Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-04-18T11:03:26Z No. of bitstreams: 1 christianedovalleribeiro.pdf: 1049142 bytes, checksum: 98e994d5887430998d905b84484671d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-04-24T03:08:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 christianedovalleribeiro.pdf: 1049142 bytes, checksum: 98e994d5887430998d905b84484671d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-24T03:08:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 christianedovalleribeiro.pdf: 1049142 bytes, checksum: 98e994d5887430998d905b84484671d5 (MD5) Previous issue date: 2015-07-27 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Lippia alba é uma planta medicinal que pertence à família Verbenaceae e é conhecida popularmente como erva cidreira. A espécie possui duas características que merecem destaque, é rica em óleos essenciais de interesse econômico e apresenta-se como um complexo poliploide, com números cromossômicos de 2n= 30, 38, 45, 60 e 90. Dessa maneira, L. alba é uma espécie interessante, tanto para a ciência aplicada, quanto para a ciência básica. Este trabalho teve como objetivo produzir plantas poliploides artificiais de L. alba para serem utilizadas em futuros estudos de melhoramento e evolução. Foi utilizado o acesso BGEN02 (2n=2x=30) para a produção de plantas autotetraploides (2n=4x=60). As plantas foram propagadas em meio de cultura MS livre de hormônios e a exposição à colchicina foi realizada misturando-a ao meio MS e inoculando os segmentos nodais. As plantas foram lavadas 3 vezes em água destilada e reinoculadas em meio MS livre de colchicina para posterior análise de nível de ploidia por citometria de fluxo. Foram realizados três experimentos de indução de poliploidia: experimento 1, experimento 2 e experimento 3. Nos dois primeiros, a análise de ploidia foi feita após a organogênese do explante (40 DAI) e no terceiro, a citometria de fluxo foi feita imediatamente após a exposição à colchicina, em curtos intervalos de tempo, para monitorar as alterações de ploidia nesse período. No experimento 1, foram utilizadas diversas concentrações de colchicina, para obter informações sobre as melhores concentrações para realizar os experimentos seguintes. A concentração de melhor resultado (0,2%) juntamente com uma concentração 10 vezes menor (0,02%) foram utilizadas no experimento 2 de indução de poliploidia, para comparar efeitos de baixa e alta concentração. Essas duas concentrações foram utilizadas também no experimento 3, no qual se utilizou dos percentuais de células em 4C e 8C para inferir a ploidia. Poliploides com aproximadamente 6 cm de comprimento foram aclimatizados utilizando substrato para plantio BioPlant ®. No experimento 1, as análises por citometria de fluxo revelaram poliploides nas concentrações de 0,2% e 0,5%, sendo que a primeira produziu maior número de plantas com ploidia alterada. Embora os tratamentos mais fortes tenham causado maior alteração de ploidia, os mesmos causaram maior mortalidade. Com os resultados do experimento 3, foi possível concluir que a concentração 0,2% aumentou os percentuais de células em 4C e 8C, ou seja, produziu células poliploides. Esse resultado corrobora os achados nos experimentos 1 e 2, em que o tratamento de 0,2% foi o que mais produziu plantas poliploides e mixoploides. Portanto, conclui-se que (1) o presente estudo obteve êxito em induzir autotetraploides artificiais de L. alba utilizando a colchicina e as técnicas de cultura de tecidos vegetais in vitro; (2) que as concentrações de 0,2% e 0,5% de colchicina foram capazes de produzir plantas autotetraploides nessa espécie e (3) que as concentrações altas apresentaram maior efeito de alteração de ploidia nos explantes de L. alba. / L. alba is an important medicinal plant that belongs to the family Verbenaceae and is popularly known as falsa melissa or erva cidreira. This species has two features that are very important, it is rich in essential oils of economic interest and is a polyploid complex, with chromosome numbers 2n= 30, 38, 45, 60 and 90. Thus, L. alba is an interesting species, for both the applied and basics research, for plant breeding (improving essential oils) and for evolutionary studies. The aim of this work was to induce artificial polyploid L. alba plants for improvement and evolutionary studies. Biological material was constituted by an accession of L. alba (BGEN02 2n=2x=30). This accession was employed to produce autotetraploid plants (2n=4x=60). Plants were propagated by in vitro tissue culture in MS hormone free culture medium. For the colchicine treatment, colchicine solution was mixed with MS medium and the nodal segments were inoculated. The explants were washed three times in distilled water and inoculated in MS medium colchicine free to after ploidy analysis by flow cytometry. Three polyploidy induction experiments were made: experiment 1, experiment 2 and experiment 3. In 1 and 2 experiments the ploidy analysis were made after explant organogenesis (40 DAI) and in experiment 3, flow cytometry was made immediately after colchicine exposure at short time intervals to monitoring the ploidy changes in this initial period. In experiment 1, several colchicine concentrations were used to obtaining information about the best concentrations to perform following experiments. The best result was obtained by 0,2%. This concentration and a ten times low concentration (0,02%) were used in experiment 2, to compare the effects of high and low concentrations. These two colchicne concentrations were used also in experiment 3 in which 4C and 8C percentiles were used to inferring the ploidy level. Polyploids with a length of approximately 6 cm were acclimatized in substrate for planting BioPlant®. In experiment 1, the ploidy analysis by flow cytometry of polyploidy induction experiments revealed polyploids in treatments with colchicine at concentrations of 0.2% and 0.5%, and the concentration that produced a greater number of plants with altered ploidy was 0.2%.Although the strongest treatments caused more ploidy changes, they caused higher mortality too. From the results of experiment 3, we concluded that 0.2% concentration caused increasing in the percentage of cells in 4C and 8C, which means polyploidy. This result corroborates the findings in experiment 1 and 2, in which the treatment of 0.2% produced more polyploids and mixoploids plants. Therefore, it is concluded that (1) this study was successful in inducing L. alba artificial autotetraploids using colchicine and the plant tissue culture techniques; (2) the concentrations of 0.2% and 0.5% colchicine were able to produce autotetraploids plants of this species, and (3) the high concentrations exhibited higher ploidy change effect on the explants L. alba than the low concentrations.

Orientador: Irene Gyongyver Heidemarie Lorand Metze / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T03:04:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis-Alves_SuiellenCarvalho_D.pdf: 1989355 bytes, checksum: c49ffc9bdc49263faef580e3f36d751a (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A imunofenotipagem é reconhecida como uma importante ferramenta para o diagnóstico das síndromes mielodisplásicas (SMD). O sistema de pontuação por citometria de fluxo descrito recentemente (FCSS) é útil para o diagnóstico diferencial, bem como para o prognóstico de SMD. Avaliamos se a inclusão de valores quantitativos de expressões anormais em células CD34+ e monócitos nesta pontuação poderia melhorar o seu valor diagnóstico. O FCSS modificado (FCSS -R) abrange 9 alterações granulocíticas, 8 monocíticas e 6 de células CD34+. A análise imunofenotípica foi realizada em células de medula óssea (MO) de 56 pacientes com SMD (76% com blastos na medula óssea <5%), 33 casos de citopenias reacionais e 41 doadores de medula óssea saudáveis de transplante alogênico (controles normais). As duas pontuações foram aplicadas em todos os casos. Embora tenhamos encontrado o desvio à esquerda assíncrono na maturação dos granulócitos, a diminuição das hematogônias e o aumento de monócitos CD16+, bem como casos isolados de co-expressões anormais no amadurecimento de precursores mielomonocíticos em citopenias reacionais, alterações qualitativas e quantitativas nos sub tipos de células mielóides CD34+ foram mais específicas de SMD. Ambas as pontuações permitiram discriminar SMD de citopenias reacionais, mas, de acordo com a área sob a curva ROC, o FCSS -R foi mais sensível (53% para FCSS e 94% para FCSS -R). Ambas as pontuações apresentaram especificidade de 100%. A inclusão de valores quantitativos de expressões anormais nas células CD34+ e monócitos em FCSS melhorou a sensibilidade de FCSS-R para o diagnóstico diferencial entre SMD e citopenias periféricas reacionias / Abstract: Immunophenotyping has been recognized as an important tool for diagnosis of myelodysplastic syndromes (MDS). The recently described flow cytometry scoring system (FCSS) is useful for the differential diagnosis as well as prognosis of MDS. We examined if the inclusion of quantitative values of abnormal expressions in CD34+ cells and monocytes in this score could improve its diagnostic value. The modified FCSS (FCSS-R) covers 9 granulocytic, 8 monocytic and 6 CD34+ cell abnormalities. Immunophenotypic analyzes were performed on bone marrow (BM) cells of 56 patients with MDS (76% with bone marrow blasts <5%), 33 cases of reactive cytopenias and 41 healthy bone marrow donors for allogeneic BM transplantation (normal controls). The two scores were applied in all cases. Although asynchronous shift to the left in the maturing granulocytes, decrease in hematogones and increase in CD16+ monocytes as well as isolated cases of abnormal co-expressions in maturing myelomonocytic precursors could be found in reactive PB cytopenias, the most important differences with MDS were seen in the subsets of myeloid CD34+ cells. Both scores allowed to discriminate MDS from reactive cytopenias, but, according to the area under the ROC curve FCSS-R was more sensitive (53% for FCSS and 94% for FCSS-R). Both scores had a specificity of 100%. The inclusion of quantitative values of abnormal expressions in CD34+ cells and monocytes in FCSS improved the sensibility of FCSS for the differential diagnosis between MDS and reactive peripheral cytopenias / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Orientador: Aureo Tatsumi Yamada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T18:21:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Degaki_KarinaYumi_D.pdf: 3236344 bytes, checksum: c9514dcb4b1f172c5ba2ee10da569217 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Células natural killer específicas do útero (uNK) gestante acumulam-se em grande número e desempenham múltiplas funções durante a gestação, As uNK podem atuar tanto como produtoras de fatores angiogênicos que contribuem para a remodelação vascular materna imprescindível para a irrigação placentária ou como células efetoras da resposta imune inata pela produção de citocinas pró-inflamatórias e o acúmulo de proteínas líticas nos grânulos. Contudo, se estas múltiplas funções são desempenhadas cada qual por subtipos funcionais específicos, ou ainda, se é uma única célula multifuncional não está definida. Uma das dificuldades no esclarecimento destas questões está na falta de critérios para a identificação destas células adotados nas diferentes formas de investigação. O presente trabalho propôs no capítulo I, estabelecer uma correlação entre, o fenótipo morfológico das células uNK de camundongos identificadas in situ através de métodos citoquimicos/imunocitoquímicos, com os imunofenótipos das células uNK isoladas do útero que apresentem os perfis de células citotóxico e/ou angiogênico, através da citometria de fluxo. Os métodos citoquímicos de PAS (periodic acid Schiff) e lectina DBA(Dolichos biflorus) e imunocitoquímica para perforina constatou que os três métodos identificam igualmente as células uNK no útero em diferentes dias de gestação (dg) e nas duplas marcações, a maioria das células uNK são DBA+/PAS+/perforina+ e, estas ainda apresentando variações entre grandes e ricas em grânulos e pequenas isentas/pobres em grânulos. Pela citometria de fluxo, as células uNK isoladas do útero no 9ºdg eram predominantemente DBA+/DX5+ (>90%) e negativas para NK1.1. Estas células uNKDBA+/DX5+ eram CD3-, porem surpreendentemente expressavam CD8a (>97%). Este imunofenótipo de célula uNKDBA+/DX5+/CD3-/CD8a+ eram perforina+/TNFa+ (>98%) com expressão do receptor de ativação Ly49H na maioria das células uNK grandes e granulares (64%) e poucas células com receptor de inibição Ly49I+ (~10%), confirmando o perfil citotóxico deste imunofenótipo. Por outro lado, estas células uNKDBA+/DX5+/CD3-/CD8a+ eram também DLL1+/VEGF-A+ e portanto, com perfil de células angiogênicas. Quando confrontado o perfil citotóxico com o angiogênico, as células uNKDBA+ co-expressam o TNFa e o Dll1, confirmando que uma mesma célula compartilha ambos os fenótipos funcionais. O capítulo II avaliou a expressão cronológica e a localização da molécula Dll1, relacionado com a remodelação vascular, nas células uNKDBA+ de camundongos nos períodos de 6,5, 9,5 e 11,5dg. A imunomarcação detectou o fenótipo uNKDBA+/Dll1+ como células pequenas agranulares no 6,5dg que coincidente com o inicio da remodelação vascular do endométrio mesometrial e, atingem o maior numero entre 9,5 e 11,5dg na região central da decídua basal onde ocorre a intensa remodelação das artérias espiraladas. Este conjunto de dados sugerem que as células uNKDBA+ podem apresentar fenótipos funcionais e pode ser adotado como referência para identificação e correlações nas análises in-utero e exo -utero / Abstract: A huge number of pregnancy specific natural killer cell (uNK) accumulates in the uterus and plays multiple functions, such as angiogenic factors, producing cell contributing to the maternal vascular remodeling critical for blood flow to placental and as innate immune responsive cells, producing pro-inflammatory cytokines and storage of lytic protein in the granules. However, it is still unknown if these multiple functions are played each one by specific cell subset, or, by one single multifunctional cell. The difficulty to solve this question is mainly due to the lack of standard criteria for identification of these cells in the different experimental approach. The present study aimed in the chapter I, to establish the relationship between the morphological phenotype of mouse uNK cells identified in situ by cytochemical/immunocytochemical methods and, the immune-phenotype of uNK cells isolated from the uterus showing cytotoxic and angiogenic profile by flow cytometry analysis. All the three, PAS (periodic acid Schiff) and DBA (Dolichos biflorus) lectin cytochemical and anti-perforin immunocytochemical methods equally identified the uNK cells in the uteri of different gestational day (gd) and by using combinations of double staining, the majority of uNK cells showed DBA+/PAS+/perforin+ profile and distinguished the incidence of large granule rich and small granule less uNKDBA+/PAS+/perforin+ cell subsets. By flow cytometry, most of uNK cells isolated from the uterus at gd9 were DBA+/DX5+ (>90%) and NK1.1-. and CD3-. Unexpectedly, this uNKDBA+/DX5+/CD3- was CD8a+ (>97%) and also perforina+/TNFa+ (>98%). The large granule rich uNKDBA+/DX5+/CD3-/CD8a+/ perforina+/TNFa+ cells were mostly Ly49H+ (64%) and poorly Ly49I+ (~10%). This immunophenotype confirms the uNK cell cytotoxic profile. Conversely, these uNKDBA+/DX5+/CD3-/CD8a+ were also DLL1+/VEGF-A+ and therefore, angiogenic cell profile. When crossed the uNKDBA+/TNFa + cytotoxic and uNKDBA+/DLL1+ angiogenic profile, majority were uNKDBA+/TNFa +/DLL1+. This result confirms the uNKDBA+ cell share both cytotoxic and angiogenic functional phenotype. In the chapter II, was evaluated the time dependent expression and localization of Dll1 molecule related to vascular remodeling in the pregnant mice uterus. The immune-stain detected the expression of this angiogenic activator in the uNKDBA+ cell that showed changes in the number and localization at the maternal-fetal interface. Markedly, the uNKDBA+/Dll1+ phenotype appear initially like small granule less cells at gd6.5, coincidental to the beginning of mesometrial endometrium vascular remodeling and reach the peak number around 9.5 to 11,5gd in the central area of decidua basalis. These are the place and time of extensive spiral artery remodeling. Taken all together, there are varieties of uNK cell functional phenotype, but most of them being uNKDBA+, this phenotype could be adopted as reference for uNK cell identification to perform the correlation between in-uterus and exo-uterus analysis / Doutorado / Histologia / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Ricardo Barini, Isabela Nelly Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade deCiências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T23:40:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vicentini_MicheleCintra_M.pdf: 1969247 bytes, checksum: 8feeac5ffde929aca61789b3a8170ccb (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: O sucesso da gestação envolve mecanismos aloimunes, sendo o feto alogênico considerado um aloenxerto bem sucedido. A imunização com leucócitos paternos têm se apresentado como uma eficiente opção terapêutica para os casos de abortamento recorrente, induzindo a produção de anticorpos anti-paternos pelo sistema imune materno durante a gestação. Atualmente, o método de Prova Cruzada por citometria de fluxo (FCXM) vem sendo utilizada para auxílio na avaliação de pacientes com Aborto Espontâneo de Repetição (AER). Objetivos: Avaliar o resultado do FCMX em mulheres com antecedente de AER que engravidaram após tratamento com ILP de acordo com o resultado gestacional. Material e Métodos: 85 pacientes foram selecionadas para o estudo tendo como critérios de inclusão: mulheres com dois ou mais AER, FXCM inicial negativo contra os maridos e mulheres de AER primário. As mulheres divididas em 2 dois grupos 1) Sucesso Gestacional (SG) 2) Perda Gestacional (PG). Após um FCXM inicial negativo (FCXM pré) as pacientes foram imunizadas com doses de ILP e após 30 dias da última ILP um novo FCXM (FCXM pós) foi realizado, a mediana da intensidade de fluorescência (MIF) foi calculada nos 2 momentos e comparada nos 2 grupos. Resultados: Calculando a razão da Intensidade de Fluorescência (IF FCXM pós / IF FCXM pré) para linfócitos T e B analisamos que não houve diferença significativa entre os dois grupos SG e PG, onde linfócito T apresentou p = 0,119 e linfócito B apresentou p = 0,109. Conclusão: Não houve associação entre a variação da razão da MIF nos 2 grupos: SG e PG. Sendo assim, essa variação (razão da MIF), não pode ser usada como parâmetro laboratorial para avaliar o sucesso da ILP quanto ao resultado ("desfecho") das gestações após o tratamento imunológico / Abstract: Introduction: Pregnancy is totally involved with mechanisms alloimmunes, which is considered as a successful allograft: the allogeneic. The immunization therapy with paternal allogeneic lymphocytes (PLI) has been exposed as an efficient therapeutic option for recurrent abortion cases (RSA). Currently, the method of Flow Cytometry Crossmatch (FCXM) has been used to assist in the evaluation of women with RSA. Objective: Evaluate the FCXM results in women with previous RSA, who became pregnant after treatment with PLI according to the pregnancy outcome Material and Methods: 85 women were selected for this study, the inclusion criteria were: women with two or more RSA, FXCM initial negative against their partners and women of primary RSA. They were divided into two groups 1) Success Outcome (SO) 2) Miscarriage (M). After an initial negative FCXM (first FCXM) patients were immunized with doses of PLI and after 30 days of the last PLI FCXM a new (post FCXM) was performed, the median fluorescence intensity (MFI) was calculated in 2 moments and compared into 2 groups. Results: Calculating the ratio of the Fluorescence Intensity (FCXM post IF / IF first FCXM) for T and B lymphocytes there was no significant difference between the two groups SO and M, where T lymphocytes showed a value P = 0.119 and B-lymphocytes showed a value P = 0.109. Conclusion: There was no association between the variation of the ratio of MFI in 2 groups: SO and M. Thus, this variation (ratio of MFI) cannot be used as laboratory parameter to evaluate the success of the outcome of PLI of pregnancies after immunological treatment / Mestrado / Saúde Materna e Perinatal / Mestra em Tocoginecologia

Orientador: Paulo César Giraldo, Fernando Guimarães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T17:52:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_JozianiBeghiniJunqueiradeCarvalho_M.pdf: 1296627 bytes, checksum: ecb2857b529cc3c0e322efcb11c882e7 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Introdução: As vulvovaginites (VV) são consideradas como agravos importantes à saúde da mulher, pois afetam suas vidas no âmbito sexual, afetivo, social, e psíquico. Muitos aspectos da fisiopatogênese destas afecções ainda precisam ser esclarecidos, entre eles os mecanismos imunes relacionados à instalação e propagação da infecção. Objetivos: Identificar e quantificar por citometria de fluxo (CF) os leucócitos presentes no conteúdo vaginal de mulheres com flora normal e VV. Avaliar a expressão do CD16 nos neutrófilos do conteúdo vaginal destas mulheres. Materiais e Métodos: Estudo de corte transversal, no período de junho de 2009 a outubro de 2010. O estudo incluiu 152 mulheres no menacme diagnosticadas com: flora vaginal normal (n=51), vaginose bacteriana (VB) (n=34), candidíase vulvovaginal (CV) (n=43) e VB associada a CV (VB+CV) (n=14). As mulheres foram submetidas a exame especular para medida de pH vaginal, teste de Whiff, coleta de material para bacterioscopia e cultura para fungos. A VB foi detectada pelos critérios de Amsel e/ou escore de Nugent ?7. A CV, pela presença de hifas ou esporos no conteúdo vaginal. VB+CV foi diagnosticada quando estas duas VV estavam presentes na mesma mulher segundo critérios já descritos. Foram consideradas com flora vaginal normal, as mulheres que apresentaram flora do tipo 1 e ausência de patógenos nos exames laboratoriais. Ao final do exame ginecológico, foi realizado um lavado da cavidade vaginal, o qual foi enviado ao laboratório para processamento. Os leucócitos foram marcados com anticorpos monoclonais conjugados a fluoróforos (anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD14, anti-CD15, anti-CD16, anti-CD19, anti-CD24 e anti-CD56) e analisados por CF. Resultados: Os granulócitos neutrófilos foram as células predominantes em todos os grupos estudados. A média da porcentagem de granulócitos neutrófilos foi significativamente maior (p<0,05) na CV comparado à flora normal e VB. A média da porcentagem de granulócitos neutrófilos foi significativamente menor (p<0,05) na VB comparado à flora normal e a CV. Macrófagos e linfócitos foram detectados em percentuais bem menores que os granulócitos neutrófilos. Houve significância estatística (p<0,05) para os linfócitos TCD4 que apresentaram média da porcentagem maior na CV e VB em comparação à flora normal. Considerando-se a intensidade da expressão do CD16 nos neutrófilos, houve maior expressão nas VV (VB, CV, VB+CV) quando comparado à flora normal (p<0,05). Entre as VV, esta ocorrência foi maior na VB comparado à CV (p<0,05). Conclusões: Os granulócitos neutrófilos foram as células predominantes nos lavados vaginais e suas quantidades foram decrescentes considerando-se CV, flora normal e VB. Estes dados sugerem que, como em outros tecidos, na vagina, os neutrófilos são as principais células efetoras da resposta imune apresentando-se em maiores ou menores concentrações conforme o estímulo imunológico causado pelo micro-organismo. A maior intensidade da expressão do CD16 nos neutrófilos das mulheres com VV indica um atraso na apoptose dos neutrófilos envolvidos nestas infecções, predominando na VB / Abstract: Introduction: Vulvovaginitis (VV) is a serious health problem in women. This disease affects their lives in all aspects, be it, sexual, affective, social, and psychological. Many aspects of the pathophysiology of these infections have yet to be elucidated, including the immune mechanisms related to proliferation of microorganisms and maintenance of the infectious process. Objectives: One aim of this study was to identify and to quantify the immune cells present in the vaginal lumen of women with normal flora and VV by flow cytometry (FC). Another aim was to evaluate the expression of CD16 on neutrophils from the vaginal lumen of these women. Materials and Methods: A Cross-sectional study was performed from June 2009 to October 2010. The study included 152 women of childbearing age diagnosed with: normal vaginal flora (n=51), bacterial vaginosis (BV) (n=34), vulvovaginal candidiasis (VC) (n=43) and BV associated with VC (BV+VC) (n=14). The women underwent speculum examination for performing vaginal pH, Whiff test, Gram stain and culture for fungi. BV was diagnosed by the Amsel criteria and/or Nugent score ?7. VC was diagnosed by the presence of yeast or hyphae in the vaginal discharge. A diagnosis of BV+VC was made when both criteria were present in the same woman. Normal vaginal microflora was defined by the presence of type 1 flora and absence of pathogens in laboratorial exams. During gynecological examination, a lavage of the vaginal cavity was performed and sent to the laboratory for processing. Immune cells were labeled with fluorochrome-conjugated monoclonal-antibodies (anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD14, anti-CD15, anti-CD16, anti-CD19, anti-CD24 e anti-CD56) and analyzed by FC. Results: The neutrophil granulocytes were the predominant cells in all groups. The mean of the percentage of neutrophil granulocytes was significantly higher (p <0.05) in VC compared to the normal flora and BV. On the other hand, the mean of the percentage of neutrophil granulocytes was significantly lower (p <0.05) in BV compared to the normal flora and VC. Macrophages and lymphocytes were detected in percentages far lower than the neutrophil granulocytes. The mean percentage of CD4 lymphocytes was significantly higher (p <0.05) in BV and VC compared to the normal flora. The expression of CD16 on neutrophils was higher in VV (BV, VC, BV+VC) compared to the normal flora (p <0.05). Among the VV, it was higher in BV compared to VC (p <0.05). Conclusions: Neutrophil granulocytes were the predominant cells in the vaginal lavages. Higher amount of neutrophil granulocytes was observed in VC, normal flora and BV respectively. These data suggest that neutrophils are presented in higher or lower concentrations as the immune stimulation caused by the pathogen. The highest intensity of CD16 expression on neutrophils in women with VV indicates a delay in neutrophil apoptosis in these infections, predominantly in BV / Mestrado / Fisiopatologia Ginecológica / Mestre em Ciências da Saúde

A indoleamina - 2,3 dioxigenase (IDO) é uma enzima expressa por diversas células do organismo e, dentre suas muitas funções, atua principalmente na regulação do sistema imune. Esta se baseia no catabolismo do triptofano, cuja depleção induz uma interrupção do ciclo celular em linfócitos T, tornando-os mais sensíveis a apoptose aliado à ação de metabólitos provenientes desta reação os derivados da quinurenina que potencializariam a atividade da IDO. A presença e ativação de IDO em alguns tipos tumorais representam um dos mecanismos pelo qual as células tumorais podem se evadir do sistema imune, facilitando a indução, crescimento e progressão tumoral. O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil epidemiológico e anatomopatológico de 21 animais portadores de neoplasias mamárias, além de verificar, pelas técnicas de imuno-histoquímica e citometria de fluxo, o número de células neoplásicas e inflamatórias que expressam IDO em cultivo celular na presença de fatores como seu substrato L- triptofano e seu inibidor competitivo 1-metil-DL-triptofano (1MT). As neoplasias malignas corresponderam a 86% dos casos e o principal diagnóstico histopatológico encontrado foi o carcinoma simples. No que concerne à idade, todos os animais apresentaram idade média igual a 10,3 ± 3,3 anos. Na análise imuno-histoquímica os resultados mostraram que todas as amostras apresentaram imunomarcação citoplasmática para IDO confinado principalmente nas células localizadas nos ductos mamários. Os resultados in vitro indicam que, após 24 horas, o grupo suplementado com L - triptofano apresentou aumento significativo da expressão de IDO nas células de carcinoma simples (49,5 ± 2,5 ) ( p &le; 0,01 ), enquanto o grupo tratado 1 metil DL- triptofano exibiu uma diminuição significativa na expressão de IDO ( 33,8 ± 4,0) ( p &le; 0,01). Os macrófagos e células dendríticas na área tumoral também expressaram IDO e foram susceptíveis ao efeito de 1MT. Atualmente, na medicina veterinária procura de novas estratégias e compostos para a modulação da resposta antitumoral em pequenos animais e o 1 - metil - DL - triptofano representaria um candidato potencial para uma abordagem complementar no tratamento de neoplasias mamárias / The indoleamine - 2, 3 - dioxygenase (IDO) is an enzyme expressed on many cells and among its functions acts mainly in regulation of the immune system. It relies on the tryptophan catabolism, whose depletion induces cell cycle arrest of T lymphocytes turning these cells more sensitive to apoptosis, in addition to some down-stream tryptophan-derived metabolites that would increase IDO activity. The presence and activation of IDO in some tumor types represents a mechanism by which tumor cells can evade the immune system, thus facilitating the induction and progression of tumor growth. Our aim was to evaluate 21 animals with mammary tumors and to verify, by immunohistochemistry and flow cytometry, whether these cells express IDO, and to quantify its in vitro expression on neoplastic cells under influence of IDO substrate tryptophan and IDO competitive inhibitor 1-methyl-DL-tryptophan. Malignant neoplasms accounted for 86% of the cases and the most common diagnosis was carcinoma simple. All animals were adult females, with mean age of 10.3 ±.3 years. Immunohistochemistry results showed that all samples presented cytoplasmic immunostaining for IDO confined mainly in cells located in the mammary ducts. In vitro results indicate that, after 24 hours, the group supplemented with L - tryptophan showed significant increased expression of IDO in carcinoma cells (49.5 ± 2.5) (p &le; 0.05), while the 1MT treated group displayed an significant decreased on IDO expression (33.8 ± 4.0) (p &le; 0.05). Macrophages and dendritic cells at the tumour site also expressed IDO and were susceptible to the effect of 1MT. Currently, veterinary medicine seeks new strategies and compounds for modulating the antitumor response in small animals and 1-methyl DLtryptophan would represent a potential candidate as a complementary approach for the treatment of mammary neoplasms

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:31:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8121_1.pdf: 4893176 bytes, checksum: dcfd4807444393253e57d529e1936a2c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Com o objetivo de se verificar a existência de alterações da morfologia plaquetária, de seus antígenos de superfície, da agregação das plaquetas e da dosagem do antígeno do Fator de von Willebrand (FvW:Ag) em portadores de esquistossomose mansônica na sua forma hepatoesplênica compensada, foram estudados 45 indivíduos, adultos, entre 22 a 83 anos, de ambos os sexos, com ou sem plaquetopenia, sem comorbidades, com sorologia para hepatite viral B ou C negativa, sem passado transfusional nos últimos 90 dias que antecederam à coleta do sangue, não alcoolatras, nem usuários de medicamentos hepatotóxicos, anticoagulantes ou antiagregantes plaquetários. Foram realizados hemograma completo, ultra-som do abdome superior, endoscopia digestiva alta, agregação plaquetária com ADP, Epinefrina, Colágeno e Ristocetina, Imunofenotipagem por citometria de fluxo com os anticorpos CD42b e CD41. O antígeno do FvW foi determinado pelo teste de ELISA (Stago diagnostica). Após o estudo, constatou-se que mais de 90% dos pacientes não apresentavam alterações dos antígenos de membrana GPIb e IIb/IIIa avaliados pelos anticorpos CD42b e CD41 respectivamente; o número de plaquetas encontrado, na maioria dos pacientes, foi abaixo de 100.000/mm3, levando a hipoagregação com agonistas na maioria dos casos. O FvW:Ag nos pacientes analisados foi elevado ou muito elevado. Estatisticamente, encontrou-se associação inversa significativa para variáveis do número de plaquetas, diâmetro longitudinal do baço e o FvW:Ag (p<0.05). Houve associação entre o FvW:Ag, o diâmetro longitudinal do baço e a presença de varizes de esôfago. Concluiu-se que a elevação do FvW:Ag e os valores numericamente normais do CD 42b, encontrados neste trabalho, parecem manter a adesão plaquetária estável; que a agregação, também parece está normal quando ligada ao fibrinogênio, assim como, a expressão das GPIIb/IIIa pelos resultados obtidos com o CD41, e por fim que os testes de agregação plaquetária, induzidos pelos agonistas (ADP; colágeno; ristocetina e adrenalina) e realizados pelo agregômetro PACKS, mostraram-se alterados nos pacientes com esquistossomose porque, apesar da grande especificidade, pois são dependentes de um número de plaquetas normal. Estes achados explicam a não ocorrência de sintomatologia decorrente da plaquetopenia tais como: petéquias, equimoses, gengivorragias, em pacientes com esquistossomose hepatoesplênica

Orientadores: Nicola Amanda Conran Zorzetto, Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T12:14:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Proenca-Ferreira_Renata_M.pdf: 950238 bytes, checksum: 21ee0800d218d95b35b72ea1eeaab7e3 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Anemia falciforme (AF) é uma doença causada por uma mutação de ponto, que resulta na formação de hemoglobina S (HbS). A polimerização de HbS desoxigenada resulta na deformação, enrijecimento e fragilização das células vermelhas, anemia hemolítica e eventos vasos-oclusivos, principal causa de morbidade nos pacientes com AF. A adesão anormal das células brancas e vermelhas ao endotélio diminui o fluxo de sangue na circulação micro-vascular, principal fator envolvido na vaso-oclusão. O objetivo deste trabalho foi comparar as propriedades adesivas de plaquetas de indivíduos sadios (AA) com as plaquetas de pacientes com AF (SS) e em terapia com hidroxiuréia (HU), e quais moléculas de adesão e sinalização estão envolvidas nesta adesão. A adesão basal de plaquetas ao fibrinogênio (FB) do grupo de pacientes SS foi significativamente maior em relação às plaquetas AA, entretanto, as plaquetas de pacientes SSHU mostraram uma adesão similar às plaquetas AA. As plaquetas AA, SS e SSHU quando estimuladas com trombina (TB), apresentaram uma adesão significativamente maior em relação às suas adesões basais. Por outro lado, não houve diferenças significativas entre as adesões basais das plaquetas AA, SS e SSHU ao colágeno como ligante. A citometria de fluxo foi utilizada para comparar a expressão e ativação das principais moléculas de adesão nestas plaquetas, e identificou-se um aumento de expressão da integrina aIIbß3 na sua conformação de ativação, na superfície das plaquetas SS, em relação às plaquetas AA e SSHU. A molécula P-selectina (CD62P) foi encontrada com maior expressão também na superfície das plaquetas SS. Ensaios de adesão utilizando anticorpos específicos para as moléculas de adesão indicaram um possível papel para a integrina aIIbß3 na adesão de plaquetas ao FB. O AMPc é um importante inibidor de ativação plaquetária, e os níveis intraplaquetários de adenosina manofosfato cíclica (AMPc) das plaquetas SS foram significativamente menores em relação às plaquetas AA e SSHU. A co-incubação das plaquetas com TB reduziu significativamente os níveis de AMPc nas plaquetas AA, e SSHU, e nas plaquetas SS essa redução não foi significativa. Além disso, foi interessante notar que os níveis de hemoglobina fetal (HbF) em pacientes SS e SSHU apresentaram uma significativa correlação com os níveis de AMPc. Em relação aos níveis intraplaquetários de guanosina monofosfato cíclica (GMPc), importante inibidor de agregação plaquetária, das plaquetas AA, SS e SSHU não houve diferenças estatisticamente significativas, entretanto com estímulo de trombina houve um aumento significativo de GMPc nas plaquetas AA. A incubação das plaquetas com o cilostazol (inibidor específico da fosfodiesterase 3A, PDE3A) levou a uma redução da adesão de plaquetas SS, e sugere-se que as plaquetas SS possuem a atividade de fosforilação da PDE3A aumentada, e esteja relacionada com a degradação de AMPc nessas plaquetas. Além disso, dados indicam que as vias de sinalização dependentes de PKA, PKG e PKC não estão envolvidas na adesão alterada das plaquetas SS. A atividade funcional nos ensaios com agregação plaquetária de pacientes com AF está alterada, mas será necessário que novos experimentos sejam realizados para maiores conclusões. Os resultados sugerem que as plaquetas de pacientes AF circulam num estado ativado e que elas possuem maior capacidade de aderirem às proteínas que podem ser encontradas na matriz extracelular (MEC) e na superfície da parede vascular. Esta adesão aumentada está associada com os níveis diminuídos de AMPc intraplaquetários e ativação da integrina aIIbß3. Estas mesmas alterações parecem ser revertidas nos pacientes em uso de HU. Resultados sugerem que as plaquetas podem ter um papel importante no processo de vaso-oclusão. Quando estão ativadas, estas plaquetas servem como fonte importante para mediadores inflamatórios que, por sua vez, podem levar à exacerbação da inflamação e ativação celular no local. / Abstract: Sickle cell disease (SCD) is caused by a point mutation that results in the formation of Hemoglobin S (HbS). The polymerization of deoxygenated HbS causes deformation of red cells, which then adopt a sickle shape and become rigid and fragile. Hemolytic anemia and vaso-occlusive events are the main cause of morbidity in SCD; abnormal adhesion of white and red cells to the endothelium decreases the blood flow in the microcirculation and appears to be the main factor involved in vaso-occlusion. The objective of this study was to compare the adhesive properties of platelets from healthy individuals (AA platelets) with those of platelets from SCD patients (SS platelets) and from patients on HU therapy (SSHU platelets), as well as the adhesion molecules and signaling pathways that may be involved in this adhesion. The basal adhesion of SS platelets to fibrinogen (FB) was significantly higher than that of AA platelets; in contrast, SSHU platelets demonstrated a similar adhesion to that of AA platelets. Platelets from AA, SS and SSHU individuals, when stimulated with thrombin (TB), all presented significantly higher adhesions when compared with their basal adhesions. In contrast, there were no significant differences between the adhesions of AA, SS and SSHU platelets when collagen was used as a ligand. Flow cytometry was utilized to compare the expression and activation of the main adhesion molecules on AA, SS and SSHU platelets and identified a significantly higher expression of the ?IIb?3 integrin in its activated conformation on the surface of the SS platelets, in relation to the AA and SSHU. Expression of the P-selectin adhesion molecule (CD62P) was also found to be increased on the surface of SSHU platelets. Adhesion assays utilizing specific antibodies for the activated ?IIb?3 and P-selectin indicated a possible role for the ?IIb?3 integrin in the adhesion of platelets to FB. The cyclic nucleotide, cyclic adenosine monophosphate (cAMP) is an important inhibitor of platelet aggregation. Intraplatelet levels of cAMP were found to be significantly lower in SS platelets compared to AA and SSHU platelets. Co-incubation of platelets with TB significantly reduced levels of cAMP in the AA and SSHU platelets, but in SS platelets this decrease was not significant. Interestingly, levels of fetal hemoglobin (HbF) in SCD patients (both SS and SSHU) were found to correlate significantly with levels of platelet AMPc. With regard to intraplatelet levels of cyclic guanosine monophosphate (cGMP), there were no significant differences found between AA, SS and SSHU platelets, however following a TB stimulus AA platelets demonstrated a significant increase in intracellular cGMP. Phosphodiesterase 3A (PDE3A) is the main cyclic nucleotide hydrolyzing enzyme in platelets. Incubation of SS platelets, but not AA or SSHU platelets, with cilostazol (specific inhibitor of PDE3A) resulted in a significant reduction in their adhesion to FB, suggesting that PDE3A activity in SS platelets may be activated and that augmentation of cAMP is capable of reverting increased SS platelet adhesion. Additional experiments indicate that Protein kinase A (PKA), PKG and PKC dependent signaling pathways are not involved in the altered adhesion of SS platelets. The functional activity of SS platelets was found to be altered in platelet aggregation assays, however further experiments are required to draw conclusions from these data. Results of this study suggest that platelets from SCD individuals circulate in an activated state and that they present a greater ability to adhere to proteins that may be encountered on the vessel wall. This augmented adhesion is associated with decreased levels of intraplatelet cAMP and activation of the ?IIb?3 integrin. These alterations appear to be reversed in patients on HU therapy. Results suggest that platelets may have an important role in the vaso-occlusive process.When activated these cells are an important source of inflammatory mediators that may, in turn, result in an exacerbation of cellular activation at the vaso-occlusive site. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Jörg Kobarg / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:39:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_AlineMonticelli_M.pdf: 19291466 bytes, checksum: 5920430c506c4670ca04da10ad934398 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A Stanniocalcina-1 (STC1) humana é uma glicoproteína homóloga a Stanniocalcina (STC) originalmente identificada como um hormônio regulador da homeostase de cálcio em peixes. A STC1 humana secretada atua em diferentes processos fisiológicos incluindo a angiogênese, a hipóxia e, principalmente, a carcinogênese, demonstrando assim uma atividade abrangente. Atualmente não se conhece o receptor da STC1 e pouco se sabe sobre o mecanismo de ação e de entrada nas células dessa proteína. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar um candidato a receptor de membrana dessa proteína, o receptor de transferrina (TfR1), uma proteína transmembrana responsável pela absorção de ferro nas células. Esse receptor é provavelmente expresso por todas as células em diferentes níveis, em destaque em células do sistema hematopoiético, em células em divisão celular e células neoplásicas. Assim, avaliou-se por citometria de fluxo o efeito do tratamento com STC1 em células não transfectadas e células transfectadas superexpressando o receptor de transferrina. Células tratadas com STC1 demonstraram um efeito semelhante ao tratamento com transferrina, um conhecido ligante desse receptor, no qual ambos diminuíram o número de células positivas para a marcação da superfície com transferrina conjugada com fluorocromo (transferrina-Alexa Fluor® 488 - Life Technologies). Em outro conjunto de experimentos de Western Blot foi demonstrado que a STC1 adicionada no sobrenadante das culturas de células é internalizada nas células e detectável no lisado celular, principalmente as células transfectadas para a superexpressão do receptor de transferrina. Complementarmente, em experimentos de localização subcelular por imunofluorescência a STC1 foi detectada em uma forma pontual e espalhada no citoplasma. Em conjunto, todos esses experimentos sugerem que STC1 e transferrina interferem na localização do receptor de transferrina na superfície celular e que possivelmente esse receptor está envolvido em mecanismos de internalização da própria STC1 / Abstract: Human Stanniocalcin 1 (STC1) is the mammalian homologue of STC, which was originally identified as a calcium-regulating hormone in bony fishes. The human secreted Stanniocalcin acts on different physiological processes, including angiogenesis, hypoxia and especially carcinogenesis, facts that demonstrate their activity is wide. Currently there are few data on the mechanism of action of this protein or how it enters the cell. Thus, the aim of this study was to investigate transferrin receptor (TfR1) as a candidate to membrane receptor protein of STC1. This receptor is a membrane protein responsible for the iron uptake in cells. This receptor is probably expressed by all cells especially by cells in division and cancer cells, but its expression level may vary. We evaluated by flow cytometry the effect of STC1 treatment in non-transfected cells and cell with TfR1 overexpression. The treatment with STC demonstrated a similar effect to treatment with transferrin, a known ligand for receptor, which decreased the number of positive cells for staining with fluorochrome (transferrin conjugated to Alexa Fluor® 488 - Life Technologies). We also demonstrated by Western Blot that STC1 added to the supernatant of cultures of cells, especially cells that overexpress transferrin receptor, is internalized into the cells and detectable in the cell lysate. Additionally, in subcellular localization experiments by immunofluorescence STC1 was detected in a timely manner and scattered in the cytoplasm. Together all this information suggests that STC1 and transferrin interferes with the localization of the transferrin receptor in the cellular surface and perhaps this receptor is involved in the mechanism of internalization of STC1 / Mestrado / Bioquimica / Mestra em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Resumo: A anemia é considerada um dos fatores para avaliar progressão da doença renal e diminuição da qualidade de vida do paciente. Conforme a doença renal progride, ocorre aumento gradativo na produção de toxinas urêmicas que reduz a meia vida dos eritrócitos circulantes por interferir na estabilidade da membrana eritrocitária. Para tanto, utiliza-se a contagem de reticulócitos para classificar a anemia como regenerativa ou não regenerativa. Objetivou-se neste estudo avaliar a resistência da membrana das hemácias, utilizando-se do teste de Fragilidade Osmótica Eritrocitária (FOE) em cães com doença renal crônica (DRC) e avaliação de reticulócitos. Foram avaliados 43 cães provenientes da rotina do Serviço de Nefrologia e Urologia do Hospital Veterinário Governador Laudo Natel da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias - UNESP - campus Jaboticabal. As referidas unidades experimentais foram distribuídas em três grupos, quais sejam, G0 (n=13), composto por cães hígidos e G1, DRC estádios 1 e 2 (n=14) e G2, DRC estádios 3 e 4 (n=16), classificados de acordo com o recomendado pela International Renal Interest Society. A fim de definir os critérios de inclusão dos cães foram feitos, além do exame físico, a avaliação de pressão arterial, hemograma, contagem de reticulócitos, exames bioquímicos, urinálise e relação proteína/creatinina urinária (UP/C). Para execução do teste de FOE as hemácias foram diluídas em concentrações decrescentes de cloreto de sódio e analisadas por citometria ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Anemia is considered one of the factors to assess the kidney disease progress and the decrease in patient's quality of life. As kidney disease progresses, there is a gradual increase in urinary toxin production that shortens the circulating erythrocyte half-life by interfering with erythrocyte membrane stability. To do this, use a reticulocyte count to classify anemia as regenerative or non-regenerative. The objectives of this study were to evaluate the resistance of the red blood cells, using the Erythrocyte Osmotic Fragility test in dogs with chronic kidney disease (CKD) and to evaluate reticulocytes. Forty-three dogs were charged, followed by the routine of the Nephrology and Urology Service of the Governor Laudo Natel Veterinary Hospital of the Faculty of Agricultural and Veterinary Sciences - UNESP - Campus Jaboticabal. The experimental units were divided into three groups, namely, G0 (n = 13), consisting of healthy dogs and G1, CKD stages 1 and 2 (n = 14) and G2, CKD stages 3 and 4 (n = 16), classification proposed by the International Renal Interest Society. In order to define the inclusion criteria of dogs made, in addition to physical examination, an assessment of blood pressure, blood count, reticulocyte count, biochemical tests, urinalysis, and urinary protein/creatinine ratio. To perform the erythrocyte osmotic fragility test, red blood cells were diluted in decreasing sodium chloride filters (0.9 to 0.0%) and analyzed by flow cytometry. As creatinine serum concen... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre