Submitted by Kamila Costa (kamilavasconceloscosta@gmail.com) on 2015-07-23T18:22:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertaçao - João R S de Souza.pdf: 1067465 bytes, checksum: ffb0fcdbdf112c8294e4d0590a7ffc54 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T18:38:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertaçao - João R S de Souza.pdf: 1067465 bytes, checksum: ffb0fcdbdf112c8294e4d0590a7ffc54 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T18:41:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertaçao - João R S de Souza.pdf: 1067465 bytes, checksum: ffb0fcdbdf112c8294e4d0590a7ffc54 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-23T18:41:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertaçao - João R S de Souza.pdf: 1067465 bytes, checksum: ffb0fcdbdf112c8294e4d0590a7ffc54 (MD5) Previous issue date: 2014-11-27 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The stingless bees are responsible for even 90% of native tree pollination and variety of organism associated with them is big like as insects, mites, bacteria, yeasts and filamentous fungi. Studies have been related interaction between fungi and stingless bees and this study aimed to identify the diversity of filamentous fungi which are associated with stingless bees (Melipona spp.) in two meliponários from Manaus and Iranduba, both in Amazonas state. It has been used 48 bee collected in rainy and drought seasons on 2013. The bees were collected when they entered in the colony and transferred to sterile tubes and were carried to Microorganisms’ Genetics Laboratory from Federal University of Amazonas (LAGEM), where bees were transferred to salty solution tubes and after that they were plated in triplicate on BDA and SABOURAUD media and incubated at 28 ºC to their development and colonies isolation. After fungi structures visualized, the identification was realized from microcultivation culture development under cover slips and deposited under slides; they were stained by lactophenol blue. Were isolated 482 colonies allocated in 16 genus. Penicillium, Fusarium, Acremonium, Cladosporium, Paecilomyces and Verticilium were genus with high frequency exceeding 50% of isolates; following by Aspergillus, Moneliella, Alysidium, Scedosporium, Rhinocladiella, Tritirachium, Pestalotiopsis, Torula, Mucor and Rhizopus beyond a lot of Mycelia sterilia colony. Genetics analysis of isolates confirmed 16 genus and 12 distinct species. Therefore, in Brazil, with meliponicultivation development in last years, mainly in traditional communities from North and Northeast, is indispensable more and depth studies about existence of these fungi in the surface body of stingless bees, because this study showed the diversity of fungi which are associated with stingless bees is highest and most of this fungi wa not related yet in surface of these insects. / As abelhas sem ferrão são responsáveis por até 90% da polinização das árvores nativas, grande é a variedade de organismos associados a elas, como insetos, ácaros, bactérias, leveduras e fungos filamentosos. Estudos já realizados têm relatado a interação dos fungos com abelhas sem ferrão. Desta forma este trabalho teve como objetivo identificar a diversidade de fungos filamentosos associados a abelhas sem ferrão (Melipona spp.) em dois Meliponários de Manaus e Iranduba, Amazonas. Foram utilizadas 48 abelhas, coletadas no período chuvoso e de estiagem do ano de 2013. As abelhas foram coletadas ao adentrarem na colônia, transferidas para tubos estéreis, acondicionados sob refrigeração, levadas ao Laboratório de Genética de Microrganismos (LAGEM) da Universidade Federal do Amazonas, onde as abelhas mortas foram transferidas para tubos contendo solução salina e posteriormente plaqueadas em triplicata em meios BDA e SABOURAUD. Foram incubadas a 28 oC para desenvolvimento e isolamento das colônias. Após a visualização das estruturas fúngicas, foi realizada a identificação a partir do desenvolvimento das culturas em microcultivo sob lamínulas, depositadas sobre lâminas e coradas com azul de Lactofenol. Foram isoladas 482 colônias distribuídas em 16 gêneros. Penicillium, Fusarium, Acremonium, Cladosporium, Paecilomyces e Verticillium apresentando maior frequência, ultrapassando 50% das colônias, seguidos de Aspergillus, Moniliella, Alysidium, Scedosporium, Rhinocladiella, Tritirachium, Pestalotiopsis, Torula, Mucor, e Rhizopus, além de várias Mycelia sterilia. Análise genética dos isolados confirmaram 16 gêneros e 12 espécies distintas. Assim, com o desenvolvimento da meliponicultura no Brasil nos últimos anos, principalmente em comunidades tradicionais do Norte e Nordeste, torna-se necessário o estudo aprofundado sobre a existência desses fungos na superfície corpórea de abelhas sem ferrão, onde esse estudo mostrou que a diversidade fúngica associada a esses organismos é elevado, e alguns desses fungos aqui descritos ainda não haviam sido relatados na superfície corpórea de abelhas sem ferrão.

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gabriela ferreira.pdf: 2171105 bytes, checksum: 7284a05e34ce4f40f5cadd3444c3723d (MD5) Previous issue date: 2013-06-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / An important source of genetic resources is microbial biodiversity for the advancement of biology and biotechnology. The present study aimed to characterize and identify microorganisms isolated from cupuaçu fruit (Theobroma grandiforum) that showed pigment production; analyze the pigments obtained by the technique of Thin Layer Chromatography in Silica Gel, High Performance Liquid Chromatography and Nuclear Magnetic Resonance; evaluate the pigment potential for human use by performing cytotoxicity assays; characterize the isolates for their potential to produce mycotoxins, and characterize the pigments obtained in relation to the presence of antioxidant activity. Were obtained 207 filamentous fungi from T. grandiflorum fruit, 85 of these showed potential for pigments production. On morphological and molecular analysis, 17 were taxonomically identified as Penicillium purpurogenum, all producers of an extracellular red pigment. The pigment was produced by the isolates in a short period of incubation in the absence or presence of light, at room temperature and on PDA. The stability assays performed showed that the pigment has high stability in relation to changes in temperature, pH and brightness, even in extreme conditions such as freezing, freeze-drying and heating in a microwave oven. Bioassays have shown that the pigment does not have antibiotic activity for testers micro-organisms (Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella typhi and Candida albicas) and also showed no cytotoxicity against Artemia salina. It was observed that butanol fraction of the extract showed antioxidant activity. The spectroscopic and chromatographic analyzes performed indicate that this pigment belongs to anthraquinones family. It is necessary further purification of the pigment, HPLC analyzes and NMR to be redone to obtain the structural determination of the molecule. The results obtained show that the red pigment presents a great potential for use as cosmetic and food coloring. Since it has chemical stability, water solubility, antioxidant activity, production in a short time and has no toxicity. These results provided information to confirm the feasibility of natural sources for producing pigments, effectively contributing to the advancement in the use of appropriate technologies to acquire new sources of natural compounds that occurs without less or any environmental impact. / A biodiversidade microbiana representa uma fonte importante de recursos genéticos para o avanço da biologia e biotecnologia. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar e identificar os micro-organismos isolados de frutos de cupuaçu (Theobroma grandiforum) que apresentaram produção de pigmentos; analisar os pigmentos obtidos por meio da técnica de Cromatografia em Camada Delgada de Sílica Gel, Cromatografia Líquida de Alta Eficiência e Ressonância Magnética Nuclear; avaliar o potencial para consumo humano dos pigmentos obtidos realizando ensaios de citotoxicidade; caracterizar os isolados produtores quanto ao seu potencial para a produção de micotoxinas; e caracterizar os pigmentos obtidos em relação à presença de atividade antioxidante. Foram obtidos 207 fungos filamentosos de frutos de T. grandiflorum, destes 85 apresentaram potencial para a produção de pigmentos. Em análise morfologica e molecular, 17 foram identificados taxonomicamente como Penicillium purpurogenum, todos produtores de um pigmento vermelho extracelular. O pigmento obtido foi produzido pelos isolados em curto período de incubação, na ausência ou presença de luz, em temperatura ambiente e incubação meio BDA. Os ensaios de estabilidade realizados demonstraram que o pigmento possui alta estabilidade em relação a mudanças de temperatura, pH e luminosidade, inclusive em condições extremas como congelamento, liofilização e aquecimento em forno de micro-ondas. Os bioensaios realizados demonstraram que o pigmento não possui atividade antibiótica para os micro-organismos testadores (Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella typhi e Candida albicas), assim como também não apresentou citotoxicidade para Artemia salina. Observou-se que a fração butanólica do extrato apresentou atividade antioxidante. As análises cromatográficas e espectrométricas realizadas indicam que este pigmento seja da família das antraquinonas. Faz-se necessário nova purificação do pigmento e que as análises em CLAE e RMN sejam refeitas para obter-se a determinação estrutural da molécula. Os resultados obtidos com o pigmento vermelho demonstram que este apresenta um grande potencial para sua utilização como colorante de cosméticos e alimentos, pois possui estabilidade química, solubilidade em água, atividade antioxidante, produção em um curto espaço de tempo e não possui toxicidade. Estas análises forneceram subsídios para confirmar a viabilidade de fontes naturais produtoras de pigmentos, contribuindo efetivamente com o avanço na utilização de tecnologias apropriadas para aquisição de novas fontes de compostos naturais com pouco ou sem nenhum impacto ambiental.

Submitted by Rosangela Silva (rosangela.silva3@unioeste.br) on 2018-05-24T14:48:48Z No. of bitstreams: 2 Ana Carolina Feil Kmetzski.pdf: 812447 bytes, checksum: 2d488034b2c65ee35de1c24cddd5d26d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-24T14:48:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Ana Carolina Feil Kmetzski.pdf: 812447 bytes, checksum: 2d488034b2c65ee35de1c24cddd5d26d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-02 / The pulp and paper industry is a globally expanding segment. Focusing on economic profitability and environmental preservation, the paper industry has been looking for viable alternatives to enhance the Kraft process. The chlorine bleaching conventional method, although highly efficient, causes environmental pollution due to the discharge of organochlorine compounds into effluents. The use of enzymes microorganisms, especially xylanases, has emerged as a promising alternative for the bleaching processes. These enzymes could considerably help reduce environmental pollution, reducing the use of organochlorine compounds, which acts as a bleaching chemical for pulps and causes the formation of organochlorine residual compounds, which are extremely harmful to the environment and give the pulp industry one of the most polluting. Therefore, studies that provide the use of enzymatic processes in the Kraft pulp bleaching stage by the industry will always be relevant, mainly in order to reduce the discharge of contaminating material into effluents. In this context, this review will discuss the characteristics of the constitution of the raw material for the pulp kraft paper industry, as well as the enzymatic properties of fungal xylanases cellulase-free tested on cellulose pulps, kraft and waste straw, which have potential for future use by paper industry. / A indústria de papel e celulose é um segmento em ampla expansão mundial. Com foco na rentabilidade econômica e preservação ambiental, a indústria papeleira tem buscado alternativas viáveis para aprimorar a etapa do processo da polpa Kraft. O método convencional de branqueamento da polpa com cloro, embora altamente eficiente, causa poluição ambiental devido à descarga de compostos organoclorados em efluentes. A utilização de enzimas de micro-organismos, em especial as xilanases, têm surgido como uma alternativa promissora para o processo de branqueamento da polpa Kraft. Essas enzimas podem auxiliar consideravelmente na redução da poluição ambiental, com diminuição da utilização de compostos organoclorados, que atuam como agentes químicos branqueadores das polpas e ocasionam a formação de compostos residuais que são extremamente prejudiciais ao meio ambiente e conferem às indústrias de celulose a condição de ser uma das mais poluidoras. Em razão disso, estudos que proporcionam o uso de processos enzimáticos na cadeia de branqueamento da polpa Kraft pela indústria serão sempre relevantes, principalmente com o intuito de reduzir a descarga de material contaminante em efluentes. Dentro desse contexto, essa revisão abordará sobre as características da constituição da matéria-prima para obtenção da polpa celulose pela indústria papeleira, bem como, as propriedades enzimáticas das xilanases fúngicas isentas de celulases testadas em polpas de celulose, kraft e palhas de resíduos que apresentam potencial para uso futuro pelas indústrias papeleiras.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Diogo pdf.pdf: 2699953 bytes, checksum: 09315b0edaa52c24cb3e4ee84d5626e7 (MD5) Previous issue date: 2011-06-20 / The Tiquira is a distilled alcoholic beverage prepared from the saccharification and subsequent fermentation of cassava. The processes of saccharification and fermentation are performed by micro-organisms that grow naturally in beijus exposed to the environment. The growth of these micro-organisms occurs over a period of approximately 8 days and as many strains are collected, the process yield and the quality of distillate are compromised. The objective is therefore to improve the quality of spirit cassava (Tiquira) produced in the state of Maranhão through the identification and selection of the best micro-organisms and fermentation and saccarifiying employed in artisanal process. The selected strains were subjected to studies, which identified the presence of filamentous fungi, bacteria and yeast. We identified three (3) species of filamentous fungi: Aspergillus niger, Aspergillus flavus and Rhizopus oryzae, which were tested before their power of sporulation in different culture media at 30oC, and the SDA medium provided the best composition for obtaining the fungal growth more quickly. Samples of R.oryzae, A.niger and A.flavus previously shown to be the best producers were selected for testing enzymatic saccharification of starch to evaluate and confirm the ability of conversion to glucose. The strain R. oryzae reached a conversion value of 78.02% on average using a standard temperature of 30oC, amount of 5.5 x 107 spores, pH 5 and 50g/l of soluble starch, giving a greater yield of saccharification, followed by A.flavus 71.55%, A.niger 57.17% and mixture of spores 48,02%. Therefore, it is evident that the use of filamentous micro-organisms native becomes an option for use in starch saccharification samples. / A Tiquira é uma bebida alcoólica destilada e preparada a partir da sacarificação e posterior fermentação da mandioca. Os processos de sacarificação e fermentação são realizados por micro-organismos que se desenvolvem naturalmente nos beijus expostos ao meio ambiente. O crescimento desses micro-organismos ocorre por um período aproximado de 8 dias e, como são diversas as linhagens coletadas, o rendimento do processo bem como a qualidade do destilado ficam comprometidos. O objetivo deste trabalho é, portanto, o de contribuir para a obtenção de uma maior qualidade da aguardente de mandioca (Tiquira) produzida no estado do Maranhão através da identificação e seleção dos melhores micro-organismos sacarificantes e fermentativos empregados no processo artesanal. As cepas selecionadas foram submetidas a estudos, onde identificamos a presença de fungos filamentosos, bactérias e uma levedura. Foram identificadas 3 (três) espécies de fungos filamentosos: Aspergillus niger, Aspergillus flavus e Rhizopus oryzae, os quais foram testados perante o seu poder de esporulação em diferentes meios de cultura a 30oC, tendo o meio SDA (Saboroud Dextrose Ágar) fornecido a melhor composição para o obtenção do crescimento dos fungos mais rapidamente. As amostras de R. oryzae, A. niger, A. flavus e a mistura destes esporos, que previamente mostraram ser melhores produtoras enzimáticas foram selecionadas para testes de sacarificação do amido para avaliar e confirmar a capacidade de conversão à glicose. A cepa R. oryzae alcançou um valor de conversão de 78,02% em média utilizando-se uma temperatura padrão de 30oC, quantidade de esporos 5,5 x 107, pH 5 e 50g/l de amido solúvel, obtendo o maior rendimento de sacarificação, seguida pelo A. flavus 71,55% , A. niger 57,17% e mistura dos esporos 48,02%. Portanto, evidencia-se que a utilização de micro-organismos filamentosos autóctones torna-se uma opção para uso em sacarificação de amostras amiláceas.

Os fungos filamentosos são utilizados em larga escala na produção de produtos biotecnológicos na indústria devido a sua versatilidade e um dos exemplos são as peptidases que representam uma das principais classes de enzimas hidrolíticas. As peptidases são hidrolases que catalisam a quebra das ligações peptídicas das proteínas e que nos microrganismos são responsáveis por funções fisiológicas e patológicas, além de ter muitas aplicações em diversos campos industriais. Neste estudo foram analisados diferentes bioprocessos fermentativos para produção de peptidases pelo fungo Aspergillus terreus. Este microrganismo foi capaz de produzir peptidases em ambos os bioprocessos, sólido ou submerso, obtendo melhor performance e o pico de produção no bioprocesso fermentativo sólido de valor 677U/mL, nas condições 5g de farelo de trigo, 72 horas, 30°C e 75% de umidade. Utilizando o bioprocesso fermentativo submerso também obtivemos resultados satisfatórios com pico de atividade de 360U/mL, nas condições de meio padrão suplementado com Caseína 0,5%, 72 horas e 35°C. A caracterização bioquímica parcial dos extratos dos dois bioprocessos mostrou semelhanças entre algumas características das enzimas produzidas como a faixa extensa de pH ótimo abrangendo regiões ácidas, neutra e alcalinas, temperatura ótima pontual de 55°C e perfil de inibição pelo PMSF e EDTA. Contudo, os perfis de estabilidade (pH e temperatura) e comportamento frente a adição de íons apresentaram respostas diferentes entre si, o que sugere a produção de enzimas diferentes produzidas pelo mesmo fungo em meios distintos. A microencapsulação por Spray Drying como processo de estabilização foi satisfatória obtendo rendimentos de 37,5-58,2% e com níveis acima de 50% de atividade enzimática. Em contrapartida, a imobilização enzimática demonstrou ser eficaz na etapa de ligação ao suporte, mas não foi capaz de estabilizar a enzima presente no extrato, o que ficou caracterizado pela perda de atividade proteolítica. / Filamentous fungi are extensively used in the production of biotechnological products in industry because of their versatility and one of the examples are peptidases which constitute a major class of hydrolytic enzymes. The peptidases are hydrolases which catalyze the cleavage of peptide bonds of proteins and microorganisms that are responsible for the physiological and pathological roles, in addition to having many applications in various industrial fields. This study evaluated various bioprocesses for fermentative production of peptidases by the fungus Aspergillus terreus. This microorganism was able to produce peptidase in both bioprocess, solid or submerged, achieving better performance in the solid bioprocess with peak of production of 677U/mL under the conditions 5g wheat bran, 72 hours, 30°C and 75% humidity . Using submerged fermentation bioprocess we also obtained satisfactory results with peak of activity of 360U/mL with conditions of standard medium supplemented with 0.5% casein, 72 hours and 35°C. Biochemical characterization of the two partial purified extracts showed similarities between some characteristics of the enzymes produced, as large optimum pH range spanning regions acidic, neutral and alkaline point temperature optimum of 55 ° C and the inhibition profile of PMSF and EDTA. However, the stability profiles (pH and temperature) and behavior in addition ions showed different responses to each extract, which suggests the production of different enzymes in different ways. Microencapsulation by Spray Drying and stabilization process was obtaining satisfactory yields of 37.5 to 58.2%, with levels above 50% of enzyme activity. In contrast, the enzyme immobilization step was effective in bonding the support, but was not able to stabilize the enzyme present in the extract, which was characterized by the loss of proteolytic activity

A pesquisa de linhagens com duplicação cromossômica, como a linhagem A de Aspergillus nidulans, teve oseu início no final da década de 1970. Durante este período foram isolados da linhagem A, diversos variantes deteriorados, que foram caracterizados genética e citologicamente. Neste trabalho de pesquisa, as analises genéticas demonstraram que os determinantes de deterioração ou segmentos de inserção de V5, V101, V102, V103 e V104 estão localizados nos grupos de ligação VIII, III, IV, VII e I respectivamente. As análises citogenéticas revelaram diversas alterações no ciclo celular e migração nucleares nas fases iniciais de desenvolvimento. A duplicação cromossômica da linhagem A e os variantes deteriorados foram investigados a nível molecular, por técnica de PCR. Os resultados mostraram que o segmento de inserção consiste de um provável Elemento de Transposição, denominado de MATE, o qual é característico do fungo Aspergillus nidulans. Os segmentos de inserção analisados apresentam características típicas de MATE, como o motivo “Spe” que é encontrado por toda seqüência dos Elementos MATE. / The research with chromosome duplication strains, as strain A of Aspergillus nidulans, began during the 70's, with isolation of several deteriorates variants of strain A and characterization by genetic and cytological analysis. In this work the genetic analysis has demonstrated that the deterioration determinant or insertion sequence in V5, V101, V102, V103 and V104 deteriorates variants are located in the linkages groups VIII, III, IV, VII and I, respectively. The cytological analyses have demonstrated changes in cellular cycle and nuclear migration in initial phases of development. The chromosome duplication of strain A and the deteriorated variants were investigated by PCR with designed primers to mobile elements, what have resulted in the identification of the transposable element MATE, mainly by great similarity with "Spe" motif sequence that is described as essential in activity of these elements.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-10T10:37:22Z No. of bitstreams: 1 anacristinacapelupimendes.pdf: 1977487 bytes, checksum: 25f7b78abcedf5b1f10fe8710aebbc3e (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T11:21:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 anacristinacapelupimendes.pdf: 1977487 bytes, checksum: 25f7b78abcedf5b1f10fe8710aebbc3e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T11:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anacristinacapelupimendes.pdf: 1977487 bytes, checksum: 25f7b78abcedf5b1f10fe8710aebbc3e (MD5) Previous issue date: 2015-07-31 / A contaminação de produtos alimentícios e medicinais pode ocorrer desde o cultivo até a estocagem, principalmente quando não existe controle das condições que favorecem o crescimento fúngico. O fungo Aspergillus carbonarius causa a deterioração dos produtos, além de produzir ocratoxina A, potencialmente carcinogênica e nefrotóxica. O aumento de cepas resistentes aos antifúngicos sintéticos além da diversidade de ações biológicas relacionadas às espécies vegetais Rosmarinus officinallis L. e Piper aduncum L. estimula as pesquisas científicas por novos antimicrobianos. Considerando o aumento da exposição aos agentes fúngicos, devido ao crescimento do consumo de produtos in natura, e a alta incidência de ocratoxina A, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a ação antifúngica e antiocratoxigênica dos óleos essenciais de R. officinallis L. e P.aduncum L. sobre o fungo Aspergillus carbonarius CDCA 0126. Os óleos essenciais foram obtidos por hidrodestilação e o perfil químico determinado por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas. O efeito inibitório dos óleos essenciais sobre os isolados fúngicos foi determinado pela associação dos métodos da difusão em disco e diluição em ágar e quantificação de ocratoxina por cromatografia líquida de alta eficiência. Foram identificados como compostos majoritários verbenona (24,61%), geraniol (17,55%) e 1,8 cineol (11,26%) e no óleo de P.aduncum L., piperitona (28,17%) e limoneno (10,42%). Os ensaios in vitro demonstraram a efetividade dos óleos na inibição do crescimento fúngico. O óleo essencial de R.officinallis L. reduziu em 94,36% a produção da ocratoxina A, sendo que o óleo de P.aduncum L. inibiu totalmente a produção. Os resultados deste trabalho indicam que os óleos essenciais avaliados representam uma alternativa promissora no controle do crescimento A. carbonarius e na produção de ocratoxina A. / The contamination of food and medicinal products plants, can occur from cultivation to storage, especially when there is no control of the conditions that favor fungal growth. The fungus Aspergillus carbonarius causes deterioration of products, in addition to producing ochratoxin A, a potentially carcinogenic and nephrotoxic. The increase of synthetic antifungal resistant strains beyond the diversity of biological actions related to Rosmarinus officinalis L. plant species and Piper aduncum L. encourages scientific research for new antimicrobials. Considering the increased exposure to fungal agents, due to elevation consumption of fresh products and the high incidence of ochratoxin A, this study aimed to evaluate the antifungal action and antiochratoxigenic property of essential oils R.officinallis L. and P. aduncum L. on the fungus Aspergillus carbonarius CDCA 0126. The essential oils were obtained by hydrodistillation and the chemical profile determined by gas chromatography-mass spectrometry. The inhibitory effect of essential oils on the fungal isolate was determined by the association of disk diffusion and agar dilution methods and the quantification of ochratoxin A released by high-performance liquid chromatography. They were identified as major compounds verbenone (24.61%), geraniol (17.55%) and 1,8 cineole (11.26%) in R.officinallis L. essential oil and piperitone (28.17%) and (10.42%) P.aduncum L.. In vitro assays demonstrated the effectiveness of oil in the inhibition of fungal growth. The essential oil R.officinallis L. reduced the 94.36% the production of ochratoxin A, whereas the oil P.aduncum L. completely inhibited production. These results indicate that the evaluated essential oils represent a promising alternative for the control of A. carbonarius growth and production of ochratoxin A.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2018-05-17T15:27:41Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-05-22T11:42:00Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2018-05-22T11:42:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018-05-03 / Os fungos têm um papel complexo no trato intestinal, influenciando diretamente na saúde e na doença e sua disbiose pode contribuir para a obesidade. O objetivo deste estudo foi avaliar a diversidade de fungos da microbiota intestinal humana entre indivíduos eutróficos, com sobrepeso e obesos. Foram coletados espécimes fecais de 72 indivíduos adultos e análises dependentes e independentes de cultivo foram realizadas para avaliar os fungos presentes. As leveduras foram identificadas pela técnica de ionização e dessorção a laser assistida por matriz acoplada a analisador do tipo espectro de massa por tempo de vôo (MALDI-TOF MS) e os fungos filamentosos por microcultivo. A contagem média de fungos filamentosos e leveduras cultiváveis foi de 1,58 Log10 UFC/g de fezes. Diferenças significativas no nível populacional dos fungos filamentosos foi observado entre os grupos dos indivíduos eutróficos e obesos. Trinta e quatro gêneros de fungos foram identificados. O filo predominante foi Ascomycota com 29 gêneros e/ou espécies diferentes, seguido por Zigomycota e Basidiomycota. O fungo mais isolado nos indivíduos eutróficos foi Paecylomyces sp. e nos indivíduos obesos Penicillium sp. Os indivíduos eutróficos apresentam uma diversidade ligeiramente maior de fungos filamentosos do que os indivíduos obesos. Os indivíduos do sexo feminino tiveram um maior número de fungos diferentes quando comparados aos do sexo masculino. A análise de eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE) mostrou agrupamento dos indivíduos eutróficos e com sobrepeso em um cluster e dos indivíduos obesos em outro cluster distinto, embora a riqueza tenha sido baixa nos três grupos. A análise de hibridização in situ florescente (FISH) demonstrou maior densidade relativa de C. albicans no grupo obeso quando comparado ao eutrófico e pela análise de reação da polimerase em cadeia quantitativa (qPCR) um número maior de cópias de DNA de fungos e do filo Ascomycota nos indivíduos obesos quando comparado aos indivíduos com sobrepeso e obesos. Foi verificada correlação positiva entre os fungos e os parâmetros antropométricos colesterol total, LDL, triglicerídeos, hemoglobina, HOMA-IR, HOMA-β, insulina, glicose sérica, creatinina e porcentagem de fibras e carboidratos da dieta. Outros estudos são necessários para melhor compreender a interrelação entre a micobiota do intestino e a obesidade. Futuramente, este conhecimento poderá ser utilizado na modulação da micobiota intestinal e no tratamento da obesidade. / Fungi have a complex role in the intestinal tract, directly influencing health and disease and potential dysbiosis could contribute to obesity. The aim of this study was to investigate the fungal diversity of human gut microbiota among eutrophic, overweight, and obese individuals and to understand the gut microbial ecology shifts between healthy and obese individuals. Stool samples of 72 adult individuals were collected and dependent and independent cultive approach were performed to evaluate the fungi. The yeasts were identified by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) and the filamentous fungi were identified by microculture. The mean count of filamentous fungi and yeast was 1.58 log10 CFU/g of feces. Significant differences in the population level of the filamentous fungi was observed within eutrophic and obese groups. Overall, 34 genera were identified. The predominant phylum was Ascomycota with 20 different genera, followed by Basidiomycota and Zygomycota. The most prevalent specie was Paecylomyces sp. in euthrophic individuals and Penicillium sp. in obese individuals. The results of the eutrophic individuals suggest a slightly higher diversity of fungi within these individuals. Female individuals had a greater diversity of fungal types compared to males. The denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) analysis showed the grouping of eutrophic and overweight individuals in one cluster and of obese individuals in another cluster, although richness was low in all three groups. The fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis showed a higher relative density of C. albicans in the obese group when compared to eutrophic and by the quantitative real time PCR (qPCR) a larger number of DNA copies of fungi and the phylum Ascomycota in obese individuals when compared to overweight and obese individuals. There was a positive correlation between fungi and the anthropometric parameters, total cholesterol, LDL, triglycerides, hemoglobin, HOMA-IR, HOMA-β, insulin, serum glucose, creatinine and percentage of dietary fibers and carbohydrates. Other studies are needed to better understand the causal relationship between gut mycobiota and obesity. This knowledge could be used in modulating the gut mycobiota and identifying future obesity treatments.

Orientador: Heloiza Ferreira Alves Prado / Banca: Maria de Lourdes Texeira de Moraes Polizeli / Banca: Paulo Cezar Ceresini / Resumo: Cento e quarenta e oito linhagens fúngicas, mesofílicas e termofílicas, foram isoladas de amostras de solo e de matéria orgânica em decomposição de áreas de Cerrado no estado do Mato Grosso Sul. Essas linhagens tiveram suas capacidades de crescimento a 35 ºC e 45 °C analisadas em meios contendo palha de milho como fonte de carbono. Sessenta e seis fungos, com crescimento a 45 ºC foram selecionados para testes de produção enzimática. A maioria das linhagens isoladas produziram xilanase e celulases (avicelase e CMCase) por fermentação em estado sólido (FES), inicialmente utilizando o farelo de trigo como substrato. Posteriormente, foram realizados os estudos do efeito da fonte de carbono e do perfil de produção de enzimas, utilizando diferentes substratos como: farelo de trigo, bagaço de cana-de-açúcar, serragem, sabugo de milho e com misturas destes na proporção de 1:1. A produção mais elevada de CMCase, 18 U/g, foi obtida pelo fungo Penicillium sp 1IP4-A2, em farelo de trigo, após 48 horas de cultivo. As maiores produções de avicelase 13,1 U/g, e xilanase, 370 U/g, foram obtidas pelo fungo Aspergillus sp 1IP2B1, quando cultivado em farelo de trigo e sabugo de milho, após 24 horas e 96 horas de cultivo, respectivamente. A xilanase referida acima, produzida pelo fungo Aspergillus sp 1IP2B1, apresentou atividade máxima em 55 ºC com pH de 5,5 e se manteve estável até 55 °C / Abstract: One hundred forty-eight mesophilic and thermophilic fungal strains were isolated from samples of soil and decomposing organic matter from Cerrado in the state of Mato Grosso do Sul. These strains have had their capacity for growth at 35 °C and 45 °C analyzed in culture medium containing corn straw as the carbon source. Sixty-six fungi, growing at 45 °C, were selected for enzyme production testing. The most of the isolated strains produced xylanase and cellulase (CMCase and avicelase) by solid state fermentation (SSF), initially using wheat bran as substrate. Subsequently, studies of the effect of carbon source and enzyme production profile were performed using different substrates: wheat bran, sugar cane bagasse, sawdust, corn cobs and mixtures in a 1:1 ratio. The highest CMCase production, 18 U/g, was produced by fungi Penicillium sp 1IP4-A2 in wheat bran, after 48 hours of cultivation. The highest avicelase production, 13.1 U/g, and xylanase, 370 U/g, were obtained by fungi Aspergillus sp 1IP2B1, in wheat bran and corn cob, after 24 hours and 96 hours of culture on solid fermentation, respectively. The xylanase produced by fungi Aspergillus sp 1IP2B1 showed maximum activity at 55 °C at pH 5.5 and it was stable up to 55 °C / Mestre

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V?rias pesquisas foram feitas desde que a L-asparaginase mostrou a habilidade de reduzir alguns c?nceres na d?cada de 50. Estas pesquisas incluem a triagem de micro-organismos produtores, a otimiza??o de meios de cultura para melhorar a produ??o e a procura de uma metodologia que consiga purificar a enzima a partir do estrato bruto. Tais pesquisas se intensificaram recentemente no Brasil devido a uma crise de abastecimento gerada pela interrup??o da importa??o pelo fornecedor. A L-asparaginase ? um princ?pio ativo de alta demanda para tratar a leucemia linfobl?stica aguda e por isso deve ser produzida no Brasil. Este estudo foi realizado utilizando a linhagem Penicillium sp. T8.3 e teve como objetivo aprimorar a produ??o da enzima ajustando as condi??es de cultivo, usando glicerol e L-asparagina (como fontes de carbono e nitrog?nio, respectivamente) e pH como as tr?s vari?veis de entrada. Os experimentos foram desenvolvidos aplicando ferramentas da estat?stica multivari?vel como planejamento fatorial, desenho composto central para gerar um modelo matem?tico emp?rico. Foram analisadas a concentra??o de am?nio e a atividade enzim?tica produzida nos bioprocessos. A atividade enzim?tica foi determinada em rea??o conduzida a 37 ?C e pH 7,0, condi??es semelhantes ? do meio fisiol?gico. Todos os dados estat?sticos foram gerados com o programa Statistica 7.0 ?. Foi produzida uma atividade m?xima de 12,7 U por bioprocesso estacion?rio conduzido em meio ajustado com 15,5 g.L-1 de glicerol, 5,6 g.L-1 de L-asparagina e pH 4,8. Desse modo, o ajuste das condi??es de cultivo permitiu elevar a produ??o em mais de 30 vezes e alcan?ar uma atividade enzim?tica superior ? maioria dos relatos da literatura que tratam da produ??o da enzima f?ngica. O modelo estat?stico previu a produ??o enzim?tica com 77% de acerto, mostrando sua validade experimental e o potencial da linhagem T8.3 para a produ??o de L-asparaginase eucarionte. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2017. / The enzyme L-asparaginase is nowadays used in both pharmaceutics and food industry because of its ability to catalyze the reaction of hydrolysis of L-asparaginase into ammonia and aspartate. This feature is useful in the food industry because it hinders the formation of carcinogenic compounds such as acrylamide. On the other hand, in the pharmaceutical industry, this enzymatic reaction prevents some leukemic cells from growing due to asparagine depletion. Since these cells have low levels or no asparagine synthase, their metabolic routes depend on amino acid absorption from physiological medium. Several researches have been carried out since L-asparaginase showed to reduce some cancers in the 50?s. These researches include the screening of producing-microorganisms, optimization of the culture media to increase enzyme production, and development of methodology to purify the enzyme from crude extracts. Such researches have recently been intensified in Brazil due to a supply crisis resulting from interruption of the importer activities. L-asparaginase is a pharmaceutical of high demand to treat acute lymphoblastic leukemia, and therefore, it must be produced by Brazil. This study was carried out with the strain Penicillium sp. T8.3, and aimed to improve enzyme production by adjusting culture conditions, and by evaluating glycerol and L-asparagine ? as carbon and nitrogen sources, respectively ? and pH as input variables. The experiments were developed by using multivariable statistic tools such as factorial planning and central composite design to generate an empirical mathematical model. It was analyzed the ammonium concentration and the enzymatic activity produced in the bioprocesses. L-asparaginase activity was determined in reactions conduced at 37 ?C and at pH 7.0, similar to the physiological conditions. All statistical data were obtained with the software Statistica 7.0 ?. A maximum activity of 12.7 U was produced by stationary bioprocess in media adjusted with 15.5 g.L-1 glycerol, 5.6 g.L-1 L-asparagine, and pH 4,8. Thus, adjustment of culture conditions allowed to increase production by 30 times, and to reach an enzyme activity higher than those reported by most of the literature that deals with production of the fungal enzyme. The statistical model predicted enzyme production with 77% of accuracy, showing its experimental validity and the potential of strain T8.3 to produce the eukaryote L-asparaginase. / La enzima L-asparaginasa es usada actualmente en la industria de alimentos y en la industria farmac?utica debido a su facilidad para catalizar la reacci?n de degradaci?n de L-asparagina en amoniaco y aspartato. Esta caracter?stica es ?til en la industria de alimentos puesto a que evita la producci?n de compuestos cancer?genos como la acrilamida. Por otro lado, en la industria farmac?utica, esta reacci?n detiene el crecimiento de c?lulas leuc?micas debido al desabastecimiento de L-asparagina al que las c?lulas se enfrentan. Ya que estas c?lulas tienen poca o ninguna asparagina sintetasa, sus rutas metab?licas dependen exclusivamente de la absorci?n de amino?cidos desde el medio fisiol?gico. Varias investigaciones se han llevado a cabo desde que la L-asparaginasa mostr? su capacidad para reducir algunos c?nceres en los a?os 50. Estas investigaciones incluyen la clasificaci?n de microorganismos como productores de esta enzima, la mejora de los medios de cultivo para optimizar la producci?n, y la b?squeda de una metodolog?a para purificarla desde el extracto celular. Estos temas de investigaci?n han ganado inter?s en Brasil debido a que el proveedor de este f?rmaco detuvo sus servicios. La L-asparaginasa presenta una alta demanda para tratar la leucemia linfobl?stica aguda y por lo tanto debe ahora producirse en Brasil. Este estudio se llev? a cabo utilizando una cepa Penicillium sp. T8.3 cuyo objetivo fue optimizar la producci?n de la enzima mediante ajustes en las condiciones de cultivo usando glicerol y L-asparagina (como fuentes de carbono y de nitr?geno, respectivamente) y pH como las tres variables de entrada. Los experimentos fueron desarrollados utilizando herramientas de estad?stica multivariable como un planeamiento factorial y un dise?o de compuesto central para obtener un modelo matem?tico emp?rico. Se analizaron la concentraci?n de amoniaco y la actividad enzim?tica en los procesos biotecnol?gicos. La actividad enzim?tica fue determinada en una reacci?n a 37 ?C y pH 7.0, condiciones similares al medio fisiol?gico. Todos los datos estad?sticos fueron obtenidos del programa Statistica 7.0 ?. Se obtuvo una actividad m?xima de 12.7 U en proceso biotecnol?gico estacionario en un medio ajustado con 15.5 g.L-1 de glicerol, 5.6 g.L-1 de L-asparagina y pH 4.8. Este ajuste de las condiciones de cultivo logr? aumentar la producci?n en m?s de 30 veces, bien como alcanzar una actividad enzim?tica superior a la mayor?a de los relatos de literatura que tratan de la producci?n de la enzima de hongos. El modelo estad?stico predijo la producci?n enzim?tica en 77% de acierto, mostrando su validez experimental y el potencial de la cepa T8.3 para la producci?n de la L-asparaginasa eucariota.