Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-12Bitstream added on 2014-06-13T19:03:33Z : No. of bitstreams: 1 dias_fc_dr_jabo.pdf: 950154 bytes, checksum: 170fddcca2fc4c7004161e93f093a97f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A ocorrência de anticorpos neutralizantes contra os genótipos do vírus da diarréia viral bovina (BVDV 1 e BVDV 2) foi verificada, pelo teste de virusneutralização (VN), em 260 amostras de soro sangüíneo de 26 rebanhos não vacinados contra o BVDV, provenientes dos Estados de Minas Gerais e São Paulo. Do total de amostras, 102 (39,2%) reagiram ao BVDV, das quais 81 (31,1 %) foram reagentes ao BVDV 1 e ao BVDV 2, sete (2,7%) reagiram apenas ao BVDV 1 e 14 (5,4%) reagiram apenas ao BVDV 2. Nos mesmos rebanhos, verificou-se também a presença sugestiva de animais persistentemente infectados (PI) por meio da pesquisa de anticorpos neutralizantes em cinco amostras de soro sangüíneo de bezerros sentinelas com idade entre 6 e 12 meses. A ocorrência de animais PI foi pesquisada em três dos 26 rebanhos, dos quais foram colhidas amostras pareadas de sangue de todos os animais do rebanho. Todas as amostras foram submetidas ao teste de VN contra o BVDV 1 e o BVDV 2, e naquelas não reagentes a pelo menos um dos genótipos, bem como nas amostras provenientes de bovinos com menos de seis meses de idade, foi realizada a pesquisa do vírus pela RT-PCR. Em um dos rebanhos foram detectados dois animais PI, cujas estirpes foram caracterizadas geneticamente como pertencentes ao subgenótipo eVOV 1 b. A infecção natural pelo BVDV foi monitorada nos três rebanhos selecionados para a pesquisa de animais PI, sendo que em dois deles constatou-se a eliminação do BVDV. No entanto, a infecção permaneceu no rebanho em que haviam sido detectados dois animais PI, pois foram diagnosticados posteriormente um animal transitoriamente infectado (TI) e novos animais reagentes ao vírus. Foram submetidos à análise estatística os resultados dos testes de VN contra o BVDV 1 e o BVDV 2, realizados em 1925 amostras de soro sangüíneo obtidas no período de execução... / The occurrence of neutralizing antibodies against to bovine viral diarrhoea virus genotypes (BVDV 1 and BVDV 2) has been confirmed by virusneutralization test (VN) in 260 samples of blood serum undertaken in the states of Minas Gerais and São Paulo, Brazil. Samples were retrieved from 26 cattle herds which were not BVDV vaccinated. One hundred and two samples (39.2%) were reagents to BVDV, or rather, 81 (31.1%) were reagents to BVDV 1 and BVDV 2, seven (2.7%) were reagents to BVDV 1 only and 14 (5.4%) were reagents to BVDV 2 only. In the same herds, the significant presence of persistently infected (PI) animais was also verified by a research involving neutralizing antibodies in five samples of blood serum in 6 to 12¬month-old calves. The occurrence of PI animais was researched in three out of 26 herds by paired blood samples of total animais in the herdo Ali samples were analyzed by VN test against to BVDV 1 and BVDV 2, and virus research was undertaken by RT-PCR in samples which were not reagent to at least one of the genotypes and in samples of less than 6-month-old cattle. Two PI animais, genetically characterized as belonging to BVDV 1 b subgenotype, were detected in one of the herds. BVDV natural infection was monitored in three herds selected for PI animais research. BVDV was eliminated in two herds. However, infection remained in the herd in which two PI animais were diagnosed, because a transiently infected animal (TI) and other virus-reagent animais were detected later on. Statistical analysis evaluated VN test results against BVDV 1 and BVDV 2 with 1925 samples of blood serum obtained during the research period. Although no significant ditterences were found between BVDV 1 reagent bovines and BVDV 2 reagent ones (p>0.05), a significant ditterence was detected among titles of antibodies from samples which were reagent to both genotypes (p<0.0001).

AQUINO, Tércia Maia Furtado de. Farelo de arroz parboilizado em rações para leitões na fase de creche. 2012. xiv, 53 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Zootecnia, Programa de Pós-Graduação em Zootecnia. Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-08-09T14:40:52Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_tmfaquino.pdf: 717919 bytes, checksum: 35eaaf7849604fe49e5104b1d0fe8d6c (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-09T14:49:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_tmfaquino.pdf: 717919 bytes, checksum: 35eaaf7849604fe49e5104b1d0fe8d6c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T14:49:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_tmfaquino.pdf: 717919 bytes, checksum: 35eaaf7849604fe49e5104b1d0fe8d6c (MD5) Previous issue date: 2012 / Two assays were conducted to evaluate rice bran parboiled as an ingredient in piglet diets at nursery phase. In the first assay, 14 piglets of commercial lineage with 17 . 2 ± 1 . 02 kg of body weight were allotted to determine the nutritional value of rice bran parboiled on digestibility assay, using the method of total collection of feces . A complet ely randomized design, with two treatments (reference ration and test ration) and seven replicates per treatment were used , where the experimental unit consisted of one animal. The parboiled rice bran presented 2321 . 08 kcal ME/ kg and 17 .15 % of CP . In the second assay, 60 male castrated piglets , of commercial lineage, weaned at 21 days of age and average live weight of 6 . 40 ± 0 . 79 kg, were used to evaluate the effect of inclusion of different levels of parboiled rice bran in piglet diets at nursery phase, on productive performance, d iarrhea incidence and economic viability, of 21 - 32 days of age, 21 - 42 days of age and 21 - 63 days of age. A randomized block design was used , with 5 treatments (inclusion levels of parboiled rice bran: 0; 4; 8; 12 and 16%) and 6 replicates per treatment, where the experimental unit consisted of two animals. The blocks were made using the initial weight of the animals. There was no d ifference (P>0 . 05) between treatments and control treatment with the inclusion of parboiled rice bran when compared by Dunnett's test (5%), as well as regression analysis, where no effects (P>0 . 05) were observed among the levels of inclusion parboiled rice bran in diets in any of performance variables (daily mean feed intake, daily mean weight gain and feed conversion). The results indicated that the inclusion of parboiled rice bran provided no changes in the incidence of diarrhea in animals. The economic analysis showed no significant difference among treatments. Therefore, it can be co ncluded that parboiled rice bran can be included up to 16% in diets for piglets at nursery phase. / Foram conduzidos dois ensaios para avaliar a utilização do farelo de arroz parboilizado (FAP) como ingrediente em rações para leitões na fase de creche. No primeiro ensaio foram utilizados 14 leitões machos castrados de mesma linhagem comercial, com peso inicial de 17,2±1,02 kg, para a avaliação nutricional do farelo de arroz parboilizado em ensaio de digestibilidade, utilizando o método de coleta total de fezes. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, sendo dois tratamentos (ração referência e ração teste) e sete repetições por tratamento, sendo a unidade experimental constituída por um animal. O farelo de arroz parboilizado apresentou 2321,08 kcal EM/kg e 17,15%PB. No segundo ensaio foram utilizados 60 leitões machos castrados, de linhagem comercial, desmamados aos 21 dias de idade e com peso vivo de 6,40 ± 0,79 kg, com o objetivo de avaliar o efeito de diferentes níveis inclusão do farelo de arroz parboilizado sobre o desempenho zootécnico, ocorrência de diarreia e viabilidade econômica, dos 21- 32 dias de idade, 21- 42 dias de idade e 21- 63 dias de idade. O delineamento experimental utilizado foi em blocos casualizados, com cinco tratamentos (0; 4; 8; 12 e 16% de inclusão do FAP), e seis repetições por tratamento, sendo a unidade experimental constituída por dois animais. A formação dos blocos foi feita através do peso inicial dos animais. Não houve diferença (P>0,05) entre o tratamento controle e os tratamentos que receberam a inclusão do farelo de arroz parboilizado quando comparados pelo teste de Dunnett (5%), assim como para a análise de regressão, onde não foram observados efeitos (P>0,05) entre os níveis de inclusão do farelo de arroz parboilizado nas rações para nenhuma das variáveis de desempenho zootécnico (consumo de ração médio diário, ganho de peso médio diário e conversão alimentar). A inclusão dos diferentes níveis do farelo de arroz parboilizado não proporcionou aumento na incidência de diarreia nos leitões. Para a análise econômica realizada, a inclusão do farelo de arroz parboilizado mostrou-se viável até o nível de 16%. Conclui-se que o farelo de arroz parboilizado pode ser incluído até o nível de 16% em rações para leitões na fase de creche.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-26Bitstream added on 2014-06-13T20:35:33Z : No. of bitstreams: 1 alexandrino_b_me_jabo.pdf: 222632 bytes, checksum: 48c6532830e7cdbb18fc1060e2cf6feb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve como objetivo verificar a variação da ocorrência da Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (IBR) pela associação com duas doenças virais imunossupressoras: a Diarréia Viral Bovina (BVD) e a Leucose Enzoótica Bovina (LEB), em seis propriedades onde não se adota esquema de vacinação contra essas enfermidades. Amostras de soro sangüíneo foram analisadas no teste de virusneutralização (VN), para constatação de IBR e BVD, e Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA), para a LEB. Foram selecionados cinco rebanhos bovinos, em propriedades localizadas em municípios dos Estados de São Paulo e Minas Gerais, sendo três de exploração leiteira, um de gado de corte e um misto, com animais soropositivos ao BoHV-1, além de um rebanho controle, sem anticorpos contra essa enfermidade. Das 278 amostras analisadas, 54,68% (152/278) foram positivas ao BoHV-1, 69,70% (194/278) ao BVDV-1 e 34,33% (96/278) ao VLEB. Na análise estatística, ao relacionar cada enfermidade com o tipo de exploração do rebanho e a idade dos animais, houve diferença significativa, indicando que estas variáveis são fatores de risco para as enfermidades estudadas. Em relação ao tipo de exploração, os rebanhos leiteiros foram mais suscetíveis ao BoHV-1 e a LEB (81,31% e 49,53% respectivamente, (α = 1 ) enquanto no rebanho de gado de corte o BVDV-1 teve maior ocorrência (94,74%, α = 1). A idade foi fator de risco apenas para o BoHV-1 e a LEB, sendo os animais mais velhos os mais suscetíveis (α = 1). As associações entre o BoHV-1 e o BVDV-1, e o BoHV-1 e a LEB também foram significativas (α = 5 e α = 1 respectivamente), indicando que em rebanhos infectados por BVDV-1 e/ou LEB, a probabilidade de se encontrar o BoHV-1 é maior do que naqueles onde não ocorre essas duas enfermidades. / The present research had as objective to verify the variation of the occurrence of Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR) by association with two viral infections that affect the immune system, Bovine Viral Diarrhoea (BVD) and enzootic bovine leukosis (EBL), in six farms where vaccination against these diseases was not adopted. Serum samples had been analyzed by the virus neutralization (VN) test for IBR and BVD diagnosis, and agar gel immunodiffusion (IDGA) test for EBL diagnosis. Five cattle herds with BoHV-1 seropositive animals had been selected in the states of São Paulo and Minas Gerais, three of them exploiting dairy cattle, one exploiting beef cattle and one exploiting mixed cattle, in addition to a control herd without seropositive animals. From 278 analyzed samples, 54.68% (152/278) reacted to the BoHV-1, 69.70% (194/278) to the BVDV-1, and 34.33% (97/278) to the EBLV. The statistic analysis showed a significant difference (α = 1) in infection occurrence according to the kind of exploitation and the age of the animals. Dairy cattle were more sensitive to the BoHV-1 (81.31%) and to the EBLV (49.53%) and less to BVDV-1 infection (45.79%). Among the beef herds, the major occurrence was BVDV-1 infection (94.74%), followed by BoHV-1(34.19%) and EBLV (3.95%). The age was a risk factor (α = 1) only for BoHV-1 and EBLV. The associations between BoHV-1 and BVDV-1 infections (α = 5) and between BoHV-1 and EBLV infections (α = 1) also indicated that among BVDV-1 and/or EBLV infected herds the probability of finding BoHV-1 is higher than among herds where these two infections does not occur.

Orientador: Dirlei Antonio Berto / Banca: Margarida Barros / Banca: Rosemeire da Silva Filardi / Resumo: Utilizaram-se 126 leitões de genética comercial, desmamados com idade média de 21 dias (6,11 kg ± 0,42). O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com seis tratamentos (Rações com 100% de inclusão de premix de microminerais inorgânico (PMI)- 3,00 kg/T; rações com 0%, 25%, 50%, 75% ou 100% de inclusão de premix de microminerais em forma orgânica (PMO), equivalente a 0; 0,75; 1,50; 2,25 ou 3,00 kg/T, respectivamente) sete repetições e três animais por parcela. No período experimental total (21 aos 63 dias de idade), os níveis crescentes do PMO nas rações determinaram efeito quadrático no ganho de peso diário (GPD), conversão alimentar (CA), porcentagem de Hematócrito (Ht), Hemoglobina (Hb), Hemoglobina corpuscular média (HCM), Volume corpuscular médio (VCM), e Plaquetas (Pq). Comparando-se as médias do tratamento com PMI com cada um dos demais, observou-se que os leitões alimentados com rações sem premix de microminerais apresentaram menores valores de GPD, Ht, Hb, HCM, VCM e Pq, e pior CA, enquanto aqueles que receberam rações com 25% de PMO tiveram menores valores para Ht e Hb, comparado com aqueles que receberam 100% de SMI. O PMO estudado pode substituir as fontes inorgânicas das rações de leitões, com níveis de suplementação 50% inferior, sem prejuízo no desempenho e com menores custos em ração/kg de ganho de peso e sem alterar os parâmetros hematológicos / Abstract: One hundred and twenty-six weaned piglets with 21 days of age (6.11 kg ± 0,42) were used. A completely randomized block design was used, with six treatments (Diets with 100% inclusion of inorganic microminerals premix (IMP) - 3.00 kg/T; diets with 0%, 25%, 50%, 75% or 100% of inclusion of organic microminerals premix (OMP), equivalent to 0; 0.75; 1.50; 2.25 or 3.00 kg/T, respectively), seven replicates and three animals per plot. In the total experimental period (21 to 63 days old), increasing OMP in diets led to a quadratic effect on the daily weight gain (DWG), feed conversion (FC), Hematocrit percentage (Ht), Hemoglobin (Hb), Mean corpuscular hemoglobin (MCH), Mean corpuscular volume (MCV) and Platelets (Pq). Comparing IMS means with those of the other treatments, the animals fed diets with no microminerals premix showed lower DWG, Ht, Hb, MCH and Pq, and lower FC. Those receiving diets with 25% of OMP had lower Ht and Hb compared with those who received 100% of IMP. Considering the nursery phase, OMP can replace inorganic sources in piglets diets with 35% less supplementation resulting in ununpaired performance and low cost of feed/kg of weight gain and no changes in hematological parameters / Mestre

O Torque teno vírus suíno é classificado como pertencente à família Anelloviridae gênero Iotatorquevirus que compreende as espécies: Torque teno sus virus 1a (TTSuV1a) e Torque teno sus virus 1b (TTSuV1b); e o gênero Kapatorquevirus que compreende apenas a espécie Torque teno sus virus k2 (TTSuVk2). O TTSuV foi identificado como potencial agente causador de falhas reprodutivas em porcas, como agente desencadeante nos quadros de doenças associadas ao circovírus suíno tipo 2 (PCVAD) e em associação com outros agentes como o vírus da síndrome respiratória e reprodutiva dos suínos (PRRSV), vírus da influenza suína (SIV) e Mycoplasma hyopneumoniae como co-agentes na manifestação clínica do complexo respiratório suíno (PRDC). No presente estudo foi utilizada uma PCR direcionada a região não traduzida do genoma viral (UTR), e foi investigado um total de 391 amostras divididas entre fetos abortados e mumificados, leitões natimortos, soro, fezes e pulmão de suínos de dez propriedades localizadas no Estado de São Paulo. Diferenças entre as frequências do TTSuV1 e do TTSuVk2 foram comparadas entre amostras de porcas com problemas reprodutivos (fetos abortados e mumificados e leitões natimortos), diferentes fases da criação de suínos (porcas, leitões da creche e crescimento), leitões apresentando ou não diarréia, entre animais da terminação vacinados ou não contra o PCV2 e ainda entre amostras positivas e negativas para o PCV2. Amostras positivas de pulmão de suíno e um pool de soro de Porco Monteiro do Pantanal foram submetidos a uma PCR para amplificação da ORF1 de ambos os gêneros do TTSuV, seguida pela clonagem e posterior sequenciamento para reconstrução da filogenia. Foi investigada a ocorrência de eventos de recombinação entre as amostras, pressão de seleção e propriedades da proteína relacionadas à ligação com anticorpos. O TTSuVk2 foi mais presente infectando tanto fetos abortados quanto leitões natimortos. Porcas e leitões da creche foram mais frequentemente infectados pelo TTSuV1 enquanto que leitões do crescimento pelo TTSuVk2. A coinfecção (TTSuV1 + TTSuVk2 + PCV2) foi mais frequente em amostras fecais diarreicas que nas não diarreicas. Animais da terminação apresentaram alta frequência de coinfecção (TTSuV1 + TTSuVk2), sendo ainda maior na associação com o PCV2. A filogenia construída pelo método neighborjoing baseada na sequência da ORF1 revelou existir quatro tipos do TTSuV1 (1a, 1b, 1c e 1d) e sete subtipos do TTSuVk2 (2a, 2b, 2c, 2d, 2e, 2f, 2g) circulantes nas populações de suínos domésticos e ferais do Brasil. Entre as estirpes virais circulantes foram detectados eventos de recombinação intra-hospedeiro, inter-hospedeiro, intra-genótipo e inter-genótipo. A região carboxi-terminal da proteína demonstrou agrupar características relacionadas à ligação com anticorpos. Este estudo é o primeiro a caracterizar geneticamente amostras de TTSuV circulantes em suínos domésticos e ferais do Brasil e contribui para um melhor entendimento sobre a epidemiologia do vírus. / The porcine torque teno virus is classified within the Anelloviridae family, genus Iotatorquevirus comprising the species: Torque teno sus virus 1a (TTSuV1a) and Torque teno sus virus 1b (TTSuV1b). The genus Kapatorquevirus comprises only one species, the Torque teno sus virus k2 (TTSuVk2). TTSuV was identified as a potential agent of reproductive failure causes in sows, as a trigger agent associated with porcine circovirus associated diseases (PCVAD) and in combination with other agents such as porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRSV), swine influenza virus (SIV) and Mycoplasm hyopneumoniae as a co-agent in the clinical manifestation of porcine respiratory disease complex (PRDC). In this study, PCR targeting the untranslated region (UTR) of the virus genome was used to investigate a total of 391 samples within aborted and mummified fetuses, stillborn piglets, serum, feces and lungs of pigs from ten different properties located at São Paulo State. Differences between frequencies of TTSuV1 and TTSuVk2 were compared among samples of sows with reproductive failure (aborted and mummified fetuses and stillborn piglets), different phases of pig breeding (sows, nursery and growing piglets), samples from piglets with diarrhea or not, finishing pigs vaccinated or not against PCV2 and between positive and negative samples for PCV2. Positive lung samples from pigs and a pool of sera from feral pigs were used to PCR amplification for the ORF1 of both genera of TTSuV, followed by cloning and subsequent sequencing to reconstruct the phylogeny. The occurrence of recombination events among the samples, selection pressure and protein-related antibodies binding properties was investigated. The TTSuVk2 was more frequent infecting both aborted fetuses as stillborn piglets. Sows and nursery piglets were frequently more infected by TTSuV1 while growing piglets by TTSuVk2. The coinfection (TTSuV1 + TTSuVk2 + PCV2) was more frequent in diarrheic stool samples than in the non-diarrheic. Finishing pigs showed high frequency of coinfection (TTSuV1 + TTSuVk2) and and increase of the coinfection in association with PCV2. Phylogeny constructed by neighborjoing method based on the ORF1 sequence revealed the existence of four types TTSuV1 (1a, 1b, 1c and 1d) and seven subtypes of TTSuVk2 (2a, 2b, 2c, 2d, 2e, 2f, 2g) circulating within populations of domestic and feral pigs in Brazil. Among circulating viral strains, intra-host, inter-host, intra-and inter-genotype recombination events were detected. The carboxy-terminal region of the protein showed the have characteristics related with antibodies binding activity. This study is the first to genetically characterize samples of TTSuV circulating in domestic and feral pigs from Brazil and contributes to a better understanding of the epidemiology of the virus.

Acute diarrhea is the second leading cause of mortality among children under 5 years of age in developing countries. The pathogens most strongly associated with diarrhea is rotavirus followed by enteric pathogens such as bacteria, helminthes and protozoan. Adequate sanitation and water supply contribute to decrease acute diarrhea incidence of most etiologic agents, although vaccination remains the most important intervention to control rotavirus acute diarrhea. This study aimed to describe environmental exposures and spatial analysis associated with acute diarrhea and enteric pathogens among rotavirus vaccinated infants from Laranjeiras, Sergipe, Brazil. The children live in an area covered by Saúde da Família National Program and were 2 to 11 months old at enrollment. All reported children were followed for 12 months. Demographic, socioeconomic and environmental data were obtained from a questionnaire, and immunization data were obtained from children vaccination card. Children stool samples were collected each month in order to run laboratory analyses. The household spatial localization was obtained by using a Global Positioning System (GPS). Spatial analysis was performed using the TerraView computer program and Kernel intensity estimation. A total of 1,113 stool samples were collected, with 80 samples associated to diarrhea episodes. Diarrhea incidence rate was 0.50 ± 0.99 episodes/child/year. Overall, we observed 5.1% of Ascaris lumbricoides infection, 3.0% of Endolimax nana infection, 2.6% of rotavirus infection and 0.9% of Giardia lamblia infection. We observed rotavirus in 3.75% of stool samples associated with diarrhea but the majority (11.25%) of known diarrhea episodes was associated with helminthes and protozoan infections. There was no influence of environmental exposures on the number of episodes of diarrhea and enteroinfecções suggesting that environmental exposures are similar for the entire study sample. We observed some changes on spatial distribution of intestinal infections and diarrhea episodes along the four evaluated trimesters, especially on the urban center and adjacent areas. In conclusion, the studied infants live equally in poor urban drainage and poor sewerage areas which probably explain the significant rates of helminthes and protozoan infections appearing in early life. The low diarrhea incidence rate in this rotavirus vaccinated population and the low number of symptomatic rotavirus infection compared to asymptomatic infections may highlight the vaccination role as an important prevention strategy of acute diarrhea among young children. / A diarreia aguda é a segunda causa de mortes em crianças menores de 5 anos em vários países em desenvolvimento, sendo a infecção pelo Rotavírus a causa mais comum, seguida das infecções por enterobactérias e enteroparasitos. Medidas de saneamento e boa qualidade da água podem diminuir a ocorrência da doença, mas em relação ao Rotavírus a vacinação específica tem papel fundamental. Este estudo teve o objetivo de conhecer as características ambientais e analisar espacialmente a diarreia aguda e as enteroinfecções em lactentes numa situação de uso ampliado da vacina contra o Rotavírus, no município de Laranjeiras/SE. Os lactentes residiam nas áreas de cobertura das Equipes de Saúde da Família, com a faixa etária entre dois e onze meses de idade e foram acompanhados durante 12 meses. Através de um questionário foram obtidos os dados demográficos, socioeconômicos e ambientais e cobertura vacinal contra rotavírus. Foram coletados mensalmente amostras de fezes para realização de exames parasitológicos, bacteriológicos e presença do rotavírus. Para a localização espacial dos domicílios foi utilizado o Sistema de Posicionamento Global (GPS). A análise espacial foi realizada no programa TerraView, utilizando-se o estimador de intensidade Kernel. Foi coletado um total de 1.113 amostras de fezes, sendo 80 associadas a episódios de diarreia. Obteve-se uma incidência média anual de episódios de diarreia de 0,50 ± 0,99/criança/ano. A presença do rotavírus ocorreu em 3,75% dos casos, enquanto que a maior parte (11,25%) das diarreias agudas com causa conhecida aconteceu na presença de infecções helmínticas e por protozoários. No total de 1113 amostras, foram encontrados: Ascaris lumbricoides (5,1%), Endolimax nana (3,0%), rotavírus (2,6%) e Giardia lamblia (0,9%). Não houve influência das condições ambientais no número de episódios de diarreia e das enteroinfecções. Ocorreram pequenas variações na distribuição espacial das enteroinfecções e dos episódios de diarreia, durante os quatro trimestres, destacando-se o centro urbano e áreas adjacentes com maior intensidade. Conclui-se que as características ambientais demonstram homogeneidade em relação às precárias condições de saneamento básico nas moradias dos lactentes, contribuindo para um significativo número de enteroparasitos, até mesmo nesta faixa etária. O baixo número de episódios de diarreia/criança/ano nesta população com ampla cobertura vacinal contra rotavírus sugere o papel da vacinação como uma importante medida de prevenção. O efeito atenuador da vacina também pode ser demonstrado pelo número de casos de infecção por rotavírus assintomáticos em maior número em comparação com os casos sintomáticos.

Escherichia coli enteroinvasora (EIEC) é um dos agentes etiológicos da disenteria bacilar, caracteriza-se pela destruição do epitélio do cólon provocado pela resposta inflamatória induzida após invasão da mucosa por bactérias. Cepas de EIEC são bioquímica, genética e patogênica semelhante a Shigella spp. A patogenicidade de EIEC e Shigella dependem da presença da pInv plasmídeo, que contém os genes necessários para a colonização bacteriana na mucosa intestinal. Recentemente, demonstrou-se que genes plasmidias ospC1, ospG e ospF de S. flexneri estão envolvidos na inibição da resposta inflamatória em células epiteliais intestinais, um fator importante na iniciação da colonização bacteriana e produção de doença. Como a EIEC mostrou doença menos grave, foi analisada as sequências de aminoácido, avaliada a transcrição destes genes plasmídiais e resposta inflamatória modulada por este micro-organismo na célula epitelial intestinal Caco-2. As células Caco-2 foram infectadas em momentos diferentes com 11 sorotipos de EIEC e S. flexneri (M90T). Os dados sobre a capacidade de invasão e sobrevivência de bactérias, expressão de genes de bactérias e da quimiocina IL-8 foram obtidos por CFU, RT-PCR, e ELISA, respectivamente. A significância estatística foi avaliada por ANOVA de dois fatores. Os 11 sorotipos de EIEC estudados apresentaram similaridade de 100% com S.flexneri para OspC1 e OspF,contudo, foram diferentes na homologia do OspG. Quando comparamos as sequências de aminoácido dos 11 sorotipos observamos 100% de similaridade entre eles para OspG, sugerindo o envolvimento destas proteínas na modulação da resposta imune induzida por estes micro-organismos. Os sorotipos de EIEC apresentam diferenças na capacidade de invasão dos enterócitos. Algumas diferenças significativas foram observadas na transcrição dos genes e na produção de IL-8. Os sorotipos de EIEC O29: H-e O167: H-apresentou um baixo transcrição de genes ospC1 e ospF, e um aumento significativo na produção de IL-8 quando comparado com outros sorotipos. Além disso, demonstrou que a maior transcrição destes genes por alguns sorotipos de EIEC parecem estar relacionados com a menor indução de IL-8. Estes dados sugerem que as proteínas OspC1 e OspF desempenham um papel na resposta inflamatória. No entanto, não se observou relação na transcrição ospG para a produção de IL-8. Estes resultados sugerem que as proteinas efetoras OspC1 e OspF estão envolvidas na inibição da resposta inflamatória em células epiteliais do intestino favorecendo a invasão da EIEC. / Enteroinvasive E. coli (EIEC) is one of the etiological agents of bacillary dysentery, it is characterized by the destruction of the colonic epithelium caused by the inflammatory response induced upon invasion of the mucosa by bacteria. Strains of EIEC are biochemical, genetic and pathogenic similar to Shigella spp. The pathogenecity of EIEC and Shigella depend on the presence of the plasmid pInv, which contains the genes necessary for bacterial colonization in the intestinal mucosa. Recently, it was demonstrated that the plasmid genes ospC1, ospG and ospF of S. flexneri are involved in inhibition of the inflammatory response in intestinal epithelial cells, an important factor in the initiation of bacterial colonization and production of disease. As EIEC has showed less severe disease, we evaluated the transcription of these plasmid genes and inflammatory response modulated by this microorganism in the intestinal epithelial cell Caco-2. The Caco-2 cells were infected in different times with 11 serotypes of EIEC and S. flexneri M90T strain. The data about sequences of amino acids, invasiveness and survival of bacteria, bacterial genes expression, and chemokine IL-8 were obtained by CFU, RT-PCR, and ELISA, respectively. The statistical significance was evaluated by two-way ANOVA. All EIEC serotypes studied showed 100% similarity with S.flexneri to OspC1 and OSPF, however, were different in the homology of OspG. Compared the amino acid sequences of the 11 serotypes observed 100% similarity between them to OspG, suggesting the involvement of them in modulating of the immune response induced by these microorganisms. There were no differences in the invasion the enterocytes among EIEC serotypes. However, some significant differences were observed in the transcription of those genes and production of IL-8. The EIEC serotypes O29:H- and O167:H- showed a low transcription of genes ospC1 and ospF, and a significant increase in production of IL-8 when compared with other serotypes. Furthermore, it was shown that the high transcription of ospF and ospC1 by some EIEC serotypes are related to low induction of IL-8. These data suggested that the proteins OspC1 and OspF play a role in the inflammatory response. However, we did not observed association between ospG transcription to the production of IL-8. These results lead us to believe that the effector proteins OspF and OspC1 are involved in inhibition of the inflammatory response in intestinal epithelial cells favoring the EIEC invasion.

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Na diarreia aguda não bacteriana, os adenovírus entéricos constituem um dos importantes agentes etiológicos da doença. Os adenovírus humanos (HAdV) pertencem à família Adenoviridae e ao gênero Mastadenovirus, cujos membros estão classificados em 7 espécies (A-G) e 54 sorotipos. Dentre estes, os sorotipos 40 e 41, ambos da espécie F, são os mais comumente associados com a DDA. Considerando-se, então, a importância da DDA em países em desenvolvimento, o grande número de casos que não são esclarecidos e o pouco conhecimento sobre a infecção e a participação dos HAdV na gênese da DDA, em Juiz de Fora, Minas Gerais, foi realizado o presente estudo. Entre janeiro de 2007 e dezembro de 2010, foram analisados 395 espécimes fecais diarréicos, provenientes de indivíduos de várias idades, atendidos em serviços ambulatoriais e hospitalizados. A presença dos HAdV foi detectada pela reação de PCR , utilizando-se os iniciadores específicos e a caracterização molecular das amostras positivas foi feita pelo seqüenciamento e análise filogenética das sequências parciais do gene do Hexon. Para as análises estatísticas, foi utilizado o programa SPSS versão 13.0, tendo se adotado um valor de significância como p<0,05. A prevalência da infecção por HAdV, no período 2007-2010, foi de 10,9% (43/395). Os resultados mostraram que não houve correlação significante entre a procedência da amostra (ambulatorial X hospitalar) e a ocorrência da infecção (p=0,152), o mesmo tendo sido observado em relação ao gênero do indivíduo infectado (p=0,393). Por outro lado, a maioria dos casos positivos foi detectada em crianças de até 24 meses de idade, mostrando uma correlação estatisticamente significante entre a idade dos indivíduos infectados e a ocorrência da infecção (p=0,007). Na maioria dos casos de infecção pelo HAdV (36/43), este foi o único agente viral detectado, no entanto, foram observados casos de coinfecção HAdV/Rotavirus (5/43) e HAdV/Norovirus (2/43). A análise filogenética das sequências parciais do gene do Hexon, de 35 amostras positivas, revelou que todas agruparam com amostras de HAdV da espécie F, sorotipo 41, confirmando assim, a associação de HAdV entéricos, nos casos estudados. Este levantamento epidemiológico revelou a presença e a circulação destes vírus na população de Juiz de Fora, no período avaliado, bem como sua importante participação na gênese da DDA, permitindo assim, esclarecer uma boa parte dos casos da doença, que normalmente ficaria sem definição etiológica. / Acute diarrheal disease (ADD) is still the major cause of child morbidity and mortality in developing countries. Among the non-bacterial diarrhea, enteric adenoviruses are one of the most important etiologic agents of disease. Human adenoviruses (HAdV) belongs to the Adenoviridae family and Mastadenovirus genus. The virus are classified into seven species (A-G) and 54 serotypes. Among them, serotypes 40 and 41, both of the species F, are the most commonly associated with ADD. Taking in consideration the importance of the DDA in developing countries, the large number of cases that don’t have the etiologic agent identified and the lack of knowledge about the participation of HAdV infection and the pathogenesis of ADD, we performed this study in Juiz de Fora, Minas Gerais. Between January of 2007 and December of 2010 395 diarrheal fecal specimens originating from individuals of various ages treated in ambulatory and hospitalized were analyzed. The presence of HAdV was detected by PCR, using specific primers, and molecular characterization of positive samples was performed by sequencing and phylogenetic analysis of partial sequences of the hexon gene. For statistical analyzes, we used SPSS version 13.0, adopting a value of p <0.05 as significant. The prevalence of infection by HAdV between 2007-2010 was 10.9% (43/395). The results showed no significant correlation between the origin of the sample (hospital X ambulatory) and the occurrence of infection (p = 0.152), and the same was observed in relation to gender of the infected person (P=0,393). Moreover, the majority of positive cases was detected in children under 24 months of age, showing a statistically significant correlation between the age of the infected individuals and the occurrence of infection (p=0,007). In most cases of infection HAdV (36/43), this was the only viral agent detected, however, cases of co-infection HAdV / Rotavirus (5/43) and HAdV /Norovirus (2/43) were identified. Phylogenetic analysis of partial sequences of the hexon gene from 35 positive samples revealed that all samples clustered with HAdV species F, serotypes 41, confirming the association of enteric HAdV in the cases of this study. This epidemiological survey revealed the presence and circulation of these viruses in the population of Juiz de Fora in the period studied, as well as its important role in the genesis of the DDA, our data identified a good number of cases of the disease, which normally remains unidentified.

Intimina é o principal fator de virulência envolvido na patogênese de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) e de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC). A detecção de EHEC e EPEC típica ou atípica é de fundamental importância na definição da conduta terapêutica das infecções promovidas por E. coli, que ainda são a principal causa de diarreia aguda em crianças e adultos em muitos países desenvolvidos e em desenvolvimento. Anticorpos são ferramentas importantes na detecção de diversos patógenos. Neste trabalho avaliou-se a sensibilidade e especificidade dos anticorpos policlonal e monoclonal anti-intimina frente a isolados de EPEC e EHEC por immunoblotting. Os anticorpos apresentaram 100% de especificidade e a sensibilidade foi de 97%, 92% e 78%, quando se utilizou a fração enriquecida em IgG do soro de coelho, antissoro de rato e anticorpo monoclonal, respectivamente. Esse anticorpo monoclonal anti-intimina foi caracterizado como IgG2b e 1 &#181;g desse anticorpo reconheceu 0,6 &#181;g de intimina purificada com uma constante de dissociação de 1.3 x 10-8 M. A menor reatividade do anticorpo monoclonal em relação aos anticorpos policlonais levou-nos à clonagem e expressão do fragmento variável de cadeia simples desse anticorpo (scFv). Para isso, o mRNA do hibridoma anti-intimina foi extraído, reversamente transcrito para cDNA e amplificadas as cadeias leve e pesada da fração variável do anticorpo, utilizando iniciadores aleatórios comerciais. As cadeias amplificadas foram ligadas ao vetor pGEM-T Easy e sequenciadas. Iniciadores específicos foram desenhados e utilizados em uma estratégia de amplificação e união das cadeias, formando o scFv, que por sua vez foi clonado no vetor de expressão pAE. Linhagem de E. coli BL21(DE3)pLys foi transformada com o plasmídeo pAE-scFv antiintimina e submetida à indução protéica. O scFv anti-intimina foi expresso de forma insolúvel, solubilizado, purificado e submetido ao ensaio de refolding. O rendimento obtido foi de 1 mg de proteína por 100 mL de cultivo bacteriano. Para testar a funcionalidade do scFv, foram realizados ensaios de ELISA de captura e imunofluorescência. Os resultados mostraram que 275 ng de scFv reagiram com 2 &#181;g de intimina purificada a uma absorbância de aproximadamente 0,75 e por imunofluorescência mostrou uma forte reatividade ao isolado de EPEC típica E2348/69. Este estudo demonstrou que o anticorpo recombinante anti-intimina obtido foi capaz de reconhecer a região conservada de intimina (Int388-667) na forma purificada e a intimina &#945; no isolado de EPEC típica, e se mostrou mais eficiente que o anticorpo monoclonal nativo. / Intimin is the major virulence factor involved in the pathogenesis of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC). The detection of EHEC and typical or atypical EPEC has fundamental importance in defining the therapeutic management of infections caused by E. coli, which are still the leading cause of acute diarrhea in children and adults in many developed and developing countries. Antibodies are important tools in the detection of several pathogens. In this study it was evaluated the sensitivity and specificity of polyclonal and monoclonal antibodies against intimin in the detection of EPEC and EHEC by immunoblotting. All employed antibodies showed 100% specificity and the sensitivity was 97%, 92% and 78% for rabbit anti-intimin IgG-enriched fraction, rat antisera and monoclonal antibody, respectively. This anti-intimin monoclonal was characterized as IgG2b and 1 mg recognized 0.6 &#181;g of purified intimin with a dissociation constant of 1.3 x 10-8 M. The less extent reactivity of monoclonal led us to clone and express the single chain fragment variable of this antibody (scFv). Thus, the anti-intimin hybridoma mRNA was extracted, reverse transcribed to cDNA and the light and heavy chains of variable fragment of the antibody were amplified using commercial random primers. The chains were amplified, ligated to the pGEM-T Easy vector and the insert was sequenced. Specific primers were designed and used in a strategy to amplify and link the chains, obtaining the scFv, which was cloned into the pAE expression vector. E. coli BL21(DE3)plys was transformed with the pAE-scFv anti-intimin plasmid and subjected to induction of protein expression. The scFv anti-intimin, expressed in the insoluble fraction, was purified and submitted to refolding. The yield was 1 mg of protein per 100 mL of bacterial culture. To test the functionality of the scFv, ELISA and immunofluorescence assays were performed. The results showed that 275 ng of scFv reacted with 2 &#181;g of purified intimin resulting in an absorbance of 0.75. By immunofluorescence it was observed a strong reactivity to the typical EPEC isolate E2348/69. This study demonstrated that the recombinant anti-intimin antibody obtained was able to recognize the conserved region of intimin (Int388-667) in its purified form and &#945; intimin in a typical EPEC isolate, and was more efficient than the native monoclonal antibody.

O uso de aditivos em dietas tem sido recomendado para controlar os problemas relacionados ao desmame precoce e melhorar o desempenho dos leitões. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos da inclusão do sorbitol em dietas complexas de leitões recémdesmamados sobre o desempenho, a frequência de diarreia, a digestibilidade aparente de nutrientes, a morfometria dos órgãos e a viabilidade econômica. Foram utilizados 120 leitões recém-desmamados (6,22 ± 0,28 kg) em um experimento em blocos completos casualizados (definidos pelo peso inicial e sexo), com cinco tratamentos, oito repetições (blocos) por tratamento e três animais por unidade experimental (baia). Os tratamentos foram: dieta basal com 120 ppm de clorohidroxiquinolina e dieta basal com 0, 1, 1,5 ou 2% de sorbitol. Para a determinação da digestibilidade aparente dos nutrientes e da energia, foi utilizado o método da coleta parcial de fezes. Ao final do experimento, foi abatido um animal de cada baia para avaliação da morfometria dos órgãos. De maneira geral, a inclusão de até 2,0% de sorbitol em dietas complexas de leitões recém-desmamados não afeta (P>0,05) o desempenho dos animais, a ocorrência de diarreia, a morfometria dos órgãos, a digestibilidade aparente dos nutrientes e a viabilidade econômica, enquanto que o uso do antimicrobiano clorohidroxiquinolina prejudica o desempenho (P<0,05) e aumenta (P<0,01) o custo de produção dos leitões em fase de creche. / Feed additives have been recommended to overcome early weaning problems and to improve pig performance. The purpose of this study was to evaluate growth performance, frequency of diarrhea, apparent digestibility of nutrients, organs morphometry and economic feasibility of weanling pigs fed complex diets containing sorbitol. One hundred and twenty weanling pigs (6.22 ± 0.28 kg) were used in a randomized complete block design experiment with five treatments, eight replications (blocks) per treatment and three pigs per experimental unit (pen). The treatments were: basal diet with 120 ppm of chlorhydroxyquinoline or basal diet with 0, 1, 1.5 or 2% of sorbitol. The marker method was used in digestibility assay. At the end of experimental period, one animal per experimental unit was slaughtered to evaluate of organs morphometry. Overall, dietary added sorbitol up to 2.0% in weanling pig complex diet does not affect (P>0.05) growth performance, frequency of diarrhea, apparent digestibility of nutrients, organs morphometry and economic feasibility, while the antimicrobial agent chlorhydroxyquinoline depresses (P<0.05) growth performance and increases (P<0.01) the cost per kilogram of weight gain of weanling pig.