Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-03T11:33:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Igor K. C. Lobo.pdf: 3889233 bytes, checksum: 90f8aeeb9144c0133ea8b9fbfc42611c (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-03T11:33:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Igor K. C. Lobo.pdf: 3889233 bytes, checksum: 90f8aeeb9144c0133ea8b9fbfc42611c (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-03T11:34:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Igor K. C. Lobo.pdf: 3889233 bytes, checksum: 90f8aeeb9144c0133ea8b9fbfc42611c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-03T11:34:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Igor K. C. Lobo.pdf: 3889233 bytes, checksum: 90f8aeeb9144c0133ea8b9fbfc42611c (MD5) Previous issue date: 2016-07-15 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Guarana from Amazonia is much appreciated for its medicinal and energizing properties, and the Amazonas state is the second national contribution in production. However, this production has been affected by a major disease of culture: the overbudding, whose causal agent is the fungus Fusarium decemcellulare. The symptoms of the disease are overbudding, hyperplasia and hypertrophy floral and stem galls. In other studies, the development of symptoms similar to those overbudding’s symptoms is associated to production, or modulation, of auxin hormone by the pathogen. Thus, this study aimed identify genes from biosynthesis pathways of auxin hormone in Fusarium decemcellulare and analyze differences between transcriptomic profiles of homothallic and heterothallic individuals. Twelve libraries were sequenced referring to six biological replicates (three homothallic individuals and three heterothallic individuals) for each growth condition: BD and MS media. Quality control of reads was carried out by Trimmomatic-0.33, FastQC and SortMeRNA softwares. Mapping reads to reference genome was done with TopHat2 software and the transcriptome assembly in each condition, as well as differential expression, were performed using the Cufflinks package (Cufflinks, Cuffmerge and Cuffdiff). Functional annotation of transcripts was performed by KEGG Automatic Annotation Server (KAAS) and Blast2GO. To verify the ability to synthesize auxin, FDC200 and CML2241 were grown in MS medium, which was then analyzed by ultra performance liquid chromatography. Genes from two putative auxin biosynthesis pathway were identified at genomic and transcriptomic levels: the indole-acetaldehyde pathway, its deviation and the tryptamine pathway. The expression of these genes was detected in both individuals, heterothallic and homothallic. A gene from a putative aminocyclopropane (ACC) deaminase also has been identified at genomic and transcriptomic levels, which is responsible for degrading the precursor of hormone ethylene, ACC. Furthermore, the auxin hormone was detected in the MS medium, where FDC200 and CML2241 were grown, confirming biosynthesis of IAA (indole-3-acetic acid) by the fungus. Therefore, the data obtained suggest the use of auxin biosynthesis and blocking of plant ethylene production by Fusarium decemcellulare to evade the host defense system, and the symptoms of overbudding in guarana plant would be a consequence of hormonal imbalance caused by the fungus. / O guaraná da Amazônia é muito apreciado por suas propriedades medicinais e energéticas, sendo o Amazonas a segunda contribuição nacional na produção. Esta produção, entretanto, acaba sendo afetada por uma das principais doenças da cultura: o superbrotamento, que tem como agente causal o fungo Fusarium decemcellulare. Os sintomas da doença são: o superbrotamento de gemas, a hiperplasia e hipertrofia floral e as galhas do caule. Em diversos estudos, associa-se sintomas semelhantes aos do superbrotamento a uma produção, ou ainda modulação, do hormônio auxina por parte do patógeno. Assim, o objetivo deste trabalho foi de identificar genes de vias de síntese do hormônio auxina em Fusarium decemcellulare e analisar diferenças entre perfis transcriptômicos de isolados homotálicos e heterotálicos. Foram sequenciadas 12 bibliotecas, referentes a seis réplicas biológicas (três isolados homotálicos e três isolados heterotálicos de F. decemcellulare) para cada condição de crescimento: meios BD e MS. O controle de qualidade das reads foi realizado pelos softwares Trimmomatic-0.33, FastQC e SortMeRNA. O mapeamento de reads no genoma de referência foi realizado com o software TopHat2 e a montagem do transcriptoma final em cada condição, bem como o cálculo de expressão diferencial, foram realizados através do pacote Cufflinks (Cufflinks, Cuffmerge e Cuffdiff). A anotação funcional dos transcritos foi realizada através das ferramentas KEGG Automatic Annotation Server (KAAS) e Blast2GO. Para verificar a habilidade de F. decemcellulare em sintetizar auxina, os isolados FDC200 e CML 2241 foram crescidos em meio MS, o qual foi posteriormente analisado por meio de cromatografia líquida de ultra performance. Foram identificados, a nível genômico e transcriptômico, duas putativas vias de síntese do hormônio auxina: a via do indol-acetaldeído, mais o desvio desta via, além da via da triptamina. A expressão destes genes foi detectada tanto em indivíduos heterotálicos, quanto em homotálicos. Foi identificado ainda, também a nível genômico e transcriptômico, um gene de uma putativa aminociclopropano (ACC) deaminase, responsável por degradar o precursor do hormônio etileno, o ACC. Além disso, o hormônio auxina foi detectado no meio de cultura MS, onde foram crescidos os isolados FDC200 e CML2241, confirmando biossíntese por parte do fungo. Os dados aqui obtidos sugerem, portanto, que Fusarium decemcellulare estaria se utilizando da síntese de auxina e bloqueio da produção de etileno da planta para burlar o sistema de defesa da hospedeira, sendo os sintomas do superbrotamento em guaranazeiro uma consequência do desequilíbrio hormonal causado pelo fungo.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-20T13:05:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Felipe B. Pessoa.pdf: 2891308 bytes, checksum: 9f5619e8fdd080b9c2dba4d27433d3d9 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-20T13:05:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Felipe B. Pessoa.pdf: 2891308 bytes, checksum: 9f5619e8fdd080b9c2dba4d27433d3d9 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-20T13:05:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Felipe B. Pessoa.pdf: 2891308 bytes, checksum: 9f5619e8fdd080b9c2dba4d27433d3d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T13:05:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Felipe B. Pessoa.pdf: 2891308 bytes, checksum: 9f5619e8fdd080b9c2dba4d27433d3d9 (MD5) Previous issue date: 2016-08-08 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Besides being useful for human consumption, fungi are versatile organisms that degrade organic matter, producing value added substance. Among the bioactive substances present in these fungi, polysaccharides are the main products, which have a high value for chemical, pharmaceutical and medical industries. Knowing that the Amazon presents the greatest biodiversity of the planet and that in this forest there is still little information about the species of native basidiomycetes, the objective of the study was the cultivation of edible mushrooms Lentinus strigosus and Pleurotus ostreatus in regional wood residues as a substrates, aiming the extraction and Chemical characterization of polysaccharides isolated from the fruiting body of these mushrooms. For the cultivation, regional wood residues were used, according to the following substrate formulation: 68% sawdust of Simaboura amara (marupá) or Anacardium giganteum (cajuí), cereal meal mixture (30%) and calcium carbonate (2 %), homogenized and humidified to 75%. The substrates were autoclaved, inoculated and kept in a climatic chamber until complete colonization, and then transferred to the production chamber. After the fruiting, the mushrooms were harvested, dehydrated and analyzed for yield. They were grounded and successively subjected to cold and hot water extractions for subsequent purification and characterization of polysaccharides. The fractions obtained containing polysaccharides were purified by the process of freezing and thawing, Fehling solution and dialysis membranes with 12-14 kDa exclusion limit. The chemical structure of the polysaccharide was determined by an analysis of the monosaccharide composition, NMR and methylation. Regarding to the production, the results showed that the formulation containing cajuí allowed better results of biological efficiency (EB 221,17 and 104,88%); Yield (220.23 g kg-1 and 72.5 g kg-1) for P. ostreatus and L. strigosus, respectively. The organic matter loss (OML) was not significantly different for the two types of substrates used. Three β-D-glucans were isolated from the hot extraction (IHW-fraction A, B and C), which contains the main chain composed of β-D-Glcp units connection (1→ 3), and may be replaced by O-6 for β-Glcp terminals. Besides, these were isolated homopolysaccharide (methylated galactan) of cold extraction. Thus, it is possible to use regional waste timbers for the cultivation of native edible fungi in the Amazon region. The glucans described in this study are similar to those that have biological effects reported in scientific literature, as it is likely that they have a therapeutic potential. / Os fungos são organismos versáteis que degradam matéria orgânica, produzem substância de valor agregado, além de serem úteis para a alimentação humana. Dentre as substâncias bioativas presentes nos fungos, os polissacarídeos são os principais produtos que apresentam elevado valor para a indústria química, farmacêutica e medicinal. Sabendo que a Amazônia apresenta a maior biodiversidade do planeta e que nesta floresta existem poucas informações sobre espécies nativas de basidiomicetos, são necessárias pesquisas sobre o petencial destes fungos. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo o cultivo dos cogumelos comestíveis Lentinus strigosus e Pleurotus ostreatus em resíduos madeireiros regionais como substratos, visando à extração e caracterização química dos polissacarídeos isolados do corpo de frutificação destes cogumelos. Para o cultivo, foram utilizados resíduos maderireiros regionais, conforme a seguinte formulação de substrato: 68% de serragem de de Simaboura amara (marupá) ou Anacardium giganteum (cajuí), mistura de farelo de cereais (30%) e carbonato de cálcio (2%), sendo os mesmos homogeneizados e umidificados a 75%. Os substratos foram autoclavados, inoculados e mantidos em câmara climática até a completa colonização, sendo em seguida, transferidos para câmara de produção. Após o período de frutificação, os basidiomas foram colhidos, desidratados e analisados quanto à produtividade. Posteriormente foram moídos e submetidos às extrações aquosas à frio e à quente sucessivamente para purificação e caracterização dos polissacarídeos. As frações obtidas contendo os polissacarídeos foram purificadas pelo processamento de congelamento/degelo, solução de Fehling e diálises em membranas com limite de exclusão de 12-14 kDa. A estrutura química dos polissacarídeos foi determinada através das análises de composição monossacarídica, metilação e RMN. Em relação ao cultivo, os resultados mostraram que a formulação contendo cajuí permitiu melhores resultados quanto à eficiência biológica (EB 221,17 e 104,88 %); rendimento (220,23 g kg-1 e 72,5g kg-1) para P. ostreatus e L. strigosus, respectivamente. A perda de matéria orgânica (PMO) não diferiu estatisticamente para os dois tipos de substratos utilizados. Três β-D-glucanas foram isoladas das extrações à quente (fração IHW-A, B e C). Sua estrutura contém cadeia principal formada por unidades β-D-Glcp com ligação (1→3), podendo ser substituída em O-6 por terminais de β-Glcp. Além destas, foram isolados homopolissacarídeos (galactana metilada) das extrações a frio. Sendo assim, foi possível utilizar resíduos de marupá e cajuí para o cultivo de fungos comestíveis nativos da Amazôia. As moléculas descritas neste estudo são semelhantes as que apresentam efeitos biológicos relatadas na literatura, sendo provável que as mesmas tenham um potencial terapêutico.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:33:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:34:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:34:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:34:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Studies on biodiversity has great importance to the rational use of natural resources, especially in mega-diverse regions such as the Amazonia. The study of fungal diversity Agaricomycetes is important to contribute with the knowledge of the diversity of them in the state of Amazon and introduce new records to the region. The relevance of this research is to contribute to the knowledge about biodiversity and the prospect of bioactive products, identifying fungi Agaricomycetes wood-degrading potential insecticide against larvae of mosquito of dengue virus, chikungunya and zika the Aedes aegypti. The methodology used for classical taxonomic identification was performed through analysis of macro-and microscopically, basidiomatas from the collections held in 12 municipalities of the state of Amazon (Autazes; Anamã; Careiro da várzea; Coari; Babu; Borba; Novo Aripuanã; Nova Olinda do Norte; Manaus; Manicoré; Parintins and Presidente Figueiredo) in the period from January to March 2013 and from January to May 2014. In that sense, it was possible to expand knowledge about the diversity of the Agaricomycetes. 323 specimens were collected, 263 of them were identified, represented by 40 genera, 76 species, classified into 15 families and 4 orders of Agaricomycetes. The healthy basidiocarps were recovered, of which 43 were pure cultures. These were used for the production of extracts, molecular identification and identification by MALDI-TOF. Molecular identification was through the sequencing of the Its regions 1 and 2 of the rDNA, and by MALDI TOF mass spectrometry. Molecular identification analyses were performed by comparison of the sequences deposited in GenBank. The result of the molecular sequencing allowed an alignment with the nucleotide sequences that matches the identification of fungi as being of the group, the Agaricomycetes similarity above 96 %. In MALDI TOF only 26 specimens were possible be submitted to IC/MALDI TOF MS analysis. Spectral data were obtained with peak patterns (ions) exclusive to fungi with similarity of protein mixtures, which refers to the percentage of identity for the amount of identical values. Larvicidal activity performed effectively, six fungi showed bioactive compounds with lethal capability against larvae of third stage of A. aegypti. The extract of P. sanguineus, presented mortality of probit to 5.3 larvae of A. aegypti, which gives this fungus, a potential entomopatogênico quite expressive. The other extracts were not possible being necessary for analysis, evaluation and increased sample number. / Os estudos sobre a biodiversidade são de suma importância para a utilização racional dos recursos naturais, principalmente em regiões mega-diversas, como a Amazônia. O estudo da diversidade de fungos Agaricomycetes é importante para contribuir com o conhecimento sobre a diversidade destes no Estado do Amazonas e apresentar novos registros para a região. A relevância dessa pesquisa está em contribuir para o conhecimento da biodiversidade e da prospecção de produtos bioativos, identificando fungos Agaricomycetes degradadores de madeira com potencial inseticida contra larvas do mosquito transmissor do vírus da dengue, chikungunya e zika o Aedes aegypti. A metodologia utilizada para identificação taxonômica clássica foi realizada através de análises dos basidiomas macro e microscopicamente, A partir das coletas realizadas em 12 municípios do Estado do Amazonas (Autazes; Anamã; Careiro da várzea; Coari; Barcelos; Borba; Novo Aripuanã; Nova Olinda do Norte; Manaus; Manicoré; Parintins e Presidente Figueiredo) no período de janeiro a março de 2013 e de janeiro a maio de 2014. Nesse sentido, foi possível expandir o conhecimento sobre a diversidade de Agaricomycetes na região. Foram coletados 323 espécimes, destes foram identificados 263, representados por 40 gêneros, 76 espécies, classificadas em 15 famílias e 4 ordens de Agaricomycetes. Os basidiocarpos saudáveis foram isolados, dos quais foram obtidas 43 culturas puras. Estes foram utilizados na produção de extratos, identificação molecular e identificação por MALDI- TOF. A identificação molecular foi através do sequenciamento das regiões Its 1 e 2 do rDNA, e pela técnica de MALDI TOF Espectrometria de Massa. As análises da identificação molecular foram realizadas por comparação das sequências depositadas no GenBank. O resultado do sequenciamento molecular permitiu um alinhamento com as sequências nucleotídicas que corresponde a identificação dos fungos como sendo do grupo Agaricomycetes, com taxa de similaridade acima de 96 %. Na técnica de MALDI TOF apenas 26 espécimes foram possíveis ser submetidas à análise IC /MALDI TOF MS. Foram obtidos dados espectrais com padrões de pico (íons) exclusivo para os fungos com similaridade das misturas de proteínas, o que refere-se a porcentagem de identidade para a quantidade de valores idênticos em massa. A atividade larvicida apresentou-se eficaz, seis fungos apresentaram substâncias bioativas com potencialidade letal contra larvas de 3º estádio de A. aegypti. O extrato de P. sanguineus, apresentou mortalidade de 5,3 probit para larvas de A. aegypti, o que confere a este fungo, um potencial entomopatogênico bastante expressivo. Os demais extratos não foram possíveis de análise sendo necessário para avaliação, e aumento do número amostral.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-16T11:49:28Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese parcial - Susamar Pansini.pdf: 500467 bytes, checksum: bf2e7b561436bbe06d2ee92c69f64f81 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-16T11:50:14Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese parcial - Susamar Pansini.pdf: 500467 bytes, checksum: bf2e7b561436bbe06d2ee92c69f64f81 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-17T20:18:49Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese parcial - Susamar Pansini.pdf: 500467 bytes, checksum: bf2e7b561436bbe06d2ee92c69f64f81 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-17T20:18:49Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese parcial - Susamar Pansini.pdf: 500467 bytes, checksum: bf2e7b561436bbe06d2ee92c69f64f81 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2016-08-23 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The relationship between environmental gradients and the set of palms trees (Arecaceae) was investigated in 48 permanent plots installed in 25 km2 of the forest in a fragment between the rivers Purus-Madeira in the Estação Ecologica do Cuniã (Ecological Station Cuniã - ESEC Cu-niã) which is located in the North of the province of Rondônia, Porto Velho municipality. 48 investigated plots, 30 are from the mainland and follow the curve of the ground level to mini-mize the internal variation in soils and topography and 18 plots are riparian and follow the course of streams. For the study of the relationship between the set of palm trees and environ-mental variations, data of surface soil samples were collected and granulometric analysis were made (percentages of silt, sand and clay), macro and micronutrients (pH, Ca, Mg, P, K, Fe, MN, Zn). The local hydrological conditions were measured by the distance of the nearest streams and vertical drainage gradient was measured by the depth of the water table sheet. The depth of the litter was measured every two meters along the centerline of each plot. The structure and floristic composition of the palm trees and the factors related to it was evaluated. The relation-ship between palm trees and gradient of soil, topography, elevation and depth of the local litter were studied, evaluating the most important factors for palm trees forest of canopy and subcan-opy and how small-scale variations change the response of species to environmental conditions. The community showed positive correlation with variable content of silt, phosphorus, sum of bases and distance of the stream, showing that species replacement is linked to local conditions. The study of the relationship between the palms and the hydrologic gradient was evaluated based on the monitoring of the water table, water distance and how species behave according to the variations of the local water conditions. Water is an important factor for the colonization of species of palm trees and affects them differently, based on the size of the species. Finally, it was evaluated how the palm trees set responds to the temporal variation by the analysis of mortality rates and the repopulation of the species. The main gradients related to mortality of palm trees in the area were elevation, and water distance. The repopulation was strongly influ-enced by the content of silt and the water distance. / A relação entre gradientes ambientais e a assembleia de palmeiras (Arecaceæ) foi investigada em 48 parcelas permanentes instaladas em 25 km2 de floresta em um trecho do interflúvio Pu-rus-Madeira na Estação Ecológica do Cuniã (ESEC Cuniã) que está localizada no norte do Estado de Rondônia, município de Porto Velho. Das 48 parcelas investigadas, 30 são de terra-firme e seguem a curva de nível do terreno para minimizar a variação interna de solos e topo-grafia e 18 parcelas são ripárias e seguem o curso dos igarapés. Para estudo das relações entre a assembleia de palmeiras e as variações ambientais, foram coletados dados de amostras superficiais de solo e feitas análises granulométricas (porcentagens de silte, areia e argila), macro e micronutrientes (pH, Ca, Mg, P, K, Fe, Al, Mn, Zn). As condições hidrológicas locais foram medidas pela distância do igarapé mais próximo e o gradiente vertical de drenagem foi medido pela profundidade do lençol freático. A profundidade de liteira foi medida a cada dois metros ao longo da linha central de cada parcela. Foi avaliada a estrutura e composição florística de palmeiras e os fatores a ela relacionados. Estudou-se a relação entre palmeiras e gradiente de solo, topografia, altitude e profundidade de liteira local, avaliando os fatores mais importantes para palmeiras do dossel e subdossel da floresta e como as variações em pequena escala alteram a resposta das espécies às condições ambientais. A comunidade apresentou correlação positiva com as variáveis de teor de silte, fósforo, doma de bases e distância do igarapé, mostrando que a substituição das espécies está ligada a condições locais. O estudo da relação entre as palmeiras e o gradiente hidrológico foi avaliado com base no monitoramento do lençol freático, distância da água e como as espécies se comportam segundo as variações das condições hídricas locais. A água é fator importante para a colonização das espécies de palmeiras e afeta de forma distinta, de acordo com o porte das espécies. Por fim, avaliou-se como a assembleia de palmeiras responde à variação temporal pela análise das taxas de mortalidade e recrutamento das espécies. Os principais gradientes ligados às taxas de mortalidade de palmeiras na área foram Altitude e distância da água. O recrutamento foi fortemente influenciado pelo teor de silte e distância da água.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-31T13:23:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-31T13:23:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-31T13:23:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T13:23:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2017-03-30 / Leishmaniasis is a disease that affects around 12 million people worldwide, being prevalent in 5 continents and considered endemic in 98 countries. The cutaneous form is the most common and can be caused by approximately 20 species. In Brazil, the antimony drug is used as the first choice in the treatment of leishmaniasis. After intravenous administration, it is rapidly absorbed and almost 90% of the antimony is excreted within the first 48 hours by the kidneys. As a consequence, the administration of high doses is indispensable, which generates many side effects, including cardiorespiratory and renal alterations. In this sense, the general objective of this work was the development of pure maghemite nanoparticles and coated with glucuronic and fructose acid, shortwave, aiming to generate an innovative treatment protocol, via hyperthermia for the treatment of cutaneous leishmaniasis lesions. In addition to the synthesis of nanoparticles, characterization tests were performed, including field emission gun microscopy (FEG); X-ray diffraction; Fourier-transformed infrared spectroscopy (FTIR); Möusbauer spectroscopy and magnetic measurements (ZFC). Short-wave parameter definition tests and in vitro cell viability assays, with and without the use of short waves, were also performed. Results: The results of the FEG revealed a well ordered structure of nanoparticles, with an average diameter of 60nm. X-ray diffraction data, together with Möusbauer, indicated the oxidation state and crystalline phase of the iron oxide compatible with a pure sample of maghemite. The FTIR measurements indicated adsorption of the binders to the nanoparticles, especially when coated with glucuronic acid. The magnetization measurements by ZFC indicated, in all samples, magnetic properties compatible with ferromagnetic regime and saturation magnetization between 56 and 59 emu /g, indicating that these materials when exposed to an alternating electromagnetic field will allow hyperthermia. Finally, the in vitro assays indicated a real leishmanicidal effect when the pure or coated nanoparticles were exposed to the alternating magnetic field of the short waves for 30 minutes, which generated hyperthermia and consequent death of the pathogen. In view of the above, it is possible to conclude that the application of the proposed leishmanicide method indicated a high potential of use for the treatment of cutaneous leishmaniasis lesions / A leishmaniose é uma patologia que afeta cerca de 12 milhões de pessoas em todo mundo, sendo prevalente em 5 continentes e considerada endêmica em 98 países. A forma cutânea é a mais comum e pode ser causada por aproximadamente 20 espécies. No Brasil, o medicamento à base de antimônio é utilizado como primeira escolha na terapêutica da leishmaniose. Após administração endovenosa, ele é rapidamente absorvido e praticamente 90% do antimônio é excretado nas primeiras 48h pelos rins. Em conseqüência, faz-se indispensável a administração de doses elevadas, o que gera muitos efeitos colaterais, incluindo alterações cardiorrespiratórias e renais. Nesse sentido, o objetivo geral do presente trabalho constituiu-se como o desenvolvimento e caracterização de nanopartículas de maghemita puras e revestidas com ácido glicurônico e frutose, atrelado a aplicação de ondas curtas, visando a geração de um protocolo de tratamento inovador, via hipertermia, para o tratamento de lesões de leishmaniose cutânea. Para tanto, foram realizados, além da síntese das nanopartículas, ensaios de caracterização, que incluem, entre outros, microscopia de varredura, via FEG; difração de Raio-X; espectroscopia na região do infravermelho (FTIR); espectroscopia de Möusbauer e medidas magnéticas (ZFC). Ensaios de definição de parâmetro de ondas-curtas e ensaios de viabilidade celular in vitro, com e sem o uso de ondas curtas, também foram realizados. Os resultados do FEG revelaram uma estrutura bem ordenada de nanopartículas, com diâmetro médio na ordem de 60nm. Os dados de difração de raio-X, juntamente com Möusbauer, indicaram o estado de oxidação e fase cristalina do oxido de ferro compatível com uma amostra pura de maghemita. As medidas do FTIR indicaram adsorção dos ligantes às nanopartículas, sobretudo quando revestidas com ácido glicurônico. As medidas de magnetização por ZFC indicaram, em todas as amostras, propriedades magnéticas compatíveis com regime ferromagnético e magnetização de saturação entre 56 e 59 emu/g, indicando que esses materiais quando expostos à um campo eletromagnético alternado permitirão a hipertermia. Por fim, os ensaios in vitro indicaram um real efeito leishmanicida quando as nanopartículas puras ou revestidas foram expostas ao campo magnético alternado do ondas-curtas por 30 minutos, o que gerou hipertermia e consequente morte do patógeno. Diante do exposto, é possível concluir que a aplicação do método leishmanicida proposto indicou um alto potencial de utilização para o tratamento de lesões de leishmaniose cutânea via hipertermia por ondas-curtas com nanopartículas de maghemita.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-31T15:38:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andrey A. Damasceno.pdf: 2116345 bytes, checksum: 7c6f07c8d1a70353d64b35efff86a951 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-31T15:38:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andrey A. Damasceno.pdf: 2116345 bytes, checksum: 7c6f07c8d1a70353d64b35efff86a951 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-31T15:38:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andrey A. Damasceno.pdf: 2116345 bytes, checksum: 7c6f07c8d1a70353d64b35efff86a951 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T15:38:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andrey A. Damasceno.pdf: 2116345 bytes, checksum: 7c6f07c8d1a70353d64b35efff86a951 (MD5) Previous issue date: 2016-05-27 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The following interest in fungal enzymes comes about their potential for industrial use, as well as biotechnological research. In this context, the enzyme laccase (EC 1.10.3.2) stand out by its potential use in several industrial applications. Thus, the main goal of this research was to characterize the laccase enzyme produced by the Amazonian fungus Trametes cubensis. The T. cubensis strain was collected in Tefé National Forest (FLONA) and the enzymatic activity was determined from the submerged and semi-solid fermentation. As substrate, sawdust of the wood of Simarouba amara and sugarcane bagasse was tested. As inductors, copper sulfate, “ABTS” and mineral medium were used. The laccase was purified by means of ion exchange chromotography and characterized by mass (SDS-PAGE and zymogram) and determined kinetic parameters Km and Vmax. The most expressive laccase activity occurred in the medium with substrate of Simarouba amara (marupá) with 184 U / mL. The yield was 40% and purification factor of 1.5, with Vmax and Km of 33.33 μmol.L-1 6.66 mM, respectively. The becoming laccase from Trametes cubensis has an apparent molecular mass of approximately 40 kDa. In this way, from the cultivation of Trametes cubensis, it is possible to obtain laccases, however, the study is still necessary in reference the use of different inductors, looking for a potentialization of this activity. / O crescente interesse pelas enzimas fúngicas vem em função da sua potencialidade para uso industrial, bem como na pesquisa biotecnológica. Neste contexto, a enzima lacase (EC 1.10.3.2) destaca-se pelo seu potencial uso em diversas aplicabilidades industriais. Assim, o objetivo dessa pesquisa foi caracterizar a enzima lacase produzida pelo fungo amazônico Trametes cubensis. A cepa de T. cubensis foi coletada na Floresta Nacional de Tefé (FLONA) e determinada a atividade enzimática a partir da fermentação submersa e semi-sólida. Como substrato testou-se serragem da madeira de Simarouba amara e bagaço-de-cana de açúcar. Como indutores utilizou-se sulfato de cobre, ABTS e meio mineral. A lacase foi purificada por meio de cromotografia de troca iônica e caracterizada quanto à massa (SDS-PAGE e zimograma) e determinados os parâmetros cinéticos Km e Vmax. A atividade de lacase mais expressiva ocorreu no meio com substrato de Simarouba amara (marupá) com 184 U/mL. O rendimento foi de 40% e fator de purificação de 1,5, com Vmax e Km de 33,33 μmol.L-1 6,66 mM, respectivamente. A lacase proveniente de Trametes cubensis apresenta massa molecular aparente de, aproximadamente, 40 kDa. Nesse sentido, a partir do cultivo de Trametes cubensis é possível obter lacases, contudo, estudos ainda são necessários no que se refere ao uso de diferentes indutores, visando uma potencialização dessa atividade.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-21T15:24:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-21T15:24:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-21T15:25:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-21T15:25:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2017-03-15 / This study proposes a methodological process (systematization) for the utilization of tailings from the productive process of the wood industry (logs with hollows, cracks, malformation, etc.). Nowadays, the management and processing of wood logs are important variables for this operation within the wood industry of Amazon, however, the productive process, coupled with strict quality criteria imposed by the market, especially the international market, contributes for the generation of waste that can cause environmental impacts if no viable and environmentally friendly alternatives for disposal are found. In this case, the waste generated by sawmills is generally used in boilers for the production of electric energy, or for the production of boards and panels. Therefore, investigations on ways to use these residues are important, through which the value attributed to the discarded raw material, mostly noble wood and in relative big amount can be used for the development of products with differentiated and competitive design. The methodology used for the research was based on a study of the literature on the wood and furniture markets, productive processes, methodology in Design for the development of furniture, as well as a case study with Precious Woods Amazon which concentrates its activities on certified forest management (scope of certification), located between the municipalities of Itacoatiara, Silves and Itapiranga in the State of Amazon, Brazil. The study stages for the elaboration of the systematic involved a pre-selection of the raw material up to its processing for the manufacture of residential furniture, activities that accumulate significant waste of wood. The validation of the results came from a Focus Group (workshop) with professionals in the areas of Forestry Engineering, Design and Furniture Industry. The products developed within the study were evaluated by experts as being of great ecological appeal, with current and differentiated style that reflects a high commercial and economic viability identity that values the wood of the Amazon. With the results of this methodological process, it was possible to elaborate a systematic for the use of wood residues / Este estudo propõe um processo metodológico (sistematização) para o aproveitamento dos rejeitos do processo produtivo de Madeireiras (troncos com presença de oco, rachaduras, má formação e etc.). O manejo e o processamento das toras de madeiras na Amazônia brasileira atualmente são variáveis importantes para o gerenciamento da produção das mesmas, no entanto, o processo produtivo aliado aos critérios rígidos de qualidade impostos pelo mercado, principalmente o internacional, contribui para a geração de resíduos que podem ocasionar impactos ambientais se não encontradas alternativas viáveis e ecológicas para o descarte. Nesse caso, o aproveitamento dos resíduos pelas serrarias é geralmente utilizado em caldeiras para a produção de energia elétrica, ou ainda, para a produção de chapas e painéis. Assim sendo, importam investigações sobre formas de aproveitamento desses resíduos, em que o valor atribuído à matéria-prima descartada, em sua maioria madeira nobre e em relativa quantidade, possa ser aproveitada para o desenvolvimento de produtos com Design diferenciado e competitivo. A metodologia utilizada para a pesquisa partiu de uma revisão da literatura sobre os mercados madeireiros e de móveis, processos produtivos, revisão sobre metodologia em Design para o desenvolvimento de móveis, bem como um estudo de caso com a Mil Madeireiras, que concentra suas atividades no manejo florestal certificado (escopo da certificação), localizada entre os municípios de Itacoatiara, Silves e Itapiranga no Estado do Amazonas, Brasil. As etapas de estudo para a elaboração da sistemática envolveram uma pré-seleção da matéria-prima até o seu beneficiamento para a manufatura de móveis residenciais, atividades que acumulam perdas significativas de madeira. A validação dos resultados partiu de um Grupo Focal (workshop) com profissionais das áreas da Engenharia Florestal, Design e Indústria de Móveis. Os produtos desenvolvidos com o estudo foram avaliados por especialistas como sendo de grande apelo ecológico, com estilo atual e diferenciado que reflete uma identidade de alto nível comercial e de viabilidade econômica que valoriza as madeiras da Amazônia. Com os resultados desse processo metodológico, foi possível elaborar uma sistemática para o aproveitamento dos resíduos madeireiros.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-22T18:06:42Z No. of bitstreams: 2 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-22T18:07:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-22T18:08:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T18:08:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-04-17 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Diarrheal diseases account for the second leading cause of death in children underfive years of age, below only pneumonia, killing about 760,000 children per year. The enterotoxigenic E. coli (ETEC) lineage is considered to be one of the most frequent causative agents of childhood diarrhea and travelers' diarrhea in low and middle-income countries. Among the virulence factors secreted by ETEC, the exoprotein EtpA has been described as an important protein that interacts with the highly conserved regions of the bacterial flagellum. These interactions are critical for adhesion, colonization, and delivery of toxins to enterocytes by ETEC. A new detection tool for enterotoxigenic E. coli bacteria was developed in the present work. Initially, the best antigenic sequence of the chimeric EtpA protein was determined by in silico prediction assays. After the construction of the recombinant antigen, we evaluated the production of anti-EtpA polyclonal antibodies in mice that were stimulated with this antigen. The mapping of epitopes using synthetic peptides demonstrated that only the 1.1 peptide was reactive to the pool of sera from the immunized animals. Specific recognition of anti-EtpA antibodies were assessed by flow cytometry. The results showed that the developed antibody was able to recognize the native EtpA protein. The evaluation of the specificity of anti-EtpA antibodies against different strains of diarrheogenic E. coli demonstrated the highest percentage and specificity for the ETEC strain (7.2%). The antibodies were then coupled into magnetic beads for the capture and detection of ETEC isolates. The results by cytometry showed high sensitivity, specificity and the efficacy of the method of separation and detection of these pathogens by magnetic beads bound to anti-EtpA antibodies. / As doenças diarreicas totalizam a segunda principal causa de morte em crianças menores de cinco anos de idade, perdendo apenas para a pneumonia. A cada ano a diarreia mata cerca de 760.000 crianças nessa faixa etária. A linhagem de E. coli enterotoxigênica (ETEC) é considerada como um dos agentes causadores mais frequentes da diarreia infantil e da diarreia dos viajantes nos países de baixa e média renda. Dentre os fatores de virulência secretados por ETEC, a exoproteína EtpA foi descrita como uma importante proteína que se interage com as regiões altamente conservadas do flagelo bacteriano. Essas interações são críticas para a adesão, colonização e entrega das toxinas nos enterócitos por ETEC. Foi desenvolvido no presente trabalho uma nova ferramenta de detecção para a bactéria E. coli enterotoxigênica. Inicialmente foi determinado a melhor sequência antigênica da proteína quimérica EtpA por ensaios de predição in silico. Após a construção do antígeno recombinante, avaliamos a produção de anticorpos policlonais anti-EtpA em camundongos que foram estimulados com esse antígeno. O mapeamento de epítopos utilizando peptídeos sintéticos demonstrou que apenas o peptídeo 1.1 foi reativo ao pool de soros dos animais imunizados. O reconhecimento específico dos anticorpos anti-EtpA foram avaliados por citometria de fluxo. Os resultados mostraram que o anticorpo desenvolvido foi capaz de reconhecer a proteína EtpA nativa. A avaliação da especificidade dos anticorpos anti-EtpA contra diferentes cepas de E. coli diarreiogênicas demonstrou a maior porcentagem e especificidade para um isolado de ETEC (7.2%). Em seguida, os anticorpos foram acoplados em beads magnéticas para a captura e detecção de isolados de ETEC. Os resultados por citometria evidenciaram alta sensibilidade, especificidade e a eficácia do método de separação e detecção desses patógenos por beads magnéticas ligadas aos anticorpos anti-EtpA.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-24T13:48:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Paloma I.S. Dantas.pdf: 4741082 bytes, checksum: e499e75b7a77189538a9f8be0d6be226 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-24T13:48:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Paloma I.S. Dantas.pdf: 4741082 bytes, checksum: e499e75b7a77189538a9f8be0d6be226 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-24T13:48:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Paloma I.S. Dantas.pdf: 4741082 bytes, checksum: e499e75b7a77189538a9f8be0d6be226 (MD5) Previous issue date: 2016-11-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Shigella is a gram-negative and intracellular bacterium responsible for triggering Shigellosis, a diarrheal disease characterized by the presence of mucus and blood. . In an epidemiological study conducted by our group in the city of Manaus-Amazonas with children with severe diarrhea from 2007 to 2009, the genus Shigella was the fifth most isolated pathogen (2.2%). Based on the clinical data we observed a heterogenous symptomatology among patients with shigellosis, since then, our group has been investigating the genotypic and phenotypic characteristics of these isolates. Shigella is a highly virulent bacterium, its mechanisms of pathogenesis is due to the presence of plasmidial and chromosomal genes. Among the genes responsible for its virulence are the Ipas genes that promote the invasion of Shigella in epithelial cells and the death of macrophages, the IpaHs genes, which modulate the host's immune response and the enterotoxins Shet1 and Shet2. In the present study, our main objective was to verify the genetic variability of the main virulence factors in clinical samples of Shigella flexneri. The virulence genes were amplified with specific primers developed in the study, the obtained amplicons were sequenced and analyzed. The Ipa, IpaH, Set1A, Se1B and Sen genes were successfully amplified. A total of 474 sequences referring to the 19 virulence genes of Shigella were sequenced, however, only 12 genes, a total of 154 sequences were analyzed for the presence of polymorphism. In this study 9 point mutations were identified in 5 Shigella virulence genes, being the IpaD, SenA, IpaH3, IpaH2.5 and IpaH6 gene. The study of the identification of specific genetic determinants is essential to understand the mechanism of pathogenesis and the propagation of virulent variants in the population of Shigella. Our work is based on previous studies conducted by our group, since the initial amplification of the virulence genes of these isolates was ineffective. Although few genes are analyzed, nucleotide variations have been found in different isolates, which may or may not interfere in the expression of the virulence phenotype. A new sequencing will be required to confirm the variations found in the study, as well as in vitro and in vivo studies, to verify if these changes may interfere with the virulence phenotype of the Shigella clinical samples. / A Shigella é uma bactéria gram-negativa e intracelular, responsável pelo desencadeamento da Shigelose, uma doença diarreica caracterizada pela presença de muco e sangue. Em um estudo epidemiológico realizado por nosso grupo na cidade de Manaus-Amazonas com crianças que apresentavam diarreia severa nos anos de 2007 a 2009, o gênero Shigella foi o quinto patógeno mais isolado (2,2%). A partir dos dados clínicos observamos uma sintomatologia heterogênia entre os pacientes com shigelose, desde então, nosso grupo vem investigando as características genotípicas e fenotípicas desses isolados. Shigella é uma bactéria altamente virulenta, seus mecanismos de patogenicidade se deve a presença de genes plasmidiais e cromossomais. Entre os genes responsáveis pela sua virulência temos, os genes Ipas que promovem a invasão de Shigella nas células epiteliais e a morte dos macrófagos, os genes IpaHs, que modulam a resposta imunológica do hospedeiro e as enterotoxinas Shet1 e Shet2. No presente estudo, nosso principal objetivo foi verificar a variabilidade genética dos principais fatores de virulência em amostras clínicas de Shigella flexneri. Os genes de virulência foram amplificados com iniciadores específicos desenvolvidos no estudo, os amplicons obtidos foram sequenciados e analisados. Os genes Ipa, IpaH, Set1A, Se1B e Sen foram amplificados com sucesso. Um total de 474 sequências referentes aos 19 genes de virulência de Shigella foi sequenciado, no entanto, apenas 12 genes, num total de 154 sequências foram analisadas quanto à presença de polimorfismo. Neste estudo foram identificadas 9 mutações de ponto em 5 genes de virulência de Shigella, sendo eles, o gene IpaD, SenA, IpaH3, IpaH2.5 e IpaH6. O estudo da identificação de determinantes genéticos específicos é essencial para compreender o mecanismo de patogênese e a propagação de variantes virulentas na população de Shigella. Nosso trabalho se baseia em estudos anteriores realizados por nosso grupo, uma vez que a amplificação inicial dos genes de virulência desses isolados foi ineficaz. Apesar de poucos genes serem analisados, variações de nucleotídeos foram encontradas em isolados diferentes, que podem interferir na expressão do fenótipo de virulência. Um novo sequenciamento será necessário para confirmar as variações encontradas no estudo, assim como estudos in vitro e in vivo, para verificar se essas alterações podem interferir no fenótipo de virulência das amostras clinicas de Shigella.

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