A doença de Chagas é um problema de saúde pública, com dados preocupantes referentes ao número de pessoas contaminadas e daquelas que ainda permanecem expostas ao risco de infecção. As doenças tropicais desafiam as pesquisas científicas, pois os medicamentos existentes apresentam sérios efeitos colaterais. As tripanossomíases são doenças de grande importância no Brasil, como é o caso da doença de Chagas. Estudos realizados em diversos países têm relatado que muitas espécies vegetais possuem atividade contra o agente etiológico da doença de Chagas, Trypanosoma cruzi. Ácido ursólico e seu isômero, ácido oleanólico, pertencem à classe de compostos triterpenóides e são amplamente distribuídos no reino vegetal e têm sido frequentemente isolados como mistura isomérica. Nesse sentido, a proposta para o presente estudo foi avaliar a atividade tripanocida, sobre a cepa Y e Bolívia de T. cruzi, dos triterpenos ácido ursólico e ácido oleanólico, sintetizar e avaliar a atividade tripanocida do sal derivado de ácido ursólico. As substâncias foram administradas nas concentrações de 20 e 50 mg/kg por via intraperitoneal e oral, após a avaliação da dose letal média (DL50). As três substâncias empregadas nas concentrações de 20 e 50 mg/kg, administradas por via intraperitoneal não foram capazes de reduzir a parasitemia dos animais experimentalmente infectados com as cepas Y e Bolívia de T. cruzi. Entretanto, as três substâncias exibiram atividade tripanocida significativa, na concentração de 50 mg/kg, administradas por via oral, em animais infectados com a cepa Y de T. cruzi. Para a cepa Bolívia de T. cruzi, as substâncias administradas por via oral exibiram atividade biológica na concentração de 20 mg/kg, sendo significativa apenas para o triterpeno ácido ursólico. A análise histológica realizada não demonstrou uma correlação significativa entre os níveis parasitêmicos e o parasitismo tecidual, para todos os grupos avaliados. A avaliação do perfil hepatobiliar e renal das substâncias foi realizada a fim de se verificar possíveis efeitos tóxicos das mesmas. Entretanto, não foi observada nenhuma diferença estatisticamente significativa entre os grupos tratados e o grupo controle, indicando que o aumento dos níveis parasitêmicos não está associado ao efeito das substâncias no tecido. Através da avaliação do efeito dos triterpenos sobre a resposta imune, verificamos uma diminuição dos níveis plasmáticos de IFN- e um aumento das concentrações de IL-10. Dessa maneira, nós sugerimos que o tratamento com essas substâncias pode direcionar a resposta imune para o padrão Th2 e, em conseqüência desse efeito imunossupressor, uma maior quantidade de formas tripomastigotas poderia ser observada na circulação do hospedeiro. / Chagas disease is a public health problem with worrisome data on the number of infected people, not to mention the population that still remains at risk of infection. Tropical diseases defy scientific research since the existing drugs have serious side effects. Trypanosomiases, such as Chagas disease, are of great importance in Brazil. Studies in several countries have reported that many plant species display activity against Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease. Ursolic acid and its isomer, oleanolic acid, belong to a class of triterpenoid compounds that is widely distributed in the plant kingdom and has frequently been isolated as an isomeric mixture. In the present study, the trypanocidal activity of the triterpenoids ursolic acid and oleanolic acid was evaluated against the Y and Bolivia strains of T. cruzi. In addition, the potassium salt derivative of ursolic acid was synthesized and also tested. The triterpenoids were administered intraperitoneally and orally at concentrations of 20 and 50 mg / kg, after evaluation of the median lethal dose (LD50). At the concentrations of 20 and 50 mg / kg, the intraperitoneal administration of each of the substances was not able to reduce parasitemia of the animals infected with the Y and Bolivia strains of T. cruzi. However, ursolic and oleanolic acid, as well as the potassium salt derivative of ursolic acid exhibited significant trypanocidal activity at a concentration of 50 mg / kg when they were orally administered to animals infected with the Y strain of T. cruzi. On the other hand, oral administration of the tested compounds at a concentration of 20 mg / kg evidenced biological activity, which was significant for ursolic acid only. For the most of studied groups, histological analysis did not demonstrate a significant correlation between the levels of parasitemia and tissue parasitism. Determination and evaluation of biochemical parameters in the serum of experimental animals was performed, to assess the hepatic, biliary, and renal toxic effects of the substances. There were no statistically significant differences between the treated groups and the control group, indicating that the increase in parasitemia is not associated with the effects of the substances in the tissue. We suggest the hypothesis of an immunosuppressive effect, since there was a decreased plasma levels of IFN- after treatment with the triterpenes. Moreover, the treated groups also exhibited increased levels of IL-10. Therefore, we suggest that treatment with the substances could be directing the immune response toward the Th2 type and, as a consequence of this immunosuppressive effect, a greater amount of trypomastigotes could be observed in the circulation of the host.

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2016-09-27T15:41:08Z No. of bitstreams: 1 marcelomaiacaixetademelo_tese.pdf: 11249406 bytes, checksum: 55e0affbf2716e2a9db836ff23bb3bc8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T15:41:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcelomaiacaixetademelo_tese.pdf: 11249406 bytes, checksum: 55e0affbf2716e2a9db836ff23bb3bc8 (MD5) Previous issue date: 2014-06-27 / Introduction: Chagasic megaesophagus (ME) is associated with a higher occurrence of esophagus cancer, while adenomas and adenocarcinomas are rare in the Chagasic Megacolon (MC). Concentration alterations in some proteins may be associated either with esophagic and colorectal carcinogenesis or with chagasic megacolon and megaesophagus. Objective: Study the association between digestive Chagas disease and carcinogenesis, considering the influence of c-Myc, GBP-2, APC, IFN- and T.cruzi proteins. Material and Method: Blocks of paraffin wax containing fragments of mucous membrane early diagnosed as 1 – normal esophagus (n=16); 2 – chagasic megaesophagus (n=10); 3 – normal colon (n=10) and 4 – chagasic megacolon (n=10) were selected. These tissues were analysed by means of immunohistochemical technique using c-Myc, GBP-2, APC, IFN- and T.cruzi antibodies. Results: The result of the GBP-2 protein expression showed higher positivity in ME (100%) when compared to MC (40%) (p = 0.011). Comparing ME with normal esophagus there was significant difference (p = 0.001), having 100% of positivity for GBP-2 in megaesophagus and 31.3% in normal esophagus. In the analysis of the IFN- expression in MC and normal colon a higher positivity was observed in MC (90%) in relation to normal colon (30%) being the difference significant (p = 0.02). As for the expression of IFN- protein, a higher positivity was observed in MC (90%) in relation to ME (40%). Conclusions: A higher frequency of expression of GBP-2 protein in chagasic megaesophagus and IFN- in chagasic megacolon explains, respectively, the increase of espinocellular carcinoma incidence in patients with chagasic megaesophagus and the protector effect of the chagasic megacolon against the colorectal adenocarcinoma. / Introdução: Megaesôfago chagásico (ME) está associado a maior ocorrência do câncer de esôfago enquanto no megacólon chagásico (MC) adenomas e adenocarcinomas são raros. Alteração nas concentrações de algumas proteínas pode estar associada tanto à carcinogênese esofágica e colorretal como ao megacólon e megaesôfago chagásicos. Objetivo: estudar a associação entre forma digestiva da doença de Chagas e carcinogênese, considerando-se a influência das proteínas c-Myc, GBP-2, APC, IFN- e T. cruzi. Material e Método: Foram selecionados blocos de parafina contendo fragmentos de mucosa anteriormente diagnosticados como; (1) esôfago normal (n=16); (2) megaesôfago chagásico (n=10); (3) cólon normal (n=10) e (4) megacólon chagásico (n=10). Esses tecidos foram analisados por meio de técnica imunoistoquímica utilizando os anticorpos c-Myc, GBP-2, APC, IFN- e T. cruzi. Resultados: O resultado da expressão da proteína GBP-2 mostrou maior positividade no ME (100%) quando comparado com MC (40%) (P = 0,011). Comparando ME com esôfago normal houve diferença significativa (P = 0,001), tendo 100% de positividade para GBP-2 no megaesôfago e 31,3% no esôfago normal. Na análise da expressão do IFN- no MC e cólon normal verificou-se maior positividade no MC (90%) em relação ao cólon normal (30%), sendo a diferença significativa (P = 0,02). A expressão da proteína IFN- apresentou maior positividade no MC (90%) em relação ao ME (40%). Conclusões: A maior frequência de expressão das proteínas GBP-2 no megaesôfago chagásico e IFN- no megacólon chagásico explicam, respectivamente, o aumento da incidência de carcinoma espinocelular em portadores de megaesôfago chagásico e o efeito protetor do megacólon chagásico contra o adenocarcinoma colorretal.

Submitted by Suzana Dias (suzana.dias@famerp.br) on 2018-11-09T16:20:01Z No. of bitstreams: 1 SabrinaQueirozArdito_tese.pdf: 553115 bytes, checksum: 3a2e5134532370664d754e2648b56cf0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-09T16:20:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SabrinaQueirozArdito_tese.pdf: 553115 bytes, checksum: 3a2e5134532370664d754e2648b56cf0 (MD5) Previous issue date: 2018-04-06 / Chagas disease is caused by the parasite Trypanosoma cruzi. It is a chronic, systemic disease, which affects about 6 million people in Latin America and 30-40% has cardiomyopathy secondary to this disease. In the vast majority of cases, the main cause of death is related to the final stages of chronic heart failure. Chagas disease has become a growing health problem in non-endemic areas due to migration. Objective: To evaluate the impact of atrial fibrillation on the prognosis of chronic systolic heart failure secondary to Chagas cardiomyopathy. Material and Methods: About 234 patients routinely followed at the Cardiomyopathy Outpatient Service of Hospital de Base of São José do Rio Preto Medical School in the SUS, from January 2000, to December 2010, with the diagnosis of chronic heart failure secondary to Chagas cardiomyopathy were included in the study. A Cox proportional hazard model was used to detect independent predictors of all-cause mortality in the studied population. A survival curve was built for patients with and without atrial fibrillation. In all the circumstances, p value <0.05 was considered statistically significant. Results: Atrial fibrillation was observed in 63 patients (26.9%). In a cox proportional hazard model analysis, beta-blocker therapy ( Hazard Ratio=0.381; 95% Confidence Interval 0.257 to 0.563, p value <0.001), use of metoprolol succinate (Hazard Ratio=0.382; 95% Confidence Interval 0.170 to 0.855, p value=0.019), use of Losartan (Hazard Ratio=0.611; 95% Confidence Interval 0.380 to 0.981, p value =0.041), and left systolic ventricular diameter (Hazard Ratio=1.042; 95% Confidence Interval 1.021 to 1.063, p value <0.001) were determined independent predictors of all-cause mortality. Survival probability at 12, 24, 36, 48 and 60 months was 80%, 65%, 56%, 44% and 37%, respectively, in patients without atrial fibrillation, and 76%, 58%, 48%, 41% and 32% in patients with atrial fibrillation, (p=0.393). Conclusion: Atrial fibrillation has no prognostic significance in patients with chronic systolic heart failure secondary to Chagas Cardiomyopathy. / A doença de Chagas é causada pelo parasita Trypanosoma cruzi. É uma doença crônica, sistêmica, que afeta cerca de seis milhões de pessoas na América Latina, e 30-40% têm cardiomiopatia secundária a essa patologia. Para a grande maioria, a principal causa de morte está relacionada a estágios finais de insuficiência cardíaca crônica. A Doença de Chagas tem se tornado um problema de saúde crescente em áreas não endêmicas devido ao deslocamento e crescimento populacional. Objetivo: Avaliar o impacto da fibrilação atrial no prognóstico da insuficiência cardíaca crônica sistólica secundária à cardiomiopatia da Doença de Chagas. Casuística e Método: Foram incluídos no estudo 234 pacientes seguidos no Ambulatório de Cardiomiopatia do Hospital de Base da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, no Sistema Único de Saúde, no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2010, que apresentavam o diagnóstico de insuficiência cardíaca crônica sistólica secundária à cardiomiopatia da Doença de Chagas. O modelo de risco proporcional de Cox foi utilizado para detectar variável de predição independente de mortalidade geral na população como um todo, bem como para revelar variáveis de predição independentes de mortalidade geral em pacientes com fibrilação atrial. Foi construída curva de sobrevida dos pacientes pelo método de Kaplan-Meier de acordo com as variáveis de predição identificadas. Da mesma forma, construiu-se curva de sobrevida para pacientes com e sem fibrilação atrial. Em todas as circunstâncias, considerou-se valor de p <0,05 como estatisticamente significante. Resultados: A fibrilação atrial foi observada em 63 pacientes (26,9%). Terapia com betabloqueador (Razão de Risco=0,381; Intervalo de Confiança 95% de 0,257 a 0,563, p<0,001), uso de succinato de metoprolol ( Razão de Risco=0,382; Intervalo de Confiança 95% de 0,170 a 0,855, p=0,019), uso de Losartan (Razão de Risco=0,611; Intervalo de Confiança 95% de 0,380 a 0,981, p=0,041), e o diâmetro sistólico do ventrículo esquerdo (Razão de Risco=1,042; Intervalo de Confiança 95% de 1,021 a 1,063, p<0,001) as variáveis de predição independentes de mortalidade geral. A probabilidade de sobrevida em 12, 24, 36, 48 e 60 meses foi de 80%, 65%, 56%, 44% e 37%, respectivamente em pacientes sem fibrilação atrial, e 76%, 58%, 48%, 41% e 32% em pacientes com fibrilação atrial, (p=0,393). Conclusão: A fibrilação atrial não tem significado prognóstico em pacientes com insuficiência cardíaca crônica sistólica secundária à cardiomiopatia da Doença de Chagas.

Submitted by Suzana Dias (suzana.dias@famerp.br) on 2018-11-09T18:03:41Z No. of bitstreams: 1 ChristianeAyo_tese.pdf: 8833199 bytes, checksum: e3a470634a8f41b17966d4b370464f0c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-09T18:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ChristianeAyo_tese.pdf: 8833199 bytes, checksum: e3a470634a8f41b17966d4b370464f0c (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Ocular toxoplasmosis, characterized by an intraocular inflammation, is the most common clinical manifestation of toxoplasmosis, the infectious disease caused by the protozoan Toxoplasma gondii. The lesions can affect the macula and other layers of the retina and the choroid, resulting in retinochoroiditis with different degrees of ocular involvement. Chagas disease is resulting from infection by the protozoan Trypanosoma cruzi. After 20 years of infection, about 30% develop chronic Chagas heart disease, which is clinically manifested by malignant ventricular arrhythmia, thromboembolism, sudden cardiac death, and chronic heart failure. Ten per cent of Chagas patients present the digestive form of the disease, characterized mainly by dilatations of the esophagus and/or colon, due to the denervation process. The progression of the infection, as well as the development of the different clinical forms and different degrees of severity may be related to genetic characteristics of the pathogen and the host. Among the factors related to the host, the immunological response is of special interest with genetic markers playing an important modulating role in this context as they may contribute to the pathogenesis or resistance in the clinical course of these infections. Objective: The present study aimed to verify the hypothesis that KIR genes, their HLA ligands and MICA gene polymorphisms are associated with ocular toxoplasmosis (OT) and the different clinical forms of Chagas disease. Patients and Methods: This study included 297 patients with toxoplasmosis, 148 clinically diagnosed with OT and 149 without OT. Moreover, 267 patients with Chagas disease were enrolled: 78 clinically diagnosed with the digestive form of the disease, 107 with the cardiac form and 82 with the mixed form. The ELISA technique was used to confirm infection by T. gondii and T. cruzi. Polymorphisms of the KIR and MICA genes were identified by PCR-SSOP and nested PCR. Continuous variables were compared using the unpaired t test and the Chi-square test with Yates correction or the Fisher's exact test were used compare the other results. Results: In relation to the toxoplasmosis, MICA genotypes and alleles did not differ between patients with and without OT, or between patients with the primary or recurrent manifestations of the disease. KIR3DS1 gene was positively associated with the development of OT. KIR activating genes along with their HLA ligands (KIR3DS1+/Bw4-80Ile+, KIR2DS1+/C2+ and KIR3DS1+/Bw4-80Ile+) were associated with susceptibility to OT and both its primary and recurrent clinical manifestations. The inhibitory pairs - KIR2DL3/2DL3-C1/C1 and KIR2DL3/2DL3-C1 - were associated with resistance to OT and its clinical manifestations, whereas the combination KIR3DS1-/KIR3DL1+/Bw4-80Ile+ was a protection factor for the development of OT and, in particular, against recurrent manifestations. As for Chagas disease, The MICA-129met allele was associated with the development of left ventricular systolic dysfunction (LVSD) in patients with chronic chagasic cardiomyopathy, while the MICA-129val allele was associated with a protection of developing LVSD. In particular, the MICA-129 met/met homozygous haplotype was associated with the development of severe LVSD and the MICA-129 val/val homozygous genotype protected against this condition. It was also possible to demonstrate that the haplotype MICA*008~HLA-C*06 and the combination between KIR genes and their HLA ligands - KIR2DS2-/KIR2DL2-/KIR2DL3+/C1+ - were associated with susceptibility for the digestive clinical form of Chagas disease. Conclusions: Our results demonstrate that KIR genes may influence both OT and the clinical digestive form of Chagas disease, whereas the MICA gene may influence the clinical forms of Chagas disease, but not the development of OT. / A toxoplasmose ocular, caracterizada por uma inflamação intraocular, é a manifestação clínica mais comum da toxoplasmose, doença infecciosa causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. As lesões podem afetar a mácula, as diversas camadas da retina e a coróide resultando em retinocoroidite com diferentes graus de comprometimento ocular. A doença de Chagas é resultante da infecção pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Após 20 anos de infecção, cerca de 30% dos pacientes desenvolvem a cardiopatia chagásica crônica, que se manifesta clinicamente por arritimia ventricular malígna, tromboembolismo, morte súbita cardíaca e insuficiência cardíaca crônica. Dez por cento dos pacientes apresentam a forma digestiva, caracterizada principalmente por dilatações do esôfago e/ou cólon devido ao processo de denervação. A progressão de uma infecção, assim como o desenvolvimento de diferentes formas clínicas e diferentes graus de gravidade, podem estar relacionadas com as características genéticas do patógeno e do hospedeiro. Dentre os fatores relacionados ao hospedeiro, a resposta imunológica desperta um interesse especial e os marcadores genéticos exercem importante papel modulador neste contexto, pois podem contribuir para patogênese ou resistência do curso clínico dessas infecções. Objetivo: O presente estudo teve como objetivo verificar a hipótese de que os genes KIR, seus ligantes HLA e o polimorfismo do gene MICA estão associados à toxoplasmose ocular (TO) e às diferentes formas clínicas da doença de Chagas. Casuística e métodos: Foram incluídos no estudo 297 pacientes com toxoplasmose, 148 clinicamente classificados com TO e 149 sem TO. Também participaram deste estudo 267 pacientes com doença de Chagas, 78 clinicamente classificados com a forma digestiva da doença, 107 com a forma cardíaca, 82 com a forma mista. O teste de ELISA foi realizado para confirmar as infecções por T. gondii e T. cruzi. Os polimorfismos destes genes foram identificados por PCR-SSOP e PCR nested. As variáveis contínuas foram comparadas utilizando o teste t não pareado. Para comparação dos demais resultados foram realizados o Teste Qui-quadrado com correção de Yates ou o Teste Exato de Fisher. Resultados: Em relação à toxoplasmose, alelos e genótipos MICA não diferiram entre os pacientes com e sem TO, nem entre os pacientes com a manifestação primária ou recorrente da doença. O gene KIR3DS1 foi associado positivamente com o desenvolvimento da TO. Genes KIR ativadores juntamente com os seus ligantes HLA (KIR3DS1+/Bw4-80Ile+ e KIR2DS1+/C2+ + KIR3DS1+/Bw4-80Ile+) foram associados com suscetibilidade à TO e às suas manifestações clínicas primária e recorrente. Os pares inibidores - KIR2DL3/2DL3-C1/C1 e KIR2DL3/2DL3-C1 – foram associados com a resistência à TO e suas manifestações clínicas, enquanto que a combinação KIR3DS1-/KIR3DL1+/Bw4-80Ile+ foi associada como fator de proteção para o desenvolvimento da TO e, em particular, para a manifestação recorrente. Quanto à doença de Chagas, o alelo MICA-129met foi associado como fator de risco para o desenvolvimento da disfunção sistólica ventricular esquerda (DSVE) em pacientes com cardiopatia chagásica crônica, enquanto que o alelo MICA-129val foi associado com a proteção ao desenvolvimento da DSVE. Em especial o haplótipo homozigoto MICA-129 met/met foi associado com o desenvolvimento da DSVE grave e o genótipo homozigoto MICA-129 val/val foi associado com a proteção desta condição. Também foi possível demonstrar que o haplótipo MICA*008~HLA-C*06 e a combinação entre KIR e seus ligantes HLA - KIR2DS2-/KIR2DL2-/KIR2DL3+/C1+ - foram associados como fatores de suscetibilidade à forma clínica digestiva da doença de Chagas. Conclusões: Nossos resultados demonstram que os genes KIR podem exercer influência tanto na toxoplasmose ocular quanto na forma clínica digestiva da doença de Chagas, enquanto que MICA pode exercer influência nas formas clínicas da doença de Chagas, mas não no desenvolvimento da toxoplasmose ocular.

A enzima glicossomal gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Tripanosoma cruzi e os mutantes D210L e D210L-G213D foram expressos em E. coli, purificados e submetidos a ensaios de cinética enzimática e de cristalização. A enzima GAPDH tipo selvagem e o mutante D210L-G213D cristalizaram-se no grupo espacial P21 e os cristais apresentaram padrões de difração de raios-X de boa qualidade. A estrutura cristalográfica da enzima tipo selvagem foi determinada a 2.5 e 2.15 A de resolução, a partir de coletas de dados realizadas a 277 e 100 K respectivamente. Os fatores R cristalográficos finais dos refinamentos foram de 16.0% para a estrutura a 277 K e 18.8% para a estrutura a 100 K. A estrutura do mutante GAPDH D210L-G213D foi determinada a 2.15 A de resolução e refinada até um fator R cristalográfico de 18.9%. A comparação entre as estruturas da enzima tipo selvagem determinadas nas duas temperaturas levou a resultados interessantes no que diz respeito ao empacotamento cristalino. O resfriamento dos cristais provocou uma redução no volume da cela unitária de 10.5%, tendo a maior variação ocorrido no parâmetro de rede a (14.5%). A sobreposição das celas unitárias mostrou uma rotação do conteúdo da unidade assimétrica de cerca de 5 graus em torno de um eixo aproximadamente paralelo a b. Por outro lado, a análise das estruturas da enzima tipo selvagem e mutante, juntamente com os parâmetros cinéticos, permitiram a discussão a respeito de alguns detalhes do mecanismo catalítico da enzima, principalmente no que se refere ao papel do resíduo Arg249. Tal resíduo, que apresenta grande mobilidade conformacional de sua cadeia lateral, parece estar envolvido na etapa de reorientação de um dos intermediários durante o processo catalítico. / The glycosomal glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) from Typanosoma cruzi and its mutants D210L and D210L-G213D were expressed in E. coli and purified, followed by kinetic and crystallization assays. Both wild type enzyme and D210L-G213D mutant were crystallized in P21 space group and the crystals presented good X-ray diffraction patterns. The three-dimensional structure of the wild type enzyme was determined at 2.5 and 2.15 A resolution from data collected at 277 and 100 K respectively. The structures were refined to a crystallographic R-factor of 16.0% for data collected at 277 K and 18.8% for those collected at 100 K. Also, the structure of the D210L-G213D mutant was solved at 2.15 A resolution and refined to a crystallographic R-factor of 18.9% with good geometry indicators. Comparison between the wild type enzyme structures solved at both temperatures led to interesting results concerning the crystal packing. Flash-cooled crystals presented a 10.5% shrink in the unit cell volume being the major reduction observed in the parameter a (14.5%). Superposition of the unit cells showed a global rotation of the asyrnmetric unit content of about 5 degrees around an axis approximately parallel to b. On the other hand, the analysis of the wild type and mutant enzyme structures, together with the kinetic parameters, allowed a discussion about some catalytic mecanism details, mainly the role of the Arg249 residue. The results showed that this residue might be involved in the reorientation of one of the intermediates during the catalytic process.

O parasita Trypanosoma cruzi (T. cruzi) é o causador da doença de Chagas e continua sendo um grave problema de saúde pública, principalmente nas regiões mais pobres da América Latina. Na busca por novas drogas terapêuticas contra T. cruzi, nós avaliamos a atividade do composto 5-hidroxi-3-metil-5-fenil-pirazolina-1-(S-benzilditiocarbazato) (H2bdtc) tanto in vitro quanto in vivo. Esta espécie foi caracterizada por análise elementar, espectroscopia UV-visível, infravermelho, RMN e espectrometria de massas. Nos experimentos biológicos, o composto H2bdtc em suspensão e/ou encapsulado em nanopartícula lipídica sólida (NLS) foi comparado com um dos medicamentos empregados atualmente, o benzonidazol (BZN). Utilizando-se o composto H2bdtc encapsulado em NLS observou-se: (a) redução de forma eficaz da parasitemia em camundongos, em concentração 100 vezes mais baixa do que aquela normalmente empregada para Benzonidazol (clinicamente aplicada a uma concentração de 400 ?mol kg-1 dia-1); (b) diminuição da inflamação e das lesões de fígado e do coração e (c) resultou em 100,0% de sobrevivência dos camundongos infectados com T. cruzi após 60 dias. Para fins de elucidação do possível mecanismo de ação do composto H2bdtc, estudo de interação com o DNA e com a albumina do soro Humano (HSA) foram realizados. Baseado nos dados relacionados à atividade tripanocida in vitro e in vivo do composto H2bdtc, este pode ser tomado como potente agente tripanocida e o estudo desenvolvido neste projeto pode concorrer ao uso de H2bdtc como possível nova droga a ser utilizada contra Doença de Chagas. / The parasite Trypanosoma cruzi causes Chagas disease, which remains a serious public health concern and continues to victimize thousands of people, primarily in the poorest regions of Latin America. In the search for new therapeutic drugs against T. cruzi, here we have evaluated both the in vitro and the in vivo activity of 5-hydroxy-3-methyl-5-phenyl-pyrazoline-1-(S-benzyldithiocarbazate) (H2bdtc). This compound was characterized by elemental analysis, UV-visible spectroscopy, infrared, NMR and mass spectrometry. Biological experiments were conducted with H2bdtc as a free compound or encapsulated into solid lipid nanoparticles; we compared the results with those achieved by using the currently employed drug, benznidazole. H2bdtc encapsulated into solid lipid nanoparticles (a) effectively reduced parasitemia in mice at concentrations 100 times lower than that normally employed for benznidazole (clinically applied at a concentration of 400 ?mol kg-1 day-1); (b) diminished inflammation and lesions of the liver and heart; and (c) resulted in 100,0% survival of mice infected with T. cruzi. Biological mechanism elucidation of H2bdtc compound was analyzed based on the interaction with DNA and Human Serum Albumin (HSA). Based on the data related to the in vitro and in vivo trypanocidal activity of H2bdtc it was taken as potent trypanocidal agent. Studies developed on this project allow concluding that H2bdtc is a possible new drug to be used against Chagas Disease.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2014-09-04T12:27:38Z No. of bitstreams: 2 DissertacaoDiogo H Saliba de Souza.pdf: 1557895 bytes, checksum: 142312323e42e02c8880548032f2795d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-04T12:27:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DissertacaoDiogo H Saliba de Souza.pdf: 1557895 bytes, checksum: 142312323e42e02c8880548032f2795d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-03-26 / Introduction: Chagasic megaesophagus (CM) is the most common digestive manifestation of Chagas’ Disease (CD) in Brazil and the State of Goiás is one of the most affected regions. The Hospital das Clínicas (HC)/ Universidade Federal de Goiás (UFG) is a reference center for study and treatment of CM in the last decades. The objective of this study was to characterize the current epidemiological profile of patients with CM seen at the HC of the UFG, from 1998 to 2010. Methodology: Nine hundred thirty-nine patients' records were analyzed and age, gender, place of birth, serology, symptoms and radiological classification according to Rezende et al. were analyzed. Results: The median age of patients was 55 years old. Male patients were the most prevalent, 54%. The prevalence of younger patients, less than 31 years old, was 4.2% but 82.1% of them were from Bahia State. Patients with more than 40 years old, were majority (85.5%). The radiological groups were distributed as follows: group I (35.9%), group II (32.9%), group III (17%) and group IV (14.2%). Dysphagia for solid was common in all radiological groups, however dysphagia for liquids, regurgitation and other gastrointestinal symptoms were significant in groups II, III and IV. Conclusion: Compared to previous studies by the same group in 1975, 1994 and 1995, the number of younger patients decreased and the frequency curve is shifting to older ages. / Introdução: O megaesôfago chagásico (MEC) é a manifestação digestiva mais comum da doença de Chagas (DC) no Brasil e o Estado de Goiás se encontra entre os mais prevalentes. O Hospital das Clínicas (HC) / Universidade Federal de Goiás (UFG) é um centro de referência no estudo e no tratamento do MEC nas últimas décadas. O objetivo desse estudo foi caracterizar o perfil clínico-epidemiológico atual desses pacientes acompanhados no HC da UFG de 1998 a 2010. Metodologia: Foram analisados 939 prontuários de pacientes nas variáveis idade, sexo, naturalidade, testes sorológicos, sintomatologia e classificação radiológica segundo Rezende et al. Resultados: A mediana da idade dos pacientes foi de 55 anos. O sexo masculino foi o mais prevalente, 54%. A prevalência de pacientes abaixo de 31 anos foi 4,2% porém 82,1% deles eram naturais da Bahia. A maioria dos pacientes (85,5%) tinha mais de 40 anos de idade. Os grupos radiológicos foram assim distribuídos: grupo I (35,9%), grupo II (32,9%), grupo III (17%) e grupo IV (14,2%). Disfagia para sólidos é comum em todos os grupos radiológicos, porém disfagia para líquidos, regurgitação e outros sintomas digestivos foram significativos nos grupos II, III e IV. Conclusão: Em relação aos estudos anteriores realizados pelo mesmo grupo em 1975, 1994 e 1995, a população de jovens, abaixo de 31 anos, está diminuindo e a maioria se encontra em faixas etárias mais avançadas.

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-20T15:45:49Z No. of bitstreams: 2 Tese - Liliane da Rocha Siriano - 2013.pdf: 1382106 bytes, checksum: d95d1cd146dc5c4ce2277e1d362553fe (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-20T15:46:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Liliane da Rocha Siriano - 2013.pdf: 1382106 bytes, checksum: d95d1cd146dc5c4ce2277e1d362553fe (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-20T15:46:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Liliane da Rocha Siriano - 2013.pdf: 1382106 bytes, checksum: d95d1cd146dc5c4ce2277e1d362553fe (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-03-05 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / After more than a century the discovery of Chagas disease, which etiological agent parasite is called Trypanosoma cruzi, there is still much to be revealed about this disease. Polymorphism, how to play, the correlation between strain and the clinical, serological and molecular methods, gene transfer and its clinical consequences, treatment and cure are topics that involve major issues still not completely understood by researchers of this enigmatic disease. The control of donors in blood banks and the reduction of vector transmissions rates caused the congenital transmission to gain greater importance. In this study, monitoring women during pregnancy allowed the accompaniment of the newborn to nine months of age, at which stage it is expected that maternal antibodies have disappeared completely. To know the population of pregnant women infected by Trypanosoma cruzi, in the service of a Maternity Hospital, 1979 records were analyzed at an interval of three years (2010 to 2012). Socioeconomic and demographic profiles, as well as reproductive and serological features were studied. Had positive serology for American trypanosomiasis 3.1% of women (61/1.979) and a few of them reported abortions. Studies have shown that abortion in infected mothers who failed to transmit their infection to the fetus had no greater frequency of miscarriage, prematurity and perinatal mortality, but there was a greater tendency to stillbirth in mothers who transmitted the infection to their children. Thirty-eight infected by T. cruzi pregnant women (two with twin pregnancies) and their fetuses (forty) participated in a survey to verify integration of kDNA minicircle of this protozoan in their children. For serological diagnosis the three conventional techniques of ELISA, IFA and HAI were performed on all samples. All mothers confirmed the positivity of Chagas disease by serology. Two children had positive serological, parasitological and molecular diagnosis of Trypanosoma cruzi, featuring congenital transmission, in addition to horizontal gene transfer. The polymerase chain reactions (PCR) were performed to identify the presence of nuclear DNA (nDNA) and mitochondrial (kDNA) in the samples studied. The amplifications were performed in triplicate with each primer pair for diagnostic confirmation. Amplification of nuclear material of T. cruzi occurred in 92.1% of mothers and 10% of children (4/40). In 70% of children and 92.1% of the mothers was no amplification of kinetoplast DNA of the parasite. Most integration events of minicircle kDNA occurred through mobile elements, with most of them the LINE-1 retrotransposon. The largest number of integrations was observed on chromosome X. / Após mais de um século da descoberta da doença de Chagas, cujo agente etiológico é o parasito denominado Trypanosoma cruzi, muito ainda há para ser desvendado sobre essa doença. O polimorfismo, a forma de reprodução, a correlação entre cepa e forma clínica, métodos sorológicos e moleculares, transferência gênica e suas consequências clínicas, tratamento e cura são tópicos que envolvem grandes questionamentos ainda não totalmente elucidados pelos pesquisadores desta enigmática doença. O controle de doadores em bancos de sangue e a diminuição nos índices de transmissão vetorial fizeram com que a transmissão congênita ganhasse uma maior importância. No presente estudo, o monitoramento das mulheres durante a gestação possibilitou o acompanhamento do recém-nascido até os nove meses de idade, fase na qual se espera que os anticorpos maternos tenham desaparecido por completo. Para se conhecer a população de gestantes infectadas por Trypanosoma cruzi, no serviço da Maternidade de um Hospital Universitário, 1.979 prontuários foram analisados num intervalo de três anos (2010 a 2012). Perfis socioeconômicos e demográficos, assim como as características reprodutivas e sorológicas foram estudados. Tiveram sorologia positiva para Tripanossomíase Americana 3,1% das mulheres (61/1.979) e poucas relataram aborto. Estudos sobre o aborto demonstraram que em mães infectadas que não transmitiram sua infecção ao feto não houve maior frequência de aborto, prematuridade e mortalidade perinatal, porém, houve uma maior tendência à natimortalidade nas mães que transmitiram a infecção aos seus filhos. Trinta e oito gestantes infectadas por T. cruzi (duas com gestações gemelares) e seus conceptos (quarenta) participaram de uma pesquisa para verificar a integração de minicírculos de kDNA deste protozoário em seus filhos. Para o diagnóstico sorológico as três técnicas convencionais de ELISA, IFI e HAI foram realizadas em todas as amostras. Todas as mães confirmaram a positividade da doença de Chagas pela sorologia. Duas crianças tiveram diagnóstico sorológico, parasitológico e molecular positivos para Trypanosoma cruzi, caracterizando a transmissão congênita, além da transferência gênica horizontal. As reações de polimerização em cadeia (PCR) foram realizadas visando identificar a presença de DNA nuclear (nDNA) e mitocondrial (kDNA) nas amostras estudadas. As amplificações foram realizadas em triplicata com cada par de primers, para confirmação diagnóstica. A amplificação do material nuclear de T. cruzi ocorreu em 92,1% das mães e em 10% das crianças (4/40). Em 70% das crianças e em 92,1% das mães houve amplificação do DNA do cinetoplasto do parasito. A maior parte dos eventos de integração de minicírculos de kDNA ocorreu por meio de elementos móveis, sendo a maioria deles o retrotransposon LINE-1. O maior número de integrações foi observado no cromossomo X.

A Doença de Chagas (DC) foi descrita por Carlos Chagas em 1909. É causada por um parasita T. cruzi, transmitido por triatomíneos, por transfusão de sangue, vertical e por via oral. A DC tem duas fases: aguda e crônica. A evolução para a forma cardíaca ocorre em cerca de 30% dos casos crônicos e é a maior responsável pela mortalidade na doença de Chagas crônica. O objetivo deste trabalho foi estudar a cardiopatia chagásica em pacientes do Tocantins, comparando com outras cardiopatias e pacientes assintomáticos do ponto de vista de exames complementares não invasivos usando energias radiantes, como ecocardiografia e RX e o ECG. Houve uma prevalência de 9,5% de pacientes chagásicos atendidos no ambulatório de cardiologia em Araguaína Tocantins, sendo que 7.3% na forma crônica e 2,21% na forma indeterminada .Dos pacientes crônicos, incluídos no estudo 50% tinham megaesôfago e 4 megacolon (20%). A maioria dos pacientes não apresentou história familiar positiva para DC, nem era tabagista ou etilista. As principais alterações eletrocardiográficas encontradas referem-se à condução. A avaliação do ICT, do chagásico crônico mostrou se aumentada em 40% dos pacientes, 40% apresentam alterações esofágicas e 20% dos pacientes s apresentavam megacolon . O ecocardiograma mostrou-se alterado em 42%). 27% dos pacientes apresentaram FE abaixo de 55% alterada. Alterações da contratilidade segmentar e Assincronia septal foram encontradas em 80% dos chagásicos crônicos. Em 80% dos pacientes foi verificada disfunção diastólica. As alterações valvares ocorreram em 75%. As alterações eletrocardiográficas,ocorreram em 80% dos pacientes com CCC, , enquanto nas outras cardiopatias tinham alterações no ECG. Observou-se que no grupo dos chagásico a diminuição da fração de ejeção esta correlacionada a maior incidência de arritmias alem da disfunção diastólica e relacionada com aumento do atrio esquerdo, ICT tem correlação com a FE e tamanho de VE e AE. Os ECG alterados também guardam relação com as disfunções. / Chagas disease (AD) was described by Carlos Chagas in 1909. It is caused by a parasite T. cruzi, transmitted by bugs, by blood transfusion, vertical and orally. The DC has two phases: acute and chronic. The evolution to the cardiac form occurs in about 30% of chronic cases and is the largest cause of mortality in chronic Chagas disease. The aim of this study was to Chagas\' disease in patients of Tocantins, compared with other heart patients and asymptomatic from the standpoint of non-invasive exams using radiant energies such as echocardiography and ECG and RX .. The descriptive study included 80 patients, 20 chronic form of Chagas disease, 20 indeterminate, 20 with other heart diseases, and 20 controls. There was a prevalence of 9.5% of chagasic patients treated in outpatient cardiology at Araguaina Tocantins, and 7.3% in chronic and 2.21% in the indeterminate. Of the chronic patients in the study 50% had megaesophagus and megacolon 4 (20%). Most patients had no family history of AD, nor was a smoker or drinker. Major electrocardiographic abnormalities found refer to driving. The evaluation of ICT, the chronic chagasic showed that increased by 40% of patients, 40% had esophageal changes and 20% of patients had megacolon s. The echocardiogram was abnormal in 42%). 27% of patients had EF below 55% changed. Changes in segmental contractility and Asynchrony septum were found in 80% of chronic Chagas disease. In 80% of the patients was observed diastolic dysfunction. The valvular changes occurred in 75%. Electrocardiographic abnormalities occurred in 80% of patients with CCC, while the other heart had ECG changes. Arterial hypertension had an incidence of 45% in patients with CCC and 40% in FCI. The systolic and diastolic ventricular dysfunction was more prevalent in groups that had an abnormal ECG and arrtimia.Observou that the group of chagasic decreased ejection fraction is correlated to a higher incidence of arrhythmias besides diastolic dysfunction and related increased atrio-left, ICT correlates with LV size and EF and LA. The abnormal ECG also are related to the dysfunction

Submitted by Rosangela Silva (rosangela.silva3@unioeste.br) on 2017-08-29T16:32:41Z No. of bitstreams: 2 Dissertação completa - CDALINE.pdf: 1677578 bytes, checksum: 70a6d704ab40032dc2f9a1952477236e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T16:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação completa - CDALINE.pdf: 1677578 bytes, checksum: 70a6d704ab40032dc2f9a1952477236e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In the pharmaceutical area, plants and plant extracts are very important because they can serve as prototypes for the development of new drugs and as a source of pharmaceutical raw materials. Public health problems such as Chagas' disease and bacterial resistance to antimicrobials show a constant need for more efficient and safe drugs and active principles. In this context, the pharmacological study of plant species is extremely important. Among the plants with high medicinal potential, those of the genus Lonchocarpus stand out with several biological activities reported. The plant Lonchocarpus cultratus (Fabaceae) has proven action against sarcoma 180 and against Gram-positive bacteria. The main chemical constituents identified are cordoin, isocordoin, derricin and triterpenes. The objective of this study was to investigate the anti-bacterial action of the extracts of the seeds and roots from the L. cultratus species, to evaluate the anti-T.cruzi activity and the respective hemotoxicity of the extracts of the plant seeds and to carry out the chemical characterization of these extracts. The extracts hexane (LHS), dichloromethane (LDS) and methanolic (LMS) were obtained from plant seeds by successive macerations. The chemical characterization was performed by qualitative analytical methods and by 1H NMR. The anti-bacterial activity was evaluated by disc diffusion test, anti-T. Cruzi by direct counting method of the parasites in the Neubauer chamber and the hemotoxicity by UV method. Qualitative chemical tests showed that alkaloids, chalcones, coumarins, triterpenes and saponins are present in the roots and seeds of L. cultratus, flavonoids and steroids, only in the roots and tannins were not observed. Chalcones were identified by 1H NMR in LDS and LHS and steroids and terpenes in LMS. The LDS and LHS extracts showed activity against the epimastigote form of T. cruzi protozoan. The LDS results were better, showing inhibition of protozoan growth of 92.30% at the concentration of 175 μg.mL-1. The IC 50 value for this extract was 6.16 μg.mL-1 and at this concentration did not show toxicity to the red blood cells. The extracts studied did not present antimicrobial activity. The absence of anti-bacterial activity in the extracts of L. cultratus, especially in the root extract previously reported, suggests problems related to the stability or low concentration of bioactive chalcones in the extract. Although there is a need for additional research, anti-T. Cruzi and hemotoxicity obtained with the dichloromethane extract show an alternative potential for the treatment of Chagas' disease / Na área farmacêutica, as plantas e os extratos vegetais são muito importantes, pois podem servir como protótipos para o desenvolvimento de novos fármacos e como fonte de matérias-primas farmacêuticas. Problemas de saúde pública, como a doença de Chagas e a resistência bacteriana aos antimicrobianos, mostram a necessidade constante na busca de novos medicamentos e princípios ativos mais eficientes e seguros. Neste contexto, o estudo farmacológico de espécies vegetais é de extrema importância. Dentre as plantas com alto potencial medicinal, as do gênero Lonchocarpus destacam-se com diversas atividades biológicas relatadas. A planta Lonchocarpus cultratus (Fabaceae) possui ação comprovada frente ao sarcoma 180 e contra bactérias Gram-positivas. Os principais constituintes químicos identificados são a cordoina, a isocordoina, a derricina e triterpenos. Por ser uma planta pouco estudada e dando continuidade a estudos do grupo de pesquisa, o presente trabalho teve o objetivo de investigar a ação anti-bacteriana dos extratos das sementes e raízes da espécie L. cultratus, avaliar a atividade anti-T.cruzi e respectiva hemotoxicidade dos extratos das sementes da planta e realizar a caracterização química desses extratos. Os extratos hexânico (LHS), diclorometânico (LDS) e metanólico (LMS) foram obtidos de sementes da planta através de macerações sucessivas. A caracterização química foi realizada por meio de métodos analíticos qualitativos e por RMN 1H. A atividade anti-bacteriana foi avaliada por teste de difusão em disco, a anti-T. cruzi por método de contagem direta dos parasitas em câmara de Neubauer e a hemotoxicidade por método UV. Os testes químicos qualitativos mostraram que alcaloides, chalconas, cumarinas, triterpenos e saponinas estão presentes nas raízes e nas sementes da planta L. cultratus, flavonoides e esteroides, somente não foram observados nas raízes e taninos. Chalconas foram identificadas por RMN 1H, em LDS e LHS e esteroídes e terpenos em LMS. Os extratos LDS e LHS apresentaram atividade contra a forma epimastigota do protozoário T. cruzi. Os resultados do LDS foram melhores, mostrando inibição de crescimento do protozoário de 92,30% na concentração de 175 μg.mL-1. O valor de CI50 para este extrato foi 6,16 μg.mL-1 e nesta concentração não apresentou toxicidade para as hemácias. Os extratos estudados não apresentaram atividade antimicrobiana. A ausência de atividade anti-bacteriana nos extratos de L. cultratus, principalmente no extrato das raízes cuja propriedade foi reportada anteriormente, sugere problemas relacionados à estabilidade ou baixa concentração de chalconas bioativas no extrato. Embora haja necessidade de pesquisas adicionais, os resultados anti-T. cruzi e de hemotoxicidade obtidos com o extrato diclorometânico mostram potencial alternativa para o tratamento da Doença de Chagas.