Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-08Bitstream added on 2014-06-13T19:17:43Z : No. of bitstreams: 1 polegato_bf_me_jabo.pdf: 388236 bytes, checksum: 27d5324f7a537c0e242c14342ba2b294 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Atualmente, o conhecimento sobre a fisiologia e a biologia reprodutiva de cervos-do-pantanal (Blastocerus dichotomus) é escasso e as lacunas existentes aumentam a vulnerabilidade da espécie à extinção. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram: (1) caracterizar alguns parâmetros relacionados à fisiologia reprodutiva de fêmeas de cervos-do-pantanal e (2) fornecer métodos adequados para o acesso às diferentes fases do ciclo reprodutivo. Para isso, seis fêmeas da espécie foram utilizadas para a caracterização hormonal do ciclo estral, da gestação e do período pós-parto. Amostras fecais foram colhidas diariamente para o monitoramento do ciclo estral, duas vezes por semana durante a gestação e em dias alternados no período pós-parto. As dosagens das progestinas fecais foram feitas por EIA. Foram monitorados 16 ciclos estrais completos, cuja duração média foi de 21,3±1,3 dias (6,4±1,2d fase inter-luteal e 14,8±1,3d fase luteal). As concentrações médias de progestinas fecais para as fases inter-luteal e luteal do ciclo estral foram 834±311ng g-1 e 3979±1611ng g-1, respectivamente, e o valor limite entre elas foi de 1457ng g-1. Quatro fêmeas levaram a gestação a termo, determinando um período de gestação médio de 253±4 dias. Houve um aumento significativo (p<0,05) na concentração de progestinas fecais a partir do quarto mês de gestação, o que pôde direcionar o diagnóstico presuntivo de gestação na espécie. Assim, concentrações de progestinas fecais 15250ng g-1 foram indicativas de gestação. No período de 60 dias pós-parto em que as fêmeas foram monitoradas, 75% (3/4) delas apresentaram estro e/ou retomaram a atividade ovariana. / The scarce knowledge about reproductive physiology and biology in marsh deer (Blastocerus dichotomus) increases the vulnerability of this species to the extinction. Thus, the aims of this study were: (1) to characterize some parameters related to the reproductive physiology of females marsh deer and (2) to turn available adequate tools for the assessment of the reproductive cycle’s phases. Six females and one male were used to the hormonal characterization of the estrous cycle, pregnancy and post parturition period. Fecal samples were collected daily during the estrous cycle, twice a week during the pregnancy and in alternated days during the post parturition period of monitoring and the amount of fecal progestins was evaluated by enzyme immunoassay. The mean length of the estrous cycle was 21.3±1.3 days (6.4±1.2d interluteal and 14.8±1.3d luteal phase) and the fecal progestins concentrations were 834±311ng g-1 and 3979±1611ng g-1, respectively for the inter-luteal and luteal phase. The limit value between these phases was 1457ng g-1. Four females became pregnant and exposed a mean pregnancy period of 253±4 days. There was a significant increase (p<0,0001) in the fecal progestins excretion since the fourth month of pregnancy, that could provide guidelines for the pregnancy diagnosis in the species. Thus, fecal progestins concentrations 15250ng g-1 were indicative of pregnancy. Seventy five percent (3/4) of the females exhibit estrous and/or restarted the ovarian function during the post parturition period of monitoring.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo deste estudo foi investigar na saliva de crianças pré-púberes obesas, em comparação com crianças eutróficas, a presença de possíveis diferenças na expressão de mediadores proteicos relacionados à metainflamação através de um estudo observacional transversal. Foram selecionadas 105 crianças pré-púberes com idade entre 5 e 9 anos, sem quaisquer outros comprometimentos sistêmicos ou bucais sendo realizada a mensuração do comprimento da circunferência da cintura (CC), além do peso e estatura para cálculo do IMC e seu escore Z (zscore IMC), de forma a compor 3 grupos: EU - eutrofia (-2SD&#8804; zscore IMC&#8804;1SD), SP - sobrepeso (1SD < zscore IMC < 2SD) e OB obesidade (zscore IMC &#8805; 2SD). Após o exame médico e odontológico foi feita a coleta de sangue e de saliva total não estimulada, de forma protocolada. Amostras séricas e salivares foram analisadas, individualmente, para a dosagem de IL1&#946;, IL6, IL8. IL10, IL12p70, TNF&#945;, MCP1, leptina, grelina e insulina, por Multiplex e adiponectina total e de alto peso molecular (adipoHMW), por ELISA. Além disso, as amostras séricas foram utilizadas para o delineamento hemodinâmico dos pacientes. As amostras salivares de EU e OB foram também analisadas em pools por espectrometria de massa (MS) e a presença de algumas proteínas foi validada por imunoblotting, para a comparação do perfil salivar proteico. As concentrações dos analitos foram comparadas tanto entre os grupos (teste de Kruswall-Wallis), como em relação ao zscore IMC e ao CC (Correlação de Spearman ou Pearson). Dos 12 analitos, somente a adipoHMW não foi detectada em nenhuma das amostras salivares. Na comparação OBxEU houve aumento na concentração total de proteínas salivares, da insulina e leptina sérica e salivar e do MCP1, além de diminuição da adiponectina sérica total e de adipoHMW e uma menor relação adiponectina/leptina (A/L) no grupo OB. As principais correlações obtidas com o zscore IMC foram com as concentrações séricas e salivares de insulina e leptina (positivas) e com a relação A/L (negativa), observando-se também a correlação negativa com a adiponectina total e adipoHMW séricas. Na comparação entre as concentrações séricas e salivares, foi possível detectar correlação positiva entre as dosagens de insulina e leptina, assim como com os valores da relação A/L. Na análise proteômica por MS foram identificadas 670 proteínas, sendo 163 delas com expressão diferenciada na saliva de OB em relação a EU. Dentre estas, encontram-se alteradas proteínas relacionadas à resposta inflamatória humoral, em especial com a via alternativa do sistema complemento e do metabolismo redox. Foram selecionadas três destas proteínas para validação por imunoblotting, que confirmou o aumento do Fator H e a diminuição do Fator B e da tioredoxina na saliva de OB em relação a EU. Considerando os resultados, podemos verificar que embora com menores concentrações absolutas dos mediadores, a saliva mostrou praticamente as mesmas associações observadas no sangue, em especial para a insulina, leptina e relação A/L, sendo possível admitir que a análise salivar venha a ser um bom método diagnóstico não invasivo para a obesidade infantil. / The aim of this study was to investigate possible different expressions of protein mediators related to metaflammation, in normal and obese prepubertal children`s saliva. For this cross-sectional observational study, 105 prepubertal children, between 5 and 9 years old, without oral or systemic disorders were selected. Weight, height and waist circumference (CC) were measured and body mass index (BMI) and BMI zscore were calculated in order to classify the children into the following groups: EU - lean (-2SD &#8804; BMI zscore &#8804; 1SD), SP - overweight (1SD < BMI zscore <2SD) and OB - obese (BMI zscore &#8805; 2SD). Following medical and dental examination, blood and unstimulated whole saliva were sampled. The samples were individually analyzed by immunoassay for IL1&#946;, IL6, IL8, IL10, IL12p70, TNF, MCP1, leptin, insulin and ghrelin, using Multiplex. Total and high molecular weight (adipoHMW) adiponectin were analyzed using ELISA. Additionally, serum samples were used to assess the patients lipid profile. Pools of EU and OB saliva samples were also analyzed by mass spectrometry (MS). The presence of some proteins was validated for by immunoblotting. The concentrations of analytes were compared between the groups EU, SP and OB (Kruswall-Wallis test), and in relation to BMI zscore and CC (Pearson or Spearman correlation). Only adipoHMW was not detected in any saliva sample. In comparison with EU, OB showed an increase in total concentration of salivary proteins, salivary and serum insulin, serum and salivary leptin and serum MCP1. Also, a decreased serum total adiponectin and adipoHMW and a lower A/L ratio were observed in the OB group. BMI zscore was positively correlated with insulin and leptin salivary and serum concentrations. A negative correlation with A/L ratio, serum total adiponectin and adipoHMW was also observed. These correlations were also found with CC. Comparing blood and saliva concentrations, significant associations between the dosages of insulin and leptin, as well as the values of A/L ratio were found. In proteomic analysis, by MS, 670 proteins were identified, and 163 of them with differential expression in saliva of OB in comparison to EU. Proteins related to the inflammatory response, in particular with the alternative pathway of the complement system and of redox metabolism were differently expressed between EU and OB. Three of these proteins were selected for validation by immunoblotting, which confirmed the increase of complement H Factor and reduced thioredoxin and complement B Factor expression in the saliva of OB compared to EU. Considering the results, it can be concluded that, although at lower absolute concentrations, the inflammatory mediators in saliva showed the same associations observed in blood, especially insulin, leptin, and A/L ratio. It is possible to assume that salivary analysis may become a useful noninvasive diagnosis method for childhood obesity.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:52:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O presente trabalho realizou-se com diferentes linhagens de camundongos (A/J, C57BL/6, B6AF1, BXA1 e BXA2) que foram desafiados com diferentes doses da cepa Y de T. cruzi. O objetivo foi avaliar o padrão de resposta de imunoglobulinas produzidas por estas linhagens e para tanto, amostras de soros foram analisadas pelo método imunoenzimático. A partir dos resultados obtidos observou-se que todas as linhagens apresentaram uma resposta superior para IgG2a e IgG2b, quando comparados ao IgG1. Indicando um padrão Th1 que expressa resposta imunológica celular. As diferentes linhagens utilizadas nessa pesquisa apresentam padrões de resposta imunológica também diferentes frente à infecção por T. cruzi. Animais da linhagem C57BL/6 mostraram-se resistentes a infecção, enquanto que os animais da linhagem A/J mostraram-se susceptíveis, corroborando com a literatura. Os animais da linhagem híbridos B6AF1 foram mais resistentes à infecção que seu parental original C57BL/6. Sua resposta imunológica apresenta traços tanto do parental original A/J quanto do C57BL/6. Os animais da linhagem BXA1 puderam ser considerados resistentes à infecção, mas não apresentaram o mesmo controle observado nos animais das linhagens B6AF1 e C57BL/6. Os animais da linhagem BXA2 foram considerados susceptíveis à infecção, mas a controlaram por um período maior, sobrevivendo assim, por tempo superior àquele observado na linhagem A/J. Os resultados obtidos indicam que a subclasse de imunoglobulinas IgG2b desempenha importante papel na resistência à cepa Y de T. cruzi. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2015-11-12T10:30:34Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2015-11-12T10:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Os tecidos ósseos alógenos são utilizados nas cirurgias de reconstrução ortopédicas e odontológicas. O número crescente de transplantes de ossos na última década beneficia diversos pacientes. Os profissionais dos Bancos de Tecidos utilizam protocolos que reduzem os riscos de transmissão de doenças infectocontagiosas, entretanto, não eliminam esta possibilidade. Portanto, é importante que tecidos sejam esterilizados por um método eficaz, sendo usualmente aplicada a radiação ionizante. Porém, a radiação ionizante pode acarretar alterações estruturais e biológicas nos ossos em relação à dose. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos da aplicação da radiação gama e de feixe de elétrons, nas doses de 15 kGy, 25 kGy e 50 kGy nos tecidos ósseos desmineralizados preservados liofilizados ou congelados e avaliar as possíveis alterações no colágeno, na concentração de proteínas totais, BMP-2 e BMP-7. Para tanto foram utilizadas as técnicas de espectroscopia Raman, Bradford e ELISA. Foram utilizadas 5 diáfises de femur humano e parte das amostras foram desmineralizadas. As proteínas ósseas foram extraídas e quantificadas. Com os resultados da espectroscopia Raman, observamos que a eficiência da desmineralização foi de 85 a 90% porém com alterações na estrutura do colágeno. Alterações também foram observadas nos ossos congelados e irradiados nas doses de 25 kGy e 50 kGy. Nos resultados da quantificação de proteínas totais e específicas, ocorreram diminuições gradativas das concentrações médias das proteínas em relação à dose de radiação nos grupos estudados. Nas doses de radiação usualmente aplicadas aos tecidos ósseos, 15 kGy ou 25 kGy, as reduções nas concentrações das BMP-2 e BMP-7, foram menores que 20%. As reduções na dose de 50 kGy foram entre 27% a 53%, sendo influenciadas pelo tipo de radiação e pelo tipo de preservação dos ossos. / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

O Urso-de-óculos (Tremarctos ornatus), único urso endêmico da América do Sul, é uma espécie severamente ameaçada devido à perda do seu hábitat e à caça. É importante do ponto de vista da conservação pela função que cumpre no ecossistema onde habita e pela sua relação com a cultura Andina. Por estas razões, torna-se necessária a aplicação de alternativas de conservação a espécie. Uma ferramenta alternativa de conservação é a reprodução assistida, porém, existe pouco conhecimento da reprodução desta espécie. A pouca informação sobre os padrões reprodutivos diminui a possibilidade de se estabelecer programas de reprodução bem sucedidos e torna-se mais difícil a criação de planos de conservação. O objetivo deste estudo foi caracterizar o ciclo ovariano na fêmea do Urso-de-óculos. Para tanto foi realizada a monitoração endócrina por meio da extração e dosagem de metabólitos fecais dos esteróides sexuais: estradiol e progesterona. O estudo foi realizado com amostras colhidas de seis fêmeas de T. ornatus mantidas em cativeiro em dois zoológicos da cidade de Lima, Peru, pelo período de treze meses, desde Fevereiro de 2010 até Abril de 2011. As extrações dos metabólitos fecais foram feitas no Laboratorio de Reproducción Animal, FMVUNMSM, em Lima, Peru; e foram quantificados por enzimaimunoensaio (EIE), no Instituto de Bioquímica Médica, Veterinärmedizinische Universität Wien-Áustria. Os resultados indicam que é possível descrever e monitorar a endocrinologia do ciclo ovariano em T. ornatus de forma não-invasiva através do uso de metabólitos fecais de esteroides sexuais; demonstrando que o Urso-de-óculos em cativeiro é uma espécie que conta com uma reprodução não sazonal, com fase folicular e lútea durando em média 08 e 22 dias, respectivamente. Nestas condições, apresenta em média, de três a quatro fases de atividade ovarianas por ano. Os resultados encontrados ajudarão a compreender o ciclo ovariano nos Ursos-de-óculos e facilitar o desenvolvimento de programas de reprodução assistida na espécie. / Spectacled bear (Tremarctos ornatus) is the only bear species that inhabits South America. It is an endangered species due to habitat loss and hunting. For the conservation point of view it is an important species for the ecosystem maintenance and also for their relationship with the Andean culture. For these reasons it is necessary to apply conservation alternatives for this species. Assisted reproduction is an alternative conservation tool; however, there is a lack of knowledge of the Spectacled bear reproduction. Little information about the reproductive parameters diminishes the possibility to establish a successful breeding program and make difficult the implementation of conservation plans for the species. The aim of this study was to characterize the ovarian cycle in the female Spectacled bear with noninvasive techniques for monitoring fecal metabolites of reproductive hormones (estradiol and progesterone). The study was carried out with samples collected by a 13-month period (Feb/10 to April/11), from six captive females T. ornatus kept in two zoological institutions in Lima, Peru. The metabolites extraction was carried out at Laboratory of Animal Reproduction, FMV-UNMSM, in Lima-Peru, and the hormonal analysis was performed in the Institute of Medical Biochemistry, Veterinärmedizinische Universität Wien-Austria. The results show us that it is possible to describe and realize a non-invasive monitoring of ovarian cycles in T. ornatus, with the use of fecal metabolites of sex steroids; and demonstrates that in captive conditions Spectacled bear is a non-seasonal reproduction species, with follicular and luteal phases lasting on average 8 and 22 days, respectively, whereas in captivity has on average three to four stages of ovarian activity per year. These results will help to understand the ovarian cycle in Spectacled Bear and facilitate the development of programs of assisted reproduction in the species.

Abstract The purpose of this study was to develop sensitive and specific laboratory diagnostic methods for the demonstration of pneumococcal surface antigens or pneumococcus-specific antibodies in clinical samples. The work took account of epidemiological aspects of both pneumococcal disease and nasopharyngeal carriage of pneumococcus. We first compared the sensitivity of pneumococcal culture and antigen detection methods in nasopharyngeal samples in a developing country setting and then investigated the possibility of improving the sensitivity of the antigen detection by introducing an enrichment step in the procedure. — Further investigations were designed to determine the validity of pneumolysin-specific immune complex bound antibody assay as a tool for diagnosing pneumococcal ALRI in a developing country setting. Finally, we developed an enzyme immunoassay for the detection of pneumococcal capsular polysaccharide antigens, using type-specific antibodies produced in-house in rabbits through immunisation with an in-house-produced pneumococcal whole cell vaccine. The method was tested in nasopharyngeal and middle ear fluid samples. The first results indicated that antigen detection might be more sensitive than culture in demonstrating pneumococci in URT, particularly in children with prior antimicrobial therapy. Antigen detection is a feasible method for studies on pneumococci in developing countries. For type-specific demonstration of S. pneumoniae, detection of pneumococcal antigen after an enrichment step proved a sensitive method that can be applied for epidemiologic study purposes, e.g., in vaccine trials, in areas without ready access to a good microbiology laboratory. Determination of IC-bound pneumolysin IgG antibodies appears to be a useful method for species-specific diagnosis of pneumococcal infections. The results indicating pneumococcal aetiology in ALRI patients in this study compare well with the best results obtained by the use of lung aspirates. Increasing the number of serial samples improves the sensitivity of the assay, but even two samples provide more positive findings than other methods currently in routine use. Criteria of positivity need to be confirmed in subsequent larger studies with both healthy controls and patients with confirmed pneumococcal disease. It is also important to control the findings in patients with pneumonia of non-pneumococcal origin. The novel enzyme immunoassay was shown to work well with enrichment culture samples, with an almost 100% sensitivity compared with the culture. Middle ear fluid samples were too diluted for the enzyme immunoassay method used, and only 74% sensitivity compared with culture was achieved. Provided that adequate samples can be obtained, the method will be a useful complement to the current laboratory methods used to diagnose pneumococcal disease. With the existence of a broad spectrum of microbiological and immunological methods, it is imperative to seek international consensus for standard methods to demonstrate pneumococcus. Otherwise it is very difficult to compare results from different clinical studies. A WHO Working Group recently proposed a standard method for detecting upper respiratory carriage of pneumococcus, but a lot of work remains to be done in other areas of research on pneumococcal infections.

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A Doença de Chagas é um dos maiores problemas de saúde pública na América do Sul causando um elevado prejuízo à população. A despeito dos inúmeros esforços para o seu controle, a doença não tem cura e apresenta problemas científicos ainda não esclarecidos. Considerando-se que vários pesquisadores têm usado a radiação ionizante para modificar protozoários ou propriedades imunológicas de biomoléculas, neste trabalho foram estudados aspectos da resposta imunológica induzida em camundongos, resistentes e suscetíveis ao T. cruzi, utilizando formas irradiadas deste parasita. Doses baixas de radiação preservaram a capacidade reprodutiva e de invasão celular. Animais resistentes e suscetíveis, imunizados com os parasitas tratados por radiação, produziram anticorpos específicos. Após o desafio, os animais apresentaram baixa parasitemia, com exceção dos grupos imunizados com parasitas que receberam apenas altas doses de radiação. A seleção de formas tripomastigotas foi obtida irradiando-se os parasitas com baixas doses, o que promoveu aprimoramento da qualidade da resposta imune, a exemplo do que se observa quando da utilização de complemento. Estes dados evidenciam a importância da seleção das formas tripomastigotas para a imunização contra o T. cruzi e apontam a radiação ionizante como alternativa para este fim, uma vez que quando a seleção é feita utilizando-se complemento, depara-se com a dificuldade de sua remoção, colocando em risco o processo de imunização por introduzir substancias estranhas ao organismo. / Chagas\'s disease is one of the major public health problems in South America, promoting high prejudice to the local population. Despite the massive efforts to control it, this disease has no cure and presents puzzling unsolved questions. Considering that many researchers have used ionizing radiation to modify protozoans or biomolecules, we investigated the immunological response aspects of susceptible and resistant mice using irradiated parasites. Low radiation doses preserved the reproductive and invasive capacities of the parasite. Both susceptible and resistant animals, after immunization with irradiated parasites produced specific antibodies. After a challenge, the animals presented low parasitaemia, excepting those immunized with the antigen irradiated with higher doses. Using low radiation doses, we were able to selectively isolate trypomastigotes, leading to an improvement in the quality of the immune response, as previously reported when performing complement system assays. These data highlight the importance of selecting trypomastigote forms for immunization against T. cruz; and point towards ionizing radiation as an alternative to achieve this selection, since when this procedure is performed using complement, the subsequent steps are impaired by the difficulties to remove this component from the system.

A Doença de Chagas é um dos maiores problemas de saúde pública na América do Sul causando um elevado prejuízo à população. A despeito dos inúmeros esforços para o seu controle, a doença não tem cura e apresenta problemas científicos ainda não esclarecidos. Considerando-se que vários pesquisadores têm usado a radiação ionizante para modificar protozoários ou propriedades imunológicas de biomoléculas, neste trabalho foram estudados aspectos da resposta imunológica induzida em camundongos, resistentes e suscetíveis ao T. cruzi, utilizando formas irradiadas deste parasita. Doses baixas de radiação preservaram a capacidade reprodutiva e de invasão celular. Animais resistentes e suscetíveis, imunizados com os parasitas tratados por radiação, produziram anticorpos específicos. Após o desafio, os animais apresentaram baixa parasitemia, com exceção dos grupos imunizados com parasitas que receberam apenas altas doses de radiação. A seleção de formas tripomastigotas foi obtida irradiando-se os parasitas com baixas doses, o que promoveu aprimoramento da qualidade da resposta imune, a exemplo do que se observa quando da utilização de complemento. Estes dados evidenciam a importância da seleção das formas tripomastigotas para a imunização contra o T. cruzi e apontam a radiação ionizante como alternativa para este fim, uma vez que quando a seleção é feita utilizando-se complemento, depara-se com a dificuldade de sua remoção, colocando em risco o processo de imunização por introduzir substancias estranhas ao organismo. / Chagas\'s disease is one of the major public health problems in South America, promoting high prejudice to the local population. Despite the massive efforts to control it, this disease has no cure and presents puzzling unsolved questions. Considering that many researchers have used ionizing radiation to modify protozoans or biomolecules, we investigated the immunological response aspects of susceptible and resistant mice using irradiated parasites. Low radiation doses preserved the reproductive and invasive capacities of the parasite. Both susceptible and resistant animals, after immunization with irradiated parasites produced specific antibodies. After a challenge, the animals presented low parasitaemia, excepting those immunized with the antigen irradiated with higher doses. Using low radiation doses, we were able to selectively isolate trypomastigotes, leading to an improvement in the quality of the immune response, as previously reported when performing complement system assays. These data highlight the importance of selecting trypomastigote forms for immunization against T. cruz; and point towards ionizing radiation as an alternative to achieve this selection, since when this procedure is performed using complement, the subsequent steps are impaired by the difficulties to remove this component from the system.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:51:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP