxina; e três flavonóides glicosilados, quercetina 3-&#946;-O-raminosídeo, miricetina 3-&#946;-O-raminosídeo e hesperidina, sendo esta última classe inédita nesta espécie. Os compostos isolados foram avaliados quanto a atividade enzimática inibitória de gGAPDH (Gliceraldeído-3-fosfatodesidrogenase) de T. cruzi. Contudo, foi utilizada uma estratégia de triagem virtual baseada nas propriedades físico-químicas das substâncias isoladas através do programa computacional Volsurf 3.0. A capacidade inibitória dos compostos pré-classificados foi testada através de uma Titulação Calorimétrica Isotérmica (ITC), que permitiu caracterizar o mecanismo de ação das subtâncias ativas sobre a enzima GAPDH. Através do ensaio padronizado foram testados os seguintes compostos frente à GAPDH: Limonina, quercetina-3-&#945;-O-L-raminosídeo e prangol que apresentaram constantes de inibição variando entre 91,8 (±18,08) e 384,8 (±145,05) &#956;M; hesperidina e marmesina não apresentaram atividade contra a enzima.