Evalúa el efecto del extracto etanólico de Vasconcellea pubescens (de nombre común “Papaya de monte”) sobre las características espermáticas en ratones tratados con ciclofosfamida y su efecto en el desarrollo de embriones preimplantacionales. Para ello conforma cuatro grupos de ratones a los que se le suministró por vía oral, durante 6 días por semana, durante 6 semanas, los siguientes tratamientos: agua destilada (control), extracto de V. pubescens (300 mg/kg), ciclofosfamida (6 mg/kg), y extracto de V. pubescens (300 mg/kg) conjugado a ciclofosfamida (6 mg/kg). No existe diferencia significativa entre los tratamientos en el peso de epidídimos ni en la concentración espermática. Respecto al porcentaje de la movilidad espermática, disminuyó significativamente en el grupo tratado con ciclofosfamida en relación al control, y el extracto de V. pubescens atenuó el efecto tóxico del fármaco. En la evaluación de los embriones en el cuarto día de desarrollo in vivo, en el tratamiento con extracto de V. pubescens conjugado a ciclofosfamida se obtuvo un mayor porcentaje de embriones detenidos en estadio de clivaje y un menor porcentaje de embriones que alcanzaron el estadio de blastocisto. El tratamiento con ciclofosfamida mostró un porcentaje menor de embriones con calidad celular óptima. Estos resultados indican que a la dosis suministrada, el extracto de V. pubescens tiene efecto inocuo en los parámetros espermáticos de ratones adultos. Sin embargo, es posible que genere daños mínimos, los cuales se incrementan por la suministración de ciclofosfamida, retrasando el desarrollo embrionario. / Tesis

Submitted by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2012-06-15T13:23:04Z No. of bitstreams: 2 Tese_ PatriciaModuloExperimentalImunosupressao.pdf: 783105 bytes, checksum: cddee06ca44579bf2f2997fea8ab0143 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho(irvana@ufpa.br) on 2012-06-15T13:23:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese_ PatriciaModuloExperimentalImunosupressao.pdf: 783105 bytes, checksum: cddee06ca44579bf2f2997fea8ab0143 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-15T13:23:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_ PatriciaModuloExperimentalImunosupressao.pdf: 783105 bytes, checksum: cddee06ca44579bf2f2997fea8ab0143 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2011 / Foi estabelecido um modelo de imunossupressão em roedores por inoculação do agente alquilante Ciclofosfamida (CY). A administração de 50 mg/kg de CY em ratos Wistar provocou uma significante diminuição dos parâmetros de celularidade e peso relativo dos órgãos linfóides. Pela análise da titulação de anticorpos, do ensaio sobre as células formadoras de placa e do teste de hemólise foi comprovada que a imunidade humoral dos roedores sofreu supressão. Foram realizadas quatro inoculações desse imunossupressor e a periodicidade entre as inoculações foi determinada pela recuperação dos níveis de normalidade dos parâmetros supracitados. A alteração na contagem diferencial de células sanguíneas brancas representou o maior efeito adverso da CY, observado nos parâmetros de laboratório analisados nos Cebus apella. Nas duas vezes que foi administrada a droga houve redução no número de linfócitos e posteriormente diminuição de neutrófilos, porém somente na segunda foi observada a imunossupressão. Visto a proximidade filogenética dos primatas não humanos, este desenho experimental será de suma importância para o estudo de tumores em diversas fases do desenvolvimento e principalmente para testes de novos fármacos e esquemas terapêuticos. Com relação às análises de genotoxicidade da CY podemos concluir que em ratos Wistar, as administrações de CY aumentaram significativamente a freqüência de micronúcleos em eritrócitos policromáticos (MN PCEs) e provocaram efeito citotóxico (P<0.05). Em C. apella, os linfócitos do sangue periférico, após o tratamento com CY apresentaram um aumento significativo da media de MN/1000 células em relação aos linfócitos controle (P<0.05). A concentração de CY de 50mg/kg, em C. apella, corresponde à concentração DL50 da droga, visto que 50% desses animais morreram durante o experimento de imunossupressão. Até o desenvolvimento deste trabalho, não se conhecia a concentração correspondente ao DL50 nessa espécie. Ao comparamos as duas espécies de animais utilizadas neste trabalho, os primatas não humanos têm uma recuperação imune mais rápida em relação aos ratos Wistar. Provavelmente a capacidade de metabolização da droga seja mais eficaz em C. apella. Nossos resultados apóiam, portanto, que os primatas não humanos constituem os melhores modelos experimentais devido a sua grande proximidade evolutiva e filogenética com o ser humano. / We established a model of immunosuppression in rats by inoculation of the alkylating agent Cyclophosphamide (CY). The administration of 50 mg/kg CY in Wistar rats caused a significant decrease in the parameters of cellularity, and relative weight of lymphoid organs. For analysis of antibody titre of the test on the plaque forming cells and hemolysis test was proven that the humoral immunity of rodents suffered suppression. Four inoculations were carried out and this immunosuppressive intervals between inoculations was determined by recovery of normal levels of the aforementioned parameters. The change in differential counts of white blood cells represented the greatest adverse effect of CY, observed in laboratory parameters analyzed in Cebus apella. Both times it was administered the drug decreased the number of lymphocytes and neutrophils subsequently decreased, but only in the second was observed immunosuppression. Since the phylogenetic proximity of nonhuman primates, this experimental design is of paramount importance for the study of tumors at various stages of development and mainly for testing new drugs and therapeutic regimens. With respect to genotoxicity analysis of CY can conclude that in Wistar rats, the administration of CY significantly increased frequency of micronuclei in polychromatic erythrocytes (MN ECPs) and caused a cytotoxic effect (P <0.05). In C. apella, the peripheral blood lymphocytes after treatment with CY showed a significant increase in media MN/1000 lymphocyte cells compared to control (P <0.05). The concentration of 50mg/kg of CY in C. apella, LD50 is the concentration of the drug, whereas 50% of these animals died during the trial of immunosuppression. Until the development of this work, do not know the concentration corresponding to the LD50 in this species. In comparing the two species of animals used in this work, non-human primates have a more rapid immune recovery compared to rats. Probably the ability to metabolize the drug is more effective in C. apella. Our results support, therefore, that non-human primates are the best experimental models due to its great evolutionary and phylogenetic proximity to humans.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-18T17:36:59Z No. of bitstreams: 1 MARIANE MAGALHÃES ZANCHI.pdf: 1185149 bytes, checksum: 5b02afd42e868819a353f05a3e1fb99a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T17:36:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIANE MAGALHÃES ZANCHI.pdf: 1185149 bytes, checksum: 5b02afd42e868819a353f05a3e1fb99a (MD5) Previous issue date: 2014-07-26 / A ciclofosfamida (CF) é um agente antineoplásico e imunossupressor, usada no tratamento de diversos tipos de tumores e em algumas doenças auto-imunes. A CF é considerada um pró-fármaco, portanto, precisa sofrer biotransformação hepática para formar seus metabólitos ativos, como a mostarda fosforamida e a acroleína. Seu metabólito terapêutico, a mostarda fosforamida, é responsável pelo efeito citotóxico na célula tumoral, enquanto a acroleína é conhecida por apresentar um efeito tóxico secundário, por aumentar a produção de espécies reativas ao oxigênio, causando estresse oxidativo. Esse, por sua vez, poderia estar diretamente relacionado com a redução da fertilidade causada por esta droga. Diante disso, compostos naturais com atividade antioxidante poderiam ser uma alternativa ao dano causado pela CF. O chá verde, obtido da planta Camellia sinensis, tem ação antioxidante e scavenger de radicais livres, devido ao alto conteúdo de polifenóis. O presente estudo avalia o papel protetor da infusão do chá verde sobre o dano oxidativo no sistema reprodutor de camundongos machos, e a sua relação com a fertilidade, após uma administração aguda de CF. Os camundongos foram pré-tratados por gavagem com veículo ou chá verde diariamente, por 14 dias, na dose de 250 mg/kg. A CF foi administrada via intraperitoneal no 14o dia, 1 hora após a administração do chá, na dose de 100 mg/kg. Os camundongos foram eutanasiados 24 horas após a administração da CF, e os testículos e epidídimos foram retirados para posteriores análises bioquímicas e avaliação espermática. O conteúdo de catequinas, principais constituintes do chá verde foi avaliada por HPLC. Epigalocatequina galato (EGCG) está presente em alta concentração na nossa infusão (1340,2 μg/mL), seguido por epicatequina (EC-500,95 μg/mL) e epicatequina galato (ECG-302,84 μg/mL). CF causou estresse oxidativo no sistema reprodutor dos animais, evidenciado neste trabalho por danificar tanto lipídios, como proteínas e DNA. A CF causou um aumento na peroxidação lipídica (níveis de MDA), dano de DNA (ensaio cometa) e atividade da enzima superóxido dismutase (SOD), enquanto diminuiu a atividade da glutationa peroxidase (GPx), glutationa-S-transferase (GST) e 17β–hidroxiesteróide desidrogenase (17β–HSD) em ambos os tecido testados. A atividade da enzima catalase (CAT) e a quantificação de proteína carbonil foram alteradas somente em testículo, mas não em epidídimo. Em relação à avaliação espermática, CF reduziu significativamente apenas a concentração de espermatozóides, comparado ao controle. O pré-tratamento com a infusão do chá verde reduziu significativamente a produção de MDA, carbonilação de proteína, dano de DNA e restaurou a atividade da GPx e GST. Em epidídimo, o chá verde também aumentou a concentração espermática e restaurou a atividade da enzima 17β–HSD. Pode-se concluir que a infusão do chá verde melhora o dano induzido pela CF, no sistema reprodutor de camundongos, e este efeito poderia ser atribuído ao alto conteúdo de catequinas presentes no chá e à sua atividade antioxidante. / Cyclophosphamide (CP) is an antineoplastic and immunosuppressive agent used to treat various types of tumors and in some autoimmune diseases. CP is considered a prodrug, therefore, must undergo hepatic biotransformation to form its active metabolites, such as phosphoramide mustard and acrolein. Its therapeutic metabolite, phosphoramide mustard, is responsible for the cytotoxic effect on tumor cells, while acrolein is known to provide a secondary toxic effect by increasing the reactive oxygen species production, causing oxidative stress. This might be directly related to the fertility reduction caused by this drug. Therefore, natural compounds with antioxidant activity could be an alternative to the damage caused by CP. Green tea, obtained from the plant Camellia sinensis, has antioxidant and free radical scavenging effect, due to the high content of polyphenols. The present study evaluates the protective role of the green tea infusion on oxidative damage on male mice reproductive system, and their relationship to fertility after an acute administration of CP. The mice were pre-treated by gavage with vehicle or green tea daily for 14 days at dose of 250 mg/kg. CP was administered intraperitoneally on day 14, 1 hour after administration of tea at dose of 100 mg/kg. Mice were euthanized 24 hours after the administration of the CP and testes and epididymis were removed for further biochemical analysis and sperm assessment. The content of catechins, the main constituents of green tea were evaluated by HPLC. Epigallocatechin gallate (EGCG) is present in high concentrations in our infusion (1340.2 μg/ml), followed by epicatechin (EC-500.95 μg/ml) and epicatechin gallate (ECG-302.84 μg/mL). CP caused oxidative stress in the reproductive system of animals, evidenced in this work by damaging not only lipids, but also proteins and DNA. CP increased lipid peroxidation (MDA), DNA damage (comet assay) and superoxide dismutase (SOD) activity, while decreased glutathione peroxidase (GPx), glutathione-S-transferase (GST) and 17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD) activity in both tissues tested. Catalase (CAT) activity and quantification of protein carbonyl were altered only in testes but not in the epididymis. Regarding sperm evaluation, CF significantly decreased only sperm concentration, compared to the control group. Pre-treatment with green tea infusion significantly reduced MDA production, protein carbonylation, DNA damage and restored GPx and GST activity. In epididymis, green tea also increased sperm concentration and restored 17 β-HSD activity. Green tea infusion improves the damage induced by CP in the reproductive system of mice, and this effect is attributed to the high content of catechins in tea and its antioxidant activity.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-05-02T13:45:06Z No. of bitstreams: 1 Natasha Pavin.pdf: 478428 bytes, checksum: 248a3efadd02d2695494d5e6ef077e2b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T13:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Natasha Pavin.pdf: 478428 bytes, checksum: 248a3efadd02d2695494d5e6ef077e2b (MD5) Previous issue date: 2016-04-02 / A ciclofosfamida (CP) é um agente antineoplásico e imunossupressor. É uma droga utilizada no tratamento de diversos tipos de tumores, usada para evitar a rejeição em transplante de órgãos e em doenças autoimunes, como artrite reumática e lúpus eritematoso. A CP é um pró-fármaco que sofre biotransformação no fígado pelo citocromo P450 para gerar metabólitos ativos como a mostarda fosfaramida e a acroleína. Seus metabólitos podem ocasionar um quadro de estresse oxidativo causando danos a diversos órgãos, entre eles o sistema reprodutor. A Tribulus terrestris (TT) faz parte da família das Zygophyllaceae, é uma erva rasteira perene com uma distribuição generalizada no Mediterrâneo, climas subtropicais e no deserto de todo o mundo. Na medicina popular tradicional, tem sido utilizada desde a antiguidade como um afrodisíaco, para energizar, vitalizar e melhorar a função sexual e desempenho físico em homens, bem como para tratar infecções urinárias, inflamações, edemas e outras doenças. Apesar de estudos experimentais e clínicos confirmarem parcialmente o fato de alguns efeitos da TT sobre a libido e a produção de esperma estarem envolvidos com o componente majoritário desta planta, a protodioscina, ainda há muito debate a respeito dos possíveis mecanismos de ação, bem como da sua aplicação terapêutica. Considerando o potencial antioxidante e esteroidogênico da TT, este estudo possui como objetivo investigar o potencial protetor do extrato seco da TT contra o dano testicular induzido pela ciclofosfamida em camundongos machos. Os camundongos Swiss machos receberam o extrato seco de TT como pré-tratamento por gavagem, durante 14 dias, na dose de 11 mg/Kg. No 14 ° dia, receberam uma única injeção intraperitoneal de ciclofosfamida na dose de 100 mg/Kg. Após 24 horas, esses animais foram anestesiados e eutanasiados, e o sangue, os testículos e os epidídimos foram retirados para posteriores análises bioquímicas, avaliação espermática e histopatológica. A presença e quantificação de protodioscina no vii extrato de TT foram avaliadas por HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência), onde foi verificada uma concentração de 1,48% no extrato seco. A CP causou um desequilíbrio no sistema reprodutor destes animais, através do aumento das espécies reativas (ER), peroxidação lipídica (TBARS) e carbonilação de proteínas, bem como uma alteração nas enzimas antioxidantes: superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa S-transferase (GST) e glutationa redutase (GR). O pré tratamento com TT foi eficaz em proteger contra esses danos. Além disso, foi verificado uma redução na atividade da enzima 17β-hidroxiesteróide desidrogenase (17β-HSD), corroborando com a redução do nível de testosterona sérica verificado neste trabalho. Ao mesmo tempo, ao analisarmos a histopatologia dos testículos destes animais, verificamos uma moderada desorganização do epitélio espermatogenico, bem como, uma congestão dos vasos sanguíneos intersticiais. Estes achados corroboraram com os resultados encontrados na avaliação seminal dos animais tratados com CP, onde foi possível verificar uma diminuição da motilidade (41,07%), do vigor (23,52%), da integridade de membrana (43,44%) e da velocidade curvo-retilinea (25,43%), e o pré tratamento com TT foi eficaz em proteger contra esses danos. Em conclusão, este trabalho visou demonstrar pela primeira vez o potencial protetor do extrato seco de TT contra os danos ao sistema reprodutor masculino de camundongos expostos ao quimioterápico CP. À melhora dos parâmetros avaliados pode estar relacionada ao potencial antioxidante e esteroidogênico, bem como pela quantidade de protodioscina observada neste extrato. / Cyclophosphamide (CP) is an antineoplastic and immunosuppressive agent. It is a drug used to treat various tumours types, and also to prevent rejection in organ transplantation and autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and lupus erythematosus. The CP is a prodrug which is biotransformed in the liver by cytochrome P450 enzymes to generate active metabolites phosphoramide mustard and acrolein. Its metabolites can cause oxidative stress state, leading to damage in various organs, including the reproductive system. Tribulus terrestris (TT) is part of the family of Zygophyllaceae, it is a perennial creeping herb with a widespread distribution in the Mediterranean, subtropical climates and desert around the world. In traditional folk medicine, it has been used since ancient times as an aphrodisiac, to energize, vitalize and improve sexual function and physical performance in men and to treat urinary infections, inflammation, edema and other diseases. Although experimental and clinical studies partly confirm that some effects of TT on libido and sperm production are involved with the major component of this plant, protodioscin, there is still much debate about the possible mechanisms of action, as well as their therapeutic application. Considering the antioxidant and steroidogenic potential of TT, this study has the objective of investigating the protective potential of TT dry extract against testicular damage induced by cyclophosphamide in male mice. The male Swiss mice received the TT dry extract as pretreatment by gavage for 14 days at a dose of 11 mg kg-1. On day 14, animals received a single intraperitoneally injection of cyclophosphamide at a dose of 100 mg kg-1. After 24 hours, the animals were anesthetized and euthanized, and blood, testes and epididymis were removed for further biochemical analyzes, sperm and histological evaluation. The presence and quantification of protodioscin in TT extract were analyzed by HPLC (High Performance Liquid Chromatography), where a concentration of 1.48% of dry extract was verified. CP caused an imbalance in the reproductive system of these animals by increasing the reactive species (RS), ix lipid peroxidation (TBARS) and protein carbonylation, as well as change in antioxidant enzymes: superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), glutathione S-transferase (GST) and glutathione reductase (GR). The pre-treatment with TT was effective in protecting against this damage. Furthermore, a reduction in the activity of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD) was found, confirming the reduction of serum testosterone levels observed in this study. Additionally, when analyzing the histopathology of the animals’ testes, we perceived a moderate disruption of spermatogenesis epithelium, as well as a congestion of interstitial blood vessels. These findings corroborate the results found in seminal evaluation of the animals treated with CP, where we observed a decrease in motility (41.07%), vigor (23.52%), membrane integrity (43,44%) and curved-straight speed (25.43%), and the pre-treatment with TT was effective in protecting against this damage. In conclusion, this study aimed to demonstrate for the first time the protective potential of TT dry extract against damage to the male reproductive system of mice exposed to CP chemotherapy. Improvement of these parameters may be related to antioxidant and steroidogenic potential as well as the amount of protodioscin observed in this extract.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T22:57:37Z No. of bitstreams: 1 AndreaCarolineCostaDeArruda_DISSERT.pdf: 2892778 bytes, checksum: ab6349b021e0a01fec34dc8730e5aa85 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-27T22:19:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AndreaCarolineCostaDeArruda_DISSERT.pdf: 2892778 bytes, checksum: ab6349b021e0a01fec34dc8730e5aa85 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-27T22:19:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreaCarolineCostaDeArruda_DISSERT.pdf: 2892778 bytes, checksum: ab6349b021e0a01fec34dc8730e5aa85 (MD5) Previous issue date: 2015-07-20 / O pericarpo de Passiflora edulis var. flavicarpa Degener atualmente est? sendo investigado para fins medicinais. N?o h? relatos na literatura sobre sua toxicidade. O objetivo do presente estudo foi investigar a toxicidade sub-cr?nica em ratos machos e toxicidade em ratas f?meas prenhes e fetos expostos durante a gesta??o a um extrato obtido por infus?o do pericarpo em ?gua (1:3 m/v; 100o C, 10 min). A composi??o do extrato foi avaliada por meio de rea??es qu?micas e tamb?m por cromatografia de camada delgada. Ratos machos adultos (n=8) foram tratados com 300 mg/kg de extrato, por gavagem, durante 30 dias e ratas prenhes (n=7) do dia 0 ao dia 20 de gesta??o. Os grupos controle de ratos machos (n=8) e ratas f?meas (n=7) receberam ?gua pot?vel (1 ml). Durante o tratamento foram registrados o consumo de ?gua e de ra??o e o peso corporal. No dia 29 o comportamento sexual dos machos foi analisado e, em seguida, metade dos machos de cada grupo receberam ciclofosfamida (50 mg/kg, i.p.) para avalia??o (anti) genot?xica na medula ?ssea e a outra metade recebeu apenas solu??o salina 0,9% (1 mL, i.p.). No dia 30, os machos foram anestesiados para coleta de sangue, medula ?ssea e ?rg?os. No dia 20 de gesta??o, as ratas prenhes foram anestesiadas para avalia??o do desempenho reprodutivo. A an?lise dos fetos foi realizada por exame visceral e esquel?tico. A an?lise fitoqu?mica revelou a presen?a de flavon?ides, alcal?ides inespec?ficos, compostos fen?licos e triterp?nicos. A an?lise estat?stica revelou aus?ncia de diferen?as em todos os par?metros analisados para machos, para f?meas e para fetos experimentais em rela??o aos animais controle. A citotoxicidade foi avaliada pela rela??o entre eritr?citos policrom?ticos e normocrom?ticos (EPC/ENC). A an?lise estat?stica (m?dia ? erro do desvio padr?o) revelou aus?ncia de altera??es na frequ?ncia de EPCMN (controle negativo: 3,26?0,42; controle positivo: 11,72?1,02; experimental negativo: 4,02?0,13; experimental positivo: 10,47?0,87) ou citotoxicidade (controle negativo: 0,37?0,08; controle positivo: 0,23?0,05; experimental negativo: 0,37?0,07; experimental positivo: 0,23?0,02). Este estudo sugere que o extrato aquoso obtido de pericarpo de P. edulis var. flavicarpa Degener n?o foi capaz de promover efeitos t?xicos em ratos nas condi??es utilizadas. / The pericarp of Passiflora edulis var. flavicarpa Degener is now being investigated for medicine purposes. There are no reports about it toxicity. The aim of the present study was investigate the sub chronic toxicity in male rats and reproductive toxicity in pregnant rats and exposed fetuses of an extract obtained by infusion of the pericarp in water (1:3 m/v;100o C, 10 min). The extract composition was evaluated by tube reactions and thin lawyer chromatography (TLC). Adult male rats (n=8) were treated with 300 mg/kg of the extract, by gavage, during 30 days and pregnant rats (n=7) from gestation day 0 to day 20. Control received tap water (1 mL). Water and food intakes and body weight gain were recorded. At day 29 of treatment the sexual behavior of the males was analyzed and then half of males from each group received cyclophosphamide (50 mg/kg, i.p.) to (anti)genotoxic assessment in bone marrow. At day 30, males were anesthesized for parameters collection. At day 20 of gestation, the dams were anesthesized for reproductive performance evaluation. The fetal analysis was conducted by visceral and skeletal. Phytochemical analysis revealed the presence of flavonoids, unspecific alkaloids, phenols and triterpenic compounds. Statistical analysis revealed absence of significant differences between experimental and control. This study suggest that the aqueous extract obtained from pericarp of P. edulis var. flavicarpa Degener was not able to promote toxic effects in rats. Cytotoxicity was evaluated with the PCE/NCE ratio (NCE=normochromatic erythrocytes). Statistical analysis (mean ? SEM) revealed absence of changes in the frequency of MNPCE (negative control: 3.26?0.42; positive control: 11.72?1.02; negative experimental: 4.02?0.13; positive experimental: 10.47?0.87) or cytotoxicity (negative control: 0.37?0.08; positive control: 0.23?0.05; negative experimental: 0.37?0.07; positive experimental: 0.23?0.02). This study suggests that the extracts showed no (anti)genotoxic and no cytotoxic activities under the experimental conditions.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-02-06T09:39:55Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rangel Moreira Silva - 2016.pdf: 3905320 bytes, checksum: 6b2881f7623815dc402d04f906727e47 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-02-06T09:40:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rangel Moreira Silva - 2016.pdf: 3905320 bytes, checksum: 6b2881f7623815dc402d04f906727e47 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-06T09:40:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rangel Moreira Silva - 2016.pdf: 3905320 bytes, checksum: 6b2881f7623815dc402d04f906727e47 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-06-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Myrciaria cauliflora (Mart), commonly known as “Jabuticaba” (Brazilian Grape) occurs in all of South America, especially in Brazil. This species presents medicinal properties and it is popularly used to treat diarrhea and respiratory diseases. It has already been proven several biological activities such as antioxidant, antimutagenic and anti-proliferative. The phytochemical analysis of M. cauliflora detected the presence of several compounds, including the ellagitannin pedunculagin. Due to the widespread use of this species for therapeutic and food purposes, this study aimed to evaluate the genotoxic, antigenotoxic, cytotoxic and anticytotoxic actions of the aqueous fraction (AF) and pedunculagin from M. cauliflora seed, by micronucleus (MN) test and the comet assay in mice bone marrow cells. In order to analyze AF and pedunculagin activities prior to CP’s toxic effects, the animals were co-, pre- and post-treated with these substances. The results showed that AF at 24 h treatment did not show genotoxic or cytotoxic effects in the MN test and comet assay. However, AF showed cytotoxic action, but did not show genotoxic effect at 120 h treatment in the MN test. In the comet assay it was able to significantly reduce the frequency of DNA breaks when compared to the negative control. In the evaluation of the antigenotoxic and anticytotoxic effects, it was observed that in all treatments, in both assays, AF and pedunculagin showed antigenotoxic and anticytotoxic activities, but in the post-treatment pedunculagin increased the cytotoxic effect of CP. In general, our results indicated that AF and pedunculagin were able to protect the mice bone marrow cells against DNA damage induced by CP in the MN test and comet assay. These findings indicated that AF and pedunculagin could be probable candidates for the development of new drugs. / Myrciaria cauliflora (Mart), comumente conhecida como jabuticaba, ocorre em toda América do Sul e especialmente no Brasil. Esta espécie apresenta propriedades medicinais e é popularmente usada para tratar diarreia e doenças respiratórias. A essa espécie já foram atribuídas várias atividades biológicas, tais como: antioxidante, antimutagênica e antiproliferativa. A análise fitoquímica de M. cauliflora detectou a presença de vários compostos, incluindo o elagitanino pedunculagina. Devido ao grande uso desta espécie para fins terapêuticos e alimentícios, este estudo teve como objetivo avaliar as ações genotóxica, antigenotóxica, citotóxica e anticitotóxica da fração aquosa (FA) e do composto pedunculagina da semente de M. cauliflora pelo teste do micronúcleo e ensaio do cometa em células da medula óssea de camundongos. A fim de avaliar a atividade da FA e da pedunculagina frente aos efeitos genotóxicos da CP, os animais foram co, pré e pós-tratados com essas substâncias. Os resultados mostraram que a FA no tempo de 24 horas não apresentou efeitos genotóxico e citotóxico no teste do micronúcleo e no ensaio do cometa. No tempo de 120 horas, pelo teste do micronúcleo, a FA não mostrou ação genotóxica, porém exibiu efeito citotóxico e pelo ensaio do cometa, a frequência de quebras de DNA foi menor, quando comparada ao controle negativo. Na avaliação dos efeitos da antigenotoxicidade e anticitotoxicidade, em ambos os ensaios, a FA e a pedunculagina mostraram atividades antigenotóxica e anticitotóxica, porém, no pós-tratamento, o composto pedunculagina potencializou o efeito citotóxico da CP. De modo geral, nossos resultados indicaram que a FA e a pedunculagina foram capazes de proteger as células da medula óssea de camundongos contra os danos no DNA induzidos pela CP no teste do micronúcleo e no ensaio do cometa. Esses resultados indicaram que a FA e a pedunculagina podem ser prováveis candidatos para o desenvolvimento de novas drogas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cyclophosphamide (CP) is an alkylating agent widely used in anticancer and immunosuppression therapy. Like other chemotherapies, this drug can induce damage in healthy tissues, generating multiple organ toxicity. The study of natural substances able to prevent or reduce the toxicity induced by the chemotherapy is very important. Pecan nut shell (Carya illinoensis) is a vegetal by-product with low cost and elevated antioxidant potential and therefore can be considered a promissory substance. The aim of this study was to verify whether the cited antioxidant protects against multiple tissue damage induced by CP. Wistar rats received water or pecan shell aqueous extract (AE - 5%) ad libitum in place of drinking water up to the end of the experiment. On day 30, half of each group received a single administration of vehicle or CP 200 mg/kg-ip. After 7 days, the animals were sacrificed by exsanguination. The blood was collected to obtain plasma and erythrocytes. Vital tissues as heart, liver, kidney, testis and bladder were removed. The occurrence of oxidative stress (OS) was observed through the determination of lipid peroxidation (LP), measured by the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) formation and reduced glutathione (GSH) in all removed tissues, the enzyme catalase (CAT) in the heart, liver, kidney and testis, the enzyme superoxide dismutase (SOD) in the testis and the plasmatic vitamin C (VIT C) levels. Furthermore, the testicular function was evaluated by the enzyme lactate deydrogenase (LDH) and the macroscopic and histopathological analysis of the bladder was carried out. Results demonstrated that the CP treatment increased TBARS and decreased GSH levels in all studied tissues. Moreover, the activities of SOD in the testis and CAT in the heart were increased. However, in the other organs, the activity of the latter was diminished. The testicular LDH and plasmatic VIT C levels were also decreased. Finally, the bladder of the CP treated rats showed dark color and various histological alterations, such as thickening of the lines, hemorrhage, edema, leukocyte infiltration and vascular proliferation. The co-treatment with AE was able to prevent the TBARS increase and GSH depletion in all tissues, except heart and plasma, respectively. The extract also prevented changes in the testicular SOD and CAT activity in all organs, except the kidney. Besides, the extract prevented alteration in plasmatic VIT C and testicular LDH as well as various visual and histological changes in the rat bladder. These findings provided important evidences of the protective effect of pecan shell AE against the general organic toxicity induced by CP. Therefore, this natural substance may be considered to minimize adverse effects related with this chemotherapy, improving the life quality of patients who need to use this type of drug. / A ciclofosfamida (CP) é um agente alquilante muito usado na terapia anticâncer e imunossupressora. Assim como outros quimioterápicos, este fármaco pode causar danos aos tecidos saudáveis, gerando toxicidade em múltiplos órgãos. Desta forma, o estudo de substâncias naturais capazes de prevenir ou minimizar a toxicidade decorrente do tratamento quimioterápico vem ganhando sua importância. A casca da noz pecã (Carya illinoensis), é um sub-produto de origem vegetal de baixo custo e com elevado potencial antioxidante, constituindo uma substância promissora. O objetivo deste estudo foi verificar se o extrato aquoso bruto do vegetal citado apresenta efeito protetor contra os danos teciduais múltiplos induzidos pela CP. Ratos Wistar receberam água potável ou extrato aquoso bruto (EAB 5%) da casca da noz pecã, ad libitum, no lugar da água de beber até o final do experimento. No trigésimo dia, a metade de cada grupo recebeu uma administração única de veículo ou CP 200 mg/kg-ip. Após 7 dias, os animais foram sacrificados por exsanguinação, para obtenção de plasma e eritrócitos, enquanto alguns tecidos como coração, fígado, rim, testículos e bexiga foram removidos. Parâmetros de estresse oxidativo (EO) foram avaliados através da peroxidação lipídica (LPO), medida por meio da formação de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e glutationa reduzida (GSH) em todos os tecidos avaliados, bem como a enzima catalase (CAT) no coração, fígado, rim e testículos. A enzima superóxido dismutase (SOD) testicular e os níveis plasmáticos de vitamina C (VIT C) também foram determinados. A função testicular foi determinada através dos níveis da enzima lactato desidrogenase (LDH). A bexiga foi submetida à avaliação macroscópica e histopatológica, já que é um tecido intensamente danificado pela CP. Os resultados obtidos demonstraram que o tratamento com CP aumentou os níveis de TBARS e diminuiu os níveis de GSH em todos os tecidos avaliados. A atividade da SOD testicular apresentou-se aumentada, bem como a atividade da CAT no coração. Nos demais órgãos, a atividade desta última enzima encontrou-se diminuída. Os níveis da enzima LDH testicular e os níveis plasmáticos de VIT C também se apresentaram reduzidos. Por último, as bexigas dos ratos tratados com CP mostraram coloração escura e diversas alterações histológicas, tais como: espessamento das camadas, hemorragia, edema, infiltração leucocitária e proliferação vascular. O co-tratamento com EAB foi capaz de prevenir o aumento do TBARS e diminuição do GSH em todos os tecidos, exceto coração e plasma, respectivamente. O extrato também preveniu modificações na atividade da SOD testicular e da CAT em todos os órgãos, exceto no rim. Além disso, o extrato também preveniu as alterações nos níveis de VIT C plasmática e LDH testicular, bem como as modificações macroscópicas e histopatológicas na bexiga dos ratos tratados com CP. Os resultados apresentados aqui evidenciam os efeitos protetores do EAB das casca da noz pecã sobre a toxicidade generalizada da CP. Deste modo, este sub-produto da indústria da noz pode ser considerado para minimizar os efeitos indesejáveis relacionados ao tratamento com CP, melhorando a qualidade de vida dos pacientes que necessitam deste quimioterápico.

Trabalhadores da área da saúde, em laboratórios, hospitais e/ou outros locais, estão potencialmente expostos a numerosos riscos ocupacionais. A ampla e crescente utilização de fármacos antineoplásicos, na quimioterapia, é considerada um importante risco químico para o pessoal envolvido no preparo e na administração destas substâncias. O manuseio destes fármacos sem cuidados pode levar a inúmeros efeitos tóxicos. Alguns destes fármacos foram classificados pela IARC como carcinógenos e provavelmente carcinógenos para humanos. Para tais fármacos é difícil atingir uma dose de não efeito observado, pois a patologia provocada por eles é considerada multifatorial. Este estudo objetivou validar método para a determinação de ciclofosfamida, um dos fármacos mais utilizados e, classificado como carcinógeno para humanos, para posterior aplicação em amostras coletadas em situação de real exposição. O analito foi identificado e quantificado por CG-EM após extração do analito em fase sólida e derivação com anidrido trifluoroacético. A ifosfamida foi utilizada como padrão interno e o fármaco foi determinado em amostras provenientes de wipe test e luvas, coletadas em quatro hospitais italianos, dentro de um intervalo de calibração de 1 a 100 ng/mL. Os intervalos de coeficiente de variação obtidos, no ensaio da precisão do método, foram entre 0,5 e 10% (intra-ensaio) e O e 19% (interensaio). Amostras contendo ciclofosfamida foram analisadas durante um mês, sem perda significativa do analito. A porcentagem de recuperação foi 98,9%. Os valores de ciclofosfamida nas 176 amostras coletadas variaram de inferior ao limite de quantificação (1,0 ng/mL) a 141.186 ng. Os resultados, bem correlacionados com aqueles relatados na literatura, sugerem que o método pode ser utilizado na identificação da ciclofosfamida em diversas superfícies e materiais e pode ser considerado ferramenta útil na monitorização da exposição ocupacional à esta substância. / Workers in laboratories and hospitals have potential exposure to numerous occupational hazards. The widespread use of antineoplastic drugs in chemotherapy is considered an important risk to staff involved in the preparation and administration to these drugs. Careless handling may lead toxic effects among the occupational exposure subjects. Some antineoplastic drugs were classified by IARC as carcinogenic and probably carcinogenic for humans. For carcinogenic agents the absence of a no-adverse-effect-Ievel is supposed. In this study cyclophosphamide was quantified adapting a previous analytical method by gas chromatography coupled mass spectrometry (GC-MS) after solid phase extraction and derivatization with trifluoroacetic anhydride. This drug in fact is one of the most frequently used alkylating antineoplastic agent for different types of tumors and classified as human carcinogen. The ifosfamide was used as internal standard and the drug was measured by analysis in wipe samples and gloves, collected from four different hospitals, within a range from 1 to 100 ng/mL. The values of variation coefficient varied from 0.5 to 10% (intra-assay) and from 0 to 19% (interassay). Frozen reference wipe samples containing cyclophosphamide were analysed over one month and no significant loss was observed. The range obtained for bias assay was 83-116% and the recovery was 98.9%. The cyclophosphamide was measured in 176 samples with values ranging from below limit of quantification (1.0 ng/mL) to 141186 ng. The results, well related with those reported in literature, suggest that this method can be used to identify the cyclophosphamide from surfaces and materials samples and can be considered useful in exposure assessment to this drug.

Trabalhadores da área da saúde, em laboratórios, hospitais e/ou outros locais, estão potencialmente expostos a numerosos riscos ocupacionais. A ampla e crescente utilização de fármacos antineoplásicos, na quimioterapia, é considerada um importante risco químico para o pessoal envolvido no preparo e na administração destas substâncias. O manuseio destes fármacos sem cuidados pode levar a inúmeros efeitos tóxicos. Alguns destes fármacos foram classificados pela IARC como carcinógenos e provavelmente carcinógenos para humanos. Para tais fármacos é difícil atingir uma dose de não efeito observado, pois a patologia provocada por eles é considerada multifatorial. Este estudo objetivou validar método para a determinação de ciclofosfamida, um dos fármacos mais utilizados e, classificado como carcinógeno para humanos, para posterior aplicação em amostras coletadas em situação de real exposição. O analito foi identificado e quantificado por CG-EM após extração do analito em fase sólida e derivação com anidrido trifluoroacético. A ifosfamida foi utilizada como padrão interno e o fármaco foi determinado em amostras provenientes de wipe test e luvas, coletadas em quatro hospitais italianos, dentro de um intervalo de calibração de 1 a 100 ng/mL. Os intervalos de coeficiente de variação obtidos, no ensaio da precisão do método, foram entre 0,5 e 10% (intra-ensaio) e O e 19% (interensaio). Amostras contendo ciclofosfamida foram analisadas durante um mês, sem perda significativa do analito. A porcentagem de recuperação foi 98,9%. Os valores de ciclofosfamida nas 176 amostras coletadas variaram de inferior ao limite de quantificação (1,0 ng/mL) a 141.186 ng. Os resultados, bem correlacionados com aqueles relatados na literatura, sugerem que o método pode ser utilizado na identificação da ciclofosfamida em diversas superfícies e materiais e pode ser considerado ferramenta útil na monitorização da exposição ocupacional à esta substância. / Workers in laboratories and hospitals have potential exposure to numerous occupational hazards. The widespread use of antineoplastic drugs in chemotherapy is considered an important risk to staff involved in the preparation and administration to these drugs. Careless handling may lead toxic effects among the occupational exposure subjects. Some antineoplastic drugs were classified by IARC as carcinogenic and probably carcinogenic for humans. For carcinogenic agents the absence of a no-adverse-effect-Ievel is supposed. In this study cyclophosphamide was quantified adapting a previous analytical method by gas chromatography coupled mass spectrometry (GC-MS) after solid phase extraction and derivatization with trifluoroacetic anhydride. This drug in fact is one of the most frequently used alkylating antineoplastic agent for different types of tumors and classified as human carcinogen. The ifosfamide was used as internal standard and the drug was measured by analysis in wipe samples and gloves, collected from four different hospitals, within a range from 1 to 100 ng/mL. The values of variation coefficient varied from 0.5 to 10% (intra-assay) and from 0 to 19% (interassay). Frozen reference wipe samples containing cyclophosphamide were analysed over one month and no significant loss was observed. The range obtained for bias assay was 83-116% and the recovery was 98.9%. The cyclophosphamide was measured in 176 samples with values ranging from below limit of quantification (1.0 ng/mL) to 141186 ng. The results, well related with those reported in literature, suggest that this method can be used to identify the cyclophosphamide from surfaces and materials samples and can be considered useful in exposure assessment to this drug.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T14:02:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseImunologicaGenotoxica.pdf: 1336666 bytes, checksum: 4e5571e62941a2f1f595da14f8696549 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-04-06T12:47:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseImunologicaGenotoxica.pdf: 1336666 bytes, checksum: 4e5571e62941a2f1f595da14f8696549 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T12:47:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseImunologicaGenotoxica.pdf: 1336666 bytes, checksum: 4e5571e62941a2f1f595da14f8696549 (MD5) Previous issue date: 2016-08-11 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O desenvolvimento deste trabalho, deu-se devido a necessidade de se compreender melhor o sistema imune, levando-se em consideração a diversidade dos modelos experimentais de imunossupressão, bem como a variedade de respostas imunológicas e genotóxicas, diferenças estas, relacionadas às espécies, ao medicamento e doses utilizadas. Desta maneira, objetivo do presente estudo foi analisar os efeitos no sistema imunológico e os efeitos genotóxicos em Rattus norvegicus da linhagem Wistar, após a inoculação do agente alquilante Ciclofosfamida (CY). A administração de 50 mg/kg de CY nos roedores, possibilitou observar uma significativa diminuição dos parâmetros de celularidade e peso relativo dos órgãos linfóides. A imunidade humoral dos roedores sofreu supressão, visto que foi realizada a análise da titulação de anticorpos, o ensaio sobre as células formadoras de placa e o teste de hemólise. Foram realizadas quatro inoculações desse imunossupressor e a periodicidade entre as inoculações foi determinada pela recuperação dos níveis de normalidade dos parâmetros supracitados. Nas duas vezes que foi administrada a droga, houve redução no número de linfócitos e posteriormente diminuição de neutrófilos, porém somente no segundo contato com a CY foi observada a imunossupressão. A análise da genotoxicidade da ciclofosfamida (CY) foi analisada através do ensaio cometa e foi de suma importância, pois dectamos danos genômicos ocorridos no DNA , expostos às diferentes doses da ciclofosfamida (CY), que foram de 50 mg/kg nas duas primeiras fases e de 25 mg/kg nas duas últimas fases do experimento. Além disso, foi verificado que os efeitos genotóxicos são cumulativos a cada dose de CY aplicada, pois mesmo sendo administrado na terceira fase, a metade da concentração (25 mg/kg) das duas inoculações inicias CY, o índice de danos não correspondeu a metade dos índices de danos da primeira e da segunda administração. Entretanto, ao analisarmos imunologicamente e genotoxicamente os roedores, nosso trabalho possibilitará testar novos esquemas terapêuticos de imunossupressão. / The development of this work has given up due to the need to better understand the immune system, taking into account the diversity of experimental immunosuppression models as well as the variety of immunological responses and genotoxic differences these, related species, the drug and doses used. Thus, aim of this study was to analyze the effects on the immune system and genotoxic effects in Rattus norvegicus Wistar, after inoculation of the alkylating agent cyclophosphamide (CY). The administration of 50 mg / kg in rodents CY, possible to observe a significant decrease in the parameters of cellularity and relative weight of lymphoid organs. The humoral immunity of rodents has undergone deletion, since the analysis of the antibody titration was performed on the test plate forming cells and hemolysis testing. four inoculations that immunosuppressant and the intervals between the inoculations was determined by recovery of normal levels of the above parameters were performed. Both times the drug was administered, there was a reduction in the number of lymphocytes and neutrophils subsequently decreased, but only the second contact CY was observed immunosuppression. The analysis of the genotoxicity of cyclophosphamide (CY) was analyzed using the comet assay and was of paramount importance because dectamos genomic damage occurring in DNA exposed to different doses of cyclophosphamide (CY), which were 50 mg / kg in the first two phases and 25 mg / kg during the last two phases of the experiment. Furthermore, it was found that the genotoxic effects are cumulative with each CY dose applied, because even being administered in the third phase, the middle concentration (25 mg / kg) of the two inoculations initial CY the damage index does not correspond to half damage indices of the first and second vaccination. However, the analysis and immunologically genotoxicamente rodents, our work will enable testing new therapeutic immunosuppression regimens.