Resumo não disponível

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-15T15:03:50Z No. of bitstreams: 2 Doutorado Carolina_Tese_Final_Pós_banca.pdf: 3244753 bytes, checksum: 877af436492eccb5711942aa55bd53f6 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T15:03:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Doutorado Carolina_Tese_Final_Pós_banca.pdf: 3244753 bytes, checksum: 877af436492eccb5711942aa55bd53f6 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-05 / CAPES; CNPq / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença negligenciada com distribuição mundial, acometendo principalmente àquele com menor status socioeconômico. No Brasil, a LTA já foi visualizada em todos os Estados, sendo endêmica em Pernambuco. A LTA pode apresentar variadas formas clínicas, e a forma cutânea é a manifestação mais comum. A resposta imunológica desempenha um importante papel na cura clínica da doença ou na sua progressão, e os linfócitos T são fundamentais. Células T CD4+ e CD8+ são fontes produtoras de citocinas, atuando nos mecanismos de cura e patogênese da doença. A resposta linfocitária é caracterizada principalmente pelo aumento de células T CD4+. Os subtipos Th1 e Th2, seu direcionamento e papel, são ao mais bem descritos na susceptibilidade e resistência a LTA. Recentemente células T regulatórias e células Th17 também vêm se destacando. Dessa maneira, os objetivos desse estudo foram avaliar a participação de linfócitos T (CD4+, CD8+, Th1, Th2, Th17 e Treg) e de suas citocinas (IFN-, TNF, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, IL-21, IL-22 e IL-23) em indivíduos com LTA ativa e naqueles após a cura clínica (espontânea ou após tratamento). A imunofenotipagem e avaliação de citocinas foram feitas por citometria de fluxo, CBA, e através da quantificação relativa do mRNA das citocinas por qPCR. Os resultados desse trabalho, apresentados em três artigos, mostraram que o balanço na proporção de células T CD4+ e CD8+ é importante para cicatrização das lesões na LTA, e que o tratamento com antimonial não induz nenhum mudança deletéria na proporção de linfócitos T na corrente sanguínea. Além disso, foi visto que as frações antigênicas solúvel e insolúvel de L. (V.) braziliensis são capazes de induzir uma resposta imune específica por parte dos pacientes com LTA. Transcritos para TNF e IFN- foram encontrados significativamente aumentadas após 24h de cultura quando comparado aos controles; no entanto, não foi possível identificar sua população secretora. O desenvolvimento da doença parece estar relacionado a uma desregulação imunológica temporária no início da infecção, caracterizada por um predomínio do perfil Th2 nos pacientes com lesão ativa, e a cura ao desenvolvimento de uma resposta do tipo 1. Essa resposta aparenta ser balanceada/coordenada por mecanismos que envolvem a citocina IL-10, e células Treg e suas subpopulações expressando marcadores de imunossupressão e migração tecidual foram observadas nos indivíduos com LTA ativa. Foi visto ainda a presença significativa de citocinas Th17, sugerindo a sua associação com a patogênese da doença. O estudo mostrou que a resposta imunológica desenvolvida pelo hospedeiro na LTA é dinâmica, e contribui em futuros estudos para desenho apropriado de intervenções imunológicas em pacientes e de vacinas.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-05-09T15:36:26Z No. of bitstreams: 1 Ney Braulio de Oliveira Lins.pdf: 535128 bytes, checksum: bf7b656b16605ec0590fcb36feaac735 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T15:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ney Braulio de Oliveira Lins.pdf: 535128 bytes, checksum: bf7b656b16605ec0590fcb36feaac735 (MD5) Previous issue date: 2013-07-01 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / High somatic cell counts and high bacteria counts are related to health problems of the mammary gland and milking hygiene, what can bring harm to the industry, as well as to public health. The lactoperoxidase system acts directly on the mammary gland health generating hypothiocyanate ions, a bactericidal compound, wich concentrations depend, among other factors, on the presence of plants in the diet rich in cyanogenic glycosides. The objective of this study was to evaluate the quality of the milk in lactating Saanen goats fed maniçoba hay. Seven Saanen goats were used, with 39 ± 2,9 days of lactation and body weight 43,3 ± 7,6 kg in an statistical Latin square design 4 x 4. The treatments consisted of the replacement of the Tifton hay by maniçoba hay (0; 33,3; 66,7 and 100%). The concentrations of thiocyanate ions, fat, protein, lactose, total solids and dry extract in milk were not affected (P <0,05) neither by the substitution of tifton hay for maniçoba nor by the preservative. The SCC was lower (P <0,05) in samples without preservative and was quadratic affected of (P<0,0001) by the substitution of tifton hay for maniçoba. The total bacteria count increased significantly in milk samples without preservative, but was not affected by the substitution of tifton hay for the maniçoba hay. / Altas contagens de células somáticas e altas contagens bacterianas estão relacionadas com problemas de saúde da glândula mamária e de higiene na ordenha, e podem trazer prejuízos para indústria, assim como para a saúde pública. O sistema lactoperoxidase atua diretamente sobre a saúde da glândula mamária gerando íons hipotiocianato, composto de ação bactericida, cujas concentrações dependem, entre outros fatores, da presença na dieta de plantas ricas em glicosídeos cianogênicos. Objetiva-se com o presente trabalho avaliar a qualidade do leite de cabras Saanen em lactação alimentadas com feno de maniçoba. Foram utilizadas sete cabras Saanen, com 39 ± 2,9 dias de lactação e peso corporal médio de 43,3 ± 7,6 kg em um delineamento estatístico quadrado latino 4 x 4. Os tratamentos consistiram da substituição do feno do capim tífton por feno de maniçoba (0; 33,3; 66,7 e 100%). As concentrações de íons tiocianato, gordura, proteína, lactose, sólidos totais e extrato desengordurado no leite não foram influenciadas (P < 0,05) pela substituição do feno de tifton por feno de maniçoba nem pelo conservante. A CCS foi menor (P < 0,05) nas amostras sem conservante e foi influenciada de forma quadrática (P < 0,0001) pela substituição do feno de tifton por feno de maniçoba. A contagem de bactérias totais aumentou significativamente nas amostras de leite sem conservante, mas não foi influenciada pela substituição do feno de tifton por feno de maniçoba.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-05-16T13:38:51Z No. of bitstreams: 1 Raquel Bezerra Jatoba.pdf: 430201 bytes, checksum: 05418e8e49b33104bb10aa85e7a2044a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T13:38:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Raquel Bezerra Jatoba.pdf: 430201 bytes, checksum: 05418e8e49b33104bb10aa85e7a2044a (MD5) Previous issue date: 2009-02-18 / The experiment was conducted at PROGENE laboratory in the Rural Federal University of Pernambuco. The aim of this paper was to develop a calibration curve for the Bactocount IBC equipment. This equipment perform the individual counting of bacteria in milk, but it is necessary to express the results of this counting in colonies formed per unit (CFU). The CFU is one of the most important parameters indicating the quality of the raw milk because milk may carry a variety of microrganisms that can infect humans. 169 samples were collected from bulk milk from four states of Northeast region of Brazil and stored in a sterile device at 4ºC and brought to the laboratory. After the analysis in Bactocount equipment, the analysis by the CFU method was performed by using the standard count in Petri dish. A calibration curve was constructed with data from Bactocount equipment compared to the CFU method. It was applied a correlation analysis and a linear regression. The correlation between Bactocoun and CFU was 0,98 and equation generated was log(CFU) = - 0,6324 + 1,102 * log(IBC). / O experimento foi conduzido no Laboratório de Qualidade do Leite, Programa de Gerenciamento de Rebanhos Leiteiros do Nordeste ¿ PROGENE, situado no Departamento de Zootecnia da Universidade Federal Rural de Pernambuco. Objetivou-se estabelecer uma curva de calibração para o equipamento Bactocount IBC, que realiza contagem individual de bactérias (CIB) no leite, o qual deverá expressar os resultados em unidade formadora de colônia (UFC), preconizado pela IN 51 (MAPA, 2002). A UFC é um dos parâmetros de monitoramento da qualidade do leite cru refrigerado de maior importância, uma vez que, a microbiota existente pode servir como veículo para doenças transmissíveis ao homem. Foram coletadas 169 amostras de leite de tanques de expansão e de latões de quatro Estados da região Nordeste e, em seguida, acondicionadas em recipientes estéreis com capacidade para 50 mL e conservadas a 4ºC (± 1) até a realização das análises, que não ultrapassou 48 horas. Após a análise no equipamento Bactocount IBC, as amostras foram encaminhadas para determinação de UFC utilizando-se o método de referência com placas Petrifilm® AC (AOAC, 2002;BRASIL, 2003). A curva de calibração foi construída com dados obtidos do contador individual de bactérias (CIB) comparando-os com os resultados do método de referência em UFC. Foi aplicada uma análise de correlação e posteriormente de regressão linear simples. A correlação entre CIB e UFC observada foi de 0,98 e a equação obtida foi a seguinte: logUFC = - 0,6324 + 1,102 * logIBC

Orientadores: Irene Gyongyver Heidemarie Lorand-Metze, Maria Marluce Vilela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T10:19:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_ElianeBorgesde_D.pdf: 1180810 bytes, checksum: c8a02911daa5432a6afbf77323a7f25f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Recém-nascidos de mulheres portadoras do vírus HIV, durante a gestação são expostos a algumas drogas e citocinas que podem alterar o desenvolvimento de seu sistema imunológico e influenciar a resposta imune dessas crianças às infecções e vacinas. Nós analisamos as subpopulações dos linfócitos, a maturação dos linfócitos B e o perfil de citocinas em recém-nascidos (RNs) a termo de mães HIV+ que foram tratadas com antirretroviral (ARV) e comparamos os resultados com um grupo controle de recém-nascidos não expostos ao HIV. Em estudo prospectivo, analisamos 36 mulheres HIV+ e seus RNs expostos e 15 mulheres não infectadas com seus RNs saudáveis. As características hematológicas e o perfil de citocinas das mães foram obtidos quando elas estavam na 35ª semana de gestação. Os linfócitos foram analisados por citometria de fluxo. As dosagens de IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12, IFN-g e TNF-a das mães e dos RNs foram realizadas por ELISA, em sobrenadantes de cultura de células mononucleares, sem estímulo e estimuladas por BCG e PHA. Após um ano de acompanhamento nenhuma das crianças expostas que participou deste estudo foi infectada pelo HIV. Os linfócitos B do sangue de cordão umbilical estavam aumentados nos RNs expostos, com aumento da subpopulação CD19+/CD5+. Em RNs expostos de mães usuárias de drogas ilícitas, este aumento foi ainda mais significativo. O tabagismo materno estava associado à diminuição de células T CD4+ do sangue de cordão. Os linfócitos B dos RNs expostos apresentaram correlação inversa com níveis de IL-7 e IL-4 do sangue de cordão. A produção de citocinas dos RNs e de suas mães foi similar, com exceção do IFN-g e do TNF-a que estavam elevados nas mães HIV+, especialmente nas usuárias de drogas ilícitas. Portanto, a ontogenia do sistema imune dos RNs foi influenciada pela infecção materna pelo HIV e o tratamento com ARV, assim como, o uso de drogas ilícitas e o tabagismo. Todos estes fatores podem influenciar a eficácia da vacinação durante o período neonatal. / Abstract: Children born to HIV+ mothers are exposed intra-utero to several drugs and cytokines that can modify the developing immune system, and influence the newborn's immune response to infections and vaccines. We analyzed cord blood lymphocyte subsets, B lymphocyte maturation and cytokine profile in term newborns of HIV+ mothers using ARV and compared them to normal newborns. In a prospective study, 36 mother-child pairs from HIV+ mothers and 15 HIV-uninfected mother-pairs were studied. Hematological features and cytokine profiles of mothers at 35 weeks of pregnancy were also examined. Lymphocytes were analyzed by flow cytometry. The non-stimulated, as well as BCG and PHA stimulated production of IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12, IFN-g and TNF-a, from mothers and infants were quantified using ELISA. After a year of monitoring revealed that none of the exposed children who participated in the study were infected with HIV. In cord blood, B lymphocytes were increased in HIV-exposed newborns, with increase of CD19+/CD5+ lymphocytes. In children of HIV+ hard drug using mothers, also immature B-cells were increased. Maternal smoking was associated with a decrease of cord T CD4+ cells. Cord blood B lymphocytes showed an inverse correlation with cord blood IL-7 and IL-4 levels. Cytokine levels were similar in infants and their mothers except for IFN-g and TNF-a that were higher in HIV+ mothers, especially in drug abusing ones. The immune system ontogeny of term newborns is influenced by mother's HIV infection, ARV treatment as well as drug abuse and smoking. All these factors may influence effectiveness of neonatal vaccination. / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Maria Heloisa Souza Lima Blotta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T06:57:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RomuloTadeuDiasde_M.pdf: 1621844 bytes, checksum: c9496b3e1e9014a3994697dee025f98d (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Pesquisas recentes têm demonstrado que a aterosclerose é uma doença inflamatória crônica. Diversos componentes que participam da resposta imunológica inata e adaptativa foram descritos nas lesões e estão relacionados com o início e progressão das mesmas. Monócitos/macrófagos, linfócitos e células endoteliais possuem papel central na patogênese da aterosclerose por meio da produção de citocinas inflamatórias e anti-inflamatórias, como a IL-1ß, IL-6, TNF-a, IFN-?, IL-10, TGF-ß e quimiocinas. Quimiocinas são citocinas de baixo peso molecular (8-10 kDa) que promovem quimiotaxia e ativação celular no local da lesão. A resposta ao estímulo promovido pelas quimiocinas é resultado de sua ligação a receptores que sinalizam via proteína G trimérica. Este trabalho teve como objetivo analisar a resposta imunológica sistêmica de pacientes com doença arterial coronariana (DAC) comparada a controles saudáveis. Para tal, avaliamos a expressão do RNA mensageiro (RNAm) e a produção in vitro das quimiocinas CCL2 (MCP-1), CXCL8 (IL-8), CXCL9 (Mig), CXCL10 (IP-10), dos receptores CCR2 e CXCR3 e das citocinas IFN-?, IL-10 e TGF-ß em células mononucleares do sangue periférico de pacientes com angina estável (AE), instável (AI) e controles saudáveis estimuladas ou não com LDL oxidada (LDLox) ou lipopolissacarídeo (LPS). Os resultados mostraram que pacientes com DAC apresentam maior expressão constitutiva do RNAm para CCL2, CXCL8, CXCL9, CXCL10, IFN-? e, após estimulação com LDLox ou LPS, de CCL2 e CXCL8, em comparação ao grupo controle. A análise da expressão protéica (ou de proteínas) revelou maiores concentrações de CCL2 e CXCL8 nos pacientes, em relação aos controles. A expressão dos receptores mostrou que pacientes com DAC apresentam maior porcentagem de células CCR2+ de forma constitutiva e de células CXCR3+ após estimulação com LDLox ou LPS. As diferenças mais marcantes entre pacientes com AI e AE foram a maior produção da proteína CXCL8 e maior expressão de RNAm para CXCL9 no primeiro grupo, em contrapartida a maior expressão do RNAm para IL-10 e da citocina TGF-ß no grupo com AE. Em conjunto, estes dados sugerem que os pacientes com DAC dispõem de mecanismos que possibilitam a contínua migração de células do sangue periférico para o local da placa. Após a migração e ativação, estas células estariam aptas a responder rapidamente ao antígeno (LDLox) produzindo grandes quantidades de mediadores imunológicos, criando um ambiente inflamatório propenso ao desenvolvimento da lesão, com possível influência na ruptura e conseqüente surgimento de eventos isquêmicos / Abstract: Atherosclerosis is now recognized to involve chronic inflammatory and immune response. Several components of innate and adaptive immune responses were described in the lesions and are involved in the initiation and progression of the atheroma. Monocytes/macrophages and lymphocytes have a key role in the pathogenesis of atherosclerosis through the production of inflammatory and antiinflammatory cytokines such as IL-1ß, IL-6, TNF-a, IFN-?, IL-10, TGF-ß and chemokines. Chemokines are low molecular mass cytokines (8 ¿ 10 kDa), which promote chemotaxis and cellular activation in the local of the lesion. The response to the stimulus promoted by the chemokines results from its link to receptors that signals through the G protein. This study aimed to analyze the systemic immune response of patients with coronary artery disease (CAD) by comparing them to healthy controls. To this purpose, we evaluated mRNA expression and the in vitro production CCL2 (MCP-1), CXCL8 (IL-8), CXCL9 (Mig), CXCL10 (IP-10), IFN-?, IL-10 and TGF-ß, in addition to the expression CCR2 and the CXCR3 in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of patients with stable (SA), unstable angina (UA) and healthy controls stimulated or not with oxidized LDL (LDLox) or with LPS. Our results showed that patients with coronary arterial disease (CAD) present higher constitutive expression of mRNA for CCL2, CXCL8, CXCL9, CXCL10, IFN-?? and, after stimulation with oxidized LDL or LPS, of CCL2 and CXCL8, as compared to the control group. We also detected higher ammounts of CCL2 and CXCL8 in the patients, when compared to the controls. The chemokine receptors expression showed that patients with CAD present higher percentage of cells CCR2+ in a constitutive manner and CXCR3+ cells after stimulation with LDLox or LPS. The main differences between SA and UA were higher expression of CXCL8 (protein) and CXCL9 mRNA in UA patients and higher IL-10 mRNA and TGF-ß (protein) in SA. All together our data suggest that PBMC of CAD patients are able to produce chemokines and cytokines involved in the regulation of monocytes and lymphocyte migration and retention into atherosclerotic lesions. After migration and activation, these cells would be ready to quickly respond to the antigen (LDLox) producing high amounts of inflammatory mediators, which may contribute to plaque instability, and the development of acute coronary syndromes / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Irene Lorand-Metze / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T20:45:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis-Alves_SuiellenCarvalho_M.pdf: 2640206 bytes, checksum: 0fe8b3a89ccee8a9cd543d9d74f965c3 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A análise multiparamétrica por citometria de fluxo é útil para o diagnóstico diferencial de Síndromes Mielodisplásicas (SMD) nos casos com poucos elementos displásicos na medula óssea (MO) e cariótipo normal. Vários estudos têm relatado hipogranularidade dos granulócitos, anormalidades no padrão de expressão de antígenos, alterações nas quantidades e expressões anômalas nas células CD34+, assim como uma diminuição das células precursoras-B, além do aumento dos monócitos. No entanto, não há um consenso sobre qual o melhor painel a ser aplicado, pois, os painéis geralmente utilizados incluem um grande número de anticorpos monoclonais (AcMo). Neste estudo, a utilidade de um painel racionalizado (10 AcMo) foi avaliada, em combinações de quatro cores, na rotina laboratorial, permitindo o estudo de diversos parâmetros para o diagnóstico de SMD, podendo sugerir fatores prognósticos. Foi examinado MO de pacientes com diagnóstico recente de SMD. O diagnóstico foi baseado na contagem de sangue periférico, citologia de medula óssea e cariótipo. O critério OMS foi utilizado. Foram analisados: dispersão lateral da luz (side scatter -SSC) e padrão de maturação dos granulócitos e dos monócitos, além dos subtipos presentes na população de células CD34+, sendo estas características comparadas com a MO normal. As combinações de AcMo utilizadas foram: HLA-DR/CD14/CD45/CD33; CD16/CD34/CD45/CD13; CD19/CD34/CD45/CD117 e HLA-R/CD123/CD45/CD33. No mínimo 50.000 eventos/caso foram adquiridos. Este estudo incluiu 24 casos de MO normal e 54 casos de SMD com idade mediana de 62 anos (23-93). Os tipos OMS foram 2 casos de AR, 2 SMD del 5q, 25 CRDM, 8 CRDMSA, 7 AREB-I, 10 AREB-II. Os casos foram grupados em SMD com <5% de blastos (baixo risco) e SMD >5% de blastos (alto risco) para análise e comparados com MO normal. Foram detectadas 16 alterações: 4 nos precursores granulocíticos, 4 nos monócitos, 6 na população de blastos como o aumento das células CD34+, mieloblastos e células imaturas não definidas, diminuição dos precursores de células B, e 2 nas populações minoritárias. O total de número de alterações em casos com < 5% de blastos na MO foram de 6 (2-15) porcentagem de blastos na citologia (r= 0.38; p= 0.001), porcentagem de células CD34+ (r= 0.40; p< 0.001), células CD34+/CD13+ (r= 0.61; p< 0.0001), e com as células imaturas não linfóides CD34+/CD13- e CD34+/CD117- (r= 0.30 p=0.02 e r=0.55 p=0.0003, respectivamente). Os precursores de células-B (r=-0.39; p= 0.001) e a hemoglobina (r= -0.30; p= 0.001) diminuíram de acordo com a extensão do número de alterações. Houve correlação entre o número de alterações com o tipo OMS (r= 0.38; p=0.002) e o IPSS (r=0.27 p=0.02). Mesmo com o uso de um painel restrito de 10 AcMo, concluiu-se que este painel foi suficiente para fazer o diagnóstico em 91% dos casos, e permitiu detectar características associadas com a agressividade dos casos. / Abstract: Flow cytometric analysis is useful for the diagnosis of myelodysplastic syndromes (MDS) in cases of few dysplastic elements in bone marrow (BM) and a normal karyotype. Several studies have reported decreased side scatter (SSC) in the granulocytic gate, abnormalities in the maturation pattern antigens, number and abnormal co-expressions in CD34+ cells besides decreased of B-cell precursors and increased of monocytes. There is no uniformly accepted panel for these analyses that usually comprise a large number of monoclonal antibodies (MoAbs). We examined the utility of a small panel of MoAbs in four-color combinations, used routinely in our laboratory that allows the evaluation of several parameters for the diagnosis of MDS and may suggest prognostic factors. Bone marrow aspiration was performed in the diagnostic routine. The diagnosis was based on peripheral blood counts, BM morphology and karyotype. The WHO criteria were used. We examined: SSC and maturation pattern of granulocytes and monocytes; subsets present in the CD34+ population. These features were compared to the values found in normal BM. Combinations of MoAbs:HLA-DR/CD14/CD45/CD33; CD16/CD34/CD45/CD13; CD19/CD34/CD45/CD117; HLA-R/CD123/CD45/CD33. At least 50 000 events/case were acquired. Data were acquired in a FACS CaliburTM flow cytometer and the Paint-A-Gate software was used for data analysis. Normal BMs: 24 cases; MDS 54 cases. Median age: 62 years (23-93). WHO types: 2 RA, 2 MDS del 5q, 25 RCMD, 8 RCMD-RS, 7 RAEB-I, 10 RAEB-II. We could detect 16 alterations: 4 in granulocytic precursors, 4 in monocytes, increase in CD34+ cells, myeloblasts and not defined immature cells, decrease in B-cell precursors, changes in precursor lymphoid dendritic cells and basophilic precursors. The total number of changes in cases with <5% BM blasts was 6 (2-15) and in RAEB 8 (4-12). The number of alterations had a positive correlation with the WHO type, IPSS, %blasts (cytology) (r=0.38; p=0.001), %CD34+ cells (r=0.40; p=0.001), CD34+/CD13+ cells (r=0.61; p<0.0001), but also non-lymphoid immature cells (CD34+/CD13- r=0.30; p=0.02 e CD34+/CD117- r=0.55; p=0.0003). The B-precursors cells and hemoglobin decreased with the increase of number alterations (r=-0.39; p=0.001 and r=-0.30; p=0.01 respectively). We conclude that our panel, although small, was sufficient to make the diagnosis of MDS in 91% of our cases, and permitted to detect features associated with aggressive cases. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T02:20:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amoras_AnaLidiaBraga_D.pdf: 8619774 bytes, checksum: 0bd50b9b777f5d8e05904cfcafaf0d50 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Recentemente, demonstramos defeitos na fagocitose e quimiotaxia de monócitos em pacientes com agamaglobulinemia ligada ao X (ALX) e imunodeficiência comum variável (ICV). Existem poucos dados da expressão in vivo dos receptores para a região constante de imunoglobulina G (IgG) (FcyR) e receptores de complemento (RC) nesses pacientes. O objetivo deste estudo foi investigar a expressão dos FcyR e RC nos monócitos de pacientes com ALX e ICV e compará-la com controles saudáveis. Amostras de sangue total foram obtidas de 10 pacientes com ALX, 12 com ICV e 18 controles saudáveis. O fenótipo dos monócitos foi determinado por citometria de fluxo de células marcadas com CD14+. A expressão dos receptores de superfície FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) e FcyRIII (CD16), CR1 (CD35) e CR3 (CD11b e CD18) foi medida através da determinação da proporção de células CD14+ para cada receptor e pela densidade do receptor. Comparado ao controle, observou-se uma porcentagem significantemente maior de monócitos CD16+ e CD35+ nos pacientes com ALX (P=0,002 e P=0,007, respectivamente). A expressão da intensidade de fluorescência relativa (IFR) do FcyRII (CD32) e FcyRIII (CD16) foi significantemente mais baixa nos monócitos de pacientes com ICV em comparação aos controles (P=0,001 e P=0,035, respectivamente). Pacientes com ALX, que possuem redução na tirosina quinase de Bruton (Btk) mostraram porcentagens normais ou maiores de monócitos expressando CD16+ e CD35+. Esses resultados indicam que a expressão dos receptores Fc e complemento não são suficientes para o bom desempenho da função de fagocitose sugerindo que a deficiência fagocitária desses indivíduos pode resultar de defeitos nos mecanismos de transdução intracitoplasmática mediados por Btk. Além disso, a expressão reduzida de CD16+ e CD32+ nos monócitos de pacientes com ICV, que possuem Btk normal, sugere fortemente que a expressão dos receptores é independente de Btk e que a alteração dos receptores vistas nessepacientes pode ser responsável pela deficiência na função fagocitária dos monócitos desses pacientes. / Abstract: Recently we reported that monocyte phagocytosis and chemotaxis are impaired in X-linked agammaglobulinaemia (XLA) and common variable immunodeficiency (CVI) patients. Few data exist on the in vivo expression of receptors for the constant region of immunoglobulin (IgG) (FcgR) and complement receptors (CR) in these patients. The objective of this study was to investigate the expression of FcgR and CR on monocytes from XLA and CVI patients and compare it to that of healthy controls.Whole blood samples were obtained from 10 patients with XLA, 12 with CVI and 18 healthy controls.Monocyte phenotype was determined by flow cytometry with gating on CD14+ cells. Surface expression of FcgRI (CD64), FcgRII (CD32) and FcgRIII (CD16), CR1 (CD35) and CR3 (CD11b and CD18) was measured by determination of the proportion of CD14+ cells positive for each receptor and by receptor density. Compared to controls, a significantly higher percentage of CD16 and CD35+ monocytes from XLA (P=0.002 and P=0.007, respectively) were observed. The relative fluorescence intensity (RFI) expression of FcyRII (CD32) and FcyRIII (CD16) were significantly lower on CVI monocytes compared to controls (P=0.001 and P=0.035, respectively). XLA patients, who have a reduction of Bruton's tyrosine kinase (Btk), showed normal or increased percentages of monocytes expressing Fcy and complement receptors. These results indicate that the expression of Fcy and complement receptors are not sufficient to a good perform of the phagocytosis function and suggests that the impaired phagocytosis observed in XLA patients could be due to defects of intracytoplasmatic transduction mechanisms Btk mediated. Furthermore, the reduced expression of CD16+ and CD32+ on monocytes from CVI patients, who have a normal expression of Btk, strongly suggests that the expression of these receptors is independent of Btk and the impaired phagocytosis observed in the CVI patients could be due the receptors alterations on the monocytes of these patients. / Doutorado / Pediatria / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Maria Heloisa Souza Lima Blotta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T00:09:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_LannyCristinaBurlandy_D.pdf: 1993850 bytes, checksum: c3f425ae548a166847fe87f0b24ad2b0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Em doenças causadas por microorganismos intracelulares como a tuberculose, criptococose e listeriose foi demonstrado que as células T CD8+ contribuem de forma relevante para o controle da infecção. Em trabalho anterior verificamos um aumento do número de linfócitos T CD8+ no lavado broncoalveolar de pacientes com paracoccidioidomicose (PCM) pulmonar, sugerindo um papel para estas células, cuja ação efetora se dá por meio da produção de citocinas como o IFN-? e atividade citotóxica. O presente estudo teve por objetivo verificar o estado de ativação e a produção de moléculas citotóxicas por linfócitos do sangue periférico (CD4+ e CD8+) de pacientes com PCM, indivíduos com PCM-Infecção e controles, tanto ex-vivo como in vitro, após estimulação com leveduras de P. brasiliensis. A expressão dos marcadores de ativação e moléculas citotóxicas foi avaliada por citometria de fluxo. A análise ex-vivo mostrou que, de maneira geral, os pacientes apresentam menor freqüência de células positivas para moléculas citotóxicas (granzima A, B e perforina), em relação aos indivíduos com PCM-infecção. A estimulação com leveduras de P. brasiliensis levou a um aumento discreto de células ativadas (CD69+) e uma redução na expressão de grânulos citotóxicos. A adição de IL-15 às culturas mostrou elevação da freqüência de células CD69+ apenas no grupo com PCM-infecção e controles. Já as células T CD4+ e CD8+ dos pacientes foram ativadas apenas na ausência do fungo. O efeito da adição de IL-15 na expressão dos grânulos foi pouco expressivo em relação à granzima A e B, mas maior freqüência de células CD8+perforina+ foi observada em indivíduos com PCM-infecção, em relação aos pacientes. Menor expressão do receptor para IL-15 (IL-15Ra) foi detectada em células T CD4+ de pacientes com PCM comparada ao grupo PCM-infecção e aos controles. A dosagem da granulisina sérica pela metodologia de ELISA mostrou níveis inferiores nos pacientes com PCM, comparado aos outros grupos. Além disso, os resultados mostraram uma tendência a um aumento de granulisina nos pacientes após terapia antifúngica. Em conjunto os resultados mostraram que os linfócitos de pacientes com PCM encontram-se em um estado de menor ativação, expressam menores quantidades do receptor para IL-15 e produzem níveis basais de grânulos citotóxicos (granzima A, B, perforina e granulisina). Estes fatores, ao lado de outros mecanismos que comprometem a imunidade celular, poderiam resultar em atividade citotóxica deficitária e, portanto, menor capacidade de lisar o fungo / Abstract: CD8+ T cells play a pivotal role in host defense against diseases caused by intracellular pathogens such as tuberculosis, cryptococcosis and listeriosis. In a previous study we verified an increased number of T CD8+ cells in bronchoalveolar lavage of patients with pulmonary paracoccidioidomycosis (PCM), suggesting a role for them in the local immune response. CD8+ T cells effector functions include cytokines production, mainly IFN-? and cytotoxic activity. The aims of this study were to verify the activation state as well as the production of cytotoxic molecules by peripheral blood lymphocytes (CD8+ and CD4+) from patients with PCM, individuals with PCM-infection and controls, both ex-vivo and in vitro after stimulation with P. brasiliensis yeast cells. The expression of activation and cytotoxic molecules was evaluated by flow cytometry. The ex-vivo analysis showed that, in general, the patients presented a lower frequency of granzime A, B and perforin-positive cells as compared to PCM-infection individuals. P. brasiliensis yeast cells stimulation led to a discrete increase in CD69+ cells and a reduction in cytotoxic granules expression in all groups. The addition of IL-15 to the cultures induced an increase in the frequency of CD69+ cells only in individuals with PCM-infection and controls. Differently, CD8+ and CD4+ T cells from PCM patients were activated only in the absence of fungal cells. The effect of IL-15 in granzyme A and B expression was low but a higher frequency of CD8+perforin+ was detected in individuals with PCM-infection than in patients with PCM. IL-15Ra expression was lower in CD4+ T cells from patients in relation to individuals with PCM-infection and controls. The detection of granulysin levels by ELISA showed lower levels in PCM patients than in individuals with PCM-infection and controls. Moreover, a tendency to a rise in granulysin levels was observed after antifungal therapy. Altogether the results showed that lymphocytes from PCM patients are poorly activated, express low levels of IL-15Ra and produce basal levels of cytotoxic granules (granzyme A, B, perforin and granulysin). These findings, in addition to other mechanisms that impair cellular immunity, may account to defective cytotoxic activity and consequently low capacity to kill the fungus / Doutorado / Ciencias Medicas / Doutor em Ciências Médicas

A Artrite Encefalite Caprina (AEC) é uma lentivirose multisistêmica que tem a glândula mamária caprina como um dos alvos lesionais da doença. Pode causar uma manifestação mamária específica, chamada de mastite endurativa, além da mama representar uma importante via de eliminação do vírus, mesmo em animais que não apresentam a forma clínica. Considerando-se a possibilidade desta virose, cuja célula alvo predominante é o monócito, levar a alterações imunológicas que influenciem a susceptibilidade do animal a outras doenças, objetivou-se avaliar essa interação do vírus e da imunidade do hospedeiro por meio de fenotipagem, fagocitose e produção de Espécies reativas de oxigênio (ERO) e dos mecanismos de morte das células sanguíneas e lácteas de cabras naturalmente infectadas. Para isso 200 cabras foram triadas e, destas selecionadas oito fêmeas não sororreagentes e dez sororreagentes na pesquisa de anticorpos séricos para AEC, dentro dos padrões hematológicos da espécie e com dois exames bacteriológicos do leite negativos. O leite e o sangue colhido destes animais foram submetidos às seguintes provas: fenotipagem dos leucócitos CD4+, CD8+, CD14+, PG68A+ e CD45+, fagocitose de Staphylococcus aureus e de Escherichia coli por células CD14+ e PG68A+, produção de ERO e marcação com Anexina-V e Iodeto de Propídeo (PI) por granulócitos e células mononucleares. A infecção pelo VAEC pode ser associada a um aumento de células CD14+ no leite, mas não no sangue. Os outros perfis celulares não sofreram alterações. Quanto a função fagocítica, o vírus reduziu a porcentagem de fagocitose de Staphylococcus aureus por granulócitos PG68A+ do leite. Esta alteração não ocorreu na fagocitose de Escherichia coli e na produção de ERO dessas células, nem na fagocitose e produção de ERO pelas células CD14+ ressaltando que nesses processos a espécie bacteriana pode sofrer interações com o vírus ou mesmo com a resposta imune do organismo infectado. O VAEC não influenciou significativamente os mecanismos de morte ora investigados, mas a tendência dos resultados sugere que possa haver indução de morte por apoptose e/ou por necrose nos granulócitos do sangue e influenciar no processo de necrose destas células no leite, sem alterar esses processos nas células mononucleares. Ressalta-se a importância da interação monócito-neutrófilo na glândula mamária, principalmente nos animais sororreagentes para AEC, mesmo na ausência de mastite bacteriana. / The caprine arthritis encephalitis (CAE) is a multisystem lentivirose that have the goat mammary gland as one target of the lesional disease. May cause a mammary specific expression, called indurative mastitis, beyond these organ represent a major route of virus elimination, even in animals that do not exhibit this clinical manifestation. Considering the possibility of this virus, whose target cell are predominantly monocyte, lead to immunological changes that influence the animal\'s susceptibility to other diseases, this study aimed to evaluate the interaction of virus and host immunity by phenotyping, phagocytosis and production of reactive oxygen species (ROS) and the mechanisms of cell death, in blood and milk of goats naturally infected. For that, 200 goats were screened and was selected eight females non sero-reagents and ten seroreagents for serum antibodies against CAE, with the haematological analises within the species standards and two negative bacteriological tests of milk. Milk and blood from these animals underwent the following tests: phenotyping of leukocytes CD4+, CD8+, CD14+, PG68A+ and CD45+, phagocytosis of Staphylococcus aureus and Escherichia coli ROS production by CD14+ and PG68A+ cells, and labeling with Annexin-V and propidium iodide (PI) for granulocytes and mononuclear cells. CAEV infection may be associated with an increase in CD14+ cells in milk, but not in blood. The other cellular profile did not change. In the phagocytic function, the virus reduced the percentage of phagocytosis of Staphylococcus aureus by granulocytes PG68A+ milk. This change did not occur in the phagocytosis of Escherichia coli and production of ROS in these cells, nor in phagocytosis and ROS production by CD14+ cells, noting that in those cases the bacterial species may undergo interactions with the virus or even with the immune response of the infected organism. The VAEC not significantly affect the mechanism of death now investigated, but the tendency of the results suggests that can induce apoptosis and/or necrosis in the blood granulocytes and influence the process of necrosis of these cells in milk, without changing these processes mononuclear cells. We emphasize the importance of monocyte-neutrophil interaction in the mammary gland, especially in animals seropositive for CAE, even in the absence of bacterial mastitis.