VIANA, A. F. S. C. Efeito gastroprotetor e cicatrizante do (-)-Mirtenol. 2017. 158 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Farmacologia Pós-Graduação (posgfarmacologia@gmail.com) on 2017-09-06T12:34:18Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_afscviana.pdf: 4750158 bytes, checksum: aa1137f41bab98c8a5557992a3a248a7 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-09-06T12:56:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_afscviana.pdf: 4750158 bytes, checksum: aa1137f41bab98c8a5557992a3a248a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T12:56:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_afscviana.pdf: 4750158 bytes, checksum: aa1137f41bab98c8a5557992a3a248a7 (MD5) Previous issue date: 2017-09-01 / (-)-Myrtenol is a bicyclic monoterpene alcohol structurally related to a-pinene found in diverse plant, such as herb Myrtus communis L. (Myrtaceae) used traditionally for the treatment of gastrointestinal disorders. This study was aimed to assess the potential gastroprotective and ulcer healing effects of (-)-myrtenol and the possible mechanisms involved, in vivo experimental models of gastric lesion and in vitro scratch assay. The results showed that (-)-myrtenol at the dose of 2000 mg/kg did not promote acute toxicity during the 14 days observation period in mice. Pretreatment with (-)-myrtenol (50 and 100 mg/kg, p.o.) significantly reduced (p<0.05) the area of gastric lesions induced by ethanol (83 and 83%, respectively) by indomethacin (89 and 87%, respectively), and by retention cold stress (79 and 73%, respectively), as compared to the respective vehicle groups. The mechanistic evaluation of (-)-myrtenol (50 mg/kg, p.o.) in ethanol-induced gastric ulcer involved antioxidant and anti-inflammatory activity, with increase in the activity of glutathione peroxidase, superoxide dismutase and catalase, a decrease in the activity of myeloperoxidase and malondialdehyde in gastric tissue and with increase in levels of nitrite/nitrate, gastric mucus and non-protein sulfhydryls. Pretreatment with GABA-A receptor antagonist flumazenil, the cyclooxygenase inhibitor indomethacin, and nitric oxid synthase inhibitor L-NAME significantly (p<0.05) blocked the (-)-myrtenol gastroprotection. The (-)-myrtenol (50 and 100 mg/kg) administered for seven days was also able to significantly reduced (p<0.05) acetic acid-induced gastric ulcer, increasing the rate of wound healing (47 and 32%, respectively) as compared to the vehicle group. Treatment with (-)-myrtenol (25, 50 and 100 mg/kg, v.o.) in acetic acid-induced gastric ulcer model did not changes significantly the body weight, absolute organ weight and biochemical parameters. The (-)-myrtenol also stimulated re-epithelialization in the ulcer area, reduced activity of N-acetylglicosaminidase and metalloproteinases (2 and 9) and proinflammatory cytokines expression (IL-1β and TNF-α), increased cyclooxygenase-2 expression, gastric mucus content and percentage of collagen fibers, as compared to the respective vehicle groups. In vitro scratch assay with AGS cells, (-)-myrtenol (0.1, 1, 10 and 100 nM) did not alter cell viability, stimulated cell migration in the presence and absence of hydroxyurea, with 6 and 24 hours of incubation, compared to the control group. In summary, these results provide, for the first time, evidence that (-)-myrtenol exert gastroprotective effect mainly due to inhibition of oxidative stress and peripheral GABA-A receptor modulation, regulating blood flow in the mucosa, probably by stimulate the production of nitric oxide and prostaglandins. The (-)-myrtenol shows a healing-promoting effect on acetic acid-induced gastric ulcers to modulate the proinflammatory cytokines expression (IL-1β and TNF-α) and COX-2 expression and to increase the mucus content of the stomach, reepithelialization and gastric cell matrix remodeling. / O (-)-mirtenol é um monoterpeno álcool bicíclico, com estrutura semelhante ao α-pineno, presente em algumas espécies vegetais, como a Myrtus communis L. (Myrtaceae) utilizada tradicionalmente para tratar problemas gastrintestinais. No presente estudo avaliou-se a atividade gastroprotetora e cicatrizante do (-)-mirtenol, e os possíveis mecanismos envolvidos nesse efeito, em modelos experimentais de lesão gástrica in vivo e de ferida in vitro. A administração oral e única do (-)-mirtenol na dose de 2000 mg/kg, não promoveu toxicidade aguda, durante 14 dias de observação, em camundongos. O pré-tratamento com (-)-mirtenol (50 e 100 mg, v.o) reduziu significativamente (p<0,05) a área de lesões gástricas induzidas por etanol (83 e 83%, respectivamente), por indometacina (89 e 87%, respectivamente), e por estresse de retenção e frio (79 e 73%, respectivamente), quando comparados aos respectivos grupos veículo. A avaliação mecanística do (-)-mirtenol (50 mg/kg, v.o.) em modelo de lesões gástricas induzida por etanol, em camundongos, envolveu ação antioxidante e anti-inflamatória, com aumento da atividade das enzimas catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase, aumento dos grupamentos sulfidrilas não proteicos, dos níveis de nitrato/nitrito e do conteúdo de muco gástrico aderido, redução dos níveis de malondialdeido e da atividade de mieloperoxidase. O pré-tratamento com antagonista dos recepetores GABA-A (flumazenil), com inibidor das ciclo-oxigenases (indometacina) e da sintase de óxido nítrico (L-NAME), inibiu estatisticamente (p<0,05) o efeito gastroprotetor do (-)-mirtenol em modelo de lesão induzida por etanol. O (-)-mirtenol (50 e 100 mg/kg), administrado durante sete dias, também foi capaz de reduzir significativamente (p<0,05) a área da lesão gástrica induzida por ácido acético, aumentando a taxa de cicatrização da lesão em 47 e 32%, respectivamente, quando comparados com o grupo veículo. O tratamento com o (-)-mirtenol (25, 50 e 100 mg/kg, v.o.), durante sete dias, em modelo de lesão gástrica induzida por ácido acético em ratos, não promoveu alterações estatísticas nos parâmetros bioquímicos, no peso dos animais e dos órgãos avaliados. O (-)-mirtenol ainda estimulou a reepitelização na área da lesão, reduziu a atividade da enzima N-acetilglicosaminidase e a expressão das citocinas pró-inflamatórias, IL-1β e TNF-α, enquanto aumentou a expressão de ciclo-oxigenase-2, o conteúdo de muco gástrico, a porcentagem de fibras de colágeno e reduziu a expressão da atividade de metaloproteinases 2 e 9, comparados com os respectivos grupos veículo. Em modelo de ferida in vitro (Scratch), com células AGS, o (-)-mirtenol (0,1; 1; 10 e 100 nM) não alterou a viabilidade celular, estimulou a proliferação e migração celular na presença e na ausência de hidroxiureia, com 6 e 24 horas de incubação, comparados com o grupo controle. Em suma, os resultados encontrados elucidam as primeiras evidências científicas para o efeito gastroprotetor do (-)-mirtenol, com possíveis mecanismos relacionados à inibição do estresse oxidativo e modulação dos receptores GABA-A periféricos, regulando o fluxo sanguíneo na mucosa, provavelmente por estimular a produção de óxido nítrico e prostaglandinas. O efeito cicatrizante gástrico promovido pelo (-)-mirtenol envolve modulação da expressão de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β e TNF-α) e de COX-2, aumento do conteúdo de muco, reepitelização e remodelamento da matriz celular gástrica.

MESQUITA, Charles Jean Gomes de. Efeitos do imiquimode na cicatrização de queimaduras em ratos. 2008. 109 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-18T13:41:39Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_cjgmesquita.pdf: 4136987 bytes, checksum: 86d772cc98740c7e330f8881443b4d47 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-18T13:43:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_cjgmesquita.pdf: 4136987 bytes, checksum: 86d772cc98740c7e330f8881443b4d47 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-18T13:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_cjgmesquita.pdf: 4136987 bytes, checksum: 86d772cc98740c7e330f8881443b4d47 (MD5) Previous issue date: 2008 / Burns can result in substantial morbidity because of fibroblastic hyperproliferation and contracture. Imiquimod is a immunomodifier -TLR-7 agonist used in viral diseases and in neoplastic conditions like actinic keratosis, melanoma, and non-melanoma skin cancer. It acts by promoting endogenous cytokines known to suppress fibroblast proliferation. A new recent use is in treating keloids and hypertrophic scars to reduce scarring. No study of the effect of imiquimod on cutaneous burns has been performed. This study examined burn healing in the presence of topical imiquimod by evaluation of wound appearance, computer-aided image analysis, and histology in a rat model. Standardized partial-thickness burns were produced on the dorsum of thirty-two Wistar rats. Right-sided wounds received therapy with isotonic saline (sham). Left-sided wounds were treated with imiquimod cream at 5% (IMQ). This was repeated 3 times/week after injury. Euthanasia was performed at 4th, 7th, 14th and 21st Postburn days (PBD). Wounds were harvested for histological analysis. Evaluation of wound appearance was performed using clinical assessment scale (CAS) and a visual analogue scale (VAS). Scars area and perimeter were measured using digital planimetry to assess wound edge migration by Gilman’s modified Equation. Inflammation type and intensity was graded by histological scale. Collagen type was identified by picrosirius-polarization and morphometric analysis was performed. VAS scores showed discretally improved appearance in the imiquimod-treated wounds versus the saline-treated control at PBD21 (P=0.0491). There was no difference in CAS scores. Wound edge migration was significantly slowest in imiquimod-treated wounds (p<0.05). Histological evidence of partial thickness dermal injury with sparing of dermal appendage epithelial cells was seen in all wounds. Histologic characteristics of gradually diminished injured area between groups were similar except in imiquimod-treated wounds at PBD14 (p<0.05). Inflamattory state was bigger in imiquimod-treated wounds at PBD7 and PBD21 (p<0.005). At PBD7 there was no chronic-type of inflammatory reaction in imiquimod-treated group, although in saline-treated group chronic plus sub-acute type was present in 87.5% (p<0.005). At PBD21 68.75% of imiquimod-treated group showed acute plus subacute inflammatory state, and saline-treated group displayed chronic-type in 56.25% of the wounds. The total amount of collagen increased in both groups throughout all time points. Morphometry showed an inversed ratio type I to type III collagen. Ratios of type I collagen to type III collagen was much lower in imiquimod-treated wounds at PBD4 and PBD21. Topical treatment with Imiquimod 5% cream for partial-thickness burn wounds 3 times/week courses do not improve clinical appearance and scarring during late healing. There is no difference in histology during the short-term healing process. Computer-aided image proccessing was efficient to evaluate burned-wound healing. Wound healing and fibrosis was impaired in imiquimod- treated wound group. / Queimaduras podem causar substancial morbidade e contraturas devido à hiperproliferação fibroblástica. O imiquimode, imunomodulador utilizado em doenças virais e neoplasias cutâneas, promove resposta imune inata e adaptativa, interagindo com Toll-Like Receptors, permitindo reconhecer antígenos e células invasoras, ativando células de Langerhans e citocinas endógenas capazes de suprimir a hiperproliferação fibroblástica, mostrando-se útil no tratamento de cicatrizes hipertróficas e quelóides. Inexistiam trabalhos sobre o imiquimode em queimaduras cutâneas. Avaliou-se os efeitos do imiquimode na cicatrização de queimaduras utilizando-se métodos macroscópicos, microscópicos e computacionais. Produziram-se queimaduras dérmicas profundas de cada lado da linha média dorsal em 32 ratos Wistar utilizando um ferro-de-solda modificado aplicado a pele por 9s. Instituiram-se tratamentos 3X/semana a partir do segundo dia pós-queimadura (D2PQ). No lado direito (controle) utilizou-se solução salina isotônica (SAL). À esquerda utilizou-se imiquimode (IMQ) tópico 5%. Oito animais foram eutanasiados nos D4, D7, D14 e D21PQ, obtendo-se fotografias digitais e amostras teciduais. Na análise macroscópica utilizou-se escala visual analógica (EVA), escala de exame clínico (EEC) e planimetria digital. Para análises microscópicas utilizaram-se amostras coradas pela hematoxilina-eosina (HE) ou picrosirius-red (PR). Nas amostras HE, sob microscopia ótica, quantificou-se o tipo e a intensidade da reação inflamatória e a involução temporal do dano tecidual pela atribuição de escores. Amostras PR foram analisadas à microscopia de luz polarizada, quantificando-se a densidade do colágeno tipo I e tipo III e razão colágeno I: colágeno III (Razão I:III). Não houve mortes, infecção nem autocanibalismo. Os parâmetros biométricos não evidenciaram efeitos deletérios sobre o estado nutricional. A EVA favoreceu discretamente o grupo SAL (P=0,0491). A EEC não mostrou diferenças significativas. A planimetria digital evidenciou menor velocidade de reparação nas feridas do grupo IMQ (P<0,05). A quantificação da área de lesão mostrou involução similar, exceto no D14PQ onde a área de necrose era maior no grupo IMQ (P<0,05). A análise histológica qualitativa mostrou um processo reparatório mais lentificado no grupo IMQ em todos os tempos. No D7PQ, a intensidade da reação inflamatória foi classificada como discreta em 50% das feridas do grupo SAL e intensa ou moderada em 75% do grupo IMQ (P<0,005). No D21PQ a inflamação foi mais extensa no grupo IMQ (P<0,005). Observou-se que 50% das feridas do grupo SAL exibiam reação inflamatória subaguda e 37,5% crônica, enquanto nenhuma ferida do grupo IMQ mostrava inflamação crônica no D7PQ (P<0,005). No D21PQ a inflamação no grupo IMQ era subaguda (68,75%) e no grupo SAL 56,25% era crônica (P<0,05). A morfometria do colágeno evidenciou aumento do colágeno tipo I e diminuição do colágeno tipo III nos dois grupos. A razão colágeno I: colágeno III foi menor no grupo IMQ em D4 e D21PQ (P<0,05). O modelo reproduziu queimaduras dérmicas, preservando anexos essenciais à reepitelização. A picrossirius-polarização foi eficaz no reconhecimento do colágeno e os métodos computacionais foram eficientes, identificando diferenças mínimas no processo lesão-reparação. O imiquimode foi eficaz em promover o processo inflamatório e retardar a maturação, gerando menor quantidade de fibrose.

PENAFORTE, Lúcia Regina Albuquerque Gois. Efeitos da L-arginina sobre as concentrações de metabólitos in vivo no sangue e em cicatriz de retalho miocutâneo, e sobre a pressão de rotura de cicatriz cirúrgica intestinal em ratos. 2002. 98 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-10T14:08:16Z No. of bitstreams: 1 2002_dis_lragpenaforte.pdf: 1579694 bytes, checksum: c2624ea088064a2ea654a8c3246ba309 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-10T14:08:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2002_dis_lragpenaforte.pdf: 1579694 bytes, checksum: c2624ea088064a2ea654a8c3246ba309 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-10T14:08:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2002_dis_lragpenaforte.pdf: 1579694 bytes, checksum: c2624ea088064a2ea654a8c3246ba309 (MD5) Previous issue date: 2002 / Cicatrization, contraction and deposition of connective tissue matrix constitute healing mechanisms for the development of the wound scar. Studies have demonstrated that L-arginine favors cicatrization, increasing the synthesis of collagen. The aim of this paper was to study the effects of L-arginine upon the concentrations of glucose, pyruvate, lactate and ketone bodies, in vivo, in blood, miocutaneous skin graft scar and on the pressure of rupture of intestinal surgical scar in rats. Forty-eight white Wistar male rats, were distributed in 2 groups: (G1/control) and G2/experiment). A pedunculated miocutaneous skin graft was raised on the dorsum of all rats followed by immediate suturing with nylon 5-0. Jejunotomies were also performed on the antimesenteric border of the small intestine. Bowel sutures were carried out utilizing synthetic material (poliglecaprone 25). Oral supplementation of L-arginine (5% of TCI/day) was delivered via gavage to G-2/Experiment rats beginning 12 hours following surgical procedures daily. G-1/Control animals were fed sodium caseinate instead. Blood samples were collected 7, 14 and 30 days later. Measurement of intestinal rupture pressure was carried out at the same intervals, following blood samples collection. Decreased concentrations of pyruvate lactate and ketone bodies in the 14th postoperative day suggest greater utilization by peripheral tissues due to a possible anabolic effect of L-arginine. Increased ketone bodies concentrations in the miocutaneous graft in the 30th postoperative day in L-arginine treated rats may be due to increased uptake of these metabolites by healing tissues. Group G-2/E intestinal rupture pressure was greater than G-1/C on the 14th day. These results suggest that oral supplementation of L-arginine has effects upon blood concentrations of metabolites and on the cutaneous, muscular and small intestine cicatrization. / A epitelização, contração e deposição da matriz de tecido conjuntivo constituem mecanismos pelos quais as feridas cicatrizam. Estudos demonstraram que L-arginina favorece a cicatrização, aumentando a síntese de colágeno. Objetivou-se, neste trabalho, estudar os efeitos da suplementação de L-arginina sobre concentrações in vivo de glicose, piruvato, lactato e corpos cetônicos no sangue e em cicatriz de retalho miocutâneo, como também verificação da pressão de ruptura de cicatriz intestinal. Quarenta e oito ratos brancos, machos, da linhagem Wistar, foram divididos em dois grupos: (G-1/Controle) e (G-2/Experimento). Ambos foram submetidos à confecção de retalho miocutâneo e dorsal, suturado com nylon monofilamentado nº5.0 e também, submetidos a laparotomia mediana e, jejunotomia de dois centímetros na borda antemesentérica seguida de sutura imediata com fio poliglecaprone 25, nº5.0. No pós-operatório os animais do G1/C receberam suplementação alimentar de caseinato de cálcio (fonte protéica intacta de alto valor biológico, 5% do VCT/dia). Os animais do G-2/E receberam suplementação alimentar com L-arginina (5% do VCT/dia). Cada grupo foi subdividido em três subgrupos e após cada 7,14 e 30 dias foram coletadas amostras de sangue e de segmento de área cicatricial do retalho miocutâneo para estudos enzimáticos com dosagem de metabólitos, como também realizado teste de pressão de rotura no segmento intestinal contendo cicatriz. A queda das concentrações sanguíneas de piruvato, lactato e corpos cetônicos no 14º pós-operatório, no grupo E em relação ao grupo C, sugere maior utilização destes metabólitos nos tecidos periféricos por possível ação anabólica da oferta de L-arginina. O aumento das concentrações tissulares, no retalho miocutâneo, de corpos cetônicos no 30º dia pós-operatório nos animais tratados com suplementação alimentar de L-arginina traduziu provável aumento de captação desses metabólitos pelos tecidos em cicatrização. Observou-se um aumento da pressão de rotura no 14º pós-operatório do G-2/E em relação ao G-1/C. Os resultados sugerem que suplementação de L-arginina tem efeito sobre concentrações séricas de substratos e sobre cicatrização cutânea, muscular e de intestino delgado.

Orientador: Prof. Dr. Jorge R. Ribas Timi / Coorientador: Prof. Dr. Jorge Eduardo Fouto Matias / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 08/07/2016 / Inclui referências: f. 66-71 / Área de concentração : Nutrição e cicratização / Resumo: INTRODUÇÃO: a cicatrização de feridas é um processo dinâmico que envolve vários fenômenos biológicos e bioquímicos os quais podem ser minimizados em condições patológicas ou melhorados pela oferta de fatores de crescimento ou de condições de crescimento teciduais. O óxido nítrico como o produto da reação de óxido-redução da arginina (ARG) estimula a proliferação dos angioblastos, células precursoras do endotélio. Consequentemente ocorre formação de novos vasos sanguíneos no tecido e possivelmente coopera para a melhora do processo cicatricial. OBJETIVO: avaliar os efeitos da arginina na cicatrização da parede abdominal em ratos Wistar. MÉTODO: utilizaram-se vinte ratos Wistar, submetidos à laparotomia-laparorrafia e separados em dois grupos. No grupo arginina receberam tratamento diário, por cinco dias, com ARG (300mg/kg/dia) via intraperitoneal. No grupo controle foram tratados diariamente com solução tampão fosfatos em dose equivalentes ao peso, pela mesma via do grupo arginina. No sétimo dia pósoperatório coletaram-se amostras de sangue e a cicatriz da parede abdominal de ambos os grupos. Avaliaram-se o nível sérico de nitratos e nitritos, a evolução cicatricial pelas dosagens de hidroxiprolina tecidual, formação de tecido de granulação, determinação da porcentagem de colágeno maduro e imaturo, densidade de miofibroblastos e angiogênese. Empregaram-se os testes de ANOVA e T-Student com p 0,05 para as comparações entre os grupos. RESULTADOS: entre os grupos controle e tratado por arginina, não ocorreram diferenças significantes nas dosagens de nitratos e nitritos (p=0,9903), hidroxiprolina tecidual (p=0,1315) e na densidade de miofibroblastos (p=0,0511). O grupo arginina apresentou maior densidade microvascular (p=0,0008), maior porcentagem de colágeno tipo I (p=0,0064) e melhora na formação do tecido de granulação com melhores índices de proliferação angiofibroblástica (p=0,0007) e reepitelização das bordas (0,0074). CONCLUSÃO: na avaliação cicatricial da parede abdominal de ratos Wistar sob tratamento com arginina por sete dias não houve alteração do nível sérico de nitratos e nitritos, da deposição de colágeno total e da densidade de miofibroblastos. Verificaram-se aumento da maturação de colágeno do tipo I, da densidade microvascular e melhora na formação do tecido de granulação cicatricial pelas melhores reepitelização de bordas e proliferação angiofibroblástica. Descritores: arginina, cicatrização, hidroxiprolina, angiogênese, CD34, miofibroblastos, colágeno tipo I, picro-sirius, anti actina alfa, nitratos e nitritos, ratos Wistar, parede abdominal. / Abstract: INTRODUCTION: wound healing is a dynamic process involving several biological and biochemical phenomena which can be minimized in pathological conditions or improved if a correct supply of growth factors or proper tissue growing conditions are in course. Nitric oxide as the product of the arginine (ARG) reduction reaction stimulates the proliferation of angioblasts, endothelial cell precursors. Consequently there is formation of new blood vessels in the reparation tissue that, probably, improves the healing process. OBJECTIVE: to evaluate the effects of arginine on the abdominal wall healing process in rats. METHOD: the study was approved by the Ethics Committee for Animal Research according to the 012/11 HAC protocol. Twenty Wistar rats underwent laparotomy-laparorrhaphy and were separated into two groups. In the arginine group 10 rats received daily treatment for five days, with ARG (300mg / kg / day) intraperitoneally. In the control group the other 10 rats were treated daily with phosphate buffer solution at a dose equivalent to the weight, by the same administration way of the arginine group. On the seventh postoperative day blood samples and the surgical wound of the abdominal wall were collected in both groups. Serum levels of nitrates and nitrites, the scar evolution by measurements of tissue hydroxyproline, granulation tissue formation, the percentage of mature and immature collagen, myofibroblast density and angiogenesis were evaluated. ANOVA and T-Student tests with p 0.05 were employed for comparisons between groups. RESULTS: there were no significant differences in dosages of nitrates and nitrites (p=0,9903), tissue hydroxyproline (p=0,1315) and myofibroblast density (p=0,0511) between the groups. The arginine group had a higher microvascular density (p=0,0008), higher percentage of type I collagen (p=0,0064) and improve in the granulation tissue formation with better angiofibroblastic proliferation index (p=0,0007) and better edges re-epithelialization of the wound (0,0074). CONCLUSION: wound healing evaluation in the abdominal wall of Wistar rats under treatment with arginine, there were no changes in serum levels of nitrates and nitrites, the total collagen deposition and myofibroblasts density. There were increase of type I collagen maturation, microvascular density and improved granulation tissue formation by better edges reepitelization and angiofibroblastic proliferation. Keywords: arginine, wound healing, hydroxyproline, angiogenesis, CD34, myofibroblasts, collagen type I, Sirius red, anti actin alpha, nitrates and nitrites, Wistar rats, abdominal wall.

Orientadora : Profª. Drª. Daniela de Almeida Cabrini / Coorientadora : Prof. Dr. Michel Fleith Otuki / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 12/03/2015 / Inclui referências : f. 62-69 / Resumo: Com o objetivo de verificar o envolvimento do sistema das cininas no processo de cicatrização cutânea, animais nocaute para os receptores cininérgicos (KOB1, KOB2 e KOB1B2) e wildtype (WT/controle) foram submetidos ao modelo de cicatrização por excisão cutânea. Observou-se que no décimo dia após a excisão, os animais WT apresentaram oclusão da ferida igual a 96,13 ± 0,55%, enquanto os grupos nocaute KOB1, KOB2 e KOB1B2 apresentaram contração da lesão de 91,39 ± 0,93%, 86,80 ± 1,93% e 82,0 ± 1,73%, respectivamente. Uma vez que foram observadas diferenças com relação ao tempo de resolução do processo de reparo tecidual, foi realizada a avaliação do período de oclusão total das feridas nestes grupos. Os animais WT apresentaram fechamento completo de suas lesões no 12° dia após a realização da excisão, já os animais nocautes tiveram suas lesões elucidadas no 17° (KOB1), 21° (KOB2) e 23° dia (KOB1B2). Análises realizadas com amostras coletadas durante as diferentes fases do processo de cicatrização (fase inflamatória - 2°, 3° dias, fase proliferativa - 7 °, e fase de remodelamento tecidual - 10 ° dia), reforçaram a ocorrência de diferenças no processo de reparação tecidual nos grupos nocaute. Os resultados mostraram que houve redução significativa do número de células infiltradas no tecido lesionado durante a fase inflamatória nos grupos nocaute, sendo esta redução de 30,65 ± 3,66% (KOB1), 48,20 ± 2,52% (KOB2) e 47,72 ± 2,29% (KOB1B2), no 2° dia após a excisão. Esta redução permaneceu no 3° dia, sendo iguais a 44,26 ± 7,79% (KOB1), 67,19 ± 2,88% (KOB2) e 60,03 ± 4,28% (KOB1B2), quando comparados ao grupo WT. Na fase proliferativa (7° dia), observaram-se reduções significativas na taxa de reepitelização nos grupos nocautes para o receptor B2, em comparação ao grupo WT (76,16 ± 8,03%), sendo estas reduções iguais a 24,94 ± 8,45% (KOB2) e 23,63 ± 5,41% (KOB1B2). Análises de amostras referentes à fase de remodelamento tecidual (10° dia) mostraram diferenças nos níveis de colágeno tecidual nos animais nocautes para os receptores das cininas, sendo estas reduções iguais a 18,13 ± 2,7% (KOB1), 12,11 ± 1,52% (KOB2) e 16,96 ± 0,51% (KOB1B2), em comparação com o grupo controle (88,9 ± 2,62 ?g/tecido). Através de análises imunohistoquímicas, foram constatadas reduções significativas na taxa de proliferação de fibroblastos nos grupos nocautes B2, com reduções de 39,01 ± 5,96% (KOB2) e 38,03 ± 4,32% (KOB1B2). Assim como, foram observadas reduções no número de miofibroblastos nestes grupos, sendo estas reduções iguais a 34,87 ± 3,31% (KOB2) e 44,10 ± 3,54% (KOB1B2), em comparado ao grupo controle (32,5 ± 4,92 células/campo). No entanto, os dados dos animais KOB1 foram semelhantes aos dos WT. Os resultados obtidos sugerem a participação do sistema das cininas em processos que compõem a reparação tecidual, auxiliando na compreensão desse processo fisiopatológico e tornando as cininas uma nova opção terapêutica. Observou-se a participação direta do receptor B2 em processos de proliferação e diferenciação de células que compõem a pele. Palavras-chave: Cininas, Cicatrização, Pele, receptores cininérgicos, Receptor B1, Receptor B2. / Abstract: To verify the involvement of kinins in the skin healing process, knockout animals for kinin receptors (KOB1, KOB2 and KOB1B2), and wildtype (WT / control) were subjected to excision wound healing model. It was observed that on the tenth day after excision, WT animals had occlusion of the wound equal to 96.13 ± 0.55%, while knockout groups KOB1, KOB2 and KOB1B2 presented wound closure of 91.39 ± 0.93 % 86.80 ± 1.93% and 82.0 ± 1.73%, respectively. Since differences with time resolution of tissue repair process were observed, the evaluation of the period of total occlusion of wounds in these groups was performed. Thus, the WT animals showed a complete closure of injuries on the 12th day after excision, and the knockout animals had their injuries elucidated on the 17th (KOB1), 21th (KOB2) and 23th day (KOB1B2). Analyzes performed on samples collected during the different phases of wound healing (inflammatory phase - days 2 and 3, proliferative phase - day 7, and tissue remodeling phase - day 10), reinforced the occurrence of differences in the repair process tissue in the knockout groups. Results in the knockout groups also show reduction of infiltrated cells in the tissue during the inflammatory phase, with a decline of 30.65 ± 3.66% (KOB1), 48.20% ± 2.52 (KOB2) and 47.72 ± 2.29% (KOB1B2), on the day 2 after excision. This reduction remained on day 3 being equal to 44.26 ± 7.79% (KOB1), 67.19 ± 2.88% (KOB2) and 60.03 ± 4.28% (KOB1B2), both compared to WT group. In the proliferative phase (day 7), there was a significant reduction in re-epithelialization rate in knockouts groups for the B2 receptor in comparison to WT (76.16 ± 8.03%), presenting rate reductions of 24.94 ± 8.45% (KOB2) and 23.63 ± 5.41% (KOB1B2). Analysis of samples relating to the phase of tissue remodeling (day 10) showed differences in the levels of collagen tissue, with reduced levels in knockout animals of 18.13 ± 2.7% (KOB1), 12.11 ± 1.52% (KOB2) and 16.96 ± 0.51% (KOB1B2), compared with the control group (88.9 ± 2.62 g /tissue). In knockouts B2 groups, immunohistochemical analyzes show significant reductions in fibroblast proliferation rate of 39.01 ± 5.96% (KOB2) and 38.03 ± 4.32% (KOB1B2). Again, decreases were observed in the number of myofibroblasts in these groups, equal to 34.87 ± 3.31% (KOB2) and 44.10 ± 3.54 % (KOB1B2), in comparison with the control group (32.5 ± 4.92 cells/field). Data from KOB1 animals did not show differences concerning fibroblast proliferation and myofibroblasts. The results suggest the involvement of the kinin system in processes that make up the tissue repair, assisting in the understanding of pathophysiological process, and making kinins a new therapeutic option. Highlighting the B2 receptor direct participation in proliferation and differentiation of fibroblasts in the skin. Keywords: Kinins, Wound Healing, Skin, kinin B1 receptors, kinin B2 receptors.

Orientador : Osvaldo Malafaia / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias da Saúde

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2010. / Submitted by wiliam de oliveira aguiar (wiliam@bce.unb.br) on 2011-06-30T18:21:36Z No. of bitstreams: 1 2010_MarcioSousaJeronimo.pdf: 1578926 bytes, checksum: 79c20c6135d32319982393e2ad178021 (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-07-04T12:37:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_MarcioSousaJeronimo.pdf: 1578926 bytes, checksum: 79c20c6135d32319982393e2ad178021 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-04T12:37:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_MarcioSousaJeronimo.pdf: 1578926 bytes, checksum: 79c20c6135d32319982393e2ad178021 (MD5) / A cicatrização de ferida é um mecanismo coordenado e regulado por que envolve mediadores solúveis e insolúveis da resposta imunitária. Certas condições são conhecidamente comprometedoras desse mecanismo. A obesidade, diabetes e a imunossupressão interferem em mecanismos chaves do reparo e fazem que este seja comprometido no final. Animais sadios, imunossuprimidos, diabéticos ou obesos foram submetidos a confecção de uma ferida de primeira e segunda intenção no dorso e tratados com L-Arginine topicamente dutrante 5, 7 e 10 dias pós operação. O tecido foi retirado e feito análises histopatológicas e RT-PCR em tempo real para se determinar o quadro de evolução da ferida. A análise estatística foi feita pelo teste T. Nosso trabalho revelou que o uso tópico da L-Arginina em feridas de primeira e segunda intenção melhorou o processo de cicatrização por aumentar a produção de TGF-β e citocinas da fase inflamatória TNF-α e IL1-β. A L-Arginina parece ser uma boa alternativa para o auxílio no reparo de feridas em condições que mecanismos de cicatrização está comprometida. Nosso trabalho abre perspectivas para estudos que envolvam novas formulações e associações que tenham como base esse aminoácido. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The wound healing is a coordinated and regulated mechanism that involves soluble mediators and insoluble immune response. Certain conditions are known to compromising the mechanism. Obesity, diabetes and immunosuppression interfere in key mechanisms of repair and do it to be compromised in the end. Healthy animals, immunosuppressed, diabetic or obese underwent construction of a wound from the first and second intention in the back and treated with L-Arginine topically dutrante 5, 7 and 10 days post operation. The tissue was removed and was the histopathological analysis and RT-PCR in real time to determine the framework of evolution of the wound. Statistical analysis was performed by the test T. Our work showed that the topical use of L-arginine in wounds of first and second intention improved the healing process by increasing the production of TGF-β and cytokines in the inflammatory TNF-α and IL1-β. L-Arginine appears to be a good alternative to aid in wound repair mechanisms in conditions that healing is compromised. Our work opens up perspectives for studies involving new formulations and associations that are based on this amino acid.

A terapia com laser em baixa intensidade visa, principalmente, supressão da dor e aceleração da cicatrização de feridas. Este estudo teve por objetivo, avaliar clinica e histologicamente os efeitos do laser de arseneto de gálio e alumínio (GaAlAs) – 670nm na aceleração da cicatrização de gengivoplastias em 13 pacientes. Após a cirurgia, o lado direito (teste) recebeu aplicação do laser com dose de 4J/cm², a cada 48h, durante 1 semana, totalizando 4 sessões. O lado esquerdo (controle) não foi irradiado. Cinco examinadores avaliaram, comparativamente, o aspecto clínico da cicatrização através de fotografias dos períodos pós-cirúrgicos de 7, 14, 21,30 e 60 dias. Nos períodos de 7 a 21 dias, houve preferência ora por um, ora por outro lado como o mais bem cicatrizado e nos períodos subseqüentes, ambos foram considerados iguais. Para a avaliação histológica, foram realizadas biópsias incisionais, próximas da papila mesial dos caninos, em ambos os lados, nos períodos pós-operatórios de 7,14, 21 e 60 dias. A análise morfométrica da maturação epitelial e conjuntiva mostrou que a cicatrização ocorreu dentro de parâmetros normais em ambos os lados. Para a análise estatística dos dados clínicos foram utilizados os testes dos sinais e Kappa. Houve baixa concordância entre examinadores com valores médios de Kappa entre 0,17 e 0,36. Para os dados morfométricos aplicou-se o “teste t” pareado, com nível de significância de 5%. (P<0,05). Os resultados não mostraram diferenças estatisticamente significantes entre os grupos, levando à conclusão que, do ponto de vista clínico e histológico, o laser não influenciou a cicatrização da mucosa bucal. / The main goal of this research was to clinically and histologically evaluate the effects of Aluminum Gallium Arsenate laser – 670nm in acceleration of wound healing after gingivoplasty in 13 patients. After surgery the right side of the patient (test group), received a laser dose of 4J/cm², in 48-hour intervals, during one week, totalizing 4 sessions. The left side (control group) did not receive irradiation. Five blind observers evaluated the clinical aspect of wound healing through photography of the treated areas at post surgical periods of 7, 14, 21, 30, 60 days. There was a tendenc y of choosing sometimes one side, sometimes the other as better healed until 21 days, and for the following periods both sides were considered equal. For histological analysis, incisional biopsies were performed on the mesial papilla of canines on both sides. Specimens were taken at 7, 14, 21 and 60 days post surgically. Morphometric analysis was carried out at epithelium and connective tissue and revealed normal healing parameters for both sides. For clinical evaluation the Sign and Kappa tests were used as statistical analysis. There was little agreement between examiners (mean Kappa values of 0,17 to 0,36). For the morphometric study, differences between the control group and experimental group were analyzed using the Student’s paired t-test with a confidence interval of 5% (p<0,05). The results obtained did not show statistically significant differences between the groups suggesting that clinically and histologically the laser therapy did not influence the healing of oral mucosa.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:26:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2156_1.pdf: 1712852 bytes, checksum: 3850b32a1588491d5215dcf34a37eb8e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / A Todo instante nosso corpo está sujeito a lesões e muitas são as substâncias e técnicas no sentido de prover o mais rápido restabelecimento da região. Alguns polímeros desempenham interferência proativa na cicatrização, destacando-se colágeno, fibrina, quitosana, cianoacrilatos, num grupo chamado de cola biológica. Extratos naturais de plantas também concorrem em volume de estudos, ao auxílio da regeneração tecidual. Cicatrizes fibrosadas (quelóides), em regiões que comprometem a estética, levam seus portadores a um decréscimo de auto-estima. Portanto o controle de infecções, manutenção do sistema imunológico e reparação tecidual organizada, constituem-se relevantes eventos para boa cicatrização. O polímero PMMA (polimetilmetacrilato de metila) é bastante utilizado na indústria de forma geral, na medicina, na odontologia, nos implantes, na liberação de fármacos. Sua familiaridade ao cianoacrilato, notabilizado na síntese de tecidos, seu uso no preenchimento de sulcos e rugas faciais, a estimulação do sistema imune e adesividade, sinalizam-no como agente cicatrizante. Testou-se propositivamente, seu comportamento em feridas em dorso de ratos. Na primeira etapa do trabalho, obteve-se feridas através de um punch cirúrgico com 0,8 cm. Sobre as mesmas colocou-se em aplicação única PMMA (G3) quimicamente ativado em pó e líquido, analisados nos tempos T7, T15 e T21 dias. Nesses períodos os animais foram sacrificados igualmente àqueles tratados com solução salina(G1) e por sutura (G2-Fio seda 000 Ethicon®), n=6. Peças histológicas foram retiradas, fixadas em solução tampão de formol a 10%, recebendo tratamento rotineiro para microscopia óptica. Os preparos corados em HE-Hematoxilina Eosina e Tricrômio de Masson, objetivou analisar as estruturas gerais, células de defesa, fibroblásticas, vasos, colágeno e epitélio. A captura de imagens das lâminas realizou-se através de microscópio óptico, acoplado ao sistema ATI tv Player Versão 6.3. Contou-se colágeno analiticamente pelo sistema Imagelab Versão 2.4, enquanto que os demais parâmetros, pelo ImageJ. Demonstrou-se aumento do número de células de defesa no grupo tratado com PMMA em T7 e redução em T21, quando comparado aos demais grupos, enquanto que o número de células fibroblásticas manteve-se superior em todos os tempos analisados, finalizando em T21 com maior nível de colágeno e similaridade na espessura de epitélio. Concluído o primeiro estudo, seguiu-se desenvolvimento galênico e respectivos controles de géis de PMMA. Nesse segundo estudo, provocou-se duas feridas de 0,6cm de diâmetro nos dorsos de 30 animais, uma próxima à cervical, e outra distante 2 cm. Comparou-se histlogicamente em 3 períodos, T5, T14 e T20 dias, o gel PMMA (SG4) ao gel PMMA+ aroeira (SG3), aos controles Salina (SG1) e Fibrase®(SG2), todos com aplicação diária, n=5. Os resultados mostraram maior número de células de defesa e fibroblástica em SG4/ T5 e T14, enquanto que a espessura do epitélio em T5 foi substancialmente maior nos SG 3 e 4, concordando com a planimetria observada com paquímetro digital®. Concluiu-se que a ocorrência do maior número de células de defesa nos primeiros dias nos grupos tratados com PMMA levou a um processo cicatricial mais rápido e equilibrado, destacando que após o sétimo dia de tratamento, um organismo saudável, equilibra os fenômenos hemodinâmicos

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-26T19:36:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Paulo Antônio Galindo Soares.pdf: 13877147 bytes, checksum: 054deb774fd3b5c19eb287cdb6ac701f (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-30T20:35:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Paulo Antônio Galindo Soares.pdf: 13877147 bytes, checksum: 054deb774fd3b5c19eb287cdb6ac701f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-30T20:35:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Paulo Antônio Galindo Soares.pdf: 13877147 bytes, checksum: 054deb774fd3b5c19eb287cdb6ac701f (MD5) Previous issue date: 2015-08-21 / CAPES / Hidrogéis são considerados uma rede polimérica tridimensional capaz de absorver grandes quantidades de água ou fluídos biológicos e que podem ser aplicados para a manutenção de células, nutrientes, drogas ou proteínas, bem como matriz de suporte para crescimento celular e regeneração de tecidos. Neste trabalho foram desenvolvidos hidrogéis baseados em polissacarídeos naturais, que foram caracterizados e aplicados como cicatrizantes de lesões cutâneas em ratos. Primeiro foi desenvolvido um hidrogel baseado nas misturas de policaju/quitosana nas proporções de 1:4 e 2:3 (p/p), cuja matriz foi formada seguindo ciclos de secagem/hidratação em valores de pH específicos. Para a caracterização destas formulações, foram empregadas técnicas de espalhamento dinâmico de luz, espectroscopia de infravermelho, microscopia eletrônica de varredura e reologia. Além disso, para o hidrogel de policaju/quitosana 1:4, foi avaliado o seu impacto na cicatrização de lesões cutâneas em ratos (Registro de Patente nº BR 10 2014 014009-3), cujos resultados demonstraram que este hidrogel contribuiu para um processo de cura e modulação da inflamação mais eficiente. Um Segundo hidrogel foi preparado com 1,7% (p/v) de galactomanana (extraída de sementes de Cassia grandis) e diferentes concentrações de κ-carragenana (0,3, 0,4 e 0,5% p/v), CaCl2 (0,0, 0,1 e 0,2 M) e pH (5,0, 5,5 e 6,0), utilizando um planejamento fatorial completo 23 baseado em parâmetros reológicos. A melhor formulação foi obtida com 1,7% (p/v) de galactomanana e 0,5% (p/v) de κ-carragenana, contendo 0,2 M de CaCl2 à pH 5,0. Ressonância magnética nuclear e microscopia eletrônica de varredura foram utilizadas a fim de caracterizar esta formulação do hidrogel. Além disso, um estudo de prateleira foi conduzido ao longo de um período de 90 dias de estocagem a 4 ºC, avaliando pH, cor, contaminação microbiana e reologia. A capacidade cicatrizante deste hidrogel também foi avaliada como curativo tópico, e assim como para o hidrogel de policaju/quitosana, o hidrogel de galactomanana/κ-carragenana também contribuiu positivamente para o processo cicatricial; além disso, a incorporação de bromelina na matriz deste hidrogel estimulou e acelerou este processo. Em conclusão, os hidrogéis de policaju/quitosana e galactomanana/κ-carragenana podem ser uma via promissora no campo de biomateriais e aplicações biomédicas. / Hydrogels are three-dimensional polymeric networks capable of absorbing large quantities of water or biological fluids and can be used to preserve cells, nutrients, drugs or proteins, as well as scaffold matrices for tissue engineering and healing process. In this work we have developed, characterized and applied as wound dressing, hydrogels based on natural polysaccharides. First we developed hydrogels based on mixtures of policaju/chitosan at weight ratios of 1:4 and 2:3 (p/p), which matrices were formed following rounds of drying/hydration cycles at a specific pH value. For the characterization of these formulations, dynamic light scattering, infrared spectroscopy, scanning electron microscopy and rheology techniques were employed. Futhermore, for the 1:4 policaju/chitosan hydrogel, was evaluated the impact of the hydrogel dressing at the wound healing of the cutaneous scars in rats (Patent register nº BR 10 2014 01409-3), which results demonstrated that this hydrogel contributed to more efficient healing process and modulation of the inflammation. A second hydrogel was prepared with 1.7 % (w/v) galactomannan (from Cassia grandis seeds) and different concentrations of κ-carrageenan (0.3, 0.4 and 0.5% w/v), CaCl2 (0.0, 0.1 and 0.2 M) and pH (5.0, 5.5 and 6.0), using a 23 full factorial design based on rheological parameters. The best formulation was obtained with 1.7% (w/v) galactomannan and 0.5% (w/v) κ-carrageenan, containing 0.2 M CaCl2 at pH 5.0. Nuclear magnetic resonance and scanning electron microscopy where used in order to characterize this hydrogel formulation. Further, a shelf life study was carried out with this formulation along 90 days-period of storage at 4 ºC, evaluating pH, color, microbial contamination and rheology. The wound healing capacity of this hydrogel was also evaluated as a topical dressing, and as was to the 1:4 policaju/chitosan hydrogel, the galactomannan/κ-carrageenan also contributed for the wound healing process; further, the incorporation of bromelain in the hydrogel matrix stimulating and accelerating this processes. In conclusion, the policaju/chitosan and galactomannan/κ-carrageenan hydrogels can be a promising road to biomaterials fabrication and biomedical applications.