Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T14:52:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bertolini_MartinnadeMendoncae_D.pdf: 3303888 bytes, checksum: 17ca780a99a3e63d87bcf4ed94370ffc (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O patógeno oportunista Candida albicans e Streptococcus do grupo Mitis formam comunidades complexas em múltiplos sítios da cavidade oral, nos quais o ambiente e a disponibilidade de nutrientes sofrem mudanças constantes. Objetivou-se estudar as características estruturais e de virulência de biofilmes de Candida albicans na presença e ausência de S. oralis crescendo sobre um modelo tri dimensional de mucosa oral humana, em diferentes condições: (1) umidade da superfície mucosa (molhada ou semi seca), (2) disponibilidade de nutrientes (suplementação do meio de cultura com BHI) e (3) morfotipo da hifa (hifa ou pseudo hifa). Para isso foram utilizados modelos tri dimensionais de mucosa oral humana formado por queratinócitos imortalizados (linhagens celulares OKF6-TERT2 ou SCC15) sobre uma matriz colágena com fibroblastos para o crescimento dos biofilmes. Estes foram infectados por Streptococcus oralis 34, e/ou Candida albicans, sendo uma cepa de referência e cepas mutantes para a formação de pseudo-hifas, pela deleção dos genes ndt80 ou tup1. A determinação do biovolume e estrutura do biofilme foram realizadas por microscopia confocal a laser, com os biofilmes sendo corados por imunofluorescência com anticorpo especifico para C. albicans e sonda para Streptococcus. Como determinante de virlência secções de tecido com 5 ?m de espessura foram coradas da mesma maneira anterior ou por hematoxilina e eosina, com o intuito de se detectar a invasão de microorganismos. O dano tecidual também foi mensurado pela liberação de lactato desicrogenase no meio de cultura. Os dados foram avaliados por análises de variâncias (ANOVA) e os procedimentos para comparações múltiplas pareadas por Bonferroni t-test, com ? = 5%. Em condições úmidas C. albicans estendeu hifas longas e entrelaçadas, formando um biofilme de superfície homogênea. Biofilmes mistos apresentaram uma estrutura estratificada, com S. oralis crescendo em contato com a mucosa e a C. albicans cobrindo a superfície bacteriana. Em condições de semi-secas a C. albicans formou densos focos de crescimento localizados a partir dos quais as hifas estenderam-se radialmente para se entrelaçarem com hifas de focos adjacentes. Em biofilmes mistos este fenômeno provocou o acúmulo focal de S. oralis co-localizado com os focos de C. albicans. Embora o biovolume do biofilme de C. albicans tenha sido significativamente maior em condições úmidas (P<0,001), houve uma invasão tecidual mínima em comparação com as condições semi-secas, na qual a barreira epitelial foi completamente destruída. A suplementação do meio de cultura, em condições semi-secas não alterou a arquitetura do biofilme, mas intensificaram o crescimento, o biovolume e a invasão/dano tecidual (P<0,001), proporcionalmente as concentrações testadas. Mutantes para a formação de pseudo-hifas formaram biofilmes defeituosos, nos quais a maioria dos S. oralis estava em contato com a superfície epitelial, abaixo das pseudo-hifas. A presença de S. oralis promoveu invasão e dano tecidual em todas as condições. Conclui-se que a umidade, a disponibilidade de nutrientes, o morfotipo da Candida e a presença de S. oralis afetam fortemente a arquitetura e virulência de biofilmes de C. albicans crescidos sobre nas mucosas / Abstract: The opportunistic pathogen Candida albicans and streptococci of the Mitis group form complex communities in multiple oral sites, where the environment and nutrient availability change constantly. We aimed to study structural and virulence characteristics of Candida albicans biofilms in the presence or absence of S. oralis, growing on a three-dimensional model of human oral mucosa, under different conditions: (1) moisture of mucosal surface (wet or semi dry), (2) nutrient availability (BHI supplementation on culture media) and (3) hyphal morphotype (hyphae or pseudohyphae). For this it was used a three-dimensional model of the human oral mucosa formed by immortalized oral keratinocytes (OKF6-TERT2 or SCC15 cell lines) on a fibroblast-embedded collagenous matrix to grow biofilms. Infections were carried out using Streptococcus oralis 34, a C. albicans reference strain and pseudohyphal mutants with a homozygous deletion of the ndt80, or tup1 gene. Determination of biofilm biovolume and structure was done by confocal scanning laser microscopy with biofilms stained by immunofluorescence using an anti-Candida antibody and a Streptococcus probe. As determinant of virulence, 5-?m-thick tissue sections were stained same way or with hematoxylin and eosin in order to detect invasion of microorganisms. Also tissue damage was measured by lactate dehydrogenase release in the culture media. Statistical analyses were performed using SigmaPlot 12 software at 5% significance level. Data were evaluated by analysis of variance (ANOVA) and when statistical significances were found, all pairwise multiple comparison procedures were performed with Bonferroni t-test, with ? = 5%. Under wet conditions C. albicans extended long intertwined hyphae, forming a homogeneous surface biofilm. Mixed biofilms had a stratified structure, with S. oralis growing in close contact to the mucosa and C. albicans growing on the bacterial surface. Under semi-dry conditions, C. albicans formed localized foci of dense growth from which hyphae extended radially to intertwine with hyphae from adjacent foci. In mixed biofilms this promoted focal growth of S. oralis co-localizing with C. albicans. Although Candida biofilm biovolume was significantly greater under wet conditions (P<0.001), there was minimal tissue invasion compared to semidry conditions where the epithelial barrier was completely destroyed. Supplementing the infection medium with nutrients under semidry conditions did not change the biofilm architecture but intensified focal growth and increased biofilm biovolume and tissue invasion/damage (P<0.001), proportionally to the tested concentrations. Pseudohyphal mutants formed defective mixed biofilms, with most S. oralis in contact with the epithelial surface, below the pseudohyphal mass. Interestingly, the presence of S. oralis promoted fungal invasion and tissue damage under all conditions. Moisture, nutrient availability, hyphal morphotype and presence of S. oralis strongly affect architecture and virulence of mucosal fungal biofilms / Doutorado / Protese Dental / Doutora em Clínica Odontológica

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-23Bitstream added on 2014-06-13T18:40:42Z : No. of bitstreams: 1 sakabe_r_dr_jabo.pdf: 1962870 bytes, checksum: cd990c2bf904dcaef626cdef3948aa0c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este ensaio teve como objetivo avaliar a suplementação alimentar com dois óleos vegetais (soja e linhaça) e parede celular de Saccharomyces cerevisiae em tilápias do Nilo sobre o desempenho produtivo, inflamação aguda induzida por Streptococcus agalactiae inativado, inflamação crônica por corpo estranho por meio do implante de lamínulas de vidro no tecido subcutâneo e a taxa de sobrevivência frente ao desafio com S. agalactiae. Foram utilizadas 840 tilápias, invertidas sexualmente, distribuídas em 24 caixas de 500L (n=35). O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado com oito tratamentos e três repetições, no qual foram testadas duas fontes de ácidos graxos essenciais (óleo de soja (OS) e óleo de linhaça (OL)) e dois níveis de parede celular de S. cerevisiae (PC) na dieta (0,0 e 0,3%) constituindo os seguintes tratamentos: OS; OL; OS+OL; OS+PC; OL+PC; OS+OL+PC; PC e controle. Os peixes receberam as rações teste durante três meses, duas vezes ao dia, ad libitum. Um lote de peixes foi avaliado quanto ao acúmulo de células na inflamação induzida por S. agalactiae inativado, na bexiga natatória após 12, 24 e 48 horas. O segundo lote de peixes foi submetido ao implante de lamínulas de vidro no tecido subcutâneo por dois, quatro, seis e oito dias, quando foram colhidas e avaliadas quanto ao acúmulo de macrófagos e formação de gigantócitos. Dentre os parâmetros hematológicos foi realizado eritrograma completo (contagem de células vermelhas, percentual de hematócrito e taxa de hemoglobina). Além disso, foi avaliada a atividade respiratória de leucócitos sanguíneos. No terceiro lote de peixes, foram avaliados os parâmetros de desempenho produtivo e a sobrevivência frente ao desafio bacteriano com S. agalactiae. No estudo da inflamação aguda constatou-se o efeito da suplementação alimentar com os óleos vegetais (soja e/ou linhaça)... / This test was designed to evaluate dietary supplementation with two vegetable oils (soybean and linseed) and cell wall of Saccharomyces cerevisiae in Nile tilapia growth performance, acute inflammation induced by Streptococcus agalactiae inactivated, chronic inflammation of foreign body through implantation of glass coverslips into the subcutaneous tissue and survival upon challenge with S. agalactiae. 840 tilapia, sexually inverted, were distributed into 24 aquarium of 500L (n = 35). The design was completely randomized with eight treatments and three replicates which two sources of essential fatty acids (soybean oil (SO) and linseed oil (LO)) and two levels of the cell wall of S. cerevisiae (PC) in diet (0.0 and 0.3%), and tested to the following treatments: OS, OL, OL + OS, OS + PC, PC + OL; OS + OL + PC, PC and control. The fish were fed with diets for three months, twice daily, ad libitum. In one group of fish the accumulation of cells in the inflammation induced by S. agalactiae inactivated in bladder after 12, 24 and 48 hours were evaluated. The second group of fish was subjected to implantation of glass coverslips into the subcutaneous tissue by two, four, six and eight days when they were harvested and evaluated for macrophage accumulation and formation of giant cell. Among the hematological parameters the complete erythrocyte (red blood cell count, percentage of hematocrit and hemoglobin) was performed. Furthermore, the respiratory activity of blood leukocytes was evaluated. The third group of fish, the productive performance parameters and survival to the bacterial challenge with S. agalactiae was evaluated. In the study of acute inflammation was found the effect of dietary supplementation with vegetable oils (soybean and / or linseed), as well as the yeast cell wall increased accumulation of total cells in the exudate of the swim bladder... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-30 / Introdução - Os Streptococcus agalactiae são bactérias consideradas parte da microbiota da vagina, das vias aéreas superiores e do trato intestinal, porém sua importância como patógeno humano vem crescendo no decorrer dos anos. Quando presente na vagina podem trazer sérias consequências para a mulher, podendo estar associados à infertilidade, aumentar o risco de ruptura prévia de membrana, levar a corioaminionite, endometrite, etc. e, a partir da colonização vaginal da mãe, pode também haver contaminação dos neonatos na hora do parto. Objetivo - O objetivo deste estudo foi determinar a associação dos Streptococcus agalactiae com inflamação vaginal em mulheres atendidas nos laboratórios públicos de Maceió. Material e método - Foi coletado material do terço médio distal da vagina de 1014 mulheres entre 18 e 49 anos. Um dos swabs foi utilizado para a realização de exame bacterioscópico e os outros dois swabs foram utilizados para a realização de cultura para o Streptococcus agalactiae (colocado em caldo Todd-Hewitt) e outros microrganismos, além de exame a fresco direto. A identificação dos microrganismos foi realizada de acordo com a literatura. Resultados - A frequência de colonização vaginal pelo Streptococcus agalactiae encontrada neste estudo foi de 13,9%, sendo que 98 (9,7%) culturas foram positivas somente para este microrganismo e em 43 (4,2%) o mesmo estava associado a outros microrganismos. Dentre as mulheres com cultura positiva apenas para o estreptococo, 18,9% apresentaram reação inflamatória, enquanto somente 6,7% não tinham inflamação. A proporção de reações inflamatórias observadas nas mulheres colonizadas pelo estreptococo foi comparável à de outros patógenos comumente encontrados na vagina como: Candida spp., G. vaginalis e Trichomonas spp.. Em relação ao grau de associação destes microrganismos com inflamação vaginal, verificou-se um Risco Relativo de 2,80 para o Streptococcus agalactiae, 2,01 para Candida spp., 0,55 para Gardnerella vaginalis e 19,03 para Trichomonas spp. Estes dados foram confirmados pela análise multivariada pelo método Forward Stepwise (Wald). Foi verificado que a gestação não constitui um fator de risco, bem como a idade, número de parceiros sexuais, frequência de relações sexuais, abortos e gestações anteriores. Conclusão - O estreptococo do grupo B, quando presente na vagina, mostrou ser um agente promotor de inflamação, a exemplo de outros microrganimos como Candida spp e Trichomonas spp, que são sempre valorizados quando encontrados nesse sítio. Este fato mostra que esta bactéria, ainda considerada parte da microbiota vaginal, pode ser considerada tão patogênica como outros microrganismos, havendo assim a necessidade de diferenciar quanto a um estado de simples colonização ou se a bactéria está sendo agente de processo infeccioso. / superior aerial tract, and intestinal tract microbiota, but it is growing in importance as a human pathogen throughout the last years. When it is present in vagina, it can bring serious consequences to the woman, and can be associated to infertility, improving risk of premature rupture of membrane, leading to chorioamnionitis, endometritis, etc. and from mother vaginal colonization there may be contamination of neonates during delivery. Objective - Objective of this study was to determine the association of Streptococcus agalactiae with vaginal inflammatory process in women attended in public laboratories of Maceió. Material and methods – It has been collected material in the distal medium third of the vagina of 1014 women from 18 to 49 years. One of the swabs has been used to bacterioscopic examination procedures and the other two swabs had been used for culture procedures of Streptococcus agalactiae (put in Todd-Hewitt broth) and other microorganisms, beyond the fresh direct examination. The identification of the microorganisms has been made according to literature. Results – The frequency of vaginal colonization by Streptococcus agalactiae found in this study has been of 13,9%, being 98 (9,7%) positive cultures only for this microorganism and 43 (4,2%) associated with other microorganisms. Among women with positive culture only to streptococcus, 18,9% presented inflammatory reaction, while only 6,7% didn’t have inflammation. The proportion of inflammatory reactions observed in women colonized by the streptococcus has been comparable to that of other pathogens commonly found in vagina as: Candida spp., G. vaginalis and Trichomonas spp.. In relation to the degree of association of those microorganisms with vaginal inflammatory processes, it has been verified a Relative Risk of 2,80 for Streptococcus agalactiae, 2,01 for Candida spp., 0,55 for Gardnerella vaginalis and 19,03 for Trichomonas spp. Those data have been confirmed by the multivariant analysis using Forward Stepwise method (Wald). It has been verified that pregnancy does not constitute a risk factor, nor age, number of partners, frequency of intercourse, abortions and previous pregnancies. Conclusion – B group streptococcus, when it is present in vagina showed to be an inflammatory process promoting agent, as for example other microorganisms, like Candida spp and Trichomonas spp, that are always valued when they are found in that site. This fact shows that this bacteria that is still considered as part of vaginal biota, should be considered so much pathogenic as other microorganisms, thus existing the necessity of differenciating between a state of simple colonization or otherwise if the bacteria is being an infectious process agent. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Introduction: Colonization of the anogenital tract of pregnant women by Group B Streptococcus (GBS) is the main risk factor for early-onset neonatal sepsis. Identification of maternal colonization allows antimicrobial prophylaxis and prevention of vertical transmission. Objectives: To identify the genetic diversity and phenotypic characteristics of GBS using molecular biology techniques and culture in specific medium, and the epidemiological aspects of pregnant women colonized by this bacterium. Methods: It was performed a cross-sectional study, anogenital samples of 316 pregnant women were collected between 35 and 37 weeks and submited to culture in specific medium, antimicrobial susceptibility test, multiplex PCR, multi locus sequence typing (MLST) and multi locus variable number of tandem repeat analysis (MLVA). The epidemiological aspects of colonized and non-colonized pregnant women were also investigated. Results: It was obtained a prevalence of 36.4% by culture and 38.6% by PCR. Multiplex PCR had sensitivity of 100%, specificity of 96.5%, positive predictive value of 94.3% and negative predictive value of 100%. The most common serotypes were Ia, V, II and III. Resistance genes were identified in 34 samples. Sensitivity to penicillin was universal, 24.3% presented resistance to erythromycin and 14.8% to clindamycin. Evaluating the epidemiological variables, there were no differences between the colonized and non-colonized pregnant women. Diversity index and number of genotypes found by MLST was 0.608 and 6, and by MLVA was 0.840 and 15, respectively. Conclusion: We found a high prevalence of maternal GBS colonization, with serotype distribution similar to the Americas region. Multiplex PCR was more accurate than culture, and maternal epidemiological variables showed no difference when evaluating presence or absence of bacterial colonization, its serotypes and antimicrobial resistance. MLVA showed a higher discrimination capacity among the unrelated strains than MLST. / Submitted by Otto Henrique May Feuerschuette (otto.feurschuette@unisul.br) on 2018-04-26T00:54:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) OTTO TESE CORRIGIDA PÓS BANCA (1).pdf FINAL.pdf: 3081595 bytes, checksum: afad5beba2687558aafe2f1705d36e01 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvane Cauz (silvane.cauz@unisul.br) on 2018-04-26T12:14:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) OTTO TESE CORRIGIDA PÓS BANCA (1).pdf FINAL.pdf: 3081595 bytes, checksum: afad5beba2687558aafe2f1705d36e01 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-26T12:14:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) OTTO TESE CORRIGIDA PÓS BANCA (1).pdf FINAL.pdf: 3081595 bytes, checksum: afad5beba2687558aafe2f1705d36e01 (MD5) Previous issue date: 2018 / Introdução: A colonização do trato anogenital de gestantes pelo Estreptococo do grupo B (EGB) é o fator de risco primário para a sepse neonatal precoce. A identificação da colonização materna permite a profilaxia antimicrobiana e prevenção da transmissão vertical. Objetivos: Identificar a diversidade genética e as características fenotípicas do EGB utilizando-se técnicas de biologia molecular e cultura em meio específico, e avaliar os aspectos epidemiológicos de gestantes colonizadas por essa bactéria Métodos: Foi realizado um estudo transversal com 316 amostras anogenitais de gestantes entre 35 e 37 semanas para realização de cultura em meio específico, teste de sensibilidade aos antimicrobianos, PCR multiplex, multi locus sequence typing (MLST) e multi locus variable number of tandem repeat analysis (MLVA). Pesquisou-se também os aspectos epidemiológicos dessas gestantes. Resultados: Foi encontrada prevalência de 36,4% pela cultura e 38,6% pela PCR. A PCR multiplex apresentou sensibilidade de 100%, especificidade de 96,5%, valor preditivo positivo de 94,3% e valor preditivo negativo de 100%. Os sorotipos mais encontrados foram Ia, V, II e III. Os genes de resistência foram identificados em 34 amostras. A sensibilidade à penicilina foi universal, 24,3% apresentaram resistência à eritromicina e 14,8% à clindamicina. Avaliando-se as variáveis epidemiológicas, não se identificaram diferenças entre as gestantes colonizadas e não colonizadas. O índice de diversidade e o número de genogrupos encontrados pelo MLST foi 0,608 e 6, e pela MLVA foi 0,840 e 15, respectivamente Conclusão: Constatou-se uma alta prevalência de colonização materna, com distribuição dos sorotipos semelhante à região das Américas. A PCR multiplex foi mais acurada que a cultura, e as variáveis epidemiológicas maternas não apresentaram diferença significativa ao avaliar-se a presença ou não de colonização bacteriana, seus sorotipos e a resistência aos antimicrobianos. A MLVA apresentou uma capacidade de discriminação entre as cepas não relacionadas maior do que a MLST