Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-07T14:12:03Z No. of bitstreams: 1 Filipe Queiros Gondim Bezerra.pdf: 680484 bytes, checksum: 8941d5bb069bfda96fd37c2db5f99b53 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-07T14:12:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Filipe Queiros Gondim Bezerra.pdf: 680484 bytes, checksum: 8941d5bb069bfda96fd37c2db5f99b53 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to determine the effect of seasons on nuclear maturation in vitro and inductions of cell death by apoptosis in sheep oocytes as well as the effect on the ability of develop from oocytes in vitro sheep embryos. The ewes ovaries during the dry season (October to March) and rainy season (April-September) were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of "slicing" of the follicles from 2 to 6 mm in diameter and selected based on morphology. In this stage were performed 12 repetitions, where the COCs were subjected to maturation, and in vitro fertilization. The percentage of cleaved oocytes was determined on day 3 (D-3) and the oocytes that developed to the stages of 8-16 cells (D-4), morula (D-5) and blastocyst (D-8) after fertilization. The blastocysts quality was assessed with the pigment DAPI and the determination of blastomeres positive for apoptosis and DNA fragmentation by TUNEL test. It was found significant difference (P <0.05) during D-3 and D-4 fertilization stages. No significant difference (P>0.05) was observed on morula and blastocyst in vitro maturation phases and DNA fragmentation (TUNEL). In the stage 25 oocytes were placed in maturity basic medium (MBM). After maturation, we determined the stage of maturity with the nuclear dye DAPI, the enzyme activity of group II caspases with reagent PhiPhiLux-G1D2 and DNA fragmentation (TUNEL). In the stages of nuclear maturation stages of germinal vesicle, metaphase I, telophase I and metaphase II showed no significant difference (P> 0.05). Significant difference (P <0.05) in enzyme activity of caspases in vitro matured oocytes. The DNA fragmentation was not significantly different (P> 0.05). Under the conditions observed in this study, the results indicate that there was no effect of season on in vitro nuclear maturation and apoptosis of oocytes as well as on the development of oocytes and in vitro production of sheep embryos. / Este estudo teve como objetivo determinar o efeito das estações do ano na maturação nuclear in vitro e na indução da morte celular por apoptose em oócitos ovino também como o efeito na capacidade de desenvolvimento de oócitos na produção in vitro de embriões da espécie ovina. Os ovários de ovelhas na estação seca (outubro a março) e chuvosa (abril a setembro) foram colhidos em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram colhidos pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na morfologia. Nesta etapa foram realizadas 12 repetições, onde os CCOs foram submetidos a maturação, fertilização e cultivo in vitro. A porcentagem de oócitos clivados foi determinada no dia 3 (D-3) e os oócitos que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células (D-4), mórula (D-5) e blastocisto (D-8) após a fecundação. A qualidade dos blastocistos foi avaliada com o corante DAPI e a determinação deblastômeros positivos para apoptose e fragmentação de DNA através do teste de TUNEL. Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) nas fases fertilização, D-3 e D-4. Não apresentaram diferença significativa (P > 0,05) às fases de maturação in vitro, mórula e blastocisto e na fragmentação de DNA (TUNEL). Em outra etapa 25 oócitos foram colocados em meio básico de maturação (MBM). Após a maturação, foi determinado o estádio de maturação nuclear com o corante DAPI, a atividade das enzimas Caspases do grupo II com reagente PhiPhiLux-G1D2 e fragmentação de DNA (TUNEL). Nos estádios de maturação nuclear as fases de Vesícula Germinativa, Metáfase I, Telófase I e Metáfase II não apresentaram diferença significativa (P > 0,05). Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) na atividade das enzimas Caspases dos oócitos maturados in vitro. A fragmentação do DNA não apresentou diferença significativa (P > 0,05). Nas condições observadas neste estudo, os resultados permitem concluir que não houve efeito da estação do ano na maturação nuclear in vitro e na apoptose de oócitos também como na capacidade de desenvolvimento de oócitos e na produção in vitro de embriões da espécie ovina.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-03T12:32:37Z No. of bitstreams: 1 Ricardo de Macedo Chaves.pdf: 847836 bytes, checksum: d3823ad319704f7a05a04fb624401ca9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-03T12:32:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo de Macedo Chaves.pdf: 847836 bytes, checksum: d3823ad319704f7a05a04fb624401ca9 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study was divided in three stages and aimed to determine the cellular changes induced by heat stress on nuclear maturation in vitro and induction of cell death by apoptosis in goat oocytes and embryos. The ovaries of goats in the dry season and rainy season were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The first stage, the cumulus oophorus complexes in goat of 12 repetitions were collected by the technique of "slicing" of the follicles from 2 to 6 mm in diameter and selected based on morphology. Divided into Group-1 (recovered) and Group-2 (in vitro matured), 25 oocytes per drop were placed in basic medium maturity (MBM). After collection of oocytes, it was determined the quality of oocytes, the enzyme activity of group II caspases with reagent PhiPhiLux-G1D2 and DNA fragmentation (TUNEL). Group-2, after maturation, were determined the stage of nuclear maturation, enzymes caspases and DNA fragmentation. In the stages of nuclear maturation stages of germinal vesicle, disruption of the germinal vesicle, metaphase I and II showed no significant difference (P > 0.05). There was no significant difference (P > 0.05) in the activity ofenzymes and caspases in DNA fragmentation of oocytes recovered and matured in vitro. The second stage, the cumulus oophorus complexes in goat were submitted to maturation, fertilization and in vitro. The percentage of cleaved oocytes was determined on day 3 (D-3) and the oocytes that developed to the stages of 8-16 cells (D-4), morulae (D-5) and blastocyst (D-8) after fertilization. The quality of blastocysts was assessed with the pigment DAPI and the determination of blastomeric positive for apoptosis by TUNEL assay. Significant difference (P < 0.05) stages of fertilization, cultivation in D-3 and morulae. No significant difference (P > 0.05) phases of maturation, growing on D-4, blastocyst and the TUNEL test. Based on these results, we concluded that the dry and rainy seasons will notinfluence the nuclear maturation in vitro apoptosis of oocytes and embryos and in vitro production of embryos in goats. / Este estudo foi dividido em duas etapas e teve como objetivo determinar as alterações celulares induzidas pelo estresse térmico na maturação nuclear in vitro e na indução da morte celular por apoptose em oócitos e embriões caprinos. Os ovários de cabras nas estações seca e chuvosa, foram coletados em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Na primeira etapa, os complexos cumulus oophorus caprinos de 12 repetições foram colhidos pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na morfologia. Divididos em Grupo-1 (recuperado) e Grupo-2 (maturados in vitro), 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos, foi determinado a qualidade dos oócitos, atividade das enzimas Caspases do grupo II com reagente PhiPhiLux-G1D2 e fragmentação de DNA (TUNEL). O Grupo-2, após maturação, foi determinado o estádio de maturação nuclear, enzimas Caspases e fragmentação de DNA. Nos estádios de maturação nuclear as fases de Vesícula Germinativa, Rompimento da Vesícula Germinativa, MetáfaseI e II não apresentaram diferença significativa (P > 0,05). Não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas Caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos recuperados e maturados in vitro. Na segunda etapa, os complexos cumulus oophorus caprinos foram submetidos à maturação, fertilização e cultivo in vitro. A porcentagem de oócitos clivados foi determinada no dia 3 (D-3) e os oócitos que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células (D-4), mórula (D-5) e blastocisto (D-8) após a fertilização. A qualidade dos blastocistos foi avaliada com o corante DAPI e a determinação de blastômeros positivos para apoptose através do ensaio de TUNEL. Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) nas fases de fertilização, cultivo no D-3 e mórula. Não apresentaram diferença significativa (P > 0,05) às fases de maturação, cultivono D-4, blastocisto e no teste de TUNEL. Com base nos dados obtidos, podemos concluir que as estações seca e chuvosa não exercem influência na maturação nuclear in vitro, na apoptose de oócitos e embriões e na produção in vitro de embriões da espécie caprina..

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-01T13:00:01Z No. of bitstreams: 1 Maria do Carmo Rodrigues de Medeiros.pdf: 391424 bytes, checksum: 5d4ef37040a5c34e7019b007848f47c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-01T13:00:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria do Carmo Rodrigues de Medeiros.pdf: 391424 bytes, checksum: 5d4ef37040a5c34e7019b007848f47c9 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Aiming to evaluate the effect of crude equine pituitary extract (EPE), obtained during anestrous, on superovulation, and follicular and luteal vascularity, it was used six purebred Arabian mares in two estrous cycles (control and treatment). Mares were synchronized using prostaglandin F2α, and monitored daily by ultrasound B mode until the follicles reached diameter close to 23 mm (deviation). In this moment, mares in the treatment cycle received 8 mg of EPE, once a day, intramuscularly, until two or more follicles reached a diameter between 32 and 35 mm. Ovulation was induced with deslorelin acetate (750 mcg, MI) when follicles reached at least 35 mm. At the time of follicular deviation, induction of ovulation and final preovulatory exam, it was used B-mode ultrasound to measure the diameter of follicles, and, on the eighth day after ovulation, to measure the area of the corpus luteum (CL); color Doppler was also used to assess blood perfusion of the follicle wall and luteal parenchyma. In the control cycle was performed the same procedure except for the use of EPE. There was no effect of EPE on ovulation number, diameter of follicles, vascularity of the follicular wall and serum estrogen concentration. Animals treated or not, showed functional CLs, with no difference in parenchymal area or luteal vascularization, or in serum progesterone concentration on the eighth day after ovulation. It was observed that the EPE provided a greater number of subordinate follicles at the time of induction of ovulation of the dominant follicle. Although these follicles have failed to ovulate, it was concluded that EPE influenced the follicles growth, and it can be used in other biotechnologies, with greater utilization of equine ovarian follicular reserve. / Com o objetivo de avaliar o efeito do extrato bruto de pituitária equina (EPE), produzido no período de anestro estacional, sobre a superovulação e vascularização folicular e luteal, foram utilizadas seis éguas da raça Puro Sangue Árabe, em dois ciclos estrais (controle e tratamento). As éguas foram sincronizadas utilizando prostaglandina F2α, e monitoradas diariamente, por ultrassonografia modo B, até que os folículos atingissem diâmetro de aproximadamente 23 mm (desvio). No ciclo tratamento, a partir do desvio, as éguas receberam 8 mg de EPE, uma vez ao dia, por via IM, até que dois ou mais folículos atingissem diâmetro entre 32 a 35 mm. A ovulação foi induzida com acetato de deslorelina (750 μg, IM) quando os folículos atingiram no mínimo 35 mm. No momento do desvio folicular, da indução da ovulação e do último exame pré-ovulatório foi utilizada a ultrassonografia modo B para medir o diâmetro dos folículos e a área do corpo lúteo no oitavo dia pós-ovulação; também foi usado Doppler colorido para avaliar a perfusão sanguínea da parede folicular e do parênquima luteal, em todos os momentos. No ciclo controle foi realizado o mesmo procedimento exceto pelo uso do EPE. Não foi observado efeito do EPE sobre número de ovulações, diâmetro dos folículos, vascularização da parede folicular e concentração sérica de estrógeno. Os animais tratados ou não, apresentaram CLs funcionais conforme a concetração sérica de progesterona, não havendo diferença na área do parênquima ou vascularização luteal, nem na concentração de progesterona, no oitavo dia após a ovulação. Foi observado que o EPE proporcionou um maior número de folículos subordinados no momento da indução da ovulação do folículo dominante. Embora estes folículos não tenham chegado a ovular, concluiu-se que o EPE atuou no crescimento de folículos, que podem ser utilizados em outras biotécnicas como aspiração folicular, com maior aproveitamento da reserva folicular de ovários equinos.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Klayto Jose Goncalves dos Santos.pdf: 661017 bytes, checksum: 02f9686f6a0ec71d996c292c1817d5b9 (MD5) Previous issue date: 2010-08-27 / The reproductive and productive index of dairy cattle in Brazil are below the desirable rates, and, in recent decades, the increase in milk production occurred, partly, more because of the expansion of explored areas and the increase of herds than due to an effective productive increment. The development and application of reproductive biotechnologies are essential conditions for improving reproductive efficiency, especially for domestic ruminants, and techniques such as artificial insemination and embryo transfer have been successfully used. Other biotechnologies such as in vitro embryo production, cloning and genetic modification help to accelerate genetic improvement, because they include animals with superior desirable traits, although the results in terms of production are not so good. The main goal of an embryo transfer program is to obtain a high number of viable embryos per donor, after exogenous hormones administration, by increasing the number of oocytes released, enabling the embryo transfer to recipient cows in order to complete the gestation. Cows are born with more than 100,000 oocytes in ovarian follicles, but by natural via, only 0.01% of viable products can be generated, or a number close to 10 calves throughout their reproductive life. One of the proposed solutions to this problem was the development of in vitro production (IVP) of bovine embryos, a major biotech assisted reproduction, which allows the interaction of sperm with oocyte outside the female reproductive tract. Although these biotechnologies are used in many dairy and beef herds, efficiency of an IVP program is limited, among other factors, because of the oocyte recovery rates and the individual variation of ovarian response to FSH treatment, requiring more studies to evaluate the association between follicular waves and superstimulatory treatments, mainly in dairy animals. / Os índices reprodutivos e produtivos da pecuária bovina leiteira brasileira estão abaixo do desejável, e a elevação na produção de leite nas últimas décadas ocorreu, em parte, mais pela expansão das áreas exploradas e o aumento do efetivo de rebanho que pelo real incremento na produtividade. O desenvolvimento e a aplicação de biotécnicas reprodutivas são condições indispensáveis para a melhoria na eficiência reprodutiva, e especialmente para os ruminantes domésticos, técnicas como a Inseminação Artificial e Transferência de Embriões vêm sendo utilizadas com sucesso. Outras biotécnicas como a produção in vitro de embriões, clonagem e transgenia, contribuem para acelerar o melhoramento genético, pois incluem a utilização de animais provados e com características desejáveis superiores, mas apresentam resultados inferiores em termos de produção. A principal meta do programa de TE é a superovulação, cujo objetivo é obter, após administração de hormônios exógenos, elevado número de embriões viáveis por doadora pelo aumento do número de oócitos liberados, possibilitando a transferência dos embriões obtidos após a inseminação artificial para o trato reprodutivo de receptoras para completarem a gestação. As fêmeas bovinas nascem com mais de 100.000 oócitos nos folículos ovarianos, mas pelas vias naturais, apenas 0,01% de produtos viáveis podem ser gerados, ou seja, um número próximo a dez descendentes em toda sua vida reprodutiva. Uma das soluções propostas para esse problema foi o desenvolvimento da produção in vitro (PIV) de embriões bovinos, uma importante biotécnica de reprodução assistida, a qual permite a interação do espermatozóide com o oócito fora do trato reprodutivo feminino, com a formação de um novo indivíduo. Embora essas biotécnicas sejam utilizadas em muitos rebanhos tanto de leite quanto de corte, a eficiência de um programa de PIV está limitada, entre outros fatores, pela taxa de recuperação de oócitos, pela variação individual na resposta ovariana aos tratamentos para estimular o amadurecimento e ovulação de um número grande de folículos, requerendo estudos para avaliar o efeito da associação entre início da onda folicular e o início do tratamento superestimulatório principalmente em animais de origem leiteira.

A alopecia difusa não-cicatricial (ADNC) acomete 7% dos pacientes HIV positivos. O objetivo deste trabalho foi comparar os achados histológicos e imunohistoquímicos (citoqueratina 19/TUNEL e caspase 3 clivada) em cortes transversais de couro cabeludo de 15 pacientes HIV-1 positivos com ADNC e de 12 controles sadios. A apoptose de células tronco-foliculares e amplificadoras transitórias na protuberância folicular foi demonstrada pela dupla marcação TUNEL/CK19 em 80% dos casos e em 25% dos controles e, pelo anticorpo anti-caspase 3 clivada em 61% dos casos e 16% dos controles. Não houve correlação entre a incidência de apoptose e o grau de imunodeficiência dentre os casos / Seven percent of HIV positive patients present diffuse non-cicatricial alopecia (DNCA). The aim of this study was to compare the histological and the immunohistochemical (cytokeratin 19/TUNEL and cleaved caspase 3) findings in transverse scalp sections of 15 HIV-1 positive patients with DNCA and 12 healthy controls. Follicular stem and transit amplifying cells apoptosis in the bulge was demonstrated by double labeling TUNEL/CK19 in 80% of cases and 25% of controls, and by the anti-cleaved caspase 3 antibody in 61% of cases and 16% of the controls. There was no relation between the incidence of apoptosis and the degree of immunodeficiency among cases

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-20T12:31:20Z No. of bitstreams: 2 Tese - Eduardo Camelo de Castro - 2015.pdf: 5148354 bytes, checksum: bbedf154e2b63e301d86d884047f4fed (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-20T12:34:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Eduardo Camelo de Castro - 2015.pdf: 5148354 bytes, checksum: bbedf154e2b63e301d86d884047f4fed (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-20T12:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Eduardo Camelo de Castro - 2015.pdf: 5148354 bytes, checksum: bbedf154e2b63e301d86d884047f4fed (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-01-31 / OBJECTIVES: To evaluate the variability of three-dimensional automatic counting of follicles measuring between 2 - 6 mm and 2 - 10 mm during the menstrual cycle. Considering that this is a standard exam for the early follicular phase, to check if this test can be applied during other phases of the ovarian cycle. METHODS: A Prospective observational study. Serial transvaginal ultrasound scans were performed from 04/20/2013 to 10/30/2014 on infertile patients. Inclusion criteria included age between 18 and 35 years, body mass index 18-25 kg / m2, regular menstrual cycles, no history of ovarian surgery and no hormonal changes to TSH, prolactin, fasting insulin and fasting glucose. Those patients with ovarian cysts or who did not complete one or more days of the serial transvaginal ultrasound scans and who did not undergo three-dimensional (3D) scanning with the researcher, were excluded. The antral follicle count was taken in 3D mode with automated software. Visits were scheduled for early follicular (2 to 5 days), mid-follicular (days 6 - 10), periovulatory (days 12 - 16) and luteal (days 20 - 26) phases of the menstrual cycle. RESULTS: Forty-five women were included. The Friedman test showed that the total number of antral follicles measuring 2-6 mm varied significantly (p=0.001) across the four periods of the menstrual cycle. The Paired Student’s t-test showed a significant increase in follicles count 2-6 mm from the mid-follicular and periovulatory to the luteal phase. We found no significant intracycle variation between the small antral follicles (2-6 mm) in the early follicular, mid-follicular and periovulatory phases. The Friedman test showed that the total number of antral follicles measuring 2-10 mm varied significantly (p=0.003) across the menstrual cycle. Paired Student’s t-test showed a significant increase in count from the early follicular to the mid-follicular phase. CONCLUSIONS: The variation of three-dimensional automatic follicles counting 2-6 mm in the early follicular, mid-follicular and periovulatory phases was not statistically significant. There was a significant variation in the 3D automatic count of ovarian follicles measuring 2-10 mm during the menstrual cycle. The significant variability in the counting of antral follicles measuring 2-10 mm across the menstrual cycle does not permit this examination to be carried out of early follicular phase. / OBJETIVOS: Avaliar a variabilidade da contagem automática tridimensional dos folículos de 2 a 6 mm e de 2 a 10 mm durante o ciclo menstrual. Considerando que este exame esta padronizado para a fase folicular precoce, verificar se este teste pode ser aplicado durante as outras fases do ciclo ovariano. METODOLOGIA: Estudo prospectivo observacional. Foram incluídas todas as pacientes inférteis que fizeram monitorização da ovulação de 20/04/2013 a 30/10/2014, que tinham entre 18 e 35 anos, índice de massa corporal de 18 a 25 kg/m2, ciclos menstruais regulares, sem história de cirurgia ovariana e sem aterações hormonais sugestivas de doenças endócrinas como alteração da dosagem do TSH, prolactina, insulina de jejum e glicemia de jejum. Foram excluídas as pacientes que apresentaram cistos ovarianos, as que faltaram em um ou mais dias da monitorização da ovulação e as que não realizaram a monitorização no ultrassom tridimensional (3D) com o pesquisador. A contagem dos folículos antrais (CFA) foi feita pelo modo 3D com software de automação na fase folicular precoce (2º ao 5º dia), na fase folicular media (6º ao 10º dia), no período periovulatório (12º - 16º dia) e na fase lútea (20º ao 26º dia). RESULTADOS: Quarenta e cinco mulheres foram incluídas. Houve diferença entre as médias das contagens dos folículos que mediram de 2 a 6 mm (p=0,001) e 2 a 10 mm (p=0,003) pelo teste de Friedman que avaliou conjuntamente a CFA das quatro fases do ciclo. Quando se aplicou o teste t-Student pareado, houve um aumento significativo na CFA de 2 a 6 mm quando se comparou a contagem desses folículos na fase folicular média e periovulatória com a contagem da fase lútea. Não houve diferença estatisticamente significante entre a contagem destes folículos pequenos nas fases folicular precoce, folicular média e periovulatória. Houve um aumento significativo na CFA de 2 a 10 mm da fase folicular precoce para a fase folicular média quando se aplicou o teste t-Student pareado. CONCLUSÕES: A variação da contagem automática tridimensional dos folículos de 2 a 6 mm, nas fases folicular precoce, folicular média e periovulatória, não mostrou significância estatística. Houve uma variação significativa da contagem automática 3D dos folículos ovarianos de 2 a 10 mm durante o ciclo menstrual. A variabilidade significativa da contagem dos folículos antrais de 2 a 10 mm durante o ciclo não permite que este exame seja realizado fora da fase folicular precoce.

A produção in vitro de embriões, no Brasil, ocupa lugar de destaque dentre as biotecnologias da reprodução animal e o atual desafio é torná-la cada vez mais acessível, para tanto, é fundamental aproximar os resultados de produção e sobrevivência dos embriões produzidos in vitro daqueles desenvolvidos naturalmente. Boa parte desta variação do potencial de desenvolvimento do embrião está relacionada à características do oócito. Há a possibilidade de essa capacidade estar relacionada ao perfil lipídico do líquido folicular e das células do folículo, neste sentido, este projeto teve como objetivo principal avaliar a correlação do potencial de desenvolvimento de oócitos com o conteúdo do perfil lipídico no líquido folicular e das células foliculares, baseado no sistema de ativação partenogenética, cultivo individual e analise retrospectiva. Não existe, até o momento, uma caracterização detalhada do microambiente folicular, um componente importante dos fluídos são os lipídios e recentemente tem sido demonstrado que eles estão envolvidos em vários aspectos do metabolismo além de também funcionarem como moléculas sinalizadoras ou até mesmo serem capazes de induzir modificações na cromatina. Os íons oriundos do estudo do perfil lipídico foram avaliados em comparação ao potencial de desenvolvimento do oócito. No conjunto de dados do MALDI observou-se maior concentração de triacilglicerídeos, principalmente contendo ácidos graxos como o oleico, linoleico e esteárico nos líquidos foliculares e células do folículo provenientes do ambiente folicular de oócitos que clivaram. No perfil lipídico do líquido folicular feito por LC-MS/MS os lipídios identificados foram de classes diversas, com participação expressiva no modo positivo de triacilgliceróis, fosfatidilcolinas, esfingomielinas, monoacildiacilglicerídeos entre outros e no modo negativo a classe lipídica que prevaleceu foi dos lipídios mitocondriais, as cardiolipinas. Também foram detectados lipídios citosólicos como o CE e alguns pouco descritos no líquido folicular como o PIP2 e PIP3, além disso, alguns lipídios foram característicos dos grupos clivados e blastocistos. O perfil lipídico do líquido folicular e das células do folículo é complexo e alguns lipídios deste ambiente tem potencial para serem biomarcadores de qualidade oocitária. / In vitro embryo production in Brazil occupies a prominent place among the animal reproduction biotechnology, the current challenge is to make it increasingly accessible so it is essential to approach the results of production and survival of in vitro produced embryos of those developed naturally. Much of this potential change of embryo development is related to the oocyte characteristics. There is the possibility of this ability is related to the lipid profile of follicular fluid and follicle cells , in this sense, this project aimed to evaluate the correlation of the oocytes development potential with the content of the lipid profile in follicular fluid and cells follicular, based on parthenogenetic activation , individual cultivation and retrospective analysis system. There isn\'t, to date, a detailed characterization of the follicular microenvironment, an important component of the follicular fluid and cels are the lipids and recently has been shown that they are involved in various aspects of metabolism in addition also function as signaling molecules or even be capable of inducing changes in chromatin. Derived ions from the study of lipid profile were evaluated compered with oocyte developmental potential. In MALDI dataset observed triacylglycerides higher concentration, mainly containing fatty acids such as oleic, linoleic and stearic acids in follicular fluid and follicle cells from follicular environment of cleaved oocytes. In follicular fluid lipid profile done by LC-MS/MS lipids were identified in diferent classes, with significant participation in positive mode of triacylglycerols, phosphatidylcholines, sphingomyelins, monoacildiacilglicerídeos among others and in negative mode prevailed lipid class was of mitochondrial lipids, the cardiolipin. Cytosolic lipids were also detected as CE and some little follicular fluid as described in the PIP2 and PIP3, and others lipids were characteristic of cleaved and blastocysts groups. The lipid profile of follicular fluid and follicle cells is complex and some of this lipid environment has the potential to be biomarkers of oocyte quality.

O presente estudo visou avaliar o efeito das características morfológicas e da dinâmica vascular do folículo e corpo lúteo sobre a fertilidade de vacas de corte submetidas à protocolo de sincronização de estro e ovulação. Para isso o estudo foi dividido em três experimentos sendo: No primeiro experimento foi avaliado, no momento da transferência de embriões (TE), a vascularização do corpo lúteo e sua relação com as taxas de prenhez em vacas multíparas Nelore utilizadas como receptoras de embriões. No segundo experimento analisou-se a área e vascularização do folículo no momento da inseminação artificial em vacas, novilhas e primíparas Nelore e vacas Tabapuã multíparas submetidas a protocolo de sincronização de estro e ovulação. No dia 11 após as inseminações foram avaliados a área, diâmetro e vascularização do corpo lúteo e no dia 30 realizou-se o diagnóstico gestacional dos animais. No terceiro experimento foram utilizadas vacas multíparas Nelore e cruzadas submetidas ao mesmo protocolo de sincronização de estro e ovulação do experimento 2. Neste experimento foi analisada a área dos folículos no momento da inseminação artificial e aplicados 400 UI de eCG 14 dias após, quando então avaliou-se o tamanho do corpo lúteo e dos folículos existentes. No dia 30 após a IA foi realizado o diagnóstico gestacional e análise da vascularização do corpo lúteo permitindo avaliar a relação da aplicação do eCG com o aumento da vascularização e taxas de prenhez. No presente estudo foi encontrada uma provável correlação positiva em relação à vascularização e tamanho do folículo pré-ovulatório com o tamanho e vascularização do corpo lúteo, porém apenas nos experimentos 1 e 3 houve um aumento nas taxas de prenhez conforme o aumento na vascularização. / The present study evaluated the effect of the morphological characteristics and the vascular dynamics of the follicle and corpus luteum in the fertility of beef cows submitted to a protocol of estrus synchronization and ovulation. Three experiments were done. In the first experiment, the corpus luteum vascular perfusion and its relationship with the pregnancy rates of Nelore recipient cows after embryo transfer (ET) were evaluated. In the second experiment, the area and vascular perfusion of the follicle at the time of artificial insemination (AI), the area, diameter and vascular perfusion of the corpus luteum on Day 11 after ovulation of Nelore cows submitted to a protocol of estrus synchronization and ovulation were evaluated. In the third experiment, Nelore cows were submitted to the same protocol of estrus synchronization and ovulation used in experiment 2 and the area of the follicle was measured at the time of the AI. After 14 days of the AI, 400 UI de eCG was given to the cows and the size of the corpus Luteum and the largest follicle were evaluated. On Day 30 after AI the size and vascular perfusion of the corpus luteum was evaluated. The pregnancy diagnosis was done on Day 30 after ovulation for all the three experiments. In the present study, it was found a positive correlation between the vascular perfusion and the size of the pre-ovulatory follicle, and the size and vascular perfusion of the corpus luteum. However, only in the experiments 1 and 3 the pregnancy rates increased with the increase in the corpus luteum vascular perfusion.

O pelo é uma característica dos mamíferos: na maioria das espécies, juntamente com a pele, a pelagem reveste externamente o corpo, com exceção de algumas regiões bem delimitadas. O pelo do cão e demais mamíferos apresenta formato distinto de acordo com a região do corpo. O estudo da obtenção e caracterização de células-tronco em cães poderá ampliar as possibilidades terapêuticas, mediante a utilização das células indiferenciadas na reparação capilar e lesões da pele e seus anexos. Neste trabalho foram utilizadas amostras de folículo piloso retiradas da região rostral de fetos caninos correspondentes a três fases gestacionais distintas (grupo I= 30 dias de gestação; grupo II= 35 dias de gestação; grupo III= 40 dias de gestação).Estas amostras foram cultivadas em placas de Petri de 75 cm² com 5mL de meio de cultivo DMEM, suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB) e 1% de antibióticos estreptomicina/penicilina. As células obtidas foram congeladas e descongeladas e utilizados nos procedimentos de, análise da expressão dos marcadores de células-tronco: STRO-1, CD 117, OCT 3/4, CD 90, Nanog, CD- 34, SSEA-4, CD -105, MCP-1, HSP- 47, CD 1 A, VEGFR1, DR4, IL- 1 &beta;, caspase3, Ki- 67, CD -45. A escolha dos anticorpos marcadores de células-tronco foi baseada em estudos que mostraram afinidade e avidez com o folículo piloso. Utilizamos também para a caracterização do folículo piloso, a imunohistoquímica e análise de PCR com o marcador S100 e a imunocitoquímica com os marcadores OCT 3/4, VEGF, STRO-1, CD117 e Nanog. Os resultados obtidos sugerem que a linhagem celular do folículo piloso de fetos de cães apresentaram crescimento satisfatório com a utilização do meio DMEM-hight suplementado com 10% de SFB inativado e 1% de antibióticos, sendo mantidas e expandidas em cultivo. O crescimento e a expansão das células-tronco do folículo piloso são peculiares, pois, sua expansão ocorre em torno da haste pilosa, utilizando-a como ancoragem. Os resultados indicaram características de pluripotência nas células-tronco do folículo piloso pela expressão dos marcadores OCT3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4, e STRO-1, em todos os grupos analisados. Considerando, a taxa de proliferação, a fase do ciclo celular, distribuição e aspectos de morte celular não foram encontradas diferenças significantes na expressão dos marcadores HSP47, DR4. Para verificar a angiogêneseforam utilizados os marcadores VEGFR1, Ki-67 e caspase-3, sendo expressos em todos os grupos. Na imunohistoquímica e análise de PCR observou-se a expressão da proteína S100, sendo maior nas células do grupo de fetos com 40 dias de gestação- grupo III. Neste estudo, podemos concluir que o conjunto de marcadores expressos nos diferentes grupos de células tronco obtidas das vibrissas de fetos caninos indicaram a expressão de marcadores de pluripotência das células-tronco do folículo piloso / Hair is a characteristic of mammals, since in most species the coat spreads throughout the body, except for some well-defined regions. Mammals in general, including dogs, have different characteristics in their coat according to the region of the body. The study of obtainment and characterization of stem cells from the hair follicle could contribute to new therapeutic possibilities, particularly in the treatment of hair, skin and it appendices injuries. In this study, hair follicle samples were harvestedin the rostral region of canine fetuses, divided into three distinct groups, according to the stage of pregnancy, as follows: Group I = 30 days, Group II = 35 days, Group III = 40 days. These samples were grown in 75 cm² Petri dishes with 5 mL of DMEM culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and antibiotics 1% streptomycin / penicillin. Cells were frozen and thawed and used in procedures for analysis of expression of markers of stem cells: STRO-1, CD 117, OCT 3/4, CD 90, Nanog, CD- 34,SSEA -4,CD- 105, MCP-1, HSP-47, CD 1 A, VEGF-R1, DR4, IL-1 &beta;, caspase-3, Ki-67, CD -45. The choice of antibodies was based on studies that showed affinity and avidity to the hair follicle. In addition, for purposes of characterization of the hair follicle, procedures for immunohistochemistry and PCR analysis with the marker S100 and immunocytochemistry with the markers OCT3/4, VEGF, STRO-1, CD117 e Nanog were used. The results suggested that hair follicle cell line of fetal dogs showed satisfactory growth using the DMEM high medium supplemented with 10% inactivated FBS and 1% antibiotics and could be maintained and expanded in culture. The growth and expansion of stem cells of the hair follicle are unique because they occur around the hair shaft using it as anchorage. Results also indicated pluripotency features in the hair follicle stem cells through the positive expression of Oct3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4 and STRO-1, in all groups. Regarding the proliferation rate and cell cycle phase, distribution and cell death aspects, HSP47, DR4 were used. To verify angiogenesis, VEGFR1, Ki67 and Caspase-3 were expressed in all groups. In Immunohistochemistry procedures we observed the expression of S100, and in mRNA on RT-PCR. We concluded in this study that in group III the expression of S100 was higher than in the two other groups. In addition, we found that the pluripotency of the stem cells was indicated by the expression of the markers OCT3/4, Nanog, CD105, CD90, SSEA-4 and STRO-1

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francielle Alves Caldato.pdf: 206297 bytes, checksum: 76f7cbc3c353feae2e5df0057c4ca517 (MD5) Previous issue date: 2013-10-31 / The present study aimed to evaluate the effects of supplementation with resveratrol on the reproductive organs (uterus and ovaries) of female rats With diet-induced obesity palatable diet (DPH). We studied 64 Wistar rats were divided into 4 groups: control group (G-CM n = 16): animals fed with commercial feed supplementation Labina ® over placebo (0.5 mL of deionized water, by gavage); Control Group Res + (G-MR n = 16) animals fed commercial feed supplemented with more Labina ® 30 mg resveratrol / kg / day diluted in 0.5 ml deionized water by gavage; group O(G-CO n = 16): animals fed palatable diet (DPH) over placebo supplementation; group O + Res (G- RO n = 16): animals fed with DPH or supplemented with resveratrol 30mg / kg / day. The animals received the diets and supplements for 12 weeks (84 days) and after the experimental period, the rats were euthanized and organs (uterus and ovaries) were removed, weighed and processed for histology. From the results obtained we conclude that supplementation with resveratrol increases ovarian activity evidenced by increase of LCs, as well as in ovarian follicles. In the uterus, the animals that receiving resveratrol was demonstrated by the proliferative capacity characteristic of NORs smaller and in greater quantity. / O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da suplementação com resveratrol sobre os órgãos reprodutivos (útero e ovários) de ratas Wistar com obesidade induzida por dieta palatável hiperlipídica (DPH). Foram estudadas 64 ratas Wistar, divididas em 4 grupos: Grupo Controle (G-CM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação de placebo (0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem); Grupo Controle+Res (G-RM n=16): animais alimentados com ração comercial LABINA® mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia diluídos em 0,5 mL de água deionizada, por meio de gavagem; Grupo Obeso (G-CO n=16): animais alimentados com dieta palatável hiperlipídica (DPH) mais suplementação de placebo; Grupo Obeso+Res (G-RO n=16): animais alimentados com DPH mais suplementação com 30mg de resveratrol/Kg/dia. Os animais receberam as dietas e suplementos durante 12 semanas (84 dias) e após o período experimental as ratas foram eutanasiadas e os órgãos (útero e ovários) retirados, pesados e processados para histologia. Pelos resultados obtidos concluímos que a suplementação com resveratrol aumenta a atividade ovariana evidenciada pelo aumento de CLs, bem como nos folículos ovarianos. No útero dos animais que receberam o resveratrol houve maior capacidade proliferativa demonstrada pela característica das NORs (regiões organizadoras de nucléolos) pequenas e em maior quantidade.