O Bacupari (Garcinia brasiliensis Mart.) é uma espécie arbórea de importância medicinal, da qual diversos estudos têm obtido o isolamento e testado a atividade de moléculas como a 7-epiclusianona, guttiferona-A, garciniafenona e fukugetina. Porém, a produção desses compostos in natura é limitada, tornando necessário estudos que otimizem a produção destas. Nesse contexto as técnicas de cultura de tecidos vegetais, como o cultivo de calos e suspensões celulares tem sido utilizada para produzir e otimizar a obtenção de metabólitos de interesse farmacêutico in vitro. O objetivo desse trabalho foi utilizar a glutamina como fonte de nitrogênio em calos de G. brasiliensis com intuito de investigar a influência desse aminoácido na produção de fenóis, flavonoides e proantocianidinas. Explantes de 2 mm de espessura e 4 mm de diâmetro foram obtidos a partir de seguimentos do procâmbio de sementes de bacupari, obtidas de uma população localizada no município de Viçosa-MG e inoculados em meio de cultivo contendo 30 mL de meio MS (Murashige e Skoog, 1962) complementado com sacarose (3%), ágar (0,7%), BAP (6-Benzilaminopurine, 0,5 mg L-1) e diferentes concentrações de sais que seguem: Meio MS com as concentrações originais de nitrogênio (20 mM NH4NO3 e 18,8 mM KNO3), meio MS com 10 mM NH4NO3 e 9,4 mM KNO3 chamado ½ força (MS ½) e meio MS sem NH4NO3 e KNO3 contendo glutamina em concentrações finais de 5, 10, 30 e 60 mM. Após a inoculação o material foi mantido em sala de crescimento na ausência de luz por um período de 140 dias. As análises bioquímicas foram realizadas em intervalos de 20 dias e as análises fitoquímicas no final do período de cultivo, aos 140 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado contendo 6 tratamentos e 4 repetições. Foi observada diferença significativa na concentração de aminoácidos entre os tratamentos em relação ao tempo de cultivo. A concentração mais baixa para aminoácidos foi a 60 mM de glutamina no tempo de 100 dias. Essa redução pode estar relacionada com a síntese de proteínas, as quais haviam mostraram o decréscimo aos 80 dias de cultivo. Além disso a baixa quantidade de aminoácidos a 60 mM de glutamina indica que esses podem ter sido desviados para a rota metabólica dos metabólitos especiais. / The Bacupari (Garcinia brasiliensis Mart.) is an arboreal species of medicinal importance, where through various studies have demonstrated the isolation and activity of important molecules such as 7-epiclusianone, guttiferona-A, garciniafenona and fukugetina. However, the production of these compounds in nature is limited, so seen the need for studies that optimize the production of these compounds. In this context the techniques of plant tissue culture, such as in vitro cultivation of cells (callus) has been used to produce and optimize the production of metabolites of pharmaceutical interest in vitro. The objective of this study was to use glutamine as a nitrogen source in callus of G. brasiliensis in order to investigate the influence of the amino acid in the production of phenols, flavonoids and proanthocyanidins. The explants were inoculated in MS medium, MS with half concentration of the nitrogen salts, and MS absent of nitrogen sources supplemented with glutamine (5, 10, 30 and 60 mM). Biochemical analyzes were performed at intervals of 20 days and phytochemical analysis at the end of the culture period. At the 20 th and 100 th days, there was no difference in the amino acid content, between the treatments. In the remaining periods, the treatment with 60 mM of glutamine showed the lowest concentrations of amino acids. With respect to proteins, there were differences only at the 140 th day of cultivation, and the use of 60 mM of glutamine resulted in higher concentrations, while MS had the lowest concentrations. Similarly, the treatment with 60 mM glutamine resulted in higher levels of phenolic compounds, flavonoids and proanthocyanidins, and the lower levels were observed in MS. Thus, it is concluded that the use of 60 mM glutamine to replace the nitrogen sources in MS medium in the 140 th day promoted the accumulation of proteins and synthesis of secondary metabolites in callus of Bacupari. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O tratamento de esgoto tem se evidenciado devido às necessidades ambientais, e no final do processo há geração de um resíduo denominado lodo de esgoto ou biossólido, rico em matéria orgânica e elementos essenciais as plantas. Neste estudo, propôs-se a utilização do biossólido da ETE de Paraguaçu- MG como fonte alternativa para nutrição in vitro de Sucupira-preta (Bowdichia virgilioides Kunth.), espécie lenhosa nativa do cerrado brasileiro. As sementes de sucupira-preta foram desinfestadas em etanol 70 % e hipoclorito de sódio, e imersas em ácido sulfúrico concentrado (98 %) para superação da dormência tegumentar. Após 3 enxágues em água destilada autoclavada as sementes foram inoculadas, uma por tubo de ensaio contendo 30 mL de meio WPM e diferentes concentrações do biossólido moído. Os tratamentos foram divididos da seguinte maneira: controle com meio WPM; meio WPM acrescido de concentrações crescentes de biossólido; concentrações crescentes de biossólido apenas; e um segundo controle contendo apenas água destilada. O delineamento foi inteiramente casualizado em esquema fatorial (2 x 7 com 14 tratamentos e 8 repetições por tratamento), com fator presença e ausência de meio WPM e fator concentração de biossólido (ausência; 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 e 10 g L-¹). Os tubos foram mantidos em sala de crescimento até o 41º dia, quando foram avaliados: número de folhas; comprimento da parte aérea; área foliar; número de gemas; número de raízes secundárias; comprimento da raiz principal; espessura do caule e massa seca da planta inteira. O fator presença de biossólido apenas, foi significativo influenciando de forma direta as variáveis área foliar, número de raízes secundárias e número de gemas. A presença do biossólido influenciou de forma significativa nos tratamentos onde há interação deste com meio WPM apenas para variável comprimento da raiz principal. Quanto as demais variáveis: número de folhas, comprimento da parte área, espessura de caule e massa seca, não houve resultado significativo para os tratamentos com a presença do biossólido apenas. Os resultados mostraram que a suplementação do meio com o biossólido é possível. Conclui-se que devido à maioria dos parâmetros avaliados não diferirem estatisticamente, o biossólido tem potencial para a substituição dos nutrientes do meio WPM, no que se refere ao estabelecimento in vitro de Sucupira-preta utilizando sementes como explante, resultando em economia para o processo, além de reutilizar o resíduo do tratamento de esgotos. Estudos complementares visando a padronização dos teores de cada componente do biossólido auxiliarão na consolidação do uso deste na cultura de tecidos vegetais. / The high organic matter content of sewage sludge is one of the motivations for their disposal in the environment as a soil conditioner, and at the end of the process, there is a production of one residue denominated the biosolids, wich is rich in organic matter and essential elements to the plants. This study aim to use the biosolids from ETE Paraguaçu (Minas Gerais) as alternative source to in vitro nutrition of sucupira-preta (Bowdichia virgilioides Kunth.), a native woody species from Brazilian Cerrado. Sucupira-preta seeds was sterilized in both 70 % ethanol and hypochlorite of sodium and immersed in 98 % concentrated sulphuric acid for breaking of seed coat dormancy. After 3 rinses in distilled autoclaved water the seeds were inoculated one by each one test tube containing 30 ml of WPM medium and at different concentrations of grounded biosolids. The treatments were divided in four procedures: first control with WPM medium, one with WPM medium amended with increased concentrations of biosolids, other with only increased concentrations of biosolids and the last control medium with only distillated water. The experimental design was completely randomized in a factorial arrangement (2 x 7 with 14 treatments with eight replications), with the presence or absence factor of WPM medium and the biosolids concentration factor (absence; 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 e 10 g L-¹). Test tubes were maintained in growing room until the 41th day and it was evaluated the number of leaves, aerial part length,  leaf area measurements, the number of buds, the number of secondary roots, the length of the main root,  the thickness of the stem and the mass of dry matter of the whole plant. The factor with only the biosolids presence was significate influenced the leaf area, number of secondary roots and the number of buds directly. The biosolids presence significantly influences the treatments as the biosolids interacted with WPM medium affecting only the main root length variable. As for the other variables such as the number of leaves, aerial part length, the thickness of the stem and the drier mass, the results showed no significance to those treatments with only biosolids presence. Results demonstrated that the supplementation of medium with the biosolids is possible. The Since the majority of estimated parameters did not have significative  differences, it is possible to infer that biosolids has a potential to substitute the nutrients of WPM medium regarding the establishment in vitro of sucupira-preta using seeds as explants. Consequently, it is a safety way for the process besides of the reusing of sludge that result from processes of sewing treatment. Complementary studies searching for the standardization of each components of biosolids will contributed to evaluated the feasibility of this residue use as substrate in plants tissue cultivation.

Orientador: Elenice Deffune / Banca: Magda Massae Hata Viveiros / Banca: Jaqueline de Camargo Rinaldi / Resumo: Introdução: Muitas patologias podem acometer a córnea, entre elas a síndrome do olho seco e as doenças relacionadas. Tratamentos inovadores para a síndrome do olho seco têm surgido, entre eles, o uso de colírio produzido com soro autólogo de uso ocular, soro de sangue de cordão umbilical, meio condicionado obtido pela expansão de células tronco do epitélio limbal (modelo ex vivo), entre outros. Pacientes com provável indicação do colírio de soro autólogo podem ter a contra-indicação na produção oriunda do status imune para doenças virais como HIV, hepatites B e C, sífilis, doença de Chagas e HTLV I e II, que do ponto de vista de produção do autocolírio, encontram barreiras. Para estes casos, o colírio de soro alogênico, oriundo de doadores saudáveis, é uma alternativa viável. Objetivos: Analisar o efeito in vitro da ação de colírio alogênico em cultura de células da região córneo-escleral, estabelecer a cultura e expansão de células aderentes obtidas da região córneo-escleral, comparar a cultura das células aderentes em meio de cultura contendo colírio e fatores de crescimento derivados de plaquetas, avaliar as células por meio da técnica de imunohistoquímica e analisar os dados médicos dos pacientes que utilizam autocolírio por meio de prontuários. Casuística e Métodos: Os anéis córneo-esclerais foram obtidos no centro cirúrgico após cirurgia de doação de córnea, sendo que estes anéis são materiais de descarte após a cirurgia. Em seguida, o tecido foi encaminhado ao Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu, onde foi fragmentado em pequenas partes e digerido com colagenase tipo I. As células foram plaqueadas em frascos de 25 cm² com meio DMEM Knockout, em uma primeira parte do experimento, e em meio Keratinocyte na segunda parte do trabalho. Após confluência de 80%, as células passaram pelo processo de tripsinização para desprendimento ... / Abstract: Introduction: Many diseases can affect cornea, including dry eye syndrome and related diseases. Innovative treatments for dry eye syndrome have emerged , among them the use of autologous serum eye drops produced with the use of eye serum, umbilical cord blood, conditioned medium obtained by expansion of limbal epithelial stem cells (ex vivo model) among others. Patients with probable indication of autologous serum eyedrops may be contraindicated in production originating immune status for viral diseases such as HIV, hepatitis B and C, syphilis , Chagas disease and HTLV I and II, from the point of view of eye drops's production, have barriers . For these cases, eye drops from healthy donors allogeneic serum can be an alternative. Objectives: Evaluate in vitro effect of the action of allogeneic eye drops in corneal-scleral cell culture, established the culture and expansion of adherent cells obtained from the corneal- scleral region, compare the culture of adherent cells in culture medium containing eye drops and platelets derived growth factors, evaluating the cells by immunohistochemistry and analyze medical data of eye drops's patients. Materials and Methods: The corneal- scleral rings were obtained in the operating room after surgery of tissue donor, and these rings were discarded after surgery. Then, tissue was sent to the Laboratory of Cell Engineering of Botucatu Blood Center, which was fragmented into small pieces and digested with collagenase type I. Cells were plated in 25 cm² flasks with DMEM Knockout in the first part of the experiment, and Keratinocyte in the second part of the experiment. After 80% confluence, cells passed through the trypsinization procedure for detachment of the cells from the culture flask. Mounting plaque experiment, cells were placed to control, or untreated cells, treated cells with eye drops and cells treated with platelets derived growth factors was performed. After 5 days, immunohistochemistry ... / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Banca: Flávia Karina Dlella / Resumo: Células tronco embrionárias (CTE) são caracterizadas pelas capacidades de auto-renovação e diferenciação. No entanto, os mecanismos moleculares que regulam estes dois processos são mal compreendidos. CTE de camundongos foram originalmente isoladas a partir da massa celular interna (MCI) de blastocistos produzidos in vitro e in vivo e mantidas em cultura sem perda da pluripotência, originando tecidos das três camadas germinativas. Há profundo interesse em conhecer os processos envolvidos na proliferação e diferenciação das células embrionárias contribuindo, no futuro, para engenharia de tecidos e clonagem terapêutica. Objetivos: Comparar o potencial gerador de CTE de embriões bovinos produzidos in vitro em meio contendo alta e baixa concentração de soro, assim como avaliar a manutenção da pluripotência das células em cultivo através da ação de dois fatores, a LIF e o bFGF, utilizados isoladamente ou em conjunto, no cultivo in vitro de CTEbov. Foram utilizados blastocistos bovinos com 9 dias de desenvolvimento in vitro para remoção da massa celular interna (MCI) e posterior cultivo das mesmas em placas tratadas com monocamada de fibroblastos bloqueados. As colônias celulares semelhantes a células-tronco foram analisadas através da identificação da expressão in sito dos fatores de indiferenciação Oct-4, Nanog, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1- 60, TRA-1-81. Os blastocistos bovinos com 9 dias de idade também foram submetidos à marcação imunocitoquímica. Adicionalmente foi avaliado o potencial de diferenciação in vitro das CTEbov para linhagens celulares de origem endodermal, mesodermal e ectodermal. Em média, 525 embriões de cada um dos dois grupos (2,5% e 10% de soro fetal bovino, respectivamente) foram selecionados para o isolamento da MCI. Foram utilizados 300 blastocistos iniciais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Embryonic stem cells (ESC) are characterized by their capacity for selfrenewal and differentiation. However, the molecular mechanisms which regulate these two processes are poorly understood. ESC of mice were originally isolated from the inner cell mass (ICM) of blastocysts in vitro and in vivo and maintained in culture without loss of pluripotency, yielding three germ layers of tissue. There is keen interest in learning about the processes involved in proliferation and differentiation of embryonic cells contribute in the future, tissue engineering and therapeutic cloning. To compare the potential generator ESC of bovine embryos produced in vitro in medium containing high and low concentrations of serum, as well as evaluating the maintenance of pluripotency of the cells in culture through the action of two factors, the LIF and bFGF, used singly or together, in vitro cultivation of ESCbov. We used bovine blastocysts to nine days of in vitro development to remove the inner cell mass (ICM) and further cultivation of the same plates treated with fibroblast monolayer blocked. The cell colonies similar to stem cells were analyzed by in situ identification of the expression of differentiation factors Oct-4, Nanog, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81 . The bovine blastocysts with 9 days of age were also subjected to immunocytochemical labeling. Additionally it was evaluated the potential of differentiation in vitro of cell lines to ESCbov endodermal origin, mesodermal and ectodermal. The average 525 embryos from each of the two groups (2.5% and 10% fetal bovine serum, respectively) were selected for isolation of the ICM. Early blastocysts were used 300, 160 expanded blastocysts and 45 hatched blastocysts per group. However, only expanded blastocysts adhered to the monolayer of fibroblasts and developed into colonies similar to... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Co-orientador: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Rafael Silva Cipriano / Banca: Vera Lúcia Lorenzetti Magalhaes Curci / Banca: Carlos Noriyki Kaneto / Banca: Cáris Maroni Nunes / Resumo:A infecção pelo herpesvírus Bovino tipo 5 (BoHV-5) resulta em meningoencefalite não supurativa que é responsável por perdas econômicas significativas na América do Sul. Células tronco mesenquimais (CTM) são encontradas em diferentes tecidos fetais, como no cordão umbilical que possuí diversos fatores favoráveis para obtenção destas células. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar o isolamento e a viabilidade das CTM bovinas e sua capacidade de diferenciação em outros tecidos de origem mesenquimal, como as "neuron-like cells" - células semelhantes a neurônios - (CSN), e avaliar a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção experimental com BoHV-5. As CTM foram isoladas da geleia de Wharton e diferenciadas em tecido adiposo, cartilagem, ósseo e CSN. As linhagens celulares foram caracterizadas pela expressão genica e imunofenotipicamente, utilizando a técnica de PCR, imunocitoquímica e citometria de fluxo, respectivamente. O conjunto de primers e painel de anticorpos primários, empregados na experimentação, permitiu caracterizar as células tronco e sua diferenciação em células neuronais. Após a adaptação e diferenciação, ambas as células foram infectadas pelo BoHV-5, exibindo efeito citopático e taxa de replicação viral aumentada 72 h pós infecção. A técnica de hibridização in situ identificou as partículas virais no interior das CSN e no meio extracelular. Os resultados demonstram a capacidade de diferenciação das CTM em outros tipos celulares e a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção in vitro de células neuronais pelo BoHV-5. Estes resultados corroboram o uso de MSC como fonte de NLC para uso no estudo da patogênese da infecção experimental pelo BoHV-5 / Abstract:Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) infection results in non- suppurative meningoencephalitis which underlies significant economic losses in South America. Mesenchymal stem cells (MSCs) are found in fetal tissues, such as the umbilical cord. The goal of this research was to characterize the isolation and viability of bovine umbilical cord MSCs for in vitro differentiation into "neuron-like cells" (NLC) to be used as a model for experimental infection with BoHV-5. MSCs were isolated from Wharton's jelly and differentiated in vitro into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic cells as well as NLC. The cells lines were characterized molecularly and immunophenotypically, using PCR, immunocytochemistry, and flow cytometry. The set of primers and panel of primary antibody used in the experiments confirmed the isolation of mesenchymal stem cells and their differentiation into neuronal-like cells. After adaptation and differentiation, the cells were infected with BoHV-5, exhibiting typical cytopathic effect and increased viral replication rate 72 h post-infection. Viral particles were identified in the NLC and in the extracellular environment. by in situ hybridization These results corroborate the use of MSCs as a source of NLC which can be used to study the pathogenesis of the experimental in vitro infection wtih BoHV-5 / Doutor

Orientador: Crispin Humberto Garcia Cruz / Banca: Vanildo Luiz Del Bianchi / Banca: Mauricio Boscolo / Banca: Sandra Regina Ceccato Antonini / Banca: Harvey Alexander Villa Vélez / Resumo: As crises no fornecimento de petróleo, a possibilidade de sua escassez, instabilidade dos preços e, principalmente, os efeitos negativos ao meio ambiente, aumentaram, nos últimos anos, o interesse pela procura de fontes alternativas para produção de energia. A possibilidade de produzir etanol a partir de resíduos lignocelulósicos é um grande atrativo para os pesquisadores, pois reduziria a necessidade em aumentar as áreas plantadas para incremento da produção, a competição direta com a produção de alimentos e o custo de matéria-prima. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi estudar a produção de etanol por culturas individuais e co-culturas de Zymomonas mobilis e Pachysolen tannophilus usando cascas de banana, maracujá e coco verde hidrolisadas. O pré-tratamento ácido, seguido de hidrólise enzimática das cascas de banana, maracujá e coco, promoveram a liberação de 74,1, 87,2 e 13,4 g L-1 de açúcares totais, respectivamente. Foram avaliadas três concentrações de substrato (5, 10 e 15%) e três pH iniciais dos meios de fermentação (4,5; 5,0 e 5,5). Nas fermentações com a bactéria Z. mobilis, com os três resíduos, foi verificado que o substrato mais concentrado não contribuiu para um aumento significativo da produção de etanol. Além disso, a maior concentração do produto foi de 2,9 g L-1, obtido nas fermentações de cascas de banana hidrolisadas com concentração de 5%. Já nas fermentações com a levedura P. tannophilus, as maiores produções de etanol foram determinadas... / Abstract: Crises in oil supply, the possibility of their scarcity, price instability and, especially, the negative effects to the environment have increased the interest in alternative sources for energy production, in recent years. The possibility of producing ethanol from lignocellulosic residues is a great attractive to the researchers, because it would reduce the need for increasing the planted areas to increase production, the direct competition with food production and the high costs of raw materials. In this context, the objective of this work was to study the ethanol production by individual cultures and co-cultures of Zymomonas mobilis and Pachysolen tannophilus using banana, passion fruit and coconut peels hydrolysate. The acid pretreatment, followed by enzymatic hydrolysis of banana, passion fruit and coconut peels promoted the liberation of 74.1, 87.2 and 13.4 g L-1 of total sugars, respectively. Three substrate concentrations (5, 10 and 15%) and three initial pH of fermentation media (4.5; 5.0 and 5.5) were evaluated. In the fermentations with Z. mobilis bacteria, using the three residues, it was found that the most concentrated substrate did not contribute to a significant increase in ethanol production. In addition, the highest product concentration was 2.9 g L-1, obtained in hydrolysed banana peels fermentations at 5% concentration. In the fermentations with yeast P. tannophilus, the highest ethanol yields were determined using passion fruit peel hydrolysates at 10% solids concentration, providing the ethanol production of 10 g L-1 . And the association of Z. mobilis bacteria and P. tannophilus yeast, in the co-culture process, showed potential for the lignocellulosic hydrolysates fermentation. The inoculation system that showed the best results was the one in which the bacterium was inoculated at the beginning of the process, and after 7 h of fermentation, the yeast ... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:41:13Z : No. of bitstreams: 1 moroz_a_dr_botib.pdf: 3424039 bytes, checksum: a7c3216b5e555a810395696e16f33e9b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O câncer de próstata (CaP) é importante causa de morte no mundo. Além do óbvio impacto na vida pessoal do paciente e na sua família, no Brasil esta doença gera custos altíssimos para o Sistema Único de Saúde (SUS), desde o diagnóstico até o óbito. As terapias disponíveis, além de causarem complicações e efeitos colaterais indesejáveis, não proporcionam sobrevida alta ao paciente. Além disso, os casos de cura são restritos aos diagnosticados precocemente, e com intervenção rápida, antes que o tumor se torne resistente à castração química. Neste sentido, estratégias preventivas são desejáveis para a diminuição da incidência e óbitos e, dentre elas, o uso da finasterida, um fármaco inibitório da enzima 5-α-redutase, foi proposto como potencial agente quimiopreventivo após estudo conduzido pelo Prostate Cancer Prevention Trial, que demonstrou significante diminuição na incidência de CaP no grupo de pacientes tratados, em comparação ao grupo controle. No entanto, mesmo com resultados promissores, foi detectado aumento, também significante, do número de casos de cânceres mais agressivos (alto grau) no grupo de pacientes que recebeu finasterida, em comparação aos pacientes do grupo controle. Após intenso debate entre urologistas, biologistas e cancerologistas, ainda não há consenso sobre a natureza artefatual ou de real indução de cânceres mais agressivos pela finasterida. O órgão regulatório americano Food and Drugs Administration (FDA) declarou que o aumento dos casos agressivos pela finasterida não deve ser negligenciado, e recentemente proibiu o uso deste fármaco como quimiopreventivo para o CaP. Uma vez que casos agressivos de câncer estão comumente relacionados à superexpressão de enzimas... / Prostate cancer (PCa) is an important death cause in Brazil and other countries. Besides the obvious impact at patient’s life, and their relatives, this disease consumes exorbitant resources from the Sistema Único de Saúde (SUS), from diagnosis to death. The available therapies not only cause undesirable complications and side effects, but also are inefficient at providing good survival expectancies for those affected. Moreover, the cure is only possible when the tumors are readily found and when the intervention is fast enough to prevent that the tumor become castration-resistant. In this sense, preventive strategies are desirable in order to lower incidence and death, and amongst them, finasteride (Fin) treatment, an inhibitor of the 5-alpha reductase enzyme, was proposed as a potential chemopreventive agent after the study conducted by the Prostate Cancer Prevention Trial reported a significant lower incidence of PCa cases on Fin-treated patients, when compared to control patients. However, even though these results were promising, this study also reported a significant increase on more aggressive, high-grade PCa, amongst Fin-treated patients, compared to those not exposed to Fin. After an intense debate about factual or artifactual Fin-induced high-grade PCa cases, between urologists, biologists and oncologists, there are still no decisive conclusions on this matter. The regulatory USA organ, Food and Drugs Administration (FDA), has recently declared that the higher incidence of a more serious form of PCa at the Fin-treated patients must not be neglected, and prohibited its use as a chemopreventive agent. Given that the aggressive cancer cases are commonly associated with the super-expression of matrix metalloproteinases (MMPs) enzymes, with consequently higher invasion and migration potential of tumor... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2017-03-14T14:10:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-11. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-14T14:42:48Z : No. of bitstreams: 1 000874656.pdf: 3822657 bytes, checksum: 2b9fdefdb2600b9a80b8499695bfbd0d (MD5) / Estudos têm sido conduzidos com o intuito de prevenir a formação do biofilme em biomateriais ou buscar terapias alternativas para o tratamento de doenças decorrentes da instalação do biofilme. Como terapia alternativa, este estudo avaliou (1) a citotoxicidade da terapia fotodinâmica (PDT), através da utilização de queratinócitos humanos co-cultivados com Candida albicans. Em relação à prevenção da formação do biofilme, (2) foi avaliada a citotoxicidade de nanopartículas (NP) de tungstato de prata (Ag2WO4) e de molibdato de prata (Ag2MoO4), em solução e como revestimento de biomateriais. No estudo 1, a co-cultura foi realizada utilizando uma membrana Transwell, em que células e micro-organismos cresceram separadamente durante 24h, e ficaram em contato por mais 24h. Após este período, a PDT foi realizada utilizando-se a curcumina como fotossensibilizador. As seguintes condições foram testadas: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. Além disso, como controle negativo, três membranas de cada placa foram destinadas apenas ao crescimento de microorganismos e outros três poços para o crescimento de células separadamente, com seus respectivos meios. A proliferação celular, foi avaliada através dos testes Alamar Blue, MTT, XTT e UFC. Para o estudo 2, as NP foram sintetizadas e caracterizadas através de Microscopia Eletrônica de Varredura e Difração de Raios X. A partir da confecção das NP, foram feitas as soluções e o revestimento de titânio (Ti), zircônia (Zi), resina acrílica (RA) e silicone (Si). Para a realização do teste de citotoxicidade, 100 µL da suspensão composta por 1,5 x 104 células/ml (HaCat) foram colocados em cada compartimento de uma placa com 96 orifícios, incubada em estufa com 5% de CO2, a 37ºC por 24 horas. Após tal período de incubação, o meio de cultura foi desprezado, permanecendo as células aderidas no fundo da placa...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Studies have been conducted in order to prevent biofilm formation on biomaterials or seek alternative therapies for the treatment of diseases caused by biofilm installation. As an alternative therapy, this study evaluated (1) the cytotoxicity of photodynamic therapy (PDT) by the use of co-cultured human keratinocytes with Candida albicans (Ca). In relation to prevention of biofilm formation, (2) the cytotoxicity was evaluated nanoparticles (NP) silver tungstate (Ag2WO4) and silver molybdate (Ag2MoO4), in solution and as a biomaterial coating. In study 1, the co-culture was performed using a Transwell membrane, and cells in which micro-organisms grown separately for 24 h, and were in contact for a further 24h.After this period, PDT was performed using curcumin as a photosensitizer. The following conditions were tested: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. In addition, as a negative control, three membranes of each plate were assigned only to the growth of microorganisms and another three wells for cell growth separately with respective means. Cell proliferation was evaluated by testing the Alamar Blue, MTT, XTT, and CFU. For the study 2, the NP were synthesized and characterized by scanning electronic microscopy and X-ray diffraction. Since the making of the NP, they were made solutions and the titanium coating (Ti), zirconium (Zi), acrylic resin (RA) and silicon (Si). To perform the cytotoxicity assay, 100 µL of suspension composed of 1.5 x 104 cells / mL (HaCaT) were placed in each compartment of a plate with 96 wells, incubated in an incubator with 5% CO2 at 37 ° C for 24 hours. After this incubation period, the culture medium was discarded, remaining adhered cells at the bottom of the wells. 100 µL of culture medium containing the nanoparticles in solution and the extracts were placed on each plate hole. The plate was incubated for another 24 hours. Cell proliferation was assessed using the Alamar ... (Complete abstract electronic access below)

Orientador: Ian Castro-Gamboa / Co-orientador: Alan Cesar Pilon / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Patrícia Mendonça Pauletti / Resumo: Nos últimos anos, a busca por compostos bioativos oriundos de rotas metabólicas silenciadas (em microrganismos) tem levado o desenvolvimento de novas ferramentas analíticas assim como a aplicação de diferentes metodologias. Uma das mais importantes estratégias para acessar tal produção metabólica é o uso de cultivos em co-cultura, onde a interação entre dois ou mais microrganismos pode mimetizar, de certa maneira, as relações tróficas existentes na natureza. A relação de competição por nutrientes e espaço leva a produção de enzimas e compostos relativos a um determinado tipo de interação que pode estar relacionado a reprodução, inibição de crescimento ou estimulação. Neste trabalho, foi realizado o co-cultivo entre os fungos Fusarium solani e Phomopsis cassiae, ambos isolados da Senna spectabilis. A investigação foi direcionada ao encontro de novos produtos naturais biossitentizados pelas espécies em co-cultivo. Para isso, os fungos foram cultivados em meio sólido de batata dextrose ágar. O acompanhamento do crescimento dos fungos visou a observação de possíveis distinções morfológicas de acordo com nível de interação. Os perfis metabólicos dos microrganismos foram obtidos através do uso de técnicas do estado da arte em CLAE-DAD, CG-EM e RMN. Para os fungos em co-cultivo foi possível determinar a presença de cinco substâncias quando comparado aos cultivos isoladamente pela técnica de CLAE-DAD com o auxílio das ferramentas quimiometricas. Os espectros obtidos por RMN de 1H pro... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In recent years, the search for new bioactive compounds has increased the need to develop several methods of analysis, aiming to activate metabolic routes silenced in microorganisms. An important strategy to access the production of distinct secondary mebatolites is co-culture, where the interaction between two or more microorganisms occurs, mimicking, to a certain extent, the relationships existing in nature. The competition for nutrients and space leads to the production of enzymes and compounds, which are related to the type of interaction (reproduction, inhibition of growth or stimulation). In this work, co-cultivation was carried out between the fungi Fusarium solani and Phomopsis cassiae, both isolated from Senna spectabilis's. The research was directed to the encounter of new natural products biossentetized by the species in co-cultivation. For this, the fungi were cultivated in the solid batata dextrose ágar medium, being monitored their growth in order to observe possible distinctions in their morphologies when the interaction occurs. The metabolites profiles of the microorganisms were observed through the LC-DAD, GC-MS and NMR techniques. For the fungi in co-culture it was possible to determine the presence of five substances when compared to the cultures alone by the CLAE-DAD technique with the help of chemometric tools. The spectra obtained by 1H NMR allowed the visualization of the existence of unique signals present in the co-cultivation experiment, however, its... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Neves Jardini / Banca: Carlos Alberto Alves Cairo / Banca: Caio Gorgulho Zanet / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Fernando Vagner Raldi / Resumo: Alterações nas propriedades físicas e químicas na superfície do titânio (Ti) buscam acelerar e melhorar a osseointegração. Além disso, a criação de substratos porosos, além de beneficiar fenômenos celulares, propiciaria uma maior resistência mecânica na interface osseointegrada devido ao crescimento de tecido ósseo para o interior dos poros. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da porosidade de amostras de Ti na osteogênese in vitro em amostras de titânio. Foram confeccionadas por metalurgia do pó, discos de titânio puro grau 2 com 12 mm de diâmetro e 3 mm de altura, que foram divididos em três grupos: a) G1: controle - titânio denso; b) G2: 30% de porosidade e poros com 300 μm; c) G3: 40% de porosidade e poros com 300 μm. Inicialmente, a superfície de 03 espécimes de cada grupo foi caracterizada por meio de analise metalográfica, visando confirmar a quantidade, área, morfologia e interligação dos poros. Para a realização da pesquisa, células osteogênicas obtidas da calvária de ratos recém-nascidos foram cultivadas sobre as amostras de cada grupo e avaliadas quanto à adesão celular, após 24 horas, proliferação e viabilidade celular, após 7, 10 e 14 dias. A diferenciação celular foi avaliada através da mensuração do conteúdo de proteína total, atividade da fosfatase alcalina e formação de matriz nodular mineralizada nos períodos de 7, 10 e 14 dias. Os resultados obtidos com os testes ANOVA e Tukey (5%) indicaram que houve adesão celular em todas as superfícies e que esta não interferiu nos resultados. As superfícies porosas (G2 e G3) favoreceram a proliferação celular quando comparadas as superfícies densas. O conteúdo de proteína total e a formação de matriz mineralizada foram significantemente maiores nas amostras de G3. Entretanto, não houve diferença estatística nos valores da atividade da fosfatase alcalina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Changes in physical and chemical properties on the surface of titanium seek to accelerate and improve osseointegration. Furthermore, the creation of porous substrates, provide greater strength in the osseointegrated interface due to the bone ingrowth. The aim of this study was to evaluate the influence of porosity on osteogenesis in vitro in samples of titanium. Were made by the powder metallurgy, discs of pure titanium grade 2 with 12 mm diameter and 3 mm in height, which were divided into three groups: a) G1: control - titanium machined b) G2: 30% porosity and pore with 300 μm c) G3: 40% of porosity and pore size of 300 μm. Initially, the area of 03 specimens of each group was characterized by metallography analysis, to confirm the quantity, area, shape and interconnection of pores. To conduct the study, osteogenic cells derived from calvaria of newborn rats were cultured on the samples of each group and evaluated for adhesion, after 24 hours, proliferation and cell viability after 3, 7 and 10 days. The cell differentiation was assessed by measuring the total protein content, alkaline phosphatase activity and bone-like nodule formation at 7, 10 and 14 days. The results obtained with ANOVA and Tukey tests (5%) indicated that there was cell adhesion on all surfaces and it does not interfere in the results. The porous surfaces (G2 and G3) provide better results in cell proliferation when compared to smooth surfaces. The content of total protein and the formation of bonelike nodules were significantly higher in samples from G3. However, there was no statistical difference in the values of alkaline phosphatase activity between the experimental groups. These results suggest a correlation between the surface topography of the samples and the phenomena of adherence, proliferation and cell differentiation. / Doutor