Peptídeos antimicrobianos (AMP) são importantes componentes do sistema imune de todos os organismos vivos. No plasma de Acanthoscurria rondoniae isolamos 15 AMP com similaridade com a hemocianina. As sete subunidades da hemocianina foram sequenciadas e sua estrutura tridimensional determinada. A rondonina, processada a partir de uma enzima do plasma em condições ácidas apresentou melhor atividade em pH ácido, sinergismo com gomesina, não citotóxico, não interagiu com membranas artificiais lipídicas, protegeu as células da infecção por vírus humanos de RNA e seu mecanismo de ação em leveduras está associado com material genético. Nossos resultados nos ajudam a entender porque aracnídeos sobreviveram por um longo tempo na escala evolutiva. E como as doenças infecciosas estão entre as principais causas de morte da população humana torna-se vital investir na busca de substâncias naturais ou sintéticas que exibam atividades antimicrobianas específicas e, acima de tudo, que as exerçam através de mecanismos de ação alternativos daqueles dos antibióticos disponíveis. / Antimicrobial peptides (AMP) are important components of the immune system of all living organisms. In the plasma of Acanthoscurria rondoniae we isolated 15 AMP with similarity to hemocyanin. The seven subunits hemocyanin were sequenced and determined its three-dimensional structure. The rondonin, processed from a plasma enzyme under acidic conditions showed best activity at acid pH, synergism with gomesin, non-cytotoxic, does not interacted with lipid artificial membrane, protected the cells from infection by human virus RNA and its mechanism of action in yeast is associated with genetic material. Our results help us understand why arachnids have survived for a long time on the evolutionary scale. And how infectious diseases are among the leading causes of death in human population becomes vital to invest in the search for natural or synthetic substances that exhibit specific antimicrobial activities and, above all, that engage through alternative mechanisms of action of these antibiotics available.

Vochysiaceae compreende uma família com duas tribos, oito gêneros e aproximadamente 250 espécies distribuídas predominantemente na América Tropical. Vochysia pyramidalis e V. tucanorum são espécies arbóreas, a primeira distribuída nas regiões nordeste e central do Brasil e a última apresentando distribuição semelhante, mas alcançando latitudes meridionais até o sul do Paraná. Estas e outras espécies de Vochysiaceae apresentam teores relativamente altos de lipídeos de sementes. Os lipídeos de sementes de V. pyramidalis assemelham-se aos da manteiga de cacau, com altos teores de ácido esteárico e ácido oleico, e os de V. tucanorum são ricos em ácidos graxos de cadeia longa, como os ácidos erúcico e docosanóico, assemelhando-se ao óleo original de colza. Os lipídeos de ambas as espécies têm, portanto, potencial valor econômico. Foi verificado que as proporções dos ácidos graxos das duas espécies podem variar entre populações de diferentes localidades. A proposta do presente trabalho foi detectar variações na distribuição química das duas espécies, a fim de apontar populações com lipídeos dotados de perfis de ácidos graxos mais convenientes para potencial uso medicinal e/ou industrial, e verificar possível conexão entre perfis químicos e genéticos. O último foi estabelecido com base em marcadores AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism). Foram coletadas sementes e fragmentos de folhas de 3-9 indivíduos de V. pyramidalis de populações de Alto Paraíso de Goiás (GO), Andaraí (BA), Palmeiras (BA) e UnB-Brasília (DF), e 5-10 indivíduos de V. tucanorum de populações de Bauru (SP), Botucatu (SP), Santana do Riacho (MG), Perdões (MG), IBGE-Brasília (DF), Ibicoara (BA) e Sengés (PR). Os lipídeos das sementes foram extraídos com hexano. Foram seguidos métodos padronizados para a obtenção dos correspondentes ésteres metílicos dos ácidos graxos. Estes foram analisados por CG/FID e a identificação das substâncias foram baseadas na comparação dos tempos de retenção com aqueles de amostras autênticas de ésteres metílicos de ácidos graxos. A distribuição dos ácidos graxos das duas espécies foi analisada pelo coeficiente de Distância Euclidiana Simples e pelo método de agrupamento UPGMA e Análise de Componente Principal (PCA), usando o programa de computador Fitopac 1.6.4. Dois agrupamentos principais foram obtidos, cada um correspondendo a uma das espécies de Vochysiaceae. Entretanto, foi notada uma alta semelhança entre amostras da mesma espécie. Em cada espécie, não foi obtido nenhum agrupamento coerente relacionado à populações e localidades. A única exceção correspondeu aos indivíduos da população de V. pyramidalis de Alto Paraíso de Goiás, que se agrupou isoladamente de outras amostras da mesma espécie. Análises de AFLP foram realizadas com DNA extraído de fragmentos de folhas preservados em silicagel, seguidos de procedimentos padronizados de digestão, ligação, amplificações pré-seletiva e seletiva, e análise em seqüenciador automático. Três e quatro combinações de iniciadores foram usadas para V. pyramidalis e V. tucanorum, respectivamente. Os fragmentos obtidos foram utilizados como caracteres e analisados pelo método de evolução mínima Neighbor-Joining, usando distância de Nei & Li por meio do programa de computador PAUP v. 4.0, e Análise de Coordenada Principal (PCO) usando o programa de computador Fitopac 1.6.4. Assim como ocorreu com os caracteres químicos, pequenas distâncias foram obtidas ao se comparar amostras de cada uma das duas espécies de Vochysia. Em análises individuais de cada espécie, não foi obtido nenhum agrupamento coerente com as respectivas populações. Os resultados do presente trabalho sugerem que a dispersão de indivíduos de V. pyramidalis e V. tucanorum nas presentes áreas de distribuição é um evento recente, não tendo decorrido tempo suficiente para alcançar diferenças químicas e genéticas detectáveis. Essa observação é coerente com estudos da dispersão de sementes e de pólen, que mostrou uma alta capacidade de dispersão de espécies de Vochysia. / The Vochysiaceae comprise a family with two tribes, eight genera and approximately 250 species distributed predominantly in tropical America. Vochysia pyramidalis and V. tucanorum are tree species, the former distributed in Central, Northeastern and Southeasten Brazil and the latter having similar distribution, but reaching meridional latitudes as far as the south of Paraná. These two species and other Vochysiaceae have been shown to have relatively high levels of seeds lipids. The seed lipids of V. pyramidalis resemble cocoa butter, with high levels of stearic and oleic acids, while V. tucanorum seeds are rich in long chain fatty acids, such as erucic and docosanoic, resembling the original rapeseed oil. Hence, lipids of both species of Vochysiaceae have potential economic value. It has been reported that proportions of seed fatty acids of the two species may vary among populations of different localities. The aim of the present work was to detect variations in chemical profiles of the two species, in order to point out populations with lipids endowed with fatty acid profiles more convenient for potential medical and/or industrial uses, and verify possible connection between chemical and genetic profiles. The latter was established on basis of AFLP (amplified fragment length polymorphism) markers. Seeds and leaf fragments were collected of 3-9 individuals of V. pyramidalis from populations of Alto Paraíso de Goiás (GO), Andaraí (BA), Palmeiras (BA) and UnB-Brasília (DF) and 5-10 of V. tucanorum from populations of Bauru (SP), Botucatu (SP), Santana do Riacho (MG), Perdões (MG), IBGE-Brasília (DF), Ibicoara (BA) and Sengés(PR). Seed lipids were extracted with hexane. Standardized methods were followed to obtain the corresponding fatty acids methyl esters. These were analyzed by GC/FID and identification of the substances were based on comparison of retention times with those of authentic samples of fatty acid methyl esters. The distribution of fatty acids of the samples of the two species was analyzed by Simple Euclidean Distance coefficients, clusthering method UPGMA and Principal Component Analysis (PCA) using Fitopac 1.6.4 as computer program. Two main clusters were obtained, each corresponding to one of the Vochysiaceae species. However, a high similarity was noted among samples of the same species. Within each species, no clusters were obtained coherent with populations and localities. The only exception corresponded to individuals of a population of V. pyramidalis of Alto Paraíso de Goiás, which grouped apart from other samples of the same species. AFLP analyses were carried out with DNA extracted from leaf fragments preserved in silicagel, following the standardized procedures of digestion, ligation, pre and selective amplifications and analysis in automatic sequencer. Three and four primer combinations were used regarding V. pyramidalis and V. tucanorum, respectively. Fragments obtained were scored as characters and analyzed by the Neighbor-Joining method, using Nei & Li distances in a computer program implemented in PAUP v. 4.0 and Principal Coordinate Analysis (PCO) using Fitopac 1.6.4 as computer program. As with chemical characters, small distances were obtained comparing samples of each the two Vochysia species. In the analyses of individuals of each species, no clusters were obtained coherently with the respective population. The results of the present work suggest that the dispersion of individuals of V. pyramidalis and V. tucanorum into the present areas of distribution is a recent event, no enough time having been elapsed to reach detectable chemical and genetic differences. This observation is coherent with studies of seed and polen dispersal, which have shown a high disperal capacity of Vochysia species.

[pt] O município de Silva Jardim cuja região possui uma rica biodiversidade tanto em flora, quanto fauna, em seu bioma fragmentado. Um dos aliados para o processo de conservação dos biomas são as leis implementadas pelo Lei de Proteção da Vegetação Nativa, pois, visa proteger principalmente as áreas mais frágeis e de extrema importância para a recuperação da paisagem. Nesse sentido essa dissertação teve por objetivo avaliar o potencial de conservação a partir da integração da análise dos fragmentos florestais e da Lei de Proteção da Vegetação Nativa- LPVN. Para isso, a metodologia se debruçou em levantado todo o processo histórico de ocupação do município. Espacializar a LPVN através de técnicas de geoprocessamento em ambiente SIG. Utilizando os princípios da ecologia da paisagem, se escolheu as métricas de paisagem para avaliação dos fragmentos no software V-Late, podendo assim caracterizar o cenário atual. Tivemos como resultado 33,2 porcento do total de Silva Jardim protegidos pela LPVN. Os fragmentos muito pequenos e grandes foram os que mais chamaram atenção na análise final, tendo 45 porcento de suas áreas protegidas, devido a sua distribuição pela paisagem. Finalmente, quando analisamos a eficiência da LPNV, não podemos anular o processo de ocupação, dado que as áreas mais fragmentadas estão nos limites de APP de curso d água em áreas planas. Sendo assim, é preciso pensar em planos de educação e conscientização da população para a conservação da Mata Atlântica. / [en] The municipality of Silva Jardim, whose region has a rich biodiversity in both flora and fauna, in its fragmented biome. One of the allies for the conservation process of the biomes are the laws implemented by the Native Vegetation Protection Law because it aims to protect mainly the most fragile areas and of extreme importance for the recovery of the landscape. In this sense, this dissertation aimed to evaluate the conservation potential based on the integration of forest fragment analysis and the Native Vegetation Protection Law (Law 12.651 / 12). For that, the methodology looked at the entire historical occupation process of the county. Specialize Native Vegetation Protection Law through geoprocessing techniques in a GIS environment. Using the principles of landscape ecology, were chosen the landscape metrics to assess fragments in the V-Late software, thus being able to characterize the current scenery. As a result, 33.2 percent of Silva Jardim s total was protected by the Native Vegetation Protection Law. The very small and large fragments were the ones that attracted the most attention in the final analysis, with 45 percent of their areas protected, due to their distribution across the landscape. Finally, when we analyze the efficiency of Native Vegetation Protection Law, we cannot cancel the occupation process, given that the most fragmented areas are within the limits of permanent preservation watercourse sector in flat territories. Therefore, it is necessary to think about education and awareness plans for the conservation of the Atlantic Forest.

[pt] Um espectrômetro de massa PDMS-252Cf-TOF (Time-of-Flight Plasma Dessorption Mass Spectrometry) foi usado para analisar amostras condensadas de água pura e misturas de H2O:C2H2, H2O:C2H6 e H2O:N2O, em temperaturas entre 10 e 100 K. Os íons dessorvidos devido ao impacto foram identificados e seus rendimentos de dessorção determinados. Observa-se que a distribuição desses rendimentos em função da massa dos íons pode ser descrita pela soma de duas exponenciais. Este resultado sugere fortemente que ocorrem dois processos de formação de agregados: um, via emissão direta de fragmentos do sólido e outro, via recombinação de fragmentos na fase gasosa. Para H2O puro, os principais agregados dessorvidos são: ((H2O)nH2O+, (H2O)nH3O+, On +, (H2O)nO−, (H2O)nOH− e On −. Para misturas de gelos H2O:C2H2 e H2O:C2H6, são observadas as séries (C2H2)n + e (C2H6)n +. Para H2O:N2O, as séries Nn +, (O)nN2 +, (O)nN2−, (O)nN4−, e (N2)nNO+ são as mais abundantes. A Teoria do Funcional da Densidade (DFT), no nível B3LYP/6-31G, foi usada para calcular a estabilidade molecular dos íons moleculares secundários emitidos. Cálculos para as estruturas C2Hm + (com m = 1 a 6) geraram 26 estruturas estáveis. As curvas de estabilidade por massa/carga obtidas são comparadas com aquelas obtidas experimentalmente para os rendimentos de dessorção por massa/carga para os mesmos íons. Tal metodologia é utilizada para prever as conformações mais prováveis dos íons dessorvidos. / [en] A PDMS-252Cf-TOF (Time-of-Flight Plasma Desorption Mass Spectrometry) mass spectrometer was used to analyze condensed samples of pure water and mixtures of H2O:C2H2, H2O:C2H6 and H2O:N2O, at temperatures between 10 and 100 K. The ions desorbed due to the projectile impact were identified and their desorption yields determined. It is observed that the yield distributions as a function of the mass of the ions can be described by the sum of two exponentials. This result strongly suggests that two processes of aggregate formation occur: one, via direct emission of fragments from the solid and the other, via recombination of fragments in the gas phase. For pure H2O, the main desorbed aggregates are: ((H2O)nH2O+, (H2O)nH3O+, On +, (H2O)nO−, (H2O)nOH− and On −. For mixtures of ices H2O:C2H2 and H2O:C2H6, the series (C2H2)n + and (C2H6)n + are observed. For H2O:N2O, the series Nn +, (O)nN2 +, (O)nN2−, (O)nN4−, and (N2)nNO+ are the most abundant. Density Functional Theory (DFT), at the B3LYP/6-31G level, was used to calculate the molecular stability of emitted secondary molecular ions. Calculations for the C2Hm + structures (with m = 1 to 6) generated 26 stable structures. The stability curves per mass/charge obtained are compared with those obtained experimentally for the desorption yields per mass/charge for the same ions. Such methodology is used to predict the most likely conformations of the desorbed ions.

[ES] El aprendizaje automático (ML por sus siglas en inglés) es conocido como la rama de la inteligencia artificial que reúne algoritmos estadísticos, probabilísticos y de optimización, que aprenden empíricamente. ML puede aprovechar el conocimiento y la experiencia que se han generado durante años en las empresas para realizar automáticamente diferentes procesos. Por lo tanto, ML se ha aplicado a diversas áreas de investigación, que estudian desde la medicina hasta la ingeniería del software. De hecho, en el campo de la ingeniería del software, el mantenimiento y la evolución de un sistema abarca hasta un 80% de la vida útil del sistema. Las empresas, que se han dedicado al desarrollo de sistemas software durante muchos años, han acumulado grandes cantidades de conocimiento y experiencia. Por lo tanto, ML resulta una solución atractiva para reducir sus costos de mantenimiento aprovechando los recursos acumulados. Específicamente, la Recuperación de Enlaces de Trazabilidad, la Localización de Errores y la Ubicación de Características se encuentran entre las tareas más comunes y relevantes para realizar el mantenimiento de productos software. Para abordar estas tareas, los investigadores han propuesto diferentes enfoques. Sin embargo, la mayoría de las investigaciones se centran en métodos tradicionales, como la indexación semántica latente, que no explota los recursos recopilados. Además, la mayoría de las investigaciones se enfocan en el código, descuidando otros artefactos de software como son los modelos. En esta tesis, presentamos un enfoque basado en ML para la recuperación de fragmentos en modelos (FRAME). El objetivo de este enfoque es recuperar el fragmento del modelo que realiza mejor una consulta específica. Esto permite a los ingenieros recuperar el fragmento que necesita ser trazado, reparado o ubicado para el mantenimiento del software. Específicamente, FRAME combina la computación evolutiva y las técnicas ML. En FRAME, un algoritmo evolutivo es guiado por ML para extraer de manera eficaz distintos fragmentos de un modelo. Estos fragmentos son posteriormente evaluados mediante técnicas ML. Para aprender a evaluarlos, las técnicas ML aprovechan el conocimiento (fragmentos recuperados de modelos) y la experiencia que las empresas han generado durante años. Basándose en lo aprendido, las técnicas ML determinan qué fragmento del modelo realiza mejor una consulta. Sin embargo, la mayoría de las técnicas ML no pueden entender los fragmentos de los modelos. Por lo tanto, antes de aplicar las técnicas ML, el enfoque propuesto codifica los fragmentos a través de una codificación ontológica y evolutiva. En resumen, FRAME está diseñado para extraer fragmentos de un modelo, codificarlos y evaluar cuál realiza mejor una consulta específica. El enfoque ha sido evaluado a partir de un caso real proporcionado por nuestro socio industrial (CAF, un proveedor internacional de soluciones ferroviarias). Además, sus resultados han sido comparados con los resultados de los enfoques más comunes y recientes. Los resultados muestran que FRAME obtuvo los mejores resultados para la mayoría de los indicadores de rendimiento, proporcionando un valor medio de precisión igual a 59.91%, un valor medio de exhaustividad igual a 78.95%, una valor-F medio igual a 62.50% y un MCC (Coeficiente de Correlación Matthews) medio igual a 0.64. Aprovechando los fragmentos recuperados de los modelos, FRAME es menos sensible al conocimiento tácito y al desajuste de vocabulario que los enfoques basados en información semántica. Sin embargo, FRAME está limitado por la disponibilidad de fragmentos recuperados para llevar a cabo el aprendizaje automático. Esta tesis presenta una discusión más amplia de estos aspectos así como el análisis estadístico de los resultados, que evalúa la magnitud de la mejora en comparación con los otros enfoques. / [CAT] L'aprenentatge automàtic (ML per les seues sigles en anglés) és conegut com la branca de la intel·ligència artificial que reuneix algorismes estadístics, probabilístics i d'optimització, que aprenen empíricament. ML pot aprofitar el coneixement i l'experiència que s'han generat durant anys en les empreses per a realitzar automàticament diferents processos. Per tant, ML s'ha aplicat a diverses àrees d'investigació, que estudien des de la medicina fins a l'enginyeria del programari. De fet, en el camp de l'enginyeria del programari, el manteniment i l'evolució d'un sistema abasta fins a un 80% de la vida útil del sistema. Les empreses, que s'han dedicat al desenvolupament de sistemes programari durant molts anys, han acumulat grans quantitats de coneixement i experiència. Per tant, ML resulta una solució atractiva per a reduir els seus costos de manteniment aprofitant els recursos acumulats. Específicament, la Recuperació d'Enllaços de Traçabilitat, la Localització d'Errors i la Ubicació de Característiques es troben entre les tasques més comunes i rellevants per a realitzar el manteniment de productes programari. Per a abordar aquestes tasques, els investigadors han proposat diferents enfocaments. No obstant això, la majoria de les investigacions se centren en mètodes tradicionals, com la indexació semàntica latent, que no explota els recursos recopilats. A més, la majoria de les investigacions s'enfoquen en el codi, descurant altres artefactes de programari com són els models. En aquesta tesi, presentem un enfocament basat en ML per a la recuperació de fragments en models (FRAME). L'objectiu d'aquest enfocament és recuperar el fragment del model que realitza millor una consulta específica. Això permet als enginyers recuperar el fragment que necessita ser traçat, reparat o situat per al manteniment del programari. Específicament, FRAME combina la computació evolutiva i les tècniques ML. En FRAME, un algorisme evolutiu és guiat per ML per a extraure de manera eficaç diferents fragments d'un model. Aquests fragments són posteriorment avaluats mitjançant tècniques ML. Per a aprendre a avaluar-los, les tècniques ML aprofiten el coneixement (fragments recuperats de models) i l'experiència que les empreses han generat durant anys. Basant-se en l'aprés, les tècniques ML determinen quin fragment del model realitza millor una consulta. No obstant això, la majoria de les tècniques ML no poden entendre els fragments dels models. Per tant, abans d'aplicar les tècniques ML, l'enfocament proposat codifica els fragments a través d'una codificació ontològica i evolutiva. En resum, FRAME està dissenyat per a extraure fragments d'un model, codificar-los i avaluar quin realitza millor una consulta específica. L'enfocament ha sigut avaluat a partir d'un cas real proporcionat pel nostre soci industrial (CAF, un proveïdor internacional de solucions ferroviàries). A més, els seus resultats han sigut comparats amb els resultats dels enfocaments més comuns i recents. Els resultats mostren que FRAME va obtindre els millors resultats per a la majoria dels indicadors de rendiment, proporcionant un valor mitjà de precisió igual a 59.91%, un valor mitjà d'exhaustivitat igual a 78.95%, una valor-F mig igual a 62.50% i un MCC (Coeficient de Correlació Matthews) mig igual a 0.64. Aprofitant els fragments recuperats dels models, FRAME és menys sensible al coneixement tàcit i al desajustament de vocabulari que els enfocaments basats en informació semàntica. No obstant això, FRAME està limitat per la disponibilitat de fragments recuperats per a dur a terme l'aprenentatge automàtic. Aquesta tesi presenta una discussió més àmplia d'aquests aspectes així com l'anàlisi estadística dels resultats, que avalua la magnitud de la millora en comparació amb els altres enfocaments. / [EN] Machine Learning (ML) is known as the branch of artificial intelligence that gathers statistical, probabilistic, and optimization algorithms, which learn empirically. ML can exploit the knowledge and the experience that have been generated for years to automatically perform different processes. Therefore, ML has been applied to a wide range of research areas, from medicine to software engineering. In fact, in software engineering field, up to an 80% of a system's lifetime is spent on the maintenance and evolution of the system. The companies, that have been developing these software systems for a long time, have gathered a huge amount of knowledge and experience. Therefore, ML is an attractive solution to reduce their maintenance costs exploiting the gathered resources. Specifically, Traceability Link Recovery, Bug Localization, and Feature Location are amongst the most common and relevant tasks when maintaining software products. To tackle these tasks, researchers have proposed a number of approaches. However, most research focus on traditional methods, such as Latent Semantic Indexing, which does not exploit the gathered resources. Moreover, most research targets code, neglecting other software artifacts such as models. In this dissertation, we present an ML-based approach for fragment retrieval on models (FRAME). The goal of this approach is to retrieve the model fragment which better realizes a specific query in a model. This allows engineers to retrieve the model fragment, which must be traced, fixed, or located for software maintenance. Specifically, the FRAME approach combines evolutionary computation and ML techniques. In the FRAME approach, an evolutionary algorithm is guided by ML to effectively extract model fragments from a model. These model fragments are then assessed through ML techniques. To learn how to assess them, ML techniques takes advantage of the companies' knowledge (retrieved model fragments) and experience. Then, based on what was learned, ML techniques determine which model fragment better realizes a query. However, model fragments are not understandable for most ML techniques. Therefore, the proposed approach encodes the model fragments through an ontological evolutionary encoding. In short, the FRAME approach is designed to extract model fragments, encode them, and assess which one better realizes a specific query. The approach has been evaluated in our industrial partner (CAF, an international provider of railway solutions) and compared to the most common and recent approaches. The results show that the FRAME approach achieved the best results for most performance indicators, providing a mean precision value of 59.91%, a recall value of 78.95%, a combined F-measure of 62.50%, and a MCC (Matthews correlation coefficient) value of 0.64. Leveraging retrieved model fragments, the FRAME approach is less sensitive to tacit knowledge and vocabulary mismatch than the approaches based on semantic information. However, the approach is limited by the availability of the retrieved model fragments to perform the learning. These aspects are further discussed, after the statistical analysis of the results, which assesses the magnitude of the improvement in comparison to the other approaches. / Marcén Terraza, AC. (2020). Design of a Machine Learning-based Approach for Fragment Retrieval on Models [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/158617

[pt] Um espectrômetro de massa tipo tempo-de-vôo, montado no Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (Campinas - SP), foi utilizado para analisar os íons dessorvidos de uma amostra de amônia condensada (temperaturas de análise: 25 a 150 K) ao ser impactada por fragmentos de fissão do 252Cf. O espectrômetro permite identificar e determinar as abundâncias das espécies iônicas dessorvidas. Quanto à parte teórica, foram feitos cálculos para determinar as estruturas mais estáveis dos agregados de NH3 e para determinar suas dinâmicas de emissão de íons secundários observados na parte experimental. A amônia foi escolhida por sua semelhança com a água, uma molécula muito bem estudada. Outra razão é o atual interesse em determinar a formação de compostos orgânicos nas superfícies de corpos interestelares, uma vez que está comprovada a presença da amônia naquelas superfícies. Nos espectros obtidos observa-se a formação de agregados de amônia que podem ser representados por (NH3)nNHm ± com n = 0-30 e m = 0-5, para íons positivos, e com n = 0- 3 para íons negativos. Uma forma de evidenciar a possibilidade de formação de novos compostos foi realizar experiências com a mistura NH3-CO, com a mesma montagem experimental utilizada para a amônia. Observa-se no espectro obtido (antes da sublimação do CO a 30 K) linhas de massa resultantes de reações primárias que correspondem a íons moleculares híbridos com estrutura CnOmHl+.Os cálculos teóricos referentes às estruturas dos agregados foram realizados través do programa Jaguar 5.5 e Jaguar 6.0. O objetivo é determinar as estruturas mais estáveis dos agregados iônicos da amônia através da teoria DFT (Teoria do Funcional de Densidade) por meio da minimização da energia. Encontrou-se uma relação direta entre as estabilidades determinadas e as abundâncias relativas no espectro de massa. Finalmente foram realizados cálculos com o modelo teórico de dessorção iônica induzida por elétrons. Os resultados de distribuição de velocidades e energias foram comparados com os dados experimentais dos agregados da amônia (n = 0, 4), apresentando uma concordância razoável em valor absoluto, mas moderada em forma. / [en] A time-of-flight mass spectrometer, mounted at the Laboratório National de Luz Síncrotron (Campinas - SP), was used to analyze desorbed ions of a condensed ammonia sample (analyzing temperatures: 25 - 150 K) being impacted by 252Cf fission fragments . The spectrometer allows identifying and determining the relative yields of ionic desorbed species. Besides, it had been made theoretical calculations to determine the most stable cluster structures as well as to determine the emission dynamics of NH3 clusters observed in the experimental part. The ammonia was chosen because of its similarity with the water molecule (very well studied). Another reason is the current interest in determining the organic compounds formation in the interstellar surfaces, now that it is proven the presence of ammonia in those surfaces. The measured spectra show the formation of ammonia clusters that can be represented by (NH3)nNHm ± with n = 0 - 30 and m = 0 - 5 for positive ions, and n = 0 - 3 for negative ones. One way to evidence the formation possibility of new compound is to perform experiments with CO-NH3 mixture samples, using the same experimental set up used for the ammonia. In the spectrum measured before CO sublimation (30 K), mass lines, product of primary reactions, corresponding to hybrid molecular ions having the CnOmHl + structure were observed. Theoretical calculations referring to cluster structures had been carried out using the programs Jaguar 5,5 and Jaguar 6.0. The objective is to determine the most stable structures of the ammonia clusters through the Density Functional Theory (DFT) by means of energy minimizations. A direct relation between the computed stabilities and the relative abundances in the mass spectra was found. Finally calculations with the Secondary Electron Induced Desorption (SEID) model had been carried out. Results of velocity and energy distributions had been compared with the experimental data of ammonia clusters (n = 0, 4), presenting a good agreement in absolute values but moderate agreement in shape.

Devido o dinamismo e complexidade estrutural observada nas paisagens antrópicas, pesquisas contínuas são necessárias para melhorar o conhecimento sobre quais os impactos delas na biodiversidade, bem como para entender quais espécies ocorrentes nestas paisagens refletem as condições ambientais lá existentes. Desse modo, tomando a avifauna como representante da biodiversidade presente nestas paisagens, esta tese objetivou: 1) caracterizar as assembleias de aves ocorrentes nos remanescentes florestais de Mata Atlântica inseridos em paisagem antrópica agrícola, bem como as assembleias que ocorrem no interior das culturas de pasto e cana-de-açúcar, 2) identificar um método analítico adequado para acessar a integridade ecológica existente nos remanescentes florestais por meio das assembleias de aves, 3) avaliar o efeito da estrutura e dinâmica destas paisagens nas assembleias de aves ocorrentes nos remanescentes florestais, 4) identificar quais características da paisagem antrópica agrícola influenciam as aves ocorrentes no interior das culturas de pasto e cana-de-açúcar. Assembleias de aves foram amostradas mensalmente durante um ano (Nov2011-Nov2012) por meio de pontos fixos e transectos em oito remanescentes florestais com diferentes tamanhos (3-115ha) e históricos de degradação, e oito sítios amostrais localizados no interior das culturas agrícolas (quatro em pasto e quatro em cana-de-açúcar). Estes foram selecionados dentro de cinco unidades amostrais de uma paisagem tipicamente (16 km2) agrícola do Estado de São Paulo (Bacia do Rio Corumbataí). O índice de serviços ecossistêmicos de Ferraz et al. (2014) foi adotado como uma medida do grau de distúrbios antrópicos presente nos remanescentes florestais do qual leva em consideração a dinâmica e estrutura deles. Já as características das paisagens nas culturas agrícolas foram coletadas em duas escalas de análise (buffers circulares de 600 e 1000m) levando em consideração métricas que pudessem refletir uma maior heterogeneidade da paisagem. No total, 191 espécies foram observadas nos remanescentes florestais, enquanto que 137 nas culturas agrícolas. As aves com hábitos florestais, não-florestais, hábitos mistos florestais-não-florestais, pequenos insetívoros de sub-bosque, aves que forrageiam no estrato médio dos remanescentes, espécies endêmicas e ameaçadas foram os melhores indicadores ecológicos nos remanescentes. Estes grupos formaram a base de dados do Índice de Integridade Biótica (IIB) um método multimétrico que obteve um melhor desempenho em refletir a integridade existente nos remanescentes quando comparado com os níveis de sensibilidade a distúrbios antrópicos de Parker III et al. (1996), riqueza geral das assembleias e índice de diversidade de Shannon. Foram registradas 132 espécies nas pastagens enquanto que apenas 72 nos canaviais, sendo que tanto a riqueza geral quanto a abundância relativa de alguns grupos de aves foram explicadas pela variação na heterogeneidade da paisagem. Assim, conclui-se que métodos analíticos classicamente utilizados em ecologia podem apresentar falhas na avaliação ecológica de remanescentes de Mata Atlântica inseridos em paisagem antrópica, ocasionando interpretações errôneas. Novos métodos analíticos devem ser explorados, sendo o IIB um possível substituto. A diferença existente entre as assembleias de aves ocorrentes nas pastagens, (maior heterogeneidade) e nos canaviais (baixa heterogeneidade) indicam as consequências negativas que homogeneização da paisagem agrícola pode ocasionar à biodiversidade ocorrente nestas paisagens. / Because human-modified landscapes (HML) are dynamic and have structural complexity, continuous research is necessary to improve knowledge about the HML impacts on the biodiversity, as well as to provide knowledge of which current species may reflect the environmental conditions existing there. Thus, considering birds as sample of the HML existing biodiversity, the following thesis aimed to: 1) describe the bird assemblages of Atlantic Forest patches located in HML and bird assemblages of the interior of cattle pastures and sugar cane crops, 2) identify a proper bird analytical approach to assess the existing ecological integrity of forest patches in HML, 3) assess the effects of the landscape features (dynamic and structure) on the bird assemblages of forest patches in HML, 4) identify which landscapes features of both crops may exert influence on the bird assemblage composition of each crop. Bird sampling was performed monthly along one year (Nov 2011 - Nov 2012) in eight forest patches with different historical and size (3 - 115 ha), and eight sites located in the interior of each crop (four in cattle pasture and four in sugar cane), using point counts and transects. Five focal landscapes (16 km2) located in a typical HML of São Paulo state (Corumbataí river basin) were used to select these sampling sites. The rank of ecosystem services provisioning of Ferraz et al. (2014) was used as a measurement of the existing gradient of human disturbance in the forest patches, which was built through information about forest dynamic and structure. The landscape features of each crop were collected through two scale of analysis (circular buffers with 600 and 1000 radius meters) taking into account metrics that may represent the landscape heterogeneity. 191 species were observed in the forest patches while 137 in the crops. The forest birds, non-forest birds, birds with forest-non-forest habits, small understory-midstory insectivorous, species with foraging habits in the midstory strata, threatened and endemic species, were the best ecological indicators of the forest patches. These bird groups were used as database in the development of the Index of Biotic Integrity (IBI), a multimetric approach, which showed a better performance to indicate the existent integrity in the forest patches in comparison with \"sensitivity to disturbance\" of Parker III et al. (1996), total species richness and Shannon´s diversity index. 132 species were observed in cattle pastures while 72 in sugar cane. Both richness and relative abundance of some bird groups were explained by the landscape heterogeneity variation. Thus, it is possible to conclude that some classical birds analytical approaches may be flawed in the ecological assessment of Atlantic Forest patches inserted in HML. New analytical approaches should be explored, and the IBI is a possible alternative. The bird\'s assemblage differences between cattle pastures (high heterogeneity) and sugar cane (low heterogeneity) are an example of the negative consequences caused by the crops homogenization on the living biodiversity of agricultural landscapes.

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No Brasil, sete espécies estão envolvidas com a etiologia da doença, distribuídas em todas as regiões geográficas e responsáveis por diferentes manifestações clínicas. Diante disso, o diagnóstico em conjunto com a identificação da espécie é de grande importância clínico-terapêutica. Este trabalho tem por objetivo avaliar a aplicabilidade da técnica de PCR quantitativa em tempo real (qPCR) para identificação de espécies de Leishmania envolvidas com a etiologia da LTA. Foram realizados ensaios de qPCR para padronização da Temperatura de melting (Tm) utilizando cepas de referência de diferentes espécies de Leishmania. Após o diagnóstico em amostras de sangue de animais domésticos utilizando a qPCR, as amostras positivas foram analisadas através de suas Tm, e os produtos de qPCR foram purificados e sequenciados. Dez amostras previamente caracterizadas por isoenzimas, também foram analisadas através da Tm. Ainda como teste de referência, foi padronizada uma Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) utilizando as cepas de referência e testada nas amostras. Através da padronização da Tm das espécies, foram criados dois intervalos de análise: 1 (Tm = 78-79,99°C), que compreende: Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (V.) panamensis, Leishmania (V.) lainsoni, Leishmania (V.) guyanensis e Leishmania (V.) shawi; e 2 (Tm = 80-82,2°C), que compreende: Leishmania (V.) naiffi, Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (L.) mexicana. Um total de 223 amostras positivas foi analisado, destas, 58 incluídas no intervalo 1 e 165 no intervalo 2. O sequencimento de 94 destas amostras foi correspondente à L. (V.) braziliensis, L. (V.) panamensis e L. (V.) guyanensis. A RFLP em 173 amostras identificou 167 L. (V.) braziliensis, 05 L. (L.) mexicana e 01 L. (V.) panamensis. A análise da Tm das dez amostras caracterizadas por isoenzimas demonstrou 80 por cento de concordância (p = 0,6499) entre o padrão-ouro (isoenzimas) e os intervalos desenvolvidos neste estudo. Os resultados do sequenciamento foram concordantes com a qPCR em 43,62 por cento (n= 41) das amostras. A RFLP e qPCR tiveram 27,74 por cento (n= 48) de concordância. Análise estatística mostrou que a qPCR e sequenciamento são testes sem diferenças estatísticas significantes (p = 0,2566). Sendo assim, é possível concluir que a Tm da qPCR pode ser utilizada como um método para direcionamento da espécie de Leishmania presente na amostra em análise, sendo necessário a realização de métodos clássicos de caracterização, quando a precisão na identificação do parasito for crucial para implementação do tratamento, como em casos de resistência e/ou recidiva da doença. A utilização desta tecnologia pode ser ainda mais precisa quando for utilizada a metodologia com sondas desenhadas para cada espécie de Leishmania, sendo necessários estudos futuros para comprovar esta perspectiva (AU) / The American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is caused by protozoa of the genus Leishmania, involved in a complex biological cycle. In Brazil, seven species are involved in the etiology of the disease, distributed in all geographic regions and responsible for different clinical manifestations. Therefore, the diagnosis together with the identification of the species is of great clinical and therapeutic importance. This work aims to evaluate the applicability of the technique of real-time quantitative PCR (qPCR) for the identification of Leishmania species involved in the etiology of ACL. qPCR assays for standardizing the melting temperature (Tm) using reference strains of different species of Leishmania were performed. After the diagnosis on blood samples of domestic animals using the qPCR positive samples were analyzed by their Tm and qPCR products were purified and sequenced. Ten samples previously characterized by isoenzymes were also analyzed by Tm. Also as a reference test was standardized as Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) using the reference strains and tested on samples. Through standardization of Tm species two ranges of analysis were created: 1 (Tm = 78-79,99°C), comprising: Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (V.) panamensis, Leishmania (V.) lainsoni, Leishmania (V.) guyanensis e Leishmania (V.) shawi; and, 2 (Tm = 80-82,2°C), comprising: Leishmania (V.) naiffi, Leishmania (L.) amazonensis e Leishmania (L.) mexicana. A total of 223 positive samples were analyzed, of these, 58 included in the range 1 and 165 in the range 2 to 94 and the sequence of these samples corresponded to L. (V.) braziliensis, L. (V.) panamensis and L. (V.) guyanensis. By RFLP in 173 samples were identified 167 L. (V.) braziliensis, 05 L. (L.) mexicana and 01 L. (V.) panamensis The analysis of Tm of the ten samples characterized by isoenzymes showed 80 per cent agreement (p = 0.6499) between the gold standard (isoenzymes) and intervals developed in this study. The sequencing results were concordant with qPCR in 43.62 per cent (n= 41) of the samples. The RFLP and qPCR had 27.74 per cent (n= 48) agreement. Statistical analysis showed that qPCR and sequencing tests are no statistically significant differences (p = 0.2566). Thus, we conclude that the Tm of qPCR can be used as a method for direction of Leishmania species present in the sample under analysis, performing classic methods of characterization is necessary when the accuracy in identifying the parasite is crucial for implementation treatment, such as in cases of resistance and / or recurrence of the disease. The use of this technology can be even more precise when the methodology with probes designed for every Leishmania species is used; future studies are needed to confirm this view (AU)

O carcinoma epidermóide de pênis (CEP) representa 95% das neoplasias penianas e afeta quase sempre pacientes não circuncidados estando muitas vezes associado à falta de higiene local adequada e à fimose. No Brasil a sua incidência é de 2,7 % porém em algumas áreas do país pode chegar a 17% dos casos diagnosticados por ano. O tumor pode ocorrer em qualquer parte do órgão sexual masculino e o tipo de estadiamento empregado é controverso. A classificação de Broders é a mais utilizada. Estudos sugerem a relação entre o desenvolvimento do carcinoma de pênis com a infecção por HPV (Papiloma Vírus Humano). O método de avaliação dos linfonodos inguinais permanece controverso sendo difícil a diferenciação entre linfadenomegalia inflamatória reacional e metastática. O exame físico não é um preditor confiável do comprometimento linfonodal pois pacientes com linfonodos palpáveis podem não apresentar metástases. Há poucas publicações sobre os mecanismos moleculares envolvidos na gênese e progressão do CEP. Apesar de vários marcadores terem sido avaliados, atualmente a aplicação clínica destes é limitada. A maior parte dos marcadores estudados requer procedimentos invasivos para obtenção do tecido tumoral. Existe a necessidade de encontrar através de uma técnica pouco invasiva marcadores tumorais circulantes capazes de diferenciar portadores de CEP com e sem envolvimento metastático. Neste tipo de neoplasia, a descoberta de biomarcadores que avaliem o prognóstico é relevante, pois o exame físico não é um indicador confiável do comprometimento linfonodal e da sobrevida.Os objetivos foram 1) revisar e discutir a epidemiologia, a etiologia, os diversos tipos de abordagem cirúrgica e as controvérsias no tratamento cirúrgico do câncer de pênis 2) investigar através da plataforma ClinProt/ MALDI / TOF a presença de marcadores plasmáticos capazes de discriminar indivíduos saudáveis de pacientes afetados por carcinoma epidermóide de pênis (CEP) 3) avaliar a importância destes marcadores na evolução da doença. Foram coletados e analisados pela plataforma ClinProt / MALDI / TOF o plasma de 36 indivíduos saudáveis e 25 pacientes com CEP invasivo, submetidos a tratamento cirúrgico entre junho de 2010 e junho de 2011, nos serviços de urologia do Instituto Nacional de Câncer e do Hospital Mário Kröeff (Rio de Janeiro). Nossos resultados apontaram para um conjunto de dois peptídeos (A = m / z 1897,22 + -9 Da e B = m / z 2021,99 + -9 Da) que foram capazes de diferenciar pacientes com CEP de indivíduos controles. Esses peptídeos foram posteriormente identificados como fragmentos C3 e C4 A/B do sistema complemento. A validação cruzada, utilizando toda casuística apresentou 62,5% e 86,76% de sensibilidade e de especificidade, respectivamente, com uma alta sensibilidade (100%) e especificidade (97%) nos pacientes que morreram pela doença. Além disso, os pacientes com envolvimento ganglionar obtiveram uma sensibilidade e uma especificidade de 80 % e 97%, respectivamente. Ficou demonstrado que à medida que a doença progride mais subexpressos está o conjunto de peptídeos quando comparados com indivíduos saudáveis. Estes resultados podem ser úteis como ferramentas para a avaliação do prognóstico destes pacientes. / Squamous cell carcinoma of the penis (SSCP) represents 95% of penile cancers. It affects mostly uncircumcised patients and is often associated with lack of adequate local hygiene and phimosis. In Brazil, the incidence is 2.7% but in some areas of the country can reach 17% of diagnosed cases of cancer per year. The tumor can occur in any part of the sexual organ and the type of staging to be used is controversial. The Broders classification is more often used to classify tumors. Studies suggest the relationship between the development of penile carcinoma and HPV infection (Human Papilloma Virus). The evaluation method of inguinal lymph nodes remains controversial and it is difficult to differentiate inflammatory reaction from metastatic lymphadenopathy. Physical examination is not a reliable predictor of lymph node involvement since patients with palpable lymph nodes can not present metastases. There are few publications about the molecular mechanisms involved in the genesis and progression of the SSCP. Although several markers have been evaluated, currently the clinical application of these is limited. Most of the markers studied require invasive procedures for obtaining tumor tissue. There is a need to find through a minimally invasive technique circulating tumor markers able to differentiate SSCP patients with and without metastatic involvement. In this type ofmalignancythediscovery of biomarkers that assessthe prognosisis relevant since physical examination is not a reliable predictor oflymph node involvementand survival. The objectives of this study were: 1) to review and discuss the epidemiology, etiology, different types of surgical approach and controversies in the surgical treatment of penile cancer 2)to investigate via the platform ClinProt / MALDI / TOF presence of plasma markers able to discriminate healthy subjects from patients affected by squamous cell carcinoma of the penis (SCCP) 3) to evaluate the importance of these markers in disease progression. Between June 2010 and June 2011, plasma samples from 36 healthy subjects and 25 patients with penile carcinoma who underwent surgical treatment in the UrologyServicesofNational Cancer InstituteandMarioKröeffHospital were collected and analyzed by the ClinProt/MALDI/TOF platform. Our results found a cluster of 2 peptides (A=m/z 1897.22 +-9 Da and B=m/z 2021.99 +-9 Da that was able to discriminate patients from controls subjects. These peptides were further identified as C3 and C4 A/B fragments from complement system. Cross validation analysis using the whole casuistic showed 62.5% and 86.76% of sensitivity and specificity, respectively with a very high sensitivity (100%) and specificity (97%) for SCCP patients that have died by disease. Moreover, patients with lymph node involvement present a sensitivity and specificity of 80% and 97%, respectively. The results showed that as the disease progresses more under express are the cluster comparing with healthy subjects. These results may be useful as prognostic toll.

There isn t a unique development process suitable for all software projects. Standards and quality models such as ISO/IEC 15504, MPS.BR, CMM and CMMI, recommend the process tailoring to satisfy specific project features. However process tailoring is a complex task because it requires knowledge and expertise of who performs. The incomplete or duplicate process elements selection can generate ambiguities which may disturb the project progress and generate distrust in relation to the tailored process. This dissertation presents a systematic strategy to completeness and internal consistency validation of the elements that are part of the tailored process, call fragments. The aim is to contribute to improving the software development process quality and help the process engineer on the process tailoring task, providing complete and consistent process elements which are prioritized according to the project features. To support the proposed strategy have benn developed: i) ontology to similarity recognition among process; ii) a metamodel for process tailoring; iii) a web toll for complete and consistent process definition. The proposed strategy facilitates the work of the engineer showing which elements are adequate (complete and consistent) to be part of the tailored process and enables the elimination of inconsistences lead to improving the process. / Não existe um modelo de processo de desenvolvimento único para ser adotado para todos os projetos de software. Normas e modelos de qualidade como a norma ISO/IEC 15504, MPS.BR, CMM e o CMMI preconizam que a adaptação de processos seja realizada para satisfazer às necessidades específicas dos projetos. Entretanto, a atividade de adaptar um processo de software é considerada uma tarefa complexa, exigindo conhecimento e experiência de quem a realiza. A seleção de elementos de processo incompletos, ou duplicados podem gerar ambiguidades que podem comprometer o andamento do projeto e gerar desconfiança para com o processo adaptado. Esta dissertação apresenta uma estratégia sistemática para validação da completude e consistência interna dos elementos formadores do processo adaptado, neste trabalho chamados fragmentos. O objetivo é contribuir para a melhoria da qualidade dos processos de desenvolvimento de software adaptados e auxiliar o engenheiro de processos na tarefa de adaptação de processos, fornecendo elementos de processo completos, consistentes e priorizados de acordo com as características do projeto. Para apoiar a proposta, foram desenvolvidas: i) uma ontologia para reconhecimento da similaridade em processos; ii) um metamodelo para adaptação de processos e iii) uma ferramenta web para definição de processos completos e consistentes. A estratégia proposta facilita o trabalho do engenheiro de processos informando para este quais elementos são adequados (completos e consistentes), e possibilita a eliminação de inconsistências levando a melhoria do processo.