Made available in DSpace on 2016-06-02T20:18:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5170.pdf: 1490860 bytes, checksum: e55ec88b5e46f4a697f05f0b01a4a9a5 (MD5) Previous issue date: 2013-04-24 / The literature presents many alternatives of physical training and frequently reiterates the use of animal models for studies on the effect of training, as the results in animals are similar to those in humans. There is also the possibility of evaluating variables such as volume and intensity. In addition, many studies have reported beneficial effects of estrogen as an important resource to minimize the deleterious effects of aging. As a means of understanding estrogen action and its influence on aerobic and anaerobic exercise, four experiments were carried out in this context. The first study was called The behavior of glycogen reserves in female rats denervated muscle, with different doses of estrogen and aimed at evaluating the estrogen action on the glycogenic profiles of denervated skeletal muscle.Methods: The animals were divided in 6 experimental groups (n=6): control (C), denervated for 15 days (D), denervated and treated with estrogen 20mg/weight/day (E20), denervated and treated with estrogen 40mg/weight/day (E40), denervated and treated with estrogen 80mg/weight/day (E80) and denervated and treated with estrogen 160mg/weight/day (E160). The treatment was realized by 15 days and the choice substance was estradiol cipionate. The following analyses were carried out: glycogen reserves in soleus (S), white (WG) and red gastrocnemius (RG), body and soleus weights. The statistical analysis included the Kolmogorov-Smirnov test, ANOVA and post-hoc Tukey test (p<0.05). Results: The denervation induced a reduction in glycogen content in the S, WG and RG muscles. The groups treated with estrogen we observed a progressive elevation in glycogen reserves concomitant with the elevation of dose and reinstate the glycogen reserves, but the dose that shows a better action is 160mg/weight/day were we observed the greatest quimiometabolic responses. Conclusions: These results suggest that estrogen may be an effective resource to minimize the metabolic compromising that follows the skeletal muscle atrophy induced by denervation. Subsequently, we conducted a study called Estrogen modulation of insulin secretion in isolated rat pancreatic islets , whose goal was to evaluate the sensitivity to glucose in pancreatic islets isolated from female rats treated with estradiol cypionate (160 mg/body weight/ 15 days) as well as its effect on concentration of protein kinase C and protein kinase A in isolated islets. For this purpose, islets were isolated from rats by the collagenase method to evaluate the secretory process in the presence of different concentrations of glucose. On the other hand, the concentration of the enzymes PKC and PKA was also performed by Western blotting. Statistical analysis was applied to normality test (Kolmogorov-Smirnov test) followed by Tukey test, p <0.05. The results showed that the group treated with estradiol cypionate had greater insulin secretion against the same concentration of glucose, and increase of concentration of PKA and PKC enzymes, compared to control. The results show insulinotropic properties of estrogen in synergy with glucose, which is the main insulin secretagogue, since the hormone did not alter the secretion at concentrations normoglycaemia. Possibly the focus of the secretagogue action of estrogen involves the activation of cytosolic enzyme pathways that determine the exudation of insulin. From these observations, we conducted the third study entitled "Electrocardiographic profile of aged rats trained and treated with estrogen , whose goal was to assess the eletrocardiographic profile of rats treated with the association of estrogen and physical activity. We used Wistar rats at 1 year of age, which were submitted to two programs of aerobic exercise (swimming 3 sessions weekly / 8 weeks) and anaerobic (climbing stairs of 80 cm, 3 sessions weekly / 8 weeks). We evaluated blood pressure and ECG intervals considering the QRS, QTc and PR. Data were compared by Student's t test followed by Tukey test, p <0.05. The findings of this study showed that the group treated with estrogen values were 21% lower compared to the control group. With respect to training, we observed that aerobic training promoted 25% reduction in FC, which reached 37.2% reduction in the presence of estrogen. In anaerobic training, we observed 28% reduction, which was accentuated to 40% when estrogen was present. Thus we conclude that treatment with estrogen alone or associated with physical activity was effective in maintaining and improving conditions in the metabolic and functional heart in the cardiac changes that accompany the aging process. Subsequently, we held the fourth paper entitled "Metabolic actions of estrogen in rats subjected to two types of physical training . The purpose of this study was to evaluate whether rats supplemented with estrogen show better responses to the aerobic and anaerobic physical activity. We used aged Wistar rats (13 months), placed under ideal conditions of bioterism and divided into experimental groups called Control and Treated with estrogen (E, 160&#956;g/100g), Aerobically and Anaerobically trained, and Treated with estrogen or not. Blood samples were collected for biochemical evaluation and samples of different muscles of the anterior and posterior were collected for glycogen content assessment by the phenol sulfuric method. The outcomes show that both estrogen and the different workout programs promoted increase in muscle glycogen reserves. Besides, the association of hormone with exercise promoted an additional effect with further enhances in energy conditions. Additionally, we found lower plasma free fatty acids and abdominal fat, and there was also an increase in total protein concentration indicating adjustments in metabolic homeostasis, an important condition to be preserved in the aging process. / A literatura científica apresenta diversas maneiras de treinamento físico e constantemente reitera que a utilização de modelos animais em estudos sobre o efeito do treinamento visto a possibilidade de avaliar variáveis como volume e intensidade, já que as respostas encontradas nos animais são similares às encontradas em humanos. Por outro lado, diversos estudos têm relatado efeitos benéficos do estrógeno como um recurso importante para minimizar os efeitos deletérios do envelhecimento. Nesse contexto, com o objetivo precípuo de compreender as ações estrogênicas e suas influências no exercício aeróbio e anaeróbio foram realizados 2 trabalhos. O primeiro trabalho intitulado Perfil eletrocardiográfico de ratas envelhecidas treinadas e tratadas com estrógeno , cujo objetivo foi avaliar o perfil eletrocardiográfico de ratas tratadas com a associação de estrógeno e atividade física. Foram utilizadas ratas wistar com 1 ano e meio de idade, as quais foram submetidas a dois programas de exercício físico aeróbio (natação 3 sessões semanais/8 semanas) e anaeróbio (escalada em escada de 80 cm, 3sessões semanais/8 semanas), incluindo um período de 2 semanas de adaptação para cada protocolo de treinamento. Foram avaliados a pressão arterial e o ECG considerando os intervalos QRS, QTc e PR. Os dados foram comparados através do teste T de student seguido do teste de Tukey, p<0,05. Os resultados desse estudo mostraram que o grupo tratado com estrógeno apresentou valores 21% menores se comparado ao controle. Com relação ao treinamento foi observado que o treinamento aeróbio promoveu redução 25% na FC, redução que atingiu 37,2% na presença do estrógeno. No treinamento anaeróbio foi observado redução de 28% sendo acentuado para 40% quando o estrógeno esteve presente. Dessa forma conclui-se que nas alterações cardíacas que acompanham o processo de envelhecimento, o tratamento com estrógeno isoladamente ou associado a prática de atividade física mostrou-se eficiente na manutenção bem como na melhora das condições metabólicas cardíacas. Seqüencialmente foi realizado o segundo trabalho intitulado Ações metabólicas do estrógeno em ratas submetidas a dois tipos de treinamento físico. A proposta deste estudo foi avaliar se ratas suplementadas com estrógeno apresentam melhores respostas frente à atividade física aeróbia e anaeróbia. Foram utilizadas ratas Wistar envelhecidas (1 ano e meio de idade) acondicionadas sob condições ideais de bioterismo e divididas em grupos experimentais denominados Controle e Tratadas com estrógeno (E,160&#956;g/100g), Treinado aeróbio e treinado anaeróbio tratados ou não com estrógeno. Foram coletadas amostras de sangue para avaliação bioquímica e amostras de diferentes músculos dos membros anteriores e posteriores para avaliação do conteúdo de glicogênio pelo método do fenol sulfúrico. Os resultados mostram que tanto o estrógeno quanto os diferentes treinamentos promoveram elevação nas reservas musculares de glicogênio, por outro lado, na associação do hormônio com o exercício físico, foi verificado um efeito aditivo que promoveu a melhora ainda mais expressiva nas condições energéticas. Associado a isto, foi verificado menores concentrações plasmáticas de ácidos graxos livres e gordura abdominal e ainda houve elevação na concentração de proteínas totais indicando ajustes na homeostasia metabólica, condição importante a ser preservada no processo de envelhecimento.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-01-18Bitstream added on 2014-06-13T19:24:26Z : No. of bitstreams: 1 lopes_lg_dr_araiq.pdf: 1390235 bytes, checksum: f24a3595f7aea46b9ca1d7c8ce11fd3a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6669.pdf: 3530464 bytes, checksum: bd826d7ee4a6c0bb3ebc74dc5752604e (MD5) Previous issue date: 2015-04-10 / Financiadora de Estudos e Projetos / The decrease of regulate the estrogen production that occurs at menopause is typically followed by increase of several deleterious changes in the skeletal muscle system. Menopause is mimicked experimentally by a technique called ovariectomy. The ovariectomy produces increased total body mass, changes in body composition and lipid profile, reduction in skeletal muscle (sarcopenia) and bone mineral mass (osteopenia). Mitochondria play a crucial role in a myriad of cellular processes including oxidative phosphorylation, biosynthetic pathways and programming of cell death. Alteration of mitochondrial biogenesis markers in ovariectomized rats and the effects of resistance training (RT) and estrogen replacement (RE) are unclear. Purpose: This study aimed to investigate the effects of Ovariectomy (Ovx), RT and ER on markers of mitochondrial biogenesis and protein expression related to oxidative capacity in the rat gastrocnemius pool. Methods: ER was performed using Silastic® capsules. During the 12-week RT, the animals climbed a ladder with weights attached to their tails. RT began simultaneously for all experimental groups. Gene expression was analysed by RT-PCR, and protein content was determined by western blotting. Results: The estrogen deficiency associated with Ovx decreased the gene expression of the mitochondrial biogenesis markers PGC-1&#945; (~73%), NRF-1 (~44%), and TFAM (~53%) (p<0.05) and decreased the protein expression of phosphorylated AMPK, CREB and AKT, which are related to oxidative capacity, compared to the Sham-Sed group. RT increased PGC- 1&#945; (~59%) and TFAM (~48%) expression compared to the Ovx-Sed group. The combination of RT and ER was superior to the Ovx-Sed and Ovx-RT treatments regarding the gastrocnemius muscle. Conclusions: This study showed that ovaries removal affects transcription factors that regulate mitochondrial biogenesis in skeletal muscle. According to our results and evidence from the literature, and estradiol levels of exercise appear to play an important role in the protection of mitochondrial dysfunction in skeletal muscle of rats. / Introdução: A diminuição da produção regular do estrógeno que ocorre na menopausa é tipicamente seguida pelo aumento de várias alterações deletérias no sistema musculoesquelético. A menopausa é mimetizada experimentalmente por uma técnica chamada ovariectomia. A ovariectomia produz aumento da massa corporal total, alterações na composição corporal e no perfil lipídico, redução da musculatura esquelética (sarcopenia) e da massa mineral óssea (osteopenia). As mitocôndrias desempenham papel crucial em uma miríade de processos celulares que incluem fosforilação oxidativa, vias de biossíntese e programação da morte celular. Alteração dos marcadores de biogênese mitocondrial em ratas ovariectomizadas, bem como os efeitos do treinamento resistido e reposição de estrógeno não são totalmente conhecidas. Objetivos: Investigar os efeitos da ovariectomia, do treinamento resistido e da reposição de estrógeno sobre a biogênese mitocondrial e capacidade oxidativa do músculo esquelético de ratas. Materiais e Métodos: A reposição de estrógeno foi realizada com cápsula Silastic. O treinamento resistido consistiu de 12 semanas em que os animais subiram uma escada com pesos atados às suas caudas. A expressão gênica foi analisada por RT-PCR e o conteúdo de proteína por Western Blotting. Resultados: A deficiência de estrogénio, associada à ovariectomia, reduziu a expressão gênica de marcadores de biogênese mitocondriais, tais como PGC-1&#945; (~ 73%), NRF-1 (~ 44%), TFAM (~ 53%) (p <0,05) e o conteúdo de proteína relacionada à capacidade oxidativa, como AMPK, CREB e AKT quando comparado com grupo Sham-Sed. O treinamento resistido aumentou esses marcadores, tais como PGC-1&#945; (~ 59%) e TFAM (~ 48%) em relação ao grupo Ovx-Sed. Conclusões: O presente estudo mostrou que a remoção dos ovários afeta fatores de transcrição que regulam a biogênese mitocondrial no músculo esquelético. De acordo com os nossos resultados e evidências da literatura, os níveis de estradiol e de exercício parecem desempenhar um papel importante na proteção da disfunção mitocondrial no músculo esquelético de ratas.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:21:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5619556 bytes, checksum: f89abc7c11080124052c031ad8d11131 (MD5) Previous issue date: 2014-08-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / With the increasing use of manufactured products such as pharmaceuticals, cosmetics and toiletries, a new category of water bodies pollutants, called emerging contaminants, is gaining prominence in the environmental issues and preservation scenario of the planet's fresh water. Among these are endocrine disruptors, such as estrogens that has concerned the scientific community that has been warning for need to establish maximum concentration levels of these types of substances in the drinking water. Parallel to the legislation s rises to control these pollutants is necessary the development of rapid analytical methodologies, robust and with low waste generation. Almost all the analytical methods for quantification of estrogens in water samples make use of liquid or gas chromatography coupled to mass spectra associated to long chromatographic runs. In this work a fast method is presented for simultaneous quantification of four estrogens (E1, E2, E3 and EE2) in surface water samples using HPLC-DAD and multiway calibration with the purpose to exploit the potentialities of the second order advantage to circumvent the problems of sample complexities. Second order calibration models based on PARAFAC, MCR-ALS, N and U-PLS/RBL methods were constructed using individual pattern of analytes (pure standard) solutions. These models were then validated using a set of synthetic mixtures of these analytes with two potential interferences (daizein and biochanin A) to simulate the organic load and to demonstrate second order advantage. Satisfying statistical validation parameters were obtained, especially for U and N-PLS/RBL models. Finally river and sewage samples fortified with four estrogens were subjected to a pre-concentration and sample clean up using SPE-C18 cartridge followed by chromatographic analysis. The application of the calibration model to the fortified waters' samples led to, most cases, a recovery between 70 and 120%, reflecting the good accuracy of the proposed method / Com o uso cada vez maior de produtos industrializados, como os farmacêuticos, os cosméticos e os de higiene pessoal, uma nova categoria de poluentes dos corpos aquáticos, chamados de contaminantes emergentes, vem ganhando destaque no cenário das questões ambientais e preservação da água potável do planeta. Entre estes estão os alteradores endócrinos, como é o caso dos estrógenos que têm preocupado a comunidade científica que já vem alertando para necessidade de se estabelecer limite máximo de concentração dessas substâncias nas águas de abastecimento. Paralelamente ao surgimento de legislação para controle desses poluentes é necessário que ocorra o desenvolvimento de metodologias analíticas rápidas, robustas e com baixa geração de resíduos. Em quase sua totalidade os métodos analíticos para quantificação de estrógenos em amostras de águas fazem de uso da cromatografia líquida ou gasosas acopladas a espectros de massa, associada a longas corridas cromatográficas. Neste trabalho é proposta uma metodologia rápida para quantificação simultânea de quatro estrógenos (E1, E2, EE2 e E3) em amostras de águas superficiais empregando HPLC-DAD e calibração multivias com propósito de explorar as potencialidades da vantagem de segunda ordem para contornar os problemas da complexidade da matriz. Modelos de calibração de segunda ordem baseados nos métodos PARAFAC, MCR-ALS, N e U-PLS/RBL foram construídos usando soluções padrão individual dos analitos (padrões puros). Estes modelos foram depois validados empregando-se um conjunto de misturas sintéticas destes analitos com mais dois potenciais interferentes (a daizeina e biochanina A) para simular a carga orgânica e demonstrar a vantagem de segunda ordem. Estas misturas sintéticas foram construídas usando planejamento Taguchi. Parâmetros estatísticos de validação satisfatórios foram obtidos, em especial para os modelos U e N-PLS/RBL. Por fim amostras de rio e esgoto fortificadas com os quatro estrógenos foram submetidas a uma pré-concentração e limpeza da amostra usando cartuchos SPE-C18, seguido da análise cromatográfica. A aplicação dos modelos de calibração as amostras de águas fortificadas levou para a maioria dos casos a uma recuperação entre 70 e 120%, refletindo a boa exatidão do método proposto

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2017-05-03T15:52:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Laura - versão final - Corrigida_docx - sem assinatura.pdf: 1975245 bytes, checksum: 1380118f3f00203cdd14e785c8e7df92 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T15:52:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Laura - versão final - Corrigida_docx - sem assinatura.pdf: 1975245 bytes, checksum: 1380118f3f00203cdd14e785c8e7df92 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / CNPQ / Compostos desreguladores endócrinos (CDEs) contaminamecossistemas aquáticos esão capazes de imitar a ação de hormônios endógenos em peixes. Diante disso, este trabalho avaliouprimeiramente os efeitos da exposição de machos adultos de Poecilia viviparaa uma mistura ambiental de contaminantes com atividade estrogênica e ao CDE 17 α-etinilestradiol (EE2), envolvendo a análise química de moléculas estrogênicas na mistura ambiental, e de parâmetros bioquímicos, comportamentais e reprodutivos. Moléculas com atividade estrogênica foram quantificadas por cromatografia líquida com espectrometria de massas nas águasda Lagoa do Araçá (LA), do rio Capibaribe (RC) e no Complexo estuarino da Bacia do Pina (CEBP), região metropolitana de Recife. Machos adultos de P. vivipara cultivados em laboratório foram expostos por 14 dias a água limpa controle (EECT), ea 10ngEE2 L-1 (EE10) e 100 ngEE2 L-1 (EE100).Em paralelo, machos adultos residentes no CEBP foram coletados em LA, e trazidos ao laboratório. Machos expostos ao EE2 em laboratório e residentes no CEBP foram colocados em contato com fêmeas adultas cultivadas no laboratório, e os casais foram monitorados por um sistema de vídeo, com posterior avaliação quantitativa do comportamento sexual pelo software de análise comportamental Smart. Os parâmetros avaliados foram:número de contatos entre machos e fêmeas (NC); duração média dos contatos em segundos(YACUBIAN-FERNANDES et al.); distância média entre machos e fêmeas durante os contatos (DiC). O número de tentativas de cópula dos machos (TC) foi avaliado por observação humana dos vídeos, e a velocidade natatória dos machos isolados foi também quantificada pelo software Smart. Após a interação entre os casais, fêmeas pareadas com machos controle e LA foram mantidas isoladas em aquários por 90 dias para quantificação do sucesso de impregnação (SI) e do número de juvenis produzidos (NJP). Machos dos tratamentos EECT, EE10, EE100 e LA foram sacrificados e a quantidade de vitelogenina no fígado foi avaliada indiretamente por método histoquímico para coloração de fosfoproteínas. As análises cromatográficas indicaram a presença dos estrogênios estriol (E3), estrona (E1), EE2 e estradiol (E2), e de bisfenol A (BPA) nas concentrações médias de 31,8; 19,5; 11,9; 8,6; e 4,2 ng L-1, respectivamente, nas águas do CEBP, típicas de áreas urbanas contaminadas por esgotos domésticos. Machos expostos ao EE2 e provenientes da Lagoa do Araçá apresentaram indução de vitelogenina (p < 0,05). O número de contatos entre machos e fêmeas, e número de tentativas de cópula dos machos diminuiu nos casais em EE100 e LA (p < 0,05). A distância média entre machos e fêmeas durante os contatos aumentou em EE100 e LA (p < 0,05). Machos isolados expostos a EE10 e EE100 apresentaram hiperatividade natatória, enquanto machos provenientes de LA apresentaram hipoatividade natatória comparado aos controles. Machos de LA impregnaram 55% das fêmeas, enquanto machos controle impregnaram 88% das fêmeas. Fêmeas pareadas com machos controle (FeCt) produziram 7,1 juvenis em média, enquanto fêmeas pareadas com machos de LA (FeLA) produziram 2,7 juvenis (p = 0,019), totalizando 57 juvenis produzidos por FeCt versus 14 juvenis produzidos por FeLA, o que representa uma redução de 75% na geração de potenciais recrutas para a população. No segundo tema deste trabalho, machos e fêmeas adultos cultivados no laboratório foram mantidos isolados e ambos machos e fêmeas foram expostos por 30 dias ao herbicida atrazina nas concentrações 0 (controle-ATCT), 0,5μgL-1 (AT0,5); 5μgL-1 (AT5) e 50 μgL-1(AT50). Após a exposição, casais foram formados para cada tratamento, e o comportamento sexual foi analisado para o parâmetro TC por observador humano. A atividade natatória de machos e fêmeas mantidos isolados também foi avaliada. Após a exposição e pareamento dos casais, fêmeas de cada tratamento foram mantidas isoladas em aquários por 90 dias, para quantificação do número de ovócitos maduros (NO), e dos índices gonadossomático (IGS) e hepatossomático (Webb and Weihs). Os parâmetros NO, IGS e IHS para as fêmeas não foram alterados significativamente. Nos casais expostos a atrazina foi observada uma redução em TC na concentração de 5 (p > 0,05) e 50 μgL-1 (p < 0,05). Hiperatividade natatória foi detectada nas fêmeas expostas a todas concentrações, e em machos expostos a 5 (p > 0,05) e 50 μg L-1 (p < 0,05). Este estudo quantifica pela primeira vez CDEs estrogênicos em águas da região metropolitana de Recife, e demonstra o efeito de desreguladores endócrinos como o EE2 em laboratório, bem como os efeitos de uma mistura ambiental de contaminantes incluindo CDEs estrogênicos, em biomarcadores bioquímicos, comportamentais e reprodutivos de Poecilia vivipara, que podem afetar a viabilidade populacional em situações ambientalmente realistas. / Endocrine disruptor compounds (EDCs) contaminate aquatic ecosystems and are able to mimic the action of endogenous hormones in fish.Therefore, this study first evaluated the effects of adult male Poecilia vivipara exposure to an environmental mixture of contaminants with estrogenic activity and to the EDC 17 α-ethinylestradiol (EE2), involving the chemical analysis of estrogenic molecules in the environmental mixture, and biochemical, behavioral and reproductive parameters.Molecules with estrogenic activity were quantified by liquid chromatography with mass spectrometry in the waters of Lagoa do Araçá(LA) and the Capibaribe River (CR), in the Pina Basin estuarine complex (PBEC), metropolitan area of Recife. Laboratory grown adult male P. vivipara were exposed for 14 days to a clean water control (EECT) and to 10 ngEE2 L-1 (EE10) and 100 ngEE2 L-1 (EE100).In parallel, resident adult males in the PBEC were collected in LA, and brought to the laboratory.Males exposed to EE2 in the laboratory and residents of PBEC were placed in contact with adult females grown in the laboratory, and the couples were monitored by a video system, with subsequent quantitative assessment of sexual behavior by behavioral analysis software Smart.The parameters evaluated were: number of contacts between males and females (NC); average duration of contacts in seconds (YACUBIAN-FERNANDES et al.); average distance between males and females during the contacts (DiC). The number of male copulation attempts (Lichota et al.) was assessed by human observation of the videos, and swimming speed of single males was also quantified by the Smart software.After the interaction between couples, females paired with control and LA males were kept isolated in tanks for 90 days to quantify the impregnation success (IS) and the number of juveniles produced (NJP). Males of treatments EECT, EE10, EE100 and LA were sacrificed and the amount of vitellogenin in the liver was assessed indirectly by a histochemical staining method for phosphoproteins.Chromatographic analysis indicated the presence of estrogens estriol (E3), estrone (E1), EE2 and estradiol (E2), and bisphenol A (BPA) in concentrations averaging 31.8; 19.5; 11.9; 8.6; and 4.2 ng L-1, respectively, in PBEC waters, typical of urban areas contaminated by domestic sewage.Males exposed to EE2 and from Lagoa do Araçá showed vitellogenin induction (p <0.05).The number of contacts between males and females, and thenumber of male copulation attempts decreased in couples from EE100 and LA (p <0.05).The average distance between males and females during the contacts increased at EE100 and LA (p <0.05). Isolated males exposed to EE10 and EE100 developed swimming hyperactivity, while males from LA developed swimming hypoactivity compared to controls.LA males impregnated 55% of females, while control males impregnated 88% of females.Females paired with control males (FeCt) produced 7.1 juveniles on average, while females paired with LA males (FeLA) produced 2.7 juveniles (p = 0.019), totaling 57 juveniles produced by FeCt versus 14 juveniles produced by FeLA, which represents a 75% reduction in the generation of potential recruits for the population.In the second theme of this work, adult males and females grown in the laboratory were kept isolated and both males and females were exposed for 30 days to atrazine concentrations 0(control-ATCT), 0.5 μg L-1 (AT0.5); 5 μg L-1 (AT5) and 50 μg L-1 (AT50).After exposure, couples were formed for each treatment, and sexual behavior was analyzed for MCA by a human observer.Swimming activity of isolated males and females was also evaluated.After exposure and pairing of couples, females from each treatment were kept isolated in tanks for 90 days, to quantify the number of mature oocytes (NO), and the Gonadosomatic index (GSI) and hepatossomatic index (HSI). The parameters NO, GSI and HSI for females did not change significantly.In couples exposed to atrazine a significant reduction in MCA was observed at concentrations5 (p > 0,05) and 50 μg.L-1 (p <0.05). Hyperactive swimming was detected in females exposed to all concentrations, and in males exposed to 5 (p > 0.05) and 50 μgL-1 (p < 0.05).This study quantifies for the first time estrogenic EDCs in waters of the metropolitan area of Recife, and demonstrates the effect of endocrine disruptors such as EE2 in the laboratory, as well as the effects of an environmental mixture of contaminants including estrogenic EDCs, in biochemical, behavioral and reproductive biomarkers of Poecilia vivipara, which can affect population viability in environmentally realistic conditions.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Raphael Teixeira Verbinnen.pdf: 4011751 bytes, checksum: 6a77c544380be3240e2586a2ad753bff (MD5) Previous issue date: 2009-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Given the humanity perception of necessity to preserve the environment and the incessant search for sustainable development, today the preservation of natural water sources is by far one of the most worrying factors for the preservation of life. Besides the most common aquatics pollutants, also there is one called emerging pollutants, which in recent decades have been detected due the technological advances. These involve mainly the organic micropollutants, which present the endocrine disrupters (ED's) main group. Among the ED's, the natural and synthetic sex steroids hormones have significant importance because their daily use in medicine, in the replacement therapy and contraceptive methods, which has contributed to the continuous release in domestic sewage. There are several consequences of this effect, including fertility declining, occurrence of various cancers and disorders in the development and homeostasis of organisms. The domestic and industrial sewage and leaching from agricultural fields fertilized with sludge from sewage treatment plants (STP's) are the main sources of contamination. This study allowed the chromatographic separation of the hormones estriol (E3), 17 β-estradiol (E2), estrone (E1) and 17 α-ethynylestradiol (EE2) in relatively short duration (16,5 minutes), using the acetonitrile:water (ACN: H2O) mixture as mobile phase in gradient mode, constant flow of 1 mL min-1, injection volume of 20 μL, λ = 280 nm and temperature of 27 ºC. The method was developed in two laboratories, involving different instruments. Four procedures and two adsorbents (C18 e OPT) of SPE were tested. The sample preparation method, including dechlorination and the SPE procedure with C18 cartridge, resulted in the recovery values within the acceptable limit. The developed method was validated according to guidelines of the ANVISA`s Guide for Validation, and bioanalytical methods was adapted for this study. The method was then applied in the analysis of the natural (17β-estradiol, estrone and estriol) and the synthetic (17α-ethinylestradiol) hormone in drinking water from the city of São Luís Peaks were not identified for the substances studied, probably substances concentrations below the limits of detection and quantification of the method were found. / Diante da percepção do homem sobre a necessidade de se preservar o ambiente e da busca incessante pelo desenvolvimento sustentável, hoje a proteção das fontes de água natural é de longe um dos fatores mais preocupantes para a conservação da vida. Além dos poluentes aquáticos mais comuns, existem também os chamados poluentes emergentes, que nas últimas décadas vêm sendo detectados em função do aprimoramento de métodos e técnicas de detecção. Estes envolvem principalmente os micropoluentes orgânicos, que por sua vez apresentam os desreguladores endócrinos (DEs) como principal grupo. Dentre os DEs, os hormônios sexuais esteróides, naturais e sintéticos, têm significativa importância, devido ao seu uso diário na medicina, em terapias de reposição e métodos contraceptivos, o que tem provocado o contínuo lançamento em esgotos sanitários. Várias são as conseqüências do efeito destas substâncias, dentre elas: diminuição da fertilidade, ocorrência de cânceres diversos e perturbações no desenvolvimento e na homeostase de organismos. Os esgotos sanitários e industriais, além da lixiviação de campos de agricultura adubados com lodo proveniente de estações de tratamento de esgotos (ETEs) são as principais fontes de contaminação. Este trabalho possibilitou a separação cromatográfica dos hormônios estriol (E3), 17 β-estradiol (E2), estrona (E1) e 17 α-etinilestradiol (EE2) em tempo relativamente curto (16,5 min), utilizando como fase móvel a mistura acetonitrila:água (ACN:H2O), em modo gradiente, fluxo de 1 mL min-1, λ = 280 nm e temperatura de 27 ºC. O método foi desenvolvido em dois laboratórios, envolvendo dois instrumentos diferentes. Foram testados 4 procedimentos e 2 adsorventes de extração em fase sólida (C18 e OPT). O método de preparo da amostra, incluindo a descloração e o procedimento de EFS, com cartucho C18 resultou em valores de recuperação dentro dos limites considerados adequados. O método desenvolvido foi validado segundo as orientações do Guia para Validação de Métodos Analíticos e Bioanalíticos publicado pela ANVISA, tomando-se por base os procedimentos para os métodos bioanalíticos, os quais foram adaptados para este estudo. O método foi, então, aplicado na análise dos hormônios naturais (17β-estradiol, estrona e estriol) e o sintético (17α- etinilestradiol) em água potável distribuída na cidade de São Luís. Para as amostras analisadas, não foram identificados picos referentes às substâncias de interesse, portanto pode-se afirmar que estas foram encontradas em concentrações inferiores aos limites de detecção e de quantificação do método.

Um dos grandes problemas da engenharia ambiental é a contaminação dos corpos hídricos. Os sanitaristas têm se preocupado com os hormônios sexuais, notadamente os estrógenos, compostos extremamente ativos biologicamente, que têm sido referidos como agentes etiológicos de feminilização e de vários tipos de cânceres. Os estrógenos naturais 17 \'beta\'-estradiol (E2), estriol (E3), estrona (E1) e o sintético 17 \'alfa\'-etinilestradiol (EE2), desenvolvidos para uso médico em terapias de reposição hormonal feminina e métodos contraceptivos, são os que despertam maiores preocupações, pela contínua introdução ao ambiente; hormônios que possuem a melhor conformação reconhecida pelos receptores que resultam respostas máximas, por isso são considerados responsáveis pela maioria dos efeitos disruptores desencadeados pela disposição de efluentes. A mudança de padrões quanto à atividade sexual dos jovens e a preocupação com o planejamento familiar, levaram ao grande consumo de contraceptivos que, através da urina, são levados pela rede coletora aos corpos de água. O indiscriminado uso desses hormônios na bovinocultura, suinocultura, avicultura e aqüicultura são responsáveis por parte considerável desse contaminante nos mananciais. Os hormônios excretados através da urina e fezes e agentes provenientes das indústrias de processamento de alimentos preocupam os sanitaristas porque o lançamento de efluentes in natura ou tratados, são as principais vias de contaminação do ambiente aquático, quer pelo déficit de infra-estrutura em saneamento, quer pela ineficiência tecnológica e/ou operacional na remoção desses compostos nas estações de tratamento de água ou de efluentes. Apesar de possuírem meia-vida relativamente curta, quando comparados a outros compostos orgânicos como praguicidas, os estrógenos naturais são continuamente introduzidos no ambiente, o que lhes confere caráter cumulativo. A proposta desta pesquisa foi verificar a presença de estrógenos na água bruta que chega à Estação de Tratamento de Água, após seu tratamento, em água tratada por osmose reversa e por tecnologia Milli Q (marca registrada). Para verificar e quantificar presença desses hormônios estrógenos em água de abastecimento de São Carlos-SP, foram realizadas exames através de imunoensaio quimiluminescente e radioimunoensaios. Os resultados apontaram que a ETA não possui solução eficiente para a remoção dos analitos de interesse dessa pesquisa, uma vez que na água tratada foram encontrados valores semelhantes aos da água bruta. / One of the major problems of environmental engineering is the water contamination. The sanitary persons have been concerned with the gonadal hormones, notably the estrogen, biologically active compounds extremely, which have been referred to as etiologic agents of feminization and several types of cancers. The natural estrogen 17 \'beta\'-estradiol (E2), estriol (E3), estrone (E1) and synthetic 17 \'alpha\'-ethinylestradiol (EE2), developed for medical use of hormone replacement therapy in women and contraceptive methods, are those that attract larger concerns by the continuous introduction into the environment; hormones that have the best conformation recognized by receptors that result answers maximum, so they are considered responsible for most of the effects disruptors triggered by the wastewater disposal. The change in patterns on the sexual activity of young people and the concern with family planning, led to the large consumption of contraceptives that, in the urine, are led by the distribution net to water. The indiscriminate use of these hormones in cattle, pigs, poultry and aquaculture are responsible for part of this contaminant in the source. The hormones excreted in the urine and feces and agents from the food processing industries in the sanitary concern that the launch of effluents in nature or treated, are the main routes of contamination of the aquatic environment, either by lack of infrastructure, sanitation, or by inefficiency technological and/or operating in the removal of these compounds in the treatment plants, water or effluent. Despite having relatively short stocking-lige when compared to other organics such as pesticides, natural estrogens are continuously released into the environment, which gives them character cumulative. The proposal of this research was to verify the presence of estrogen in the gross water that arrives at the water treatment plant, after the treatment, in water treated by reverse osmosis and by Milli Q technology. To verify and quantify presence of these hormones estrogen in water supply of San Carlos-SP, examinations were conducted through immunoassay chemiluminescent and radioimunoassays. The results showed that the ETA has no efficient solution for removal of interest analytes of this research, because in the treated water were found values similar to crude water.

Os perfis longitudinais dos metabólitos dos esteróides sexuais, progesterona e estrógenos, e dos glicocorticóides foram analisados para 22 eventos (gestação, parto e lactação) de 8 jaguatiricas mantidas em cativeiro. Três eventos foram oriundos da Transferência de Embrião (TE) e foram comparados àquelas que gestaram por fertilização natural. As análises estatísticas demonstraram haver diferenças altamente significativas para metabólitos de progesterona na fase inicial (P<0001) e média (P< 0,007) da gestação, bem como, no período da lactação (P<0,0015). As análises descritivas sugeriram uma atividade ovariana para a espécie no período de lactação, uma vez detectado picos de metabólitos de estrógenos para alguns eventos. Foi realizado ainda, um estudo do comportamento materno de 3 fêmeas através do sistema de vídeo-monitoramento dos primeiros meses da lactação (n=3989,5 horas observadas). A espécie em cativeiro despendeu mais tempo cuidando do seu filhote e descansando durante o dia, entrando na caixa de abrigo entre 5:00h e 8:00h (61,3%) e nela permanecendo por um tempo médio de 8 horas seguidas. Outras análises comportamentais sugerem que o estresse é um fator preponderante na determinação do sucesso da criação do filhote. A variável comportamental executada pela fêmea de entrar e sair da caixa por repetidas vezes foi associada ao estresse, sendo possível avaliar a resposta da adrenal pela secreção dos glicocorticóides e realizar sua validação fisiologicamente. Espera-se desta forma, contribuir para uma mudança no quadro bastante crítico da população em cativeiro, considerando a baixa taxa de natalidade e a alta taxa de mortalidade dos filhotes, principalmente, no seu primeiro mês de vida. / The longitudinal profiles of the sexual steroid\'s metabolites, progesterone and estrogen, and glucocorticoids were analyzed for 22 events (pregnancy, birth and breastfeeding) of 8 ocelots kept in captivity. Three events came from the Embryo Transfer (TE) and were compared against the ones that were gestated by natural fertilization. The statistical analysis demonstrated that the differences were highly significative during the initial (P<0001) and middle stages (P< 0,007) of pregnancy and lactation (P<0,0015) periods for the progesterone metabolites. The descriptive analysis suggests a ovarian activity for the species during the lactation period, once detected the estrogen metabolites peaks during some events. A study was also performed, concerning the maternal behavior of 3 female through video-monitoring of the first months of lactation (n=3989,5 hours observed). The species that were kept in captivity spent more time resting and caring the puppy, entering it\'s shelter between 5:00h and 8:00h (61,3%) and there staying during 8 hours average. Other behavior analysis suggests that the stress level is a predominant fact in the success of the establishment of the puppy. A behavior variable performed by the female, by entering the shelter for a repeated number of times was linked to the stress level, being possible to assess the adrenal response by the secretion of glucorticoids and perform it\'s phisiological validation. It is expected by this means, a contribution for a change in the critical scene of the population that is kept in captivity, considering the puppies\' low birth rate and high mortality rate, specially during it\'s first months.

OBJETIVO: Estudiar el efecto del tratamiento con 2-metoxiestradiol en el remodelado vascular miocárdico inducido por la hipertensión y tras una lesión vascular por denudación endotelial en arteria femoral.MATERIAL Y MÉTODOS: modelo de hipertensión: se han utilizado 5 grupos experimentales de ratas SHR de 10 semanas de vida: rata hembra intacta, rata hembra ovarioectomizada, rata hembra ovarioectomizada y tratada con 2-metoxiestradiol, rata macho y rata macho tratada con 2-metoxiestradiol. Se les midió la presión por pletismografía una vez por semana hasta la semana 18. En la semana 18 se les extrae en corazón y los vasos del lecho mesentérico para realizar los protocolos de análisis de la estructura vascular miocárdica y de producción de anión superóxido y expresión de proteínas relacionadas con la proliferación celular. Modelo de lesión vascular: se han utilizado 5 grupos experimentales de ratas SD: rata hembra intacta, rata hembra ovarioectomizada, rata hembra ovar ioectomizada y tratada con 2-metoxiestradiol, rata macho y rata macho tratada con 2-metoxiestradiol. A la semana de establecer los grupos, se les realiza la cirugía de lesión endotelial por denudación y a las dos semanas se extrae la muestra y se cuantifica la formación de neoíntima.RESULTADOS: Modelo de Hipertensión: Existen diferencias entre sexos en las ratas SHR, tanto en la evolución de la Hipertensión como en el remodelado vascular miocárdico, en la actividad de la NADPH oxidasa vascular de lecho mesentérico y en los factores protéicos de proliferación celular. El tratamiento con 2-metoxiestradiol atenuó el aumento de la presión arterial sistólica provocada por la ovarioectomía así como en el remodelado vascular miocárdico. En la expresión de proteínas y en la actividad de la enzima NADPH oxidasa disminuyó pero no de forma significativa. En las ratas macho, el tratamiento con 2-metoxiestradiol atenuó la evolución de la hipertensión, el remodelado vascular miocárdico, e l incremento de la actividad de la enzima NADPH oxidasa y los factores de proliferación celular. Modelo de Lesión Vascular: No hemos observado diferencias entre sexos en la formación de neoíntima. La ovarioectomía provocó un incremento en la formación de neoíntima y el tratamiento con 2-metoxiestradiol atenuó dicho incremento. En ratas macho, este metabolito no mostró efecto ninguno.

Os perfis longitudinais dos metabólitos dos esteróides sexuais, progesterona e estrógenos, e dos glicocorticóides foram analisados para 22 eventos (gestação, parto e lactação) de 8 jaguatiricas mantidas em cativeiro. Três eventos foram oriundos da Transferência de Embrião (TE) e foram comparados àquelas que gestaram por fertilização natural. As análises estatísticas demonstraram haver diferenças altamente significativas para metabólitos de progesterona na fase inicial (P<0001) e média (P< 0,007) da gestação, bem como, no período da lactação (P<0,0015). As análises descritivas sugeriram uma atividade ovariana para a espécie no período de lactação, uma vez detectado picos de metabólitos de estrógenos para alguns eventos. Foi realizado ainda, um estudo do comportamento materno de 3 fêmeas através do sistema de vídeo-monitoramento dos primeiros meses da lactação (n=3989,5 horas observadas). A espécie em cativeiro despendeu mais tempo cuidando do seu filhote e descansando durante o dia, entrando na caixa de abrigo entre 5:00h e 8:00h (61,3%) e nela permanecendo por um tempo médio de 8 horas seguidas. Outras análises comportamentais sugerem que o estresse é um fator preponderante na determinação do sucesso da criação do filhote. A variável comportamental executada pela fêmea de entrar e sair da caixa por repetidas vezes foi associada ao estresse, sendo possível avaliar a resposta da adrenal pela secreção dos glicocorticóides e realizar sua validação fisiologicamente. Espera-se desta forma, contribuir para uma mudança no quadro bastante crítico da população em cativeiro, considerando a baixa taxa de natalidade e a alta taxa de mortalidade dos filhotes, principalmente, no seu primeiro mês de vida. / The longitudinal profiles of the sexual steroid\'s metabolites, progesterone and estrogen, and glucocorticoids were analyzed for 22 events (pregnancy, birth and breastfeeding) of 8 ocelots kept in captivity. Three events came from the Embryo Transfer (TE) and were compared against the ones that were gestated by natural fertilization. The statistical analysis demonstrated that the differences were highly significative during the initial (P<0001) and middle stages (P< 0,007) of pregnancy and lactation (P<0,0015) periods for the progesterone metabolites. The descriptive analysis suggests a ovarian activity for the species during the lactation period, once detected the estrogen metabolites peaks during some events. A study was also performed, concerning the maternal behavior of 3 female through video-monitoring of the first months of lactation (n=3989,5 hours observed). The species that were kept in captivity spent more time resting and caring the puppy, entering it\'s shelter between 5:00h and 8:00h (61,3%) and there staying during 8 hours average. Other behavior analysis suggests that the stress level is a predominant fact in the success of the establishment of the puppy. A behavior variable performed by the female, by entering the shelter for a repeated number of times was linked to the stress level, being possible to assess the adrenal response by the secretion of glucorticoids and perform it\'s phisiological validation. It is expected by this means, a contribution for a change in the critical scene of the population that is kept in captivity, considering the puppies\' low birth rate and high mortality rate, specially during it\'s first months.