Orientador: José Paes de Almeida Nogueira / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Banca: Jean Guilherme Fernandes Joaquim / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar a prevalência de Salmonella spp. e seu perfil de resistência a antibióticos em suínos abatidos em frigoríficos sob inspeção federal localizados no interior do estado de São Paulo. Para tanto foram utilizados diferentes tipos de amostras, tais como fezes e linfonodos mediastínicos, mesentéricos e submandibulares, sendo 50 amostras de cada tipo, possibilitando avaliar a relevância do tipo de material analisado em relação ao real status do animal frente à contaminação pelo patógeno. Com base nas amostras positivas foi realizada a sorotipagem das cepas e teste de resistência aos antibióticos. A prevalência do patógeno foi de 10% no total das amostras (20/200), sendo os maiores percentuais de positividade encontrados nos linfonodos submandibulares com 20% de positivos (10/50) e mesentéricos com 18% (9/50) e os menores valores encontrados nas fezes com 2% de positivos (1/50) e linfonodos mediastínicos com nenhuma amostra positiva. Os sorovares predominantes foram S. Typhimurium com 55% das amostras (11/20), seguido de S. enterica subspécie enterica 4,5,12:i:- com 35% (7/20) e os sorovares S. Brandenburg e S. Derby com 5% (1/20) cada. Todas as amostras isoladas apresentarem resistência frente a pelo menos um dos antimicrobianos testados, sendo que 90% (18/20) apresentaram resistência a pelo menos 4 drogas simultaneamente e 15% (3/20) foram enquadradas como multi drogas resistentes. Os maiores índices de resistência foram encontrados para Ciprofloxacina e Tetraciclina com 90% de resistentes (18/20) cada, seguido de Ácido Nalidíxico com 80% (16/20), Sulfonamidas com 75% (15/20), Cloranfenicol e Estreptomicina com 70% (14/20) cada, Sulfametoxazole- Trimetroprim com 65% (13/20), Ampicilina com 25% (5/20), Cefotaxime com 10% (2/10) e Ceftriaxona e Gentamicina com 5% (1/20) cada. As amostras resistentes à Ciprofloxacina foram testadas para a presença da enzima ESBL, sendo 100% ... / Abstract: The objective of this study was to evaluate the prevalence of Salmonella spp. and their antibiotic resistance profiles in swine slaughtered in abattoirs under federal inspection located in the state of São Paulo. For both types of samples, such as feces and mediastinal, mesenteric and submandibular lymph nodes, 50 samples of each type being possible to evaluate the relevance of the type of material analyzed in relation to the actual status of the animal against the contamination by the pathogen were used. Based on positive samples, serotyping of the strains and antibiotic resistance test was performed. The prevalence of the pathogen was 10% of total samples (20/200) wich the highest positivity found in the submandibular lymph nodes with 20% positive (10/50) and mesenteric with 18% (9/50) and lower found in the feces with 2% positive (1/50) and mediastinal lymph nodes with no positive sample. The predominant serotypes were S.Typhimurium with 55% of the samples (11/20) followed by S. enterica subspecies enterica 4,5,12: i: -, 35% (7/20) and the serotypes S. Brandenburg and S. derby 5% (1/20) each. All isolates were resistant at least one of the antimicrobials tested, among them 90% (18/20) showed resistance to at least four drugs simultaneously and 15% (3/20) were classified as multi drug resistant. The highest rates were found for Ciprofloxacin and Tetracycline resistance with 90% (18/20) each, followed by Nalidixic Acid with 80% (16/20), Sulfonamides 75% (15/20), Chloramphenicol and Streptomycin with 70% (14/20) each, Trimethoprim-Sulfamethoxazole 65% (13/20), Ampicillin 25% (5/20), Cefotaxime 10% (2/10) and Ceftriaxone and Gentaminicine with 5% (1/20) each. Resistant to Ciprofloxacin samples were tested for the presence of ESBL enzyme, 100% of them considered negative / Doutor

O objetivo deste trabalho foi desenhar primers, amplificar fragmentos de três loci que codificam antígenos de superfície de protozoários do gênero Sarcocystis spp. isolados do intestino de marsupiais do gênero Didelphis spp., sequenciar os fragmentos gênicos de todos isolados e compará-los entre si e com fragmentos de sequências homólogas disponíveis no GenBank. Trinta e duas amostras de Sarcocystis spp. de gambás do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, tiveram o DNA extraído e amplificado utilizando marcadores moleculares em genes codificadores de antígeno de superfície (SAG-2, SAG-3, e SAG-4). Entre essas amostras, 28 tiveram pelo menos um dos fragmentos gênicos sequenciados. Foi possível sequenciar os 3 fragmentos gênicos de 20 amostras. As análises das sequências dos genes renderam os seguintes resultados: SAG-2: 275 nucleotídeos e sete alelos para 26 amostras; SAG-3: 353 nucleotídeos e seis alelos para 21 amostras; SAG-4: 278 nucleotídeos e onze alelos para 25 amostras. Para cada marcador, análises filogenéticas foram realizadas empregando métodos de distância. As reconstruções filogenéticas permitiram verificar as relações de ancestralidade entre os diferentes alelos, que foram nomeados de acordo com o critério de evolução inferido na topologia das árvores. Para os três loci, diferentes alelos foram agrupados em três grupos ou genótipos, que foram nomeados com caracteres em números romanos I, II, III e IV. Diferenças intra-genótipo (sub-genótipos) foram representados por letras minúsculas (Ia, Ib, Ic, etc.). Cada alelo foi nomeado com numeração arábica (Ia1, Ia2, Ia3, etc.). Nas analises filogenéticas concatenadas baseada em dados de aminoácidos foi possível dividir as amostras dentro de três grupos. A filogenia baseada nas sequências de aminoácidos indica que três grupos de organismos devem existir dentro do complexo de indivíduos da população estudada (Sarcocystis-RS, Falcatula-like e Neurona-like). Embora o grupo designado como Sarcocystis-RS tenha um único alelo para o locus gênico SAG-3 (configuração do tipo III), táxons deste grupo compartilham alelos com indivíduos do grupo Falcatula-like. Assim, seria plausível assumir que exista uma troca gênica entre as duas populações. No que diz respeito ao grupo Neurona-like, nenhum dos indivíduos deste grupo compartilham alelos com indivíduos de outros grupos. No entanto, esta observação precisa ser confirmada, pois as análises foram baseadas em poucas sequências Neurona-like (duas sequências). Este relato revela uma notável diversidade genética entre os isolados de Sarcocystis spp de gambás do Brasil. / The present work aimed to design primers and amplify fragments of three loci that code for surface antigens of the protozoan genus Sarcocystis spp. isolated from intestine of marsupials of the genus Didelphis spp and to sequence the gene fragments of all isolates and compare them with each other and with fragments of homologous sequences available in GenBank. Thirty two samples of Sarcocystis spp. from opossums from the State of Rio Grande do Sul, had the nuclear DNA extracted and amplified using the molecular markers targeted to genes encoding surface antigens (SAG-2, SAG-3, and SAG-4). Among these samples, 28 had at least one of the gene fragments sequenced. It was possible to sequence the three gene fragments from 20 samples. The analysis of gene sequences yielded the following results: SAG-2: 275 nucleotides and seven alleles for 26 samples; SAG-3: 353 nucleotides and six alleles for 21 samples; SAG-4: 278 nucleotides and eleven alleles for 25 samples. For each marker phylogenetic analysis was performed employing distance methods. The phylogenetic reconstructions allowed us to verify the ancestry relationships between different alleles, which were named according to the criteria of evolution inferred from the tree topology. For the three loci, different alleles were grouped into three groups or genotypes, which were named with characters in Roman numerals I, II, III and IV. Intra-genotype differences (sub-genotypes) were represented by lowercase letters (Ia, Ib, Ic, etc.). Each allele was named with Arabic numerals (Ia1, Ia2, Ia3, etc.). With concatenated phylogenetic analysis based on amino acid dataset it was possible to divide the samples into three groups. The amino acid based phylogeny indicates that three groups of organisms must exist within the complex of individuals in the population studied (Sarcocystis-RS, Falcatula-like, and Neurona-like). Although the group designated as Sarcocystis-RS has a unique allele for the genetic locus SAG-3 (configuration type III), the taxa of this group share alleles with individuals in the Falcatula-like. Thus, it is plausible to assume that gene exchange occurs between these two populations. Regarding the Neurona-like group, none of the individuals in this group share alleles with individuals of the other groups. However, this observation remains to be confirmed, because this analysis was based on very few Neurona-like sequences (two sequences). This report reveals a striking genetic diversity among Sarcocystis spp isolated from opossums from Brazil.

Os membros da sub-famíla Toxoplasmatinae conhecidos são Hammondia hammondi, Toxoplasma gondii, Neospora hughesi, Neospora caninum e Hammondia heydorni. As duas primeiras espécies têm os felídeos como hospedeiro definitivo, enquanto as duas últimas têm desenvolvimento sexual em carnívoros da família dos canídeos. O ciclo biológico de N. hughesi é pouco conhecido. Foi estudado a variabilidade nucleotídica de seqüências intercaladas entre os genes codificadores das frações ribossômicas 18S, 5.8S (ITS-1). No entanto, como estas não permitem reconstruções filogenéticas com o uso de grupo externo, em virtude da inconsistência dos alinhamentos produzidos, pesquisamos uma seqüência codificadora de proteína sendo o marcador escolhido, o gene codificador da proteína de choque térmico HSP70 (heat shock protein 70KDa). Este gene é bastante utilizado para resolução de filogenias de outros organismos como, por exemplo, aqueles pertencentes ao gênero Cryptosporidium. No presente trabalho, amplificamos por PCR e seqüenciamos 951 pares de bases (pb) do gene codificador de HSP70 de oocistos T. gondii-like (oriundos de fezes gatos), de oocistos Neospora-like (de fezes de cães) e de taquizoitos de N. caninum, N. hughesi e T. gondii mantidos em laboratório. Os primers foram desenhados a partir de seqüências consenso obtidas em pesquisa de bancos de dados de seqüências EST de N. caninum e seqüências de RNAm de T. gondii. Seqüências ITS-1 destes oocistos também foram determinadas para a confirmação da espécie de parasito estudada. Os resultados mostram que os táxons H. hammondi e T. gondii são monofiléticos e geneticamente muito próximos, mas contrariando resultados anteriores, não foi demonstrada a monofilia entre os táxons H. heydorni e N. caninum. De fato, a análise de diversidade nucleotídica de gene codificador HSP70 mostra que a distância evolutiva entre H. heydorni e N. caninum é tão grande quanto a distância de cada uma destas espécies com T. gondii. Em adição, foi possível identificar dentre as amostras de oocistos, duas linhagens divergentes de H. heydorni. Paralelamente ao estudo filogenético também foi possível desenvolver um método diagnostico diferencial para oocistos tipo Hammondia. As seqüências de gene HSP70 obtidas foram alinhadas e dois pares de primers internos a estas seqüências foram desenhados. O primeiro par amplifica 771 pb de oocistos T. gondii-like e o segundo 400 pb de oocistos Neospora-like. A clivagem do fragmento de 771 pb com enzima de restrição Hin6I produz perfis eletroforéticos distintos para amostras de T. gondii e H. hammondi. A clivagem do fragmento de 400pb com a enzima de restrição MunI também produz perfis eletroforéticos distintos entre amostras de N. caninum e H. heydornii. A diferenciação dos perfis de restrição pode ser feita em eletroforese em gel de agarose a 2,5%. / Hammondia hammondi, Toxoplasma gondii, Neospora huguesi, Neospora caninum and Hammondia heydorni are the known members of the sub-family Toxoplasmatinae. H. heydorni and N. caninum use canids as definitive hosts whereas felids are the definitive hosts from T. gondii and H. hammondi. The definitive host of N. hughesi is unknown. Here, the nucleotide diversity at internal transcribed spacer (ITS-1) and heat shock protein (HSP70 kDa) loci in the subfamily toxoplasmatinae were studied. The HSP70 coding genes are widely used for phylogenetic studies in a number of other organisms specially within the genus Cryptosporidium. In the present study, it was amplified by PCR and sequenced 951 bases pairs (bp) from HSP70 coding gene from oocysts T.gondii-like (from cat), from oocysts N. caninum-like (from dog) and tachyzoites of N. hughesi grown on cell cultures. The primers were designed based on consensus sequences within EST sequences of N. caninum sequences and RNAm sequences of T. gondii. ITS-1 sequences amplified from oocysts were also obtained in order to confirm the species of the parasites. The results showed that T. gondii and H. hammondi are monophyletic and genetically very close, but the monophyletic status of H. heydorni N. caninum was not demonstrated. In fact, the nucleotide diversity at the HSP70 locus has shown that the evolutionary distance between H. heydorni and N. caninum is as high as that observed between either H. heydorni or N. caninum and T. gondii., In addition, it was possible to identify two distinct groups among the H. heydorni oocysts. Concomitantly to the phylogenetic study it was also possible to standardize a diagnostic test capable of differentiate the oocysts Hammondia-like was development a diagnostic method that differ oocysts T. gondii-like and N. caninum-like. The sequences obtained from HSP70 coding gene were aligned and two new pair of PCR primers was designed. The first pair amplifies 771bp from T. gondii-like oocysts, whereas the second pair amplifies 400 bp from N. caninum-like oocysts. The restriction enzyme Hin6I used to cleave the 771 bp amplicons generated distinct profiles with samples from H. hammondi and T. gondii. The same occurred with the restriction of the fragments of 400bp cleaved by the enzyme MunI used in N. caninum e H. heydorni samples. The profiles can be differentiated by 2.5% agarose gel electrophoresis.

Resumo: Avaliaram-se dietas formuladas com milho ou sorgo para suínos nas fases inicial, crescimento e terminação sobre o desempenho dos animais, digestibilidade dos nutrientes, produção e características de fezes e urina e biodigestão anaeróbia dos dejetos. No ensaio de desempenho não foram verificadas diferenças quanto ao consumo médio diário de ração, ganho médio diário de peso e conversão alimentar. Foi realizado um ensaio de digestibilidade em cada fase de crescimento dos animais utilizando o método de coleta total de fezes, não se observando diferenças para coeficientes de digestibilidade da matéria seca e da energia bruta, coeficiente de metabolizabilidade, energia digestível e metabolizável. Os maiores coeficientes de digestibilidade da proteína bruta e proteína digestível foram verificados nos animais alimentados com dietas à base de milho na fase terminação. Para animais alimentados com dietas formuladas com sorgo foram verificados maiores valores de matéria seca digestível nas fases crescimento e terminação. Verificou-se maior produção média de fezes para animais alimentados com dietas formuladas com sorgo, gerando maiores coeficientes de resíduo. Os maiores teores de sólidos totais e voláteis foram verificados nas fezes de animais alimentados com dieta à base de milho, em todas as fases de crescimento. As concentrações médias dos nutrientes nas fezes e na urina variaram entre os tratamentos e fases. O abastecimento de 20 biodigestores indicou maiores reduções nos teores de sólidos voláteis e maiores produções de biogás quando se utilizaram fezes de suínos alimentados com dietas formuladas à base de milho. As concentrações médias dos nutrientes no afluente e efluente dos biodigestores variaram entre os tratamentos e fases. / Abstract: There were evaluated diets formulated with corn or sorghum for pigs in the initial stages, growing and finishing on the growth performance of animals, digestibility of nutrients, production and characteristics of feces and urine and anaerobic digestion of pigs manure. In the test of growth performance were not found differences in the average daily consumption of feed, average daily weight gain and feed conversion. There was performed a test of digestibility at each stage of growth of animals using the total collection of feces, no difference was observed for digestibility coefficients of dry matter and gross energy, coefficient to metabolize, digestible and metabolizable energy. The highest rates of digestibility of crude protein and digestible protein were observed in animals fed with diets based on corn in the finishing stage. For animals fed diets formulated with sorghum there were observed higher values of digestible dry matter in growing and finishing phases. There was a greater average production of feces by animals fed with diets based on sorghum, generating higher coefficient of waste. The highest levels of total and volatile solids were found in the feces of animals fed with diets containing corn, in all the stages of growth. The average concentrations of minerals in feces and urine varied among treatments and stages. The supply of 20 anaerobic digesters indicated greater reductions in the volatile solids levels and greater production of biogas when using waste from pigs fed with diets based with corn. The average concentrations of minerals in the affluent and effluent in the anaerobic digesters varied among treatments and stages. / Orientador: Jorge de Lucas Junior / Coorientadora: Maria Cristina Thomaz / Banca: Mônica Sarolli Silva de Mendonça Costa / Banca: Roberto Alves de Oliveira / Banca: Antônio Carlos de Larentiz / Banca: Maria Benincasa Vidotti / Doutor

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:43:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VanessaMAS_DISSERT.pdf: 1312665 bytes, checksum: c571f23a201e08178fefee625ed7591a (MD5) Previous issue date: 2012-09-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Em infec??es parasit?rias helm?nticas a eosinofilia ? um dos fatores essenciais ? resist?ncia do hospedeiro, entretanto, infec??es com protozo?rios raramente resultam em eosinofilia perif?rica. O objetivo deste estudo foi identificar infec??es por enteroparasitas em crian?as e associ?-las com eosin?filos sangu?neos e fecais. Os exames parasitol?gicos efetuados pelo m?todo de Blagg, a pesquisa de eosin?filos pelo tric?mio e colora??o por Leishman foram realizados em 346 crian?as. Amostras positivas para parasitas representaram 80,1% e negativas 19,9%. A eosinofilia absoluta perif?rica foi encontrada em 55,9% das crian?as, sendo 82,7% representado por crian?as parasitadas e destacando que 54,9% dos infectados por protozo?rios apresentaram eosin?filos acima de 500c?lulas/mm3. Das 62 crian?as com amostras fecais positivas para eosin?filos, 77,4% eram parasitadas por helmintos e/ou protozo?rios. A presen?a dos cristais de Charcot-Leyden nas fezes foi positiva em 39,1% das amostras, se mostrando estatisticamente significante nas crian?as parasitadas com helmintos (p=0,022). As crian?as s?o residentes em ?reas end?micas de parasitoses intestinais e como p?de ser observado a maior parte das crian?as que apresentaram eosinofilia e eosin?filos nas fezes eram parasitadas por helmintos e/ou protozo?rios

Neste estudo avaliou-se a função reprodutiva de fêmeas de peixe-boi da Amazônia (Trichechus inunguis) mantidas em cativeiro no Laboratório de Mamíferos Aquáticos do Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (n=4) e no Centro de Preservação e Pesquisas de Mamíferos Aquáticos - Manaus Energia S.A. (n=2), por meio da extração e quantificação de progestinas e estrógenos fecais. As amostras fecais foram colhidas duas vezes por semana durante doze meses, foram liofilizadas e processadas de acordo com o protocolo adaptado de Schwarzenberger et al (1991). Realizou-se a validação dos radioimunoensaios em fase sólida, progesterona e 17β-estradiol para o uso em extratos fecais de peixe-boi da Amazônia. A duração média do ciclo ovariano (± EPM) definido por dois picos consecutivos de estrógenos fecais foi de 22,49 ± 1,26. A fase de estro teve duração média de 6,4 ± 0,45. Para verificar se as fêmeas mantidas em cativeiro apresentavam o padrão reprodutivo sazonal dos peixes-bois de vida livre sugerido por Best (1982), avaliou-se a influência das fases do ciclo hidrológico dos rios da bacia Amazônica. Não foi observada diferença estatística nas concentrações de progestinas fecais ao longo das fases do ciclo hidrológico, porém verificou-se que durante a fase de cheia apresentaram concentrações de estrógenos fecais superiores às outras fases, corroborando com os dados sugeridos por Best (1982). Com os resultados obtidos nesse estudo, pretende-se ampliar os conhecimentos sobre a fisiologia reprodutiva do peixe-boi da Amazônia, fornecendo mais uma ferramenta de estudo para auxiliar pesquisas e manejo reprodutivo, tendo como objetivo final a conservação da espécie. / This study has evaluated the reproductive function of six females of the Amazon manatee (Trichechus inunguis) kept in captivity at the Aquatic Mammals Laboratory - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (n=4) and Centro de Preservação e Pesquisa de Mamíferos Aquáticos-Manaus Energia S/A (n=2) through extraction and quantification of fecal estrogens and progestins. Fecal samples were obtained twice a week for 12 months. Validation of the solid phase radioimmunoassay for progesterone and 17β-estradiol was performed for using on Amazon manatees fecal extracts. Ovarian cycle mean duration (± SEM), defined by two consecutive peaks of fecal estrogens, was 22,49 ± 1,26 days. Mean estrous phase duration was 6,4 ± 0,45 days. To verify if the captive females showed the same seasonal reproductive pattern of wild manatees suggested by Best (1982), the influence of the hydrological cycle of the Amazon River Basin was analyzed. There was no statistical difference on the fecal progestins between phases, but during the flood phase it was verified that the estrogen fecal concentrations were increased, corroborating with Best (1982).These results show that the improvement of the non-invasive techniques for reproductive assessments increase the knowledge of reproductive physiology and is an important tool for scientific research, reproductive management, and species conservation.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-09-14T20:45:25Z No. of bitstreams: 1 HerminioMendes.pdf: 6465933 bytes, checksum: b67849d7574d0171fe7eab9850a0985a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-14T20:45:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HerminioMendes.pdf: 6465933 bytes, checksum: b67849d7574d0171fe7eab9850a0985a (MD5) Previous issue date: 2017-06-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão / The use of food for probiotic bacteria has recently been considered a possibility of prevention against the installation or attenuation of several infectious processes. Species belonging to the genera Bifidobacterium and Lactobacillus predominate in the gastrointestinal microbiota and are widely used in functional foods. In general, a selection of new probiotic strains for use in humans has as its source a human intestinal flora and breast milk. Thus, the objective of this study was to isolate and identify new species with potential probiotic from samples of breast milk and feces of infants exclusively breastfed, in addition to evaluating their probiotic potential. Samples of breast milk from two different lactation periods (colostrum and transitional milk) and samples of fecal material from infants were used. Isolation was used using MRSC and for Beerens for Lactic-Acid Bacteria and Bifidobacterium spp. respectively. Probiotic potential was assessed by physical pH and bile salt tolerance tests. Verified its ability to adhere to mucin and human intestinal cells (HT-29) and inhibit adhesion of different diarrheogenic strains of E. coli. The identification of the promising isolates was performed through the 16S rDNA region. Five isolates had acid-bile resistance, with CLM0109 insulation having 90.2% and 64.6% resistance, pH 3.0 and pH 2.0, respectively. These isolates have an ability to adhere to mucin and HT-29 cells, the isolate FEB0308 showed the highest level of adherence to HT-29 cells. The adhesion assay demonstrated that all isolates were absorbed by adhesion of diarrheogenic E. coli (DECs). Antimicrobial susceptibility analysis showed that 3 isolates showed resistance to one or two antibiotics (kanamycin and streptomycin). The molecular analysis allowed identifying the isolates as belonging to the species Lactobacillus casei. The results show that the five isolates present probiotic potential especially for use in the prevention and treatment of infections caused by DEC and demonstrate that milk and stool samples from infants can act as a source of potential probiotic bacteria. / O uso de alimentos contendo bactérias probióticas foi recentemente considerado uma possibilidade de prevenção contra a instalação ou atenuação de diversos processos infecciosos. Espécies pertencentes aos gêneros Bifidobacterium e Lactobacillus predominam na microbiota gastrintestinal humana e são amplamente utilizadas em alimentos funcionais. Em geral, a seleção de novas cepas probióticas para uso em humanos, tem como fonte a microbiota intestinal humana e o leite materno. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar e identificar novas estirpes com potencial probiótico a partir de fezes de lactentes amamentados exclusivamente com leite materno, além de avaliar seu potencial probiótico. Foram utilizadas amostras de material fecal de bebes alimentados exclusivamente com leite materno. O isolamento foi realizado utilizando-se ágar MRSC e ágar Beerens para bactérias ácido-lácticas (BAL) e Bifidobacterium spp. respectivamente. O potencial probiótico foi avaliado pelos testes de tolerância ao pH gástrico e sais biliares. Além disso, foi verificado sua capacidade de aderir à mucina e as células intestinais humanas (HT-29), bem como a capacidade de inibir adesão de distintas linhagens diarreiogênicas de E. coli além de sensibilidade a antimicrobianos. A identificação dos isolados promissores foi realizada através da região 16S rDNA. Cinco isolados apresentaram resistência ácido-biliar, com destaque para o isolado CLM0109 que apresentou 90.2% e 64.6% de resistência a pH 3.0 e pH 2.0 respectivamente. Estes isolados tiveram a capacidade de aderir à mucina e células HT-29, o isolado FEB0308 apresentou o maior nível de aderência a células HT-29. O ensaio de inibição da adesão demonstrou que todos os isolados foram capazes de inibir adesão de E. coli diarreiogênicas (DECs). Além disso, a análise de sensibilidade a antimicrobianos demonstrou que 3 isolados apresentaram resistência a um ou dois antibióticos (canamicina e estreptomicina). A análise molecular identificou os isolados como Lactobacillus casei. Concluímos que os cinco isolados apresentam potencial probiótico especialmente para uso na prevenção e tratamento de infecções causadas por DEC e demonstra que as amostras fecais de lactentes alimentados exclusivamente com leite materno, podem funcionar como fonte de bactérias com potencial probiótico.

Orientador: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Eunice Oba / Banca: Ian Martin / Resumo: As aves da família Psittacidae são muito visadas pelo tráfico de animais selvagens. O papagaio-verdadeiro (Amazona aestiva) é uma das espécies mais traficadas. Os animais provenientes do tráfico são transportados em espaço restrito, sem alimento ou água e as aves adoecem ou morrem devido ao estresse ou brigas, antes mesmo de chegarem ao consumidor final. O estresse leva a secreção de glicocorticoides que possui diversas funções nos vertebrados além de sofrerem flutuações dos seus níveis basais para preparar o organismo para o início das atividades diárias. Fatores ambientais e necessidades fisiológicas interagem para a manutenção do relógio biológico, que é responsável por determinar essas alterações endócrinas. As análises hormonais através de técnicas não-invasivas têm sido usadas em estudos da biologia da conservação, comportamentais e fisiológicos em aves cativas ou de vida livre devido a sua facilidade de coleta e por não causarem prejuízos ao indivíduo. Os níveis de metabólitos de glicocorticoides presentes nas excretas refletem as concentrações plasmáticas desses hormônios. Com objetivo de determinar o perfil de excreção urofecal de metabólitos de glicocorticoides nos excrementos de A. aestiva, ao longo do dia e relacionar esses achados com as atividades diária desses animais, foram utilizados 22 animais (12 machos e 10 fêmeas) alojados em gaiolas individuais, e suas excretas foram colhidas a cada três horas, por 24 horas consecutivas. Foi observado um pico nas concentrações de metabólitos de glicocorticóides nas primeiras horas do dia, quando também se inicia as atividades diárias das aves; e as concentrações diminuíram gradualmente até atingirem seus níveis basais no final da tarde e se mantiveram baixos até a manhã seguinte / Abstract: The birds of the Psittacidae family are highly targeted for wildlife trafficking. The Blue-fronted parrot (Amazona aestiva) is one of the most trafficked species. The animals are transported in restricted spaces, without food or water and the birds get sick or die due to stress or fights, before arriving to the final consumer. Stress leads to secretion of glucocorticoids that has several functions in vertebrates and suffer fluctuations of baseline levels to prepare the organism for the start of daily activities. Physiological and environmental factors interact to maintain the biological clock, which is responsible for determining these endocrine changes. The hormonal assays employing non-invasive techniques have been used in studies of conservation biology, behavioral and physiological studies of captive or free-living birds because of the ease of collection and lack of harm to the individual. Levels of glucocorticoid metabolites in feces reflect plasma concentrations of these hormones. In order to define the profile of excretion of glucocorticoids metabolites in A. aestiva droppings throughout the day and correlate these findings with the daily activities of these animals, we used 22 animals (12 males and 10 females) housed individually in cages, and their droppings were collected every three hours for 24 consecutive hours. A peak in the concentration of glucocorticoids metabolites was observed in the first hours of the day at the start of the birds' daily activities, and the concentrations decreased gradually to basal levels in the late afternoon and remained low until the next morning / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-05-04Bitstream added on 2014-06-13T18:44:24Z : No. of bitstreams: 1 vicente_hig_dr_jabo.pdf: 1044940 bytes, checksum: 1e6202c64e317099b4cf8015b4128b59 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este trabalho teve como objetivo determinar a prevalência de Escherichía calí produtoras de shigatoxinas e E. calí dos sorogrupos 0157, 0111 e 0113 em rebanhos leiteiros do Município de Jaboticabal-SP. A presença de seqüências stx1, stx2e eae foi detectada pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em amostras de fezes, água, leite, mão de ordenhador, insuflador de ordenhadeira e teto. Todas as amostras stx e eae positivas foram submetidas a uma nova reação de PCR para detecção das seqüências rfb 0157, 0111 e 0113. Observou-se uma alta prevalência (72,16%) de seqüências stx nas fezes dos bovinos. Os coeficientes de prevalência das seqüências rfb 0157, 0111 e 0113 nas fezes dos bovinos foram, respectivamente, 14,77%, 0,2% e 30,83%. Detectaram-se seqüências stx em amostras de água (19,51 %), leite (33,33%), mão de ordenhador (3,57%), e teto (7,14%). Ainda nas amostras de água e leite foram detectadas Escheríchía colí 0157 e 0113. Por meio da separação imunomagnética, isolou-se 53,62% das amostras PCR 0157 positivas, sendo destas 72,97% produtoras de enterohemolisina. Foram isoladas 25% das amostras PCR 0113 positivas. Animais de todos os rebanhos (100%) apresentaram em suas fezes STEC e E. calí 0113 e os sorogrupos 0157 e 0111 foram observados em 60,0% e 10,0% dos rebanhos, respectivamente. Concluiu-se que a alta prevalência de STEC detectada em rebanho leiteiro evidenciou que as fezes de bovinos desempenham um papel importante na contaminação ambiental e podem oferecer risco de agravo à saúde pública. / The objective of this study was to determine the prevalence of Shigatoxigenic Escherichía colí (STEC) and STEC serogroups 0157, 0111 and 0113 in feces, water, milk, milkman's hands, teat and teatcup sampled in dairy farms in Jaboticabal-SP. Samples were collected from 10 herds and assessed for the presence of the virulence genes stX1, stX2 and eae by polymerase chain reaction (PCR). Ali stx and eae positive samples were submitted to a second PCR reaction targeting the sequences rfb 0157, rfb 0111 and rfb 0113. High prevalence of stx was detected (72,16%) in fecal samples, whereas the prevalence of sequences rfb 0157, rfb 0111and rfb 0113 were 14,77%, 0,2% and 30,83%, respectively. Sequence stx was detected in water (19,51 %), milk (33,33%), milkman's hands (3,57%) and teat samples (7,14%). It was also detected Escheríchía colí 0157 and 0113 in water and milk samples. It was isolated, by immunomagnetic separation, 53,62% of the PCR positive samples, from these, 72,97% were enterohaemolytic. 25% of the 0113 PCR positive samples were isolated. STEC was identified in ali herds (100%), and serogroups 0157, 0111 and 0113 were observed in 60%, 10% and 100% of the herds, respectively. In conclusion, the high STEC prevalence detected in dairy herds evidences that bovine feces might play an important role as a contamination source in the region of Jaboticabal.

Orientador: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Coorientador: Márcio Carvalho da Costa / Banca: Janete Apparecida Desiderio / Banca: Gustavo Adolfo Sabatini / Resumo: Estudos recentes em indivíduos da espécie humana e camundongos relataram que o exercício físico pode alterar a microbiota intestinal. Evidências indicaram que essa comunidade microbiana está envolvida na homeostase do metabolismo do hospedeiro. Ademais, estudos com substâncias ergogênicas são escassos na literatura sobre a microbiota intestinal. Objetivou-se avaliar o impacto do exercício físico agudo e do condicionamento aeróbio associado a suplementação com cromo ou L-carnitina na microbiota intestinal de potras. Nosso modelo experimental utilizou potras da raça Mangalarga Machador em estágio de condicionamento físico incipiente, distribuídas em 4 grupos: Controle (sem exercício), Exercício, L-carnitina e Cromo. As potras foram submetidas a dois testes de esforço incremental e condicionadas em esteira por 42 dias na intensidade de 70-80% do limiar de lactato. Amostras fecais foram obtidas antes e 48 horas após do exercício agudo e do programa de condicionamento. As populações bacterianas foram caracterizadas pelo sequenciamento da região V4 do gene 16S rRNA por meio da plataforma Illumina MiSeq e um total de 5.224.389 de sequências foi obtido de 48 amostras. Para o total de sequências, os três filos mais abundantes foram Firmicutes (50,22%), Verrucomicrobia (15,13%), seguido por 13,80% de bactérias que não foram classificadas no nível filo. Os gêneros com maior abundância relativa foram: Clostridiales não classificados (17,06%), "5 genus incertae sedis" (12,98%) e bactérias não classificadas (12,95%). Nossos resultados indicaram que a atividade física intensa e o condicionamento aeróbio podem alterar a composição e a estrutura da população bacteriana intestinal de potras. O cromo ou a L-carnitina na comparação intra grupos provocaram alterações moderadas na diversidade da microbiota fecal de potras. Entretanto, os resultados dos grupos suplementados não apresentaram alteração em... / Abstract: Recent studies performed in humans and rats reported that exercise could alter the intestinal microbiota. Evidence indicated that this microbial community is involved in the metabolic homeostasis of the host. Moreover, studies about ergogenic substances are scarce in the literature on intestinal microbiota. This study aimed to assess the impact of acute exercise and aerobic conditioning, associated either with chromium or L-carnitine supplementation, on the intestinal microbiota of fillies. Twelve "Mangalarga Marchador" fillies in incipient fitness stage were distribuided into four groups: control (no exercise), exercise, L-carnitine and chromium. The fillies underwent two incremental exercise tests, before and after training on a treadmill for 42 days at 70-80% of the lactate threshold intensity. Fecal samples were obtained before and 48 hours after the acute exercise (incremental exercise test). Bacterial populations were characterized by sequencing the V4 region of the 16S rRNA gene using the MiSeq Illumina platform, and 5,224,389 sequences were obtained from 48 samples. The results showed that the three most abundant phyla were Firmicutes (50.22%), Verrucomicrobia (15.13%), followed by bacteria that were not classified at the phylum level (13.80%). The genera with the highest relative abundance were unclassified Clostridiales (17.06%), "5 genus incertae sedis" (12.98%) and unclassified bacteria (12.95%). Our results indicated that intense physical activity and aerobic conditioning might change the composition and structure of the intestinal bacterial population in fillies. The intra-group comparison showed that chromium or L-carnitine caused moderate changes in the fecal microbiota of fillies. However, the results of the supplemented groups were not different from the exerciseonly group. Thus, further studies using a larger sampling are needed to further investigate these changes / Mestre