Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T09:52:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T23:11:09Z : No. of bitstreams: 1 142322.pdf: 27645979 bytes, checksum: be410a62c87fae625775f08cfa9fe531 (MD5)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:30:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337730.pdf: 3042114 bytes, checksum: b1db87538875d11b0c2804170ae64711 (MD5) Previous issue date: 2015 / Elevados níveis do aminoácido homocisteína (Hcy) são caracterizados como uma desordem metabólica denominada - hiperhomocisteinemia, a qual está envolvida com a ocorrência de anomalias congênitas. No sistema nervoso central (SNC) especificamente, esta condição está associada ao dano ao DNA, citotoxicidade neuronal, estresse oxidativo e prejuízo na síntese de neurotransmissores. Neste estudo, foi avaliado o efeito da dose alta de Hcy sobre a expressão das proteínas do ciclo celular, diferenciação e sobrevivência neural. Adicionalmente, investigamos o efeito da Hcy sobre a ultraestrutura das células do mesencéfalo em embriões de Gallus domesticus. Para tal, os embriões foram tratados com 48 horas de incubação (E2) onde foram organizados dois grupos experimentais: controle - 50 µl salina e Hcy - 20 µmol Hcy/50 µl salina. Os embriões foram analisados em duas idades - E6 e E10. Através da técnica de imuno-histoquímica, verificou-se uma redução significativa da proliferação celular na camada ependimária do mesencéfalo nos embriões em E6. A avaliação da expressão das demais proteínas envolvidas no ciclo celular como p53, p21, ciclina E e PCNA foi realizada pela combinação das técnicas de citometria de fluxo e imuno-histoquímica. O tratamento com Hcy induziu um aumento na expressão da proteína p53, e uma diminuição na expressão das proteínas p21 e ciclina E. Para as proteínas envolvidas no processo apoptótico, como BCL2 e BAK, não foram encontradas diferenças significativas nas duas idades analisadas. Na análise da diferenciação neural encontramos um aumento significativo na expressão da proteína GFAP em E6, o que caracterizamos como um processo de resposta celular denominado gliose reativa. Porém, esta resposta foi normalizada nos embriões na idade E10. Para a análise de sobrevivência neural, houve uma redução na expressão de BDNF e GDNF nos embriões expostos à Hcy na idade de E6. Por fim, através da técnica de microscopia eletrônica de transmissão, a análise ultraestrutural das células revelou alterações relacionadas ao espaço perinuclear e a formação anômala de membrana nos embriões expostos à Hcy nas idades de E6 e E10. Os resultados demonstram que, embora a Hcy não tenha induzido anomalias congênitas aparentes no SNC, o tratamento comprometeu os processos de proliferação celular, diferenciação glial e sobrevivência neural em G. domesticus.<br> / Abstract : High levels of amino acid homocysteine (Hcy) are characterized as a metabolic disorder named hyperhomocysteinemia, which is related to the occurrence of congenital anomalies. Specifically in the nervous system (CNS), this condition is associated with DNA damage, neuronal cytotoxicity, oxidative stress and impaired neurotransmitter synthesis. This study evaluated the effect of Hcy on the expression of cell cycle proteins, neuronal differentiation and survival. Additionally we investigated the effect of Hcy on the ultrastructure of midbrain in embryos aged E6 and E10. Thus, fertilized eggs of Gallus domesticus were treated at 48 hours of incubation (E2). Two experimental groups were organized: Control - 50 µl saline and Hcy - 20 µmol Hcy/50 µl saline. Embryos were analyzed at two embryonic ages - E6 and E10. Immunohistochemistry showed a significant reduction in expression cell proliferation in the ependymal layer of the midbrain at E6. Evaluation of expression of the other proteins involved in cell cycle such as p53, p21, cyclin E and PCNA were performed by the combination of flow cytometry and immunohistochemistry Hcy treatment induced an increase in p53 expression, and a decrease in the expression of the proteins p21 and cyclin E. Proteins involved in apoptosis, as BCL2 and BAK, not showed significant differences in both ages examined. The analysis of neural differentiation found a significant increase in protein expression GFAP at E6, which characterized as a process of cellular response termed reactive gliosis, but this response was standardized at E10. The quantification of the proteins neuronal survival BDNF and GDNF were quantified by flow cytometry and a significant reduction was found in embryos exposed to Hcy at E6, and this pattern is reversed at E10. Finally, by technique of transmission electron microscopy, the ultrastructural analysis of the cells showed changes related to the perinuclear space and the anomalous formation of membrane in embryos exposed to Hcy at E6 and E10. The results demonstrated that although Hcy did not induce congenital anomalies in the CNS, the treatment impaired the cellular processes of proliferation, differentiation glial and neuronal survival in G. domesticus.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-10-19T12:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337730.pdf: 3042114 bytes, checksum: b1db87538875d11b0c2804170ae64711 (MD5) Previous issue date: 2015 / Elevados níveis do aminoácido homocisteína (Hcy) são caracterizados como uma desordem metabólica denominada - hiperhomocisteinemia, a qual está envolvida com a ocorrência de anomalias congênitas. No sistema nervoso central (SNC) especificamente, esta condição está associada ao dano ao DNA, citotoxicidade neuronal, estresse oxidativo e prejuízo na síntese de neurotransmissores. Neste estudo, foi avaliado o efeito da dose alta de Hcy sobre a expressão das proteínas do ciclo celular, diferenciação e sobrevivência neural. Adicionalmente, investigamos o efeito da Hcy sobre a ultraestrutura das células do mesencéfalo em embriões de Gallus domesticus. Para tal, os embriões foram tratados com 48 horas de incubação (E2) onde foram organizados dois grupos experimentais: controle - 50 µl salina e Hcy - 20 µmol Hcy/50 µl salina. Os embriões foram analisados em duas idades - E6 e E10. Através da técnica de imuno-histoquímica, verificou-se uma redução significativa da proliferação celular na camada ependimária do mesencéfalo nos embriões em E6. A avaliação da expressão das demais proteínas envolvidas no ciclo celular como p53, p21, ciclina E e PCNA foi realizada pela combinação das técnicas de citometria de fluxo e imuno-histoquímica. O tratamento com Hcy induziu um aumento na expressão da proteína p53, e uma diminuição na expressão das proteínas p21 e ciclina E. Para as proteínas envolvidas no processo apoptótico, como BCL2 e BAK, não foram encontradas diferenças significativas nas duas idades analisadas. Na análise da diferenciação neural encontramos um aumento significativo na expressão da proteína GFAP em E6, o que caracterizamos como um processo de resposta celular denominado gliose reativa. Porém, esta resposta foi normalizada nos embriões na idade E10. Para a análise de sobrevivência neural, houve uma redução na expressão de BDNF e GDNF nos embriões expostos à Hcy na idade de E6. Por fim, através da técnica de microscopia eletrônica de transmissão, a análise ultraestrutural das células revelou alterações relacionadas ao espaço perinuclear e a formação anômala de membrana nos embriões expostos à Hcy nas idades de E6 e E10. Os resultados demonstram que, embora a Hcy não tenha induzido anomalias congênitas aparentes no SNC, o tratamento comprometeu os processos de proliferação celular, diferenciação glial e sobrevivência neural em G. domesticus.<br> / Abstract : High levels of amino acid homocysteine (Hcy) are characterized as a metabolic disorder named hyperhomocysteinemia, which is related to the occurrence of congenital anomalies. Specifically in the nervous system (CNS), this condition is associated with DNA damage, neuronal cytotoxicity, oxidative stress and impaired neurotransmitter synthesis. This study evaluated the effect of Hcy on the expression of cell cycle proteins, neuronal differentiation and survival. Additionally we investigated the effect of Hcy on the ultrastructure of midbrain in embryos aged E6 and E10. Thus, fertilized eggs of Gallus domesticus were treated at 48 hours of incubation (E2). Two experimental groups were organized: Control - 50 µl saline and Hcy - 20 µmol Hcy/50 µl saline. Embryos were analyzed at two embryonic ages - E6 and E10. Immunohistochemistry showed a significant reduction in expression cell proliferation in the ependymal layer of the midbrain at E6. Evaluation of expression of the other proteins involved in cell cycle such as p53, p21, cyclin E and PCNA were performed by the combination of flow cytometry and immunohistochemistry Hcy treatment induced an increase in p53 expression, and a decrease in the expression of the proteins p21 and cyclin E. Proteins involved in apoptosis, as BCL2 and BAK, not showed significant differences in both ages examined. The analysis of neural differentiation found a significant increase in protein expression GFAP at E6, which characterized as a process of cellular response termed reactive gliosis, but this response was standardized at E10. The quantification of the proteins neuronal survival BDNF and GDNF were quantified by flow cytometry and a significant reduction was found in embryos exposed to Hcy at E6, and this pattern is reversed at E10. Finally, by technique of transmission electron microscopy, the ultrastructural analysis of the cells showed changes related to the perinuclear space and the anomalous formation of membrane in embryos exposed to Hcy at E6 and E10. The results demonstrated that although Hcy did not induce congenital anomalies in the CNS, the treatment impaired the cellular processes of proliferation, differentiation glial and neuronal survival in G. domesticus.

Orientador: Edir Nepomuceno da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-05T13:16:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinto_AndreaTroller_D.pdf: 1260936 bytes, checksum: df21a83a56a9b358c3745669a0ae4ab3 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A salmonelose humana é epidêmica no mundo todo. O consumo de ovos in natura crus ou parcialmente cozidos está associado a esta ocorrência, principalmente quando possuem defeitos de casca e são submetidos a estocagem inadequada. Os trabalhos com contaminação experimental de ovos de galinha geralmente utilizam grandes inóculos e a imersão de ovos em culturas bacterianas puras. Este trabalho teve como objetivo utilizar metodologia de contaminação de ovos com casca íntegra ou com defeitos que se aproximam da realidade operacional de granjas e entrepostos de ovos a fim de avaliar alguns riscos de contaminação por Salmonella Enteritidis (SE) e Escherichia coli em ovos de consumo, a partir da simulação de condições reais como contaminação pós lavagem, lavagem manual, oscilação de temperatura em ovos submetidos a diferentes condições de armazenagem, bem como verificar indicadores de perda de qualidade como a perda de peso e mudanças de pH. Também foi verificado o comportamento destes dois microrganismos em albúmen e gema de ovos de galinha submetidos a duas temperaturas de armazenagem. Os microrganismos estudados tem sua viabilidade diminuida na superfície de ovos com casca íntegra ou com defeitos quando os mesmos são submetidos a temperatura de 30°C, enquanto que a 8°C eles permanecem viáveis na casca. A temperatura de 30°C é responsável pela tendência maior de invasão dos microrganismos no conteúdo interno de ovos de galinha. Foi possível verificar, também, que há uma maior perda de peso em ovos armazenados a 30°C, independentemente da qualidade da casca. O pH de albúmen e gema aumentou ao longo do tempo, independentemente da forma de armazenagem, entretanto a velocidade de alteração do pH do albúmen foi maior na temperatura mais alta / Abstract: Human salmonelosis is epidemic all over the world. Food containing raw and partially coocked eggs is associated with this occurrence. Mainly when they have shell defects and/or are submitted to inadequate storage. The researches with experimental hem eggs contamination use big innocua and dipping eggs into bacterial cultures. This research had as objective, by using egg shell contamination methodology, evaluate some risks of contamination by Salmonella Enteritidis (SE) and Escherichia coli in consumption eggs. It was done by simulation of real operacional system, in an egg grading plant, like post-washing and post-manual washing contamination, oscillation of storage temperature; and by submitting eggs under different temperatures, as well as verifying loss of quality as the loss of weight and changes of pH. Also, the behavior SE and E. coli was verified in albumen and yolk that were submitted by 8° and 30°C. The results were that SE and E. coli decresase their viability on the egg surface, in intact and in imperfect shells, when the eggs were stored by 30°C, while that 8°C they remain viable on the surface. By 30°C, the bacteria can penetrate more easily in the egg contens. It was possible to verify that thre are a bigger loss of weight in the eggs stored at 30°C, independently of the shell quality. The pH of the albumen and the yolk increased, independently of the storage temperature, however the speed of alteration of pH of albumen it was bigger in the highest temperature / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Uma população experimental F2 foi desenvolvida a partir do cruzamento de uma linhagem macho de frangos de corte com uma linhagem de postura, com o objetivo de mapear QTLs (locos controladores de características quantitativas) para características de desempenho e carcaça. Um total de 2.063 animais F2 em 21 famílias de irmãos completos obtidas em 17 incubações. As aves foram criadas como frangos de corte e abatidas a 6 semanas de idade, foram avaliadas 19 características de desempenho e carcaça. A genotipagem foi realizada em 3 fases: 1) Um total de 80 marcadores microssatélites do cromossomo 1 foram testados nos indivíduos parentais e F1 para identificar marcadores informativos. 2) Genotipagem seletiva dos indivíduos F2 que representam os extremos fenotípicos para peso vivo aos 42 dias de idade (P42), para identificar regiões potencialmente associadas (P < 0,10) com esta característica. 3) Sete famílias de irmãos completos (649 F2) foram genotipados para 12 marcadores associados na fase 2 e para 14 marcadores flanqueadores. Mapeamento por intervalo utilizando regressão foi aplicado para dois modelos genéticos (F2 e meio-irmãos) para detectar QTLs Foram encontradas fortes evidências de QTLs afetando peso vivo, consumo de ração, conversão alimentar e peso de asas, coxas e sobrecoxas, peito, gordura abdominal, fígado, pulmão e coração no cromossomo 1. / An F2 chicken population was developed by crossing a broiler sire line and a layer line, with the objective of mapping Quantitative Trait Loci (QTL) for performance and carcass traits. A total of 2,063 F2 chicks in 21 full-sib families from 17 hatches were reared as broilers and slaughtered at 6 weeks of age. Nineteen performance and carcass quality traits were measured. The genotyping was done in three phases: 1) A total of 80 microsatellite markers from chromosome 1 were tested in the parental and F1 individuals to identify informative markers. 2) Selective genotyping of F2 individuals, representing extreme phenotypes for body weight at 42 days of age (BW42), to identify regions potentially associated (P < 0,10) with this trait. 3) Seven full-sib families (649 F2 chicks) were genotyped for 12 markers associated in phase 2 and for additional 14 flanking markers. Interval mapping using regression methods was applied to two different genetic models: 1) Line-cross; 2) Half-sib analyses for mapping QTL. Strong evidences for QTL affecting body weight, feed intake, feed conversion and weights of drums and thighs, breast, abdominal fat, liver, lung and heart were found on chromosome 1.

A preocupação do consumidor com a origem e a qualidade do produto final é vista com maior atenção, preocupação social e ambiental. Levando em conta esta demanda as informações sobre dietas e metabolismo das aves criadas em sistema orgânico são escassas. Sabendo que a idade da ave influencia no desempenho, qualidade dos ovos e no seu metabolismo. O presente estudo teve o objetivo de avaliar o efeito da idade sobre a qualidade de ovos de poedeiras e avaliar o efeito da enzima fitase sobre o metabolismo de nutrientes em sistema de produção de ovos orgânicos. Foram utilizadas poedeiras semi pesadas com diferentes idades (28, 65 e 110 semanas). Também se avaliou a inclusão da enzima fitase em 4 níveis(0,300, 750 e 1300 FTU/Kg) na dieta das aves. A qualidade externa dos ovos foi prejudicada com o avanço da idade das aves. As aves de 28 semanas produziram ovos mais leves que as aves com 65 e 110 semanas. A qualidade da casca diminui com o avançar da idade. Porém a qualidade interna do ovo não foi alterada com a idade das poedeiras. A inclusão de fitase não causou efeito no metabolismo dos nutrientes. A metabolizabilidade foi diferente entre as idades, as aves com 110 semanas apresentaram melhor eficiência, exceto nos minerais. Foi observado que a inclusão de 300FTU/Kg de fitase em aves com 110 semanas, estimulou um maior consumo de MS, Ca, P e N. O melhor balanço de cálcio foi observado nas aves com 28 semanas, que aproveitam 18% e 34% a mais do que as aves com 65 e 110 semanas. No monitoramento de desempenho as aves com 65 semanas tiveram 19% a mais de massa total de ovos. Observou-se que as aves com 28 semanas tem melhor conversão alimentar por dúzia de ovos do que as aves com 65 e 110 semanas. O peso do ovo foi afetado pela idade das aves, sendo maior em aves com 110 semanas. O consumo de forragem não diferiu entre as idades. A idade de postura afeta a qualidade externa de ovos orgânicos. Em sistema de produção orgânica, a metabolizabilidade dos minerais da dieta foi maior em aves jovens em relação às aves mais velhas, porém o aproveitamento de proteína e energia da dieta aumentou com a idade das aves. / The consumer's concern with the origin and quality of the food is seen with greater attention, social and environmental concern. Taking into account this demand the information on diets and metabolism of birds within the organic system are scarce. It is known that the age of the bird influences the performance, egg quality and metabolism, the present study aimed to evaluate the effect of age on the egg quality of laying hens and to evaluate the effect of the enzyme phytase on the metabolism of nutrients in organic egg production system. Were used laying hens semi heavy with different ages (28, 65 and 110 weeks). The was also evaluated inclusion of the phytase enzyme in 4 inclusion levels (0,300, 750 and 1300 FTU / kg) in the diet of the birds. The external quality of the eggs was impaired with the advancing age of the birds. Birds at 28 weeks had lower egg weight than birds at 65 and 110 weeks. The quality of the bark decreases with the advancing age. However the internal quality of the egg did not change with the age of laying hens. The inclusion of phytase had no effect on nutrient metabolism. The metabolism of nutrients was different between the ages, birds with 110 weeks presented better efficiency, except in minerals. It was observed that the inclusion of 300FTU / kg of phytase in birds with 110 weeks stimulated a higher consumption of DM, Ca, P and N. The best calcium balance was observed in birds at 28 weeks, which used 18% and 34% More than birds at 65 and 110 weeks. In the performance monitoring the birds 65 weeks of age old birds had 19% more total egg mass. Was observed that birds at 28 weeks had better feed conversion per dozen eggs than birds at 65 and 110 weeks. The weight of the egg was affected by the age of the birds, being greater in birds with 110 weeks. Feed intake of forage did not differ between ages. The age of laying affects the external quality of organic eggs. In organic production system, the metabolizability of dietary minerals was higher in young birds compared to older birds, but the protein and energy intake of the diet increased with the age of the birds.

Com o objetivo de desenvolver um novo modelo de ninho mecânico para a coleta de ovos em matrizes de frangos de corte foram realizados dois trabalhos. O primeiro visou adaptar o ninho manual modelo Holandês, cujo formato é bem aceito por matrizes de frangos de corte, a um modelo que permita fazer a coleta mecânica dos ovos. Esta adaptação foi avaliada em dois experimentos no mesmo galpão, das 25 às 35 semanas de idade. No primeiro experimento foram comparadas porcentagem semanal de ovos produzidos (%SOP) e de ovos de cama (%OC), e no segundo experimento, além dessas variáveis, foram observadas as percentagens de ovos trincados (%OT) e de ovos sujos de ninho (%OS). Também no experimento 2, visando reduzir os ovos postos na cama, observados no experimento 1, foi colocada maravalha sobre a forração desenvolvida, do alojamento até 26a semana. A %SOP foi semelhante nos dois tipos de ninhos, tanto no experimento 1 como no experimento 2. Em relação à %OC (experimento 1 e 2), %OS e %OT (experimento 2), o ninho mecânico teve pior desempenho (P<0,05). No experimento 2, a colocação de maravalha no ninho mecânico não contribuiu para a redução da %OC. A transformação do ninho manual em mecânico aumentou significativamente o número de ovos postos na cama, ovos trincados e sujos de ninho, demonstrando uma pior aceitação deste tipo de ninho pelas galinhas. O objetivo do segundo trabalho foi desenvolver um novo modelo de ninho mecânico e comparar seu desempenho com o ninho manual modelo Holandês. Numa granja com dois galpões foram alojados 7800 fêmeas e 800 machos em cada galpão e avaliada a % de ovos produzidos, sujos de ninho, de cama, trincados, eliminados, microtrincas, infertilidade, mortalidade embrionária, contaminação, pintos refugo e eclosão de ambos os tipos de ninho. Não houve diferença estatística na % de ovos produzidos, trincados e sujos de ninho, na maioria das semanas entre os ninhos, contudo na média das 28 semanas o galpão com ninho manual apresentou melhor desempenho. Em relação à % de ovos de cama, o galpão com ninho manual apresentou melhor resultado. Quanto à % de ovos eliminados e às respostas de incubatório, não houve diferença entre os sistemas de coleta. Os trabalhos demonstraram que a presença de maravalha nos ninhos exerce forte influência na sua aceitação e que o ninho mecânico desenvolvido é uma boa alternativa ao ninho manual modelo Holandês, porém precisa ser aperfeiçoado para atingir o mesmo desempenho, principalmente em relação à postura de ovos de cama. / Two experiments were carried out to design a new mechanical nest model for the collection of eggs from broiler breeders. The first one was an adaptation of the hand-operated Dutch nest, to a model that allows for mechanical egg collection. This adaptation was assessed in two experiments conducted in the same poultry house from the 25th to the 35th weeks of life. In the first experiment, the weekly rates of eggs produced (%WEP) and of floor eggs (%FE) were compared, whereas in the second experiment, in addition to these variables, the rates of cracked eggs (%CE) and of nest dirty eggs (%DE) were also assessed. In experiment 2, in order to reduce the number of floor eggs observed in experiment 1, wood shavings were placed on the designed bedding, from the time hens enter the poultry houses to the 26th week. %WEP was similar in both types of nests, in experiment 1 and experiment 2. With regard to %FE (experiment 1 and 2), %DE and %CE (experiment 2), the mechanical nest had the worst performance (P<0.05). In experiment 2, lining the mechanical nest with wood shavings did not contribute to reducing %FE. Changing the hand-operated nest into a mechanical one significantly increased the number of floor eggs, of cracked eggs and of nest dirty eggs, with poorer acceptance of the mechanical nest by the hens. The aim of the second experiment was to design a new mechanical nest model and to compare its performance with that of the hand-operated Dutch nest. A total of 7,800 hens and 800 males were housed in each poultry house, and assessed the percentages of eggs produced, nest dirty, floor, cracked, discarded, microcracks, infertility, embryonic mortality, contamination, stunting syndrome and hatching from both types of nest. No statistical difference was observed in the rate of eggs produced, cracked eggs and nest dirty eggs between the nest models in most of the weeks assessed. However, the average obtained for the 28 weeks shows that the poultry house with the hand-operated nest had a better performance. With respect to the rate of floor eggs, the poultry house with the hand-operated nest yielded better results. There was no difference between the collection system in terms of the rates of discarded eggs and parameters analyzed and the hatch. The experiments have demonstrated that wood shavings in the nest influence strongly breeders acceptance and breeders; also the mechanical nest model developed it’s a good alternative to the conventional model. Nevertheless, it still has to be improved to have the same performance as that of the hand-operated nest.

A VP3, ou Apoptina, é uma das proteínas codificadas pelo vírus da anemia infecciosa das galinhas (CAV). Esta proteína é capaz de induzir apoptose em células humanas tumorais; entretanto, o mesmo não ocorre em células normais. Assim, esta proteína apresenta-se como uma promissora candidata como agente antineoplásico. O girovírus aviário 2 (AGV2), descrito em 2011, é relacionado ao CAV e codifica proteínas homólogas às expressas por este vírus, incluindo a VP3. A comparação da sequência de aminoácidos da VP3 do AGV2 com a da Apoptina do CAV revela uma identidade de 32,2% e o compartilhamento de domínios importantes para a atividade pró-apoptótica tumor-especifica. Nesse trabalho objetivamos investigar o potencial de três variantes da VP3 do AGV2 em induzir seletivamente a morte de células humanas tumorais. Os genes das VP3 foram expressos através de um sistema de expressão adenoviral. Após a transdução dos adenovírus recombinantes expressando as VP3 do AGV2 nas células humanas tumorais A549 e normais MRC-5, a localização subcelular dessas proteínas foi analisada por imunofluorescência e suas implicações sobre a viabilidade celular foram determinadas pelo ensaio de MTT. Nossos resultados evidenciam que os adenovírus expressando as variantes da VP3 do AGV2 possuem a habilidade de inibir preferencialmente a proliferação de células tumorais. Demonstramos também que as VP3 do AGV2 acumulam-se no núcleo das células tumorais, enquanto que na maior parte das células normais essas proteínas ficam restritas ao citoplasma. No entanto, inesperadamente detectamos, em menor proporção, a expressão de VP3 do AGV2 também no núcleo das células normais. Ainda, analisando as sequências de aminoácidos das variantes da VP3 do AGV2, pudemos conjecturar que a presença de um sinal de exportação nuclear com menor eficiência do que o existente na Apoptina do CAV pode estar correlacionado com a localização nuclear dessas proteínas nas células normais e com a inibição da proliferação celular verificada nessas células. Este é o primeiro trabalho demonstrando o potencial da proteína VP3 codificada pelo AGV2 em induzir preferencialmente a morte de células humanas tumorais. / VP3, also known as Apoptin, is one of the proteins encoded by the chicken anemia virus (CAV). This protein is able to induce apoptosis in tumor cells; however, the same does not occur in normal cells. Thus, this protein appears as a promising candidate for anticancer therapy. The recently discovered avian gyrovirus 2 (AGV2) is related to CAV and encodes CAV-homologous proteins, including VP3. The comparison of the AGV2-VP3 amino acid sequence with CAV-Apoptin shows an identity of 32.2% and the presence of functional domains that seem to be important for its tumor-specific pro-apoptotic activity. In this work, we aim to investigate the potential of three AGV2-VP3 protein variants as inducers of apoptosis in human tumor cells. VP3 genes were expressed through an adenoviral expression system. After transduction of the recombinant adenoviruses expressing the AGV2-VP3 variants in human tumor A549 cells and normal MRC-5 cells, subcellular localization of these proteins was analyzed by immunofluorescence and their effects on cell viability was determined by MTT assay. Our results show that the adenoviruses expressing AGV2-VP3 have the ability to inhibit preferentially the proliferation of tumor cells. We also demonstrate that AGV2-VP3 variants accumulate in the nucleus of tumor cells, whereas in most normal MRC-5 cells these proteins are restricted to cytoplasm. However, we unexpectedly detected the expression of AGV2-VP3 proteins, in a lesser extent, in the nucleus of normal cells. Furthermore, analyzing the amino acid sequences of AGV2-VP3 variants we could speculate that the presence of a nuclear export signal (NES) with a lower efficiency than CAV-Apoptin NES may be correlated to the nuclear localization of these proteins in normal cells and to the cell proliferation inhibition observed in these cells. This is the first study validating the potential of AGV2-VP3 protein to preferably induce death of human tumor cells.

A membrana corioalantóica (MCA) é uma das membranas extraembrionárias do embrião da galinha, cuja característica principal é ser muito vascularizada e permeável a trocas iônicas e gasosas. O ambiente onde está inserida permite o desenvolvimento de vários modelos experimentais, incluindo estudos de angiogênese, toxicologia e biocompatibilidade, bem como análise do processo de reparo e de carcinogênese de inúmeros tecidos. O objetivo deste trabalho foi verificar as alterações histomorfológicas de fragmentos de gengiva enxertados na MCA, com o intuito de verificar a viabilidade da utilização desse modelo em estudos envolvendo a mucosa oral. Fragmentos de gengiva foram coletados de pacientes submetidos a cirurgia de exodontia e enxertados na MCA de ovos fecundados de galinha após 9 dias de desenvolvimento embrionário. A coleta das gengivas foi feita após 1, 3 e 5 dias de inserção na MCA. As alterações morfológicas microscópicas foram anallisadas no decorrer do tempo no epitélio e na lâmina própria da gengiva e na MCA. Análise de TUNEL foi realizada para se comprovar a presença ou não de apoptose nos tecidos da gengivais. Foram realizadas também análises imuno-histoquímicas e quantificação da expressão de queratinas 10 (K10) e 14 (K14), para verificar as alterações de diferenciação epitelial, e CD34, para mensuração da vascularização. Do total de 25 ovos embrionados utilizados, 10 ovos receberam as gengivas para o experimento; o restante não mostrou viabilidade embrionária e foi descartado. Após 1 dia de inoculação, a interface MCA-gengiva exibiu intenso infiltrado inflamatório, o qual invadiu a lâmina própria. Após 5 dias, essa reação inflamatória ficou restrita à interface MCA-gengiva. As principais modificações morfológicas na gengiva foram observadas nos períodos de 3 e 5 dias de inoculação, em que houve perda da arquitetura do epitélio, mantendo-se somente a camada basal viável, e redução da celularidade na lâmina própria. Observou-se aumento da vascularização no período de 5 dias, atestada pela quantificação de vasos CD34 positivos. O epitélio remanescente exibiu ausência de estratificação e de expressão de K10, intensa marcação de K14 e células TUNEL negativas, sugerindo a presença de células epiteliais viáveis e pouco diferenciadas. Concluiu-se que a gengiva foi incorporada à MCA, com redução paulatina da reação inflamatória e revascularização, bem como manteve-se viável nesse ambiente em um período de 5 dias; contudo, sofreu processos de adaptação que incluíram a perda da estratificação epitelial e a redução da celularidade na lâmina própria. / Chorioallantoic membrane (CAM) is one of the chicken embryo extra embryonic membrane, whose main characteristic is being very vascularized and permeable for ionic and gaseous exchanges. The environment where it is inserted allows the development of many experimental model, including studies about angiogenesis, toxicology and biocompatibility, as well as analysis of the repair process and carcinogenesis of many tissues. The objective of this study was to verify the histomorphological changes of gingival fragments grafted on CAM, with the intent to check the viability of this model in studies involving oral mucosa. Fragments of gingiva were collected from patients undergoing dental extraction and grafted on CAM of fertilized chicken egg after 9 days of embryonic development. The collect of gingiva were made after 1, 3 and 5 days of insertion on CAM. The morphological alterations were analyzed over the time in the epithelium and lamina propria of gingiva and CAM. TUNEL analysis were made to evaluate the presence or not of apoptosis in the gingival tissue. Imunohistochemistry and quantification of the expression of keratin 10 (K10) and 14 (K14) were also made to check any alteration of epithelial differentiation, and CD34, for measurement of vascularization. Total of 25 fertilized egg were used, 10 eggs received gingiva for experiments; remaining egg didn\'t show embrionary viability and were discarded. After 1 day of inoculation, the CAM-gingiva interface exhibited a intense inflammatory infiltrate, which invaded the lamina propria. After 5 days, this inflammatory reaction were restricted to the CAM-gingiva interface. The main morphological changes in the gingiva were observed between 3 to 5 days of inoculation, in which there was loss of epithelial architecture, only the basal layer were viable, and a reduction of cellularity in lamina propria. Were observed a increase of vascularization in period of 5 days, attested by the quantification of positive CD34 vessel. The remaining epithelia showed the absence of stratification and expression of K10, intense marking of K14 and TUNEL cell negative, suggesting the presence of viable epithelial cells and less differentiated. It was concluded that the gingiva was incorporated by CAM, with gradual reduction of inflammatory reaction and revascularization, as well remained viable in this environment in a period of 5 days; however, it underwent processes of adaptation that included the loss of epithelial stratification and the reduction of cellularity in the lamina propria.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-07Bitstream added on 2015-04-09T12:48:25Z : No. of bitstreams: 1 000816830.pdf: 3606121 bytes, checksum: b72f959db176b160845ce86fd37d1575 (MD5) / Baixa pressão parcial de O2 durante o desenvolvimento embrionário e/ou fetal pode diminuir a taxa metabólica e a taxa de crescimento do embrião, podendo levar a alterações morfofisiológicas após o nascimento, além de atenuar a resposta ventilatória hipóxica no recém-eclodido de galinhas. No presente estudo, várias incubações foram realizadas para avaliar o efeito da hipóxia pre-natal sobre a taxa metabólica e a resposta à hipóxia aguda em diferentes linhagens e idades de Gallus gallus. Além disso, foi verificada a possibilidade de que a redução da taxa metabólica por si e não especificamente induzida por hipóxia prolongada durante desenvolvimento pré-natal seria um fator contribuinte sobre a diminuição da taxa metabólica em neonatos. Para isso embriões de galinha foram incubados a 35 ◦C (grupo de frio), que é conhecido por diminuir o consumo de oxigênio embrionário por ~30% ao longo de incubação, e aumenta o período de incubação em ~2 dias. Quanto a aves precoces, nenhum estudo havia abordado a influência da hipóxia em diferentes fases de incubação no desenvolvimento morfométrico do intestino, importante não somente para os processos digestivos e de absorção, mas também para a proteção contra patógenos; por isto avaliamos as características morfométricas e a quantidade de células caliciformes por vilo das regiões do intestino delgado em pintainhos recémeclodidos de frango de corte / Low O2 partial pressure during embryonic and fetal development can decrease the growth and metabolic rate of the embryo, leading to morphophysiological changes after birth, and blunt the hypoxic ventilatory response in newly hatched chicken. In the present study, different conditions during incubation (cold and hypoxia) were performed to evaluate the effect of prenatal hypoxia on metabolic rate, and the response to acute hypoxia in different strains and ages of Gallus gallus. We also considered the possibility that prolonged metabolic depression per se, but not specifically induced by hypoxia, during incubation would be a contributing factor to decreased metabolic rate in neonate. Thus chicken embryos were incubated at 35◦C (cold group), which is known to decrease the embryonic oxygen consumption (VO2) by ~ 30% throughout the incubation period and increases the incubation time in ~2 days. Finally, in precocial birds, no study has approached the influence of hypoxia at different stages of incubation in the morphometric development of the intestine, not only important for the digestive processes and absorption, but also for protection against pathogens, so we evaluated the morphometric characteristics and quantity of goblet cells per villi of the small intestine regions in newly hatched broiler chicks