Orientador: Osmir Batista de Oliveira Junior / Banca: Andréa Abi Rached Dantas / Banca: Sérgio Salvador / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar comparativamente o efeito do bochecho diário com solução de digluconato de clorexidina à 0,12% (TA - controle) em relação à solução de 0,03% de triclosan, 1% copolímero (Gantrez® ) e 0,05% de fluoreto de Sódio (TB - teste) em função da taxa de formação de placa dentária, retenção do antimicrobiano na placa dentária e saliva e redução de estreptococos do grupo mutans na saliva. Material e Método: Participaram deste estudo clínico randomizado, cruzado, com duplo cegamento e dois períodos de tratamento, 26 voluntários de ambos os gêneros e idade entre 18 e 30 anos (média de 24 anos), divididos em 2 grupo: G1(n=13) e G2 (n=13). Em cada período de tratamento os participantes realizaram 2 bochechos diários de 60 segundos cada, um ao se levantar e outro doze horas após, por sete dias. Resultado: A redução do índice de placa foi muito semelhante em ambos os grupos, já a análise por cromatografia líquida de alta eficiência não evidenciou traços dos antimicrobianos após 12 horas do uso dos enxaguatórios por 1 e 7 dias na placa dentária nem na saliva. A ação antimicrobiana evidenciou efeito estatisticamente significativo para tratamento (antes e após bochecho) com agente antimicrobiano (clorexidina e triclosan). A clorexidina foi mais eficaz que o triclosan (22,8% e 8,9% de redução, respectivamente). Conclusão: 1) Tanto o triclosan quanto a clorexidina, mostraram-se eficazes na redução da placa dentária dos voluntários. 2) Nenhum dos antimicrobianos permanecem na cavidade bucal após 12 horas do uso. 3) O uso de enxaguatórios bucais com clorexidina e triclosan, complementa o controle mecânico da placa dentária por sua eficaz ação antimicrobiana sobre os estreptococos do grupo mutans, reduzindo o risco de cárie dos pacientes. / Abstract: The aim of this study was to comparatively evaluate the effect of daily rinsing with a solution of chlorhexidine digluconate 0,12% (TA- control) with the solution 0,03% triclosan + 1% copolymer (Gantrez ® ) + sodium fluoride 0,05% (TB- test) according of the rate of dental plaque formation, retention of antimicrobial agent in dental plaque and saliva by high performance liquid chromatography and reduction on mutans streptococci in saliva .Material and Method: In this randomized clinical study, crossover, double blinding with two treatment periods, 26 volunteers of both genders with between 18-30 years ( average 24 years), was divide into 2 groups: G1 (n=13) and G2 (n=13). In each treatment period the volunteers realized two daily mouthwashes of 60 seconds each, the first to get up and other twelve hours later, for 7 days. Results: The reduction of rate of dental plaque formation was same in bouth groups; high performance liquid chromatography analysis wasn't show trace of antimicrobial after 12 hours use of mouthwashes by 1 or 7 days in dental plaque or in saliva .The antimicrobial action showed statistically significant effect for treatment (before and after rinsing) with antimicrobial agent (chlorhexidine x triclosan). The chlorexidine digluconate was more effective than triclosan (22,8% and 8,9 decrease, respectively). Conclusion: 1) As far as triclosan, chlorhexidine, were effective in reducing dental plaque volunteers. 2) None of the antimicrobial agents remain in the oral cavity after 12 hours of use. 3) The use of mouthwashes containing chlorhexidine and triclosan, complements the mechanical control of dental plaque for their effective antimicrobial action on mutans streptococci, reducing caries risk patients. / Mestre

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:55:48Z : No. of bitstreams: 1 000863710_20171126.pdf: 287037 bytes, checksum: a5b5af62641bd4ba3ab04a54bc1689a7 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-11-29T13:07:49Z: 000863710_20171126.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-11-29T13:08:39Z : No. of bitstreams: 1 000863710.pdf: 5230867 bytes, checksum: bfb60b8b830b90f845acafe6dab3dbe4 (MD5) / A biomassa constituída pelo bagaço da cana-de-açúcar é um subproduto do processo de produção do açúcar e do etanol. Novas aplicações para o bagaço têm sido desenvolvidas, dentre elas pode-se destacar a produção de biocombustíveis (etanol) de segunda geração. O processo para a produção de etanol de segunda geração a partir da biomassa da cana-de-açúcar envolve a otimização de forma integrada de diversas etapas: pré-tratamento, hidrólise e fermentação dos hidrolisados, para avaliar a eficiência destes processos é fundamental uma caracterização precisa dos açúcares da biomassa para sua conversão em etanol, diante disso foi desenvolvida a preparação e utilização do eletrodo de carbono vítreo modificado com nanotubos de carbono contendo óxi-hidróxido de níquel GCE/MWCNT/NiOOH para detecção e quantificação de açúcares em meio alcalino. Foram estudados as constantes de velocidade eletrocatalíticas dos açúcares no GCE/MWCNT/NiOOH, esses estudos são importantes para melhor compreensão dos processos eletródicos envolvidos no eletrodo GCE/MWCNT/NiOOH durante a eletro-oxidação dos açúcares para o desenvolvimento de métodos analíticos acoplados em HPLC. Foram desenvolvidos os métodos analíticos utilizando o HPLC com os eletrodos GCE/MWCNT/NiOOH e GCE/MWCNT/CoOO para quantificação dos açúcares em amostras de bagaço de cana de açúcar. O GCE/MWCNT/NiOOH apresentou limites de detecção de 2,5×10-6 mol L-1 para arabinose, 5,4×10-6 mol L-1 para galactose, 3,4×10-6 mol L-1 para glicose e 6,6×10-6 mol L-1 para xilose. Já o GCE/MWCNT/CoOO apresentou os seguintes limites de detecção: 3,4×10-6 mol L-1 para arabinose, 4,4×10-6 mol L-1 para galactose, 3,6×10-6 mol L-1 para glicose e a xilose foi de 5,0×10-6 mol L-1. Foi observado que ambos os eletrodos apresentaram limites de detecção semelhantes, outra característica foi que em ambos os métodos... / Biomass generated from the bagasse from sugarcane is a byproduct of the production process of sugar and ethanol. New applications for the bagasse have been developed among them we can highlight the production of biofuels (ethanol) of second generation. The processes for the production of second generation ethanol from biomass sugarcane involves optimizing an integrated manner in several steps: pre-treatment, hydrolysis and fermentation of the hydrolyzed products, to evaluate the efficiency of these procedures is fundamental a precise characterization of biomass sugars for conversion into ethanol, therefore it was developed the preparation and use of the glassy carbon electrode modified with carbon nanotubes containing nickel oxide-hydroxide GCE/MWCNT/NiOOH for detection and quantification of sugars in alkaline médium. It was studied electrocatalytic constant rate of sugars in GCE/MWCNT/NiOOH. These studies are important to better understand the electrodic processes involved in the GCE/MWCNT/NiOOH during the electro-oxidation of sugars to the development of analytical methods for HPLC. Analytical methods were developed using HPLC with electrodes GCE/MWCNT/NiOOH and GCE/MWCNT/CoOO for quantification of sugars in sugarcane bagasse samples. The GCE/MWCNT/NiOOH presented a detection limit 2.5×10-6 mol L-1 for arabinose, 5.4×10-6 mol L-1 for galactose, 3.4×10-6 mol L-1 for glucose and 6.6×10-6 mol L-1 for xylose. The GCE/MWCNT/CoOO showed the following detection limits: 3.4×10-6 mol L-1 for arabinose, 4.4×10-6 mol L-1 for galactose, 3.6×10-6 mol L-1 for glucose and 5.0×10-6 mol L-1 for xylose. It was observed that both electrodes exhibit similar detection limits, another feature was that in both methods were adequate in determining the sugars present in the sugarcane bagasse samples, on GCE/MWCNT/NiOOH was determined 5.9 ×10-4 mol L-1 arabinose 1.0×10-2 mol L-1 glucose and 2.8 10-3 mol L-1...

Resumo: Este trabalho teve como objetivos monitorar a quantidade de resíduo existente em frutos de laranjeira 'Valência' dos fungicidas oxicloreto de cobre, tiofanato metílico e pyraclostrobin, como também determinar a capacidade protetora e fungistática (oxicloreto de cobre) e a capacidade preventiva e curativa (tiofanato metílico e pyraclostrobin) no controle da mancha preta dos frutos cítricos (MPC). No primeiro experimento, aproximadamente 1000 frutos, previamente ensacados, foram primeiramente imersos nas caldas fungicidas e posteriormente inoculados com conídios de Guignardia citricarpa em intervalos regulares de 1, 7, 14, 21, 28 e 35 dias após a aplicação do fungicida, para o oxicloreto de cobre e de 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 dias após a aplicação do fungicida, para o tiofanato metílico e pyraclostrobin. No segundo experimento, aproximadamente 1000 frutos, previamente ensacados, foram primeiramente inoculados e posteriormente tratados por imersão com os respectivos fungicidas nos mesmos intervalos regulares. Foram utilizados 16 frutos por período de inoculações e oito frutos por período de aplicação do fungicida. Para o primeiro experimento, oito frutos foram utilizados para a realização das análises de resíduo e outros oito frutos deixados na planta até a época da colheita. Para o segundo experimento, somente avaliou-se a incidência da doença e severidade na colheita. As análises de resíduos foram realizadas por técnicas de Espectrofotometria de Absorção Atômica na superfície dos frutos, para o oxicloreto de cobre e de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada ao detector de massas/massas (CLAE - EM/EM) na superfície e casca dos frutos, para o tiofanato metílico e na superfície, casca e polpa dos frutos para o pyraclostrobin. Na época da colheita, os frutos foram avaliados quanto à incidência, severidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objectives of this study were: (i) measure the amount of residues of copper oxychloride, methyl thiophanate and pyraclostrobin in 'Valencia' sweet orange fruits after their application; (ii) to evaluate the protective and fungistatic capacity of copper oxychloride and (iii) to evaluate the preventive and curative capacity of systemic fungicides methyl thiophanate and pyraclostrobin for the control of citrus black spot (CBS). Two experiments were carried out, in the first on 1.000 fruits were first immersed in the fungicides and then inoculated with conidia of Guignardia citricarpa at regular intervals of 1, 7, 14, 21, 28 and 35 days, for the copper oxychloride and 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 and 56 days for methyl thiophanate and pyraclostrobin. In the second experiment, on 1.000 fruits were first inoculated with conidia of G. citricarpa and then treated by immersion with the fungicides in the same regular intervals as described. Sixteen fruits were used for each period of inoculations and eight fruits per application. For the first experiment, eight fruits were used for analysis of residues and eight fruits were left in the plant until harvesting to evaluate disease incidence and severity. For the second experiment it was evaluate only disease incidence and severity in the harvest. Analysis of residues were performed by Atomic Absorption Spectrometry on the fruits surface, for copper oxychloride and High Performance Liquid Chromatography coupled to the detector mass/mass (HPLC - MS / MS) on the fruits surface and peel for the methyl thiophanate, and on the fruits surface, peel and pulp for the fungicide pyraclostrobin. Under conditions of high inoculum pressure, copper oxychloride showed limited protective capacity and no fungistatic capacity. Residues found on the fruits surface were directly related to the fruits growth. Methyl thiophanate was converted on its metabolite... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Antonio de Goes / Coorientador: Marcel Bellato Spósito / Banca: Joaquim Gonçalves Machado Neto / Banca: Nelson Sidnei Massola Junior / Mestre

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Co-orientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Mario Sergio Palma / Banca: Luce Maria Brandão Torres / Banca: Norberto Peporine Lopes / Resumo: O presente trabalho tem como objetivo a busca de compostos, que inibem in vitro a enzima acetilcolinesterase (AChE), úteis para o tratamento de doenças neuro-degenerativas crônicas como o mal de Alzheimer. Neste contexto, a espécie Tetrapterys mucronata Cav. (Malpighiaceae) foi selecionada no banco de extratos do NuBBE, devido ao resultado positivo para a inibição in vitro da AChE. Na literatura, esta espécie também é relatada como uma das espécies usadas em menor escala na preparação da bebida Ayahuasca. Dessa forma, foi realizada a análise fitoquímica dos extratos EtOH e aquoso de T. mucronata. Após obtenção do perfil químico dos referidos extratos através da técnica CLAE-DAD, observou-se a presença de taninos, substâncias que interferem nas análises cromatográficas de identificação e isolamento dos demais constituintes do extrato. Para remoção destes interferentes, foram utilizadas as técnicas de extração líquido-líquido e extração em fase sólida (SPE) com poliamida como fase estacionária. A fração obtida livre de taninos (P6) foi analisada pelas técnicas CLAE-DAD-EM e UPLC-TOF-EM, a fim de identificar os constituintes químicos presentes nesta fração previamente descritos na literatura para a família Malpighiaceae. Esta metodologia permitiu a identificação do flavonol catequina. Como não foi possível identificar os demais constituíntes da fração P6, esta foi submetida a purificação em larga escala, utilizando a técnica de MPLC-UV. As frações obtidas por este procedimento foram analisadas por técnicas espectrométricas e como resultado foi possível identificar e caracterizar 17 compostos destes, 5 novos produtos naturais: dois alcaloides, 5'-hidroxi-3'-etilamina-2'-[3-(3-(1H-indol-3-il)1,2-propanodiol]triptamina (6) e 5'-hidroxi-3'-etil-N,N-dimetilamina-2'-[3-(3-(1H-indol-3-il)1,2-propanodiol]triptamina (7) e três derivados de fenantreno 2,6-diidroxi-9,10-diidrofenantreno (13)... / Abstract: The present work aims at seeking compounds that inhibit in vitro the enzyme acetylcholinesterase (AChE), and might be useful for the treatment of chronic neuro-degenerative diseases such as Alzheimer's. In this context the species Tetrapterys mucronata Cav. (Malpighiaceae) was selected from NuBBE's bench of extract to be the focus of this work, due to the positive result for the in vitro inhibition of AChE conducted prior to this study. In the literature this species is also reported as a species used a lesser extent in the preparation of Ayahuasca. Thus, it was performed the phytochemical analysis of EtOH and aqueous extracts of T. mucronata. After analysis by HPLC-DAD of these extracts, was observed the presence of polymeric compunds (tannins). Liquid-Liquid Extraction (LLE) and Solid Phase Extraction (SPE) using polyamide as stationary phase were used to remove these interferents. The tanin free fraction (P6) was analyzed by HPLC-DAD-MS and UPLC-TOF-MS techniques in order to identified chemical constituents present in this fraction which had been previosly described in other species of Malpighiaceae family. This methodology led to the identification of catechin. As almost all the compounds present in the fraction could not be identified by the hyphenated techniques mentioned above, the P6 fraction was subjected to large-scale purification steps using MPLC-UV. The fractions obtained by this procedure were analyzed and as results were thus idintified 17 compounds, 5 of them new natural products: two alkaloids, 3-(3-(2-aminoethyl)-5-hydroxy-1H-indol-2-yl)-3-(1H-indol-3-yl)propane-1,2-diol (6) and 3-(3-(2-N,N-dimethyl-aminoethyl)-5-hydroxy-1H-indol-2-yl)-3-(1H-indol-3-yl)propane-1,2-diol (7); three phenanthrene derivatives 2,6-dihydroxy-9,10-dihydrofenanthrene (13), 2,6-dihydroxifenantrene (14) and 7-methyl-2,6-dihydroxifenantrene (17). 12 compounds were described for the first time in Malpighiaceae family: three tryptamine alkaloids... / Doutor

Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Maysa Furlan / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Resumo: As espécies da família Eriocaulaceae apresentam estudos químicos na literatura que descrevem a presença de substâncias com potencial biológico, com destaque para a planifolina em Paepalanthus planifolius. Apesar disso, existem poucos dados sobre a química dos microrganismos associados a essas espécies, como fungos endofíticos. Para esse estudo, selecionamos o fungo endofítico Microsphaeropsis arundinis, isolado dos capítulos de P. planifolius. O endófito foi cultivado em meios de cultivo líquido (Caldo Batata Dextrose, Caldo YM, Extrato de Malte, Caldo Nutrient e Caldo Czapek-Dox) e sólido (arroz parboilizado e milho canjica) e os extratos acetato de etila obtidos foram analisados quimicamente quanto a seu perfil cromatográfico por HPLC-PDA e biologicamente a partir da atividade antitumoral contra linhagens de câncer de mama e de câncer de pulmão. O extrato acetato de etila cultivado em arroz parboilizado demonstrou-se o mais ativo frente as linhagens de adenocarcinoma de mama murino (IC50 = 39,91 μg mL-1) e adenocarcinoma de mama humano (IC50 = 51,93 μg mL-1), sendo cultivado em escala ampliada e estudado fitoquimicamente buscando-se o isolamento das substâncias produzidas. A utilização de técnicas espectroscópicas e espectrométricas permitiu a identificação de oito substâncias, sendo as substâncias 1, 2, 3 e 7 inéditas na literatura e a substância 5 descrita pela primeira vez como produto natural. Uma análise biossintética mostra que as substâncias são provenientes da via d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Species of Eriocaulaceae family showed some chemical studies that describe the presence of compounds with biological potential, such as planifolin in Paepalanthus planifolius . Despite these compounds, there are few data about the chemistry of the microorganisms associated with these species, such as endophytic fungi. For this study, we selected the endophytic fungus Microsphaeropsis arundinis, isolated from P. planifolius capitula. The endophyte was cu ltivate in liquid culture media (Potato Dextrose Broth, YM Broth, Malt Extract, Nutrient Broth and Czapek - Dox Broth) and solid culture media ( parboiled rice and corn) and the ethyl acetate extracts were chemically analyzed by HPLC - PDA and biologically eval uated against adenocarcinoma cell lines using MTT assay. The ethyl acetate extrac t cultivated in parboiled rice was the most active one against murine breast adenocarcinoma (IC 50 = 39,91 μg mL - 1 ) and human breast adenocarcinoma (IC 50 = 51,93 μg mL - 1 ), being select to cultivated on an enlarged scale and fractionated result in the isolation of major compounds . The use of spectroscopic and spectrometric techniques result in the ide ntification of eight compounds, with 1 ( 2Z, 5E ) - 4,7,9 - trihydroxy - 2,5 - decadienoic acid) 2 ( ( 2Z, 5E ) - 4 - acetoxy - 7,9 - dihydroxydeca - 2,5 - dienoic acid ), 3 ( ( 2Z,5E ) - 7 - acetoxy - 4,9 - dihydroxydeca - 2,5 - dienoic acid) and 7 ( 1 - (2,5 - dihydroxypheny l) - 3' - oxobutan - 2' ' - yl acetate) unpublished in ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Juvenal Henrique Veloso (fito_henrique@hotmail.com) on 2018-07-31T17:07:14Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Juvenal Henrique Veloso.pdf: 2934629 bytes, checksum: f047e5c9e6be3d80e08eafd6be7bda09 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2018-08-02T18:00:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 veloso_jh_me_araiq_int.pdf: 2944938 bytes, checksum: 362f5d701582ba5706b196620d6c8540 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-02T18:00:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 veloso_jh_me_araiq_int.pdf: 2944938 bytes, checksum: 362f5d701582ba5706b196620d6c8540 (MD5) Previous issue date: 2018-07-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As espécies Byrsonima intermedia (“murici-mirim”) e Terminalia catappa (“castanholas”) apresentam comprovadamente atividades antimicrobiana, anti-inflamatória, antiulcerogênica, analgésica e cicatrizante e possuem em sua composição taninos, flavonóides e ácidos fenólicos. Essas espécies são potenciais candidatas para a produção de fitoterápicos e dessa forma são necessárias metodologias de análise que identifiquem a constituição química dessas espécies, como impressões digitais (fingerprintings), para comprovação da identidade e controle de qualidade utilizando, por exemplo, a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Apesar da importância atribuída a essa técnica, grandes volumes de solventes tóxicos são gerados por ano, como a acetonitrila (MeCN) e metanol (MeOH), aumentando os custos de tratamento desses resíduos além da sua manipulação poder ocasionar danos à saúde dos analistas. Uma alterativa eficiente de reduzir esses impactos é a aplicação dos conceitos da Química Verde (QV). Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi substituir o MeOH por etanol (EtOH) em análises por CLAE-DAD para a obtenção de fingerprintings de extratos hidroalcoólicos das folhas de B. Intermedia e T. catappa, utilizando uma abordagem multiparamétrica, aplicando os conceitos da QV. Para isso foi empregada a quimiometria nas análises por CLAE-DAD, utilizando Planejamento Fatorial Fracionário e Planejamento do Composto Central. Após a otimização do modelo foram identificadas as substâncias majoritárias de ambas as espécies por comparação dos espectros UV e tempo de retenção com padrões autênticos. Este trabalho demonstrou que foi possível a substituição da MeOH por EtOH sem necessidade de modificações no equipamento, apenas alterando o solvente a partir de condições otimizadas, visando o melhor desempenho e menor impacto ambiental do método. Os métodos verdes desenvolvidos foram comparados com os métodos da literatura pela métrica HPLC-EAT a fim de avaliar o impacto ambiental gerado e quanto maior o score obtido pela métrica, mais poluente é o método. Os métodos desenvolvidos obtiveram score entre 27 e 30, enquanto que os métodos da literatura obtiveram score entre 47 e 50. Além de apresentar menor impacto ambiental, a utilização do EtOH em análises de matrizes complexas, demonstrou seletividade semelhante ou superior à do MeOH, permitindo a identificação dos constituintes presentes nos extratos, sendo então uma opção menos tóxica e sustentável. / The species Byrsonima intermedia ("murici-mirim") and Terminalia catappa ("castanets") have shown antimicrobial, anti-inflammatory, antiulcerogenic, analgesic and cicatrizant activities and have tannins, flavonoids and phenolic acids in their composition. These species are potential candidates for the production of phytotherapics, and therefore, analytical methodologies are needed to identify the chemical constitution of these species, such as fingerprintings, for proving identity and quality control using, for example, High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Despite the importance attached to this technique, large volumes of solvents are generated per year, such as the toxic solvent, acetonitrile, increasing the costs of treatment of the waste generated and its handling can cause damages to health and the environment, and an efficient way to reduce these impacts is the application of the concepts of Green Chemistry. Despite the importance attached to this technique, large volumes of toxic solvents are generated per year, such as acetonitrile (MeCN) and methanol (MeOH), increasing the costs of treatment of these wastes and their manipulation may cause damage to the health of analysts. An efficient alteration to reduce these impacts is the application of the concepts of Green Chemistry (GC). In this context, the objective of this work was to replace the MeOH by ethanol (EtOH) in CLAE-DAD analyzes to obtain fingerprintings of hydroalcoholic extracts from the leaves of B. intermedia and T. catappa, using a multiparametric approach, applying the concepts of GC. For this, the chemometry was used in the analyzes by HPLC-DAD, using Fractional Factorial Design and Central Compound Design. After the optimization of the model the major substances of both species were identified by comparison of UV spectra and retention time with authentic standards. This work demonstrated that it was possible to replace the MeOH with EtOH without modifications in the equipment, only changing the solvent from optimized conditions, aiming at the best performance and lower environmental impact of the method. The methods developed obtained a score between 27 and 30, whereas the literature methods obtained a score between 47 and 50. In addition to having a lower environmental impact, the use of EtOH in complex matrix analyzes showed similar or higher selectivity than MeOH, allowing the identification of the constituents present in the extracts, being a less toxic and sustainable option. / CNPq: 163395/2017-9 / FAPESP: 2016/08179-8

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-30 / Procuramos neste projeto de tese de Doutorado, manter a estratégia de anos, relacionado com o objetivo duplo de aquisição de autonomia na síntese de alguns tipos de materiais poliméricos e ao mesmo tempo, de aprimoramento da metodologia da síntese peptídica nestes suportes sólidos. Dentre os sub-tópicos ainda não desenvolvidos, a tecnologia da síntese de copolímeros de partida para a obtenção de derivados e posterior emprego em síntese de peptídeos e outras aplicações foi escolhida como item principal desta tese. Copolímeros com base em estruturas de poliestireno mas, alterando-se os grupos responsáveis pelo intercruzamento da matriz polimérica [divinilbenzeno (DVB), diacrilato de tetraetilenoglicol (TEG) ou diacrilato de 1,6-hexanodiol (HD)], foram estudados quanto à sua parte sintética e de algumas propriedades estruturais e físico-químicas. Fixando-se uma determinada condição de polimerização, obtiveram-se diversos lotes de copolímeros denominados respectivamente de DVB, TEG e HD, variando-se o grau de intercruzamento ou a condição de síntese (sem solvente, com tolueno, n-heptano ou a mistura 1:1 de ambos). Grãos dos copolímeros observados por microscopia, indicaram a obtenção de tamanhos na faixa de 125 a 600 μm e com variadas porcentagens de estruturas rompidas. Dos três, o TEG se mostrou no geral, o mais frágil, principalmente quando sintetizado em n-heptano, com ausência quase total de grãos íntegros em diferentes situações sintéticas. Por outro lado, o DVB e o HD apresentaram resultados sintéticos razoavelmente equivalentes, embora grãos maiores (de 600 μm) tenham surgido mais durante a síntese do primeiro em tolueno. Não se observou uma clara influência do grau de intercruzamento no tamanho ou integridade dos grãos das resinas obtidas. Mas no geral, grãos menores foram observados mais em copolímeros com teor de intercruzamento maiores. Alterações específicas em algumas condições de polimerização deverão ser futuramente testadas para um conhecimento mais claro das regras que governam a obtenção de copolímeros com diferentes tamanhos ou integridade de sua estrutura. A fase seguinte desta tese envolveu a síntese, estudos de alguns derivados destes copolímeros e suas aplicações biológicas. A partir do DVB de 2% de intercruzamento, obtiveram-se quatro lotes de benzidrilamino-resina (BAR), após inserção de grupamentos XIV fenilmetilamínicos. Estes quatro lotes apenas se distinguiram quanto ao tipo de solvente eluente utilizado para a obtenção dos copolímeros correspondentes. Surpreendentemente, apenas o lote de BAR proveniente do DVB sintetizado com a mistura 1:1 de tolueno e nheptano apresentou um ótimo rendimento da síntese de um octapeptídeo-modelo (cerca de 90%). Ainda do DVB, um derivado contendo grupamento sulfônico também foi obtido e ensaios iniciais de matriz como trocadora catiônica em cromatografia em coluna foram efetuados. A partir de um dos lotes de BAR anteriormente obtido, assimilamos também a técnica de introdução do grupamento polietilenoglicol (50 e 70% de acoplamento dos grupos amínicos da resina). Avaliação do grau de solvatação, efetuada por microscopia dos grãos, indicaram alterações significativas, com mudança do perfil de inchamento, de solventes mais apolares para polares, em função da inserção de grandes quantidades destes grupos polihidroxilados na estrutura da resina. Quanto aos copolímeros de TEG e HD, também foram alterados quimicamente em protocolos que introduziam inicialmente, grupamentos clorometílicos e posteriormente, aminometílicos. As respectivas resinas derivadas (ATEG e AHD) também foram, comparativamente à BAR, avaliadas em termos de grau de solvatação de suas matrizes, dependente do sistema de solvente empregado. Esta investigação foi efetuada, via acoplamento de uma marcador paramagnético do tipo aminoácido (9- fluorenilmetiloxicarbonil-2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxil-4-amino-4-carboxílico ou abreviadamente, Fmoc-TOAC) nos sítios amínicos destas resinas. Posterior investigação, via ressonância paramagnética eletrônica (RPE), indicaram uma diferenciação da ATEG em relação às outras resinas. Esta resina apresentou ótima solvatação (maior mobilidade de sua estrutura polimérica) tanto em solvente apolar (DCM) quanto nos polares (DMF e DMSO). Como aplicação prática destas duas resinas, o octapeptídeo modelo testado com os quatro lotes de BAR também foi sintetizado em ambas e o rendimento do material bruto obtido ficou ao redor de 70%. Em suma, o escopo deste projeto objetivando a aquisição da tecnologia de síntese de copolímeros e alguns de seus derivados foi o de aumentarmos o grau de autonomia de nosso grupo neste campo, evitando-se a importação dos mesmos. Por outro lado, fica em aberto a possibilidade de diferentes tipos de estudos físico-químicos e de aplicações tecnológicas dos mesmos, não somente restrito à síntese de peptídeos mas de XV outras moléculas de interesse biológico e também com inserções no campo da cromatografia em coluna. Um tópico final, aparentemente dissociado dos demais mas ainda relacionado com o uso alternativo de derivados poliméricos, envolveu a aplicação da resina comercial de troca aniônica DEAE-Macroprep (BioRad Co.). Baseado em estudos prévios de nosso grupo, esta resina de uso cromatográfico foi empregada para a síntese de um pentadecapeptídeo e o derivado obtido (peptidil-DEAE-Macroprep) foi posteriormente utilizado para a purificação de heparinas e outros glicosaminoglicanos, através da cromatografia de afinidade. Os dados iniciais desta estratégia cromatográfica diferenciada e inovadora, mostraram-se promissores para a separação deste tipo de macromoléculas complexas, ainda não totalmente estabelecido na literatura. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-08T12:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 7.pdf: 817573 bytes, checksum: a128b8a4e1e43d37a95128847a6aba9b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A expressão da incerteza de medição é uma indicação quantitativa da qualidade de um resultado, demonstrando a precisão que o acompanha e acrescentando mais confiabilidade ao mesmo. Em função da CLAE ser um método amplamente utilizado no controle da qualidade de medicamentos, este projeto teve por objetivo o desenvolvimento de um instrumento metodológico para cálculo de incerteza de medição em resultados analíticos obtidos por tal metodologia. Para o desenvolvimento do projeto foi então escolhido o ensaio analítico farmacopeico para quantificação do teor de ofloxacino, um antimicrobiano usado no tratamento da tuberculose mutirresistente, doença que se apresenta como um grave problema de saúde pública em nível mundial. A elaboração do diagrama de causa e efeito demonstrou ser uma ferramenta essencial no delineamento das fontes que influenciam a incerteza. Por outro lado a elaboração de tabelas, identificando os tipos de incertezas advindas de cada fonte, foi fundamental para permitir a construção das planilhas para cálculo da incerteza padronizada e do grau de liberdade efetivo associados ao resultado, bem como do fator de abrangência e da respectiva incerteza expandida. A demonstração passo a passo da execução dos cálculos foi essencial para a compreensão destes. Com os resultados obtidos foi possível concluir que as principais contribuições para a incerteza padrão combinada do resultado analítico do teor de Ofloxacino foram a incerteza do padrão analítico, a incerteza oriunda da amostragem do lote e as incertezas de massa. O resultado obtido para o lote analisado de LFM-Ofloxacino 400 mg mostrou-se satisfatório em relação ao teor do fármaco, de acordo com a especificação farmacopeica. / The expression of uncertainty in measurement is a quantitative indication of the quality of the result, demonstrating its precision and adding more reliability to itself. In view of HPLC is a method widely used in quality control of medicines, this project aimed to the development of a methodological tool for calculating measurement uncertainty in analytical results obtained by this method. For the development of the project was chosen the analytical essay pharmacopeic to quantify the content of ofloxacin, an antimicrobial used to treat mutirresistent tuberculosis disease that presents itself as a serious worldwide public health problem. The development of the cause and effect diagram shown to be an essential tool in delineating the sources that influence the uncertainty that accompanies the analytical test result. Moreover the preparation of tables, identifying the types of uncertainty arising from each source was essential to allow the construction of spreadsheets to calculate the standard uncertainty and effective degrees of freedom associated with the test result as well as the coverage factor and the respective expanded uncertainty. The demonstration step by step implementation of the calculations was essential for understanding these. With these results we concluded that the main contribution to the combined standard uncertainty of the analytical result of the content of ofloxacin were of reference standard uncertainty, uncertainty arising from sampling and uncertainties batch of dough. The result obtained for the batch analyzed LFM-ofloxacin 400 mg was satisfactory with the contents of the drug, according to pharmacopoeial specification. This study concluded that the calculation of the expanded uncertainty interval provides knowledge about the result which covers an extensive fraction probability distribution, characterized by that result and its combined standard uncertainty, making the results more completely, allowing those who use to assess their reliability and its compliance assessment for decision making to the product analyzed.

ARAÚJO, S. A. M. Desenvolvimento e validação de um método analítico (SPE–HPLC) para determinação de compostos emergentes em águas superficiais. 2014. 169 f. Tese (Doutorado em Engenharia Civil: Saneamento Ambiental) – Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2015-04-07T16:49:53Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_samaraujo.pdf: 4364536 bytes, checksum: 96ce6581a6cf5d37e03df3d99419c4d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa(mmarlene@ufc.br) on 2015-04-16T10:26:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_samaraujo.pdf: 4364536 bytes, checksum: 96ce6581a6cf5d37e03df3d99419c4d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-16T10:26:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_samaraujo.pdf: 4364536 bytes, checksum: 96ce6581a6cf5d37e03df3d99419c4d5 (MD5) Previous issue date: 2014-01-30 / Emerging organic pollutants (EOP), or Emerging Contaminants, is a term that is used to refer any chemical compound insert in variety of comercial products such as medicines, veterinary products, food packaging, pesticides, or any microorganism. The EOP can be found in environmental and ecological arrays not usually monitore or government unregulated, and poses risks to human health na environment. The methodological approach of this thesis included a developed and validated method to determine caffeine, ciprofloxacin, 17β-estradiol, 17α-ethinylestradiol and diethylstilbestrol, considered endocrine disruptors. The method uses a Solid-Phase Extraction (SPE) and high performance liquid cromatography coupled to a diode array detector. Chromatografic conditions were established by gradiente elution using acetonitrile and ultrapure water (pH = 2). The experimental design performed by SPE showed that better responses are achieved when it is used the cartridge C18, 500 mL sample volume, pH 3,0 and 2,0 mL 100% methanol elution volume. The method validation parameters indicated satisfatory selectivity, sensitivity, linearity, precision, accuracy and robustness. Detection limits (DL) ranged from 0,283 to 1,543 μg/L (ppb) and quantification limits (QL) ranged from 0,944 e 5,142 μg/L (ppb). A new quality control strategy using surrogate standard was proposed, and a relation factors (RF) was established to correct of concentrations of compounds of interest in real samples. The validated method was applied to the analysis of surface waters reservoirs from water supply system in metropolitan region of Fortaleza. The compounds 17β-estradiol, 17α-ethynyl estradiol was detected in a maximum concentration of 989 to 980 ng / L, respectively. / Poluentes orgânicos emergentes (POEs) ou simplesmente contaminantes emergentes referem-se a qualquer composto químico presente numa variedade de produtos comerciais como medicamentos, produtos de uso veterinário, embalagens de alimentos, produtos de higiene, agrotóxicos, ou alguns microrganismo. Os POEs podem ser encontrados em matrizes ambientais e biológicas, não são usualmente monitorados ou ainda não possuem legislação regulatória correspondente, e apresentam risco potencial à saúde humana e ao meio ambiente. Neste trabalho, foi desenvolvido e validado um método para a determinação de cafeína, ciprofloxacina, 17β-estradiol, 17α-etinilestradiol e dietilestilbestrol, considerados interferentes endócrinos. O método desenvolvido utilizou extração em fase sólida (SPE) e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a um detector de arranjo de diodos. Foram estabelecidas condições cromatográficas com eluição por gradiente utilizando acetonitrila e água ultrapura pH 2,0. O planejamento fatorial realizado por SPE indicou que melhores respostas são alcançadas quando utiliza-se o cartucho C18, 500 mL de volume de amostra, pH 3,0 e volume de eluição igual a 2,0 mL de metanol 100%. As figuras de mérito de validação do método indicaram seletividade, sensibilidade, linearidade, precisão, exatidão e robustez satisfatórias para a maioria dos compostos estudados. Os limites de detecção (LD) variaram entre 0,283 e 1,543 μg/L (ppb) e os limites de quantificação (LQ) variaram entre 0,944 e 5,142 μg/L (ppb). Foi proposta uma nova estratégia de controle de qualidade utilizando padrão surrogate, e estabelecido um fator de relação (FR) a fim de corrigir as concentrações dos compostos de interesse em amostras reais. O método validado foi aplicado nas análises de água superficial dos açudes que fazem parte do abastecimento de água da Região Metropolitana de Fortaleza/CE. Os compostos 17β-estradiol, 17α-etinilestradiol foram detectados numa concentração máxima de 989 e 980 ng/L, respectivamente.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Oxidative stress may be initiated by a decline in the antioxidant defence system or by an overproduction of free radicals leading to an imbalance between oxidants and antioxidants. The most significant alteration in the antioxidant defence is a decrease in reduced glutathione (GSH) concentration. GSH depletion is linked to a number of disease states; including cancer, neurodegenerative and cardiovascular diseases. GSH is the main nonprotein thiol involved in the antioxidant cellular defence against xenobiotics and naturally occurring deleterious compounds, such as free radicals and hydroperoxides. GSH not only protects cell membranes from oxidative damage, but also helps to maintain the sulphydryl groups of many proteins in the reduced form, a requeriment for their normal function. Free radicals induce lipid peroxidation that plays important roles in the pathological process of many diseases such cardiovascular diseases. Given the role of GSH in the protection against oxidative stress and detoxification of xenobiotics, its availability in the reduced form may be a key factor in the maintenance of health. Therefore, its determination in human erythrocytes is necessary. Metodologies for measuring GSH in human biological samples and their feasibility as routine methods in the clinical chemistry laboratory are important. The high-performance liquid chromatography (HPLC) became recently the method of choice for measuring GSH, because it is rapid, highly specific, sensitive and reproducible. Recent reports describe the use of HPLC with fluorescence detection of derivatives or electrochemical detection of the sulphydryl groups, however these detectores are not as widely available as ultraviolet-visible models. For the HPLC analysis of blood samples, the removal of proteins is the most important cleanup step. In this study, a method was optimized and validated to determine the human erythrocyte GSH by HPLC, gradient elution, with ultraviolet detection, wavelength 330 nm. The separation was performed on a C18 column integrated with guard-column, at 39°C. Pre-column derivatization was performed with 5, 5´-dithio-bis (2-nitrobenzoic) acid (DTNB), Ellman´s reagent. The erythrocytes were separed, hemolized and deproteinized with 15% trichloroacetic acid before the derivatization. The analytical parameters were evaluated: linearity, selectivity, precision, accuracy, limit of detection, limit of quantification, robustness, recovery and stability. The optimized method was applied in healthy human (control group) and patients receiving hemodialysis treatment. The assay was linear from 0.5 to 3.0 mM. The relative standard deviation for intra- and inter-day precision was lower than 10% with accuracy (%bias) was within ± 10% for the three GSH concentrations. The average recovery of GSH from erythrocytes was over 94%. The limit of detection was 0.0024 mM and the limit of quantification was 0.0081 mM. Derivatized samples with DTNB showed good stability for a month at 20°C. The method was evaluated in blood samples from healthy subjects and hemodialyzed patients. Erythrocyte GSH levels of patients were significantly (p<0.05) increased when compared with control group. Many patients received vitamin supplementation, 70% and erythropoietin, 75%. The healthy subjects showed GSH levels similar to previous reports. The results demonstrated that the optimized method is linear, reproducible, provided low limit of detection and quantification, and is feasible. / O estresse oxidativo pode ser iniciado pela diminuição do sistema de defesa antioxidante ou por uma produção excessiva de radicais livres, um desequilíbrio entre oxidantes e antioxidantes. A alteração mais significativa nas defesas antioxi-dantes é a diminuição na concentração da glutationa reduzida (GSH). A depleção da GSH está relacionada a estados patológicos; incluindo câncer, doenças neurodegenerativas e cardiovasculares. É o principal tiol não protéico envolvido na defesa antioxidante contra produtos de biotransformação de xenobióticos e compostos deletérios formados naturalmente, como os radicais livres e hidroperóxidos. A glutationa não só protege as membranas celulares do dano oxidativo, mas também ajuda a manter os grupos sulfidrílicos de muitas proteínas na forma reduzida, mantendo sua função normal. Os radicais livres induzem a peroxidação lipídica que ocupa importante função nos processos patológicos de muitas doenças como as doenças cardiovasculares. Devido a importante função da GSH na proteção contra o estresse oxidativo e detoxificação de xenobióticos, sua disponibilidade na forma reduzida pode ser um fator essencial para a manutenção da saúde. Conseqüentemente, sua determinação em eritrócitos humanos é necessária. Assim, metodologias para a medida da GSH em amostras biológicas e sua exeqüibilidade como método de rotina em laboratórios de análises clínicas são fundamentais. A cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) tornou-se, recen-temente, o método de escolha para a medida de GSH porque é rápido, altamente seletivo, sensível e reprodutível. Relatos recentes descrevem o uso da CLAE com detecção por fluorescência de derivados ou detecção eletroquímica de grupos sulfidrílicos, no entanto, estes detectores não são largamente utilizados como os modelos de ultravioleta-visível. Para a análise de amostras sangüíneas por CLAE, a remoção de proteínas é a etapa de cleanup mais importante. Neste estudo, um método foi otimizado e validado para determinar GSH em eritrócitos humanos por CLAE, eluição por gradiente, detecção ultravioleta, comprimento de onda 330 nm. A separação foi realizada em uma coluna C18 integrada a uma coluna guarda, a 39ºC. A derivação pré-coluna foi realizada com ácido 5,5´ditio-bis (2-nitrobenzóico) (DTNB), reagente de Ellman. Os eritrócitos foram separados, hemolisados e desproteinizados com ácido tricloroacético 15% antes da derivação. Os parâmetros analíticos avaliados foram: linearidade, seletividade, precisão, exatidão, recuperação, limite de detecção, limite de quantificação, robustez e estabilidade. O método otimizado foi aplicado em amostras de sangue de indivíduos sadios (grupo controle) e de pacientes submetidos ao tratamento de hemodiálise. A análise foi linear de 0,5 a 3,0 mM. O desvio padrão relativo para a precisão intra- e inter-dia foi menor que 10% com exatidão (bias%) menor que ± 10% para as concentrações 0,5; 1,5 e 3,0 mM. A recuperação média de GSH em eritrócitos foi acima de 94%. O limite de detecção foi de 0,0024 mM e o limite de quantificação foi de 0,0081 mM. As amostras derivadas com DTNB mostraram boa estabilidade por um mês a 20°C. Os indivíduos saudáveis mostraram níveis de GSH semelhantes aos obtidos em trabalhos prévios. Os níveis eritrocitários de GSH dos pacientes foram significativamente aumentados (p<0,05) quando comparados com os do grupo controle. Muitos dos pacientes receberam suplementação vitamínica do complexo B, 70% e eritropoietina, 75%. Os resultados demonstraram que o método otimizado é linear, reprodutível, apresenta baixo limite de detecção e quantificação e é exeqüível.