Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-23. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:56Z : No. of bitstreams: 1 000819087.pdf: 1423284 bytes, checksum: a89857bcef9822e82a34c2b6424c6064 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral é uma doença que causa manifestações clínicas variadas em cães, que podem apresentar desde alterações subclínicas a desordens generalizadas, incluindo alterações neurológicas. Há evidências do comprometimento das barreiras encefálicas, como a presença de infiltrado inflamatório com predomínio de linfócitos T CD3+ no sistema nervoso central. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi determinar e comparar os imunofenótipos de linfócitos T no sangue periférico e no liquor e avaliar as lesões encefálicas em cães infectados. Verificou-se que os linfócitos T presentes em maior quantidade no liquor foram os duplos negativos (DN) e os duplos positivos (DP), com predomínio de TCRαβ. Também verificou-se que as células sanguíneas não diferiram das células do liquor em quantidade, o que indica que pode estar havendo um comprometimento da barreira hematoliquórica, permitindo que as células do sangue migrem para o liquor. Ocorreu também o predomínio de infiltrado linfohistioplasmocitário no encéfalo, principalmente em leptomeninges. Porém, não houve correlação entre a inflamação nessa área e as células T. Além disso, a correlação positiva entre a inflamação no subepêndima e as células T DN do liquor indica que essas células chegam no encéfalo também pelos vasos subependimários. Em conjunto, os resultados contribuem para explicar a inflamação observada no encéfalo de cães com leishmaniose, sendo que as células T DN podem ser responsáveis pela progressão neurológica da doença / Visceral leishmaniasis (VL) is a disease causing several clinical manifestations in dogs, that can present from subclinical to generalized disorders, including neurological disorders. There are evidences of cerebral barriers involvement, such as the presence of inflammatory infiltrate with predominance of CD3+ T cells in the brain of infected dogs. Therefore, the aim of this study was to determine and to compare the immunophenotypes of T lymphocytes in the peripheral blood and in the cerebrospinal fluid (CSF) of dogs with VL and evaluate the brain lesions. It was detected that the double negative (DN) and double positive (DP) T cells were present in higher percentage in the CSF, with predominance of TCRαβ. Besides, the amount of blood T cells did not differ from those observed in the CSF, indicating that the blood-CSF barrier may be damaged, allowing the migration of cells from the blood to the CSF. Moreover, inflammatory infiltrate with predominance of lymphohistioplasmacytic cells was observed, mainly in leptomeninges. However, there was no correlation between the intensity of the inflammation in this area and the T cells. Furthermore, the positive correlation between intensity of the inflammation in the subependimal area and DN T cells in the CSF indicates that these cells also may reach the brain through the subependymal vessels. Together, the results contribute to explain the inflammation observed in the brain of dogs with VL, where the DN T cells may contribute to the neurological progression of the disease

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-14. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:24Z : No. of bitstreams: 1 000819084.pdf: 1209964 bytes, checksum: 04874bbac5638856dedf456279299e45 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral é uma doença imunomediada que pode causar alterações na população de linfócitos T em diferentes órgãos e tecidos, e também aumento de células inflamatórias no encéfalo de cães infectados. O objetivo deste estudo foi avaliar e caracterizar as lesões encefálicas por meio de análise de cortes histológicos do encéfalo e as subpopulações de linfócitos T CD4+, CD8+, duplo-positivos (DP), duplo-negativos (DN), TCRs αβ e δγ e células dendríticas (cd11c+/MHC-II+) provenientes de linfonodos regionais da cabeça e do linfonodo poplíteo de cães com leishmaniose visceral utilizando citometria de fluxo. Os resultados mostram que encéfalos de cães com LV podem apresentar infiltrados inflamatórios em região de leptomeninges, plexo coroide e região subependimária. Entre os linfonodos, não houve diferença entre as subpopulações de linfócitos T, porém, observamos redução dos linfócitos T CD8+ e aumento dos T DN e TCR δγ enquanto que os CD4+ e DP e TCR αβ mantiveram-se próximos a valores de cães saudáveis, sugerindo assim que os linfócitos DN e TCR δγ podem estar relacionados com a resposta imunológica de cães sintomáticos com LV. Todos esses achados descartam a hipótese de que os linfonodos regionais da cabeça poderiam apresentar um padrão de resposta imune específica relacionada com as lesões encefálicas dos cães / Visceral leishmaniasis (VL) is an immune-mediated disease which may cause changes in T lymphocytes population in different organs and tissues, and also an increase in the inflammatory cells population in the brain of infected dogs. The aim of this study was to evaluate the encephalic lesions in brain sections, and to characterize the T lymphocytes subsets CD4+, CD8+, double-positive (DP), double-negative (DN), the TCRs αβ and δγ, and the dendritic cells (CD11c+/MHC-II+) from the regional lymph nodes of the head and the popliteal lymph node using flow cytometry. The results evidenced that the brain of dogs with VL may present inflammatory infiltrates in leptomeninges, choroid plexus and subependymal area. Between the lymph nodes, there was no difference among the T cell subsets, nevertheless, there was noticed a reduction in the CD8+ lymphocytes and an increase in the DN subset as well as the TCR δγ, while CD4+, DP and TCR αβ were detected in amounts closely related to described reference ranges, which suggests that the DN and TCR δγ lymphocytes may be related to the immune response in symptomatic dogs. Altogether, these findings discard the hypothesis that the regional lymph nodes of the head may present a specific pattern of immune response related to the brain lesions in dogs with VL.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:40Z : No. of bitstreams: 1 000852682_20160620.pdf: 79700 bytes, checksum: 3cf603415213794e29627e720a92e128 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-06-20T12:14:14Z: 000852682_20160620.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-20T12:14:51Z : No. of bitstreams: 1 000852682.pdf: 1984663 bytes, checksum: 5c39404e9531f1892485e096eb8f1752 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A congelação e refrigeração são biotecnologias muito utilizadas na reprodução equina, entretanto um significativo número de garanhões possuem baixa qualidade seminal após a criopreservação. Diversos autores descreveram a importância da composição e lipídica das membranas espermáticas sobre a resistência à criopreservação. Desta forma, este estudo teve como objetivo analisar a relação do perfil lipídico das membranas espermáticas com a raça e a resistência espermática à congelação e refrigeração. No experimento 1 foram verificadas as diferenças do perfil de fosfolipídios das membranas espermáticas de garanhões das raças Mangalarga Marchador e Quarto de Milhaa e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 728,6; 741,5 e 744,5 nos Mangalarga Marchador. No experimento 2 foram avaliados os fosfolipídios das membranas espermáticas entre garanhões com espermatozoides sensíveis ou resistentes à danos decorrentes da congelação e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 703,5; 728,6; 781,5; 808,5 e 836,6 nos animais sensíveis à congelação. No experimento 3 comparou-se os fosfolipídios das membranas espermáticas dos garanhões com a resistencia à refrigeração e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 772,5 e 774,6 nos animais resistentes à refrigeração. No experimento 4 observou-se não serem os mesmo lipídios que conferem resistência espermática à congelação e à refrigeração. Como os resultados do presente estudo, pode-se concluir que existe diferença no perfil lipídico das membranas espermáticas entre animais Quarto de Milha e Mangalarga Marchado, entre animais sensíveis e resistentes à congelação, entre animais sensíveis e resistentes à refrigeração. Além disso não há relação do perfil lipídicos que confere resistência espermática à congelação e à refrigeração / The freezing and refrigeration are biotechnology very used in equine reprodution, although a significant number of stallion have low seminal quality after cryopreservation. Many authors described the importance of lipid composition of spermatic membrane in crypreservation resistance.The aim of this study is to analisy the lipid profile with MALDI-MS of plasmatic membrane of stallion sperm, checking its relation with breed and with spermatic resistance to freezing and refrigeration. Four experiments were done. The experiment 1 verified the diference of phospholipid spermatic membrane in stallions of Mangalarga Marchador and Quarter horse breeds, which was observed bigger relative abundance of ions m/z 728,6; 741,5 e 744,5 in Mangalarga Marchador. The experiment 2 evaluated the spermatic phospholipid membrane between stallions with weak and resistant to the damage of freezing and was observed bigger relative abundance of ions m/z 703,5; 728,6; 782,5; 808,5 and 836, 6 in the animals weaks to freezing. The experiment 3 compared the phospholipids of stallions spermatic membranes with sperm weaks or resistant to the damage of refrigeration and was observed bigger relative abundance of ions m/z 772,5 e 774,6 in animals resistants to refrigeration. The experiment 4 showed that not the same lipids offer spermatic resistance to freezing and refrigeration.The results of this study demonstrate tha there is a diference in lipid profile of spermatic membrane between Quarter Horse and Mangalarga Marchador breeds, between animals weak and resistant to freezing and between animals weak and resistant to refrigeration. Besides there is no relation of lipid profile that offer spermatic resistance to freezing and refrigeration / FAPESP: 2012/24843-4

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-17Bitstream added on 2014-06-13T20:41:33Z : No. of bitstreams: 1 coleta_fed_dr_jabo.pdf: 1516429 bytes, checksum: e84a2357867aa696823f7eb1c4532adc (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Considerando a importância da origem celular do linfoma e as alteragOes decorrentes da evolugäo desta neoplasia e aquelas ocorridas corn o emprego da quimioterapia, avaliaram-se 27 câes corn diagnOstico de linfoma, que foram submetidos indugäo da remiss5o, corn o protocolo de Madison-Wisconsin. No momento do diagnOstico e uma semana apOs cada uma das oito sessOes quimioterapicas, realizou-se hemograma e analise citomètrica das subpopulagOes linfocitarias CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD45+CD21+ no sangue periferico e, na medula Ossea as avaliagOes foram realizadas antes e apOs o tratamento. Observou-se um major nOmero de animais machos, das ragas Rottweiler e sem raga definida, de meia idade e grande porte, que apresentaram com major freqUéricia, linfoma multicêntrico em estadio Vb. Com relagäo a origem celular do linfoma, notou-se predominancian de linfoma B. No eritrograma, observou-se anemia normocitca normocrOmica na maioria dos animais durante todo o tratamento. No leucograma, notou-se em alguns animais, no momento do diagnOstico, a presenga de leucocitose por neutrofilia. Alem disso, houve uma consideravel deplegâo de linfOcitos no sangue circulante, assim como das subpopulagOes CD5+CD8+ e CD45+CD21+, durante todo o tratamento e, observou¬se tambem, com menor intensidade, uma deplegäo da subpopulagâo CD5+CD4+. Na medula Ossea observou-se deplegâo da subpopulagäo CD45+CD21+. Assim, a imunidade humoral e imunidade mediada por calulas ficam prejudicadas corn a evolugao do linfoma e corn o emprego da quimioterapia. / Considering the importance of the lymphoma cellular origin and the decurrent alterations of the evolution of this neoplasia and those occured ones with the chemotherapy, was evaluated 27 dogs with diagnosis of lymphoma. that they were submitted to the induction of remission, with the protocol of Madison-Wisconsin. At the moment of the diagnosis and one week after each one of the eight chemotherapic sessions, became fullfilled hemogram and citometric analysis of CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD45+CD21+ lymphocyte subpopulations in peripheral blood and, bone marrow evaluations were carried through before and after the treatment. Was observed a bigger number of male animals, Rottweiler breeder and without defined race, of half age and big tall, that had presented more frequently, multicentric lymphoma in Vb stage. With regard to the lymphoma cellular origin, the B cell lymphoma was noticed. In the eritrogram, was observed in the majority of the animals anemia normocitic normocromic during the treatment. In the leucogram, was noticed in some animals, at the moment of the diagnosis, the presence of leukocitosis with neutrofilia. Moreover, had a considerable depletion of lymphocytes in circulating blood, as well as of CD5+CD8+ e CD45+CD21+ subpopulations, during all the treatment and, it was also observed , with lesser intensity, a depletion of CD5+CD4+ subpopulation. In the bone marrow was observed depletion of CD45 +CD21+ subpopulation. Thus, the humoral immunity and immunity mediated for cells are harmed with the evolution of lymphoma and the use of chemotherapy.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-13Bitstream added on 2014-06-13T21:03:41Z : No. of bitstreams: 1 000738029.pdf: 1190698 bytes, checksum: 404f1d7a805177183b19eed97178743a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / hjkhjkhjk / CAPES: 2011/ / FAPESP: 12/00334-3

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-27Bitstream added on 2014-06-13T18:43:42Z : No. of bitstreams: 1 000736347.pdf: 3203619 bytes, checksum: 506aebfe2bd88bd5a1d7ee4e36e61e4b (MD5) / Foram realizadas caracterizações microbiológicas dos estafilococos coagulase-positivo - ECP (Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius e Staphylococcus hyicus), a pesquisa de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae e Escherichia coli pela multiplex-PCR, California Mastitis Test (CMT), a contagem de células somáticas (CCS) automática pelo Somacount 300® calibrado para o leite bovino e CCS microscópica padronizada por Prescott e Breed (1910) em amostras de leite de 257 cabras, 513 metades mamárias e 10 tanques de expansão, além da aplicação de questionário epidemiológico nas 10 propriedades estudadas do estado de São Paulo. A prevalência de mastite subclínica em nível de cabra pela lactocultura foi de 43,6% e de mastite clínica 5,84%. Das 178 metades mamárias positivas na lactocultura, os patógenos mais prevalentes foram: Estafilococos coagulase-negativo - ECN (70%), S. aureus (13,5%), S. intermedius (7,9%) e Enterobacteriaceae (4%). Nenhuma das amostras mostrou-se negativa ao CMT, sendo a distribuição dos escores nas metades mamárias: 1+ (42,69%), 2+ (29,63%) e 3+ (27,68%). As prevalências dos patógenos na multiplex-PCR das metades mamárias foram: S. aureus (9,7%), S. agalactiae (5,5%) e E. coli (16,6%) e nos tanques de expansão: S. aureus (60%), S. agalactiae (10%) e E. coli (40%). Os resultados encontrados indicam que o CMT apresenta baixa sensibilidade e especificidade nos escores 2+ e 3+ para o diagnóstico de mastite subclínica. O Somacount 300® calibrado para o leite bovino superestima em 2,1 vezes a CCS microscópica, sendo que ambas não apresentaram nenhum ponto de corte eficiente para maximização simultânea da sensibilidade e especificidade. A multiplex-PCR apresenta boa acurácia para detecção de S. areus, S. agalactiae e E. coli no leite caprino mastítico Houve algumas diferenças estatísticas significantes nas análises univariadas dos fatores de risco para mastite... / Microbiological characterizations of the coagulase-positive staphylococci - CPS (Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius and Staphylococcus hyicus), the research of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli by multiplex-PCR, California Mastits Test (CMT), the automatic somatic cell count (SCC) by Somacount 300® equipment calibrated for bovine milk and the microscopic SCC standardized by Prescott and Breed (1910) in milk samples from 257 goats, 513 half-udders and 10 bulk tanks were carried out beyond the application of the epidemiological questionnaire in 10 properties studied of São Paulo State. The prevalence of subclinical and clinical mastitis by microbiological culture was 43.6% and 5.84% respectively. 178 half-udders were positive by microbiological culture, and coagulase-negative staphylococci - CNS (70%), S. aureus (13.5%), S. intermedius (7.9%) e Enterobacteriaceae (4%) were the most prevalent pathogens. No sample was negative to CMT. The distribution of scores CMT in half-udders were: 1+ (42.69%), 2+ (29.63%) and 3+ (27.68%). The prevalence of pathogens in multiplex-PCR in half-udders were: S. aureus (9.7%), S. agalactiae (5.5%) and E. coli (16.6%) and in bulk tanks: S. aureus (60%), S. agalactiae (10%) and E. coli (40%). The results indicate that the CMT scores 2+ and 3+ showed low sensitivity and specificity for the diagnosis of subclinical mastitis. The Somacount 300® calibrated to bovine milk overestimated the microscopic SCC in 2.1 fold, being that both showed no efficient cut-off point for simultaneous maximization of the sensitivity and the specificity. The multiplex-PCR presented good accuracy for the detection of S. aureus, S. agalactiae and E. coli in the mastitic caprine milk. There were some significant differences in the univariate analysis of risk factors for subclinical mastitis, however, when the analysis was adjusted for property, the ...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-05Bitstream added on 2015-04-09T12:47:45Z : No. of bitstreams: 1 000814294_20150610.pdf: 154779 bytes, checksum: 51dd92acc01e4cdcca6fb139c344baff (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-12T11:19:03Z: 000814294_20150610.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-12T11:19:38Z : No. of bitstreams: 1 000814294.pdf: 481135 bytes, checksum: 6396c52973d54e22945046da7a3983f0 (MD5) / Em Medicina Veterinária o linfoma é uma neoplasia caracterizada por proliferação clonal de linfócitos malignos, sendo uma das mais comuns em cães. Há evidências que as Tregs inibem a função efetora contra tumores, resultando em disfunção de células T em humanos e cães com câncer. O aumento da expressão da enzima ciclooxigenase-2 (COX-2) pelas células do tumor e células inflamatórias locais, estimula o desenvolvimento das Tregs. Deste modo, o tratamento com inibidores de COX-2, como os anti-inflamatórios não esteroidais é mais uma estratégia para a supressão das Tregs. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar quantitativamente, por intermédio da citometria de fluxo, as Tregs em cães com linfoma, submetidos ao protocolo quimioterápico CHOP, associado ou não a um inibidor de COX-2 (Firocoxib). Foram utilizados 12 cães controles (hígidos), 12 cães com linfoma tratados com o protocolo CHOP e 12 cães com linfoma, tratados com o CHOP+Firocoxib. As Tregs formam avaliadas por citometria de fluxo, no momento do diagnóstico, após a indução da quimioterapia (5ª semana) e ao término do protocolo (20ª semana). Os resultados mostraram que os cães com linfoma apresentaram porcentagens maiores de Tregs (17,08±1,62) quando comparados ao grupo controle (5,67±1,62) (p<0,0001). Além disso, no grupo linfoma teve uma diminuição das porcentagens de Tregs ao final do protocolo quimioterápico, nos grupos tratados com o protocolo CHOP tradicional (GT1) (8,648±1,736) e no grupo tratado com CHOP associado a um firocoxib (GT2) (5,903±1,126) (p<0,0001). E que entre os grupos, GT1 (20,66±2,487) e GT2 (12,79±0,7673), apenas no momento do diagnóstico (M0), foi estatisticamente diferente (p<0,0114). Conclui-se que cães com linfoma multicêntrico possui um aumento das Tregs, e durante o protocolo quimioterápico, associado ou não a um firocoxib, essas células diminuem significativamente / In Veterinary Medicine lymphoma is a neoplasm characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes, one of the most common in dogs. There is evidence that Treg inhibit the effector function against tumors, resulting in T cell dysfunction in humans and dogs with cancer. Increased expression of cyclooxygenase-2 enzyme (COX-2) by tumor cells and local inflammatory cells, stimulates the development of Treg. Thus, treatment with COX-2 inhibitors such as nonsteroidal anti-inflammatory is a further strategy for the removal of Tregs. In this context, this work aimed to evaluate quantitatively, through flow cytometry, Tregs in dogs with lymphoma undergoing chemotherapy protocol CHOP, with or without a COX-2 inhibitor (Firocoxib). 12 dogs were used controls (healthy), 12 dogs with lymphoma treated with CHOP protocol and 12 dogs with lymphoma treated with CHOP + Firocoxib. Tregs form assessed by flow cytometry at diagnosis after induction chemotherapy (Week 5) and the protocol termination (20 weeks). The results showed that dogs with lymphoma had higher percentages of Tregs (17.08 ± 1.62) compared with the control group (5.67 ± 1.62) (p <0.0001). Moreover, in the lymphoma group had a decrease of Treg percentages at the end of chemotherapy protocol, the groups treated with the traditional CHOP protocol (GT1) (8.648 ± 1.736) and in the CHOP arm associated with a firocoxib (GT2) (5,903 ± 1.126) (p <0.0001). And that between the groups, GT1 (20.66 ± 2.487), and GT2 (12.79 ± 0.7673) only at the time of diagnosis (M0), was statistically different (p <0.0114). It was concluded that dogs with multicentric lymphoma has increased Tregs, and during the chemotherapy protocol, with or without a firocoxib, these cells decrease significantly

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:22Z : No. of bitstreams: 1 000829908_20160901.pdf: 53511 bytes, checksum: c4a534029afcd0c7fbcf17b554cea70b (MD5) Bitstreams deleted on 2016-09-01T14:08:39Z: 000829908_20160901.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-01T14:09:17Z : No. of bitstreams: 1 000829908.pdf: 1790690 bytes, checksum: 03ab0efe7f9d02d0ac648b9cdd412a18 (MD5) / O laser de baixa potência (LBP) é muito utilizado em diferentes ramos da medicina regenerativa e odontologia, onde é aplicado para melhorar o processo de cura e é benéfico em uma variedade de processos patológicos, no qual pode aumentar a taxa de proliferação de várias linhagens celulares. No entanto, poucos são os trabalhos que avaliaram os efeitos do LBP em células-tronco mesenquimais (CTM) caninas. Desta forma, os objetivos do presente trabalho são: caracterizar as células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (CTM-TA) e da medula óssea (CTM-MO) caninas, estudar o efeito do laser de baixa potência fosfeto de índio-gálio-alumínio nas densidades de 1,1 e 8,7 J/cm2 sobre o cultivo das mesmas quanto à proliferação e viabilidade celular, à imunogenicidade por meio da expressão do MHC-II e avaliar o cariótipo das células irradiadas e não irradiadas a fim de comprovar a ausência de alterações cromossômicas com a utilização do LBP. O estudo revelou que o LBP não alterou a viabilidade, proliferação celular, expressão de MHC-II e o cariótipo das amostras analisadas entre os grupos. Desta forma, pode-se concluir que o LBP não causa efeitos biológicos às CTM-TA e CTM-MO caninas nas dosagens utilizadas de 1,1 e 8,7 J/cm2. Portanto, outras dosagens devem ser investigadas para estimular a proliferação das CTM caninas sem causar alterações celulares deletérias / Low power laser (LPL) is widely used in different fields of regenerative medicine and dentistry, where it is used to improve the healing process and is beneficial in a variety of disease processes, which can increase the rate of proliferation of various cell lineages. However, there are few studies evaluating the effects of LPL on canine mesenchymal stem cells (MSC). Thus, the aims of this study are: to characterize canine mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (AT-MSC) and bone marrow (BM-MSC), to investigate the effect of low power laser aluminium gallium indium phosphide at densities of 1.1 and 8.7 J/cm2 on cellular viability and proliferation, immunogenicity by MHC-II expression and evaluate the karyotype of the irradiated and non-irradiated cells in order to identify the absence of chromosomal abnormalities with the use of LPL. The study revealed that LPL did not affect cell viability and proliferation, MHC-II expression and karyotype of the samples analyzed between groups. Thus, we can conclude that LPL cause no biological effects to canine AT-MSC and BM-MSC with the 1.1 and 8.7 J/cm2 dosages used. Therefore, other dosages to stimulate proliferation without causing deleterious cellular changes of canine MSC must be investigated

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:21Z : No. of bitstreams: 1 000831319.pdf: 1267209 bytes, checksum: c23ca8ee7c298aed36bdf625fb1e71a9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação, o que as tornam muito atrativas para a terapia celular, tanto na medicina humana como na medicina veterinária . Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. Atualmente há uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (CU) e sangue do cordão umbilical (SCU), podendo ser obtidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA, CU e SCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e em abatedouro. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e CU no momento do parto (n=6) e de MA e CU no terço inicial de gestação (n=6), bem como de SCU no terço médio de gestação em abatedouro (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológica, imunocitoquímica, imunofenotípica por citometria de fluxo e diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e criopreservação. Além disso, foram criopreservadas e analisadas por citometria de fluxo para observação da viabilidade celular. Todas as amostras dos diferentes períodos gestacionais demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para CD34 e baixa expressão de MHC II. Apresentaram também capacidade de diferenciação in vitro nas três linhagens mesodermais e quando analisadas ... / Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell type, in both human and veterinary field, is the mesenchymal stem cells (MSC). Nowadays, there is a great tendency to use stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM), extravascular matrix of umbilical cord (EMUC) and umbilical cord blood (UCB), which can be obtained non-invasively at delivery time. Thus, the aim of this study was to isolate, characterize and differentiate. MSC derived from bovine fetal annexes cow dairy neonates after assisted delivery and of fetus obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0,1% collagenase solution. Six samples of AM and EMUC at delivery time, six samples of AM and EMUC at first third of pregnancy and six samples of UCB at secondary third of pregnancy were subjected to morphology evaluation, immunocytochemistry, flow cytometry and in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation. Moreover, sample were cryopresrved and evaluated for viability by flow citometri. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, lacked CD 34 expression and showed low expression of MHC II. They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80-90% viability after cryopreservation. According to the results, AM, EMUC and UCB, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, are a painless and non-invasive source of MSC and can be used for stem cell bank creation

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:49Z : No. of bitstreams: 1 000836696.pdf: 2245540 bytes, checksum: 495fc221f47be948d5c924e8f591e746 (MD5) / O estudo de células tronco em cães corrobora com o progresso das terapias celulares, tanto veterinárias quanto humanas, uma vez que a espécie canina é um modelo de estudo para desenvolvimento de doenças humanas hereditárias e, também, adquiridas. As CT multipotentes derivadas de tecido são geralmente as mais utilizadas, sobretudo pela facilidade de obtenção por meio do próprio animal (autólogas) e por não envolverem questões éticas, as quais limitam o uso das células tronco embrionárias. Estudos recentes e promissores demonstraram a existência de CT no ovário, com grande capacidade de proliferação e possível capacidade pluripotente. Com base nessas evidências, este projeto propôs a obtenção de células tronco isoladas a partir do tecido ovariano de cães adultos, utilizando o tecido adiposo como controle. Para tanto, foram delineados três experimentos: o experimento I possuía o objetivo de verificar as características de crescimento e morfológicas. Então, foi realizado o isolamento de células provenientes do tecido ovariano e adiposo, após digestão em colagenase, Após 3h do inicio do cultivo, foi realizada a primeira troca de meio para seleção de células aderentes ao plástico. Após 72h de cultivo primário, o tecido adiposo possuía mais células por grama de tecido em relação ao ovariano (1937 ± 592,6 vs 1771 ± 262,1), ambas as células derivadas apresentaram morfologia fibroblástica. Em relação às análises de crescimento, o tempo de duplicação da população foi similar em ambos os tipos celulares. Tanto as células do tecido adiposo, como as do ovariano foram capazes de formar colônias, entretanto as do tecido adiposo mostraram uma maior capacidade de formar colônias que as células do tecido ovariano (37,08 ± 2,10 vs. 27,08 ± 1,45, p<0,05). O experimento II possuía o objetivo de realizar a caracterização molecular das células obtidas no experimento I. Tanto as células do... / Research with canine stem cells contributes to the progress of veterinary and human cellular therapies, because the dog is often the best animal model for many hereditary and acquired human diseases. While embryonic SC have unlimited differentiation potential (i.e. pluripotent), adult-derived multipotent SC are often preferred for ease of recovery from the patient itself (i.e. autologous) and for avoiding ethical constraints of destroying embryos to obtain pluripotent SC. Recent promising studies have shown the existence SC in ovarian tissue, that have greater proliferative and differentiation potential than SC in other adult tissues. Based on this evidence, the aim of this project was to obtain stem cells isolated from ovarian tissue of adult dogs. In experiment I, we evaluated morphological and kinetic properties of collagenase-digested ovarian and adipose derived SC. Adipose derived cells yielded more cells per tissue after 72h in culture (1937 ± 592.6 vs 1771 ± 262.1), both cells had the same fibroblastic morphology. The growth curve showed that adipose derived cells started the exponential growth before the ovarian derived cells, however when the both were multiplying, the population doubling time was the same. All the derived cells types were able to form colonies, however, adipose derived cells formed more colonies than ovarian derived cells (37.08 ± 2.10 vs. 27.08 ± 1.45). Experiment II aimed at characterizing at the molecular level the SC obtained in experiment I. We evaluated the expression of mesenchymal and pluripotent markers through immunofluorescence (flow cytometry and confocal microscopy) and PCR. Both cells from expressed CD90, CD44, CD194 and CD 105 by PCR, were positive for CD44, CD90 (only the adipose tissue) and negative for CD45 and CD34 by immunocytochemistry analysis. By flow cytometry, 37.08%+-11.35% of the population of cells derived from ovarian tissue was positive for CD90, while 62.05%+-8.40% of ...