Orientador: Irani Quagio-Grassiotto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T21:20:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mazzoni_TalitaSarah_D.pdf: 26204829 bytes, checksum: b3ecbe44f1a0367d6194fb7c297136c2 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Considerando o status atual de conhecimento da morfogênese e diferenciação gonadal nos Teleostei frente à restrição de informações, especialmente em aspectos tangentes ao estabelecimento do epitélio germinativo e sua relação com a formação da estrutura gonadal tomou-se aqui como modelos biológicos Tanichthys albonubes, Gymnocorymbus ternetzi, Corydoras schwartzi, Amatitlania nigrofasciata e Poecilia reticulata, representando as séries Otophysi, Percomorpha e Atherinomorpha, visando estabelecer uma análise comparativa da diferenciação gonadal entre as espécies, considerando suas posições na escala filogenética. A proliferação e diferenciação de células germinativas e somáticas a partir do primórdio gonadal em T. albonubes, G. ternetzi, C. schwartzi, A. nigrofasciata e P. reticulata levam à formação das diferentes estruturas ovarianas e testiculares e à constituição do epitélio germinativo que margeia as lamelas ovígeras e os túbulos/lóbulos testiculares. Nesses animais, o primórdio gonadal é formado por células germinativas primordiais (CGPs) rodeadas por células somáticas. Após sucessivas divisões mitóticas das células somáticas, o tecido gonadal aumenta, originando uma gônada indiferenciada, com as mesmas características morfológicas entre machos e fêmeas de T. albonubes e C. schwartzi. Em A. nigrofasciata e P. reticulata grupos de células germinativas e somáticas organizam-se de maneira distintas em machos e fêmeas. Nas gônadas femininas, as CGPs estão distribuídas por todo o tecido gonadal, enquanto que nas masculinas, as CGPs localizam-se na periferia. Na região dorsal das gônadas masculinas de A. nigrofasciata e P. reticulata, células somáticas organizam-se formando o ducto testicular, enquanto que em T. albonubes, G. ternetzi e C. schwartzi esse é a última estrutura a se formar. Nas gônadas femininas das cinco espécies, os processos envolvidos na diferenciação gonadal, como a foliculogênese, o estabelecimento do epitélio germinativo e a formação da cavidade ovariana são bastante semelhantes. Nas gônadas masculinas, as células somáticas, pré-Sertoli, associam-se às CGPs, formando cistos de espermatogônias; estas proliferam formando conjuntos celulares. Em T. albonubes e A. nigrofasciata os cistos de espermatogônias que constituem um mesmo conjunto, afastam-se uns dos outros, criando um espaço central, que se torna maior, originando um compartimento luminal, delimitado por cistos de espermatogônias. Formam-se os túbulos e lóbulos testiculares e o epitélio 2 germinativo masculino é estabelecido. Em G. ternetzi o tecido gonadal masculino é estabelecido e organizado em túbulos após a diferenciação gonadal feminina, sobre um ovário previamente desenvolvido, constituindo uma diferenciação gonocorística do tipo indireta. C. schwartzi apresenta um tecido gonadal masculino compacto, que sofre degenerações no interior de estruturas acinares compostas por cistos, para constituir os túbulos testiculares. Em P. reticulata, os conjuntos de espermatogônias conectam-se ao ducto em formação, originando os primeiros lóbulos testiculares. Ao final da diferenciação gonadal, os testículos de T. albonubes, G. ternetzi e C. schwartzi apresentam espermatogônias distribuídas aleatoriamente no túbulo. Estes anastomosam-se, caracterizando o testículo como tubular anastomosado. Em P. reticulata, as espermatogônias ficam restritas na região periférica dos lóbulos, os quais não apresentam lúmen testicular, características estas de um testículo lobular restrito. A mesma distribuição aleatória de cistos nos túbulos dos Otophysi ocorre nos lóbulos testiculares de A. nigrofasciata, caracterizando um testículo com organização lobular do tipo irrestrita / Abstract: Considering the lack of information about the gonadal morphogenesis and differentiation in Teleostei, especially in tangent aspects concerning the establishment of the germinal epithelium and its relation with the formation of the gonadal structure, in the present study, it was taken Tanichthys albonubes, Gymnocorymbus ternetzi, Corydoras schwartzi, Amatitlania nigrofasciata and Poecilia reticulata as biological models, representing the series Otophysi, Percomorpha and Atherinomorpha, to establish a comparative analysis of the gonadal differentiation among the species, taking into account their position in the phylogenetic scale. The proliferation and differentiation of germ and somatic cells from the gonadal primordium of the T. albonubes, G. ternetzi, C. schwartzi, A. nigrofasciata and P. reticulata lead to the formation of different testicular and ovarian structures and to the formation of the germinal epithelium of the ovigerous lamellae and the testicular lobules/tubules. In these animals, the gonadal primordium is formed by primordial germ cells (PGCs) surrounded by somatic cell. After successive mitotic divisions of the somatic cells, the gonadal tissue increases, resulting in a undifferentiated gonad, with the same morphological characteristics between males and females of T. albonubes and C. schwartzi. In A. nigrofasciata and P. reticulata groups of germ and somatic cells organize distinctly in males and females. In the female gonads, the PGCs are distributed throughout the gonadal tissue. In the male, the PGCs are located in the periphery. In the dorsal region of the male gonads of A. nigrofasciata and P. reticulata somatic cells are organized forming the testicular duct, whereas at T. albonubes, G. ternetzi and C. schwartzi this is the last structure formed. In female gonads of the five species, the processes involved in gonadal differentiation, such as folliculogenesis, the establishment of the germinal epithelium and the formation of the ovarian cavity are quite similar. In male gonads, the somatic cells, pre-Sertoli, associate to the PGCs forming cysts of spermatogonia; these proliferate and form clusters. In T. albonubes and A. Nigrofasciata, the cysts of the spermatogonia, which form a single cluster, move away from each other, creating a central space, which becomes greater, originating a luminal compartment, delimited by cysts of spermatogonia. Thus, testicular tubules and lobules are formed and male germinal epithelium is established. In G. Ternetzi, the male gonadal tissue is established and organized in tubules after the female gonadal 4 differentiation on an ovary previously developed, constituting an indirect gonochoristic differentiation. C. schwartzi presents a compact male gonadal tissue, which undergoes degeneration within acinar structures composed of cysts, forming the testicular tubules. In P. reticulata, the clusters of spermatogonia connect to the duct in formation, originating the first testicular lobules. At the end of gonadal differentiation, the testis from T. albonubes, G. ternetzi and C. schwartzi present spermatogonia, distributed along the tubule. These anastomose, characterizing the testis as anastomosing tubular. In P. reticulata, the spermatogonia are restricted at the periphery of the lobules, which do not have lumen, features of a restricted lobular testis. The same random distribution of cysts in the tubules of the Otophysi occurs in testicular lobules of A. nigrofasciata, featuring a testis with unrestricted lobular organization / Doutorado / Biologia Celular / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vivianecuri_tese.pdf: 3356542 bytes, checksum: 3e315d421d5b2c78bdb72380eb601099 (MD5) Previous issue date: 2010-11-29 / Alcoholism is a public health problem worldwide, involving thousands of men and women, bringing serious consequences as a disease in all organs of the human body, especially the stomach, liver, heart and brain. The consumption of alcoholic beverages for infants and mothers have attracted the attention of researchers in recent decades, with significant. Objective: This study aimed to evaluate the effects of ethanol in the junctional epithelium, adamantine epithelium, epithelium of attached gingiva and periodontal ligament of the upper first molar of the rat, during lactation. Materials and Methods: To this end, we used mice with a day of postnatal life, whose mothers received 20% ethanol in drinking water and rats whose mothers do not received ethanol during the entire lactation. After 21 days, the chicks were sacrificed with anesthetic overdose (Hypnol 3%). The heads were separated and fixed in a solution of "alfac" (alcohol 80% -85 ml, 10 ml of formalin and acetic acid 5-ml), embedded in paraffin and frontal serial sections were stained with hematoxylin and eosin. The cuts were focused light microscope (100x) fitted with a camera lucida. The nuclei of cells from tissue fragments were designed on paper with increased end of 1000x. and 50 nuclei of each structure were outlined with black pencil for later measurement of larger (D) and smaller (d)diameters. Once determined the diameters were estimated karyometric following parameters: geometric mean diameter ratio D / d, perimeter, area, volume, relationship between volume and area, eccentricity, shape coefficient and contour índex. This work also was done using a grid printed on paper. The images were drawn on the grid. In order to assess the volumes and cell cytoplasm, the nucleus / xxiv cytoplasm ratio, the numerical cell density, relation to the external surface / basal layer, the thickness of epithelial layers and the density of the surface was sometimes used the count of the points and sometimes the number of intersections and applied to stereological equations appropriate for each of these variables. All data collected were submitted to non-parametric statistics (Wilcoxon-Mann-Whitney). Results: Histologically, the superior maxillar molar tooth of the rat treated with ethanol was not erupted or partially eruído; the junctional epithelium was reduced and the adamant epithelium was in full function and consists of high palisade cells. The epithelium of attached gingiva was more slender and composed of smaller cells. In the Periodontal ligament was possible to observe bigger and disorganizedfibers. The nuclei of the epithelia studies have shown decreased values after Karyometry, for larger and smaller medium diameters, volume, area, perimeter, and the relation V / A. Stereologically could be observed in the junctional epithelium, adamantine and the attached gingiva, less voluminous cell with scarce cytoplasm leading to a greater number of cells per mm3 of tissue. The disorganized periodontal ligament showed larger fibers with smaller number per mm3. Conclusion: In this study, ethanol resulted in a framework of epithelial hypotrophy, indicating a direct action on the junctional and adamantineepithelium, epithelium of attached gingiva and periodontal ligament. / O alcoolismo é um problema de saúde pública mundial, envolvendo milhares de homens e mulheres, trazendo conseqüências graves como doença em todos os órgãos do corpo do humano, em especial o estômago, o fígado, o coração e o cérebro. O consumo de bebidas alcoólicas por lactantes e lactentes vem despertando a atenção dos pesquisadores, nas últimas décadas, com achados significantes. Objetivo: Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos do etanol no epitélio juncional, epitélio adamantino, epitélio da gengiva inserida e ligamento periodontal do primeiro molar superior do rato, durante a lactação. Materiais e Métodos: Para tal, foram utilizados ratos com um dia de vida pós-natal, cujas mães receberam etanol a 20% na água do bebedouro e ratos cujas mães não receberam o etanol, durante toda a lactação. Ao final de 21 dias, os filhotes foram sacrificados com sobredosagem anestésica (Hypnol a 3%). As cabeças foram separadas e fixadas em solução de alfac (álcool 80%-85 ml, formalina-10 ml e ácido acético-5 ml), incluídas em parafina e os cortes frontais seriados foram corados com hematoxilina e eosina. Os cortes foram focalizados ao microscópio de luz (100x) munido de uma câmara clara. Os núcleos das células dos tecidos estudados foram projetados sobre papel com aumento final de 1000x. e 50 núcleos de cada estrutura foram contornados com lápis preto para posterior medição dos diâmetros maior (D) e menor (d). Uma vez determinados os diâmetros, foram estimados os seguintes parâmetros cariométricos: diâmetro geométrico médio, relação entre D/d, perímetro, área, volume, relação entre volume e área, xxi excentricidade, coeficiente de forma e índice de contorno. Neste trabalho também, foi utilizada uma grade impressa sobre papel. As imagens obtidas foram desenhadas sobre a grade. Com a finalidade de se avaliar os volumes citoplasmáticos e celular, a relação núcleo/citoplasma, a densidade numérica celular, a relação superfície externa/ camada basal, a espessura das camadas epiteliais e a densidade da superfície, foi utilizada ora a contagem de pontos ora o número de intersecções e aplicadas às equações estereológicas apropriadas para cada uma dessas variáveis. Todos os dados colhidos foram submetidos à estatística não-paramétrica (teste de Wilcoxon-Mann-Whitney). Resultados: Histologicamente, o dente molar do maxilar superior do rato tratado com etanol não estava erupcionado ou então, parcialmente erupcionado; o epitélio juncional estava reduzido e o epitélio adamantino presente estava em plena função e constituído de células altas em paliçada. O epitélio da gengiva inserida era mais delgado e constituído de células menores. No ligamento periodontal foi possível observar fibras desorganizadas e maiores. Os núcleos dos epitélios estudados mostraram valores diminuídos, após cariometria, para os diâmetros maior, menor e médio; volume, área, perímetro e relação V/A. Estereologicamente foi possível observar, nos epitélios juncional, adamantino e da gengiva inserida, células menos volumosas com citoplasma mais escasso levando a um maior número de células por mm3 de tecido. O ligamento periodontal desorganizado mostrou fibras mais volumosas e com menor número por mm3. Conclusões: Neste estudo, o etanol ocasionou um quadro de hipotrofia epitelial, indicando uma xxii ação direta nos epitélios juncional e adamantino, epitélio de gengiva inserida bem como no ligamento periodontal.

Orientador: Irani Quagio-Grassiotto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:34:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franca_GisleineFernanda_D.pdf: 12888107 bytes, checksum: b5adf2302500a4a5bb3ee0ced3071f53 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Gymnotiformes, os peixes faca, constituem um importante componente da fauna Neotropical de água doce das Américas Central e do Sul. Este grupo compreende mais de 100 espécies válidas, distribuídas em 27 gêneros. Gymnotus sp., representante da família Gymnotidae, é conhecido regionalmente como tuvira, morenita, ituí ou sarapó. Apesar do fato que a dinâmica reprodutiva, morfologia do aparelho reprodutor e a histologia das gonâdas de Gymnotus sp. terem sido abordadas por alguns autores, informações detalhadas das alterações histológicas e fisiológicas durante o ciclo reprodutivo não estão disponíveis. Considerando a importância deste grupo de peixes na região Neotropical, o ciclo reprodutivo de Gymnotus sp. foi reavaliado. Obteve-se, além disto, as concentrações plasmáticas dos esteróides, dados da histologia gonadal, imunocitoquímicos, de atividade enzimatica e proliferação celular. As gônadas de Gymnotus sp. localizam-se ventralmente na cavidade celomática e são conectadas por longos ductos à papila urogenital e que tem posição anterior no corpo do animal. Ovários são fundidos, e a morfologia interna de ambos, ovário e testículo, não diferem de outros Ostariophysi . O ciclo reprodutivo em fêmeas e machos foi dividido em cinco fases, de acordo com uma nova abordagem do desenvolvimento das células germinativas. Esta classificação, desenvolvida para ser universal, para ovário assim como para o testículo, melhor expressa as alterações histológicas durante o ciclo reprodutivo em Gymnotus sp.. A relação entre o índice gonadossomático e características histológicas nas fases reprodutivas foi realizada. As concentrações plasmáticas de estradiol e 11-cetotestosterona foram pouco variáveis em fêmeas, possuindo, ambos, tendência a maiores valores no início do ciclo reprodutivo e em animais com ovários possuindo oócitos aptos a desova. As concentrações de testosterona se elevam conforme o ovário desenvolve-se, sugerindo uma possível relação do hormônio com o desenvolvimento dos folículos. As células da teça responderam positivamente à localização da enzima 3? hidroxiesteróide desidrogenase que está de acordo com as concentrações plasmáticas da testosterona. Inesperado e nunca reportado para os Teleostei, as células foliculares também reagem a detecção da 3? hidroxiesteróide desidrogenase. Em machos as concentrações plasmáticas de estradiol permanecem, praticamente, constantes durante todo o ciclo reprodutivo. A concentração plasmática de 11- cetotestosterona possui tendência a concentrações elevadas no início do ciclo, com uma queda gradual até a fase de maturação final, quando há nova elevação. O perfil hormonal da testosterona é semelhante aos dados de proliferação de espermatogônias secundárias, sugerindo uma possível relação entre as concentrações hormonais e os eventos proliferativos. Juntos concentração plasmática de esteróides, histologia gonadal, imunocitoquímica, atividade enzimática e detecção de proliferação celular forneceram uma nova compreensão do ciclo reprodutivo em Gymnotus. / Abstract: Gymnotiformes, the American knifefish, constitute an important component of the Neotropical freshwater fauna in the Central and South America. This group comprises more than 100 valid species, divided in 27 genera. Gymnotus sp., a representative of the family Gymnotidae, regionally known as tuvira, morenita, ituí or sarapó, is the best known gymnotid. Despite the fact that reproductive dynamic, morphology of the reproductive systems and the gonadal histology of Gymnotus sp. have been studied by some authors, detailed information on histological and physiological changes of the gonads along the reproductive cycle are not available. Considering the importance of this group of fish in the Neotropical region, the reproductive cycle of Gymnotus sp. has been reevaluated. Besides plasma steroids concentration along the reproductive cycle, data from gonadal histology, imunocitochemistry, enzymatic activity and cell proliferation were obtained. Gonads of Gymnotus sp. are ventrally located in the coelomic cavity and connected by long ducts to the urogenital papilla which has an anterior position in the animal body. Ovaries are fused, and the internal morphology of both, ovary and testis, do not differ from other ostariophysians. The reproductive cycle in females and males was divided in five phases, according to a new approach from the germ cells development. This classification, developed to be universal, for ovary as well as for testis better express the histological alterations during reproductive cycle in Gymnotus sp. The relation between the gonadossomatic index and the histological characteristics of the reproductive phases was done. Plasma concentrations of estradiol and 11-ketotestosterone were low variable in females, having, both, a tendency to high values in the beginning of the reproductive cycle and in animal's ovary with oocytes able to spawn. Testosterone concentration increasingly elevate as ovary develops, suggesting a possible relation with the follicles growth. The cal cells positivity for the enzymatic detection of 3? hidroxisteroid desidrogenase is in agreement with the plasma concentration of testosterone. Unexpected and never reported in Teleostei also the follicle cells react to the enzimatic detection of the 3? hidroxisteroid desidrogenase. In males, the plasma concentrations of estradiol remain approximatly constant along the reproductive cycle. Plasma concentration of 11-ketotestosterone tends to be high at the beginning of the cycle, with a gradual decrease at the final maturation phase, in which there is a new elevation. The highest concentration of testosterone along the male reproductive cycle coincids with the secondary spermatogonia proliferation, suggesting a possible relation between the concentration of this hormone and the proliferative events. Together plasma steroids concentration, gonadal histology, imunocitochemistry, enzymatic activity and detection of cell proliferation provide a new compreension of the reproductive cycle in Gymnotus. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Este trabalho teve como objetivo propor novo método para estudar a permeabilidade de fármacos, utilizando epitélio intestinal de rã-touro (Rana catesbeiana) em método ex vivo, empregando células de Franz. Por utilizar epitélio intestinal, um material de descarte proveniente de um animal utilizado como alimento humano, pode ser considerado um método alternativo, pois não implica no sacrifício de animais. A quantidade de fármaco permeada foi determinada por método de eletroforese capilar com detecção ultravioleta e validado para os antivirais lamivudina, zidovudina e aciclovir, na presença de metoprolol e floridizina. O fármaco escolhido como modelo nos ensaios de permeabilidade foi a lamivudina. Para estabelecimento do protocolo experimental dos estudos de permeabilidade, foi proposta uma análise de variância three-way para verificar a influência na permeabilidade dos fármacos, das seguintes variáveis: secção intestinal, pH da solução de Ringer e temperatura. Foram determinados a quantidade total de fármaco permeado (Qt), o coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) e a constante de absorção de primeira ordem (ka). A partir da análise do planejamento experimental, os efeitos das variáveis não foram significativos, exceto para a secção intestinal. Os resultados de coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) obtidos foram de 0,09 x 10-4 cm/s para lamivudina e de 0,22 x 10-4 cm/s para o metoprolol. O valor de Papp obtido de para o metoprolol é próximo dos valores encontrados na literatura para outras técnicas. Para a lamivudina, entretanto, a diferença encontrada em comparação às células Caco-2 pode ser devida às diferentes técnicas empregadas. / This work aimed to propose a new method for studying drug permeability using frog intestinal epithelium (Rana catesbeiana) in ex vivo method, using Franz cells. By using intestinal epithelium, a disposal material from an animal used as human food, can be considered an alternative method, because it doesn\'t involve the sacrifice of animals. The amount of permeated drug was determined by capillary electrophoresis method with UV detection and validated for antiviral drugs lamivudine, zidovudine and acyclovir in the presence of metoprolol and floridizina. The drug chosen as a model in permeability studies was lamivudine. To establish the experimental protocol for the permeability studies, a three-way analysis of variance was proposed to check the influence of intestinal section, pH of Ringer\'s solution and the temperature on the permeability. Total amount of drug permeated (Qt), apparent permeability coefficient (Papp) and first-order constant absorption (ka) were determined. By the analysis of experimental design, the effects of the variables were not significant, except for intestinal section. The results of apparent permeability coefficient (Papp) obtained were 0.09 x 10-4 cm/s for lamivudine and 0.22 x 10-4 cm/s for metoprolol. The value of Papp obtained for metoprolol is quite close to the values found in literature for other methods. For lamivudine, however, the difference found in comparison to Caco-2 cells may be due to different techniques.

Antiinflamatórios não-esteroidais (AINEs) são muito utilizados para o alívio da dor. Estudos indicam que 1 em 7 pacientes com doenças inflamatórias crônicas usam AINEs e que 1 em 5 pessoas usam AINEs para dores agudas. Os AINEs inibem a cicloxigenase (COX-1 e COX-2) ou seletivamente a COX-2, e apesar de sua excelente ação antiinflamatória e analgésica, muitos são os efeitos colaterais. Problemas gastrointestinais (GI) são a queixa mais comum para os AINEs convencionais, que também são associados a apoptose de diferentes tipos celulares. Os COX-2 seletivos apresentam menos problemas GI, mas seu uso tem sido questionado pelo risco de trombose e enfarto do miocárdio. Todos os AINEs parecem interferir no processo de cicatrização, embora os resultados dos estudos realizados apresentem-se conflitantes. Uma vez que os AINEs são utilizados por grande número de pessoas, o objetivo do nosso trabalho foi avaliar os efeitos dessa medicação sobre o tecido epitelial e durante o processo de cicatrização. Ratos Wistar foram tratados diariamente com AINEs convencional (diclofenaco, 3mg/Kg) ou um COX-2 seletivo (Celecoxibe, 1mg/Kg) por períodos de 7 e 14 dias. O controle foi feito com animais da mesma idade e peso não submetidos ao tratamento com AINEs. Após 7 dias, em todos os animais, controles e tratados, foram realizadas feridas cirúrgicas (4cm de diâmetro) no dorso depilado, sob anestesia com Tribromoetanol. Foram analisados, histológica e histometricamente, os epitélios da mucosa bucal, e a área de cicatrização (3 e 7 dias pós-cirurgia). Os resultados obtidos foram tabelados para avaliação estatística apropriada. No geral foi possível observar que todos os AINEs provocaram alterações com o seu uso agudo, no entanto para os inibidores seletivos da COX- 2 houve uma tendência à normalização com o uso crônico, não observada com o uso do AINE convencional. Na avaliação da cicatrização foi possível observar que os AINEs convencionais provocaram um pequeno atraso no processo de cicatrização, o que não foi observado com o uso de AINE seletivo para COX-2. Foi possível concluir que é necessário cautela em pacientes que fazem uso de AINEs, por provocarem alterações significativas no epitélio bucal, sendo os convencionais os que apresentam alterações mais significativas principalmente a longo prazo / Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are widely used for pain relief mostly in inflammatory chronic diseases. One in 7 patients with chronic inflammatory diseases uses NSAIDs, 1 in 5 uses NSAIDs for acute pain. NSAIDs may inhibit cyclooxygenase (COX-1 and COX-2) or COX-2 selectively, and despite their excellent anti-inflammatory and analgesic action, there are many side effects related. Gastrointestinal (GI) problems are the most commmon complaint for conventional NSAIDs, wich are also associated with different cell types apoptosis. The COX-2 selective NSAIDs have less GI problems, but may be associated to risks of cardiovascular events. All of NSAIDs seems to interfere with wound healing, although studies results may show conflicting results. Since NSAIDs are used by large numbers of people, the aim of this study was to evaluate the effects of this medication on the epithelial tissue and during wound healing process. Wistar rats were treated daily with conventional NSAIDs (diclofenac, 3mg/Kg) or selective COX-2 (celecoxib, 1mg/Kg) for a period of 7-14 days. The control group was animals of similar age and weight not treated with NSAIDs. After 7 days in all the animals, control and treated, were made surgical wounds (4cm in diameter) on the shaved back under anesthesia with Tribromoethanol. Oral mucosa and wound healing were histological and histometrically analyzed (3 and 7 days after surgery). The results received appropriated statistical evaluation. It was possible to observe that both NSAIDs lead to changes with acute use, but only selective COX-2 inhibitors tends to get back to normal parameters with long lasting use. Related to wound healing, it was possible to verify that conventional NSAIDs was associated to a slightly delay in wound healing process, which was not observed with selective COX-2 NSAIDs use. It was possible to conclude that caution is needed with the use of NSAIDs. They cause significant changes in oral epithelium and the convenional one causes most signifcant changes with long term use

Introdução: o câncer de mama que apresenta amplificação/superexpressão do HER2 apresenta-se com pior prognóstico e seu amplicon se localiza no locus 17q12-q21. O gene WIPF2, relacionado a motilidade celular, localiza-se no mesmo locus e também se encontra presente no amplicon do HER2. Objetivo: avaliar a superexpressão simultânea do HER2 e WIPF2 através de marcação imunohistoquímica. Métodos: foram selecionados 94 casos de carcinoma ductal invasor de mama, sendo possível a obtenção de material em 87. Foi realizada técnica de microarranjo tecidual e as lâminas foram analisadas. Informações clínicas foram obtidas de prontuário médico. Resultados: após microscopia óptica das lâminas de TMA obtidas e comparação com lâminas convencionais arquivadas, validou-se o método, com bom índice de correlação kappa (0,83 para receptores de estrógeno e 0,84 para receptores de progesterona). Houve associação entre a superexpressão do WIPF2 com casos Ki-67 positivos e em pacientes nuligestas. O grupo HER2 apresentou maior porcentagem de casos WIPF2 positivos em relação ao grupo triplo-negativo à microscopia óptica (66,7% vs. 22,7%, respectivamente; p=0,03). Na análise digital, o perfil molecular HER2 apresentou maior expressão do WIPF2 em relação ao perfil luminal A e ao triplo negativo (23,9 ± 9,0% vs. 14,6 ± 9,0% e 14,2 ± 9,0%, respectivamente; p=0,01). Conclusão: O WIPF2 é mais expresso por tumores com o perfil HER2, assim como se associa a tumores com maior proliferação e tumores em pacientes nulíparas. / Introduction: the breast cancer with amplification/overexpression of HER2 shows worse prognosis and its amplicon is located in the 17q12-21 locus. The gene WIPF2, related to cellular mobility, is located in the same locus and is also present in the HER2 amplicon. Objective: to evaluate HER2 and WIPF2 simultaneous overexpression using immunohistochemistry technique. Methods: we selected 94 invasive ductal carcinoma samples and it was possible to evaluate 87. Tissue microarray has been done and slides analyzed. Clinical informations were obtained from clinical files. Results: after optical microscopy of TMA slides and comparison with conventional slides, the method was validated with a high correlation kappa index (0.83 for estrogen receptors and 0.84 for progesterone receprtors). The WIPF2 overexpression was associated with positive Ki-67 tumors and nuliparous women. The HER2 group presented greater percentage of WIPF2 positive cases when compared with triple-negative group using optical microscopy (66.7% vs. 22.7%, respectively, p=0.03). With the digital analysis, the HER2 group presented greater expression of WIPF2 when compared with luminal A and triple-negative groups (23.9 ± 9.0% vs. 14.6 ± 9.0% e 14.2 ± 9.0%, respectively; p=0.01). Conclusion: WIPF2 is more expressed in the HER2 group tumors. It is also related to high proliferation index and nuliparous women´s tumors.

Doenças da córnea estão entre as principais causas de cegueira e os mecanismos de lesão e reparação estão em grande parte concentradas no epitélio, porém os mediadores e alvos para possíveis intervenções terapêuticas são pouco conhecidos.Nas agressões ao epitélio da córnea, a ativação dos receptores vanilóides de potencial transitório 1 (TRPV1) leva a resposta inflamatória e cicatricial. O objetivo desse trabalho é identificar os mecanismos de sinalização e resposta do TRPV1 na córnea de animais experimentais. O cultivo de células epiteliais de córnea de ratos, a identificação de mediadores por western blot, medida do influxo de cálcio, resposta de citocinas medidas por ensaio quantitativo de PCR em tempo real (RNAm) e ELISA (proteína) após estímulos nocioceptivos ou inflamatórios; e a investigação histológica e imunohistoquimica em modelos animais, sejam ratos com diabetes mellitus (DM) por 8 semanas ou expostos a cloreto de benzalcônio a 0,2% (BAC) por 7 dias. Camundongos TRPV1-/- comparados aos controles C57 foram comparados sem estimulo, ou sob estimulo único com CAP a 1µM, BAC 0,2 % por 7 dias ou após queimadura alcalina com NaOH a 1M. Os resultados mostraram a presença de TRPV1 em epitélio de córnea em cultura primária, mostraram que essas células respondem com influxo de cálcio ao estímulo com o agonista Capsaicina a 1µM e aumento de TNF? e IL-1? (sendo máximo nas combinações CAP+CPZ e Win+CAP, respectivamente). Em ratos com DM e BAC ocorre a redução da expressão do RNAm de IL-1? (p=0,0269) na córnea, entre outras alterações. Os camundongos TRPV1-/- tem fenótipo físico e ocular normal, porém reduzida sensibilidade a CAP 1µM. O tratamento com BAC leva a diminuição da secreção lacrimal (p=0,0011) e de IL-1? e TNF? na glândula lacrimal (GL) de TRPV1-/- machos (p=0,0177, p=0,0245, respectivamente). A queimadura alcalina com NaOH 1M resultou em melhor cicatrização e maior espessura epitelial no grupo TRPV1-/-. Em ix conclusão, o TRPV1 está presente na córnea e atua em resposta a agressões externas. Situações adquiridas como DM e toxicidade por BAC, reconhecidas como neuropáticas diminuem a expressão de mediadores inflamatórios. A ausência genética e TRPV1 não altera o fenótipo, mas apresenta menor sensibilidade e melhor restauração da superfície ocular após queimadura alcalina / Corneal diseases are among the leading causes of blindness.Damage and repair mechanisms are largely concentrated in the epithelium, but the mediators and targets for possible therapeutic interventions are poorly understood. The aggressions to the corneal epithelium, the activation of vanilloid receptors transient potential 1 (TRPV1) leads to inflammatory and wound healing. The aim of this study is to identify the signaling mechanisms and TRPV1 response in the cornea of experimental animals.The culture of epithelial cells from rat cornea, to identify mediators by western blot analysis, measurement of calcium influx, cytokine response measured by PCR real time (mRNA) and ELISA (protein) nocioceptivos or after inflammatory stimuli; and the histological and immunohistochemical investigation in animal models are mice with diabetes mellitus (DM) for 8 weeks, and exposed to benzalkonium chloride at 0.2% (BAC) for 7 days. Mice TRPV1-/- compared to control C57 were compared with no stimulus, or under single stimulation with 1 µM Capsaicine (CAP), BAC 0.2% for 7 days or after the alkali burn with NaOH 1 M.The results showed the presence of TRPV1 in corneal epithelium in primary culture, showed that these cells respond to calcium influx the stimulus with capsaicin agonist 1?M and increase of TNF? and IL-1? (being maximum at the CAP + CPZ combinations and Win + CAP, respectively). In rats with DM and BAC occurs reducing the expression of IL-1? mRNA (p = 0.0269) in the cornea, among other changes. The TRPV1-/- mice have physical phenotype and normal ocular but low sensitivity to CAP 1?M. Treatment with BAC leads to decreased tear secretion (p = 0.0011) and IL-1? and TNF? in the lacrimal gland (GL) of TRPV1-/- mice (p = 0.0177, p = 0.0245, respectively) . The alkaline burn with NaOH 1M resulted in better healing and greater epithelial thickness in TRPV1-/- group .In conclusion, TRPV1 is present in the cornea and operates in response to external aggressions. Situations existing as DM and xi toxicity BAC recognized as neuropathic decrease the expression of inflammatory mediators. Genetic absence and TRPV1 does not alter the phenotype, but has lower sensitivity and better restoration of the ocular surface after alkaline burn

Diferentes estudos têm demonstrado uma variação importante na frequência diagnóstica dos tumores de glândula hepatoide em cães, possivelmente devido à ausência de critérios morfológicos claros e bem estabelecidos em seu diagnóstico. Não estão bem definidos os critérios clínico-patológicos associados ao comportamento biológico destas neoplasias. Alguns estudos levantam a hipótese de participação do mecanismo de transição epitélio-mesenquimal devido à frequente imunoexpressão de vimentina em tumores de glândula hepatoide, porém esta hipótese permanece sem comprovação. O objetivo deste trabalho foi avaliar a concordância diagnóstica entre patologistas, assim como investigar o mecanismo de transição epitélio-mesenquimal e a taxa de proliferação celular por marcadores imuno-histoquímicos e, por fim, correlacioná-los com sobrevida para investigação de possíveis valores prognósticos. Cinco patologistas avaliaram 57 tumores de glândula hepatoide quanto ao diagnóstico e quanto a diversos critérios morfológicos e, com base nestes critérios, foram desenvolvidos algoritmos diagnósticos por meio de árvores de regressão por partição recursiva. Adicionalmente, foram investigadas as imunoexpressões de vimentina, pancitoqueratina, E-caderina e Ki-67 em 78 lesões, comparando-as entre glândulas normais, tumores benignos, tumores malignos e tumores malignos vasculoinvasivos/metastáticos. A sobrevida livre de recorrência local, recorrência da doença, sobrevida global e sobrevida doença-específica foram investigadas em 33 pacientes. Houve concordância média razoável em análise interobservador quanto ao diagnóstico (k=0,54), com potencial de melhora para concordância média boa após aplicação de dois novos algoritmos diagnósticos (k=0,64 e 0,65, respectivamente). Em relação aos marcadores imuno-histoquímicos, foram observadas maior expressão de vimentina e menor expressão de E-caderina em tumores malignos em comparação aos tumores benignos. Adicionalmente, observou-se uma forte correlação negativa entre a expressão de vimentina em células de reserva e expressão de pancitoqueratina em células diferenciadas (p=-0,65, p<0,0001), além de maiores taxas de proliferação celular (Ki-67) e contagem de mitoses em tumores malignos em comparação com tumores benignos. Em análise univariada de sobrevida doença-específica, os fatores prognósticos foram a presença de invasão vascular ou metástase no momento do diagnóstico, o escore de E-caderina em células de reserva e diferenciadas, e o tamanho tumoral. Em relação ao tempo de sobrevida livre de doença, os fatores prognósticos foram a presença de invasão vascular ou metástase no momento do diagnóstico, escore de E-caderina em células de reserva e diferenciadas, perda de polaridade celular, grau de infiltração, histórico de doença recorrente, escore de morfologia fusiforme e proporção de células de reserva. Os resultados do presente estudo confirmaram que existe um grau de discordância diagnóstica entre patologistas que poderia explicar parte da variação observada na prevalência de carcinomas de glândula hepatoide em literatura, e de que existe potencial para melhora da concordância diagnóstica por meio dos algoritmos propostos. Ainda, os achados reforçaram a hipótese de que o mecanismo de transição epitélio-mesenquimal participa na progressão tumoral em neoplasias hepatoides em cães, explicando a frequente imunoexpressão de vimentina observada nestes tumores. Por fim, foi demonstrado que a presença de invasão vascular ou metástase no momento do diagnóstico tem impacto significativo na sobrevida dos animais, assim como há outras características clínicas, morfológicas e imuno-histoquímicas com valor prognóstico para recorrência da doença e sobrevida. / An important variation in the prevalence of canine hepatoid gland carcinoma is currently reported, likely due to lack of consistent and well-defined criteria. Additionally, clinical and pathological features predictive of biological behavior are not well defined. The epithelial-mesenchymal transition mechanism has been proposed as a possible explanation for the frequent expression of vimentin by neoplastic hepatoid gland cells, but this hypothesis remains elusive. The present study aimed to define the level of diagnostic agreement between different pathologists, investigate immunohistochemical and morphological features indicative of epithelial-mesenchymal transition, and to evaluate candidate features that might be predictive of biological behavior. Five pathologists diagnosed and classified morphological features for 57 hepatoid gland tumors, and diagnostic algorithms were built with recursive partitioning analysis. Additionally, vimentin, pancytokeratin, E-cadherin and ki-67 immunohistochemical expression were evaluated for 78 lesions, and expression levels were compared between normal glands, benign tumors, malignant tumors, and vasculo-invasive/metastatic tumors. Local recurrence free survival, disease free survival, overall survival and disease-specific survival were evaluated for 33 cases. There was a fair mean interobserver agreement for diagnosis (k=0,54), that could potentially be improved to a good mean agreement with the use of two novel diagnostic algorithms (k=0,64 and 0,65). Additionally, higher levels of vimentin expression and lower levels of E-cadherin expression were noted in malignant tumors, as compared to benign tumors, and there was a strong negative correlation between vimentin expression in reserve cells and pancytokeratin expression in differentiated cells (p=-0,65, p<0,0001). Proliferation index (ki67) and mitotic count were higher for malignant tumors when compared to benign tumors. In univariate survival analysis, vascular invasion or metastasis at the time of diagnosis, E-cadherin score in differentiated and reserve cells and tumor size were predictive of disease-specific survival. Vascular invasion or metastasis at the time of diagnosis, E-cadherin score in differentiated and reserve cells, loss of cell polarity, grade of invasiveness, history of recurrent disease, spindle cell morphology score and proportion of reserve cells were predictive of disease-free survival. The results of this study demonstrate a level of diagnostic disagreement between pathologists that might explain, at least partially, the variation of prevalence of hepatoid gland carcinoma in current literature, and that this diagnostic agreement could potentially be improved. Also, these findings support the role of epithelial-mesenchymal transition in the progression of canine hepatoid gland tumors, and this mechanism could explain the frequent expression of vimentin in this particular neoplasia. Finally, it was shown that vascular invasion or metastasis at the time of diagnosis has a significant impact on survival, and that additional clinical, morphological and immunohistochemical features might also have predictive value for disease recurrence and survival.

Doenças da córnea estão entre as principais causas de cegueira e os mecanismos de lesão e reparação estão em grande parte concentradas no epitélio, porém os mediadores e alvos para possíveis intervenções terapêuticas são pouco conhecidos.Nas agressões ao epitélio da córnea, a ativação dos receptores vanilóides de potencial transitório 1 (TRPV1) leva a resposta inflamatória e cicatricial. O objetivo desse trabalho é identificar os mecanismos de sinalização e resposta do TRPV1 na córnea de animais experimentais. O cultivo de células epiteliais de córnea de ratos, a identificação de mediadores por western blot, medida do influxo de cálcio, resposta de citocinas medidas por ensaio quantitativo de PCR em tempo real (RNAm) e ELISA (proteína) após estímulos nocioceptivos ou inflamatórios; e a investigação histológica e imunohistoquimica em modelos animais, sejam ratos com diabetes mellitus (DM) por 8 semanas ou expostos a cloreto de benzalcônio a 0,2% (BAC) por 7 dias. Camundongos TRPV1-/- comparados aos controles C57 foram comparados sem estimulo, ou sob estimulo único com CAP a 1µM, BAC 0,2 % por 7 dias ou após queimadura alcalina com NaOH a 1M. Os resultados mostraram a presença de TRPV1 em epitélio de córnea em cultura primária, mostraram que essas células respondem com influxo de cálcio ao estímulo com o agonista Capsaicina a 1µM e aumento de TNF? e IL-1? (sendo máximo nas combinações CAP+CPZ e Win+CAP, respectivamente). Em ratos com DM e BAC ocorre a redução da expressão do RNAm de IL-1? (p=0,0269) na córnea, entre outras alterações. Os camundongos TRPV1-/- tem fenótipo físico e ocular normal, porém reduzida sensibilidade a CAP 1µM. O tratamento com BAC leva a diminuição da secreção lacrimal (p=0,0011) e de IL-1? e TNF? na glândula lacrimal (GL) de TRPV1-/- machos (p=0,0177, p=0,0245, respectivamente). A queimadura alcalina com NaOH 1M resultou em melhor cicatrização e maior espessura epitelial no grupo TRPV1-/-. Em ix conclusão, o TRPV1 está presente na córnea e atua em resposta a agressões externas. Situações adquiridas como DM e toxicidade por BAC, reconhecidas como neuropáticas diminuem a expressão de mediadores inflamatórios. A ausência genética e TRPV1 não altera o fenótipo, mas apresenta menor sensibilidade e melhor restauração da superfície ocular após queimadura alcalina / Corneal diseases are among the leading causes of blindness.Damage and repair mechanisms are largely concentrated in the epithelium, but the mediators and targets for possible therapeutic interventions are poorly understood. The aggressions to the corneal epithelium, the activation of vanilloid receptors transient potential 1 (TRPV1) leads to inflammatory and wound healing. The aim of this study is to identify the signaling mechanisms and TRPV1 response in the cornea of experimental animals.The culture of epithelial cells from rat cornea, to identify mediators by western blot analysis, measurement of calcium influx, cytokine response measured by PCR real time (mRNA) and ELISA (protein) nocioceptivos or after inflammatory stimuli; and the histological and immunohistochemical investigation in animal models are mice with diabetes mellitus (DM) for 8 weeks, and exposed to benzalkonium chloride at 0.2% (BAC) for 7 days. Mice TRPV1-/- compared to control C57 were compared with no stimulus, or under single stimulation with 1 µM Capsaicine (CAP), BAC 0.2% for 7 days or after the alkali burn with NaOH 1 M.The results showed the presence of TRPV1 in corneal epithelium in primary culture, showed that these cells respond to calcium influx the stimulus with capsaicin agonist 1?M and increase of TNF? and IL-1? (being maximum at the CAP + CPZ combinations and Win + CAP, respectively). In rats with DM and BAC occurs reducing the expression of IL-1? mRNA (p = 0.0269) in the cornea, among other changes. The TRPV1-/- mice have physical phenotype and normal ocular but low sensitivity to CAP 1?M. Treatment with BAC leads to decreased tear secretion (p = 0.0011) and IL-1? and TNF? in the lacrimal gland (GL) of TRPV1-/- mice (p = 0.0177, p = 0.0245, respectively) . The alkaline burn with NaOH 1M resulted in better healing and greater epithelial thickness in TRPV1-/- group .In conclusion, TRPV1 is present in the cornea and operates in response to external aggressions. Situations existing as DM and xi toxicity BAC recognized as neuropathic decrease the expression of inflammatory mediators. Genetic absence and TRPV1 does not alter the phenotype, but has lower sensitivity and better restoration of the ocular surface after alkaline burn

A ação metastática do BPV permanece não clara. Este estudo avaliou a ação do BPV na transição epitélio-mesênquima (TEM), empregando linhagens celulares de papiloma (P), fibropapiloma (FB) e carcinoma de esôfago (CE). Os resultados mostraram a presença de infecção produtiva e o aumento do potencial proliferativo nestas células. Porém, foi verificada a redução do potencial de membrana mitocondrial em relação à pele saudável (controle) e o aumento do estresse oxidativo, resultante da ação da oncoproteína E6, justificando a clastogenicidade e a aquisição do fenótipo-tronco descrito nas linhagens de P, FB e CE. Estas linhagens mostram capacidade migratória decorrente do sequestro citoplasmático de E-caderina, e o aumento dos níveis de expressão de vimentina, vinculina e N-caderina como consequência da ativação dos fatores STAT3 e SLUG, sugerindo a ação do vírus na indução da TEM. Tais resultados foram validados em amostras de tecido, reforçando a ação do vírus na TEM, bem como demostrando o potencial destas linhagens celulares como modelo de estudo da metástase. / BPV metastatic action remains unclear. This study evaluated the BPV action on epithelial-mesenchymal transmition (EMT), using cell lines form papilloma (P), fibropapilloma (FB) and esophageal carcinoma (EC). Results showed the productive infection presence and the proliferative potential increase in these cells. However, it was verified the mitochondrial membrane potential loss in relation to normal skin (control) and the oxidative stress increase as result of E6 oncoprotein, justifying the clastogenicity and stem-cell phenotype acquisition described in P, FB and EC cells. This cell lines showed a migratory capability as result of cytoplasmic sequester of E-cadherin, and the increase levels of vimentin, vinculin and N-cadherin as consequence of STAT3 and SLUG factors activation, suggest the virus action on EMT. These results were also verified in tissue samples, reinforcing the BPV action on EMT, as well as demonstrating the potential of these cell lines as model to study the metastasis.