Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-27T14:53:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - João Paulo Cabral de Brito - 2014.pdf: 977293 bytes, checksum: f8d05d4259ea9bbd904419bbd7674cf9 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-01-28T13:20:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - João Paulo Cabral de Brito - 2014.pdf: 977293 bytes, checksum: f8d05d4259ea9bbd904419bbd7674cf9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-28T13:20:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - João Paulo Cabral de Brito - 2014.pdf: 977293 bytes, checksum: f8d05d4259ea9bbd904419bbd7674cf9 (MD5) Previous issue date: 2014-08-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Trichoderma genus corresponds to free-living filamentous fungi, including species able to act as biological control agents against pathogenic fungi. It is believed that this ability is due to the synergy of several mechanisms, including a wide variety of secondary metabolites produced by these organisms. Among them, there is the production of peptaibols, an antibiotic peptide group characterized by the presence of non-proteinogenic amino acids such as α-aminoisobutyrate (Aib), presence of N-terminal modifications and amino alcohols in the C-terminal region. These peptaibols have amphipathic nature, allowing the formation of ion channels in lipid membranes, which are believed to be related to its antimicrobial activity. This study aimed to draw a profile of production and identify of secreted peptaibols from Trichoderma asperellum TR356 strain. The fungi was grown in TLE with 0.3% glucose medium for 5 days, 120 rpm in the dark. Liquid medium filtrate was used as metabolites source. These extracts were subjected to high performance liquid chromatography (HPLC) and subsequent analysis by matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry (MALDI-TOF). The results indicate the production of two classes of peptaibols for this T. asperellum strain. Primary structure of two Asperelines (A and E) and five Trichotoxins (T5D2, T5E, T5F, and T5G 1717A) has been elucidated. Most of these peptaibols had been previously described in T. viride and T. asperellum marine strains. This is the first report of some of these compounds being produced by a T. asperellumstrain from soil. Future analysis will be necessary to elucidate the three-dimensional structures and their activity against pathogens. / O gênero Trichoderma corresponde a fungos filamentosos, de vida livre, que inclui espécies capazes de agir como agentes de controle biológicoeficazes contra fungos fitopatogênicos. Acredita-se que esta capacidade é devida a sinergia de vários mecanismos, incluindo a ampla variedade de metabólitos secundários produzidos por estes organismos. Dentre eles, há a produção de peptídeos antibióticos conhecidos como “peptaibols”, compostos caracterizados pela presença de aminoácidos não proteinogênicos como α-aminoisobutirato (Aib), e por possuírem modificações N-terminais e presença de amino álcoois na região C-terminal. Estes peptaibols apresentam natureza anfipática, permitindo a formação de canais iônicos nas membranas lipídicas, o que se acredita estar relacionado com sua atividade antimicrobiana. Este trabalhoteve como objetivo traçar um perfil de produção e identificar peptaibols secretados pela linhagem de Trichoderma asperellum TR356. O isolado foi crescido em meio TLE contendo 0,3% de glicose, por 5 dias, 120 rpm no escuro. O sobrenadante filtrado foi utilizado como fonte para extração de metabólitos. Estes extratos foram submetidos a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e posterior análise pela técnica de espectrometria de massas por ionização e dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-TOF). Os resultados indicam a produção de duas classes de peptaibols por esta linhagem de T. asperellum. Foram elucidadas as estruturas primárias de duas Asperelinas (A e E), e de cinco Trichotoxinas (T5D2, T5E, T5F, T5G e 1717A). A maior parte destes peptaibols havia sido descrito anteriormente em linhagens de T. viride e linhagens de T. asperellum marinhas. Este é o primeiro relato de alguns destes compostos sendo produzidos por uma linhagem de T. asperellum proveniente do solo. Futuras análises serão necessárias para a elucidação de suas estruturas tridimensionais e atividade destes compostos contra fitopatógenos.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Mass spectrometry is a technique widely used in all prod uctive sectors. Since the late '80s with the emergence of soft ionization techniques, mass spectrometry has been widely disseminated in the analysis of biopolymers such as fatty acids, nucleic acids, oligosaccharides and especially proteins. Lectins are proteins of nonimmune origin that have at least one specific and reversible binding carbohydrate domain, without the ability to modify them. These proteins are widely distributed in nature. Lectins isolated from seeds of legumes are among the most studied and have high homology degree, being an important molecular marker of evolution in this clade. This study aimed to characterize some legume lectins by m ass spectrometry. Lectin EVA and LAA with 240 and 237 amino acid residues respectively, were analyzed for native mass and sequence of amino acids determined, showing a high degree of homology with other legume lectins. Lectin ConGF, a ConA-like, was analyzed for protein content in the crystal. Was determined that bot h mature chain and proteolytic fragments are present to form crystal, which indicates no difference between the chains structure covalently linked together by weak interactions. The partial sequence shows that ConGF has several structural features within the subtribe Diocleinae. All results demonstrate that mass spectrometry is a versatile and robust tool for characterizing proteins and can be successfully used to obtain structural information of lectins. / A espectrometria de massa à uma tÃcnica amplamente utilizada em todos os setores produtivos. Desde o final dos anos 80 com o surgimento de tÃcnicas de ionizaÃÃo brandas, a espectrometria de massa vem sendo amplamente difundida na anÃlise de biopolÃmeros como Ãcidos graxos, Ãcidos nuclÃicos, oligossacarÃdeos e principalmente proteÃnas. Lectinas sÃo proteÃnas de origem nÃo imune que possuem pelo menos um domÃnio de ligaÃÃo especÃfica e reversÃvel a carboidratos, sem a capacidade de modificÃ-los. Estas proteÃnas sÃo amplamente distribuÃdas na natureza. As lectinas isoladas de sementes de leguminosas estÃo entre as mais estudadas e possuem alta homologia, sendo importantes marcadores moleculares da evoluÃÃo dentro desta famÃlia vegetal. Este trabalho teve como objetivo caracterizar lectinas da famÃlia Leguminosae atravÃs de espectrometria de massa. As lectinas de Erythrina velutina (EVA) e Luetzelburgia auriculata (LAA) com 240 e 237 resÃduos de aminoÃcidos respectivamente foram analisadas quanto a massa molecular nativa e foi determinada a sequencia de aminoÃcidos. As estruturas primÃrias mostraram alto grau de homologia com outras lectinas de leguminosas. A lectina ConGF, uma ConA-Like, foi analisada quanto ao conteÃdo protÃico do cristal. O cristal està composto da cadeia madura alfa e seus os fragmentos proteolÃticos, o que indica nÃo haver diferenÃa entre a estrutura ligada covalentemente e as cadeias unidas por interaÃÃes fracas. A sequÃncia parcial demonstra que ConGF possui caracterÃsticas estruturais da subtribo Diocleinae. Todos os resultados demonstram que a tÃcnica de espectrometria de massa à uma ferramenta versÃtil e robusta para caracterizaÃÃo de proteÃnas e pode ser usada com sucesso para obtenÃÃo de informaÃÃes estruturais de lectinas.

Ações para garantir a produção de alimentos e a preservação do solo e da água são essenciais para a sustentabilidade do ambiente agrícola. O uso racional de fertilizantes aumenta a produtividade agrícola e permite que menos áreas sejam desmatadas, preservando os recursos naturais. Porém, fertilizantes fontes de fósforo e de zinco podem contaminar o solo com metais pesados, por exemplo, com cádmio (Cd). O objetivo do trabalho foi avaliar a transferência do Cd contidos em fertilizantes minerais e orgânicos para plantas de arroz, empregando-se o isótopo estável 111Cd como traçador no sistema solo-fertilizante-planta. O experimento foi realizado em casa de vegetação, utilizando vasos com 3 dm3 de amostra de Latossolo Vermelho-Amarelo distrófico. A planta teste foi o arroz, cultivar CONAI. A alteração isotópica do solo foi feita com CdCl2, com 95,2% de 111Cd. Avaliaram-se 8 fertilizantes, 5 minerais e 3 orgânicos. Como fertilizantes minerais, usaram-se uma rocha fosfática importada, 2 superfosfatos simples, um nacional e outro importado, um resíduo industrial óxido de zinco e um fertilizante sulfato de zinco. Como fertilizantes orgânicos, usaram-se 2 lodos de esgoto e um composto de lixo. Foram conduzidos dois tratamentos testemunhas, um com e outro sem adubação. A planta foi dividida em parte aérea (folhas + colmos), casca e grão de arroz. As amostras de planta foram digeridas com ácido nítrico, em sistema micro-ondas. A concentração do cádmio e abundância do 111Cd foram determinadas por espectrometria de massas com plasma (ICP-MS). A adição do 111CdCl2 não interferiu no desenvolvimento e nutrição das plantas de arroz. Com o uso da técnica isotópica, calculou-se que a transferência do Cd dos fertilizantes para as plantas de arroz pode passar de 10%. Os fertilizantes minerais acidulados apresentaram maior transferência de Cd para a planta, com máximo de 30%. Os fertilizantes orgânicos apresentaram transferência de mais de 5% do Cd para as plantas de arroz. O uso da técnica isotópica foi eficaz no cálculo de transferência de Cd do fertilizante para as plantas de arroz, enquanto que o método da diferença, dependendo do fertilizante, subestima ou superestima a transferência do Cd / Actions to improve food yield and conservation of soil and water are essential to maintain the sustainability of agricultural fields. The technical use of fertilizers increase crop yields and allows fewer areas are deforested, preserving natural resources. Nevertheless, phosphate and zinc fertilizers can cause soil contamination with heavy metals, for example, with cadmium (Cd). The objective of this study was to evaluate the transfer of Cd from mineral and organic fertilizers to the rice plants using the 111Cd stable isotope as a tracer in soil-fertilizer-plant system. The experiment was carried out in greenhouse using pots filled with 3 dm3 of a Typic Haploduox soil. The plant test was the rice, cultivar CONAI. The soil isotopic enrichment was made with CdCl2 spiked with 95.2% of 111Cd. Eight fertilizers were studied: 5 minerals and 3 organics. Among mineral fertilizers, one imported rock phosphate, 2 simple superphosphate, one national and one imported, one industrial waste zinc oxide and one zinc sulphate fertilizers were used. Among organic fertilizers, two sewage sludge and one compost were used. Two control treatments, one with and one without fertilizer, were used. The plant was separated into shoot (leaf + stem), straw and rice grain. The plant samples were digested with nitric acid using microwave system. The concentration of Cd and 111Cd abundance were determined by plasma mass spectrometry (ICP-MS). The addition of 111CdCl2 did not affect the growth and nutrition of rice plant. The isotope technique has permitted to estimate that the transfer of Cd from fertilizers to the rice plant can be over 10%. The acidulated mineral fertilizers had higher percentages of Cd transfer to plant, up to 30%. Organic fertilizers had over than 5% of Cd transferred to rice plant. The isotopic method was effective in calculating the transfer of Cd from fertilizer to rice plant, meanwhile the difference method had showed under or overestimation of the Cd transference to plant, depending upon the fertilizer

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:06:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Renata_Ahlert.pdf: 14058010 bytes, checksum: 2f8b5826a49cf784877ea9e91ec9e8e9 (MD5) Previous issue date: 2010-04-20 / Rice crop has great food and economic importance. Iron is an essential element for the development of crop and necessary for essential plants functions, such as photosynthesis, respiration and DNA synthesis. However, under irrigated cultivation conditions, the low redox potential leads to reduction of iron in the soil solution which is readily available and can become toxic to plants if absorbed in excess. In rice production areas of Rio Grande do Sul, the iron has caused problems toxicity and the use of tolerant cultivars becomes an important strategy to solve the problem being necessary the study of mechanisms that give this tolerance to plants application in breeding programs. Proteomics is an important tool, which through combination of techniques such as two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry allows the analysis of proteins complex involved in response to adverse environmental conditions. The objective of this study was to analyze and identify proteins with differential expression in roots of rice cultivars exposed to iron stress, to identify mechanisms involved in stress tolerance. It was used two rice cultivars, Epagri 107 and BR-IRGA 410, tolerant and sensitive to the iron toxicity, respectively, which were subjected to treatment with 7mM FeSO4EDTA. Through two-dimensional electrophoresis, it was identified 284 spots with differential expression between combinations of treatment (between cultivars and plants treated and control). Of this total, 93 proteins were identified by mass spectrometry. The identified proteins were involved in carbohydrate metabolism, signal transduction, related to plant defense, transcription factors, transposons, nucleic acids, redox reactions, among other functions. Many of the proteins have no known function. The glutathione Stransferase protein and GATA type transcription factor that have direct relation to iron metabolism were differentially expressed in the tolerant cultivar when submitted to stress. Its association with the tolerance mechanism requires, however, be confirmed. / O arroz é uma cultura que possui grande importância alimentar e econômica. O ferro é um elemento essencial para o desenvolvimento da cultura e necessário para funções essenciais da planta, como fotossíntese, respiração e síntese de DNA. Porém, em condições de cultivo irrigado, o baixo potencial redox do meio leva a redução do ferro presente na solução do solo o qual torna-se prontamente disponível, podendo se tornar tóxico à planta quando absorvido em excesso. Em áreas de cultivo de arroz do Rio Grande do Sul, o ferro tem causado problemas de toxidez e o uso de cultivares tolerantes torna-se uma importante estratégia para solucionar o problema, sendo necessário o estudo dos mecanismos que conferem essa tolerância às plantas para aplicação em programas de melhoramento. A proteômica é uma importante ferramenta, que através da combinação de técnicas como a eletroforese em gel bidimensional e espectrometria de massa permite a análise do complexo de proteínas envolvido nas respostas às condições ambientais adversas. Assim, o objetivo desse trabalho foi analisar e identificar proteínas com expressão diferencial em raízes de cultivares de arroz quando submetidas ao estresse por ferro, para identificar mecanismos envolvidos na tolerância a esse estresse. Foram utilizadas duas cultivares de arroz, Epagri 107 e BR-IRGA 410, tolerante e sensível à toxidez por ferro, respectivamente, que foram submetidas ao tratamento com FeSO4EDTA 7mM. Através de eletroforese em gel bidimensional, foram identificados 284 spots com diferença de expressão entre as combinações de tratamentos (entre cultivares e plantas tratadas e controle). Desse total, 93 proteínas foram identificadas por espectrometria de massa. As proteínas identificadas estão envolvidas no metabolismo de carboidratos, transdução de sinais, relacionadas à defesa da plantas, a fatores de transcrição, transposons, ácidos nucléicos, reações redox, entre outras funções. Grande parte das proteínas não possui função conhecida. A proteína glutationa S-transferase e o fator de transcrição tipo GATA que possuem relação direta com o metabolismo do ferro, foram diferencialmente expressos na cultivar tolerante quando submetida ao estresse. Sua associação com o mecanismo de tolerância necessita, no entanto ser confirmada.

Neste trabalho foi desenvolvido um método de análise de erva mate mediante as técnicas de espectroscopia no infravermelho próximo (NIR), espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (ICP OES) e espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado (ICP-MS), com o intuito de classificar a erva mate por país de origem da América do Sul. Para isto, foram utilizados métodos de análise multivariada supervisionada e não supervisionada, como a análise hierárquica por agrupamentos (HCA), a análise por componentes principais (PCA), o método do k-ésimo vizinho mais próximo (kNN), soft independent modeling class analogy (SIMCA), análise discriminante por mínimos quadrados parciais (PLS-DA) e análise discriminante por máquinas de vetor de suporte (SVM-DA). Foram analisadas 54 amostras de erva mate provenientes da América do Sul (Argentina, Brasil, Paraguai e Uruguai). As amostras foram cominuídas em moinho criogênico e diretamente analisadas para a obtenção dos espectros de reflexão no NIR. Para a determinação dos elementos Ca, K, Mg, Al, Fe, Mn, Ba, Cu, P, Sr e Zn por ICP OES e Li, Be, Ti, V, Cr, Ni, Co, As, Se, Rb, Mo, Ag, Cd, Sb, La, Ce, Pb, Bi e U por ICP-MS, foi realizada a decomposição das amostras por via úmida em bloco digestor em sistema fechado. A classificação da erva mate por país de origem foi possível, sendo que a melhor classificação para todos os métodos de análise multivariada foi obtida por NIR e para as concentrações dos elementos avaliados, a SVM-DA foi o melhor. Conclui-se que a erva mate pode ser avaliada por país de origem mediante a técnicas de ICP OES, ICP-MS e NIR. / A method of yerba mate analyzis using near infrared spectroscopy (NIR), inductively coupled plasma optical emission spectrometry ( ICP OES ) and inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) was developed in order to classify yerba mate by country of origin in South America. To this end, principal components analysis (PCA), k-nearest neighbor (KNN), soft independent modeling class analogy (SIMCA), partial least square discriminant analysis (PLSDA), discriminant analysis by vector machine (SVM-DA) were used for multivariate analysis of the NIR spectra and element concentrations found in 54 samples of yerba mate from South America (Argentina, Brazil, Paraguay and Uruguay ). The samples were ground in cryogenic mill and directly analyzed in order to obtain the reflectance spectra in the NIR region. For elements determination (Ca, K, Mg, Al, Fe, Mn, Ba, Cu, P, Sr and Zn by ICP OES and Li, Be, Ti, V, Cr, Ni, Co, As, Se, Rb, Mo, Ag, Cd, Sb, La, Ce, Pb, Bi and U by ICP-MS), the samples were acid digested in closed vessel in digestion block. The classification of the yerba mate by country of origin was possible, whereas the best classification using all multivariate analysis methods was obtained for NIR. For the element concentrations, the best classification was obtained by SVM-DA. It was concluded that yerba mate classification by country of origin can be assessed through ICP OES, ICP-MS and NIR.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-01-23T15:04:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2499744 bytes, checksum: 53d7b61863a6e4086f9d8de02864e860 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-23T15:04:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2499744 bytes, checksum: 53d7b61863a6e4086f9d8de02864e860 (MD5) Previous issue date: 2016-06-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os carrapatos são artrópodes hematófagos obrigatórios de grande importância médica e veterinária. Estes artrópodes tem desenvolvido adaptações evolutivas que permitem aos mesmos a sobrevivência por longos períodos de tempo sem se alimentarem ou que, após se alimentarem até a ingurgitação, vivam com a presença de altos níveis de substâncias que estimulam o estresse oxidativo. Além disso, apresentam uma anatomia bem conciliada ao seu modo de vida e aquisição de alimentos. Dentre os principais órgãos do carrapato, as glândulas salivares apresentam grande repertório de proteínas, que desempenham papéis essenciais para o seu desenvolvimento e para a manutenção de sua relação com os hospedeiros vertebrados. Essas proteínas também podem facilitar a transmissão de agentes patogênicos aos hospedeiros. Nesse projeto, o sialome do carrapato Amblyomma sculptum foi analisado utilizando cromatografia líquida acoplada com a espectrometria de massas. Essa abordagem combinada permitiu a identificação de 501 proteínas, das quais, aproximadamente, 15% foram classificadas como proteínas secretadas putativas. As classes do grupo de proteínas secretadas putativas que mais se destacaram foram: a) família das proteínas ricas em glicina; b) família das enzimas secretadas e c) ferritinas. As proteínas ricas em glicina podem desenvolver várias funções, dentre elas, a formação do cone de cemento e a resposta a estresse. Proteínas vinculadas com o citoesqueleto, com a maquinaria de modificação proteica e com o transporte intracelular também foram identificadas, as quais foram reunidas no grupo “putative housekeeping proteins”. A diferença na abundância das proteínas entre os gêneros macho e fêmea, encontradas nas glândulas salivares dos carrapatos A. sculptum, foi indicada pela identificação de proteínas em apenas um dos sexos. As proteínas ricas em glicina, do citoesqueleto e chaperonas foram identificadas em maior número em machos do que em fêmeas, sugerindo que esse gênero esteja melhor preparado para a produção de cemento, resposta ao estresse, modificação proteica e transporte intracelular do que as fêmeas. A caracterização funcional das proteínas permitiu uma correlação dentro de um contexto biológico e facilitou um melhor entendimento sobre o sialome de carrapatos A. sculptum. Essa informação pode auxiliar na identificação de novos candidatos a alvos para o controle de carrapatos, no entanto, estudos adicionais devem ser realizados com o objetivo de melhorar o conhecimento das vias de controle das diferentes funções celulares. / Ticks are obligate hematophagous arthropods of great medical and veterinary importance. These arthropods have developed evolutionary adaptations that allow them to survive for long periods of time without feeding or, after feeding until engorgement, live with the presence of high levels of substances that stimulate oxidative stress. In addition, they have an anatomy well reconciled for their way of life and food acquisition. Among the major organs of the tick, the salivary glands contain a large repertoire of proteins, which play essential roles for the tick’s development and for the maintenance of their relationship with their vertebrate hosts. These proteins may also facilitate the transmission of pathogens to the host. In this project, the sialome of the Amblyomma sculptum tick was analyzed using liquid chromatography coupled with mass spectrometry. This combinatorial approach allowed for the identification of 501 proteins, of which approximately 15% were classified as putative secreted proteins. The classes of the group of putative secreted proteins that most stood out were: a) family of glycine-rich proteins; b) family of secreted enzymes; and c) ferritins. Glycine-rich proteins can perform several functions, including cement cone formation and stress response. Proteins linked to the cytoskeleton, the protein modification machinery and intracellular transport were also identified, which were classified in the putative housekeeping proteins group. The difference in the abundance of the proteins between the male and female gender found in the salivary glands of A. sculptum ticks was indicated by the identification of proteins in only one sex. Glycine-rich, cytoskeletal and chaperon proteins were identified in greater numbers in males than in females, suggesting that the male gender is better prepared for cement production, stress response, protein modification and intracellular transport than females. The functional characterization of the proteins allowed a correlation within a biological context and facilitated a better understanding of the sialome of A. sculptum ticks. This information may aid in the identification of novel candidates for tick control; however, additional studies should be carried out in order to better understand the pathways that control with the different cellular functions.

Orientador: Mario Henrique Gonzalez / Coorientador: Márcia Cristina Bisinoti / Banca: Letícia Malta Costa / Banca: Mirian Cristina dos Santos / Resumo: O cromo é um contaminante inorgânico que apresenta elevado impacto ao meio ambiente e pode estar presente em algumas atividades antrópicas. Há diversos métodos para a determinação deste metal em amostras ambientais utilizando técnicas espectroanalíticas, porém, o emprego da espectrometria de massas com plasma acoplado indutivamente (ICP-MS) tem se mostrado bastante eficiente devido a possibilidade de detecção em baixas concentrações. No entanto, o estudo da remoção das interferências deve ser cautelosamente avaliado. Diferentes estratégias podem ser empregadas para reduzir essas interferências, dentre elas: equações matemáticas de correção e emprego da célula de colisão. As principais interferências espectrais foram analisadas empregando soluções de ácido nítrico, água-régia invertida e ácido cítrico em diferentes concentrações (1 - 5%) contendo concentrações pré-estabelecidas do analito (1,5 - 90 μg L-1) no modo padrão sem correções e utilizando célula de colisão com discriminação por energia cinética (KED) com vazões de gás hélio pré-definidas. Foi otimizado um método unificado para a determinação de Cr em diferentes matrizes (água, tecido de peixe e solo), empregando materiais de referência certificados (MRC's) de água (NIST1640a),tecido de peixe (DORM-4) e solo(NIST2709a)onde foram avaliadas as respostas no modo padrão sem correções; utilizando vazões distintas de hélio na célula de colisão (1 - 5 mL min-1); aplicando duas equações matemáticas de correção e equações... / Abstract: Chrome is an inorganic contaminant that has high impact to the environment and is present in some anthropic activities. There are several methods for the determination of chrome in environmental samples using spectrum-analytical techniques, however, the use of mass spectrometry with inductively coupled plasma (ICP-MS) has been very effective due to the possibility of detection in low concentrations, however the study of removals of interferences must be carefully evaluated. Different strategies may be used to reduce those interferences, among them: mathematical equations of correction and using the collision cell. In order toe valuate the main spectral interferences were analyzed solutions of nitric acid, aqua regia and citric acid in different concentrations (1 - 5%) having previously established concentrations of analyte (1.5 - 90 μg L-1) in standard mode without corrections and using collisioncell by discrimination of kinetic energy (KED) with pre-defined helium gas flows were analyzed. Subsequently, in order to develop a unified method for the determination of Cr in different matrices (water, fish tissue and soil), Certified Reference Materials (CRMs) of water (NIST1640a), fish tissue (DORM-4) andsoil (NIST 2709a)where were evaluated in standard mode without corrections; using distinct flows of Helium in the collision cell (1 - 5 mL min-1); applying two mathematical equations of correction and mathematical equations jointly with the collision cell. Statistical analyzes were ... / Mestre

Orientador: Alberto José Cavalheiro / Banca: Angela Regina Araujo / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Daniel Rinaldo / Banca: Edson Rodrigues Filho / Resumo: Levando em consideração a diversidade química das estirilpironas isoladas de Cryptocarya mandioccana, este trabalho teve por objetivo estudar o mecanismo de fragmentação de 6 dessas substâncias por ESI-MS/MS e por GC-EI-MS e também determinar a configuração absoluta dos centros metínicos hidroxilados e do centro C6 do anel pirônico. Foram isoladas seis estirilpironas polihidroxiladas: desacetilcriptocarialactona (1), criptomoscatona D1 (2), criptomoscatona E2 (3), criptomoscatona E1 (4), criptomoscatona E3 (5) e criptomoscatona F1 (6). As análises por ESI-MS/MS e os cálculos teóricos indicaram que em fase gasosa os sítios de protonação e cationização das estirilpironas ocorrem no oxigênio carbonílico, similarmente aos anéis lactônicos descritos na literatura. O mecanismo de fragmentação proposto para as estirilpironas cationizadas com Na+ é comum a todas, apresentando perda neutra de C10H12O [M+Na148]+ e as substâncias tri-hidroxildas sofreram uma segunda fragmentação com perda neutra de acetaldeído [M+Na14844]+. Nos espectros de massas de íons totais não é observado o íon referente às moléculas protonadas [M+H]+, mas sim o íon [M+HH2O]+ referente à perda de água, portanto uma dissociação na fonte. Assim como para a espécie cationizada, este íon foi submetido à CID e no espectro MS/MS é observado novas eliminações de água referentes as perdas das demais hidroxilas, íons [M+HnH2O]+, e posteriormente abertura do anel pirônico e eliminação de mais uma molécula de água, seguida de CO [M+HnH2OCO]+. A derivação das estirilpironas com MSTFA permitiu analisá-las por CG-MS, porém em quase todos os casos não foi possível detectar o íon molecular. O pico base sempre é referente ao cátion de TMS (m/z 73), comum para substâncias derivadas com este reagente, enquanto que os outros íons fragmentos são resultantes da clivagem homolítica... / Abstract: Taking into account the chemical diversity of styrylpyrones isolated from Cryptocarya mandioccana, this work aimed to study the mechanism of fragmentation of six compounds belonging to this class by means of ESI-MS/MS and GC-EI-MS analysis and also to assign the absolute configuration of hydroxylated methinic centers and that at C6 in the pyrone ring. Six styrylpyrones poli-hydroxilated: desacetilcryptocaryalactone (1), cryptomoscatone D1 (2), cryptomoscatone E2 (3), cryptomoscatone E1 (4), cryptomoscatone E3 (5), e cryptomoscatone F1 (6) were isolated. Analysis by ESI-MS/MS and data from theoretical calculations in gas phase suggest the carbonyl oxygen as protonation and cationization site of the styrylpyrones, which is in accordance to data reported for the lactone rings. The fragmentation mechanism proposed for cationized styrylpyrones with Na+ is common to compounds 1-6, with loss of neutral C10H12O [M+Na148]+. Tri-hydroxylated substances showed a second fragmentation with loss of an acetaldehyde unit [M+Na14844]+. Although it was not possible to observe the protonated molecule ions [M+H]+ in the MS total ion spectrum, the ion [M+HH2O]+ referring to water loss was observed, which indicates in-source dissociation. As for the cationized species, this ion was subjected to CID process and the MS/MS spectrum showed an additional water loss related to a second hydroxyl group, ions [M+HnH2O]+. It was then followed by pyrone ring-opening and eliminations of a water molecule and CO [M+HnH2OCO]+. Derivatization of the styrylpyrones with MSTFA was conducted to allow the analysis by GC-MS. On the mass spectra, in almost all cases, it was not possible to detect the molecular ion, and the base peak was always related to cation TMS (m/z 73). This ion is common for substances derived with this reagent, while the others ions are fragments resulting from the homolytic β cleavage with... / Doutor

Orientador: Lucia Galvão de Albuquerque / Coorientador: Larissa Fernanda Simielli Fonseca / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Poliana Fernanda Giachetto / Resumo: O conhecimento de mecanismos de regulação de genes associadas a características de qualidade de carne pode colaborar para o entendimento dos processos biológicos envolvidos com esses fenótipos, o que juntamente aos métodos quantitativos já utilizados, poderá auxiliar na seleção de animais mais jovens a um menor custo, tornando viável a inclusão dessas características em programas de melhoramento genético. Apesar dos vários estudos existentes sobre genes diferencialmente expressos, relacionados à qualidade de carne em diferentes espécies, há grande divergência em trabalhos com bovinos, em relação aos genes associados a essas características. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi validar genes diferencialmente expressos, comuns a diferentes trabalhos de expressão gênica global, encontrados na literatura, relacionados às características de maciez da carne e área de olho de lombo (AOL), em um rebanho comercial de bovinos da raça Nelore. Além disso, verificar se genes diferencialmente expressos seriam traduzidos em proteínas diferencialmente expressas, por meio da técnica de espectrometria de massas avançada (LC-MS/MS). Para isso, foram selecionados 24 animais Nelores extremos para cada característica estudada. Os genes foram escolhidos por meio de buscas realizadas em trabalhos na literatura. Foram selecionados 9 genes (CAPN1, CAPN2, CAST, HSPB1, DNAJ1, FABP4, SCD, ASAH1 e PRKAG3) para maciez da carne e 5 genes (IGF-1, IGF-2, MSTN, NEDD4, UBE4A) para AOL. Para macie... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The knowledge of gene regulation mechanisms associated with meat quality traits may contribute to the understand the biological process involved with these phenotypes, which, jointly with the quantitative methods already used, may help in the selection of younger animals at a lower cost, making viable the inclusion of these traits in animal breeding programs. Despite the several studies on differentially expressed genes related to the meat quality in different species, there is a wide divergence in studies with cattle, regarding to the genes associated with these traits. In this context, the objective of the present work was to validate differentially expressed genes, common in different publications of global gene expression found in the literature, related meat tenderness and rib eye area (REA) in a commercial herd of Nelore cattle. Moreover, to verify if differentially expressed genes would be translated into differentially expressed proteins, by means advanced mass spectrometry technique (LC-MS/MS). For that, 24 extreme Nelore animals for each trait were used. The genes were chosen through searches in publications found in the literature. Were selected nine genes (CAPN1, CAPN2, CAST, HSPB1, DNAJ1, FABP4, SCD, ASAH1 e PRKAG3) for meat tenderness and five genes (IGF-1, IGF-2, MSTN, NEDD4, UBE4A) for REA. For meat tenderness, the genes CAPN1, CAPN2, CAST, HSPB1 e DNAJA1 were up regulated in animals with tough meat. For the REA, just the MSTN gene was up regulated in animals ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Fernando Rogério Pavan / Banca: Katiany Rizzieri Caleffi Ferracioli / Banca: Luís Otávio Regasini / Banca: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Marlus Chorilli / Resumo: As infecções pulmonares são um problema global e estão classificadas em terceiro lugar entre as principais causas de morte. Entre as infecções pulmonares crônicas estão a tuberculose (TB) e a paracoccidioidomicose (PCM). A TB é uma doença cujo principal agente etiológico é o Mycobacterium tuberculosis e a PCM tem como agente etiológico o complexo Paracoccidioides spp. As duas doenças podem ocorrer na forma de coinfecção, com incidência aproximada de 2,8 a 5,5% dos casos nos países da América do Sul e 10% no Brasil. Ambos os microrganismos já foram descritos na forma de biofilme monoespécie e o tratamento de ambas as doenças tem merecido atenção, devido a casos de resistência e as poucas opções terapêuticas. Diante do exposto, este trabalho visa mostrar, pela primeira vez, a capacidade de M. tuberculosis e P. brasiliensis se associarem por meio do crescimento na forma de um biofilme misto in vitro, a fim de elaborar um novo protótipo de 3'chalcona carreada numa nanoemulsão com atividade para as formas planctônica e de biofilme. Para isso, inicialmente foi padronizada e caracterizada a formação dos biofilmes monoespécie da linhagem ATCC M. tuberculosis (H37Rv), da linhagem clínica (Rv40) e da linhagem de P. brasiliensis (Pb18) e dos biofilmes mistos das associações de H37Rv+Pb18 e Rv40+ Pb18 (nesta ordem de crescimento), ambas as associações mostraram um aparente sinergismo entre elas. Na formação do biofilme misto inverso denominado assim pela ordem de associação, onde primeir... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pulmonary infections are a global problem and rank third among the leading causes of death. Among the chronic lung infections are tuberculosis (TB) and paracoccidioidomycosis (PCM). The TB is a disease whose main etiologic agent is Mycobacterium tuberculosis and PCM has the etiological agent Paracoccidioides spp. The two diseases may occur in the form of coinfection, with an approximate incidence of 2.8 to 5.5% of the cases in the countries of South America and 10% in Brazil. Both microorganisms have already been described in the form of monospecies biofilm and the treatment of both diseases has deserved attention, due to cases of resistance and the few therapeutic options. In view of the above, this research aims to show, for the first time, the ability of M. tuberculosis and P. brasiliensis to associate by means of growth in the form of a mixed biofilm in vitro, in order to elaborate a new prototype in a nanoemulsion with activity for planktonic and biofilm forms. For this purpose, it was initially standardized and characterized the formation of monospecies biofilms of the ATCC strain M. tuberculosis (H37Rv), the clinical lineage (Rv40) and the P. brasiliensis (Pb18) lineage and the mixed biofilms of the associations of H37Rv + Pb18 and Rv40 + Pb18 (in this order of growth), both associations showed an apparent synergism between them. In order to establish the mixed biofilm (Pb18 + H37Rv), it was first proposed the association of P. brasiliensis (Pb18), followed by ATCC M. tuberculosis (H37Rv) with order of inverse growth, in this association a apparent competition between the microorganisms was observed. All biofilms, monospecies and mixed, were consolidated from 30 to 45 days... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor