Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-30Bitstream added on 2014-06-13T19:09:17Z : No. of bitstreams: 1 egea_tc_me_sjrp.pdf: 1427713 bytes, checksum: d8f2e425f18704f4f7828a1c94ad86de (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Para o setor industrial, o isolamento e identificação de microrganismos com habilidade em produzir biocatalisadores é de grande importância para a apresentação de novas fontes de enzimas ao mercado. O isolamento é uma das ferramentas mais utilizadas na seleção de microrganismos, proporcionando o levantamento de espécies capazes de metabolizar compostos químicos potencialmente tóxicos, sendo essenciais na biorremediação, pois atuam como medida mitigadora para os problemas decorrentes do uso irracional de agrotóxicos. Neste trabalho, foram isoladas 75 linhagens fúngicas de solo de plantação de cana de açúcar, por diferentes fontes de carbono, em diferentes épocas do cultivo e em duas áreas de coleta – solo com e sem a queima da palha – para o estudo do potencial de produção enzimática e de degradação do herbicida diuron. Dentre os isolados, encontrou-se 10 gêneros diferentes, sendo a maioria referente ao gênero Trichoderma (40%), seguido de Fusarium (15%), Cunninghamella (13%) e Aspergillus (12%). Da quantidade total de fungos isolados, 56% foram oriundos do solo de queimada e 44% do solo sem queima. Os gêneros Aspergillus, Cunninghamella, Fusarium e Trichoderma foram os gêneros encontrados em todos os meios de isolamento, como também os mais constantes, sendo os dois últimos, os únicos a serem encontrados em todas as coletas. Os isolados foram submetidos à fermentação do estado sólido, contendo bagaço de cana e farelo de trigo como substratos, para estudo da produção de xilanase, CMCase e lacase. A atividade das enzimas pelos isolados fermentados foi bastante variada, com produção de xilanase atingindo valores máximos de 64,0 U/mL (Aspergillus) e 63,7 U/mL (Aspergillus), a produção de CMCase foi de 5,5 U/mL (Fusarium) e 4,2 U/mL (Aspergillus) e lacase de 0,50 U/mL (Verticillium) e 0,27 U/mL (Fusarium). Dos 74 isolados, 23 foram... / The isolation and identification of microorganisms with ability to produce biocatalysts is a great method for the presentation of new sources of enzymes to the industry. Isolation is one of the most used tools in the selection of microorganisms, providing a survey of species able to metabolize potentially toxic chemical compounds In this study, 75 fungal strains were isolated from soil of plant sugar cane from different carbon sources, at different times of cultivation and collecting in two areas - soil with and without straw burning - to study the enzyme activity and degradation of the herbicide diuron. Among the isolates, were found 10 different genres, mostly related to the genus Trichoderma (40%), followed by Fusarium (15%), Cunninghamella (13%) and Aspergillus (12%). Of the total isolates, 56% came from the soil of burned and 44% of the ground without burning. The genera Aspergillus, Cunninghamella, Fusarium and Trichoderma were the genera found in all media of isolation, and the last two were the only ones to be found in all samples. The isolates were subjected to solid-state fermentation, containing sugar cane bagasse and wheat bran as substrates to study the production of xylanase, CMCase and laccase. The activity of enzymes by the fungus fermentation was quite varied, with xylanase production reached maximum values of 64.0 U/mL (Aspergillus) and 63.7 U/mL (Aspergillus), the production of CMCase was 5.5 U/mL (Fusarium) and 4.2 U/mL (Aspergillus) and laccase from 0.50 U/mL (Verticillium) and 0.27 U/mL (Fusarium). Of the 74 isolates, 23 were selected for verification of the potential degradation of the herbicide diuron. All selected microorganisms showed higher degradation of the herbicide in question, and the genus Aspergillus had the most promising degradation (47.7% for peak product and 67.1 per concentration) in the period studied

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000434470-Texto+Completo-0.pdf: 6587349 bytes, checksum: 405b1e4ec3fc9ec1beb9e4856acacdf7 (MD5) Previous issue date: 2011 / Approximately one-third of the world’s population is infected with Mycobacterium tuberculosis, the aetiological agent of human tuberculosis (TB). As global incidence of drug-resistance constantly increases, the urgent need for developing new anti-TB drugs and vaccines becomes more evident. Component enzymes of fundamental metabolic pathways seem to be attractive as define molecular targets. Guanosine monophosphate synthase (GMPS), a G-type amidotransferase, catalyzes the amination of xanthosine monophosphate (XMP) to guanosine monophosphate (GMP) in a reaction that occurs in two domains, the glutamine amidotransferase and the ATP pyrophosphatase, where it attacks a highly reactive adenyl-XMP intermediate, leading to GMP formation. The guaA (Rv3396c) gene, which codes for GMPS, was identified by sequence homology in the M. tuberculosis H37Rv genome. We evidenced that adenyl-XMP formation causes enzyme inhibition by increase of ATP and XMP levels. In addition, M. tuberculosis GMPS (MtGMPS) displays an allosteric behavior to XMP variation, demonstrating positive cooperativity and different kinetic aspects from that reported for human and Escherichia coli enzymes. The proposed ordered mechanism of substrates binding, which results in the release of pyrophosphate before binding ammonia showed to be the same to other GMPSs. Our results on MtGMPS might be useful to reveal its role in M. tuberculosis purine metabolism, providing knowledge for the development of new drugs and vaccines to treat and prevent TB, respectively. / Aproximadamente 1/3 da população mundial está infectada com o Mycobacterium tuberculosis, agente etiológico da tuberculose humana (TB). A incidência global e o constante aumento da resistência às drogas tornam evidente a urgente necessidade do desenvolvimento de novas drogas, para o tratamento, e vacinas, para a prevenção desta doença. As enzimas das vias metabólicas fundamentais são vistas como atrativos alvos moleculares definidos. A enzima guanosina monofosfato sintase (GMPS), uma amidotransferase do tipo G, catalisa a aminação da xantosina monofosfato (XMP) à guanosina monofosfato (GMP), em uma reação que ocorre em dois domínios, o glutamina amidotrasferase e o adenosina trifosfato (ATP) pirofosfatase, onde ocorre o ataque do intermediário altamente reativo adenil-XMP, levando a formação de GMP. O gene guaA (Rv3396c), o qual codifica a enzima GMPS, foi identificado por homologia de sequência no genoma de M. tuberculosis H37Rv. Nós evidenciamos que a formação do adenil-XMP causa uma inibição da enzima pelo aumento dos níveis de ATP e XMP. Além disso, a GMPS de M. tuberculosis (MtGMPS), apresentou um comportamento alostérico na variação dos níveis de XMP, demonstrando cooperatividade positiva e diferentes aspectos cinéticos dos já reportados para as enzimas de humanos e Escherichia coli. O mecanismo ping-pong foi proposto com base nos resultados evidenciados pela liberação de pirofosfato (PPi) depois da ligação da amônia, corroborando com os dados previamente publicados para outras GMPSs. Nossos resultados podem ser úteis por revelar o papel desta enzima no metabolismo de purinas do M. tuberculosis, fornecendo conhecimento para o desenvolvimento de novas drogas e vacinas para o tratamento e prevenção, respectivamente.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437323-Texto+Completo-0.pdf: 4287591 bytes, checksum: a4736ecf5ed6c11a9d86f23c3c30d3b3 (MD5) Previous issue date: 2011 / Tuberculosis re-emerged in the mid 80s and currently about two million people die each year due to this disease. The resurgence of tuberculosis has become a threat to public health. The high susceptibility of HIV-infected patients and the proliferation of multi-drug resistant strains have created the need to develop new therapies. However, no new class of drugs against tuberculosis was developed in the last 45 years. Thus, it becomes imminent need to develop new antituberculosis agents. As purine metabolism could be implicated in mycobacterial latency the purine nucleoside phosphorylase (EC 2. 4. 2. 1) has been proposed as target for development of antibacterial drugs. PNP catalyzes the reversible cleavage in the presence of inorganic phosphate of N-ribosidic bonds of the purine nucleosides and deoxynucleosides, except adenosine. This reaction generates the purine base and ribose (deoxyribose)-1-phosphate. PNP is specific for purine nucleosides in the β-configuration and cleaves the glycosidic bond with inversion of configuration to produce α-ribose-1-phosphate. In this work PNP was crystallized in association with inosine, hypoxanthine and acyclovir, substrate, product and inhibitor, respectively, and data were collected using synchrotron radiation. In addition, molecular dynamics simulations and isothermal titration calorimetry experiments were used to provide detailed information on the dynamic properties and to investigate the profile and thermodynamic affinities of MtPNP associated with these molecules. With obtained results we hope to contribute to the search of new selective inhibitors for MtPNP, since differences between the mycobacterial and human enzyme binding sites have been also identified, making structure-based drug design feasible. / A tuberculose ressurgiu na metade dos anos 80 e, atualmente aproximadamente dois milhões de pessoas morrem por ano devido a esta doença. O ressurgimento da tuberculose tornou-se uma ameaça à saúde pública. A alta susceptibilidade dos pacientes infectados com HIV e a proliferação de cepas resistentes a múltiplas drogas têm criado a necessidade de se desenvolver novas terapias. No entanto, nenhuma nova classe de drogas contra a tuberculose foi desenvolvida nos últimos 45 anos. Deste modo, torna-se iminente a necessidade de se desenvolver novos agentes antituberculose. Como o metabolismo de purinas pode estar implicado na latência da micobactéria, a purina nucleosídeo fosforilase de Mycobacterium tuberculosis (MtPNP) (EC 2. 4. 2. 1) foi proposta como alvo para o desenvolvimento de drogas antibacterianas. A PNP catalisa a clivagem reversível, na presença de fosfato inorgânico, de ligações N-ribosídicas de nucleosídeos e desoxinucleosídeos de purina, com exceção da adenosina. Esta reação produz base púrica livre e ribose (desoxiribose)-1-fosfato. A reação se processa com inversão de configuração, de β-nucleosídeos para α-ribose-1-fosfato. Neste trabalho a PNP foi cristalizada em associação com inosina, hipoxantina e aciclovir, substrato, produto e inibidor, respectivamente, e os dados foram coletados utilizando radiação síncrotron. Além disso, a simulação por dinâmica molecular e experimentos de calorimetria por titulação isotérmica foram utilizadas para fornecer informações detalhadas acerca das propriedades dinâmicas, e investigar o perfil termodinâmico e afinidades da MtPNP associada com estas moléculas .Com os resultados obtidos nós esperamos contribuir para a busca de novos inibidores seletivos de MtPNP, já que as diferenças entre os sítios de ligação da enzima humana e de micobactéria foram identificadas, tornando viáveis projetos de desenho de drogas baseados na estrutura.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000424470-Texto+Completo-0.pdf: 1933848 bytes, checksum: 8ff49b9ceaa68691d9de882c207c447c (MD5) Previous issue date: 2010 / First identified in Saccharomyces cerevisie as silent information regulators (SIRs) sirtuins (SIRTs) are widely distributed in all phyla of life. These large and diverse class III histone deacetylases (HDACs) comprise a family of NAD+-dependent protein deacetylases that catalyze mono-ADP-ribosyl transfer and/or deacetylation, and are considered a highly conserved family of proteins. Zebrafish (Danio rerio) is a freshwater fish widely used as model organism in many research areas. Characteristics such as low costs of breeding and maintenance, easy water-soluble drugs administration and rapid adaptation to new environments, among others, made the zebrafish a suitable model organism for studying many human diseases; including aging-associated disorders. Despite its promising use as a vertebrate model of aging, little is known about the presence of sirtuin-related genes in zebrafish, which has been considered an important research target for its therapeutics potential. Therefore, the purpose of this study was to identify all sirtuin-related genes and to map their expression patterns in nine different tissues of adult zebrafish. Total RNA was extracted from tissues samples of male and female zebrafish. RT-PCR reactions were performed under optimized conditions for expression pattern analysis of the sirtuins-related genes, previously identified using NCBI-Blast searches. Results showed the existence of eight sirtuins-related genes, including two paralogs. Each gene presented a unique expression pattern, illustrating their wide tissue distribution. In order to test a modulatory effect on gene expression of the sirtuin members, we exposed fish to resveratrol and the results demonstrated an alteration of the expression levels of some sirtuins. In this sense, we suggest that new drugs potentially able to modulate sirtuins expression could be tested using the system here described, aiming, in the future, to develop more selective therapies for age-associated disorders / Descobertas inicialmente em Saccharomyces cerevisie como reguladoras de silenciamento de informação (SIRs), as sirtuínas (SIRTs) estão amplamente distribuídas em todos os domínios de vida. Esta grande e diversa família de histonas desacetilases da classe III (HDACs) são dependentes de nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD+) para exercer suas funções de desacetilação e/ou transferência de mono-ADP-ribosil. São consideradas uma família de enzimas bastante conservada não apenas entre eucariotos, nos quais são encontradas múltiplas sirtuínas, mas também em procariotos. O zebrafish (Danio rerio) é um teleósteo de água doce amplamente utilizado como animal modelo em diferentes áreas de pesquisa. Características como manutenção em pequenos espaços e com baixos custos, fácil administração de drogas solúveis em água e rápida aclimatação a novos ambientes, tornaram o zebrafish modelo de estudo para várias doenças humanas; entre elas as relacionadas ao envelhecimento. Apesar do uso crescente do zebrafish como sistema modelo, e das sirtuínas serem importantes alvos de pesquisa nos últimos anos principalmente devido seu potencial terapêutico, pouco é conhecido sobre sirtuínas e zebrafish. Portanto, identificar genes relacionados às sirtuínas e caracterizar o padrão de expressão gênica de cada membro em diferentes tecidos do zebrafish foi o objetivo deste trabalho. Para tanto, amostras de diferentes tecidos foram retiradas de animais adultos de ambos sexos e diretamente congeladas em nitrogênio líquido. Após a extração de RNA total de cada amostra, reações de RT-PCR, já padronizadas, foram realizadas para análise do padrão de expressão dos genes relacionados às sirtuínas, identificados previamente através de buscas no NCBI-Blast. Nossa investigação identificou oito genes relacionados às sirtuínas, incluindo dois parálogos. Cada um dos oito genes identificados apresentou um padrão de expressão único, ilustrando ampla distribuição tecidual dos membros da família das sirtuínas. Com o objetivo de testar a modulação na expressão destes genes, realizamos um experimento de exposição ao resveratrol que alterou os níveis de expressão gênica de algumas das sirtuínas. Neste sentido, propomos que novas drogas potencialmente moduladoras de sirtuínas sejam testadas usando o sistema aqui descrito com o objetivo de, no futuro, desenvolver terapias mais seletivas para as doenças associadas ao envelhecimento.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000422760-Texto+Completo-0.pdf: 1667027 bytes, checksum: 3a4e17bc0587e9fb62a27ed8ef767155 (MD5) Previous issue date: 2010 / Uridine phosphorylase (UP) is a key enzyme in the pyrimidine salvage pathway, catalyzing the reversible phosphorolysis of uridine to uracil and ribose-1- phosphate (R1P). The human UP type 1 (hUP1) is a molecular target for the design of inhibitors intended to boost endogenous uridine levels to rescue normal tissues from the toxicity of fluoropyrimidine nucleoside chemotherapeutic agents, such as capecitabine and 5-fluorouracil. Here, we describe a method to obtain homogeneous recombinant hUP1, and present initial velocity, product inhibition, and equilibrium binding data. These results suggest that hUP1 catalyzes uridine phosphorolysis by a steady-state ordered bi bi kinetic mechanism, in which inorganic phosphate binds first followed by the binding of uridine, and uracil dissociates first, followed by R1P release. Fluorescence titration at equilibrium showed cooperative binding of either Pi or R1P binding to hUP1. Amino acid residues involved in either catalysis or substrate binding were proposed based on pH-rate profiles. / A uridina fosforilase (UP) é uma enzima chave na rota de salvamento das pirimidinas, catalisando a fosforólise reversível de uridina a uracil e ribose-1- fosfato (R1P). A UP humana do tipo 1 (hUP1) é um alvo molecular para o desenho de inibidores com a finalidade de aumentar os níveis endógenos de uridina para “resgatar” os tecidos normais da toxicidade produzida pelo uso de agentes quimioterápicos análogos de pirimidinas, como o 5- fluorouracil e a capecitabina. Neste trabalho, descrevemos o método de obtenção da proteína recombinante homogênea hUP1, dados de velocidade inicial, inibição pelo produto e ensaios de ligação em equilíbrio. Esses resultados sugerem que a hUP1 catalisa a fosforólise de uridina por um mecanismo cinético bi bi ordenado, no qual o fosfato inorgânico se liga primeiro seguido pela ligação da uridina, e o uracil de dissocia primeiro, seguido pela dissociação da R1P. Os ensaios de ligação por fluorescência em equilíbrio mostraram uma ligação cooperativa tanto do PI como da R1P. Os resíduos de aminoácidos envolvidos tanto na catálise como na ligação foram propostos pelo perfil de pH.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423675-Texto+Parcial-0.pdf: 173088 bytes, checksum: 99755374f8de265672c0fc78a783ae8c (MD5) Previous issue date: 2010 / Purine Nucleoside Phosphorylase (PNP) is a purine-metabolizing enzyme that catalyzes the reversible phosphorolysis of purine nucleosides such as (deoxy)inosine and (deoxy)guanosine (dGuo) to their respective bases and (deoxy)ribose-1- phosphate. It is a key enzyme in the purine salvage pathway of mammalian cells. Tcells rely on PNP activity to maintain its functions and are particularly sensitive to PNP deficiency. The present investigation sought to determine whether the pharmacological blockage of PNP activity with a transitIon state analog (Immucillin-H) can arrest bone loss in two models of induced periodontal disease in rats. Experimental data showed that immucillin-H inhibitted bone loss induced by ligatures and bacterial LPS, with reduced number of infiltrating osteoclasts and inflammatory cells. In vitro assays revealed that Immucillin cannot directly abrogate differentiation of osteoclast precursor cells but affects lymphocyte-mediated osteoclastogenesis. On the other hand, incubation of pre-activated T-CD4+ with Immucillin-H decreased RANKL secretion with no compromise of cell viability. Immucillin-H, an analog of the transition state of PNP activity, holds great promise as a drug in the treatment of diseases characterized by imbalances of bone metabolism. / A Purina Nucleosídeo Fosforilase (PNP) é uma enzima envolvida no metabolismo de purinas que catalisa a fosforólise reversível de nucleosídeos purínicos tais como (deoxi)inosina e (deoxi)guanosina formando suas bases purínicas correspondentes e (deoxi)ribose-1-fosfato. A PNP é considerada uma enzima chave na via de salvamento de purinas de células de mamíferos. Especificamente, células T são dependentes da atividade da PNP para manter suas funções e sensíveis a alterações da mesma. O presente estudo tem como objetivo determinar se o bloqueio farmacológico da PNP com um análogo do estado de transição da enzima (lmmucillin-H) é capaz de impedir a perda óssea em dois modelos de doença periodontal induzida em ratos. Dados experimentais mostram que o lmmucillin-H inibiu a perda óssea induzida por ligaduras e por lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano assim como reduziu o número de osteoclastos e células inflamatórias. Ensaios in vitro revelaram que o lmmucillin-H não age diretamente inibindo a diferenciação de células precursoras de osteoclastos, no entanto, afeta a osteoclastogênese mediada por linfócitos. Importante, a incubação de linfócitos T CD4+ pré-ativados e tratados com lmmucillin-H diminuiu a secreção de RANKL. Desta forma, o lmmucillin-H apresenta grandes premissas como uma droga no uso de doenças caracterizadas por alterações no metabolismo ósseo.

Submitted by ALEXSON FILGUEIRAS DUTRA null (alexsonbrejo@hotmail.com) on 2017-12-06T13:54:46Z No. of bitstreams: 1 Tese_Alexson_Filgueiras_Dutra.pdf: 1878635 bytes, checksum: f8d5902f17d40824b2fda4baa95a9ac2 (MD5) / Submitted by ALEXSON FILGUEIRAS DUTRA null (alexsonbrejo@hotmail.com) on 2017-12-11T18:47:11Z No. of bitstreams: 1 Tese_Alexson_Filgueiras_Dutra.pdf: 1878635 bytes, checksum: f8d5902f17d40824b2fda4baa95a9ac2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2017-12-13T10:07:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dutra_af_dr_jabo.pdf.pdf: 1878635 bytes, checksum: f8d5902f17d40824b2fda4baa95a9ac2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-13T10:07:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dutra_af_dr_jabo.pdf.pdf: 1878635 bytes, checksum: f8d5902f17d40824b2fda4baa95a9ac2 (MD5) Previous issue date: 2017-11-16 / O selênio (Se) é um elemento essencial para os seres humanos, no entanto, em plantas é considerado benéfico. O Se pode atuar como antioxidante de células vegetais, melhorando o crescimento das plantas. A aplicação de Se em culturas para fins de biofortificação tem sido uma estratégia eficaz para aumentar o fornecimento do elemento na dieta da população. Entretanto, para ter sucesso é fundamental estudar a aplicação de Se, conhecendo a fonte e concentração adequadas, de forma que não prejudique o crescimento, os aspectos nutricionais, bioquímicos e produtivos da planta. Assim, objetivou-se avaliar o efeito de fontes e concentrações de Se na biofortificação e aspectos nutricionais, fisiológicos e enzimáticos de plantas de couve-flor. O estudo foi realizado em ambiente protegido, com plantas de couve-flor cultivadas em sistema hidropônico, sob concentrações de Se (0, 5, 15, 30 e 60 μmol L-1) nas fontes selenato e selenito de sódio. Os tratamentos foram organizados em delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5 x 2, com quatro repetições. Verificou-se que a aplicação de Se na concentração de 5 μmol L-1 na solução nutritiva promoveu crescimento das plantas e teor do elemento na inflorescência da couve-flor foi superior ao limite considerado adequado pelo Codex Alimentarius. O fornecimento de Se, na fonte selenato, pode ter contribuído para inibir a peroxidação lipídica e a produção de espécies reativas de oxigênio, uma vez que com esse elemento houve melhora na taxa de fotossíntese e na regulação da atividade enzimática das plantas. Em altas concentrações, o Se fornecido principalmente na fonte selenito, afeta negativamente o equilibrio nutricional das plantas e, em consequência, o crescimento, os apectos fisiológicos, enzimáticos e produtivos da couve-flor, depreciando a qualidade do produto.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15Bitstream added on 2014-06-13T18:44:34Z : No. of bitstreams: 1 dayoowoyemi_i_dr_rcla.pdf: 2213436 bytes, checksum: 57ef54bb4924dae1b326ff6c146c0802 (MD5) / Atualmente, existe um crescente interesse em explorar diversos habitats, a fim de revelar a biodiversidade microbiana, incluindo as leveduras. Tal diversidade ainda não acessada guarda a descoberta de novas espécies para ciência, provavelmente muitas das quais com potencial para aproveitamento em processos biotecnológicos. Com o objetivo de explorar e conservar a diversidade de fungos, o Central de Recursos Microbianos da UNESP (CRM – UNESP) mantém em seu acervo várias estirpes de leveduras isoladas de ecossistemas diversos, sendo alguns deles pouco explorados. No início deste trabalho sabíamos que muitas das leveduras depositadas no acervo do CRM – UNESP não estavam totalmente caracterizadas tanto em nível taxonômico, quanto em relação ao potencial biotecnológico que poderiam apresentar. Portanto, o presente estudo foi desenhado para caracterizar e identificar taxonomicamente leveduras depositadas no CRM – UNESP, bem como selecionar estirpes que produzem enzimas extracelulares degradadoras de polissacarídeos como amilase, celulase, xilanase, pectinase e ligninase. Usando uma abordagem polifásica, um total de 340 isolados de leveduras foi identificado, sendo que 71,2% compreendem 43 taxa de ascomicetos e os restantes 28,8% foram classificados em 27 taxa de basidiomicetos. O estudo também levou à descoberta de 8 prováveis novas espécies. Baseado nesta constatação, a classificação taxonômica e análise filogenética foi realizada para duas espécies anamórficas de ascomicetos e uma espécie teleomórfica de basidiomiceto. A descrição destas três espécies é apresentada neste estudo. Os resultados demonstraram que Wickerhamiella kiyanii FB1-1DASPT e W. pindamonhangabaensis H10YT pertencem à clade Wickerhamiella da ordem Saccharomycetales... / In recent time, there has been an increasing interest in exploring diverse ecological habitats in order to reveal the yeast biodiversity. The increased awareness in the biotechnological potentials of yeasts has also spurred attempts to search for new species with novel biotechnological capabilities. Aiming to explore and conserve the fungal diversity from various ecosystems, the UNESP – Central for Microbial Resources (UNESP – CMR) harbors various strains of ecologically diverse yeasts isolates, some of which were yet to be identified. Therefore, this study was designed to identify and characterize some yeasts from the UNESP – MRC and to select strains possessing extracellular plant polysaccharide degrading enzymes namely amylase, cellulase, xylanase, pectinase and ligninase. Using a polyphasic approach, a total of 340 strains were identified. Taxonomic classification grouped 71.2% of these isolates into 43 ascomycetous taxa while the remaining 28.8% were classified in 27 basidiomycetous taxa. The study also led to the discovery of 8 putative new species. As a result, we classified two anamorphic species in the Ascomycota and one teleomorphic species in the Basidiomycota. In this study we provide the description of both species. Our results demonstrated that the two ascomycetous species proposed as Wickerhamiella kiyanii FB1-1DASPT and W. pindamonhangabaensis H10YT belong to the Wickerhamiella clade of the Saccharomycetales (Saccharomycetes) while the basidiomycetous species proposed as Bulleromyces texanaensis ATT064T belong to the Bulleromyces / Papiliotrema / Auriculibuller clade of the Tremellales (Agaricomycotina). In order to show the significance of intraspecific diversity in yeasts, in one of our studies, we subjected 11 strains, (including the type strain CBS 8960T) of Hannaella kunmingensis... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-25Bitstream added on 2015-03-03T12:06:21Z : No. of bitstreams: 1 000806886_20160725.pdf: 581026 bytes, checksum: 4c55faecb6d2b9cbebcf0fed8076771a (MD5) Bitstreams deleted on 2016-07-25T13:17:27Z: 000806886_20160725.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-25T13:18:38Z : No. of bitstreams: 1 000806886.pdf: 2412685 bytes, checksum: 76a763d7dfe3317535d6f9ec19a7cd78 (MD5) / As endoglicanases EC 3.2.1.4 são enzimas capazes de hidrolisar as ligações glicosídicas ?-1,4 da celulose, resultando na liberação de glicose, celobiose e celo-oligossacarídeos. Empregadas mundialmente em diversos processos industriais, por exemplo, como amaciante de tecidos de algodão e bioestonagem de jeans, na extração de sucos de frutas, na adição em detergentes comerciais, na fabricação de cerveja, e na produção de papel e de etanol. Atualmente, há um grande interesse em enzimas que hidrolisem biomassa lignocelulósica para obtenção de etanol de segunda geração. A imobilização de enzimas em matrizes sólidas oferece muitas vantagens, entre as quais, reuso da enzima, a fácil separação do produto e o aumento da estabilidade operacional. Os objetivos deste trabalho foram: produzir CMCases secretadas por Aspergillus niger e Humicola grisea var. thermoidea em cultivo sólido e submerso; imobilizar CMCases em suporte agarose com diferentes ativações químicas; determinar a estabilidade térmica e as propriedades cinéticas dos derivados obtidos, comparando-os com as enzimas livres; avaliar a capacidade de reuso dos derivados ativos e estáveis e analisar qualitativamente o produto de hidrólise dos substratos celulósicos. O fungo A. niger secretou grandes quantidades de CMCases, 34,1 U.mg-1, em meio Vogel, utilizando pó de bagaço de cana-de-açúcar como fonte de carbono. O pH 5 foi determinado como o ótimo para a enzima, apresentando instabilidade ao pH 10. Com a utilização de aditivos estabilizante, a trealose a 10% (m/v), manteve, em pH 10, 80% de atividade residual, por 25 horas. Em relação à temperatura, apresentou uma faixa ampla de atividade entre 45°C a 75°C, tendo como temperatura ótima 65°C. O derivado enzimático que ofereceu melhor estabilidade foi aquele em que a imobilização foi conduzida juntamente com o substrato carboximeticelulose (CMC 1%), em... / The endoglucanases EC 3.2.1.4 are enzymes that hydrolyze the ?-1, 4 glycosidic linkages of the cellulose producing glucose, cellobiose and cello-oligosaccharides. Used worldwide in many industrial processes such as fabric softener and bioestonagem cotton jeans, extraction of fruit juices, in the addition of commercial detergents, in brewing, and the production of paper and ethanol. Currently, there is great interest in enzymes that hydrolyze lignocellulosic biomass to obtain second-generation ethanol. The immobilization of enzymes on solid arrays provides many advantages as the enzyme reuse, easy separation of the product and increased operational stability. The aims of this study were to produce secreted: CMCases produce secreted by Aspergillus niger and Humicola grisea var. thermoidea in solid and submerged cultivation; CMCases immobilized on agarose support with different chemical activations; determine the thermal stability and kinetic properties of the derivatives obtained comparing them with the free enzyme; evaluate the reuse capacity assets and stable derivatives and qualitatively analyze the product of hydrolysis of cellulosic substrates. The fungus A. niger secreted large amounts of CMCases, 34.1 U.mg-1 amid Vogel, using powdered sugarcane bagasse as a carbon source. The pH of 5 was determined as the optimum for the enzyme, presenting instability to pH 10. With the use of stabilizing additives, the 10% trehalose (w / v), kept at pH10, 80% residual activity for 25 hours. Regarding temperature there was a broad activity range from 45 °C to 75 °C and the optimum temperature as 65 °C. The enzyme derivative which offered better stability was one in which immobilization was conducted with the carboxymethycellulose substrate (1% CMC) in agarose support Glutaraldehyde (70% of reactive groups), preserving catalytic activity of 35% at 60 °C for 250 hours. Through qualitative TLC analysis, it...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-29Bitstream added on 2015-03-03T12:06:09Z : No. of bitstreams: 1 000810960.pdf: 543169 bytes, checksum: 86b76dd316103fade6c41bb9db902c95 (MD5) / As pesquisas com células-tronco têm avançado expressivamente e ocupam um papel de destaque no contexto do novo ramo terapêutico que se convencionou denominar de medicina regenerativa. A abundância e facilidade de obtenção do tecido muscular têm permitido a ampliação dos estudos acerca de seu potencial como fonte de células-tronco mesenquimais. Neste sentido, diferentes metodologias têm sido propostas para a obtenção de células-tronco mesenquimais oriundas do tecido muscular (CTDM), objetivando cultivo e aplicação clínica em medicina humana e veterinária. Um aspecto importante a ser considerado nos diversos protocolos de isolamento de células-tronco mesenquimais refere-se ao emprego rotineiro da colagenase de origem bacteriana (Clostridium histolyticum). O emprego de reagentes xenobióticos, como a colagenase, rotineiramente empregados, obedecem às recomendações da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA - Brasil), que preconiza a não utilização desses produtos no cultivo de células destinadas à terapia celular em pacientes humanos, uma vez que podem conter agentes infecciosos e contaminantes capazes de desencadear severas reações imunológicas. Neste contexto, objetivou-se, neste estudo, a proposição de novas metodologias a fim de substituir o emprego de xenobióticos no processo de obtenção CTDM. Para tanto, foram comparados os métodos de digestão enzimática (colagenase), dissociação mecânica e explante, em diferentes meios de cultura. O conjunto de resultados mostra que as técnicas de dissociação mecânica e explante são metodologias... / The researches with stem cells have advanced significantly and take a prominent role in the context of the new treatment branch that has been conventionally called of regenerative medicine. The abundance and ease of obtaining muscle tissue have allowed the expansion of studies on its potential as a source of mesenchymal stem cells. In this sense, different methodologies have been proposed for obtaining mesenchymal stem cells derived of muscle tissue (SCDM), aiming cultivation and clinical application in human and veterinary medicine. An important aspect to be considered in the various protocols of isolation of mesenchymal stem cells refers to the routine use of bacterial collagenase (Clostridium histolyticum). The use of xenobiotic reagents, such as collagenase, contrasts with the recommendations of the National Health Surveillance Agency (ANVISA - Brazil), which recommends the avoidance of the use of these products in the cultivation of cells destined for cell therapy in human patients, since which may contain infectious agents and contaminants that are capable of triggering severe immunological reactions. In this context, we aimed in this study to propose new methods to replace the use of xenobiotics in the process of obtaining SCDM. For this end, the methods of enzymatic digestion (collagenase), mechanical dissociation and explant were compared in different culture media. The set of results shows that the techniques of mechanical dissociation and explant are viable methodologies for replacement of collagenase procedures for obtaining SCDM. These new methodological...