Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Cleber Galvão Ferreira / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Resumo: Triatoma garciabesi, Triatoma guasayana, Triatoma patagonica e Triatoma sordida constituem o subcomplexo T. sordida, triatomíneos que podem veicular Trypanosoma cruzi e determinar doença de Chagas em humanos. Assim devido a importância epidemiológica foi conduzido este estudo que pode contribuir para o controle vetorial. A filogênese do subcomplexo T. sordida foi conduzido por meio de estudos do processo mediano do pigóforo, genitália externa feminina, histologia de ovos, morfometria de ovos e morfometria geométrica de asas. Também se utilizou dos marcadores moleculares CO1, Cyt b, 16S e 28S. Os resultados obtidos corroboram as descrições da literatura e fornecem novos parâmetros para a caracterização das quatro espécies do subcomplexo T. sordida, bem como das relações filogenéticas da subfamília Triatominae. O estudo do processo mediano do pigóforo de T. garciabesi, T. guasayana e T. sordida por meio de MEV não mostrou diferenças entre as três espécies. A genitália externa feminina de T. garciabesi, T. guasayana, T. patagonica e T. sordida observadas por MEV, apresentaram diferenças que possibilitam distinguir essas espécies. O estudo morfológico dos ovos por meio de MEV possibilitou descrever as características do exocório das quatro espécies, mas apresentou pouca eficácia para discriminação. O estudo histológico revelou diferenças na constituição tissular dos exocórios das quatro espécies. O estudo morfométrico de ovos mostrou que as variáveis de comprimento e abertura... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Triatoma garciabesi, Triatoma guasayana Triatoma patagonica and Triatoma sordida are the subcomplex T. sordida, triatomine bugs that can serve Trypanosoma cruzi and determine Chagas disease in humans. So because of the epidemiological importance was conducted this study may contribute to the control of these vectors. . So because of the epidemiological importance was conducted this study can contribute to the vector control. The phylogeny of the subcomplex T. sordida was conducted by the morphology of the median process pygophore, external female genitalia, histology eggs, morphometry eggs and geometric morphometric wings. Molecular markers were also used CO1, Cyt b, 16S, 28S, ITS1 and ITS2. The results corroborate the descriptions of literature and provide new parameters for the characterization of the four species of T. sordida subcomplex and the phylogenetic relationships of Triatominae. The study of median process of pygophore of T. garciabesi, T. guasayana and T. sordida by means of SEM showed no differences between the three species. The female external genitalia of T. garciabesi, T. guasayana, T. patagonica and T. sordida observed by SEM showed differences that make it possible to distinguish these species. The morphological study of eggs by SEM The morphological study of eggs by SEM enabled possible to describe the characteristics of the exochorion of the four species, but was not very effective for discrimination. The Histological study reveals differences in tissue constitution of the four species exochorion. The morphometric study of eggs show that the variables of length and opercular opening eggs feature significant differences between species, the variable width was not significant. By morphometry of the wings was possible to differentiate the species... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Paulo Câmara Marques Pereira / Resumo: A Doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi (T. cruzi), é uma patologia infecciosa crônica que apresenta grande incidência no Brasil e, nos últimos anos, passou a ser endêmica em centros urbanos. É acompanhada por alterações no sistema imune com variações nos níveis séricos das citocinas pró-inflamatórias. O tratamento disponível no Brasil é o benzonidazol, com baixa eficácia na fase crônica e efeitos colaterais importantes. Sabe-se que os adipocitos são reservatórios de T. cruzi, aspecto importante que é a relação com as citocinas pro-inflamatórias e com o aumento de T.cruzi nos adipocitos interferindo na evolução da doença. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da obesidade e das citocinas pro inflamatórias em camundongos balb/c machos infectados com T. cruzi tratados ou não com benzonidazol. Foram utilizados 120 animais, divididos em seis grupos, sendo 3 com dieta normal e 3 com dieta hipercalórica. Esses foram avaliados em cinco momentos: M1-1°dia, M2-3°dia, M3-5°dia, M4-7°dia e M5-8°dia. Para infecção utilizou a cepa aguda Y, com pico de parasitemia no sétimo dia (M4). A eutanásia foi realizada em cinco animais de cada grupo, em cada momento. Para determinação das citocinas utilizou o Kits de CBA –Cytometric Beads Array, através de citômetro de fluxo. Além disso, foi verificado o peso da gordura. O medicamento foi ofertado na dosagem de 100 mg/Kg/dia. A análise estatística foi realizada por medidas descritivas com o cálculo de média, de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi (T. cruzi), is a chronic infectious disease that has a high incidence in Brazil and, in recent years, has become endemic in urban centers. It is accompanied by changes in the immune system with variations in serum levels of pro-inflammatory cytokines. The available treatment in Brazil is benzonidazole, with low efficacy in the chronic phase and important side effects. It is known that the adipocytes are reservoirs of T. cruzi, an important aspect that is the relation with the pro-inflammatory cytokines and with the increase of T. cruzi in the adipocytes interfering in the evolution of the disease. Therefore, the objective of the present study was to evaluate the effects of obesity and proinflammatory cytokines in T. cruzi infected or non-treated male balb / c mice with benzonidazole. A total of 120 animals were used, divided into six groups: 3 with normal diet and 3 with hypercaloric diet. These were evaluated in five moments: M1-1 day, M2-3 day, M3-5 day, M4-7 day and M5-8 day. For infection, the acute Y strain was used, with a peak of parasitemia on the seventh day (M4). Euthanasia was performed in five animals from each group, at each moment. In order to determine the cytokines, the CBA-Cytometric Beads Array Kits were used by flow cytometer. In addition, the fat weight was checked. The drug was offered in the dosage of 100 mg / kg / day. Statistical analysis was performed by descriptive measures with mean, standard deviation, mi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: Grasiela de Campos Dias Severi Aguiar / Banca: Patrícia Simone Leite Vilamaior / Resumo: Os triatomíneos, insetos hematófagos estritos em todas as fases da vida, conhecidos popularmente como "barbeiros" ou "chupanças", pertencem à subfamília Triatominae (Heteroptera - Reduviidae) e são importantes vetores da doença de Chagas. Os interesses nos estudos desses insetos não se limitam apenas a questão médico-sanitária, pois em termos citogenéticos, também são de grande importância. Além disso, a sistemática e relações filogenéticas dos triatomíneos têm sido pautadas em análises morfológicas formando um quadro de conflitos taxonômicos. Assim, por meio da descrição cariotípica de T. baratai sugerimos que dados citogenéticos sejam incorporados aos sistemas de classificação dos triatomíneos. Também foi analisada a diversidade de bandas produzidas com o uso de enzimas de restrição AluI (AG ↓ CT) e Hae III (GG ↓ CC) nas espécies de T. tibiamaculata, T. protacta e T. platensis, alojadas em três diferentes complexos. Os dados obtidos mostraram padrões semelhantes em cromossomos autossômicos e sexuais e comportamentos ora distintos ora semelhantes em núcleos interfásicos. O estudo da proteína nucleolar fibrilarina, por meio de técnicas de imunofluorescência, foi realizada para verificar sua presença no corpo cromatoide, estrutura citoplasmática próximo do envoltório nuclear, de T. platensis e T. rubrovaria. Os dados obtidos no presente estudos aliados com outras técnicas auxiliarão na compreensão da biologia desses vetores da doença de Chagas / Abstract: The triatomine hematophagous insects strict at all stages of life, popularly known as "kissing bugs" or "chupanças" belong to the subfamily Triatominae (Heteroptera - Reduviidae) and are important vectors of Chagas disease. The interests in the studies of these insects are not limited to medical and health issue, because in terms cytogenetic, are also of great importance. Moreover, the systematic and phylogenetic relationships of the insects have been guided by morphological analyzes forming a taxonomic framework of conflict. Thus, by describing karyotype of T. baratai suggest that cytogenetic data are incorporated into the rating systems of the insects. Also analyzed the diversity of bands produced with the use of restriction enzymes AluI (AG ↓ CT) and Hae III (GG ↓ CC) on the species T. tibiamaculata, T. protacta and T. platensis, housed in three different complexes. The information obtained showed similar patterns in autosomal chromosomes and sexual behavior and sometimes different now similar in interphase nuclei. The study of nucleolar protein fibrillarin, by means of immunofluorescence was performed to verify its presence in chromatoid body, cytoplasmic structure near the nuclear envelope, T. platensis and T. rubrovaria. The information obtained in this study combined with other techniques will help understand the biology of these vectors of Chagas disease / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Ciências e Tecnologias e Saúde, 2018. / Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Ciências e Tecnologias e Saúde, 2018. / Introdução: A estimulação elétrica nervosa transcutânea (TENS) aplicada na região cérvico-torácica tem demonstrado capacidade de aumentar o fluxo sanguíneo periférico por meio da modulação autonômica em indivíduos saudáveis e isquemia vascular. Pacientes com insuficiência cardíaca de etiologia chagásica manifestam fibrose das fibras miocárdicas que induz uma sobrecarga autonômica compensatória. Nossa hipótese é que a EEG possa modular a hiperatividade simpática e melhorar a função vascular nessa população. Objetivos - Avaliar o efeito da estimulação elétrica nervosa transcutânea ganglionar na variabilidade da frequência cardíaca (VFC) e na dilatação mediada por fluxo (FMD) em homens com insuficiência cardíaca chagásica. Métodos: Foi realizado um ensaio clínico randomizado. Vinte homens (10 saudáveis e 10 chagásicos) foram submetidos a uma intervenção (TENS ou placebo) aplicada sobre a região ganglionar (vértebras C7 e T4) durante 30 minutos. A VFC e as imagens de fluxo sanguíneo e resistência vascular foram continuamente monitoradas durante as sete etapas do protocolo de coleta enquanto que as imagens da FMD foram registradas antes e após a intervenção durante os 5 minutos de liberação do manguito da oclusão da artéria braquial. Os efeitos da intervenção foram comparados utilizando-se o Teste ANOVA Two-way com Teste post-hoc de Tukey para ambos os grupos, considerando um p <0,05. Resultados: A FMD aumentou 69,93% nos indivíduos saudáveis (6,32 ± 2,39% para 10,74 ± 2,52%) e 28,45% em pacientes chagásicos (8,33 ± 2,44% para 10,7 ± 1,98%) após aplicação da TENS ganglionar. A VFC apresentou um padrão de redução da atividade simpática durante a modulação autonômica. Conclusão: Apesar de não alterar os índices da VFC, a aplicação da TENS sobre a região cérvico-torácica melhorou o ajuste da função endotelial da artéria braquial. Este resultado ratifica o efeito vascular da TENS aplicada sobre o gânglio estrelado e demonstra a capacidade preservada de dilatação dos vasos na insuficiência cardíaca chagásica. / Introdução: A estimulação elétrica nervosa transcutânea (TENS) aplicada na região cérvico-torácica tem demonstrado capacidade de aumentar o fluxo sanguíneo periférico por meio da modulação autonômica em indivíduos saudáveis e isquemia vascular. Pacientes com insuficiência cardíaca de etiologia chagásica manifestam fibrose das fibras miocárdicas que induz uma sobrecarga autonômica compensatória. Nossa hipótese é que a EEG possa modular a hiperatividade simpática e melhorar a função vascular nessa população. Objetivos - Avaliar o efeito da estimulação elétrica nervosa transcutânea ganglionar na variabilidade da frequência cardíaca (VFC) e na dilatação mediada por fluxo (FMD) em homens com insuficiência cardíaca chagásica. Métodos: Foi realizado um ensaio clínico randomizado. Vinte homens (10 saudáveis e 10 chagásicos) foram submetidos a uma intervenção (TENS ou placebo) aplicada sobre a região ganglionar (vértebras C7 e T4) durante 30 minutos. A VFC e as imagens de fluxo sanguíneo e resistência vascular foram continuamente monitoradas durante as sete etapas do protocolo de coleta enquanto que as imagens da FMD foram registradas antes e após a intervenção durante os 5 minutos de liberação do manguito da oclusão da artéria braquial. Os efeitos da intervenção foram comparados utilizando-se o Teste ANOVA Two-way com Teste post-hoc de Tukey para ambos os grupos, considerando um p <0,05. Resultados: A FMD aumentou 69,93% nos indivíduos saudáveis (6,32 ± 2,39% para 10,74 ± 2,52%) e 28,45% em pacientes chagásicos (8,33 ± 2,44% para 10,7 ± 1,98%) após aplicação da TENS ganglionar. A VFC apresentou um padrão de redução da atividade simpática durante a modulação autonômica. Conclusão: Apesar de não alterar os índices da VFC, a aplicação da TENS sobre a região cérvico-torácica melhorou o ajuste da função endotelial da artéria braquial. Este resultado ratifica o efeito vascular da TENS aplicada sobre o gânglio estrelado e demonstra a capacidade preservada de dilatação dos vasos na insuficiência cardíaca chagásica. / Background: Transcutaneous electrical nerve stimulation (TENS) over cervicothoracic region has been shown to increase peripheral blood flow through autonomic modulation in healthy individuals and vascular ischemia. Patients with heart failure with chagasic etiology show fibrosis of the myocardial fibers without severe vascular impairment, but with greater compensatory autonomic overload. Our hypothesis is that GEE may modulate sympathetic hyperactivity and vascular function in this population. Objectives - To evaluate the effect of ganglionic transcutaneous electrical nerve stimulation on heart rate variability (HRV) and flow - mediated dilatation (FMD) in patients with chagasic heart failure. Methods: It was a randomized controlled trial. Twenty men (10 healthy and 10 chagasic) underwent interventional stimulation (TENS or placebo) applied over the ganglionic region (C7 and T4 vertebrae) for 30 minutes. HRV and images of blood flow and vascular resistance were continuously monitored during the seven steps of the collection protocol while images of FMD were recorded before and after the intervention during the 5 minutes of cuff-occlusion release of brachial artery. The effects of the intervention were compared using the Two-Way ANOVA test with Tukey Post-hoc test for bothe groups considering a p <0.05. Results: Flow-mediated dilation (FMD) increased 69.93% in healthy subjects (6.32 ± 2.39% to 10.74 ± 2.52%) and 28.45% in chagasic patients (8.33 ± 2.44% to 10.7 ± 1.98%) after GEE application. Heart rate variability (HRV) showed a pattern of reduction of sympathetic activity during autonomic modulation. Conclusion: Despite we didn't find any change in HRV indexes, the application of TENS over cervico-thoracic region improved the endothelial function of the brachial artery. This result ratifies the vascular effect of TENS applied on the star ganglion and demonstrates the preserved capacity of vessel dilatation in chagasic heart failure. / Background: Transcutaneous electrical nerve stimulation (TENS) over cervicothoracic region has been shown to increase peripheral blood flow through autonomic modulation in healthy individuals and vascular ischemia. Patients with heart failure with chagasic etiology show fibrosis of the myocardial fibers without severe vascular impairment, but with greater compensatory autonomic overload. Our hypothesis is that GEE may modulate sympathetic hyperactivity and vascular function in this population. Objectives - To evaluate the effect of ganglionic transcutaneous electrical nerve stimulation on heart rate variability (HRV) and flow - mediated dilatation (FMD) in patients with chagasic heart failure. Methods: It was a randomized controlled trial. Twenty men (10 healthy and 10 chagasic) underwent interventional stimulation (TENS or placebo) applied over the ganglionic region (C7 and T4 vertebrae) for 30 minutes. HRV and images of blood flow and vascular resistance were continuously monitored during the seven steps of the collection protocol while images of FMD were recorded before and after the intervention during the 5 minutes of cuff-occlusion release of brachial artery. The effects of the intervention were compared using the Two-Way ANOVA test with Tukey Post-hoc test for bothe groups considering a p <0.05. Results: Flow-mediated dilation (FMD) increased 69.93% in healthy subjects (6.32 ± 2.39% to 10.74 ± 2.52%) and 28.45% in chagasic patients (8.33 ± 2.44% to 10.7 ± 1.98%) after GEE application. Heart rate variability (HRV) showed a pattern of reduction of sympathetic activity during autonomic modulation. Conclusion: Despite we didn't find any change in HRV indexes, the application of TENS over cervico-thoracic region improved the endothelial function of the brachial artery. This result ratifies the vascular effect of TENS applied on the star ganglion and demonstrates the preserved capacity of vessel dilatation in chagasic heart failure.

Orientador : Christian Macagnam Probst / Coorientador : Daniela Parada Pavoni / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 29/08/2016 / Inclui referências : f. 133-147 / Resumo: O Trypanosoma cruzi é o agente da doença de Chagas, sendo um protozoário flagelado pertencente à ordem Kinetoplastida. Este parasita está distribuído em 21 países. Possui um ciclo de vida bastante complexo com diferenças morfológicas ultra-estruturais, funcionais e bioquímicas, apresentando sob diferentes formas nos hospedeiros invertebrados e vertebrados. A forma epimastigota é não infectiva e proliferativa, encontrada naturalmente no trato digestivo do inseto vetor, podendo ser cultivada in vitro. Um importante passo para melhor entendimento desse parasita é estudo das suas características celulares e moleculares apresentadas durante a sua curva de crescimento. Nesse trabalho foi apresentada uma visão global do perfil de expressão gênica a partir das frações de mRNA total e polissomal ao longo de 10 dias da curva de crescimento de epimastigotas de T. cruzi. Usando a metodologia de RNA-seq, 2491 genes diferencialmente expressos (DEGs) foram identificados, dos quais 768 foram modulados em ambas as frações. De acordo com os padrões de modulação encontrados, os DEGs foram agrupados em 13 clusters e alguns destes apresentaram enriquecimento de termos de ontologia gênica (GO) indicando os processos biológicos e moleculares envolvidos. Análises do perfil polissomal podem revelar quais genes estão sendo traduzidos em uma determinada condição, assim o padrão de expressão desses mRNAs pode ser diferente nas frações de total e polissomal. No entanto, foi encontrada uma extensa sobreposição dos padrões de modulação para a maioria dos clusters. Claramente durante a fase estacionária o conteúdo de polissomos apresentou uma forte diminuição associado ao surgimento de grânulos de mRNA. Isto sugere que durante esta fase a maioria dos transcritos isolados a partir do colchão de sacarose está provavelmente associada a complexos de mRNA invés de polirribossomos. Isto pode indicar que os mRNAs da fase estacionária podem estar sendo protegidos por esses grânulos para posterior tradução quando o ambiente se tornar novamente favorável. Vários aspectos da curva de crescimento deste parasita foram destacados, principalmente em relação as alterações pelas quais o parasita transita ao longo da fase estacionária. Além disso, foi investigada uma possível via de controle através da concentração de glicose a qual foi proposta a partir de comparações com estudos de Saccharomyces cerevisiae. Para um estudo complementar da curva de crescimento foi realizada uma abordagem de proteômica. Os dados preliminares mostraram uma boa identificação de grupos de proteínas (3.249), a maioria representando uma proteína por grupo. Algumas proteínas diferencialmente expressadas (DEPs) foram detectadas, apesar do baixo poder estatístico das análises. Dentre 68 DEPs identificadas, 21 mostraram correlação no padrão de modulação com os dados de transcritômica. Também foi apresentada uma análise de transcritômica preliminar de epimastigotas em fase estacionária inicial submetidos a diferentes condições nutricionais (PBS, TAU e TAU3AAG) por 1, 2, 4, 6 e 24 horas. Foram identificados 612, 804 e 941 supra-genes diferencialmente expressos nos meios PBS, TAU e TAU3AAG, respectivamente. A maioria dos supra-genes modulados foram comuns nas três condições. Juntos, esses estudos representam uma etapa importante na obtenção de dados em larga escala que geração de conhecimento sobre o comportamento e resposta do parasita em diferentes condições ambientais. Palavras-chave: Trypanosoma cruzi, doença de Chagas, curva de crescimento, RNA-seq, polissomos, proteômica e estresse. / Abstract: The Trypanosoma cruzi is a flagellated protozoa that belongs to the Kinetoplastida order and is the etiologic agent of Chagas disease, an endemic illness distributed in 21 countries. The T. cruzi life cycle is complex including morphological, functional and biochemical changes. The epimastigote form is proliferative and non-infective, founded naturally in the insect vector gut and can be cultivated in vitro. An important step to comprehend the T. cruzi biology is the study of cellular and molecular features presented during its growth curve. Here, we show a global view of gene expression profile for total and polysomal RNA fractions along 10 days of the T. cruzi epimastigote growth curve in vitro. A total of 2491 differential expressed genes (DEGs) were established using RNA-Seq approach, of which 768 were modulated in both fractions. According to the modulation pattern, these DEGs were grouped into 13 clusters and some of them show enrichment to important GO terms, indicating molecular and cellular biological processes involved. The polysomal profile might reveal mRNAs that are being translated and their expression pattern could be different from the total RNA fraction, nevertheless, in most clusters we see remarkable overlapped modulation. Moreover, at the stationary phase the polysomal content greatly decline while the RNA granules seems to increase. This suggests that most of mRNAs isolated from sucrose cushion at this growth stage should be associated with granules instead with polyribosomes. This possible indicates that stationary phase mRNAs are being protected by granules for further translation when the environment becomes favorable. We highlight some views on the T. cruzi growth curve, mainly related to the alteration that the parasite pass along the stationary phase. Moreover, a possible sensing pathway for glucose depletion was suggested for T. cruzi based on Saccharomyces cerevisiae studies comparison. Growth curve complementary study was performed using proteomic approach. Preliminary data shows the identification of 3,249 protein groups, mostly representing one protein per group. Some differential expressed proteins (DEPs) were identified, besides the limited statistical power. Among the 68 DEPs identified, 21 showed correlation in their proteomic and transcriptomic modulation pattern. Preliminary transcriptomic analysis of epimastigote in early stationary phase under three nutritional different conditions (PBS, TAU, TAU3AAG) during 1, 2, 4, 6 and 24 hours were also present here. Total of 612, 804 and 941 differential expressed supra-genes were identified in PBS, TAU and TAU3AAG conditions, respectively. Most of supra-genes were common to all treatments. Together, these works represent an important step for large scale data generation that will provide insights into the parasite behavior and response to different environmental conditions. Key-words: Trypanosoma cruzi, Chagas disease, growth curve, RNA-seq, polysomes, proteome and stress.

Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Raquel Regina Duarte Moreirae Thiemann / Banca: Otavio Henrique Thiemann / Banca: Bruna Galdorfini Chiari Andréo / Banca: Ian Castro Gamboa / Resumo: A doença de Chagas ou tripanossomíase americana é endêmica nas Américas, porém outros modos de transmissão dispersaram a enfermidade às regiões onde não ocorre o vetor triatomíneo hematófago. No momento há apenas dois fármacos para o tratamento da doença, benzonidazol e nifurtimox, porém nifurtimox não é mais utilizado no Brasil. Ambos os medicamentos tem ações limitadas, dependem da fase da doença e apresentam efeitos adversos severos, além dos mecanismos de ação não serem totalmente conhecidos. Estudos relacionam a resistência ao benzonidazol com o aumento na produção de triparedoxina peroxidase mitocondrial (mTcTXNPx) que minimiza os efeitos tóxicos de espécies reativas de oxigênio, apresenta atividade peroxidase e peróxinitrito redutase. Derivados benzofuroxânicos, por conter estrutura heterociclo N-óxido relacionada com a oxidação de biomoléculas, tem apresentado atividade anti Leishmania e tumoral, bacteriostática e fungistática. No presente estudo, derivados benzofuroxânicos (N-óxido-benzo[1,2-c]1,2,5-oxadiazol), inéditos isósteros de nitrofural, foram avaliados a partir de ensaios citotóxicos in vitro, na forma epimastigota da cepa Y de T. cruzi. Os derivados benzofuroxânicos foram tóxicos para T. cruzi, IC50 menor em relação ao benzonidazol, mas não foram tóxicos para células de mamíferos HepG2, o que indica serem promissoras moléculas tripanossomicidas. Também foram detectados o monômero de mTcTXNPx de 25,5 kDa e o dímero de aproximadamente 58 kDa em condições redut... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease or American trypanosomiasis is endemic in Americas, however distinct mechanisms have dispersed the illness to the regions where the hematophagous triatomine vector does not occurs. At moment there are only two drugs available to treat the disease, benznidazole and nifurtimox, but nifurtimox is not prescribed in Brazil. Both medicines have limited actions, depend on disease phase and have severe adverse effects, moreover the mechanism of action do not well understood. Studies have described the benznidazole resistance would be related to increasing expression of mitochondrial tryparedoxin peroxidase (mTcTXNPx) which decreasing toxic effects of reactive oxygen species, has peroxidase and peroxinitrite reductase activity. Benzofuroxans derivative contain N-oxide heterocycle structure related to the oxidation of biomolecules, have shown anti-Leishmania activity and tumoral, bacteriostatic and fungistatic. In the present study, benzofuroxanic derivatives (Noxide-benzo [1,2-c] 1,2,5-oxadiazole), novel nitrofural isosteres, were evaluated from in vitro cytotoxic assays on the epimastigote form of strain Y of T. cruzi. The benzofuroxanic derivatives were toxic to T. cruzi, IC50 lower than benznidazole, although were not toxic to mammalian HepG2 cells, indicating promising trypanocidal molecules. Also, were detected the 25.5 kDa mTcTXNPx monomer and the dimer of approximately 58 kDa under reducing conditions maintained by 2-mercaptoethanol. Although there was no increased in 25.5 kDa mTcTXNPx expression, the presence of the dimer of approximately 58 kDa was verified from purified T. cruzi total protein... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: João Aristeu da Rosa / Coorientadora: Patrícia Bento da Silva / Banca: Lívia Maria Fusari / Banca: Camila Cristina de Foggi / Banca: Estela Sasso Cerri / Banca: Luis Vitor Silva do Sacramento / Resumo: A doença de Chagas apresenta em sua cadeia epidemiológica hospedeiros invertebrados, que são os triatomíneos, insetos hematófagos que veiculam Trypanosoma cruzi, agente etiológico dessa zoonose. Devido à importância epidemiológica dos triatomíneos faz-se necessário um estudo detalhado sobre caracteres morfológicos e bioquímicos, buscando uma possível relação entre fatores endógenos, exógenos e sua capacidade vetorial. Nesta tese foi desenvolvido o estudo de metabólitos produzidos pelos triatomíneos, dentre esses os constituintes responsáveis pela coloração do conexivo de adultos de Panstrongylus megistus, Triatoma dimidiata, Triatoma lenti e Triatoma rubrovaria. Justifica-se a utilização dessas espécies, pois P. megistus e T. rubrovaria embora de gêneros distintos, apresentam a coloração vermelha no conexivo enquanto T. dimidiata e T. lenti contém em seus conexivos, manchas amarelas. Assim, a identificação das substâncias responsáveis pela coloração do conexivo dessas espécies será útil para determinações de novos marcadores taxonômicos e também para análises filogenéticas. Dessa forma, foram utilizadas várias metodologias experimentais para elucidar e caracterizar a constituição dos componentes pigmentados do conexivo. As análises feitas por microscopia eletrônica de varredura e microscopia eletrônica de transmissão acopladas com EDS permitiram a visualização e identificação de nanopartículas e elementos químicos. A identificação das nanopartículas foi feita por determinação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease presents in its epidemiological chain invertebrate hosts, which are the triatomines, hematophagous insects that carry Trypanosoma cruzi, etiological agent of this zoonosis. Due to the epidemiological importance of triatomines, a detailed study of morphological and biochemical characteristics is necessary, seeking a possible relationship between endogenous and exogenous factors and their vector capacity. In this thesis developed was the study of metabolites produced by triatomines, among them the constituents responsible for the coloring of the adult connexive of Panstrongylus megistus, Triatoma dimidiata, Triatoma lenti and Triatoma rubrovaria. The use of these species is justified because P. megistus and T. rubrovaria, although of different genera, have a red color in the connexive while T. dimidiata and T. lenti contain yellow spots on their connective tissue. The identification of the substances responsible for the coloring of the connective of these species will be useful for determinations of new taxonomic markers and for phylogenetic analyzes. In this way, several experimental methodologies were used to elucidate and characterize the constitution of the pigmented components of the connective tissue. The analyzes made by scanning electron microscopy and transmission electron microscopy coupled with EDS allowed the visualization and identification of nanoparticles and chemical elements. The identification of the nanoparticles was made by determination and measurement of the atomic planes from the images generated by the high resolution MET analysis. These techniques have identified the existence of chemical elements consisting of nanoparticles, human blood and β-chitin. The results obtained allow us to conclude that the color... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-26T07:30:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 299995.pdf: 1821536 bytes, checksum: 3988ebf26e34a8547f8e39b4f07e3910 (MD5) / Introdução: A cardiopatia chagásica crônica (CCC) é considerada a causa mais comum de insuficiência cardíaca congestiva (ICC) com arritmias e morte súbita em adultos jovens nas áreas endêmicas. A progressão da severidade da CCC está associada ao aumento do dano oxidativo, conforme já demonstrado em trabalhos anteriores de nosso laboratório. Objetivos: a) Verificar o efeito antioxidante do carvedilol isoladamente, na dose de 37,5 mg/dia, e na sua associação às vitaminas antioxidantes E e C, nas doses diárias de 800 UI e 500 mg, respectivamente, ambas intervenções administradas por 6 meses; b) Verificar a eventual persistência da atenuação no quadro sistêmico de estresse oxidativo e do processo inflamatório após as sucessivas suplementações ao longo de 7 anos de monitoramento. Materiais e Métodos: Os pacientes foram classificados e divididos em quatro grupos, de acordo com a classificação clínica e hemodinâmica de Los Andes modificada, em grupos IA (n=10); IB (n=20); II (n=8) e III (n=4). Foram determinados os marcadores de estresse oxidativo, como as substâncias reagentes ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e proteína carbonilada (PC), além das atividades da superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx), catalase (CAT), glutationa redutase (GR) e glutationa S-transferase (GST), níveis de glutationa reduzida (GSH) e vitaminas E, e marcadores inflamatórios, como adenosina deaminase (ADA), mieloperoxidase (MPO) e óxido nítrico (-NO). a) Todas essas variáveis foram determinados no sangue dos pacientes, antes e após a terapia por 6 meses com carvedilol isoladamente, e após suplementação combinada das vitaminas antioxidantes e carvedilol por 6 meses. As comparações estatísticas dos marcadores de estresse oxidativo e inflamatórias dentro dos diferentes grupos e entre os diferentes tratamentos aplicados, foram realizadas através da Análise de Variância (ANOVA), complementada pelo teste de Tukey-Kramer, utilizando o método dos modelos lineares generalizados para medidas repetidas, admitindo um nível mínimo de significância de p 0,05. b) O resultado destas análises foi monitorado ao longo de 7 anos de sucessivas intervenções. Para análise estatística do monitoramento foi realizado um estudo transversal, por um método de associação para variáveis quantitativas. Resultados: a) Após 6 meses de intervenção com carvedilol a atividade da SOD diminui em todos os grupos: IA, IB, II e III a GST diminuiu nos grupos: IA, IB e II a GPx diminuiu apenas nos grupos: IA e IB; a CAT aumentou nos grupos IA e IB; houve diminuição dos níveis de GSH em todos os grupos: IA, IB, II e III e PC nos grupos IA, IB, II e III; os níveis de vitamina E e TBARS permaneceram inalterados em todos os grupos; dos marcadores inflamatórios, apenas o -NO aumentou no grupo IA. Após a adição de vitaminas E e C à terapia de carvedilol, observou-se: um perfil semelhante nas enzimas SOD, GST e GPx (diminuição em todos os grupos, apenas nos grupos IA, IB e II, apenas nos grupos IA e IB, respectivamente); diminuição da atividade da GR nos grupos IA e IB, e manutenção da atividade da CAT; os níveis de GSH diminuíram em todos os grupos: IA, IB, II e III, enquanto os níveis de TBARS diminuíram apenas nos grupos IA e IB; os níveis de PC mantiveram-se diminuídos, porém aumentados em todos os grupos, quando comparados com a intervenção do carvedilol; a vitamina E aumentou em todos os grupos após a suplementação: IA, IB, II e III; houve diminuição dos níveis de -NO no grupo IA e aumento de MPO nos grupos IB e II enquanto que a ADA aumentou apenas em IA. b) Nos 7 anos de acompanhamento destes pacientes, observou-se uma progressiva diminuição nos níveis de TBARS e PC, com uma concomitante diminuição nos níveis de GSH. SOD e GPx, após seguidas suplementações, diminuíram suas atividades, sendo mais expressivas após administração do carvedilol e quando o fármaco foi associado às vitaminas E e C. A atividade da GR manteve-se constante a partir do ano de 2008a, com tendência à queda semelhante àquela observada nas demais enzimas. A atividade da GST, a partir de 2008b, manteve-se diminuída até 2010b. A atividade da CAT teve seu maior aumento no ano de 2008c, após suplementação vitamínica e manteve-se praticamente inalterada no decurso do estudo. Os níveis de vitamina E aumentaram após as suplementações, mantendo-se estáveis ao longo dos 7 anos. MPO e -NO mostraram um perfil de aumento discreto, enquanto que a ADA permaneceu inalterada após os 7 anos de intervenção. Conclusões: a) O carvedilol foi efetivo em manter diminuída a maioria das enzimas antioxidantes e os marcadores de dano (TBARS e PC), e aparentemente, exibiu efeito sinérgico com as vitaminas E e C em atenuar o estresse oxidativo sistêmico. b) Os 7 anos de sucessivas intervenções com antioxidantes foram eficazes em manter o poder redutor no sangue de pacientes chagásicos com CCC. Aparentemente, o insulto oxidativo associado à cronicidade da doença cardíaca de Chagas, foi atenuado após cada intervenção antioxidante, e este efeito mostrou relativa persistência entre os intervalos das diferentes intervenções antioxidantes.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-25Bitstream added on 2014-06-13T20:03:05Z : No. of bitstreams: 1 blau_l_dr_arafcf.pdf: 2905737 bytes, checksum: c4bc675e22ee081d46b59428973bb73a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença de Chagas ou Tripanossomíase americana é ainda um dos maiores problemas endêmicos na América Latina desde sua descoberta 100 anos atrás. Em 2006, havia aproximadamente 7,6 milhões de casos de infecção por Trypanosoma cruzi nos 21 países latino americanos. Cerca de 90 milhões de pessoas estão sobre o risco de contrair a infecção. O número de mortes e novos casos atribuídos a essa doença são respectivamente 21.000 e 200.000 no ano de 2000. Dois fármacos são usados particularmente para tratar esta doença, nifurtimox e benznidazol que são ativos somente na fase aguda da doença. No Brasil, somente benznidazol é disponível no mercado, por causa da resistência do nifurtimox às cepas de T. cruzi. Ambos os fármacos causam efeitos adversos graves que incluem polineuropatia periférica, agranulocitose e trombocitopenia púrpura. Embora o papel exato do sistema imune na patogenia não é totalmente entendido, é aceito que o sistema imune tenha um papel importante na proteção da infecção parasitária. Antígenos produzidos por T. cruzi afetam a função celular e induzem uma resposta caótica no hospedeiro, como a transialidase (TS) que é essencial para sobrevivência do parasita. TS é uma enzima envolvida na invasão de células hospedeiras mamíferas, na proteção contra componentes do sistema complemento e induz apoptose severa nas células do sistema imune, e que a administração de anticorpos é capaz de neutralizar esta enzima. Outro antígeno, J-18, um derivado recombinante da glicoproteína gp82, é capaz de se ligar à mucosa gástrica e isto é crucial para o estabelecimento da infecção oral. Então, um anticorpo contra esta glicoproteína poderia ser útil para inibir a invasão na mucosa gástrica. Cruzipaína é outra enzima importante do T. cruzi e suas funções parecem ser participar da nutrição, mecanismos de defesa e replicação do parasita... / Chagas disease or American trypanosomiasis is still one of the major endemic problems in Latin America since its discovery 100 years ago. In 2006, there were approximately 7.6 million cases of Trypanosoma cruzi infection in 21 Latin American countries. Around 90 million people are at risk of contracting the infection. The number of deaths and new cases attributed to this disease are respectively 21,000 and 200,000 in the year 2000. Two drugs are particularly used to treat this disease; nifurtimox and benznidazol are active only in its acute phase. In Brazil, just benznidazol is available in the market, because nifurtimox resistant to T. cruzi strains. Both drugs cause severe side-effects including peripheral sensitive polyneuropathy, agranulocytosis and thrombocytopenic purpura. Although the exact role of the host immune system in the pathogenesis is not still fully understood, it is accepted that the immune system plays an important role in protection from parasitic infection. Antigen derivatives from T. cruzi affect cellular function and induce chaotic immune system host response, like trans-sialidase (TS) being essential for the parasite survival. TS is an enzyme involved in the invasion of mammalian host cells, in the protection against components of complement system and induces severe apoptose in cells of the immune system, and that antibodies administration is able to neutralize this enzyme. Another antigen, J-18, a recombinant glyprotein gp82 derivative, is able to bind to gastric mucin and this is crucial for the establishment of T. cruzi infection by oral route. Then, an antibody against this glycoprotein could be useful to inhibit the gastric mucin invasion. Cruzain is another important enzyme of T. cruzi and its functions seem to participate in nutrition, defense host mechanisms and replication of intracellular parasite. While there are no strong inhibitors against TS... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3825.pdf: 11572588 bytes, checksum: 5139f6f8274e9d9b46982514e6a5c21e (MD5) Previous issue date: 2011-06-30 / Universidade Federal de Minas Gerais / Chagas disease, caused by the flagellate protozoan of the family Trypanosomatidae Trypanosoma cruzi, is endemic in Latin America. The available drugs are ineffective and cause severe side effects. Therefore, it is necessary the discovery and development of new drugs for Chagas disease chemotherapy. The cruzain enzyme (EC 3.4.22.51) is expressed in all T. cruzi life cycle and represents a valid target against Chagas disease. The search for new cruzain enzyme inhibitors was carried out through the development of a new strategy using in silico methods, based on integrated ligand and target virtual screening. The consensus of different virtual screenings allowed the selection of 23 molecules for in vitro assays, from a virtual library containing approximately 8.5 million structures collected from the commercial database ZINC. The compounds were assayed against the cruzain and human homologous cathepsin-L and 12 presented inhibitory activity. The IC50 values ranged from 5.6 to 73.9 &#956;M for cruzain and 8.6 to 89.1 &#956;M for cathepsin-L. The apparent inhibition constant (Ki app) of the identified compounds ranged from 3.7 and 64.5 &#956;M for cruzaínain and 3.8 to 87.1 &#956;M for the cathepsin-L and showed competitive inhibition mechanisms. New molecular classes of non-covalent inhibitors of the enzyme cruzain were identified. Two substances were validated as inhibitors by evaluating compound analogs to establishing relationships between molecular structure and biological activity; a substance with the ligand efficiency of 0.33 kcal mol-1 NA-1 was identified. Two enzyme inhibitors showed trypanocidal activity against the Y strain of T. cruzi trypomastigotes with potency comparable to the drug benznidazole®. The micromolar activity of the compounds against the cruzain enzyme and the confirmed activity against the parasite provide the opportunity for molecular optimization and improve the bioactive compounds design with known mode of action. / A doença de Chagas, causada pelo parasito tripanossomatídeo Trypanosoma cruzi, é uma doença endêmica distribuída por toda América Latina. Os fármacos disponíveis são ineficientes e apresentam sérios efeitos colaterais. Portanto, são necessários novos fármacos para a quimioterapia da doença de Chagas. A enzima cruzaína (EC 3.4.22.51) de T. cruzi é expressa durante todo o ciclo de vida e representa um alvo validado contra a doença da Chagas. A busca de novos inibidores da enzima cruzaína foi realizada pelo desenvolvimento de uma estratégia integrada utilizando métodos in silico baseados na estrutura do ligante e do receptor e métodos in vitro. O consenso dos diferentes métodos de ensaios virtuais permitiu a seleção de 23 moléculas para os ensaios in vitro, a partir de uma coleção virtual com cerca de 8,5 milhões de estruturas provenientes do banco de moléculas comerciais ZINC e 12 apresentaram atividade inibitória frente à enzima cruzaína e sua homóloga catepsina-L de humanos. Os valores de IC50 variaram entre 5,6 e 73,9 &#956;M para cruzaína e 8,6 a 89,1 para catepsina-L. As constantes de inibição aparentes (Ki app) da série de compostos identificados variaram entre 3,7 e 64,5 &#956;M para a cruzaína e 3,8 a 87,1 &#956;M para a catepsina-L e apresentaram mecanismos competitivos de inibição. Novas classes moleculares inéditas de inibidores não covalentes da enzima cruzaína foram identificadas. Duas substâncias foram validadas como inibidores através de avaliação de análogos para o estabelecimento de relações entre a estrutura molecular e atividade biológica, uma substância com eficiência do ligante de 0,33 kcal mol-1 NA-1 foi identificada. Dois inibidores enzimáticos apresentaram atividade tripanossomicida frente à cepa Y do T. cruzi em sua forma tripomastigota com potência comparável ao Benzonidazol®. A inibição da enzima cruzaína com atividade confirmada frente ao T. cruzi oferece a oportunidade de otimização da estrutura molecular da substância matriz e valoriza a racionalização do processo de identificação de substâncias bioativas com modo de ação conhecido.