Tem sido demonstrado que fatores genéticos influenciam a resposta do osso e esmalte ao fluoreto (F), mas os mecanismos moleculares envolvidos não estão bem definidos. No presente estudo, foi empregada uma abordagem proteômica livre de marcadores para identificar e avaliar alterações na expressão de proteínas ósseas em duas linhagens de camundongos com diferentes susceptibilidades à fluorose (A/J susceptível e 129P3/J resistente). Camundongos machos das linhagens 129P3/J e A/J foram distribuídos em três grupos para cada linhagem, que receberam ração com baixa concentração de F e água de beber contendo 0, 10 e 50 ppm F por 8 semanas. A concentração de F foi analisada no plasma e fêmur. A atividade da fosfatase alcalina foi dosada no plasma. Fêmur, tíbia e vértebra lombar foram submetidos à análise por micro-CT. A taxa de aposição mineral (MAR) também foi avaliada no osso cortical dos camundongos. Em adição, eletroforese unidimensional e cromatografia líquida - espectrometria de massas sequencial (LC-ESI-MS/MS) foram utilizadas para identificar e caracterizar as proteínas de fêmur da linhagem 129P3/J. Para análise proteômica quantitativa, proteínas ósseas foram extraídas para cada grupo empregando quatro diferentes etapas: (a) tampão PBS (pH 7,4) por 24h, (b) tampão de Guanidina HCl 4 M / Tris HCl 50 mM (pH 7,4) por 96 h, (c) tampão EDTA 0,5 M / Tris HCl 50 mM (pH 7,4) por 96 h, e por último (d) tampão de Guanidina HCl 4 M / Tris HCl 50 mM (pH 7,4) por 96 h. As proteínas ósseas extraídas para cada grupo foram separadamente submetidas ao LC-ESI-MS/MS, seguido da análise semi-quantitativa de diferença de expressão proteica livre de marcadores. Foram identificadas várias proteínas ósseas com alteração na abundância entre os 3 tratamentos com F para cada linhagem e entre as duas linhagens para cada tratamento com F (razão 1,5 or 0,5, respectivamente). O F promoveu alterações na expressão de proteínas envolvidas na osteogênese e osteoclastogênese de maneira distinta para cada linhagem. Embora não tenha sido observada diferença significativa nos valores de BMD e parâmetros histomorfométricos entre os grupos tratados com F para ambas as linhagens, a taxa de aposição mineral (MAR) foi maior no grupo 129P3/J tratado com 50 ppm F comparado com os grupos controle e 10 ppm F, demonstrando que o F aumentou a formação óssea nesse grupo. Em conclusão, o tratamento com F em baixa e alta dose apresentou um efeito específico para cada linhagem, confirmando uma influência genética na resposta do osso à exposição ao F. / Genetic factors have been shown to influence bone and enamel responses to fluoride (F), but the molecular mechanisms involved remain unclear. In this study, a label-free proteomics approach was employed to identify and evaluate changes in bone protein expression of two mouse strains with different susceptibilities to fluorosis (A/J a susceptible strain, 129P3/J a resistant strain). Male 129P3/J and A/J mice were assigned to three groups given low-F food and water containing 0, 10 or 50 ppmF for 8 weeks. Plasma and femur were analyzed for F levels. Plasma was also evaluated for alkaline phosphatase activity. Femurs, tibiae and lumbar vertebrae were subjected to micro-CT analysis. Mineral apposition rate (MAR) was also measured in mice cortical bone. In addition, unidimensional electrophoresis and liquid chromatography/Tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS) was used to identify and characterize the femur protein profile from 129P3/J mouse strain. For quantitative proteomic analysis, bone proteins were extracted using four different steps: (a) PBS buffer (pH 7.4) for 24h, (b) 4 M Guanidine HCl/50 mM Tris HCl buffer (pH 7.4) for 96 h, (c) 0.5 M EDTA/50 mM Tris HCl buffer (pH 7.4) for 96 h, followed by (d) 4 M Guanidine HCl/50 mM Tris HCl buffer (pH 7.4) for 96 h. Bone proteins extracted from each group were separately subjected to LC-ESI-MS/MS, followed by label-free semi-quantitative differential expression analysis. Changes in many bone proteins abundance were found among the F treatment groups for each mouse strain and between the strains for each F treatment group (ratio 1.5 or 0.5, respectively). F led to alterations in expression of proteins involved in osteogenesis and osteoclatogenesis in a different way for each strain. Although F treatment had no significant effects on BMD and histomorphometric measurements for both strains, mineral apposition rate (MAR) was higher in 129P3/J mice treated with 50 ppm F compared to control and 10 ppm F groups, showing that F increased bone formation for this group. In conclusion, F treatment at low and high levels had strain specific effects in mice, confirming a genetic influence in bone response to F exposure.

Este trabalho visa determinar a estrutura e a reatividade de íons [C2H5S]+, fragmentos comuns em espectros de massa, através de reações íon-molécula em fase gasosa. Identificaram-se diferentes estruturas isoméricas, para íons com composição formal [C2,H5,S]+, com reatividades distintas. Verificou-se que os íons [C2H5S]+ obtidos por fragmentação do íon molecular do metiletilsulfeto reagem por três caminhos independentes com seu precursor neutro: a) abstração de hidreto; b) transferência de carga; c) transferência de próton. A cinética desta reação, estudada por ressonância ciclotrônica de íons por transformada de Fourier, sugere a presença de mais de um isômero do íon reagente. As reações de abstração de hidreto e transferência de próton são consistentes com as estruturas CH2=S+-CH3 e CH3CH=SH+, respectivamente, enquanto que a reação de transferência de carga indica a presença do cátion tioetóxi (CH3CH2S+), estável apenas em estado triplete. Estudos usando CD3SC2H5 demonstram que a reação de transferência de carga é promovida por cátions formados a partir da quebra da ligação C-S. Cálculos indicam que durante este caminho de fragmentação há uma tendência de se formar um íon em estado triplete, no entanto, é a primeira vez que se demostra isto experimentalmente. Isolando individualmente cada um dos diversos isômeros, verificou-se que o íon sulfônio reage essencialmente por abstração de hidreto e/ou transferência de grupos metilênicos, enquanto que o tioacetaldeído protonado e o tiirano protonado reagem, principalmente, por transferência de próton. Dependendo da forma como os íons são obtidos (ionização química ou eletrônica), e das propriedades termoquímicas dos substratos, verifica-se que estes íons podem reagir por outros caminhos, provavelmente por um mecanismo de isomerização bimolecular. A observação de que é possível gerar íons CH3CH2S+, no estado triplete, cuja vida média é de pelo menos centenas de milisegundos sugere a possibilidade da observação de outros cátions semelhantes. / This thesis describes a series of simple gas-phase ion-molecule reactions of [C2H5S]+ ions aimed at elucidating the structure of these ions. Different isomeric structures were identified according to their reactivity. These ions obtained by electron ionization from CH3SC2H5 at 13 eV undergo three distinct low pressure reactions with the parent neutral: hydride abstraction, proton transfer and charge transfer. The kinetics of these reactions studied by FT-ICR techniques suggests the [C2H5S]+ species to be a mixture of isomers. While hydride abstraction and proton transfer are consistent with CH2=S+-CH3 and CH3CH=SH+, the observed charge transfer argues for the presence of thioethoxy cation (CH3CH2S+), predicted to be stable only in the triplet state. Studies using CD3SC2H5+ show that charge-transfer reactions are promoted by cations originating from a S-C bond cleavage. Calculations of the primary fragmentation pathways of the molecular ion reveal the tendency to generate triplet thioethoxy cation. However, this is the first time that these long lived cations have been observed experimentally. The reactions of each isolated isomer show that the sulfonium ion reacts basically by hydride abstraction and methylene transfer, while protonated tioacetaldehyde and protonated tiirane react by proton transfer. Depending on how the [C2H5S]+ ions are obtained ( chemical or electronic ionization) and the thermochemical properties of the neutral substrates, these ions undergo different reaction pathways, probably by a bimolecular isomerization mechanism. The observation of these long-lived cations suggests that other thioalkoxy cations may also be amenable to experimental observation.

A classificação e caracterização do petróleo cru em tempo real é um dos mais importantes desafios atuais da indústria petroquímica e agencias ambientais. Um método rápido e econômico antes da destilação do petróleo iria a fornecer informações químicas de grande importância para o ajuste em tempo real dos parâmetros críticos de uma refinaria, permitindo a otimização do processo, resultando em benefícios econômicos e ambientais. Uma variedade de técnicas espectroscópicas está sendo utilizadas nas ultima décadas para as analises, classificação e caracterização de petróleo cru nos campos de perfuração, para as análises dos produtos petrolíferos e para detecção de derrames. As vantagens do uso desta técnica incluem uma rápida resposta, requerimento mínimo de preparação da amostra e equipamentos relativamente econômicos. As técnicas espectroscópicas envolvidas na tese (NIR) mostraram o maior potencial no campo. No entanto, os estudos realizados com todas estas técnicas não foram enfocados em aplicações em linha. O NIR é tradicionalmente a técnica espectroscópica mais utilizada para a análise de petróleo cru. Mas os problemas típicos que esta técnica apresenta são sobreposição das diferentes bandas de absorção e saturação do sinal devido à alta absorbância característico do petróleo cru. A Fluorescência é um fenômeno mais complexo do que a absorção (NIR) e efeitos como quenchinge transferência de energia têm que ser consideradas. No entanto, a espectroscopia de fluorescência pode fornecer sinais bidimensionais com muito mais informação do que uma emissão unidimensional do espectro de absorção. Enquanto a espectrometria de massa, a técnica MALDI TOF faz possível a ionização de macromoléculas que são difíceis de serem ionizadas por não ser facilmente decompostas. Neste trabalho, as vantagens e limitações das técnicas disponíveis são analisadas e o potencial do analises remoto em linha do petróleo cru é avaliado. A pesar da boa analise e classificação obtida com algumas técnicas, nem sempre é possível integrá-los em um sistema em linha quando uma preparação previa da amostra é necessária ou quando o sistema é demasiado complexo. Para a extração da informação química contida nos espectros foram utilizados métodos matemáticos e estatísticos (quimiométricos) nos espectros: Mínimos Quadrados Parciais (PLS). / Online remote characterization and real-time classification of crude petroleum is one of the most important current challenges faced by the petrochemical industry and environmental agencies. A rapid and inexpensive method for the remote analysis and classification of petroleum prior to distillation of the crude would provide chemical information of great importance for real time adjustment of the critical parameters of a refinery, permitting an optimization of the process and resulting in economic and environmental benefits. A variety of spectroscopic techniques have been used over the last few decades for the analysis, characterization and classification of crude oil in drilling fields, for the analysis of petroleum products and for the detection of oil-spills. The advantages of using these techniques include rapid response, the requirement of minimal sample preparation and relatively inexpensive equipment costs. The spectroscopic techniques involved in the thesis (NIR, fluorescence and mass spectrometry) showed the greatest potential in the field. Nevertheless, the studies carried out with these techniques typically do not focus on online applications. NIR is traditionally the spectroscopic techniques most used for crude petroleum analysis. Overlap of the different absorption bands and saturation of the signal due to the high absorbance of crude petroleum are typical problems encountered with this technique. Fluorescence is a more complex phenomenon than absorption (NIR) and effects such as quenching and energy transfer have to be considered. However, fluorescence spectroscopy can provide two-dimensional signals with much more information than a one-dimensional emission or absorption spectrum. While mass spectrometry, MALDI TOF technique makes possible the ionization of macromolecules that are difficult to be ionized not be easily broken. In this work, the advantages and limitations of the available techniques are analyzed and the potential for remote on-line analysis of crude petroleum is evaluated. In spite of the good analysis and classification obtained with some of the techniques, it is not always possible to integrate them into a remote on-line analytical system when some prior sample preparation is required or when the system is too complex. For the extraction of chemical information contained in the spectra were used mathematical and statistical (chemometric) in the spectra: Partial Least Squares (PLS).

O gênero Bothrops apresenta ampla distribuição pelo território brasileiro, sendo a espécie B. jararaca seu representante de maior importância médica na região sudeste. Análises genéticas e filogeográficas descrevem a existência de um grupo monofilético, denominado grupo Jararaca, que inclui, além da espécie B. jararaca, as espécies insulares B. alcatraz e B. insularis. A proximidade evolutiva entre estas espécies, cujo desenvolvimento se iniciou no Pleistoceno, e suas diferenças quanto à dieta, levantam subsídios para o entendimento de seus venenos e suas atividades biológicas. O objetivo deste estudo foi a caracterização dos componentes do veneno de B. alcatraz por diferentes metodologias analíticas com a finalidade de aprofundar o conhecimento sobre os venenos do gênero Bothrops e sobre a evolução dos venenos das espécies do grupo Jararaca. As abordagens analíticas utilizadas foram a avaliação do proteoma dos venenos do grupo Jararaca por eletroforese e identificação de proteínas por digestão com tripsina e análise por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS), análise do N-terminoma e do peptidoma do veneno de B. alcatraz por LC-MS/MS e análise da glicosilação dos venenos do grupo Jararaca pelo tratamento com glicosidases, cromatografia de afinidade à lectinas (concanavalin A, ConA; wheat germ agglutinin, WGA; peanut agglutininin, PNA) e caracterização do N-glicoma por MSn. Os perfis eletroforéticos unidimensionais, obtidos com e sem redução das proteínas, mostraram que o veneno de B. alcatraz difere dos venenos de B. jararaca (adultos e filhotes) e do veneno de B. insularis (adultos). O perfil eletroforético bidimensional do veneno de B. alcatraz corroborou estas diferenças e revelou que a coleta do veneno na presença ou ausência de inibidores de proteinases tem influência no número de spots visualizados. Os resultados da análise dos proteomas dos venenos do grupo Jararaca mostraram que não há diferenças qualitativas significantes entre eles, e que os três apresentam um padrão similar de distribuição das classes de toxinas. A análise quantitativa label free dos proteomas revelou algumas diferenças, indicando que o veneno de B. alcatraz apresenta maior conteúdo de metaloproteinses e fosfolipases A2, que os venenos de B. jararaca e B. insularis. A identificação do peptidoma do veneno de B. alcatraz mostrou diversas formas de peptídeos potenciadores de bradicinina, além de produtos de degradação de diferentes classes de toxinas. A avaliação da glicosilação das proteínas dos três venenos revelou que após a remoção das cadeias de N-glicanos e O-glicanos os perfis eletroforéticos se mostram mais parecidos. A identificação das proteínas do veneno de B. alcatraz que mostraram afinidade pelas lectinas revelou que a ConA interagiu com um número maior de componentes, seguida por WGA e PNA. As análises qualitativa e quantitativa do N-glicoma dos venenos do grupo Jararaca mostrou que os três venenos compartilham as mesmas estruturas de N-glicanos e em abundância relativa similar. Em conjunto, os resultados deste estudo indicaram que no grupo Jararaca, os proteomas dos venenos das espécies B. jararaca e B. insularis apresentam similaridade entre si, e se diferem do veneno de B. alcatraz, principalmente com relação ao grau de glicosilação de suas proteínas. / The Brothrops genus is largely distributed on the Brazilian territory, and B. jararaca is the species of most medical importance in the Southeastern region. Genetic and phylogeographic analyses describe the existence of a monophyletic group, named Jararaca group, which is composed of B. jararaca and of the insular species B. alcatraz and B. insularis. The close evolutionary relationship between these species, which started in the Pleistocene era, and their diet-related differences, are important aspects for the understanding of their venoms and biological activities. The aim of this study was to characterize the venom of B. alcatraz by different analytical methodologies, in order to advance the knowledge on the venoms of Bothrops genus and on the evolution of the venoms of species of the Jararaca group. The analytical approaches used in this study included the charactrization of the proteomes of the venoms of the Jararaca group by electrophoresis and protein identification by trypsin digestion and analysis by liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS/MS), N-terminomic and peptidomic analyses of the venom of B. alcatraz by LC-MS/MS and glycosylation analyses of the venoms of the Jararaca group by treatment with glycosidases, affinity chromatography to lectins (concanavalin A, Con A; wheat germ agglutinin, WGA; peanut agglutininin, PNA) and characterization of the N-glicomes by MSn. The one-dimensional electrophoretic profiles were evaluated under reducing and non-reducing conditions and showed that the venom of B. alcatraz differs from B. jararaca (newborn and adult) and B. insularis (adult) venoms. The two-dimensional electrophoretic profile of B. alcatraz venom corroborated these differences and revealed that the milking of the venom in the presence or in the absence of proteinase inhibitors influences the number of spots visualized on the gel. The results of the analysis of venom proteomes of the Jararaca group showed no significant qualitative differences between them; moreover, the three venoms showed a similar pattern of distribution of toxins classes. However, the label free quantitative analysis of these proteomes revealed some differences, and indicated that the venom of B. alcatraz has a higher content metaloproteinses and phospholipase A2 than B. jararaca and B. insularis venoms. The identification of B. alcatraz venom peptidome showed various forms of bradykinin-potentiating peptides, as well as products of the degradation of different toxins classes. The assessment of the glycosylation level of proteins of the three venoms showed that after removal of N-glycan and O-glycan chains their electrophoretic profiles become more similar. The identification of B. alcatraz venom proteins that showed affinity for lectins indicated that ConA interacted with a larger number of components, followed by WGA and PNA. The qualitative and quantitative analysis of the N-glicome of the venoms of the Jararaca group showed that they share the same N-glycan structures, which were also found in similar relative abundance. Taken together, the results of this study indicate that in the Jararaca group, the venom proteomes of B. jararaca and B. insularis show similarity to each other and differ from the venom of B. alcatraz, especially with respect to the degree of protein glycosylation.

Orientador: Jose Pedrazzoli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T03:40:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morita_MilenaRodrigues_M.pdf: 4296553 bytes, checksum: 165726f88ad105c8817c9cc33149c67a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Objetivo: Desenvolver e validar um método analítico para quantificação de levocetirizina em plasma humano. Além disso, a biodisponibilidade relativa de uma formulação contendo 5 mg de dicloridrato de levocetirizina (formulação teste e formulação referência produzida por Farmalab Indústrias Químicas e Farmacêuticas Ltda.) foi avaliada em trinta e seis voluntários sadios de ambos os sexos. Método: O plano de estudo utilizado foi aberto, randomizado, cruzado com um intervalo de washout de 7 dias. As amostras de plasma foram obtidas por um período de 48 horas. As concentrações plasmáticas de levocetirizina foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (HPLC-MS/MS), com modo de ionização electrospray positivo usando um monitoramento de reação simples (SRM). O método analítico foi validado considerando os seguintes parâmetros: especificidade, linearidade, precisão, exatidão, recuperação e estabilidades de acordo com a RE n°899/03 (ANVISA). Das curvas de concentração plasmática versus o tempo para levocetirizina, os seguintes parâmetros farmacocinéticos foram obtidos: ASC0-48h, ASC0-inf e Cmax. Resultados: A curva de calibração foi linear de 0,5 a 500,0 ng/mL. O método obteve uma corrida cromatográfica de 2,0 minutos usando uma coluna POLARIS C18 (3 µm, 50 mm x 2,0 mm). A precisão inter-corrida dos controles de qualidade foi 4,76% (CQB 1,5 ng/mL), 7,14% (CQM 200,0 ng/mL) e 3,78% (CQA 400,0 ng/mL). A exatidão inter-corrida dos controles de qualidade acima mencionados foi de 98,00%, 99.63% e 97,84%, respectivamente. A razão das médias geométricas dos dois medicamentos (teste e referência) e o intervalo de confiança (IC) foram respectivamente: 101,11% (90% IC= 97,42% - 104,93%) para ASC0-48h, 101,17% (90% IC= 97,49% - 104,99%) para ASC0-inf, 99,43% (90% IC= 94,29% - 104,86%) para Cmax. Conclusão: O método analítico mostrou-se preciso, exato e rápido para quantificação de levocetirizina em plasma humano. Desde que os IC 90% para ASC0-48h, ASC0-inf e Cmax apresentaram-se dentro do intervalo de 80-125% proposto pela ANVISA, foi concluído que a formulação teste Levocetirizina 5 mg é bioequivalente a formulação Zyxem® fabricada pelo laboratório Farmalab Indústrias Químicas e Farmacêuticas Ltda. / Abstract: Objective: To develop and validate an analytical method for levocetirizina quantification in human plasma. Moreover, it was evaluated the relative bioavailability of a levocetirizine dichloridrate 5 mg tablet formulation (test formulation vs reference formulation from Farmalab Ltda.) in 36 healthy volunteers of both sexes. Methods: The study was conducted using an open, randomized, two-period crossover design with 7 days washout period between doses. Plasma samples were obtained over a 48 h period. Plasma levocetirizine concentrations were analyzed by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) with positive ion electrospray ionization using single reaction monitoring (SRM). The analytical method was validated considering specificity, linearity, precision, accuracy, recovery and stabilities parameters according to RE n°899/03 (ANVISA). From the levocetirizine plasma concentration vs time curves, the following pharmacokinetic parameters were obtained: AUC0-48h, AUC0-inf e Cmax. Results: The calibration curve was linear over de range from 0,5 to 500,0 ng/mL. The method chromatographic run was 2,0 minutes using a POLARIS C18 column (3 µm, 50 mm x 2,0 mm). The between-run precision of quality controls was 4,76% (CQB 1,5 ng/mL), 7,14% (CQM 200,0 ng/mL) e 3,78% (CQA 400,0 ng/mL). The between-run accuracy for the above mentioned quality controls was 98,00%, 99.63% e 97,84% respectively.The limit of quantification was 0.5 ng/mL. The geometric mean ratio of both formulations (test and reference) and respective 90% confidence interval (CI) were: 101,11% (90% CI= 97,42% - 104,93%) for AUC0-48h, 101,17% (90% CI= 97,49% - 104,99%) for AUC0-inf, 99,43% (90% CI= 94,29% - 104,86%) for Cmax. Conclusion: The analytical method has proven to be precise, accurate and fast to levocetirizina quantification in human plasma. Since the 90% CI for AUC0-48h, AUC0-inf and Cmax ratios were within the 80-125% interval proposed by the ANVISA, it was concluded that levocetirizine formulation elaborated by Eurofarma Laboratórios Ltda. is bioquivalent to Zyxem® formulation. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Ronilson Agnaldo Moreno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T08:52:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mazuqueli_AnaCristina_M.pdf: 7140095 bytes, checksum: c193ad443d7fe35cf3c6d7b25f3175e8 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a bioequivalência de duas formulações de acetato de ciproterona e etinilestradiol em drágea vs comprimido (Selene® comprimidos, Laboratório Eurofarma Ltda., formulação Teste e Diane® 35, Schering do Brasil, como Referência) após administração oral em 48 voluntárias adultas sadias. O estudo foi do tipo aberto, randomizado com duas fases, em que as voluntárias receberam uma dose única de acetato de ciproterona 2mg e etinilestradiol 0,035mg . As amostras de plasma foram obtidas em um período total de 240h. As concentrações plasmáticas de acetato de ciproterona e etinilestradiol foram analisadas por um método baseado na cromatografia líquida acoplada ao espectrômetro de massa usando como fonte de ionização photospray ( LC-MS/MS ) utilizando finasterida como padrão interno do acetato de ciproterona e 17-a-etinilestradiol-D4 como padrão interno do etinilestradiol. A concentração plasmática do acetato de ciproterona não teve diferença significante após a administração de ambas as formulações (formulação teste e referência do Diane®35). A média geométrica da razão entre o medicamento teste e referência com 90% IC, foi 90,66% (84,39% - 97,40% ) para Cmax, 96,20% (90,45% - 102,33%) para ASC0-240 e 95,86% (89,81% - 102,31%) para ASC0-inf. Já para o Etinilestradiol a média geométrica da razão entre o medicamento teste e referência com 90% IC, foi de 109,92% (IC 90% = 102,67% - 117,69% ) para Cmax, 90,63% (83,75% - 98,08%) para ASC0-120 e 83,85% (69,98% - 100,47%) para ASC0-inf. Diante dos resultados encontrados de Cmax e ASC0-t e estando dentro do intervalo de confiança entre 80% e 125% proposto pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) e pelo Food and Drug Administration (FDA), conclui-se que o Acetato de Ciproterona 2mg e o Etinilestradiol 0.035mg da Eurofarma Laboratórios Ltda. em comprimido é bioequivalente ao Diane®35 da Schering do Brasil, de acordo com sua taxa e extensão de absorção. / Abstract: The aim of this study was to assess the bioequivalence of two cyproterone acetate + ethinylestradiol tablet formulations (Selene® tablet formulation elaborated by Eurofarma Laboratórios Ltda., Brazil, as test formulation, and Diane ® 35 tablet formulation by Schering of Brazil, as reference formulation) after their oral administration to 48 healthy adult females. The study was conducted using an open, randomized two-period crossover design, in which twenty-four healthy volunteers received a single oral dose of cyproterone acetate + ethinylestradiol (2mg + 0.035mg) tablet. Plasma samples were obtained over a 240-hour period. Plasma cyproterone acetate + ethinylestradiol concentrations were analyzed by a method based on liquid chromatography by positive-ion photospray ionization (LC-MS/MS), using finasteride as internal standard of cyproterone acetate and 17-a-ethinyl estradiol-D4 as internal ethinylestradiol standard. The plasma concentration of CYP acetate did not differ significantly after the administration of both formulations (test formulation and the reference Diane®), according to the geometric mean ratio between the test and reference formulations, with 90% CI: 90.66% (84.39% - 97.40% ) for Cmax, 96.20% (90.45% - 102.33%) for ASC0-240 and 95.86% (89.81% - 102.31%) for ASC0-inf. Conversely, the geometric mean ratio between the test and reference formulations for ethinylestradiol, with 90% CI, was 109.92% (CI 90% = 102.67% - 117.69% ) for Cmax, 90.63% (83.75% - 98.08%) for ASC0-120 and 83.85% (69.98% - 100.47%) for ASC0-inf. Considering the results of Cmax and ASC0-t within the confidence interval between 80% and 125% proposed by the Brazilian National Agency for Sanitary Surveillance (ANVISA) and for the US Food and Drug Administration (FDA), it was concluded that the cyproterone acetate 2mg and ethinylestradiol 0.035mg by Eurofarma Laboratórios Ltda. in tablet is bioequivalent to the Diane®35 by Schering of Brazil, according to its absorption and extension rate. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Fábio César Gozzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T06:35:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_TatianiBrenellide_M.pdf: 10987476 bytes, checksum: 5ef2abf84b79afba4ad901cc1e46c719 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A espectrometria de massas (MS) tem sido bastante utilizada em analises de amostras biológicas, tornando uma ferramenta indispensável para pesquisas na área de proteômica. A ligação cruzada é um processo de união covalente entre dois átomos espacialmente próximas. A ligação cruzada acoplada a MS permite estudos estruturais de proteínas baseado nas restrições de distância determinadas pelos espécies inter- intra-moleculares ligadas entre as cadeias laterais de resíduos de aminoácidos. Essa técnica vem sendo bastante utilizada na análise de interação entre proteínas, entretanto, um aspecto pouco explorado é a analise estrutural de proteínas. O objetivo desse trabalho foi determinar as estruturas terciárias e quaternárias de proteínas de chaperonas moleculares de cana-de-açúcar ou proteínas de choque térmico (do inglês, sugarcane heat shock protein, SHsp) utilizando a técnica de ligação cruzada acoplada com MS e modelagem molecular. As restrições de distâncias obtidas pela ligação cruzada e o gráfico de Ramanchandran foram utilizados para validar as estruturas tridimensionais da SHsp70 e SHsp90 obtidas por modelagem por homologia. Informações adicionais de dinâmica e flexibilidade da SHsp90 foi obtida pela técnica de troca hidrogênio/deutério. As chaperonas moleculares são proteínas importantes presentes em células para evitar o enovelamento incorreto de outras proteínas e suas agregações. Em plantas, fatores que corroboram com a tolerância ao estresse ainda são pouco compreendidos, mas provavelmente as chaperonas moleculares desempenha um papel importante no controle aos danos desse organismo. Desse modo, caracterizar estruturas de Hsp de cana de açúcar é uma informação essencial para a compreensão do mecanismo deste acompanhante de ação. Os estudos estruturais baseados em ligação cruzada acoplada a MS e modelagem por homologia permitiu propor um modelo estrutural para SHsp90 e SHsp70 / Abstract: Mass spectrometry (MS) has been extensively used to analyze biological samples and has advanced as an indispensable tool for proteomics research. Cross-linking is the process of chemically joining two spatially close atoms by covalent bond. The chemical cross-linking coupled to MS allows structural studies of protein based on distance constrains determined by inter- and intra-molecular cross-link between side chains of amino acids residues. This technique has been normally used to analyze protein-protein interaction but is mostly unexplored for structural analysis of proteins. The aim of this work was to investigate tertiary and quaternary structure of sugarcane molecular chaperone or heat shock protein (SHsp) using chemical cross-linking coupled to MS and homology modeling. The distance constrains obtained by chemical crosslinking and Ramachandran plot were used to validate tridimensional structures of SHsp70 and SHsp90 that was predicted by homology modeling. Additional information about flexibility and dynamics of SHsp90 was obtained using hydrogen/deuterium exchange (HDX) coupled to MS. The molecular chaperones are important proteins present in cell that helps prevent incorrect folding of proteins and their aggregation. The stress tolerance in plants is still poorly understood, but heat shock proteins likely play a large role in the plant damage control machinery. Thereby, characterizing Sugarcane Hsp structures is essential information toward the understanding of this chaperone¿s mechanism of action. The structural study of molecular chaperones by chemical cross-linking coupled to MS and homology modelling allowed the generation of a structural model for SHsp90 and SHsp70 / Mestrado / Quimica Organica / Mestra em Química

Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T05:33:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_LiviaRiberti_M.pdf: 1203619 bytes, checksum: a17baf81fa013532bd6c9d451b2336f2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Atualmente, as doenças cardiovasculares constituem uma das primeiras causas de mortes no Brasil e no mundo. Neste cenário, as estatinas constituem uma notável classe de medicamentos redutores de colesterol e têm sido associadas com uma expressiva diminuição da morbidade e mortalidade cardiovascular para pacientes em prevenção primária ou secundária da doença coronariana. Elas agem inibindo competitivamente a enzima HMG-CoA redutase, através da afinidade destes fármacos pelo sítio ativo da enzima. Esta enzima é responsável por catalisar a conversão do substrato HMG-CoA em mevalonato, um dos precursores do colesterol. A crescente necessidade e busca por medicamentos cada vez mais efetivos traz a preocupação na segurança destes produtos para seus usuários. Neste sentido, o conhecimento das impurezas e produtos de degradação torna-se necessário para garantir sua qualidade. Uma técnica muito utilizada para análises de impurezas e degradantes é a espectrometria de massas, pois é uma técnica sensível e seletiva e permite elucidar as estruturas químicas presentes na formulação do medicamento. Sendo assim, amostras de Atorvastatina cálcica foram analisadas pela técnica de espectrometria de massas por imagem (MALDI-MSI), permitindo a quantificação de impurezas do medicamento através da imagem da distribuição dessa impureza no comprimido. Dessa forma, é possível minimizar o preparo de amostra e obter um melhor conhecimento da formulação / Abstract: Currently, cardiovascular diseases constitute one of the first causes of deaths in Brazil and in the world. In this scenario, the statins are a notable class of medicines and cholesterol reducers have been associated with a significant reduction in cardiovascular morbidity and mortality for patients in primary or secondary prevention of coronary heart disease. They act by inhibiting competitively the enzyme HMG-CoA reductase, through the affinity of these drugs by the active site of the enzyme. This enzyme is responsible for catalyzing the conversion of HMG-CoA to mevalonate substrate, one of the precursors of cholesterol. The growing need and search for increasingly effective drugs brings the concern on the safety of these drugs for their users. In this sense, the knowledge of the impurities and degradation products becomes necessary to ensure their quality. A widely used technique for analysis of impurities and degrading is mass spectrometry, because it is a sensitive and selective technique and allows elucidating the chemical structures of the present formulation of the medicinal product. Thus, samples of Atorvastatin calcium were analyzed by the technique of mass spectrometry imaging (MALDI-MSI), which allows the quantification of impurities from the medicine through the image of the distribution of impurity in the tablet. That way, it is possible minimize sample preparation and get a better understanding of the formulation / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T16:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Damario_Natalia_M.pdf: 490227 bytes, checksum: 825e09295040a1c513eea757bb6936f0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O alto consumo global de queijos e a flutuação de disponibilidade e preço destes produtos lácteos os tornam alvos de fraudes. Uma das mais comuns é a adulteração de leites de alto valor agregado, como os de cabra e ovelha, com o então menos valioso leite de vaca, posteriormente vendido como matéria-prima para a indústria de queijo. Esta prática cria a necessidade de técnicas sensíveis para avaliar a autenticidade de queijos, incentivando o desenvolvimento e melhoria de métodos analíticos. Neste caminho, nós trazemos esta abordagem empregando a Direct Imprinting in Glass Surface Mass Spectrometry (DIGS-MS) para análise qualitativa de queijo em um instrumento MALDI. Esse método inclui uma preparação de amostra simples e eficaz além de rápida aquisição e interpretação de dados. A abordagem comprovou identificar prontamente lipídios de massas grandes em diferentes tipos de queijo, que podem ser associados a marcadores de qualidade. Também representa um potencial para controlar não só o produto final, mas também etapas produtivas, através da integração de dados estatísticos e analíticos, resultando em uma combinação poderosa para a discriminação de amostras com base no perfil lipídico. A ausência do efeito de matriz em toda cadeia analítica garante maior limpeza de sinal de espectros de massa e simplifica o processo / Abstract: High global consumption of cheeses and their availability and price fluctuations make these foodstuffs targets for frauds. One of the most common is the adulteration of highly priced milk (goat and sheep) with less valuable cow milk, which is sold as raw material for cheese industry. This creates the need for sensitive techniques to assess cheese authenticity by encouraging the development and improvement of analytical methods. In this path, we bring this approach employing Direct Imprinting in Glass Surface Mass Spectrometry (DIGS-MS) for qualitative cheese analysis in a MALDI instrument. This method includes simple and effective sample preparation and fast data acquisition and interpretation. It has proven to readily identify higher mass lipids in different types of cheese, which can be associated as quality markers. This can also represent potential to control not only the final product, but also productive stages, by integrating analytical and statistical data, resulting in a powerful combination for sample discrimination based on lipid profiles. The absence of matrix effect in the whole analytical chain ensures greater signal cleanliness of mass spectra and simplifies the process / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T23:10:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MonicaSiqueira_D.pdf: 2752694 bytes, checksum: 8012f1d5668a55e8fba463c5f394c113 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Com a grande incidência de resistência ao único fármaco utilizado no tratamento de esquistossomose, Praziquantel (PZQ), e relatos de diferentes níveis de virulência do parasita, o controle da doença tem se tornado cada vez mais difícil. Além disso, o método de diagnóstico convencional demanda tempo e grande preparo amostral. Num cenário clínico, quanto mais rápido o diagnóstico, maiores as chances de sucesso no tratamento da doença. Tendo em vista esse escopo, apresentamos uma nova plataforma "ômica" - a Parasitômica, que propõe o uso de metodologias simplificadas e de grande eficácia em termos de preparo de amostra e facilidade na aquisição de dados voltados a área de parasitologia, englobando diagnóstico, tratamento e elucidação de vias e mecanismos de ação. Amostras de diferentes cepas de Schistosoma mansoni, bem como diferentes estágios e tratamento com PZQ, foram analisadas através da técnica de espectrometria de massas por imagem (MALDI-MSI) e por alta resolução (ESI-HR-FTMS), pela integração de dados tanto analíticos quanto estatísticos. É possível a caracterização e diferenciação química de cada sexo e cepa do S. mansoni, bem como a visualização das alterações na composição molecular de vermes submetidos ao tratamento com PZQ. Tais resultados poderão ser úteis como potenciais alvos de novos fármacos. Nossos resultados também demonstram uma possível forma de futuro diagnóstico da esquistossomose pela análise da urina utilizando a parasitômica / Abstract: With the large incidence of resistance to the only drug used to schistosomiasis treatment, Praziquantel (PZQ), and reports of different levels of parasite virulence, disease control has become increasingly difficult. Furthermore, the conventional diagnosis method is time consuming and requires extensive sample preparation. In a clinical setting, the sooner the diagnosis is, the greater are the chances of successful disease treatment. Within this scope, we present a new "omic" platform ¿ Parasitomics, which proposes the use of simple and effective methods in terms of sample preparation and readiness of data acquisition focused on parasitology, including diagnosis, treatment and elucidation of pathways and mechanisms of action. Samples with different strains of Schistosoma mansoni, as well as different stages of life cycle and treatment with PZQ, were analyzed by mass spectrometry imaging (MALDI-MSI) and by high-resolution technology (ESI-HR-FTMS), through the integration of analytical and statistical data. Results have enabled the characterization and chemical differentiation of each sex and strain of S. mansoni, as well as the visualization of molecular composition changes in worms¿ body submitted to PZQ treatment. These results could be helpful on unraveling potential targets for new drugs. Our results also demonstrated a possible form of future schistosomiasis diagnosis by urine analysis using the parasitomics platform / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutora em Ciências