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Neurocisticercose humana: pesquisa de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano / Neurocysticercosis human antigens research in cerebrospinal fluid samplesAlessandra Xavier Pardini 23 June 2004 (has links)
A detecção de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose (NC) foi realizada empregando-se o teste ELISA com soros policlonais de coelhos imunizados com os antígenos total de Taenia solium (T-Tso), líquido vesicular de Taenia crassiceps (LV-Tcra) e peptídeos <30kDa de LV-Tcra. Os soros policlonais foram fracionados para a obtenção da fração IgG - IgG anti-Tso, IgG antiTcra e IgG anti-Tcra<30kDa. Também foi empregado o anticorpo monoclonal específico para o antígeno de excreção e secreção de Taenia crassiceps (ES-Tcra). A seleção dos clones foi realizada por ELISA empregando-se os antígenos T-Tso e LV-Tcra. Foram analisados diferentes grupos de amostras divididos em: grupo de pacientes com NC (grupo NC), incluindo pacientes em diferentes fases evolutivas da doença, grupo de pacientes \"suspeito\" de NC (grupo \"suspeito\" NC), grupo controle (grupo C) e grupo de outros patologias (grupo OP). No teste ELISA empregando-se as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e IgG anti-Tcra<30kDa, a sensibilidade obtida foi de 70%, 82,5% e 95,8% e a especificidade de 82,5%, 98% e 100%, respectivamente nas amostras do grupo NC e grupo C. Nas amostras do grupo diferentes fases evolutivas da doença, não houve diferença significativa de reatividade entre as amostras com as frações empregadas. Para as 21 amostras do grupo NC - fase ativa da doença, com a fração IgG anti-Tcra e o anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra, respectivamente, 13 e 16 amostras foram positivas para a pesquisa de antígenos. As amostras de LCR do grupo C não apresentaram reatividade com os anticorpos empregados nos ensaios. Também foram ensaiadas 68 amostras de LCR de pacientes com \"suspeita\" de NC. De acordo com as características citoprotéicas além da reatividade para a pesquisa de anticorpos anti-T solium, as amostras de LCR apresentaram, neste grupo, padrão de reatividade para a pesquisa de antígenos que variou também de acordo com a presença de anticorpos, além das alterações de proteína e/ou células, que as amostras apresentavam ou não. Frações de 14 e 18kDa foram identificadas pelo teste imunoblot somente nas amostras de LCR de pacientes com NC utilizando as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra. O anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra mostrou-se eficiente para a pesquisa de antígenos no teste de competição por ELISA nas amostras de LCR de pacientes com NC e o antígeno ES-Tcra. / Antigen detection in cerebrospinal fluid (CSF) samples of patients with neurocysticercosis (NC) was performed through ELISA test using rabbits polyclonal sera immune with total antigens of Taenia solium (T-Tso) cysticercus, vesicular liquid of Taenia crassiceps (VL-Tcra) and vesicular liquid peptides (VLP-Tcra<30kDa) cysticercus. The polyclonal sera were separated obtaining IgG-lgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra<30kDa fractions. A specific monoclonal antibody was also applied for reaching the excretion and secretion antigen of the T. crassiceps (ES-Tcra) larvae culture. Clones selection was performed through Elisa test applying the T-Tso and VL-Tcra antigens. When IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra<30kDa fractions were applied in the ELISA test, the accuracy obtained was 70%, 82,5% and 95,8% and the specificity of 82,5%, 98% and 100%, respectively, in samples of both NC and C groups. In the samples of the group in different stages of the disease there was no significant difference on reactivity between the samples when the fractions were applied. For the 21 samples of the NC group - active stage of the disease with IgG anti-Tcra fraction and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody respectively, 13 and 16 samples were positive for antigen analyses. The CSF samples of the C group did not present reactivity with the antibodies applied in the tests. Tests for 68 CSF samples of \"suspected\" NC group, were also conducted. According to the cytoproteic characteristics besides the reactivity for the anti-T. solium antibody study, the CSF samples of this group showed standard reactivity for antigen detection ranging also in accordance with the presence of antibodies and of the protein and/or cell alterations that the samples would or not present. Fractions of 14 and 18kDa were identified by immunoblot test only in the CSF samples of patients with NC using the IgG anti-Tso IgG anti-Tcra fractions and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody. The anti-ES-Tcra monoclonal antibody has shown to be efficient for analyzing antigens by a comparing method of the ELISA test in CSF samples of patients with NC and the ES-Tcra antigen.
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Expressão do Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) de Plasmodium vivax na superfície de células COS-7 transfectadas para uso em estudos funcionais / Expression of Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1) Plasmodium vivax on the surface of transfected COS-7 cells for use in functional studiesBarbedo, Mayara de Brito 29 February 2008 (has links)
O Antígeno-1 de Membrana Apical (AMA-1) de merozoítas de Plasmodium é um dos principais candidatos a compor uma vacina contra a malária. A função biológica de AMA-1 não é totalmente conhecida, entretanto, existem evidências que sugerem a participação dessa proteína na ligação a eritrócitos de diferentes espécies de Plasmodium. O objetivo deste estudo foi investigar a participação de AMA-1 de P. vivax (PvAMA-1) na ligação a eritrócitos humanos utilizando células COS-7 transfectadas com plasmídios recombinantes codificando diferentes regiões do ectodomínio de PvAMA-1. Para isso, os genes que codificam os domínios I-II ou III de PvAMA-1 foram inseridos no vetor pDisplay-EGFP, que permite a expressão das proteínas recombinantes em fusão com a porção N-terminal da Proteína Fluorescente Verde (GFP). Em paralelo, utilizamos construções contendo os genes que codificam a região C-terminal de 19 kDa da Proteína 1 de Superfície do Merozoíta (PvMSP119) e a região II da Duffy Binding Protein (PvDBP-RII). As quatro construções foram utilizadas para transfectar células COS-7 na presença de lipofectamina. A eficiência das transfecções transientes foi confirmada por imunofluorescência utilizando anticorpos específicos. Em seguida, estudamos a participação dos diferentes domínios de PvAMA-1 na ligação aos eritrócitos. Nossos resultados mostraram que os domínios contíguos I-II, ao contrário do domínio III, foram capazes de se ligar a eritrócitos in vitro. Essa ligação foi específica, pois soros de indivíduos infectados por P. vivax e soros policlonais de camundongos contendo anticorpos anti-PvAMA-1 foram capazes de inibir essa ligação em 82,0% e 79,8%, respectivamente. Além disso, anticorpos monoclonais dirigidos contra o domínio II dessa proteína foram capazes de inibir parcialmente essa ligação. Após o tratamento de eritrócitos com tripsina ou quimiotripsina, estas células perderam grande parte de sua capacidade de ligação, sugerindo que o receptor para PvAMA-1 tenha constituição predominantemente protéica. Em conjunto, nossos resultados podem servir de base para futuros estudos visando um melhor entendimento da função de anticorpos gerados durante a infecção natural ou induzidos após vacinação com PvAMA-1. / The Apical Membrane Antigen (AMA-1) of Plasmodium merozoites is one of the main candidates to be part of a vaccine against malaria. The biological function of AMA-1 is unknown. However, there are evidences that suggest the participation of this protein in the interaction with erythrocytes (RBC) of different Plasmodium species. Using transfected COS-7 cells with recombinant plasmids encoding different portions of the PvAMA-1 ectodomain, our aim was to identify possible domains of PvAMA-1 able to interact with human RBC. The genes that encoded domains I and II in combination or domain III of PvAMA-1 were cloned into the pDisplay-EGFP vector. This vector allows expression of the protein fused to the N-terminus of enhanced green fluorescent protein (GFP). In parallel, we also used constructions containing the genes that encoded the 19 kDa C-terminal region of Merozoite Surface Protein 1 (PvMSP119) and region II of the Duffy Binding Protein (PvDBP-RII). Constructions were used to transiently transfect COS-7 cells. The efficiency of expression of all constructs was confirmed by immunofluorescence assay using specific antibodies. After that, we studied the participation of the different domains of PvAMA-1 in the binding to human RBC. We found that COS-7 cells expressing domains I-II, but not domain III, bound to human RBC in vitro. This binding was specific, because sera from malaria-infected patients and mouse polyclonal sera containing antibodies to PvAMA-1 were able to block the adhesion by 82.0% and 79.8%, respectively. Moreover, monoclonal antibodies directed against domain II were partially inhibitory in the cytoadherence assays. The receptor recognized on the surface of COS-7 cells expressing the domains I and II was partially removed after human RBC were treated with trypsin or chymotrypsin, suggesting that its composition is predominantly protein. In conclusion, our results can be used as basis for future studies aimed at better understating the function of the antibodies generated during the natural infection or after vaccination with PVAMA-1.
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Expressão do Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) de Plasmodium vivax na superfície de células COS-7 transfectadas para uso em estudos funcionais / Expression of Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1) Plasmodium vivax on the surface of transfected COS-7 cells for use in functional studiesMayara de Brito Barbedo 29 February 2008 (has links)
O Antígeno-1 de Membrana Apical (AMA-1) de merozoítas de Plasmodium é um dos principais candidatos a compor uma vacina contra a malária. A função biológica de AMA-1 não é totalmente conhecida, entretanto, existem evidências que sugerem a participação dessa proteína na ligação a eritrócitos de diferentes espécies de Plasmodium. O objetivo deste estudo foi investigar a participação de AMA-1 de P. vivax (PvAMA-1) na ligação a eritrócitos humanos utilizando células COS-7 transfectadas com plasmídios recombinantes codificando diferentes regiões do ectodomínio de PvAMA-1. Para isso, os genes que codificam os domínios I-II ou III de PvAMA-1 foram inseridos no vetor pDisplay-EGFP, que permite a expressão das proteínas recombinantes em fusão com a porção N-terminal da Proteína Fluorescente Verde (GFP). Em paralelo, utilizamos construções contendo os genes que codificam a região C-terminal de 19 kDa da Proteína 1 de Superfície do Merozoíta (PvMSP119) e a região II da Duffy Binding Protein (PvDBP-RII). As quatro construções foram utilizadas para transfectar células COS-7 na presença de lipofectamina. A eficiência das transfecções transientes foi confirmada por imunofluorescência utilizando anticorpos específicos. Em seguida, estudamos a participação dos diferentes domínios de PvAMA-1 na ligação aos eritrócitos. Nossos resultados mostraram que os domínios contíguos I-II, ao contrário do domínio III, foram capazes de se ligar a eritrócitos in vitro. Essa ligação foi específica, pois soros de indivíduos infectados por P. vivax e soros policlonais de camundongos contendo anticorpos anti-PvAMA-1 foram capazes de inibir essa ligação em 82,0% e 79,8%, respectivamente. Além disso, anticorpos monoclonais dirigidos contra o domínio II dessa proteína foram capazes de inibir parcialmente essa ligação. Após o tratamento de eritrócitos com tripsina ou quimiotripsina, estas células perderam grande parte de sua capacidade de ligação, sugerindo que o receptor para PvAMA-1 tenha constituição predominantemente protéica. Em conjunto, nossos resultados podem servir de base para futuros estudos visando um melhor entendimento da função de anticorpos gerados durante a infecção natural ou induzidos após vacinação com PvAMA-1. / The Apical Membrane Antigen (AMA-1) of Plasmodium merozoites is one of the main candidates to be part of a vaccine against malaria. The biological function of AMA-1 is unknown. However, there are evidences that suggest the participation of this protein in the interaction with erythrocytes (RBC) of different Plasmodium species. Using transfected COS-7 cells with recombinant plasmids encoding different portions of the PvAMA-1 ectodomain, our aim was to identify possible domains of PvAMA-1 able to interact with human RBC. The genes that encoded domains I and II in combination or domain III of PvAMA-1 were cloned into the pDisplay-EGFP vector. This vector allows expression of the protein fused to the N-terminus of enhanced green fluorescent protein (GFP). In parallel, we also used constructions containing the genes that encoded the 19 kDa C-terminal region of Merozoite Surface Protein 1 (PvMSP119) and region II of the Duffy Binding Protein (PvDBP-RII). Constructions were used to transiently transfect COS-7 cells. The efficiency of expression of all constructs was confirmed by immunofluorescence assay using specific antibodies. After that, we studied the participation of the different domains of PvAMA-1 in the binding to human RBC. We found that COS-7 cells expressing domains I-II, but not domain III, bound to human RBC in vitro. This binding was specific, because sera from malaria-infected patients and mouse polyclonal sera containing antibodies to PvAMA-1 were able to block the adhesion by 82.0% and 79.8%, respectively. Moreover, monoclonal antibodies directed against domain II were partially inhibitory in the cytoadherence assays. The receptor recognized on the surface of COS-7 cells expressing the domains I and II was partially removed after human RBC were treated with trypsin or chymotrypsin, suggesting that its composition is predominantly protein. In conclusion, our results can be used as basis for future studies aimed at better understating the function of the antibodies generated during the natural infection or after vaccination with PVAMA-1.
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Comparação clínica entre a utilização de enxerto de tecido conjuntivo e matriz colágena suína (Mucoderm) para tratamento de retrações tipo 1: estudo clínico controlado e aleatorizado / Clinical comparison between the use of a connective tissue graft and a porcine collagen matrix (Mucoderm) for treatment of type 1 recessions: a randomized controlled clinical studySuzuki, Kleber Tanaka 18 October 2018 (has links)
Retalho posicionado coronalmente associado ao enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETCS) é o padrão ouro para o tratamento de retrações gengivais. A matriz de colágena suína bioabsorvível Mucoderm® (MD) tem sido amplamente utilizada como substituto do ETCS e tem alcançado resultados semelhantes. o MD tem a vantagem de disponibilidade que supera as limitações do sítio doador em enxertos autógenos. O objetivo deste estudo é investigar o uso do MD nos procedimentos de recobrimento radicular combinado com retalho extendido posicionado coronalmente (REPC), grupo teste (GT), em comparação ao ETCS associado ao REPC, grupo controle (GC). Dezoito pacientes adultos, apresentando recessão tipo 1 bilateral foram selecionados. Parâmetros clínicos, profundidade de sondagem, nível clínico de inserção, altura (RG) e largura (LRG) da retração, altura (GQ) e espessura (EGQ) da gengiva queratinizada e área da retração (ARG) foram registrados no início, 3 e 6 meses após os procedimentos cirúrgicos por um examinador cego. Aos 6 meses, um periodontista realizou uma Escala Estética de Recobrimento Radicular (ERR) (Cairo et al. 2009) analisando a posição da margem gengival (MG), contorno do tecido marginal (CTM), textura do tecido mole (TTM), alinhamento da junção mucogengival (AJG) e coloração da gengiva (CG). Aos 3 e 6 meses, um questionário estético funcional para o paciente foi utilizado para avaliar a satisfação com a taxa de recobrimento (STR), coloração da gengiva (CG) e sensibilidade dentinária (SEN), esta última aplicada também no baseline, e se necessário, voltaria a realizar a cirurgia (CIR) em outras áreas. O paciente respondeu ao questionário em uma escala VAS. O GT e o GC apresentaram redução significativa na média da RG (3,33 ± 0,89mm a 1,31 ± 1,03mm (p <0,05) e 3,21 ± 0,80mm a 0,83 ± 0,86mm ( p <0,05)), LRG (4,03 ± 0,57mm a 2,73 ± 1,62mm 12 e 4,10 ± 0,63mm a 2,07 ± 1,79mm (p <0,05)) e ARG (222638 ± 99731pix² para 72727 ± 82631pix² e 196461 ± 84815pix² para 48414 ± 63398pix² (p <0,05)) respectivamente e ganho de GQ (1,87 ± 1,17mm para 2,85 ± 1,43mm (p <0,05) e 1,91 ± 0 , 95mm a 2,83 ± 1,41mm (p <0,05)) e EGQ (0,76 ± 0,21mm a 1,10 ± 0,31mm (p <0,05) e 0,86 ± 0,39mm a 1, 36 ± 0,40mm (p <0,05)) respectivamente em um período de 6 meses. A quantidade média de cobertura radicular não foi diferente entre GT (61,33%) e GC (73,90%) (p> 0,05). Não houve diferença entre o GC e o GT nos parâmetros analisados no ERR aos 6 meses e para o questionário estético funcional ao paciente houve redução significativa no parâmetro SEN no GT (54,55 ± 32,60% para 19,11 ± 25,73% (p <0,05)) e GC (55,61 ± 30,88% a 11,17 ± 17,51% (p <0,05)). Ambos os grupos mostraram uma redução significativa na RG. Considerando-se que não foram observadas diferenças significativas entre o GC e o GT para RG, LRG, ARG e GQ e EGQ foram significativamente diferentes favorecendo GT, pode-se especular que o MD possa ser usado como alternativa ao CTG para o tratamento de recessões gengivais / Coronally advanced flap plus connective tissue graft (CTG) is the gold standard therapy for root coverage. The bioabsorbable porcine collagen matrix Mucoderm® (MD) has been widely used in periodontal and mucogingival surgery as a substitute for CTG and has achieved similar results. The MD has the advantage of availability overcoming the limitations of donor site in autograft. The aim of this study is to investigate the use of MD in root coverage procedures combined with extended coronally positioned flap (ECAF), test group (TG) in comparison to the CTG associated with the ECAF, control group (CG). Eighteen adult patients, non-smokers, presenting bilateral Cairo´s Recession Type 1 (RT1) were selected. Clinical parameters, probing depth, clinical attachment level, recession height (RH) and width (RW), keratinized tissue height (KTH) and thickness (KTT) and gingival recession área (GRA) were recorded at baseline,3 and 6 months after the surgical procedures by a blinded examiner. At 6 months a specialist in periodontics performed a Root Coverage Esthetic Score (RES) (Cairo et al. 2009) analyzing position of the gingival margin (GM), marginal tissue contour (MTC), soft tissue texture (STT), mucogingival junction alignment (MJA) and gingival color (GI). At 3 and 6 months a functional aesthetic questionnaire to the patient was used to evaluate the satisfaction with recovering rate (SRR), gingival color (GI) and dentin sensitivity (SEN) (the latter applied initially in the baseline) and, if necessary, would return to perform the surgery (SUR) in other areas. The patient answered the questionnaire on a VAS scale.The TG and CG showed a significant reduction in average for RH (3.33 ± 0.89mm to 1.31±1.03mm (p<0.05) and 3.21±0.80mm to 0.83±0.86mm (p<0.05)), RW (4.03±0.57mm to 2.73±1.62mm and4.10±0.63mm to 2.07±1.79mm (p<0.05)) and GRA (222638±99731pix² to 72727±82631pix² and 196461±84815pix² to 48414±63398pix² (p<0.05)) respectively and gain of KTH (1.87±1.17mm to 2.85±1.43mm (p<0.05) and 1.91±0.95mm to 2.83±1.41mm (p<0.05)) and KTT 14 (0.76±0.21mm to 1.10±0.31mm (p<0.05) and 0.86±0.39mm to 1.36±0.40mm (p<0.05)) respectively in a period of 6 month. The average amount of root coverage was not different between TG (61.33%) and CG (73.90%) (p>0.05). There was no differences between CG and TG on the parameters analyzed in the RES on 6 months and for the functional aesthetic questionnaire to the patient significant reduction was found on SEN parameter on TG (54.55±32,60% to 19.11±25.73% (p<0.05)) and CG (55.61±30.88% to 11.17±17.51% (p< 0.05)).In these 6 months follow up study, both groups showed a significant reduction in recession height. Considering no significant differences were observed between CG and TG for RH, RW, GRA and KTH and KTT were significant different favoring TG, it can be speculated that MD can be used as an alternative to CTG for the treatment of gingival recessions
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Estudo da S-nitrosação de Ras e participação das MAP quinases (ERK, JNK e p38) na apoptose de células THP-1 induzida por óxido nítrico / Study s-nitrosation of Ras and participation of MAP kinases (ERK, JNK and p38) in THP-1 cell apoptosis induced by nitric oxideTsujita, Maristela 15 October 2004 (has links)
Ras é uma proteína G monomérica que converte estímulos extracelulares em sinais bioquímicos intracelulares e controla uma variedade de processos biológicos, tais como, proliferação, diferenciação, adesão e morte celular por apoptose. Além da ativação mediada por fatores de crescimento e hormônios, Ras pode ser ativado pela interação com o óxido nítrico (NO·), um radical capaz de mediar processos de sinalização. Essa interação resulta na S-nitrosação do resíduo de cisteína 118 de Ras. Assim, propusemo-nos avaliar a participação da proteína Ras e das MAP quinases: ERK1/2, JNK e p38 no processo de apoptose de células THP-1 induzida pelo doador de NO·, S-nitrosoglutationa (SNOG). Para tanto, transfectamos células THP-1 com o plasmídeo que carrega o gene que codifica para a proteína Ras mutada, na qual o resíduo de cisteína 118 foi trocado por um resíduo de serina, o que tornou Ras não responsiva ao NO·. A apoptose foi evidenciada através da formação de corpos apoptóticos, exposição de fosfatidilserina e ativação de caspase-3. A modulação da apoptose via reação de S-nitrosação foi demonstrada através da diminuição estatisticamente significativa da exposição de fosfatidilserina nas células transfectadas com o plasmídeo p21 RasC118S quando comparadas com as células selvagens e parentais. A ativação da proteína Ras ocorreu após 5, 15 e 30 minutos da adição de SNOG nas células parentais; entretanto, nas células transfectadas com o plasmídeo p21 RasC118S não observamos resposta de ativação de Ras. A avaliação das MAP quinases revelou ativação de máxima de ERK após 4 horas e ativação máxima de JNK e p38 após 2 horas de incubação com SNOG. Em relação as MAP quinases nas células transfectadas, as células p21 RasC118S apresentaram diminuição apenas da ativação ERK, quando comparadas com as células p21RasWt. A utilização dos inibidores específicos de MEK, JNK e p38; PD09895, CEP11004 e SB22004, respectivamente demonstrou que apenas a inibição de ERK diminuiu significativamente a apoptose nas células THP-1. Concluímos que na apoptose de células THP-1 estimulada por NO·, o radical livre ativa Ras via S-nitrosação, que por sua vez, recruta ERK, MAP quinase participante desta cascata de sinalização. Finalmente, demonstramos que ERK exerce papel fundamental na condução do sinal de apoptose no modelo que estudamos. / Ras is a monomeric small G protein that converts intracellular stimulus into intracellular biochemical signals. Ras controls a myriad of biological processes such as, proliferation, differentiation, adhesion and cell death by apoptosis. In addition to growth factor-mediated activation of Ras, nitric oxide (NO·) directly interacts with and activates Ras via S-nitrosation on a single cysteine residue (Cys118). Therefore, we investigated the participation of Ras and of the MAP kinases (ERK, JNK and p38) in the apoptosis of THP-1 cells induced by the NO· donor S-nitrosoglutathione (SNOG). For that, we transfected THP-1 cells with a plasmid that contains the gene that codifies for the mutated Ras protein, in which the cysteine residue 118 was replaced by a serine. Apoptosis was evidenced by apoptotic bodies formation, phosphatidylserine exposition and caspase-3 activation. Parental and wild type Ras transfected-THP-1 cells (Wt) exposed phosphatidylserine upon treatment with 1.0 mM SNOG. The importance of the S-nitrosation reaction in the process was evidenced by a decrease on phosphatidylserine exposition in the cells transfected with the plasmid p21RasC118S, as compared to parental and wild type cells. Ras activation occurred within the first 30 minutes after SNOG addition to parental cells. However in p21RasC118S transfected cells, we were unable to detect activation of Ras. Regarding the MAP kinases located downstream on the Ras-mediated signaling cascade, ERK activity was maximum after 4 hours incubation with the NO· donor. JNK and p38 MAP kinase followed different kinetics, displaying maximum activity after 2 hours incubation with SNOG. The use of specific inhibitors to MEK, JNK and p38; PD09895, CEP11004 and S822004 respectively has shown that only ERK inhibition has significantly decreased THP-1 cells apoptosis. We concluded that NO· induced apoptosis in THP-1 cells activating Ras by S-nitrosation and recruiting the MAP kinase ERK, a downstream element of this signaling cascade. Furthermore, our findings support a major role for ERK in the NO· mediated apoptosis of THP-1 cells.
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Efeitos da suplementação de creatina sobre o desempenho esportivo e a composição corporal de nadadores competitivos / Effects of creatine supplementation on sports performance and body composition of competitive swimmersMendes, Renata Rebello 22 March 2002 (has links)
O uso da suplementação de creatina, um nutriente encontrado em alimentos de origem animal, com finalidade de se aumentar o desempenho esportivo tem sido frequentemente discutido na literatura científica. O consumo desse composto é justificado pela evidência de que sua depleção resultaria na incapacidade de se ressintetizar ATP nas quantidades necessárias, o que limitaria o desempenho muscular durante atividades de curta duração e alta intensidade. Estudos envolvendo nadadores e suplementação de creatina têm demonstrado resultados controversos, sugerindo a necessidade de se realizarem mais discussões a esse respeito. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da creatina sobre a performance e a composição corporal de nadadores competitivos após um período agudo de suplementação. Para tanto, dezoito nadadores foram avaliados quanto à composição corporal, concentração sérica de creatinina, excreção urinária de creatina e creatinina, e ao acúmulo de lactato após performance de provas de 50 e 100 metros, e séries repetitivas de 3x3x50 metros nos períodos pré e pós suplementação com creatina ou placebo. A composição corporal foi determinada através de métodos como dobras cutâneas, bioimpedância e densitometria óssea. O treinamento foi padronizado durante todo o experimento. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas nas marcas obtidas em todas as provas, nas concentrações sanguíneas de creatinina e no lactato sanguíneo após a prova de 50 m entre os períodos pré e pós-suplementação, em ambos os grupos. A creatinina e a creatina urinárias aumentaram significativamente após a suplementação no grupo creatina. No período pós suplementação, o acúmulo de ácido lático frente a prova de 100 metros e o exercício repetitivo foi significativamente menor no grupo creatina em comparação ao grupo placebo. Neste mesmo grupo o aumento da massa corpórea, da massa magra e da água corporal foi significativo, porém, não houve diferença significativa na massa muscular e óssea. No grupo placebo, a composição corporal não sofreu alteração significativa após a suplementação. Embora o aumento da água corporal e da creatinina urinária sugiram que a suplementação de creatina tenha promovido um aumento no estoque e utilização desse composto no músculo, acredita-se que o ganho de peso observado neste grupo tenha inibido um possível efeito ergogênico da creatina sobre a performance. O ganho de peso alteraria a flutuação e a hidrodinâmica de tais indivíduos, resultando em maior gasto de energia durante a prática da natação. Em conclusão, os resultados deste estudo sugerem que, em nossas condições experimentais, a suplementação de creatina não pode ser considerada um suplemento ergogênico destinado ao aumento de desempenho e ao ganho de massa muscular em nadadores. / This study examined the effect of creatine on exercise performance and body composition of competitive swimmers following an acute supplementation period. Eighteen swimmers were tested for blood lactate after the performance of 50m, 100m and repetitive set of 3x3x50m. Body composition was determined by skinfold, BIA and DEXA. Blood and urine samples were collected to determine creatine and creatinine levels. After the first trial, subjects were evenly and randomly assigned to either a creatine or a placebo group in a double-blind research design. All subjects were provided a standardized training regimen during the study period. No significant differences in performance times, blood lactate after 50m test and serum creatinine were observed between trials in both groups. Blood lactate for 100m e repetitive set were significantly higher in placebo group than creatine group in post supplementation period. Urinary creatinine increased significantly (p<0,05) in creatine group (from 1,36 to 2,72 g/day), suggesting greater creatine utilization in muscle. In creatine group, gains in weight, fat free mass and body water were significant (1,34Kg; 1,50Kg; 1,38L; respectively), but not in muscle mass (0,06Kg). In placebo group, body composition was not significantly altered after the supplementation period. Although the increase of body water and urinary creatinine suggest that the supplementation promotes increases in store and utilization of creatine in muscle, it appears that there is a factor, due to supplementation, able to hamper swimmers performance: gain of weight. Increase in body weight could result in a concomitant increase in drag forces and altered stroke mechanics, and, therefore, in a higher energy expenditure during swimming. In conclusion, the results of this study suggest that creatine supplementation can not be considered an ergogenic aid for performance and gain of muscle mass in well trained swimmers.
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Reatividade específica e cruzada de antígenos de Echinococcus granulosus e Taenia crassiceps utilizando amostras de pacientes com hidatidose e neurocisticercose / Specific and cross reactivity of Echinococcus Granulosus and Taenia Crassiceps antigens using samples from patients with hydatidosis and neurocysticercosisSilva, Fabiana Érica Vilanova da 12 December 2007 (has links)
Os estudos de reatividade dos antígenos de líquido hidático de Echinococcus granulosus (Ag LH-Eg) e de líquido vesicular de Taenia crassiceps (Ag LV-Tcra) foram feitos com anticorpos monoclonais (AcMos) anti-E. granulosus e anti-T. crassiceps e amostras humanas por eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e immunoblot. O SDS-PAGE mostrou um padrão complexo de proteínas entre 97- e 8-kDa do LH-Eg e 97- e 14-kDa do LV-Tcra. A caracterização dos antígenos com os AcMos por ELISA mostrou que todos os AcMoss anti-E . granulosus reagiram com o antígeno LH-Eg e um deles cruzada mente com o antígeno LV-Tcra. Um dos dois AcMo anti-T . crassiceps reagiu também com o LH-¬Eg. A reatividade do LH-Eg com amostras humanas apresentaram melhores resultados com o cut off média mais dois devios-padrão (M+2DP) e na diluição 1:250. As amostras de hidatidose (Hi) mostraram reatividade máxima (100%) nessa diluição. As amostras neurocisticercose (NC) ensaiadas por ELlSA-LH-Eg, apresentaram reatividade cruzada de 66,5%, teníase (T) 46%, controle negativo (CN) 4% e outras parasitoses (OP) 84,5%. O ELlSA-LV-Tcra mostrou 100% de reatividade com as amostras NC na diluição 1 :50 pelo cut off TgRoc. Com as amostras hidatidose, teníase, outras parasitoses e controle negativo a reatividade foi de 73,5; 61,5; 69 e 2%, respectivamente. Todos os AcMos anti-LH-Eg reconheceram as frações 79-,67- e 8-kDa do Ag LH-Eg e as de 24- e 16-kDa pelo AcMo anti¬-antígeno rAgB. No immunoblot, as amostras humanas reconheceram as frações 79-, 67-, 57-, 43-, 38-kDa e também as específicas (24-, 16-e 8-kDa) para o diagnóstico da hidatidose. As frações responsáveis pela reatividade cruzada foram 79-, 67-e 57¬kDa. Nossos estudos mostraram que é necessária uma melhor abordagem incluindo em estudos futuros a obtenção de antígenos recombinantes, específicos de cada um dos parasitos. / Studies to evaluate the reactivity of the hydatic liquid antigens of Echinococcus granulosus (Ag LH-Eg) and of the vesicular liquid antigens of Taenia crassiceps (Ag LV-Tcra) were conducted using anti-E. granulosus and anti-T . crassiceps monoclonal antibodies (MoAbs), and human sample, through SDS-PAGE, ELISA and immunoblot tests. The SDS-PAGE showed a complex standard of proteins from 97¬to 8-kDa of the LH-Eg and from 97-to 14-kDa of the LV-Tcra. The characterization of antigens with the MoAbs through ELISA showed that ali the anti-E . granulosus MoAbs reacted with the LH-Eg antigen and one of them cross-reacted with the LV¬-Tcra antigen. One of the two anti-T. crassiceps MoAb also reacted with the LH-Eg antigen. The reactivity of the LH-Eg with human samples presented better results with the cut off value representing the mean value plus two standard deviations (M+2DP) and with a dilution of 1:250. The hydatidosis samples (Hi) showed maximum reactivity (100%) with this dilution. When evaluated by the ELlSA-LH-Eg, the neurocysticercosis samples (NC) showed cross-reactivity of 66,5%, the taeniasis (T) showed 46%, the negative control (CN) of 4% and 84,5% for other parasitoses (OP). The NC samples, diluted at 1:50, showed 100% of reactivity in ELlSA-LV-Tcra test with the TgRoc cut off value. Concerning the samples of hydatidosis, taeniasis, other parasitoses and the negative control, reactivity was 73,5; 61,5; 69 and 2%, respectively. Ali the anti-LH-Eg MoAbs recognized the fractions 79- and 67-kDa of the Ag LH-Eg and the 24-and 16-kDa through the rAgB anti-antigen MoAb. By immunoblot, the human samples recognized the fractions 79-, 67-, 57-, 43-, 38-kDa and also the specific ones (24-, 16-and 8-kDa) for diagnosing hydatidosis. The fractions, responsible for the cross-reactivity, were 79-, 67-and 57-kDa. Our study showed that further approaches are needed and should include the obtaining of recombinant antigens, specific for each parasite.
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Guarda de material biológico em biorrepositórios : implantação de protocolo no Hospital Universitário da Universidade Federal do Maranhão / HU-UFMAGüttler, Maria Cláudia Santos January 2018 (has links)
A prática de colecionar material biológico humano na forma de Biorrepositórios (coleção de material biológico humano, coletado e armazenado ao longo da execução de um projeto de pesquisa específico) se tornou essencial para o avanço da pesquisa clínica. Contudo, normativas nacionais e internacionais recomendam a utilização de uma padronização mínima nas diversas práticas que abrangem a manipulação, gerenciamento e armazenamento de tais amostras e suas informações associadas de modo a garantir a qualidade dos resultados das pesquisas, ao mesmo tempo assegurar os padrões éticos e legais, respeitando o princípio da dignidade humana. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo caracterizar os setores de pesquisa do HU-UFMA (Hospital Universitário da Universidade Federal do Maranhão/HU-UFMA) que armazenam Biorrepositórios, quanto aos recursos humanos, estrutura física e padrões técnicos existentes, bem como desenvolver os Procedimentos Operacionais Padrão (POP’s) para manipulação e guarda das amostras biológicas pertencentes á estes Biorrepositóriose e outros que poderão vir a ser cirados. Para cumprir tais objetivos foram feitas visitas aos setores do hospital aonde são desenvolvidas as pesquisas; e aplicação de questionário com os Pesquisadores Responsáveis pelos grupos de pesquisa e com os Gestores dos setores de pesquisa na instituição. Os resultados dos questionários apontaram que alguns setores de pesquisas não contêm, e outros, estão em fase de desenvolvimento de seus POP’s para coleta, manipulação, gerenciamentos e guarda de Biorrepositórios, e que alguns grupos de pesquisas possuem, de forma isolada, POP’s para alguma das etapas de manipulação das amostras biológicas de seus Biorrepositórios. Foram identificados, ainda, os materiais biológicos que compõem os Biorrepositórios dos estudos realizados na instituição. A partir daí, realizou-se consultas a alguns dos POP’s existentes nos grupos de pesquisas e POP’s assistenciais de um dos setores estudado, para um melhor embasamento sobre os métodos utilizados nas pesquisas da instituição, além das diretrizes nacionais e internacionais sobre o tema abordado. O resultado foi a elaboração de POP’s para coleta, processamento e armazenamento das coleções de Biorrepositórios armazenados nos setores de pesquisas; elaboração de um manual de coleta, processamento, armazenamento e descarte das amostras visando à criação de Biorrepositórios; criação de formulários para registro das variáveis pré-analíticas existentes nas etapas de manipulação e guarda das amostras; e criação de modelos de formulários para cadastro do participante da pesquisa e de amostras armazenadas, no hospital. / The practice of collecting human biological material in the form of bio-repositories (collection of human biological material, collected and stored throughout the execution of a specific research project) has become essential for the advancement of clinical research. However, national and international regulations recommend the use of a minimum standardization in the various practices that cover the handling, management and storage of such samples and their associated information in order to guarantee the quality of the results of the research, at the same time assuring the ethical and respecting the principle of human dignity. In this context, the objective of the present study was to characterize the research sectors of the HU-UFMA (University Hospital of the Federal University of Maranhão / HU-UFMA) that store Biorrepositories in terms of human resources, physical structure and existing technical standards, as well as to develop the Standard Operating Procedures (SOPs) for manipulation and storage of the biological samples belonging to these bio-repositories and others which may be drawn. In order to fulfill these objectives visits were made to the sectors of the hospital where the research is carried out; and questionnaire application with the Researchers Responsible for the research groups and with the managers of the research sectors in the institution. The results of the questionnaires pointed out that some research sectors do not contain, and others, are in the development phase of their POPs to collect manipulation, management and custody of bio-repositories, and that some research groups have, in isolation, POP's for some steps of manipulating the biological samples of their bio-repositories. It was also identified the biological materials that make up the bio-repositories of the studies carried out at the institution. From then on, consultations were carried out with some of the existing POPs in the research groups and welfare POPs of one of the studied sectors, for a better basis on the methods used in the research of the institution, besides the national and international guidelines on the subject addressed. The result was the elaboration of POP's for the collection, processing and storage of the collections of bio-repositories stored in the research sectors; preparation of a manual for the collection, processing, storage and disposal of samples for the creation of bio-repositories; creation of forms for recording the pre-analytical variables in the sample handling and storage stages; and creation of template forms for registration of the research participant and of stored samples in the hospital.
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Desenvolvimento do plano estratégico para o centro de pesquisa clínica do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de PernambucoLins, Rossana Sant'Anna de Melo January 2018 (has links)
Introdução: O Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco (HCPE) faz parte da rede de hospitais universitários que são gerenciados pela Empresa Brasileira de Serviços Hospitalares (EBSERH). Em 2014, a EBSERH lançou o Programa de Pesquisas Clínicas Estratégicas para o Sistema Único de Saúde visando a implementação de um modelo de gestão de pesquisas clínicas na rede e, em 2016, o HCUFPE obteve financiamento para implantar um Centro de Pesquisa Clínica na instituição. Objetivo: Desenvolver o planejamento estratégico para a implantação do Centro de Pesquisa Clínica do HCUFPE através do método do Balanced Scorecard. Método: Estudo observacional e descritivo com mapeamento de dados sobre as pesquisas da instituição. Foi desenvolvido o instrumento de coleta de dados no REDCap© com questões fechadas relativas ao perfil do grupo de pesquisa e questões abertas, para composição da matriz SWOT. A aplicação do instrumento foi realizada através de entrevistas com os líderes de grupos de pesquisa. Foi realizada a análise de conteúdo de Bardin através do software Nvivo© e a partir desta, foi elaborado o planejamento estratégico através do método do Balanced Scorecard (BSC). Resultados: Foram identificados90 grupos de pesquisa, a partir da consulta aos registros no setor de pesquisa do hospital. No período de 2015 a 2017, foram registrados 381 projetos de pesquisa, dos quais 91% vinculados às atividades de ensino do hospital e da universidade. Foram entrevistados 29 líderes de pesquisa que pontuaram como pontos fortes para a realização de projetos de pesquisa no hospital o fato de já existirem grupos de pesquisa bem estruturados e a possiblidade de geração de conhecimento e como oportunidades, os avanços na prática clínica. As principais dificuldades citadas foram a inexistência de área física própria e a obtenção e gerenciamento de recursos financeiros para a pesquisa. Conclusão: A partir do mapeamento situacional da pesquisa no HC-UFPE, e da determinação das necessidades dos pesquisadores foi possível traçar iniciativas estratégicas com o objetivo de implementar o Centro de Pesquisa Clínica. O gerenciamento das atividades de pesquisa parece ser essencial para que as metas estabelecidas sejam alcançadas em curto espaço de tempo. / Introduction: The clinical hospital of the federal university of Pernambuco (HC-UFPE) is part of the network of university hospitals that are managed by the brazilian company of hospital services (EBSERH). In 2014, EBSERH launched the strategic clinical research program for the unified health system to implement a clinical research management model in the network and in 2016, the HC-UFPE obtained funding to establish a clinical research center in the institution. Objective: to develop the strategic planning for the implementation of the HCUFPEClinical Research Center through the balanced scorecard method. Method: observational and descriptive study with mapping of data about the institution's research. Conducted interviews with leaders of hospital research groups who were recorded and transcribed to perform SWOT analysis and Bardin content analysis. Results: a total of 90 research groups were identified, from the consultation to the records in the hospital's research sector. Registered 381 research projects in the hospital, from 2015 to 2017, of which, 159 residences, 132 graduate, 40 graduation, 35 clinical trials, 12 pbic, and 3 others. We applied questionnaires to 29 research leaders on the scientific production and infrastructure demand of the research center. the strengths of the institution are: the existence of well-structured research groups, the possibility of generating knowledge, producing improvements in clinical practice and give visibility to the hospital. The main difficulties cited were the acquisition and management of financial and human resources for research, the inexistence of its own physical area and material for research in the institution. Conclusion: Established strategic initiatives: create a course of good clinical practices, offer advice on the Plataforma Brasil to researchers, elaborate internal regulations for the research, reduce time of submission in the CEP and debureaucracy. The use of the BSC method was adequate as a strategy to manage university hospital research.
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Prevalência de lesões dentárias não cariosas e sua relação com processos erosivos / Prevalence of noncarious dental lesions and their relation to erosiveCosta, Leonardo César 14 September 2007 (has links)
O objetivo do trabalho foi avaliar a prevalência das lesões dentárias não cariosas e sua relação com processos erosivos. Foram examinados 260 alunos da graduação da Faculdade de Odontologia de Bauru. Os pacientes responderam a um questionário envolvendo identificação, hábitos de higiene bucal, dieta, condição de saúde, etc. Foram realizados, ainda, exames clínicos para a identificação, classificação das lesões e graus de sensibilidade. De posse dos dados de cada paciente, a amostra foi analisada e tabulada no programa Microsoft Office Excel. A análise estatística foi realizada utilizando-se o programa estatístico Sigma Stat, sendo que as variáveis foram pareadas e submetidas ao teste Chi-Quadrado de Pearson, com nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram que cerca de 35% dos pacientes avaliados possuíam pelo menos uma lesão dentária não cariosa. Observou-se uma maior prevalência de lesões nos pré-molares, seguido pelos molares, incisivos e caninos. A grande maioria das lesões acometeu a região cervical, principalmente na face vestibular. Não se observou diferença estatisticamente significante na ocorrência de lesões dentárias não cariosas relacionadas com a ingestão de frutas cítricas e refrigerantes, presença de doenças sistêmicas, diferentes fluxos salivares e pH tampão da saliva. Houve uma maior prevalência de lesões sensíveis nos pacientes que consumiam frutas cítricas e refrigerantes, com fluxo salivar intermediário/baixo e nos pacientes com pH tampão > que 5,5. Respeitando as características da população estudada, nenhum dos fatores avaliados pareceu interferir na dinâmica das lesões dentárias não cariosas. / This study aimed to evaluate the prevalence of noncarious dental lesions (NCDL) and their relation to erosive processes. 260 undergraduate students from Bauru School of Dentistry were examined. Patients answered a questionnaire containing identification form, oral hygiene habits, diet and systemic health condition. Thus, clinical examination was carried out to assess the kind and classification of the NCDL and the degree of lesion sensitivity. The data was recorded using a Microsoft Office Excel datasheet. Statistical analysis was performed through Sigma Stat 3.0. The factors were compared and subjected to Pearson Chi-square test, at a 5% level of significance. The results demonstrated that around 35% of the patients evaluated presented at least one NCDL. It was observed that teeth most commonly affected by these lesions were premolars, followed by molars, incisors and canines. Most of the lesions affected the cervical area, mainly the buccal face of the teeth. No significant difference was observed on NCDL in relation to citric fruit and soft drink exposure, systemic diseases, salivary flow and saliva pH buffer. Higher prevalence of hypersensitive lesions was observed in patients that ingested acidic fruits and soft drinks, with intermediate/low salivary flow and in patients with saliva pH buffer > than 5.5. Considering the characteristics of the population studied, none of the factors analyzed seemed to interfere in the dynamics of the NCDL.
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