Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T20:35:20Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-09-22T23:51:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-22T23:51:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Andréia de Sousa Rocha Barreto.pdf: 2321438 bytes, checksum: 3e46edc6c1f36a6c86dbc70776eee875 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais - INCT-DT; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES. / A esquistossomose assume o segundo lugar em importância clínica e epidemiológica dentre as doenças parasitárias no mundo. A resposta imune do hospedeiro é considerada essencial na proteção e na patogênese da doença. A fase crônica é caracterizada pela produção de citocinas Th2, sendo as mesmas associadas ao desenvolvimento de fibrose periportal. Pouco se sabe sobre o fenotipo e o grau de ativação dos diferentes subtipos de células T no processo de fibrose. Objetivo: avaliar o fenótipo e o grau de ativação dos linfócitos T em pacientes esquistossomóticos com fibrose periportal. Método: Estudo de corte transversal, realizado no povoado de Água Preta, Gandu-Bahia, incluindo 37 indivíduos com fibrose periportal determinado por ultrassonografia. Quinze deles apresentavam fibrose incipiente, sete apresentavam fibrose moderada a grave e quinze não apresentavam fibrose. Células mononucleares do sangue periférico foram obtidas por gradiente de Ficcol-hypaque e a frequência de linfócitos TCD4+ e TCD8+ e a expressão dos marcadores de superfície CD28, CD69, CD25 e CTLA-4 foram determinadas por citometria de fluxo. Resultados: Não houve diferença significativa na frequência das células TCD4+ entre os pacientes com diferentes graus de fibrose periportal, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada e grave apresentaram uma frequência menor de células TCD8+, comparados aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de células TCD8+CD28+, bem como de células TCD4+CD69+ foi maior no grupo de pacientes com fibrose incipiente, em comparação com aqueles sem fibrose. Em relação à frequência das células TCD4+CD25Low, não houve diferença significativa entre os grupos de pacientes, entretanto, os indivíduos com fibrose moderada a grave apresentaram uma menor frequência de células TCD4+CD25High comparados àqueles sem fibrose ou com fibrose incipiente. A frequência de linfócitos TCD4+CTLA-4+ em indivíduos com fibrose moderada a grave foi também menor em relação aos indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. Conclusão: A alta frequência de células T ativadas nos pacientes com fibrose indica que estas células devem participar do processo de formação da fibrose periportal. Adicionalmente, a menor frequência de células T com o perfil regulatório nos pacientes com fibrose moderada a grave reforça a hipótese de uma falta de regulação da resposta imune nestes pacientes. / Salvador

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Luis Felipe Souza (luis_felas@globo.com) on 2009-03-11T19:28:11Z No. of bitstreams: 1 2008_Tese_LilianiVieira.PDF: 2837811 bytes, checksum: f0bb9858dbc033e0333c69a65c3b3ea5 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-03-19T12:55:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_Tese_LilianiVieira.PDF: 2837811 bytes, checksum: f0bb9858dbc033e0333c69a65c3b3ea5 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-03-19T12:55:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_Tese_LilianiVieira.PDF: 2837811 bytes, checksum: f0bb9858dbc033e0333c69a65c3b3ea5 (MD5) / A Fibrose Cística (FC) é uma doença hereditária autossômica, recessiva e letal que apresenta certas dificuldades na realização do diagnóstico precoce e preciso. Devido ao comprometimento patológico essa doença assume grande importância e o diagnóstico precoce é decisivo para um melhor prognóstico. Este estudo teve por objetivo determinar a composição inorgânica e análise proteômica da saliva total de indivíduos com FC e identificar biomarcadores para uso no diagnóstico da doença. Foram coletadas amostras de saliva de habitantes da região Centro Oeste do Brasil: 12 indivíduos homozigotos para a mutação ?•F 508 (4 mulheres, 8 homens), 12 heterozigoto para ?ýF 508 (5 mulheres, 7 homens), 13 indivíduos com FC com mutações não identificadas (6 mulheres, 7 homens), 8 indivíduos com diagnóstico duvidosos para FC ( 5 mulheres, 3 homens) e 43 indivíduos saudáveis (23 mulheres e 20 homens). Indivíduos com dúvida no diagnóstico para FC ou que não cumpriram os requisitos para compor o grupo controle foram excluídos das análises. Os teores dos elementos traço Al, As, B, Ba, Ca, Cd, Co, Cr, Cu, Fe, Hg, K, Mg, Mn, Mo, Na, Ni, Pb, Se, Si, Sr, Ti, V e Zn na saliva foram avaliados por espectrometria de massa com plasma de argônio acoplado indutivamente (ICP-MS), espectrometria de emissão óptica com plasma de argônio acoplado indutivamente (ICP-OES) e espectrometria de absorção atômica (AAS). O perfil protéico foi estudado por eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de Sodium Dodecyl Sulfate (SDS-PAGE), por eletroforese bidimensional (2-DE) e análise de bases peptídicas por espectrometria de massa (MS/MS). Os elementos Na e K apresentaram, em média, teores mais elevados, enquanto, V, Cr e Se menos elevado quando comparados a indivíduos saudáveis, o elemento As foi detectado apenas no grupo de indivíduos saudáveis (p<0,05). Nas análises por eletroforese, o grupo com FC apresentou uma banda nítida de massa molecular de 38 kDa, não visualizada nos indivíduos sem a doença. A espectrometria de massa identificou a uma imunoglobulina (IgA), a qual esta visivelmente expressa nos indivíduos com FC. Existe diferença significante entre a saliva de indivíduos com FC e às de indivíduos saudáveis. Foi também identificado diferenças no perfil protéico. Com os resultados deste trabalho podemos inferir que a saliva total estimulada é uma fonte potencial para estudos que possam corroborar no desenvolvimento de um método de diagnóstico precoce e preciso da FC. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cystic Fibrosis (CF) is an autossomic recessive lethal inherited disease that presents certain difficulties for an early and accurate diagnosis. Due to its pathological character this disease assumes great importance and early diagnosis is of paramount importance for a good prognostic. The objective of this study was to determine the inorganic composition and the proteomic analysis of stimulated whole saliva obtained from CF and identify biomarkers for CF diagnosis. Samples were collected from individuals living in the Brazilian West Central Region: 12 homozygous for mutation ?•F 508 (4 females; 8 males); 12 heterogeneous for mutation ?•F 508 (4 females; 8 males); 13 with unidentified CF mutations (6 females; 7 males); 8 with doubtful CF diagnosis (5 females; 3 males); and 43 healthy individuals (23 females; 20 males) for the control group. Samples from individuals with doubtful diagnosis as well as from those that did not fulfill the basic requirements to compose the control group were discarded. Concentration of trace elements Al, As, B, Ba, Ca, Cd, Co, Cr, Cu, Fe, Hg, K, Mg, Mn, Mo, Na, Ni, Pb, Se, Si, Sr, Ti, V e Zn were evaluated using mass spectrometer with inductively coupled argonium plasma (ICP-MS), optical emission spectrometer with inductively coupled argonium plasma (ICP-OES), and atomic absorption spectrometer (AAS). Protein profile was accessed by polyacrylamide gel electrophoresis 15% in presence of Sodium Dodecyl Sulfate (SDS-PAGE), by bidimensional electrophoresis (2D), and analysis of the peptide bases by mass spectrometry (MS) In every analyses, results obtained for CF individuals were compared to those for healthy subjects. Average concentration values for Na and K were higher in CF patients as compared to healthy individuals. In contrast, V, Cr, and Se, were lower. Element As was detected only in the healthy group (p<0,05). In the SDS-PAGE analysis CF patients presented a distinct band with molecular mass between 30 and 45 kDa not visualized in the healthy subjects. By 2D electrophoresis associated with mass spectrometry it was possible to identify a heavy chain immunoglobulin (C region) of Iga¥(IgA) clearly visible in CF patients. There were significant differences between saliva from healthy and CF individuals as well as in their protein profile. Results obtained in the present study indicate that stimulated whole saliva is a potential source for studies that may corroborate the development of an early and accurate screening method.

Resumo não disponível

A fibrose cística é a mais freqüente das doenças genéticas letais na raça caucasiana. O comprometimento pulmonar é o responsável pelos óbitos em 98% dos casos e a progressão da doença é avaliada pela função pulmonar, radiologia de tórax e dados clínicos dos pacientes. Inúmeros sistemas de escores foram desenvolvidos com o intuito de classificar a gravidade da doença de uma forma mais objetiva. O escore clínico de Shwachman- Kulczycki e o escore radiológico de Brasfield encontram-se entre os mais utilizados. O objetivo desse estudo foi estudar as relações entre função pulmonar, radiologia convencional de tórax e estado clínico de pacientes com fibrose cística. Foram estudados os prontuários e radiografias de 40 pacientes em acompanhamento no Centro de Fibrose Cística do Hospital de Clínicas de Porto Alegre durante 4 anos. Foram revisados seus escores de Shwachman-Kulczycki, espirometrias e radiografias realizados em um momento de estabilidade da doença. Os exames radiológicos foram analisados por um radiologista pediátrico segundo o escore de Brasfield durante a realização do estudo. A idade média dos pacientes foi de 9,72 ± 3,27. A média do Shwachman-Kulczycki foi de 80,87 ± 10,24. No ítem “atividade”, foi de 24,75 ± 1,10; no ítem “exame físico”, de 18,87 ± 4,59; no ítem “nutrição”, de 21,87 ± 4,18 e no ítem “radiologia”, de 15,37 ± 5,23. A média do Brasfield foi de 18,2 ± 4,0. As variáveis espirométricas estudadas foram CVF%, VEF1% e FEF 25-75%, com as respectivas médias de 82,99 ± 14,36 , 83,62 ± 18,26 e 74,63 ± 2,53. As correlações entre o escore de Shwachman-Kulczycki e a função pulmonar foram moderadas com a CVF% e forte com o VEF1% e o FEF 25-75%. A correlação do Brasfield com o Shwachman-Kulczycki foi forte, bem como com o ítem “radiologia”. O Brasfield se correlacionou moderadamente com a função pulmonar. As correlações entre os testes de função pulmonar e os itens do Shwachman-Kulczycki foram moderadas entre os itens “exame físico” e CVF%, VEF1% e FEF 25-75%; entre “nutrição” e o FEF 25- 75%; e entre “radiologia” e VEF1% e FEF 25-75%. Não houve significância estatística quando o ítem “atividade física” foi correlacionado com função pulmonar. Esse ítem foi o que mais contribuiu para a pontuação total do Shwachman-Kulczycki, com cada ponto seu aumentando em 1,93 o escore total. Concluimos que sistemas de escores reproduzíveis são necessários para o acompanhamento da progressão da doença. O escore de Shwachman-Kulczycki dá a percepção geral do estado clínico do paciente, englobando alterações tanto precoces (refletidas pela radiologia), quanto tardias (refletidas pela atividade física). Os escores clínicos e radiológicos utilizados para monitorização na fibrose cística são complementares, correlacionando-se positivamente entre si e com as provas funcionais. O ítem radiológico do Shwachman-Kulczycki pode ser um substituto para o Brasfield, quando não for possível a pontuação por esse último.

Introdução: A Fibrose Cística é uma doença autossômica recessiva associada a infecções respiratórias crônicas e que leva a considerável morbidade e mortalidade. O Pneumocystis jirovecii é um fungo que causa pneumonia em imunossuprimidos e cuja colonização em várias doenças pulmonares mostrou ser um fenômeno clínico importante. Objetivo: Avaliar a taxa de colonização e a distribuição dos genótipos do P. jirovecii entre pacientes com Fibrose Cística. Material e métodos: Foram estudados 34 pacientes com Fibrose Cística que realizaram broncoscopia no Hospital de Clínicas de Porto Alegre entre março de 2004 e agosto de 2007. A detecção do P. jirovecii no lavado broncoalveolar (LBA) foi feita através de nested-PCR com a utilização dos primers pAZ 102-E e pAZ 102-H no primeiro round e pAZ 102-X e pAZ 102-Y no segundo. A caracterização do gene da Diidropteroato sintetase (DIPS) e da Grande Subunidade do RNA ribossômico mitocondrial (mtLSUrRNA) foi realizada através do uso de enzimas de restrição e de seqüenciamento genético, respectivamente. Os dados clínico-demográficos dos pacientes foram obtidos dos prontuários médicos e analisados quanto à presença de colonização. Resultados: A colonização pelo P. jirovecii foi detectada em 38,2% (13/34) dos pacientes com Fibrose Cística. Nenhum dado clínico-demográfico pôde ser associado significativamente (p<0,05) à presença da colonização nos 34 pacientes estudados. Na caracterização genotípica da DIPS, o genótipo selvagem - ausência de mutações nas posições 55 e 57 – foi observado em todos os casos. Na tipagem da mtLSUrRNA, o genótipo 1 (85C/248C) foi observado em 41,6% dos casos, o genótipo 2 (85A/248C) em 16,6% , o genótipo 3 (85T/248C) em 25% e o genótipo misto 1 e 3 em 16,6% dos casos. Conclusão: Foi observada uma alta taxa (38,2%) de colonização pelo P. jirovecii entre os 34 pacientes. Este achado sugere que os portadores de Fibrose Cística podem constituir um reservatório significativo do fungo, uma importante fonte de infecção do microorganismo a outros pacientes. Quanto a uma possível associação entre a colonização pelo P. jirovecii e o curso clínico da doença, faz-se necessário estudar um número maior de pacientes. Os resultados da distribuição genotípica da mtLSUrRNA do P. jirovecii confirmam a predominância dos subtipos 1 e 3 entre os portadores da Fibrose Cística. / Introduction: Cystic Fibrosis is na autosomal recessive disorder associated to chronic respiratory infections, which leads to considerable morbidity and mortality. Pneumocystis jirovecii is a fungus that causes pneumonia in immunosuppressed patients and its colonization rate on several pulmonary diseases is a significant clinical phenomenon. Objective: Assess the rate of P. jirovecii genotypes colonization and distribution in patients with Cystic Fibrosis. Material and methods: 34 patients with Cystic Fibrosis who have undergone bronchoscopy at Hospital de Clínicas de Porto Alegre between March 2004 and August 2007 were evaluated. Detection of P. jirovecii by analysis of bronchoalveolar lavage (BAL) was carried out with nested-PCR, with the use of primers pAZ 102-E and pAZ 102-H in the first round, and pAZ 102-X and pAZ 102-Y in the second round. Characterization of the diihydropteroate synthase (DHPS) gene and the mitochondrial Large Subunit ribosomal RNA (mtLSUrRNA) was performed with the use of restriction enzymes and genetic sequencing, respectively. The clinical and demographic data of patients was obtained from their medical records and analyzed for the presence of colonization. Results: P. jirovecii colonization was detected in 38,2% (13/34) of the patients with Cystic Fibrosis. No clinical-demographic data was significantly associated (p<0,05) to the presence of colonization in the 34 studied patients. Genotypical characterization of DHPS, the wild genotype – absence of mutations in the 55 and 57 positions – was observed in all the cases. In mtLSUrRNA typing genotype 1 (85C/248C) was observed in 41,6% of the cases, genotype 2 (85A/248C) in 16,6%, genotype 3 (85T/248C) in 25% and mixed genotype 1 and 3 in 16,6% of the cases. Conclusion: A high rate (38,2%) of P. jirovecii colonization was found in the 34 patients. This finding suggests that Cystic Fibrosis patients may constitute a major reservoir and source of infection for other patients. As for a possible association between P. jirovecii colonization and the clinical evolution of the disease, further research with a greater number of subjects is needed. The results of P. jirovecii mtLSUrRNA genotypical distribution confirm the predominance of subtypes 1 and 3 among Cystic Fibrosis patients.

Neste estudo, avaliamos quantitativamente, pela técnica de PCR em tempo real, a transcrição do mRNA dos genes CTGF, TGF-β e KIM-1, em biópsias de pacientes transplantados renais com disfunção do enxerto. Testamos a hipótese de que, em pacientes com doença crônica do transplante renal, essas moléculas estão envolvidas no desenvolvimento de fibrose desses enxertos, apresentando aumento da sua expressão gênica, e que essa expressão aumenta na medida em que o grau de fibrose tecidual é mais intenso. Setenta e sete pacientes transplantados renais que foram submetidos a biópsia renal por disfunção do enxerto entre janeiro de 2008 e dezembro de 2009 foram incluídos no estudo. Pacientes e biópsias foram classificados em quatro grandes grupos de diagnóstico, de acordo com a classificação Banff-2007: necrose tubular aguda (NTA; n = 9), rejeição aguda (RA, n = 49), nefrotoxicidade aguda por inibidor da calcineurina (NIC; n = 10) e fibrose intersticial e atrofia tubular (IF/TA; n = 29). Para os genes CTGF e TGF-β, os níveis de mRNA foram significativamente maiores em IF/TA em comparação com NIC e RA. Para o gene KIM-1, os níveis de mRNA no grupo IF/TA foram maiores do que no grupo NIC. Além disso, verificamos que a expressão dos genes CTGF, TGF-β e KIM-1 aumenta com a intensidade da fibrose observada nos exames patológicos. A avaliação molecular do tecido do enxerto renal pode ser usada para aprimorar o diagnóstico patológico e para o possível desenvolvimento de biomarcadores.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-03T12:12:48Z No. of bitstreams: 1 THIAGO JOSÉ FIGUEIRA RAMOS.pdf: 1733228 bytes, checksum: c1606fa7a4e1569d3cc660ae62c32331 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T12:12:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 THIAGO JOSÉ FIGUEIRA RAMOS.pdf: 1733228 bytes, checksum: c1606fa7a4e1569d3cc660ae62c32331 (MD5) Previous issue date: 2012-10-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A silicose é uma doença ocupacional causada pela inalação de sílica em sua forma livre e cristalina. A inflamação e fibrose pulmonar constituem as principais características da patologia, que envolve uma variedade de mediadores inflamatórios, como o TNF-α, um mediador de ações amplas e que exerce seus efeitos em um grande número de tipos celulares. LASSBio-468 é um análogo da talidomida já descrito como capaz de modular a produção de TNF-α e inibir o choque endotóxico e artrite reumatóide em modelos animais. Neste estudo, nós investigamos o potencial efeito do LASSBio-468 em modelo de silicose experimental em camundongos. Animais Swiss-webster machos (18 – 20g) foram instilados intranasalmente com uma suspensão de sílica (10 mg/50 μL) e veículo (salina). O tratamento consistiu na administração por via oral de LASSBio-468 (12,5 – 100 mg/kg) e talidomida (50 mg/Kg) durante 7 dias consecutivos, do vigésimo primeiro ao vigésimo oitavo dia após a instilação de sílica. Foram analisadas a função pulmonar (resistência e elastância) e hiperreatividade das vias aéreas à aerolização de metacolina (3 – 27 mg/mL), através de pletismógrafo invasivo de corpo inteiro (Finepoint, Buxco System), além de análises morfológicas e morfométricas do tecido pulmonar. A produção de colágeno tecidual foi acessada pelo método de sircol, enquanto que a quantificação de citocinas/quimiocinas foi realizada pelo ensaio de ELISA. A técnica de imunohistoquímica permitiu a identificação da população de miofibroblastos no pulmão. Através de uma digestão mecânica e enzimática do tecido pulmonar, obtivemos uma cultura primária de miofibroblastos que, assim como macrófagos alveolares AMJ2C11 e células epiteliais A549, foram pré-tratados com diferentes concentrações de LASSBio-468 e talidomida, estimulados com IL-13 ou sílica e avaliados quanto a proliferação celular, viabilidade e produção de mediadores inflamatórios in vitro. Demonstramos que animais silicóticos apresentaram níveis basais elevados de resistência pulmonar e elastância, bem como hiperreatividade frente à aerolização de metacolina. Resposta inflamatória tecidual, extensiva deposição de colágeno, formação de granuloma e produção de quimiocinas (KC and MCP-1) e citocinas (TNF- αand TGF-β) também foram detectadas em pulmões de animais silicóticos, assim como o aumento do número de miofibroblastos no tecido. O tratamento com LASSBio-468 reduziu o comprometimento da função pulmonar e hiperreatividade, formação de granulomas, expressão de miofibroblastos e deposição de colágeno no tecido pulmonar de animais doentes. Miofibroblastos oriundos de animais silicóticos apresentaram basal de proliferação superior, sendo responsivos também ao estímulo mitogênico da IL-13, que foi atenuado frente ao pré-tratamento com LASSBio-468. A estimulação de macrófagos alveolares e células epiteliais com sílica promoveu a liberação de TNF-α e IL-8, respectivamente, sendo o LASSBio-468 capaz de inibir de forma significativa esta produção. Em conjunto, nossos resultados mostraram que o tratamento com LASSBio-468 foi capaz de reduzir de forma curativa o comprometimento da função pulmonar e resposta granulomatosa, através de ações sobre células específicas, indicando que o composto em questão parece constituir uma promissora ferramenta para o tratamento de doenças pulmonares fibróticas crônicas como a silicose. / Silicosis, one of the oldest occupational diseases in the world, is a consequence of long-term exposure to inhaled dust containing silica in its free and crystalline form. Lung interstitial inflammation and fibrosis are the main features of the disease, involving a wide range of chemical mediators such as TNF-α. This is a pleiotropic molecule which exerts its effects on many cell types. LASSBio-468 is a thalidomide analogue which modulates TNF-α production and inhibits endotoxic shock and arthritis in animal models. In this study we investigated the effect of LASSBio-468 on experimental silicosis in mice. Anesthetized male Swiss-Webster mice (18-20g) received intranasal (i.n.) instillation of silica (10 mg/50 μL) and vehicle (saline). Treatment consisted of oral administration of the LASSBio-468 (12,5 - 100 mg/kg) and thalidomide (50 mg/Kg) during 7 consecutive days, from day 21 to 28 post-silica. The analyses included lung function (resistance and elastance) and airways hyperreactivity to aerosolized metacholine (3 -27 mg/mL) measured by whole body invasive plestimography (Finepoint, Buxco System). Morphological and morphometrical analyses included classical dyes such as Hematoxylin-Eosin and Picrus-Sirius. Collagen content and cytokine/chemokine generation were quantified by Sircol technique and ELISA, respectively. Immunohistochemistry was employed to identify the lung myofibroblastic population. Primary murine myofibroblasts cells were obtained after a mechanical and enzymatic digestion of the lung from saline and silicotic mice. Myofibroblasts, AMJ2C11 alveolar macrophages and A549 epithelial cells were pre-treated with LASSBio-468 and Thalidomide, stimulated with IL-13 or silica and evaluated thought proliferation, viability and production of inflammatory mediators in vitro. We showed that silicotic mice exhibited increased basal levels of lung resistance and elastance as well as airways hyperreactivity to methacholineaerosolization. Tissue inflammatory response, extensive collagen deposition, granuloma formation and chemokine (KC and MCP-1)/cytokine (TNF-α and TGF-β) generation were also detected in the silicotic lungs, as well as an increasing of myofibroblasts expression in the lung. Administration of LASSBio- 468 into silicotic mice reduced the decline lung function and airways hyperreactivity, myofibroblasts numbers, tissue collagen deposition and granulomatous area. The generation of cytokines and chemokines was also suppressed by the drug. The primary lung myofibroblasts obtained from silicotic mice showed a superior basal proliferation and IL-13, a pro-fibrotic cytokine, stimulated the (3H) incorporation in vitro, which was diminished by the treatment with LASSBio-468. Stimulation of alveolar macrophages and epithelial cells by silica in vitro increased the release of TNF-α and IL-8, respectively, and LASSBio-468 was able to reduce these inflammatory mediators production. The compound modulated key cells functions without decline in cell death. Altogether our findings show that the treatment of silicotic mice with LASSBio-468 reduced curatively the decline in lung function and granulomatous response, throught actions on myofibroblasts, macrophages and epithelial cells, indicating that this compound constitutes a promising tool for the treatment of chronic fibrotic pulmonary diseases such as silicosis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Nutrição, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 321861.pdf: 2061544 bytes, checksum: 394d4edcf723d87d41be41f6f495b774 (MD5) Previous issue date: 2013 / Introdução: A presença da mutação mais comum e frequente da Fibrose Cística (FC), a delta F508, está relacionada a manifestações clínicas mais severas da doença e com a piora do estado nutricional. Estes são fatores que estão inter-relacionados com a nutrição e atualmente poucos elucidados. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação do estado nutricional e os fatores dietéticos em pacientes com FC portadores da mutação delta F508.Métodos: Estudo transversal (setembro/2012 a junho/2013) com crianças e adolescentes com FC, atendidos no Hospital Infantil Joana de Gusmão (HIJG), Santa Catarina, com idade = 5 anos, com exame de genotipagem para a presença da mutação delta F508 e sem doenças associadas (nanismo, microcefalia e hipotireoidismo congênito). Foram coletadas variáveis sociodemograficas, clínicas, de estado nutricional e de consumo alimentar. O estado nutricional foi representado pelo Índice de Massa Corpórea (IMC) em percentil utilizando as curvas de crescimento do World Health Organization (2006). O consumo alimentar foi avaliado através de 3 dias de registros alimentares não consecutivos (2 dias durante a semana e 1 dia de final de semana). A média do consumo alimentar obtida através dos 3 dias de registro foi ajustado para variância intrapessoal e interpessoal e pelo valor calórico total (VCT) através do método residual utilizando modelo de regressão linear. Os participantes foram divididos em três grupos de acordo com a presença da mutação delta F508: homozigotos delta F508, heterozigotos delta F508 e ausência da mutação delta F508. Para analise estatística foram utilizados teste de qui-quadrado, Fisher, ANOVA e Kruskal-Wallis. Foi utilizada a regressão de Poisson para estimar as razões de prevalência (RP) para IMC =25° e para um VCT =150% Estimated Energy Requirement (EER) na presença da mutação delta F508. Em todas as análises foi considerado o valor de 5% como nível de significância estatística.Resultados: Um total de 36 pacientes foi avaliado (mediana de 8,6 anos; IQ 6,8 - 12,5; 50% do sexo masculino), sendo 27,7% (n = 10) homozigotos delta F508, 47,3% (n = 17) heterozigotos delta F508 e 25,0% (n = 9) não apresentavam a mutação. Os pacientes homozigotos delta F508 demonstraram ter um menor percentil de IMC (21,9 ± 23,3° vs. 30,1 ± 26,1° e 52,2 ± 29,3° ; p = 0,017) quando comparados aos pacientes heterozigotos e sem a presença da mutação, respectivamente. Quando o consumo alimentar foi analisado, os pacientes portadores da mutação delta F508, homozigotos e heterozigotos, tiveram um menorconsumo do VCT (%EER) em relação aos pacientes com ausência desta mutação (130,6 ± 17,8% vs. 115,0 ± 32,5% e 146,2 ± 27,9%; p = 0,033). Além disso, na análise do VCT em categorias, os pacientes homozigotos e heterozigotos para mutação delta F508, apresentaram valores menores de prevalência =150%EER quando comparados ao grupo dos pacientes sem esta mutação (10,0%; IC95% 0,4 ? 64,1 vs. 5,9%; IC95% 0,0 - 45,9 e 44,4%; IC95% 11,8 ? 88,2; p = 0,026). Tais associações foram confirmadas no modelo de regressão de Poisson onde foi demonstrada uma associação negativa e significativa entre a presença da mutação delta F508 e um IMC =25° e um VCT =150% EER: pacientes homozigotos e heterozigotos delta F508 tiveram uma prevalência 60% menor de um IMC =25° (RP 0,4; IC95% 0,2-0,8) e uma prevalência 90% menor de um VCT =150%EER (RP 0,1; IC95% 0,02-0,3). Modelos ajustados para função pulmonar, %EER e IMC (p <0,05 para todos os modelos).Conclusão: Pacientes portadores da mutação delta F508 apresentaram um menor percentil de IMC e menor consumo calórico diário comparado aos pacientes sem a mutação. <br> / Abstract : Introduction: The presence of the most common and frequent mutation of Cystic Fibrosis (CF), delta F508, is related to more severe clinical manifestations of the disease and worsening nutritional status. These factors are interrelated with nutrition and currently few elucidated. The aim of this study was to evaluate the association between nutritional status and dietary factors in CF patients with the delta F508 mutation.Methods: Cross-sectional study (September/2012 to June/2013) with children and adolescents with CF treated at the Hospital Infantil Joana (HIJG), Santa Catarina, Brazil, aged = 5 years, with a genotyping test for the presence of the mutation delta F508 and without comorbidities (dwarfism, microcephaly and congenital hypothyroidism). We collected sociodemographic variables, clinical variables, nutritional status variables and food consumption variables. Nutritional status was represented by body mass index (BMI) percentile, using the growth curves of the World Health Organization (2006). Dietary intake was assessed using 3-day food records nonconsecutive (two days during the week and 1 day weekend). The average food consumption obtained through the 3-day record was set for within-person variance, between-person variance and the total caloric value (TCV) through the residual method using linear regression model. The participants were divided into three groups according to the presence of the delta F508: delta F508 homozygotes, heterozygotes delta F508 and absence of the mutation delta F508. For statistical analysis we used chi-square, Fisher, ANOVA and Kruskal-Wallis. We used Poisson regression to estimate prevalence ratios (PR) for BMI = 25° and TCV = 150% of Estimated Energy Requirement (%EER) in the presence of the delta F508. In all analyzes, we considered the 5% statistical significance level.Results: A total of 36 patients were evaluated (median 8.6 years, IQ 6.8 to 12.5, 50% male), 27.7% (n = 10) homozygous delta F508, 47.3 % (n = 17) heterozygotes delta F508 and 25.0% (n = 9) had no mutation. Patients homozygous delta F508 shown to have a lower BMI percentile (21.9 ± 23.3 ° vs. 30.1 ± 26.1 ° and 52.2 ° ± 29.3, p = 0.017) compared with patients heterozygous and without the presence of mutation, respectively. When food intake was analyzed, patients with the delta F508 mutation, homozygotes and heterozygotes, had a lower consumption of VCT (%EER) compared to patients without this mutation (130.6 ± 17.8% vs. 115, 0 ± 32.5% and 146.2 ± 27.9%, p = 0.033). Furthermore, the analysis of VCT into categories, patientshomozygous and heterozygous for delta F508, showed the lowest prevalence = 150%EER when compared with patients without this mutation (10.0%, 95% CI 0.4 - 64.1 vs. 5.9%, 95% CI 0.0 to 45.9 and 44.4%, 95% CI 11.8 to 88.2, p = 0.026). When food intake was analyzed, patients with the delta F508 mutation, homozygous (130.6% ± 17.8, p = 0.033) and heterozygotes (115.0% ± 32.5, p = 0.033) were found to have a lower consumption VCT above EER compared to patients without this mutation (146.2% ± 27.9, p = 0.033). Furthermore, the analysis of VCT into categories according to EER, patients homozygous and heterozygous for delta F508, showed the lowest prevalence = 150%EER when compared with patients without this mutation (10.0%; 95%CI 0.4 ? 64.1 vs. 5.9%; 95%CI 0.0 ? 45.9 vs. 44.4%; 95%CI 11.8 ? 88.2; p = 0.026, respectively). The associations were confirmed in the Poisson regression model which was demonstrated a significant and negative association between the presence of the delta F508 and a BMI = 25 ° and VCT = 150%EER: heterozygous and homozygous delta F508 had lower prevalence 60% to BMI = 25° (PR 0.4, 95%CI 0.2-0.8) and lower prevalence 90% to VCT = 150%EER (PR 0.1, 95%CI 0.02 to 0, 3). Models adjusted for lung function, %EER and BMI (p <0.05 for all models).Conclusion: Patients with the delta F508 mutation had a lower BMI percentile and lower daily calorie consumption compared to patients without the mutation.

O trabalho avalia a contribuição da tomografia computadorizada de alta resolução (TCAR) para o estudo das alterações torácicas na fibrose cística, através da comparação com o exame radiologico convencional do tórax (ERCT). Determina os achados patológicos de 25 pacientes (com 5 a 17 anos) na TCAR e os compara com os identificados no ERCT. Os exames foram realizados em sucessão imediata. Utilizaram-se cortes axiais de 2 mm de espessura, com ]Omm de intervalo entre eles; tempo de rastreamento de 1,4 e 2,0 s; 125 kV e 150 mA. As TCAR foram fotografadas em 3 janelas de densidades apropriadas ao estudo do tórax: parênquima (nível-l024 e janela de 1200 a 2050), brônquios (nível- 550 a - 1000 e janela 1700 a 2300) e mediastino (nível - 30 a -80 e janela 320 a 500). Os achados mais freqüentemente detectados na TCAR do que no ERCT são: espessamento brônquico (100 %), bronquiectasias cilíndricas (96 %), adenomegalias (92 %), impacção mucóide (84 0/0), consolidação e/ou atelectasia (48 %), espessamento pleural costal (32 %), bolhas (20 %) e enfisema localizado (8 %). Bronquiectasias císticas (52 %) e deformação e/ou espessamento das cissuras (60 %) foram mais freqüentes no ERCT. A identificação de alterações das VIas aéreas nos segmentos broncopulmonares foi significativamente superior na TCAR (p<0,05). Em ambos exames, os lobos à direita foram mais freqüentemente comprometidos, especialmente o superior. Verificou-se, em 16 % das TCAR, espessamento do tecido intersticial ao longo dos feixes broncovasculares dos segmentos basais de ambos os pulmões, incluil1do vasos venosos e a gordura presente entre estas diferentes estruturas. A aplicação de sistema de escores para os achados da TCAR permite avaliação mais objetiva da extensão e intensidade das alterações detectadas, diminuindo o componente subjetivo da interpretação radiológica. A TCAR contribui para o entendimento da natureza de alguns achados do ERCT. / This study evaluate the contribution of high resolution computed tomography (HRCT) in assessing thoracic involvement in cystic fibrosis, as compared to chest plain radiography (CPR). The HRCT findings of 25 patients (5 to 17 years old) were determined and compared with those obtained by CPR. The two investigations were performed in elose succession. Sections 2 mm thick were obtained at 10 mm intervals with IA to 2.0 s acquisition time at 125 kV and 150 mA. AlI images were photographed at three leveIs and windows settings appropriated for evaluation of the thorax: parenchyma (widths 1200 to 2050 at leveI -1024), bronchi (widths 1700 to 2300 at leveI -550 to -] 000) and mediastinum (widths 320 to 500 at leveI -30 to -80). The findings more frequently detected by HRCT than by CPR were: peribronchial thickening (100 %), cylindrical bronchiectasis (96 %), adenomegaly (92 %), mucus plugging (84 %), consolidationlatelectasis (48 %), costal pleural thickening (32 %), bullae (20 %) and local emphysema (8 %). Cystic bronchiectasis (52 0/0) and fissures deformationlthickening (60%) were more frequent1y detected by CPR. Detection of airways abnormalities in the bronchopulmonary segments was significant1y superior by HRCT (p<0,05). By either exam the right lobes were more frequently involved, specially the upper lobe. Thickening of the intersticial tissue along the bronchovascular bundles in bilateral basilar segments, ineluding venous vessels and the fat present between these different structures, were manifested in ]6 % of the HRCT exams. The use of a scoring system to HRCT findings allows a more objetive evaluation of the extent and severity of the abnormalities detected and diminish the subjective component of radiographic interpretation. HRCT did contribute to the understanding ofthe pathologic nature of some CPR findings.

O objetivo dessa revisão é descrever achados clínicos, epidemiológicos e fisiopatológicos, o manejo, e tratamento da intolerância à glicose e diabetes melito na Fibrose Cística. Fibrose Cística (FC) é a doença autossômica recessiva mais comum na população caucasiana. Sua prevalência é de 1: 2500 nascidos vivos.Ocorre por mutações que afetam um único gene que codifica a proteína cystic fibrosis transmembrane regulator ou CFTR responsável pelo transporte dos íons cloreto e outros eletrólitos através da membrana epitelial de vários órgãos e tecidos, entre os quais, pâncreas e trato respiratório. Considerada uma doença de alta morbimortalidade em virtude das complicações que provoca, principalmente doenças respiratórias e desnutrição. Nos últimos 30 anos, houve um aumento da expectativa de vida dessa população, apesar disso, outras complicações passaram a surgir como as alterações de tolerância à glicose (ATG) e a diabetes melito (DM). Diabetes melito relacionado a fibrose cística (DRFC) e ATG estão relacionadas à diminuição da sobrevida na FC, pois estão associadas à progressão mais rápida do declínio da função pulmonar e à piora do estado nutricional nesses pacientes. O teste oral de tolerância à glicose (TTG) tem sido utilizado para identificar alterações mais precoces de tolerância à glicose e diagnosticar DRFC principalmente sem hiperglicemia de jejum. Apesar de não ser totalmente elucidado pela literatura, a prevenção ou a monitorização das ATG, assim como o diagnóstico de DRFC e do seu tratamento quando indicado, parecem estar associados a estabilização da doença pulmonar e do estado nutricional e, com isso, a melhora da sobrevida desses pacientes. / The aim of this review was to describe the epidemiological, clinical and pathological features, the management and treatment of impaired glucose tolerance and diabetes mellitus in cystic fibrosis. Cystic fibrosis (CF) is the most common autosomal recessive disease in the Caucasian population. Its prevalence is about 1:2500 for live births. It occurs by mutations that affect a single gene that encodes the protein cystic fibrosis transmembrane regulator or CFTR responsible for the transport of chloride ions and other electrolytes through the epithelial membrane to various organs and tissues, including, pancreas and respiratory tract. Considered a disease of high morbimortality because the complications it causes especially respiratory diseases and malnutrition. Over the last 30 years, there was an increase in life expectancy of this population; however, other complications began to emerge as the changes in glucose tolerance and diabetes mellitus (DM). Cystic fibrosis related diabetes (CFRD) and impaired glucose tolerance (IGT) are related to decreased survival in CF, as they are associated with more rapid progression of decline in lung function and the deterioration of nutritional status in these patients. The oral glucose tolerance test (OGTT) has been used to identify the earlier changes in the glucose tolerance and diagnose of CFRD mainly without fasting hyperglycemia. Although not fully elucidated by literature, the prevention or the monitoring of IGT, and the diagnosis of CFRD and its treatment when indicated, appears to be linked to the lung disease stabilization, nutritional status and thereby survival improvement of these patients.