Os estudos da biotransformação têm-se mostrado um método eficiente para reações que envolvam a obtenção de compostos com interesse comercial. Dentre estes produtos utilizados podemos destacar monoterpenos por constituírem uma variedade de compostos com grande aplicação tanto no âmbito farmacêutico, como em perfumes, cosméticos e alimentos. As suspensões de células vegetais e os fungos filamentosos têm sido largamente usados em reações de biotransformação destes metabólitos secundários como substratos exógenos. A habilidade das culturas celulares e fungos em transformar tais compostos vêm sendo dirigidos principalmente para a obtenção de derivados oxigenados de maior valor agregado, principalmente visando à produção de flavorizantes, aromatizantes e fragrâncias. As suspensões de células vegetais apresentam sistemas enzimáticos mais complexos, podendo levar a produtos específicos, enquanto os microrganismos, por serem mais simples e de crescimento mais rápido, geralmente promovem mais rapidamente a metabolização dos substratos.Neste contexto, o presente trabalho descreve a investigação do potencial de bioconversão dos monoterpenos (R)-(+)-α-pineno, (S)-(-)-α-pineno e (S)-(-)-β- pineno, bem como do óleo de terebentina, para avaliação de suas potencialidades frente a reações de biotransformação mediadas pelos microrganismos Cunninghamella echinulata ATCC 9245, Mortierella isabellina NRRL 1757 e Cunninghamella elegans ATCC 36112 e por suspensões de células vegetais de Catharanthus roseus. Todos os sistemas estudados mostraram habilidade na bioconversão dos substratos testados. / Biotransformation has been an efficient method to obtain important commercial compounds such as monoterpenes, that have a range of applications in the pharmaceutical, perfumery, cosmetics and food industries. Plant cell cultures and filamentous fungi suspensions have been widely used in biotransformation reactions of monoterpenes as exogenous substrates. The ability of the cells and fungi cultures to transform these compounds has being mainly used for the synthesis of oxygenated derivatives aiming at the production of flavours and fragrances. The plant cell cultures suspensions have complex enzymatic systems with the production of specific compounds, where as filamentous fungi, which are structurally simpler and fast growing, can promote quicker transformations reactions. In this context, the present work describes the evaluation of bioconversion of the monoterpenes (R)-(+)-α-pinene, (S)-(-)-α-pinene, (S)-(-)-β-pinene, as well as turpentine oil using the filamentous fungi suspensions of Cunninghamella echinulata ATCC 9245, Cunninghamella elegans ATCC 36112 and Mortierella isabellina NRRL 1757, aswer as Catharanthus roseus plant cell cultures. All evaluated systems were capable of bioconverting the studied substrates. The main product obtained from pinenes and turpentine oil was α-terpineol.

Made available in DSpace on 2015-02-20T12:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 90.pdf: 3851149 bytes, checksum: e4dbb69d527e33af273cdc8bef40b262 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O ambiente tem sido fortemente impactado por uma diversidade de poluentes, principalmente, devido ao crescimento populacional e ao aumento da atividade industrial. Neste contexto, a contaminação de corpos d água por efluentes de indústrias têxteis tem tido destaque, pois os efluentes produzidos por este setor são constituídos por uma complexa mistura de poluentes. Os corantes mais extensivamente usados, os do tipo azo, quando lançados no meio aquático sofrem degradação podendo gerar aminas aromáticas e benzidinas, potentes agentes carcinogênicos e mutagênicos que além de afetar o ambiente podem causar danos à saúde humana. A persistência de resíduos perigosos no ambiente é um problema público que leva à necessidade da atuação de segmentos relacionados à Saúde Pública, inclusive a Vigilância Sanitária, na eliminação ou mitigação das conseqüências adversas decorrentes deste processo. A seleção de fungos capazes de descolorir e detoxificar esses corantes é uma alternativa promissora para substituir ou complementar os tratamentos convencionais. Sedimentos de vinte reservatórios de água do Parque Nacional da Serra da Capivara, área de preservação ambiental encravado na caatinga no Estado do Piauí, com clima semi-árido, foram avaliados com o objetivo de selecionar consórcios de fungos com capacidade de descolorir e detoxificar três azo corantes (Vermelho Reativo 198, Azul Reativo 214 e Vermelho Reativo 141), e destas amostras de sedimento selecionar fungos que apresentem esta mesma capacidade isoladamente. / O ambiente tem sido fortemente impactado por uma diversidade de poluentes, principalmente, devido ao crescimento populacional e ao aumento da atividade industrial. Neste contexto, a contaminação de corpos d’água por efluentes de indústrias têxteis tem tido destaque, pois os efluentes produzidos por este setor são constituídos por uma complexa mistura de poluentes. Os corantes mais extensivamente usados, os do tipo azo, quando lançados no meio aquático sofrem degradação podendo gerar aminas aromáticas e benzidinas, potentes agentes carcinogênicos e mutagênicos que além de afetar o ambiente podem causar danos à saúde humana. A persistência de resíduos perigosos no ambiente é um problema público que leva à necessidade da atuação de segmentos relacionados à Saúde Pública, inclusive a Vigilância Sanitária, na eliminação ou mitigação das conseqüências adversas decorrentes deste processo. A seleção de fungos capazes de descolorir e detoxificar esses corantes é uma alternativa promissora para substituir ou complementar os tratamentos convencionais. Sedimentos de vinte reservatórios de água do Parque Nacional da Serra da Capivara, área de preservação ambiental encravado na caatinga no Estado do Piauí, com clima semi-árido, foram avaliados com o objetivo de selecionar consórcios de fungos com capacidade de descolorir e detoxificar três azo corantes (Vermelho Reativo 198, Azul Reativo 214 e Vermelho Reativo 141), e destas amostras de sedimento selecionar fungos que apresentem esta mesma capacidade isoladamente. As culturas de fungos em consórcio oriundas do Caldeirão Escuridão foram as mais eficientes na descoloração e detoxificação dos três corantes. A partir deste consórcio foi possível isolar três fungos identificados como Candida rugosa, Trichosporon ovoides e Mucor sp. Destes isolados a levedura C. rugosa apresentou importantes resultados de descoloração e detoxificação quando comparada à cepa de referência Lentinula edodes. C. rugosa foi mais eficiente na descoloração de dois dos corantes testados e obteve melhor desempenho na detoxificação dos três corantes frente a L. edodes. Este é o primeiro trabalho descrevendo a capacidade de C. rugosa tanto na degradação quanto na detoxificação de corantes têxteis. Assim, este fungo se apresenta como um potencial agente na biorremediação de efluentes têxteis.

Orientador: Luis Henrique Souza Guimarães / Banca: Ariela Veloso de Paula / Banca: Rosimeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Banca: Hamilton Cabral / Banca: Sandra Regina Pombeiro Sponchiado / Resumo: Produtos naturais bioativos podem ser produzidos por organismos de todos os reinos, de procariotos a eucariotos. Entre esses, os fungos filamentosos são fontes abundantes de diversos metabólitos, como proteínas e enzimas, as quais vêm se destacando devido as suas diversas atividades biológicas, com aplicações não só na área farmacêutica e médica como também, nas indústrias alimentícia, de materiais e na agricultura. Recentemente, a resistência microbiana frente aos antibióticos disponíveis no mercado e o aparecimento de linhagens tumorais cada vez mais agressivas, torna urgente a investigação por novas moléculas bioativas, especialmente aquelas com baixa ou nenhuma toxicidade contra as células de mamíferos. Devido ao grande potencial das proteínas fúngicas, como promissoras moléculas com aplicações biotecnológicas, o objetivo deste projeto foi realizar a prospecção de proteínas bioativas secretadas por fungos filamentosos do gênero Aspergillus. Entre as diferentes espécies estudadas, Aspergillus niveus cultivado em fermentação submersa (FSbm), em meio YPD por 120 h, foi capaz de secretar uma proteína com massa molecular de 19 kDa. A proteína foi analisada por espectrometria de massas e os peptídeos identificados apresentaram identidade de 88 a 100% com outras ribotoxinas já descritas na literatura, como α-sarcina, restrictocina e Asp f1. A ribotoxina inibiu a proliferação celular in vitro de linhagens tumorais de glioblastoma (até 32%), melanoma (43%), osteossarcoma (41%) e m... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Natural products can be produced by organisms from all kingdoms, from prokaryotes to eukaryotes. Among these, filamentous fungi are abundant sources of various metabolites, such as proteins and enzymes, which have been outstanding due to their diverse biological activities, with applications not only in the pharmaceutical and medical areas but also in the materials and food industries and in agriculture. Recently, microbial resistance to available antibiotics and the increasingly of aggressive tumor cell lines, makes urgent the investigation of new bioactive molecules, especially those with low or without toxicity to mammalian cells. Due to the great potential of fungal proteins, as promising molecules with biotechnological applications, the objective of this project was the prospection of bioactive proteins secreted by filamentous fungi of the genus Aspergillus. Among the different species studied, Aspergillus niveus cultured under submerged fermentation (Sbmf), in YPD medium for 120 h, was able to secrete a protein with molecular mass of 19 kDa. The protein was analyzed by mass spectrometry and the peptides identified showed 88 to 100% of identity with other ribotoxins described in the literature, such as α-sarcin, restrictocin and Asp f1. The ribotoxin inhibited, in vitro, the cell proliferation of glioblastoma tumor cell line (up to 32%), melanoma (43%), osteosarcoma (41%) and medulloblastoma (50%) at concentration of 20 μg / mL and incubation for 72 h. The ribotoxin was ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A proposta deste trabalho foi demonstrar in vivo, por meio de técnicas específicas de isolamento, a presença de fungos filamentosos nos canais radiculares de dentes portadores de necrose pulpar e lesão periapical, relacionar sua presença a pacientes com resposta imunológica comprometida e realizar o estudo taxonômico dos isolados. Foram realizadas culturas de 60 canais radiculares com polpa necrosada e lesão periapical. Os pacientes responderam a um questionário de saúde e assinaram permissão para realização da pesquisa. Após isolamento absoluto e assepsia do campo operatório, as amostras foram coletadas utilizando-se 3 pontas de papel absorvente estéreis inseridas no canal radicular uma a uma, durante 1 minuto. Em campo isolado por duas lamparinas, o material coletado foi inoculado em um tubo de ensaio contendo meio de Saboraud Agar acrescido de Cloranfenicol. Próximo ao campo isolado pelas duas lamparinas, foi colocada uma placa de Petri aberta contendo o mesmo meio de cultura contido no tubo de ensaio, com o intuito de verificar a acuidade do isolamento do campo (controle negativo). Ao mesmo tempo foi efetuado um controle positivo, através de uma placa de Petri que permaneceu aberta durante a coleta, fora do campo isolado. Os tubos e placas de Petri foram mantidos em temperatura ambiente por um período de sete a quatorze dias observando o crescimento micelial. Aqueles que apresentaram crescimento foram semeados em meios específicos para microcultivo CYA Agar, Extrato de Malte Agar, ou Agar Batata. Com o auxílio de microscopia óptica, as colônias foram identificadas em gênero e espécie. Das 60 amostras coletadas, 17 apresentaram cultura positiva para fungos filamentosos, perfazendo um total de 28,3%. O gênero Aspergillus foi isolado, in situ, de 7 amostras (11,6%), sendo que a espécie Aspergillus ustus foi isolada de 3 pacientes (5%). O Aspergillus granulosus, Aspergillus niger e o Aspergillus sydowii foram isoladas de 3 pacientes respectivamente. A espécie Emericella quadriluniata, forma sexuada de Aspergillus, foi isolada de 1 paciente. O gênero Penicillium foi isolado, in situ, de 4 amostras (6,6%), sendo as espécies isoladas: Penicillium implicatum, Penicilium micsynvisk, Penicillium lividum e Penicillium citrionigrum. O gênero Fusarium foi isolado, in situ, de 2 amostras (3,3%), sendo as espécies identificadas como Fusarium moniliforme, Fusarium melanochorum, respectivamente. As espécies Aureobasidium pullulans, Exophiala jeancelmei, Eurotium amstelodame e Cladosporium sphaerospermum foram isoladas in situ de 4 amostras. Todos as amostras nas quais foi isolado fungo filamentoso pertenciam a pacientes com comprometimento da resposta imunológica. Nas placas de Petri empregadas no raio das duas lamparinas, não houve crescimento micelial. Entretanto nas placas controle positivo abertas para verificar a contaminação do meio ambiente houve crescimento de fungos ambientais que não eram compatíveis com os isolados dos canais radiculares, além de não apresentarem culturas puras. Pôde-se concluir que canais radiculares, com necrose pulpar e lesão periapical, podem apresentar cultura positiva para fungos filamentosos e que este resultado, neste estudo, apresentou relação direta com a deficiência da resposta imunológica do hospedeiro. / The purpose of the present study was to evaluate in vivo, with specific techniques that isolates the presence of filament fungus in the root canal of teeth with necrotic pulp and perirradicular disease, see the relationship between the presence of these fungus and patients with immunological deficiency and carry out a taxonomic study of the fungus isolated. It was fulfilled the culture of 60 root canals of teeth with necrotic pulp and perirradicular disease. The patients answered a health questionnaire and signed a term to allow the research. After the absolute isolation and cleaning the operating field the samples were collected using three sterile paper points inserted into the root canal during 1 minute. In an isolated field by two lamps, the collected materials were inoculated in a tube with Saboraud Agar with Cloranfenicol. Nearby the isolated field with lamps it was placed an opened Petri plaque with the same culture material from the tubes with the purpose to verify the perceptiveness of the isolated field (negative control). At the same time it was carried out the positive control group with an opened Petri plaque that was maintained far from the isolated fields. The tubes and the Petri plaque were maintained in atmosphere temperature during seven to fourteen days to observe micelial growth. Those that showed growth were spread on specific environment for microcultivation CYA Agar, Extract of Agar Malt or Agar potato. With the help of an optic microscope the colonies were identified in genre and species. Among the 60 samples collected, 17 showed positive culture for filament fungus, making up a total of 28,3%. The genre Aspergillus was isolated, in situ, of 7 samples (11,6%), and the species Aspergillus ustus was isolated from 3 pacients (5%). The Aspergillus granulosus, Aspergillus niger e o Aspergillus sydowii were isolated from 3 pacients respectivaly. The species Emericella quadriluniata, sexual form of Aspergillus, was isolated from 1 pacient. The genre Penicillium was isolated, in situ, from 4 samples (6,6%), where the species isolated were Penicillium implicatum, Penicilium micsynvisk, Penicillium lividum and Penicillium citrionigrum. The genre Fusarium was isolated, in situ, from 2 samples (3,3%), where the species identified were Fusarium moniliforme, Fusarium melanochorum, respectively. The species Aureobasidium pullulans, Exophiala jeancelmei, Eurotium amstelodame and Cladosporium sphaerospermum were isolated in situ from 4 samples. All the samples where it was isolated the filament fungus belonged to pacients with the imunolgical response compromised. On the Petri plaques employed at the range of the two lamp, it was not seen micelial growth. Thereby, on the positive control plaques, opened to check the contamination of the environment showed the growth of ambiental fungus that were not compatible with the fungus isolated from the root canal, and did not shor pure culture. It was concluded that root canal with necrotic pulp and periapical disease, can show positive culture for filament fungus and these results were directly related to the deficiency of the immunological response of the hostess.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-20T16:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 200029.pdf: 2579465 bytes, checksum: e99ac946bb2223c76b5cc08e7c9b1691 (MD5) / A crescente preocupação da população com a qualidade de vida e com a saúde fez com que houvesse um aumento no consumo de sucos a base de frutas naturais e sem conservantes. Os fungos filamentosos termorresistentes são um dos principais contaminantes de sucos processados termicamente. Estudos sobre a incidência de fungos termorresistentes evidenciam que o solo é a principal fonte de contaminação das frutas por estes fungos. Conseqüentemente, frutas e vegetais que estiverem em contato ou próximos do solo são mais susceptíveis à contaminação por estes microrganismos que, além de produzirem enzimas que degradam as frutas e seus produtos derivados, podem produzir micotoxinas. A elaboração de produtos de frutas a partir de matéria-prima contaminada por esporos termorresistentes compromete a vida de prateleira do produto, uma vez que este será deteriorado antes do prazo de validade previsto, pois estes fungos sobrevivem às temperaturas normais de pasteurização e se desenvolvem no produto final. Neste contexto, a microbiologia preditiva se apresenta como uma ferramenta importante no estudo do crescimento de vários microrganismos, como os fungos filamentosos termorresistentes, sendo que um dos modelos mais utilizados é o Modelo de Gompertz Modificado. Este trabalho teve por objetivo avaliar o crescimento de Byssochlamys fulva e de Neosartorya fischeri, fungos de reconhecida resistência térmica, pelo método de diluição e plaqueamento, em sucos naturais de abacaxi e maracujá, às temperaturas de 20 e 30ºC. Foi proposta ainda a avaliação do crescimento destes fungos pelo método de filtração, como um método alternativo. Uma comparação entre os parâmetros de crescimento velocidade específica máxima de crescimento (m), duração da fase lag (l) e aumento logarítmico da população (A) obtidos graficamente e estimados pelo Modelo de Gompertz Modificado, demonstrou que, em média, a diferença entre os valores obtidos para estes parâmetros foi de 36,6%, 15,9% e 8,08%, respectivamente. O Modelo de Gompertz Modificado ajustou-se bem aos dados experimentais, com coeficientes de correlação que variaram de 0,90 a 0,99. Durante a fase lag, foi observada uma diminuição da população, o que dificultou o ajuste do modelo, que não prevê este comportamento. Os valores de velocidade específica máxima de crescimento e duração da fase lag, estimados para B. nivea, foram os mais afetados pela variação do meio e da temperatura de crescimento, praticamente não havendo diferença na população máxima atingida. Somente o crescimento de B. nivea foi avaliado pelo método de filtração. Neste método, foi observada uma dificuldade na caracterização da fase lag devido às pequenas quantidades de biomassa a serem medidas nesta fase do crescimento. Foi observado que o crescimento de B. nivea em suco de abacaxi ocorreu em 3 dias quando estocado a 20°C e em 1 dia e meio quando estocado a 30°C. O crescimento deste fungo em suco maracujá apresentou uma pequena variação crescendo em 4 dias quando estocado a 20°C e em apenas um dia quando estocado a 30°C. Os resultados evidenciam a importância da prevenção da contaminação da matéria-prima de sucos de frutas por fungos filamentosos termorresistentes, uma vez que a vida de prateleira destes sucos pode ser drasticamente diminuída.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fungi are organisms that have high importance as they are the primary decomposers of all terrestrial ecosystems and have critical ecological functions in nutrient cycling and associations with other organisms. Metabolic diversity of fungi aroused great interest for technological research, as new natural products are continually being produced by fungi. However, only a small part of fungal diversity has been grown and selected as biotechnology resource. Much of the potential of fungi is due to the diversity in production of hydrolytic enzymes such as chitinase, which can be used for various purposes. The chitinases hydrolyze the β-1.4 linked in chitin polymer resulting in the release of chito-oligomers. These enzymes are studied for numerous applications such as the production of biopesticides for agriculture use. Despite this relevance, some factors limit a wider commercial use of chitinases such as the lack of organisms with high production rates, high production cost, and low activity and stability of available chitinases. The objectives of this study were to isolate and identify producers of chitinase fungi, evaluate the production of this enzyme in solid state fermentation (SSF), optimize the production of chitinase by largest producer in SSF, evaluate different sources of chitin for the production of chitinase and various solvents for extraction of the enzymes produced during the fermentation process and evaluate the effectiveness of the enzyme extract and biological control in mortality of phytopathogenic nematodes Meloidogyne javanica and M. incognita. 51 fungi were isolated from the exoskeleton of Tibraca limbativentris bugs in 5 collection points distributed in Rio Grande do Sul, Brazil. From the isolated, 50 produced chitinases and ten were selected as the best producers of this enzyme in SSF utilizing wheat bran and macro- and micro-nutrients solution. The ten isolated were identified by ITS1-5.8S-ITS2 nrDNA region. The isolated selected Trichoderma sp. UFSMQ40 with 13.07 U gds-1 of chitinase, followed by the isolated Fusarium sp. UFSMQ32 (11.35 U gds-1), Trichoderma sp. UFSMQ24 (10.11 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ18 (10.05 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ1 (9.84 U gds-1), Lecanicillium sp. UFSMQ6 (971 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ27 (9.11 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ12 (8.92 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ49 (8.16 U gds-1) and Fusarium sp. UFSMQ17 (8.05 U gds-1) showed high production of chitinase in SSF. Subsequently this step, the isolated Trichoderma sp. UFSMQ40 was identified as Trichoderma koningiopsis by amplification of the tef1 gene fragment. As an optimization result the increased production of chitinases by this fungus in SSF was 10.76 U gds-1 and occurred when the wheat bran substrate was used with 55% moisture, 5 g of corn steep liquor, two inoculum disks at 30 °C for 72 h. The colloidal chitin, powders and flakes, should be used as enzyme inducers without altering the production of the chitinase isolated. The use of 75 mL of citrate-phosphate buffer was the best extractor evaluated for the chitinase produced by this isolated in SSF. The Trichoderma koningiopsis UFSMQ40 presents potential for the industrial production of chitinase using agricultural residues as substrates and high nematicide effect against Meloidogyne incognita e Meloidogyne javanica. / Os fungos são organismos que apresentam elevada importância, pois são os decompositores primários dos ecossistemas terrestres, possuem funções ecológicas críticas na ciclagem de nutrientes e nas associações com outros organismos. A diversidade metabólica dos fungos desperta grande interesse para exploração tecnológica, pois novos produtos naturais estão continuamente sendo produzidos por estes. Entretanto, apenas uma pequena parte da diversidade fúngica tem sido cultivada e selecionada como recurso biotecnológico. Grande parte desse potencial dos fungos se deve a diversidade da produção de enzimas hidrolíticas, como as quitinases, que podem ser utilizadas para diversos fins. As quitinases hidrolisam as ligações β-1,4 no polímero de quitina, resultando na liberação de quito-oligômeros. Essas enzimas são estudadas para várias aplicações, como na produção de bioinseticidas para uso na agricultura. Apesar dessa relevância, alguns fatores restringem uma exploração comercial mais ampla das quitinases, como a escassez de microrganismos com altas taxas de produção, o alto custo de produção, e a baixa atividade e estabilidade das quitinases disponíveis. Os objetivos deste estudo foram isolar e identificar fungos produtores de quitinases, avaliar a produção desta enzima em fermentação em estado sólido (FES), otimizar a produção de quitinases pelo isolado maior produtor desta enzima, avaliar diferentes fontes de quitina para a produção de quitinase, testar diferentes solventes para a extração das enzimas produzidas durante o processo fermentativo e avaliar a efetividade do extrato enzimático e do controle biológico na mortalidade dos nematoides fitopatogênicos Meloidogyne javanica e Meloidogyne incognita. Foram isolados 51 fungos a partir do exoesqueleto de percevejos Tibraca limbativentris em 5 pontos de coleta distribuídos no Rio Grande do Sul, Brasil. Dos isolados, 50 produziram quitinases e dez foram selecionados como os melhores produtores desta enzima, em FES utilizando farelo de trigo e solução de macro e micro nutrientes. Esses dez isolados foram identificados pela região ITS1-5.8S-ITS2 do nrDNA. O isolado selecionado Trichoderma sp. UFSMQ40 com 13,07 U gds-1 de quitinase, seguido dos isolados Fusarium sp. UFSMQ32 (11,35 U gds-1), Trichoderma sp. UFSMQ24 (10,11 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ18 (10,05 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ1 (9,84 U gds-1), Lecanicillium sp. UFSMQ6 (9,71 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ27 (9,11 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ12 (8,92 U gds-1), Fusarium sp. UFSMQ49 (8,16 U gds-1) e Fusarium sp. UFSMQ17 (8,05 U gds-1) apresentaram elevada produção de quitinases em FES. Após essa etapa, o isolado Trichoderma sp. UFSMQ40 foi identificado como Trichoderma koningiopsis pela amplificação do fragmento do gene tef1. Como resultado da otimização, a maior produção de quitinases por este fungo em FES foi de 10,76 U gds-1 e ocorreu quando foi utilizado no substrato farelo de trigo: 55% de umidade, 15% de quitina coloidal, 100% de água de maceração de milho, dois discos de inóculo à 30 °C por 72 h. A quitina coloidal, em pó e em flocos, podem ser utilizadas como indutores enzimáticos sem alterar a produção de quitinase pelo isolado. A utilização da razão 1:15 de tampão citrato-fosfato foi o melhor extrator avaliado para as quitinases produzidas por este isolado em FES. O isolado Trichoderma koningiopsis UFSMQ40 apresenta potencial para a produção industrial de quitinases utilizando resíduos agroindustriais como substratos e elevado efeito nematicida contra Meloidogyne incognita e Meloidogyne javanica.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5727.pdf: 2828678 bytes, checksum: 885d69e6ec03d3b4f41caf8cc2b8b382 (MD5) Previous issue date: 2014-02-14 / Universidade Federal de Minas Gerais / Recently, the studies in the area of hybrid materials composed by biological structures have been of great interest, since they are considered versatile biotemplates in wich referred to the organization of nanostructured functional materials, mainly aiming technological attributions. Therefore, the central objective of this Master s Dissertation was the construction of microtubules formed by multilayers combined of gold and silver nanoparticles using as biotemplates the fungus Aspergillus aculeatus, which originated, thus, stable hybrid mesostructures with high potential of application to sensors and biosensors. The fungus was cultivated in a rich environment of citrate and, after the development of the hyphae, the colloidal dispersion of nanoparticles was added. Studies were done with relation to the effect of the synthesis temperature and the concentration of citrate in the average size of the gold nanoparticles and, posteriorly characterized by X-ray diffraction (XRD), scanning electron microscopy (SEM) and spectroscopy of absorption in the UVVis region. The formation of multilayer composed by different metal nanoparticles was evaluated too. The hybrid materials were characterized by scanning electron microscopy with microanalysis by EDX (SEM-EDS). The obtained results showed that the either concentration of citrate or the temperature directly affect the average size of the gold nanoparticles with expressive results to the temperature. In which referred the formation of the microtubules with different metal nanoparticles, three distinct regions were identified, namely, containing just gold nanoparticles, containing gold and silver nanoparticles and containing just silver nanoparticles, fact discussed in this Master s Dissertation by the differentiation of hyphae growth inside the colloidal dispersion. / Recentemente, os estudos na área de materiais híbridos compostos de estruturas biológicas têm sido de grande interesse, uma vez que são considerados biotemplates versáteis no que se refere à organização de materiais funcionais nanoestruturados, principalmente visando atribuições tecnológicas. Assim, o objetivo desta dissertação de Mestrado foi a construção de microtubos formados por multicamadas combinadas de nanopartículas de ouro e de prata utilizando como biotemplate o fungo Aspergillus aculeatus, originando, portanto, mesoestruturas híbridas estáveis com alto potencial de aplicação a sensores e biossensores. O fungo foi cultivado em um ambiente rico em citrato e após o desenvolvimento das hifas, foi adicionada a dispersão coloidal de nanopartículas. Foram feitos estudos com relação ao efeito da temperatura de síntese e da concentração de citrato no tamanho médio das nanopartículas de ouro, e posteriormente caracterizados por difração de raios X (DRX), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia de absorção na região do UV-visível. Também, foi avaliada a formação de multicamadas compostas de diferentes nanopartículas metálicas. Os materiais híbridos foram caracterizados por microscopia eletrônica de varredura com microanálise por EDS (MEV- EDS). Os resultados obtidos mostraram que tanto a concentração de citrato quanto a temperatura afetam diretamente o tamanho das nanopartículas com resultados expressivos para a temperatura. No que tange a formação de microtubos com diferentes nanopartículas metálicas, três distintas regiões foram identificadas, a saber, contendo somente nanopartículas de ouro, contendo nanopartículas de ouro e de prata e contendo somente nanopartículas de prata, fato discutido nessa Dissertação de Mestrado pela diferenciação de crescimento das hifas dentro da dispersão coloidal.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T18:46:07Z : No. of bitstreams: 1 adalberto_pr_dr_araiq.pdf: 786247 bytes, checksum: cf55691544529062c4d2288dd8709c7a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A β-D-galactopiranosídeo hidrolase é uma enzima com ampla aplicação tecnológica, clínica e experimental. A enzima possui um íon de metal bivalente coordenado. Para se obter informações a respeito do centro metálico da enzima, algumas espécies de fungos filamentosos foram testadas para a produção de β−galactosidase, ente as quais, a linhagem de Trichoderma reesei FTKO foi selecionada. O extrato enzimático, ao passar pelo processo de purificação, revelou ao menos duas isoformas de β- galactosidase identificadas como BGT I e BGT II. As enzimas são termofílicas e termotolerantes. A dependência do pH para a atividade, os valores de medidas cinéticas e a atividade revelada em gel de poliacrilamida distinguem as isozimas. Para avaliar a necessidade de metais bivalentes foi padronizada uma metodologia de desativação da enzima, apoiado na competição entre o agente seqüestrante e a enzima pelos metais. A metodologia foi aplicada ao o extrato comercial Lactozym 3000 (Novozyme Latin America Ltd.) revelou a necessidade de metal para a sua atividade com a desativação seguida de reativação pelos íons Mg2+, Mn2+, Co 2+, Ni2+, mas não por Zn2+ e Eu3+. A enzima BGT I (pH ótimo de 4,5) mostrou-se, contudo, resistente à desativação, pois se mantém ativa mesmo em altas concentrações de EDTA. / The β-D-galactopiranosyde-hidrolase is an enzyme with large technological, clinic, and scientific application. The enzyme coordinates a bivalent metal ion. In order to investigate the metal center of the enzyme of moulds, some strains were tested for β−galactosidase production. Among then, Trichoderma reesei FTKO were selected. The partially purified enzymatic extract reveals the production of two isoforms of β-galactosidase, at least. This enzymes are identified as BGT I e BGT II. Both are termophylic and thermotolerant. The pH dependence, the measured kinetic values and the activity revealed in polyacrylamide electrophoresis gels distinguished the isozymes. The metal assistance of enzymatic activity was evaluated in a standard deactivation methodology of enzyme by competition for the metal by chelating agent and metal site of enzyme. When this methodology was applied in the deactivation of commercial extract Lactozym 3000 (Novozyme Latin America Ltd.), revealed the metal importance for activity. The deactivation was reverted by metals ions as Mg2+, Mn2+, Co2+, Ni2+, but not by Zn2+ or Eu3+. On the other hand BGT I enzyme (optimal pH of 4,5) maintained the activity, even in high concentration of EDTA.

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-24Bitstream added on 2015-05-14T16:59:44Z : No. of bitstreams: 1 000828601.pdf: 2257163 bytes, checksum: 0339aef0ed41dca2009f6cdc4a972bc0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O interesse por micro-organismos, em especial os fungos derivados de ambientes poucos explorados como a Antártica, tem crescido nas últimas décadas. Os ecossistemas da Antártica por serem caracterizados por extremos de temperatura, salinidade ou valores de pH, inviabilizam o desenvolvimento de muitas formas de vida, sendo os micro-organismos os mais adaptados para se proliferar nos substratos deste continente. Os micro-organismos que se desenvolvem nos ecossistemas Antárticos são capazes de produzir enzimas adaptadas ao frio, as quais possuem potencial aplicação em diversos setores de importância econômica. O presente projeto é parte do Projeto Fapesp 2010/17033-0 intitulado “Exploração biotecnológica de fungos derivados da Antártica” coordenado pela Profa. Dra. Lara Sette e teve como objetivo conhecer a biodiversidade, selecionar fungos filamentosos com potencial ligninocelulolítico e avaliar a produção dessas enzimas a médias e baixas temperaturas. Para tanto, foram utilizados 160 isolados recuperados de amostras marinhas e terrestres do continente Antártico que se encontram mantidos na coleção de pesquisa da DRM (CPQBA/UNICAMP) e na Central de Recursos Microbianos da UNESP (CRM-UNESP). Após a triagem inicial (em meio sólido e em meio líquido) dois fungos ligninolíticos foram selecionados para os experimentos subsequentes, um de origem marinha (P1) e outro de origem terrestre (M7), os quais foram identificados como Cadophora luteo-olivacea e Cadophora malorum, respectivamente. Os ensaios referentes à avaliação de diferentes fatores na produção de ligninases permitiu identificar os efeitos de cada uma das variáveis na atividade enzimática. Entretanto, a otimização da produção de lacase para o fungo C. luteo-olivacea P1 não foi eficiente, tendo em vista a baixa atividade desta enzima nas condições estudadas. Em substratos lignocelulósicos o fungo C. malorum M7 se destacou frente à atividade de... / The interest in microorganisms, especially fungi derived from underexplored environments such as Antarctica has increased in recent decades. Antarctica ecosystems have characteristics of extreme temperature, salinity or pH which prevents the development of many forms of life, being the micro-organisms the best adapted to proliferate in substrates of this continent. Microorganisms that grow in Antarctic ecosystems are able to produce cold adapted enzymes, which have potential application in many sectors of economic importance. This project is associated with the FAPESP Project 2010/17033-0 entitled “Biotechnological Exploitation of fungi derived from Antarctica, coordinated by Prof. Dr. Lara Sette and aims to know the biodiversity, to select filamentous fungi with lignocellulolytic potential and to evaluate the production of these enzymes at low and medium temperatures. For this purpose, we used 160 isolates recovered from marine and terrestrial samples of the Antarctic continent that have been maintained in the research collection of DRM (CPQBA/UNICAMP) and in the Microbial Resource Center of UNESP (CRM-UNESP). After the first screening (on solid medium and in liquid medium), two fungi were selected for subsequent experiments, one from marine sample (P1) and another one from terrestrial sample (M7), which were identified as Cadophora luteo-olivacea and Cadophora malorum, respectively. The assays regarding the evaluation of different factors in the production of ligninases allowed the identification of the effects of each variable on the enzyme activity. However, the optimization of laccase production by Cadophora luteo olivacea P1 was not efficient because the low activity of this enzyme under the conditions studied. In lignocellulosic substrates the fungus C. malorum M7 presents the best xylanase activity when grown on sugarcane bagasse and corn cobs. Among the 160 filamentous fungi studied, 76 were taxonomically characterized...

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:55Z : No. of bitstreams: 1 000844224_20160601.pdf: 362616 bytes, checksum: a0311183aabff0045355f750351c75a5 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-06-02T14:22:30Z: 000844224_20160601.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-02T14:23:10Z : No. of bitstreams: 1 000844224.pdf: 4065201 bytes, checksum: e54a6ae6edaf5bf99bd00ffc782a6ac7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo do presente trabalho foi avaliar a cinética de crescimento do fungo termófilo Myceliophthora thermophila M.7.7 em cultivo sólido. A aplicação imediata desta cinética é empregá-la a modelos de previsão de transferência de calor e massa em biorreatores; em horizonte mais amplo, a cinética poderá ser relacionada à secreção de metabólitos pelo microrganismo. O meio de cultivo foi composto por bagaço de cana de açúcar e farelo de trigo (proporção 7:3) e as determinações indiretas das concentrações de biomassa foram realizadas através de metodologias químicas analíticas e de análise de imagens. Os métodos analíticos se basearam nas quantificações de N-acetil-D-glicosamina e atividade de CMCase, α amilases, xilanases, proteases e teor de proteínas solúveis. A análise de imagens foi feita empregando-se o software Lenseye e a partir de fotografias digitalizadas, onde a quantificação do crescimento foi feita através da quantificação da área superficial ocupada pelo micélio fúngico e através de técnicas de Microscopia Ótica (MO) e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A técnica de análise do teor de N-acetil-D-glicosamina mostrou ser um bom indicativo de crescimento microbiano, com bom ajuste ao modelo logístico, resultando em um coeficiente R2 igual a 0,98, tendo permitido estimar os parâmetros cinéticos de crescimento, onde o Xmáx foi de 1,889 mg de glicosamina/g de fermentado. Além disso, foi possível observar com clareza as fases de crescimento acelerado, estacionária e de declínio, apesar de apresentar algumas incertezas na fase lag, provavelmente devido à heterogeneidade do meio de cultivo interferir na análise. A análise da cinética de secreção das enzimas estudadas foi um bom indicador das atividades metabólicas do fungo, mas não de seu crescimento. A determinação do teor de proteínas solúveis através da técnica de Lowry... / This work aimed to evaluate the growth kinetics of the thermophilic fungus Myceliophthora thermophila M.7.7 during solid-state cultivation (SEC). The immediate application of this kinetics is in heat and mass transfer modeling in SEC bioreactors; however, through the kinetics, the metabolic secretion could be understood and forecasted. The cultivation medium was composed by sugar cane bagasse and wheat bran in the proportion 7:3 and the indirect determination of biomass where done using analytical chemical techniques, as well as through image analysis. The analytical methods were based on the quantification of N-acetylglucosamine, extracellular enzyme activities, and soluble proteins. The digital analysis were performed using a specific software, and the growth quantification was correlated to the superficial area occupied by the microorganism and and through Optical Microscopy (LOM) and Scanning Electron Microscopy (SEM).The glucosamine analysis is considered an adequate method to quantify the microbial growth, since it aloud to clearly identify the phases of fast growing, stationary and decreasing, even though the lag phase identification was uncertain due to the interference of the cultivation medium on the analytical method. The analysis of CMCase, amylases, xylanases and proteases were good indicators of the fungal metabolic activities, but not of the fungal growth. The determination of the content of soluble proteins by Lowry technique presented uncertainties and do not represent faithfully all the microorganism development phases. The growth analysis by SEM possible to describe the morphological characteristics of the fungus, as the presence of conidia and hyphae propagation on fibrils branched from sugar cane bagasse. The digital image processing was well correlated to the analytical methods, but was also discarded as an adequate growth indicator. Nevertheless, this technique is promising ...